实验名称： 蛙类离体心脏灌流 课程名称：生理学实验 指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞 实验人：叶永锋08344031 学院：海洋学院 实验时间：2009年12月09日
一、【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。 四、【方法与步骤】 1、斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中， 按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大 血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉 圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。 再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备 用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪 在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜 口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量 (套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶 液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，
实验五离体蛙心灌流实验 一实验目的 1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。 2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。 二实验原理 心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。 1、任氏液：正常对照 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2、0.65%NaCl灌流： 3、2%CaCl2灌流 4、 1%KCl灌流
5、1:10000 E 灌流 6、1:10000 Ach灌流 7、心得安 β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。 8.、阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。 三实验器材 微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000 Ach，阿托品+1/10000 Ach。 四实验步骤 1、标本制备（观看视频） 2、仪器及标本的连接 3、具体软件操作： 1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任氏液清洗→2%CaCl2溶液→任氏液清洗 2）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。 五实验结果
图1 离体蛙心灌流
离体蛙心灌流及药物对心脏的影响 一、实验目的： 1、学习蛙心灌流方法。 2、了解离体心脏的自律性与环境中各因素变化的关系，观察理化因素 对蛙心活动的影响。 二、实验对象：蟾蜍 三、实验方法： 1、标本制备： 取蟾蜍→破坏CNS→固定→剪皮→打开胸腔（暴露胸骨柄，用镊子把胸骨柄捏起来，用粗剪刀剪断，沿胸骨将锁骨剪断，去除多余的骨头，注意勿将心脏剪破）→用眼科剪小心剪开心包膜→暴露心脏→在主动脉叉下方穿一根丝线备用→用蛙心夹在心舒张期夹住心尖部→在左侧主动脉分叉处2-3mm处剪一剪口→将盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主动脉球→将插入到主动脉球的套管稍向后退，再向左下逆时针旋转90°，插入心室→结扎固定→剪断血管和背面静脉窦以下组织，游离标本 2、连接装置： 蛙心管内保持2ml灌流液，用木夹夹住蛙心套管，蛙心夹的线与张力换能器相连，换能器与电脑的相应通道相连。 3、运行电脑： 打开电脑→Medlab→实验/常用生理实验→离体蛙心灌流 四、实验结果： 分别观察正常心脏活动曲线及加入不同溶液后的心脏活动曲线的变化。 曲线规律：心脏节律； 曲线疏密：心率 曲线基线：心室舒张最大程度 顺序观察项目药量心肌(率、力)变化 正常任氏液灌流正常 1 0.65%NaCl 灌流 1~2d 2 2% CaCl 2 3 1%KCl 1~2d 4 1:10000 NA 1~2d 5 1:100000 ACh 1~2d 6 3% LH 1~2d 2.5% NaHCO3 2~4d 7 1:100000 Isop 1ml +任氏液1ml 8 1:1000 prop 0.2ml+任氏液1.8ml 出现效应后，抽出一半液体后 立即加入Isop1ml
蛙心灌流实验 实验目的 1、学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。实验原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 实验材料与用品 1、材料：蟾蜍、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板（蜡盘）、常用手术器械、滴管、废液缸、棉线 2、药品：任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2 、1%KCl、0.01% 肾上腺素、0.01%乙酰胆碱 3、仪器：计算机采集系统、张力传感器 实验步骤 1、取一只蟾蜍，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 2、识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 3、插蛙心插管，制备离体蛙心。在左主动脉下穿一线结扎，靠近动脉窦，接着在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。 4、用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。提起插管，剪断主动脉左、右侧分支，轻轻提起插管和心脏，在静脉窦下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎（切勿损伤静脉窦），在结扎线下方剪去所有牵连的组织，将心脏摘出。用任氏液反复冲洗（10~25滴/min的速度缓慢点滴）任氏液。至插管内任氏液完全澄清无色为止。以后做实验注意每次换液时，插管内液面应保持相同的高度。
实验二离体蛙心灌流实验 专业：学号：姓名： 一、实验目的 1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。 2.观察理化因素对蛙心活动的影响。 二、实验原理 蛙心的灌流:蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。 心肌： 1. 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2.0.65%NaCl灌流： 3.2%CaCl2灌流：
4.1%KCl灌流：
5.1:10000 E灌流 6.1:10000 Ach灌流 7.心得安 β 1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β 1 受体结合，使E不能发挥作用。 8.阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三、 实验器材 离体蛙心 任氏液、l ％KCl 溶液、2％CaC12溶液、0.65%NaCl 溶液、1:10000 肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品 四、 实验步骤 五、 结果与分析 心率：34次/min 最大收缩力：2.5g 最小收缩力：1.1g 图1 正常脉搏曲线 心率：35次/min 最大收缩力：1.6g 最小收缩力：1.1g 图2 0.65%NaCl 灌流脉搏曲线 任氏剂 0.65%NaCl 任氏液清洗 2%CaCl 2 任氏液清洗 1%KCl 任氏液 2.药物试剂 E 任氏液清洗 心得安+E 任氏液清洗 Ach 任氏液清洗 阿托品+Ach 任氏液 1.离子试剂
实验五离体蛙心灌注 目的 学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。 原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 器材与药品 蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。 步骤 （1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 （2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 （3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。注意在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。
实验一坐骨神经腓肠肌标本制备 目的学习坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。 实验对象蟾蜍 实验用品蛙类手术器械、烧杯、培养皿、棉球、纱布、细丝线、任氏液、粗剪刀、蛙板等。 实验步骤 1.破坏脑和脊髓左手持蛙，用食指压其头部前端，使头前俯。右手持探针由头端沿正中线向后划，触到凹陷即为枕骨大孔，将探针由此垂直刺入。再将探针折向前方，插入颅腔内并左右搅动捣毁脑组织。再将探针退回至进针处，针尖转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。此时蟾蜍四肢瘫软，表明脑脊髓已完全破坏。 2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱。左手握住后肢，右手持剪刀沿脊柱的断口向下剪开两侧的皮肤及肌肉，再剪除已下垂的躯干上部及内脏。 3.剥皮剪掉肛门周围的皮肤，左手捏脊柱断端（勿触碰神经），右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉两后肢皮肤。将标本背位放于表面有少许任氏液的蛙板上，洗净双手及用过的器械。 4.游离坐骨神经沿脊柱两侧用玻璃分针分离坐骨神经，用线在坐骨神经靠近脊柱处结扎并剪断。左手捏住脊柱，右手持剪刀从背面剪去向上突出的尾骨。然后从腹面沿中线将脊柱剪成两半。捏住两侧下肢带骨用力向两侧掰，使耻骨联合处脱臼，再从耻骨联合中央剪开两后肢，一后肢放入盛有任氏液的平皿中备用，一后肢用玻璃分针划开梨状肌及其附近的结缔组织，循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂隙处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针将腹部的坐骨神经小心勾出来，手执结扎神经的线，剪断坐骨神经的所有分支，一直游离至膝关节。 5.完成坐骨神经腓肠肌标本的制备将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，在股骨中部剪去`上段股骨。再在跟腱处以线结扎，剪断并游
生理学实验报告-蛙心灌流
————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期: ?
蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Nａ＋,K+,Ｃa2+及肾上腺素(Adｒ),乙酰胆碱（ＡCｈ)，乳酸对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．６5％ＮaＣl、２％ＣａＣl2、1%KCl、１：1０000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。 四、【方法与步骤】 １、斯氏蛙心插管法 (１)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入）。用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液）,再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（１．５~２ｃm）,即可进行实验。 (2）将插好离体心脏的套管固定在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连(如右图）。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、实验观察 (1）记录正常心搏曲线 (2）改用0．65%ＮaCＩ溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同）。
万方数据
?１４５６? 间上比双管法短（Ｐ＜０．０５）；双管法的心脏离体后存活时间明显长于单管法（Ｐ＜０．０５）；单管法对动脉瓣的损伤率、心律失常的发生率明显较双管法高（Ｐ＜０．０５）。实验结果见表１。 Ｆｉｇ１Ｄｉａｇｒａｍｏｆｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ 图１单管灌流装置模式图 Ｆｉｇ２Ｄｉａｇｒａｍｏｆｔｗｏ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ． 图２双管灌流装置模式图 表１两种方法优缺点比较 Ｆｉｇ１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｄｖａｎｔａｇｅ矗ｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｗｉｔｈｔｗｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ（互±Ｓ．ｎ＝１２） Ｏｎｅ——ｅａｎｕｌａＴｗｏ——ｃａｎｌｌｌａ Ｔｉｍｅｏｆｅａｎｎｕｌａｔｉｏｎ（ｍｉｎ）４８．３５±７．２８５９．９５±２１．２３。 Ｔｉｍｅｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｈｅａｒｔ（ｍｉｎ）６４．３０±２１．１８６０．１０±１８．４８ Ｈｅａｒｔｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅ（ｈ）１．７１±１．４０２．５７±０．５９＋ Ｄａｍａｇｅｏｆａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅ（％）５８．３０。 Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ（％）６６．７２５．０。 ＲｅｃｏｒｄｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍＳａｍｅＳａｍｅ ＣｏｓｔｏｆｄｅｖｉｃｅＬｏｗｅｒＨｉｇｈｅｒ。Ｐ＜０．０５ｍｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｍｅｔｈｏｄ． 讨论 离体心脏灌流是研究心脏功能的重要手段之一，广泛应用于医学、生物学、药学等教学和科研工作中。采用离体心脏灌流系统可以直观地观察心脏的活动，研究心脏舒缩功能，心率和节律变化，前后负荷及各种体液因素等对心脏功能的影响【５Ｊ。采用蛙心脏进行离体心脏灌流是较为常用的一种模型，因其稳定，经济，一直被人们广泛采用。进行离体心脏灌流实验，首先需要保证心脏在体外较长时间存活，然后根据实验目的进行灌流和施加实验因素。无论是心脏离体前的插管、血流冲洗等操作，还是心脏离体后用人工溶液代替血液进行灌流，均使心脏脱离了生理性神经体液环境。因此，使离体心脏较长时问存活，并维持良好的状态对于完成实验和取得可靠实验数据极为重要。本研究比较了当前应用较为普遍的两种方法，并探讨了它们各自的优缺点。 本研究结果表明，单管法插管数量少，操作相对简单，缩短离体前等血管分离和插管等所需时间，可为完成各实验项目赢得足够在体外存活时间。其缺点是需将套管从主动脉经过动脉瓣插入心室，血液在心室收缩时射入动脉和插管内，而舒张时返流回心室，这样不仅打破了心脏单方向泵血的生理特征，而且，由于易发生心脏瓣膜及心肌损伤，使心律失常发生率增高，导致实验失败。常常影响实验结果的客观性及实验的顺利进行。离体心脏在体外的存活时间也较双管法短。双管法虽然需要对腔静脉和主动脉进行分别插管（双管），插管所需时问较管法要长，但因其不通过主动脉瓣，对主动脉瓣及心室肌的损伤机会大大减小，灌流液从静脉插管进入心脏，从动脉插管流出，使心脏血液单方向流动，符合心脏工作的生理特征。因此，心脏在体外存活时间反而较单管法长，而且一旦插管成功，各实验项目应能够得以顺利进行。采用双管法主要缺点除插管操作时间比单管法长外，因其灌流装置略复杂，需要特殊定制，费用较单管法实验装置高。从用途方面分析，双管灌流法还可用于研究心输出量，以及前、后负荷对心脏功能的影响等。如在双管法中改变Ｂ管中的液体量即容量负荷，改变Ａ管的口径（即后负荷）；而单管法的输入和输出均在同一管中，不适用于此项研究。 作者认为在离体蟾蜍心脏灌流实验中，采用双管法能使心脏瓣膜完好无损，保证血液单一方向流动，心脏存活时间长，能观察和记录心肌收缩力和心输出量，且记录的实验结果准确，便于整理分析，得出正确结论。而且由于实验成功机率高，减少了实验动物及试剂的消耗，值得在教学及科学研究工作推广应用。 ［参考文献］ ［１］ＭｃＫｅａｎＴ，ＳｅｈｅｒｚｅｒＡ，ＰａｒｋＨ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｓｅｈａｅｍｉａｉｎｂｕｆｆｅｒ—ｐｅ删ｔｏａｄｈｅａｎｓ［Ｊ］．Ｊ脚Ｂｉｄ，１９９７，２００ （１９）：２５７５—２５８１． ［２］ＨｕｓｓｅｉｎＡＡ，ＮａｂｉｌＺＩ，ＺａｌａｔＳＭ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｖｅｎｏｍｓｆｒｏｍｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｂｅｅｓ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｈｅａｒｔａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄｂｌｏｏｄ［Ｊ］．ＪＮａｔＴｏｘｉｎｓ，２００１，１０（４）：３４３—３５７．［３］任京力，赵树进，杨太成，等．肾上腺素能ｐ。受体亚型特异性抗体的制备及鉴定［Ｊ］．中山医科大学学报，２００２， ２３（１）：３７—３９，４３． ［４］高兴亚，汪晖，戚晓红，等主编．机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．７２—７４． ［５］黄敏，冬冬主编．医学机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２（１０２．４８—５０． ［６］胡还忠主编．医学机能学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．１３３—１３６． ［７］朱建平主编．生理科学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３．８２—８５． ［８］徐怡，汤剑清，刘少金，等．蛙心灌流实验中值得注意的几个问题［Ｊ］．数理医药学杂志，２００２，１５（５）：４０３— ４０４． ［９］季淑梅，王庆山，范振中，等．介绍一种简单、新型的主要用于蛙心灌注实验的计滴装置［Ｊ］．中国应用生理 学杂志，２００４，２０（１）：９５—９７． 万方数据
实验二蛙心灌流观察体液因素对心脏活动的影响 [原理] 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na＋，K＋，Ca2＋等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放递质去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。用受体阻断剂阻断受体，则相应的受体不能发挥作用。 本实验通过观察内环境理化因素对维持心脏正常节律性活动的重要作用，了解Na+，K+，Ca2＋离子以及肾上腺素（β受体激动剂）、乙酰胆碱（M受体激动剂）等激素对心脏活动的调节意义。各种体液因素都是通过影响细胞质内钙离子浓度来起作用。钙离子浓度升高，心肌收缩力量增强，反之减弱。 [目的] 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响； 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 [材料及设备] BL-420型生物机能试验系统，蛙，蛙心套管，蛙心夹，任氏液（与蛙心内环境相似的溶液），0.65%氯化钠，2%氯化钙，1%氯化钾，0.01%肾上腺素，0.0 1%乙酰胆碱，滴管，万能支架，张力换能器。 [方法及步骤] （一）制备离体蛙心
1．用探针破坏蟾蜍的脑和脊髓。 2.蟾蜍固定。将蟾蜍仰卧位固定于蛙板上。 3．打开蟾蜍胸腔。用剪刀剪开胸骨表面皮肤并游离、去掉胸骨，再用眼科剪剪开心包以暴露心脏。 4.蟾蜍心脏插管。用小剪刀在主动脉的根部朝心室的方向剪一小口，以灌有任氏液的蛙心滴管的尖端，由此口插入动脉球。然后将插管稍向后退，再转向心室中央的方向，插入心腔内。如确实插入心室，即以另一线将动脉球与套管的尖端一起结扎固定，然后将结扎剩下的线头结扎在套管侧壁的小玻璃钩上，并固定之，以免心脏滑脱。注意：插套管时要特别小心，应逐渐试探插入，以免损伤心肌，然后滴入少量任氏液。套管插好后的斜口应向心室腔，以免心室收缩时堵塞斜口。如果其深度和位置合适，则套管中的液面随心脏的跳动而上升和下降。于是可将与心脏相连的血管和其他组织剪断，摘出心脏，但切勿损伤静脉窦。然后用任氏液洗涤心脏内外，并经常保持其湿润。 （二）仪器连接 将两个双凹夹固定于万能支架上，将连有分离好的离体蛙心的蛙心滴管固定在上方的双凹夹上，将张力换能器置于下方双凹夹，用连有丝线的蛙心夹于心舒期夹住心尖；再将丝线连结在张力感受器上（张力感受器事先接在计算机的3 通道上）。即可在显示屏上显示出心博曲线，根据屏幕显示信号适当调整扫描速度和灵敏度等，等得到满意的图形就开始试验。 [实验项目] ?正常心脏收缩的曲线：用滴管向蛙心套管中注入1—3毫升任氏液（以后的溶液量均应与第一次相同）。注意观察心跳频率和收缩强度。 ?钠离子的影响：向套管中加入2%氯化钠数滴，观察心脏活动有何变化？ 待心脏活动发生明显改变时，添加新鲜的任氏液进行洗涤，反复数次， 直至心脏恢复正常活动后，再加入其它溶液（以下实验皆同此）。
蛙心灌流实验 2012级临七3班廖梦宇2012021320 一、实验目的 1.学习离体蛙心灌流的实验方法。 2.观察Na、K、Ca三种离子及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 二、实验准备 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：BL-420生物信号采集系统、张力换能器、蛙类手术器械1套、蛙心插管、 蛙心夹、试管夹、双凹夹、滴管、小烧杯4个、任氏液。 3.实验药品：0. 65％氯化钠、3％氯化钙、1％氯化钾、1：10 000肾上腺素、1：10 000 乙酰胆碱等。 三、实验步骤 1.离体蛙心的制备： 破坏脑和脊髓，仰卧固定于蛙板上。由剑突处向两锁骨肩峰端呈三角形剪开皮肤、胸壁，打开心包，暴露心脏。在两个主动脉干下各穿一根细线，并打一活结备 用。用连有细线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部，将心脏上翻，辨认心房，静脉窦，腔静脉，然后结扎腔静脉，用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一切口。将 盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指将套管堵住) 插入动脉球底部，稍后撤套管，再 将蛙心管尖端转向蟾蜍的背侧及左下方，于心缩期插入心室；将预置线的活结扎紧，并固定于插管壁的小钩上小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支，将心脏连同 静脉窦一起剪下用任氏液反复冲洗心室。 2.实验装置： 将蛙心插管用试管夹固定于支架上，蛙心夹的连线连接在机械换能器上。 记录心脏收缩曲线。 3.处理因素 (1) 记录仅有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，作为正常对照。 (2) 换以等量0.65％Nacl，观察心跳的变化。 (3) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入3％Cacl 1—2滴，观察心跳变化。 (4) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入l％Kcl 1～2滴，观察心跳变化。 (5) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入1：l0 000肾上腺素1～2滴，观察心跳变化。 (6) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入l：10 000乙酰胆碱1～2滴，观察心跳变化。
离体蛙心灌流 实验目的 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 实验器材 动物：蟾蜍 器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液 实验方法与步骤 1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插 管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。 2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。 3、观察并记录正常心搏曲线； 4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶 液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。 实验结果 此图为蛙心正常心搏曲线
由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。 有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。
KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。 此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化 可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl 2 增加。
由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。 此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化 由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。 实验结果分析 离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜 的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。
蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。 四、【方法与步骤】 1、斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.5～2 cm)，即可进行实验。 （2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、实验观察 (1)记录正常心搏曲线 (2)改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。
关于离体蛙心灌流演示实验的说明 一．实验目的 1.演示蛙心灌流实验, 得出兴奋传递需要神经递质，阐明兴奋在神经元间传递的实质。 2.分析蛙心灌流实验结果，体验学科知识的形成过程，培养探究意识和理性思维。 二．实验原理 乙酰胆碱是M胆碱能受体激动剂，当乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M胆碱能受体特异性结合时，会使心率减慢、房室传导减慢、心肌收缩力减弱。 阿托品是M胆碱能受体阻断剂，抑制乙酰胆碱与M受体结合，从而加速房室传导，增加心肌收缩力。 三．材料与用具 1.实验动物 牛蛙 2.实验试剂 任氏液（Biotopped） 乙酰胆碱（博美）：1:10000mg/L 硫酸阿托品注射液（天津金耀药业有限公司）：1:2000mg/L 3.实验器材 解剖器材：托盘、解剖蛙板、蛙钉、镊子、眼科剪、毁髓针、棉线、烧杯、滴管。 蛙心管流装置：铁支架、蛙心夹、蛙心插管、蛙心套管、力传感器、信号集线器、数据线、DisLab波形软件 四．实验步骤及结果（一）课前准备 1.蛙心解剖 1）毁脑毁脊髓 2）打开胸腔 3）剪开心包膜、暴露心脏2.蛙心插管 1）结扎 2）插管 3）心脏离体 4）铁支架固定 （二）课堂演示 1.演示步骤
1）观察任氏液条件下，心脏跳动频率及幅度。 2）加入2滴1∶10000乙酰胆碱溶液，观察心脏跳动频率及幅度变化。 3）当出现明显变化时，加入少许1:2000mg/L阿托品溶液，观察心脏跳动频率及幅度变化。 2.实验结果 1）任氏液条件下，心脏跳动频率及幅度 结果：心脏跳动正常。 2）滴加1：10000乙酰胆碱溶液 结果：心脏跳动变慢。 3）滴加1:2000阿托品溶液 结果：心脏跳动逐渐恢复。 附：实验用具及药品
实验报告（1） 实验名称：中枢活动的基本特征 实验目的：了解中枢活动的基本特征，分析反射弧的完整性与反射的关系 实验用物：蟾蜍、手术器械、万能支台、肌夹、秒表、滤纸片、0.5%H2SO4 实验步骤（实验内容）： 1、制备脊髓蛙。 2、反射时的测定 3、反射弧分析 ①感受器作用 ②周围神经作用 ③中枢作用 实验结果： 1、皮肤感受器反射时为3.20秒（三次的平均值）。 2、剥去皮肤后无反射发生。 3、剪断坐骨神经后无反射发生。 4、破坏脊髓后无反射发生。 由以上结果得出以下结论： 1、此反射的感受器存在于皮肤上。 2、反射弧必须保持完整反射才会发生。只要反射弧五个环节中的任一个环节被破坏，反射弧都不会发生。 实验报告（2） 实验名称：蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制作 实验目的：学习蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 实验用物：蟾蜍、手术器械、探针、玻璃分针、培养皿、任氏液等 实验步骤（实验内容）： 1、破坏脑、脊髓 2、剪断脊柱、去除前肢及内脏 3、剥离皮肤 4、分离左右后肢 5、游离坐骨神经、分离腓肠肌得标本 实验结果：制作一个机能良好的神经肌肉标本，见图。
实验报告（3） 实验名称：肌肉的收缩特征 实验目的：观察刺激与肌肉收缩的关系 实验用物：蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本、手术器械、万能支台、肌槽、记纹鼓、蛙板、刺激器、任氏液实验步骤（实验内容）： 1、连接实验装置 2、固定肌肉标本 3、观察实验项目 实验结果： 1、测定阈值为18／32V、最适刺激为24／32V。（手动鼓、外触发、手动单次） 2、描记收缩曲线（电动鼓、外触发、手动单次、最适刺激强度） 1次／S 2次／S 4次／S 8次／S （单收缩）（单收缩）（不完全强直收缩）（完全强直收缩） 实验报告（4） 实验名称：血型的测定 实验目的：1、学习用标准血清检查ABO血型的方法 2、观察红细胞的凝集现象 3、了解血型鉴定在输血治疗中的意义。 实验用物：人血、A型和B型标准血清、刺血针、玻片、玻璃棒、滴管、酒精、生理盐水、棉球等。实验步骤（实验内容）： 1、取两滴生理盐水各滴在玻片的两端。 2、分别向其中加A型和B型标准血清，混匀 3、采集血样，用玻璃棒两端各取一滴和A型和B型标准血清混匀 4、观察现象并记录。 实验结果： 1、ABO血型检查结果判断
华中科技大学生命科学与技术学院 生理学实验报告 专业生物技术 班级生实1301 姓名陈云丰 学号U201312485
实验一蛙离体心脏灌流 一、实验目的及要求 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Na+，K+，Ca2+及肾上腺素，乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。 二、实验原理 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na+，K+，Ca2+等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、实验对象、器材及药品 实验对象：青蛙 实验器材：计算机生物信号采集与处理系统、张力换能器、蛙类常用手术器械一套、玻璃分针、蛙板、蛙钉、蛙心插管、蛙心夹、烧杯、细线、滴管等 实验药品：任氏液、一定浓度的NaCl、CaCl2、KCl溶液、肾上腺素、乙酰胆碱 四、实验方法与步骤 1、斯氏蛙心插管法 （1）青蛙双毁髓后背位置于蛙板上，打开胸腔，暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用；另一根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。左手提起左主动脉上方的结扎线，右手持眼科剪在左主动脉根部（动脉球前端）沿向心方向剪一斜口，将盛有少许任氏液、大小适宜的蛙心插管由此开口处轻轻插入动脉球。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内。（可见套管中血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。将动脉球上已准备好的松结扎紧，并固定于插管侧面的钩上，以免蛙心插管滑出心室。剪断结扎线上方的血管，轻轻提起插管和心脏，在左右肺静脉和前后腔静脉下引一细线并结扎，于结扎线外侧剪去所有相连的组织则得到离体蛙心。用任氏液反复换洗插管内的任氏液，直到插管中无残留血液为止。（2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用连有细线的蛙心夹夹住少许心尖部肌肉，将细线以适宜的紧张度与张力换能器相连。张力传感器的输出线与计算机生物信号采集处理系统的输入通道相连。 2、实验步骤 （1）记录心脏在只有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，并将其作为正常对照。 （2）Na+的作用：用吸管吸出插管中的任氏液后，换以等量的NaCl溶液，记录并观察心
一、实验目的： 学习斯氏离体蛙心灌流法；了解心肌的生理特征；观察Na+、K+、Ca+、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。 二、实验原理： 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L）,心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期，血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱，血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可以使心率加快、传导加快及心肌收缩力加强，乙酰胆碱则肾上腺素的作用相反。 三、实验仪器： 青蛙、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针型露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧
杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管（斯氏套管或八木式套管）、套管夹、氯化钠溶液、氯化钙溶液、氯化钾溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、肝素。 四、实验步骤： 1、斯氏蛙心插管法： （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，
实验十、强心苷对离体蛙心的作用 [实验目的] 学习斯氏(Straub)离体蛙心灌流法，观察强心苷对离体蛙心收缩强度、频率和节律的影响以及强心苷和钙离子的协同作用。 [实验材料] 1、动物：蛙 3、药品和试剂：任氏液、低钙任氏液（所含CaCl2量为一般任氏液的1/4，其它成分不变）、5%洋地黄溶液（0.1％毒毛旋花子苷K溶液）、1%氯化钙溶液 [实验方法] 1、取蛙1只，用探针破坏脑及脊髓，背位固定于蛙板上。先剪开胸部皮肤，再剪除胸部肌肉及胸骨，打开胸腔，剪破心包膜，暴露心脏。 2、制备离体蛙心 （1）在主动脉分支处下穿一线，打好松结，备结扎套管之用。 （2）于左主动脉上剪一“V ”形小口，插入盛有任氏液的蛙心套管，通过主动脉球转向左后方，同时用镊子轻提动脉球，向插管移动的反方向拉，即可使套管尖端顺利进入心室。见到套管内的液面随着心搏上下波动后，将松结扎紧并固定在套管的小钩上。用滴管吸去套管内血液，以防止血块堵塞套管。 （3）结扎右侧主动脉，剪断主动脉，持套管提起心脏，自静脉窦以下把其余血管一起结扎（切勿伤及或结扎静脉窦），分离周围组织，在结扎处下剪断血管，使心脏离体。并用任氏液连续换洗，至无血色，使插管内保留1.5ml左右的任氏液。 3、将蛙心套管固定于铁架台，用带有长线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部，将长线连于张力换能器。 4、打开电脑及BL-410系统。记录一段正常心脏搏动曲线后，依次换加下列药液。每加一种药液后，密切注意心脏收缩强度、心率、房室收缩的一致性等方面的变化。 （1）换入低钙任氏液。 （2）当心脏收缩显著减弱时，向套管内加入5%洋地黄溶液0.1～0.2ml（或0.1％毒毛旋花子苷K溶液0.2ml）。 （3）当作用明显时，再向套管内加入1%氯化钙溶液2～3滴(过量)。 [报告要点] 打印或复印心脏的收缩曲线，图上注明加药、换药、心率、房室收缩的一致性、心室体积变化等方面的说明。 [讨论] 在本实验中可以看到强心苷的哪几种药理作用？ [注意事项] 1、本实验以青蛙心脏为好。因蟾蜍皮下腺体有强心苷样物质，可降低对强心苷的敏感性。 2、在整个实验过程中应保持套管内液面高度不变，以保证心脏固定的负荷。 3、在实验过程中，基线的位置、放大倍数、描记速度应始终一致。 4、在实验中以低钙任氏液灌注蛙心，使心脏的收缩减弱，可以提高心肌对强心甙的敏感性。