肿瘤血管生成与血管生成抑制因子的研究进展 摘要：肿瘤血管生成在肿瘤的生长和转移中起着重要的作用，是肿瘤生长、侵袭、转移和复发的先决条件。肿瘤的血管生成是一个复杂的生物学过程,包括血管内皮细胞的增殖、出芽和迁移等。这一过程中有众多肿瘤血管生成因子和抑制因子参与调节和激活血管生成的开关。因此, 研究肿瘤血管生成相关分子在肿瘤血管生成中的作用机制, 及其对肿瘤血管生成的调控,形成一种抗血管生成疗法，来达到控制肿瘤血管生长和转移的目的, 对肿瘤的治疗具有重要意义。 关键词：肿瘤血管生成；血管生成因子；血管生成抑制因子；血管生成开关恶性肿瘤的生长和转移依赖于血管生成。当肿瘤体积超过2-3mm3后局部缺血缺氧[ 1] , 需要产生新的毛细血管以维持肿瘤的生长, 丰富的血管可向肿瘤提供足够的营养物质, 清除各种降解产物, 肿瘤细胞亦经血管进入血液循环发生血行转移, 否则肿瘤将发生退行性坏死[ 2].新血管的形成发展取决于血管生成生长因子和血管生成抑制因子之间的动态平衡，当血管生长因子与血管抑制因子达到平衡时，血管生成不被启动; 当此平衡趋向于血管生成时，血管开关被开启，新生血管开始生成。在正常组织中, 由于缺少血管生成生长因子或生长因子被高水平的血管生成抑制因子严格控制,血管生成的开关处于关闭状态;但在肿瘤组织中, 生长因子过度表达, 抑制因子表达过低, 改变了这个平衡, 开启了肿瘤血管生成的表型, 导致新血管的生长。因此，有学者认为肿瘤血管形成的始动因素是血管生长因子和血管抑制因子失衡，并且这种失衡会持续出现在肿瘤生长过程中，并提出了通过抑制血管生长因子信号通路，来抑制肿瘤生长和转移。［3］1．肿瘤血管生成开关机制 实验和临床数据表明，大多数人类肿瘤生成早期不诱导血管生成和并存在于原位，在无血供数月至数年后，肿瘤中的一些细胞向血管生成的表型转变，这种现象称为血管生成开关。这一机制的分子基础可能是血管生成抑制剂的减少以及血管生成因子产量增加所致[4]。因此，血管生成表型的开关是由血管生成因子与血管生成抑制因子的动态变化来调节。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
血管内皮生长因子受体对宫颈癌细胞凋亡的效应研究(一) 作者：刘琰，杨婉华，马湘一，陈睿，汪蕊，卢运萍，马丁，王世宣 【摘要】目的研究血管内皮生长因子受体（）在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用。方法用基因重组方法构建人反义基因真核表达载体，用电穿孔法转染人宫颈癌细胞系Hela细胞。采用WesternBlot分析转染前后细胞中蛋白的变化。利用Hoechst33258染色和流式细胞仪观察转染后Hela细胞的凋亡情况。结果转染反义 质粒后,Hela细胞的蛋白表达水平明显下降，细胞凋亡率明显增加(P0.01)。结论抑 制的表达可促进宫颈癌细胞的凋亡，V可能是肿瘤基因治疗的一个潜在新靶点。 【关键词】反义核酸凋亡；宫颈癌 Keywords：；Antisensenucleicacid；Apoptosis；Cervicalcancer 血管内皮生长因子受体属于酪氨酸激酶受体家族,在胚胎发生的初始阶段存在于所有的内皮细胞，随后定位于小静脉和淋巴管，是成熟淋巴管内皮细胞的特异性标志物1]。主要通过与其配体、结合后，促进淋巴内皮细胞的增殖、分化，诱导淋巴管生成，促进肿瘤细胞的侵袭和转移2]。在肿瘤组织中可见肿瘤周边的新生淋巴管、扩张的淋巴管、有癌栓的淋巴管内皮细胞呈高表达3]。 现有研究表明在多数肿瘤细胞上也有相应表达4]，但关于其在肿瘤细胞中的效应及作用机制尚不清楚。我们自行设计了的反义重组质粒，通过电穿孔转染法瞬时转染人宫颈癌细胞株Hela细胞，观察反义封闭VE后Hela细胞凋亡情况的变化，对在宫颈癌细胞中的作用及其机制进行初步探讨。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1主要试剂与仪器培养基DMEM、Trizol购自美国GibcoBRL公司；胎牛血清为杭州四季青生物工程公司产品；逆转录酶、载体购自美国Promega公司；PCR引物购自上海博亚生物技术有限公司；兔抗人多克隆抗体、兔抗人多克隆抗体、HRP标记的羊抗兔IgG均购自美国SantaCruz公司；ECL显色试剂盒购自美国Pierce 公司。 1.1.2细胞培养人宫颈癌细胞株Hela购自美国典型物种保藏中心（ATCC）,培养在含10％胎牛血清的DMEM中，置饱和湿度5％CO2，37℃恒温培养箱中培养。 反义核酸载体的构建 目的基因的制备根据NCBIGenebank登录的的cDNA序列,利用Primer5.0设计胞外1～3区的引物，上游引物设计BamHⅠ酶切位点，下游引物设计EcoRⅠ酶切位点，上游引物序列为：3’下游引物序列为：。按Trizol说明书从胎盘组织中提取总mRNA(由华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科提供)，再以方法大量扩增目的片断。PCR循环条件：94℃预变性5min、94℃变性30s、56℃复性30s、72℃延伸45s，共35个循环，全部循环结束后，于72℃做10min终止前延伸。1%琼脂糖凝胶电泳检测，PCR产物纯化试剂盒纯化目的片断。 1.2.2反义重组质粒的构建按常规分子生物学方法，将目的基因和载体连接。连接产物转化，挑取阳性克隆,小量摇菌后酶切初步鉴定、测序。 1.3基因转染及细胞分组 参考《分子克隆》采用电穿孔转染法，将电击完的细胞转移至已加入适量培养基的35mm 培养皿中，培养皿置于含5％CO2的37℃孵箱,24h后观察转染效率。
本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！ 血管内皮生长因子(专业知识值得参考借鉴) 一概述血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF），又称血管通透因子（vascularpermeabilityfactor，VPF）是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。血管内皮生长因子有5种不同的亚型，根据氨基酸的数目命名为：VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206，其中VEGF165为VEGF主要存在形式。 二家族及受体1.家族 血管内皮生长因子是一个家族，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子（PGF）。通常VEGF即VEGF-A。VEGF-A可促进新生血管形成和使血管通透性增加，VEGF-B在非新生血管形成的肿瘤中起作用，VEGF-C和VEGF-D在癌组织的新生血管和新生淋巴管的形成过程中起作用，VEGF-E也是一种潜在的新生血管形成因子，PGF促进新生血管形成，使血管通透性增加，在实验性脉络膜新生血管中PGF的表达明显增高。 2.受体 与血管内皮生长因子进行特异性结合的高亲和力受体称为血管内皮生长因子受体（vascularendothelialgrowthfactorreceptor，VEGFR），主要分为3类VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。VEGFR-1和VEGFR-2主要分布在肿瘤血管内皮表面，调节肿瘤血管的生成；VEGFR-3主要分布在淋巴内皮表面，调节肿瘤淋巴管的生成。 三生物学功能1.促进内皮细胞增生VEGF是一种血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，在体外可促进血管内皮细胞的生长，在体内可诱导血管增生。尤其是在低氧环境下，VEGF与内皮细胞膜上VEGF 受体结合，引起受体的自身磷酸化，从而激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK），实现VEGF的有丝分裂原特性，诱导内皮细胞增生。 2.促进血管增生在低氧环境下，VEGF通过提高血浆酶原活化因子（PA）和血浆酶原活化因子抑制因子-l（PAI-1）的mRNA表达，来提高血浆酶原活化因子的活性，促进细胞外蛋白水解，进而促进新生毛细血管的形成。 3.增加血管通透性VEGF是最强的可增加血管通透性的物质之一，是通过细胞小囊泡器来实现的。其特点是作用迅速、持续时间短。
肿瘤细胞诱导血管生成模型具体步骤及详细说明 肿瘤血管生成是指肿瘤微环境诱导的在原有血管基础上生成以毛细血管为主的血管系统，并在肿瘤组织内建立血液循环的过程。肿瘤血管生成与肿瘤微环境密切相关，受多种促血管生成因子和（或）血管生成抑制因子的调节。 1、鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵（新洁尔灭）液浸泡3分钟，置37.8土0.5℃培养箱中孵育。鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1——2mm 组织小块。 2、组织接种：在制备鸡胚观察窗的次日，即鸡胚发育第8天进行组织接种。每个鸡胚可接种5—7个组织小块于接种部位CAM表面，再用透明胶纸封好，继续孵育。 3、接种组织的收获与观察：组织接种后每12小时观察一次，到组织接种第11天（鸡胚发育第18天）收获接种组织，取出鸡胚，置接种组织连同周围的CAM于解剖显微镜下观察，并用10％甲醛固定保存，部分组织可作石蜡切片，用作血管生成研究的免疫组化染色等。 4、CAM的血管生成表现：组织接种24小时后，CAM血管开始向接种组织生长，随培养时间的延长，血管数目及直径均明显增加；第2天，新细小血管直接趋向组织；第3天，新生血管形成以接种组织为中心，10——20条放射状
血管网；尔后，CAM血管继续明显增加。非接种部位与接种部位比较，CAM 血管数目少，大血管与小血管呈脉样均匀分布；而接种部位的CAM血管在接种组织周围弥散样增加，以组织为中心向周围呈放射状分布，在首先与组织发生联系的区域CAM血管更多。第4天，可见新生细小CAM血管生长形成中、粗血管，并在中、粗血管继续分支出细小血管，形成新的血管网。CAM血管管腔结构清晰，可区别动、静脉。 注意事项 该类体外实验研究，有很多人为因素影响，不能代表体内生理反应，因为内皮细胞在生长因子存在的条件下培养了很长一段时间，已被激活。因此，有必要建立一类与体内生理反应有关的血管生成实验方法，尤其是与人类血管生成有关的血管生成实验。 CAM血管生成模型用于血管生成的研究，可取得两方面结果： ①检测评价接种物刺激CAM血管增生的血管生成作用，用于分析研究血管生成促进因子、抑制因子的活性和作用的检测，如肿瘤血管生成的研究等； ②对接种物，如肿瘤组织、自身的血管生成进行研究，用于分析不同组织的血管生成活性和作用，如肿瘤组织有引发新生血管生成的作用。
乳腺癌患者血清血管内皮生长因子的检测和 意义 【摘要】目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌诊疗中的意义。方法采用ELISA方法检测33例初治乳腺癌、36例复发乳腺癌、35例定期随访者及30例正常人血清VEGF浓度。结果复治组的血清VEGF水平明显高于初治组、随访组及对照组(P均<0.01)。结论血清VEGF的检测对乳腺癌的疾病进展及预后估计有一定的临床意义。 【关键词】乳腺肿瘤;血清血管内皮生长因子 目前研究表明，血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的形成和生长以及转移中有极为重要的作用，多数实体瘤均过度表达VEGF，且常伴有血清VEGF的增高。笔者通过对104例乳腺癌患者血清浓度的检测，探讨血清VEGF在乳腺癌诊断、预后估计和病情监测的意义。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2005年10月～2007年3月在我院化疗科治疗的乳腺癌患者69例，其中乳腺癌术后巩固化疗患者33例(初治组)，复发转移乳腺癌36例(复治组)。后期乳腺癌术后0.5～3年定期复查
者35例(随访组)。初治组年龄28～59岁，复治组年龄32～67岁，随访组31～60岁，所有患者均经过病理学确诊，其中单纯癌22例，浸润性导管癌50例，髓样癌7例，乳头状癌16例，浸润性小叶癌9例。正常对照组30例，为门诊健康体检者，年龄20～57岁。
1.2 检测方法清晨空腹抽取静脉血3ml，1500r/min，离心15min，分离血清，置于-20℃冰箱保存。血清VEGF定量试剂由晶美生物工程(北京)有限公司提供，用ELISA方法按试剂盒测试步骤进行，VEGF水平范围6 2.5～250ng/L。 1.3 统计学方法计量数据用(±s)表示，两组间均数比较采用t检验。 2 结果 各组血清VEGF检测结果，见表1。复治组血清VEGF明显高于初治组、随访组及对照组，差异均有高度显著性(P<0.01)。表1 各组血清VEGF的检测结果 3 讨论 研究表明[1,2]，新的血管生成是肿瘤生长、转移和转移灶生长的必要条件，而VEGF是调节新的血管生成的最重要的细胞因子。VEGF通过促进肿瘤新生血管形成来促进肿瘤的生长，另一方面通过促进血管的渗透性来加速肿瘤细胞进出血管，因而加速肿瘤的转移。到目前为止，在乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、前腺癌等多种肿瘤组织中均检测到VEGF的表达。由于VEGF具有血管通透性，肿瘤细胞合成的VEGF进入血循环，测定血清VEGF对判断肿瘤的预后的意义[3，4]，
本实验技术来源于SciMall科学在线 血管生成（Angiogenesis）信号通路图 血管生成是通过人体中存在的诸多互补和复杂的信号途径调节的.血管内皮生长因子(VEGF)-血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管生成素(Ang)-Tie2轴和Dll4-Notch这3个复杂的、相辅相成的信号传导通路可在调节血管生成中发挥重要作用. VEGF与内皮细胞上的两种受体KDR和Flt-1高亲和力结合后，直接刺激血管内皮细胞增殖，并诱导其迁移和形成官腔样结构；同时还可增加微血管通透性，引起血浆蛋白（主要是纤维蛋白原）外渗，并通过诱导间质产生而促进体内新生血管生成。VEGF在血管发生和形成过程中起着中枢性的调控作用，是关键的血管形成刺激因子。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。TNF-α是一类具有血管活性的细胞因子，可诱导异位子宫内膜炎性细胞因子MCP-1，IL-6和IL-8等的释放，促进异位内膜及基质细胞增殖及炎性细胞浸润，新生血管形成，组织粘连，从而形成异位病灶。 （来源：Scimall科学在线） 本信号转导涉及的信号分子主要包括： HIF1α，PHDs，HIF1β，PI3K，Akt，mTOR，S6K，4E-BP1，eIF4E1，elF4E1，Ras，MEK1，MEK2，Erk1，Erk2，MNK，CBP，P300，TCEB1，TCEB2，Rbx1，Cul2，VHL，MMP，Cox2，PAI-1，VEGF，PDGFR-β，VEGFR2，Tie2，FGFR，IGFR，TGFα-R，SLIT，ROBO，Src，FAK，p38，MAPK，Smad2，Smad3，PLCγ，NOS等。 点击图中信号分子，自动寻找相关试剂
开题报告 药学 赤魟软骨血管生成抑制因子的制备 一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义 作为拥有1.8万公里海岸线的国家，我国的渔业资源非常丰富，赤魟就是这丰富资源中的一种。 魟鱼[1] (Ray)俗称鯆鱼，草帽鱼，蒲扇鱼，黄貂鱼。英文名：Red stingray。它属暖温类底层鱼，属于脊椎动物门Verterata，软骨鱼纲Chondrichthyes，板鳃亚纲Elasmobranchii，鳐目(或魟目)Rajiformes，魟科Dasyatidae和燕魟科Myliobatidae。全世界共有六个科158种。赤魟主要分布于我们南海和东海，长江口咸谈水中亦有分布。浙江沿海拥有丰富的海洋资源，其中以赤魟（Dasyatis akajei）资源最为丰富。 魟软骨味尚佳，皮厚实，无血有光泽，含丰富的胶质，水发后烹制成“大扒鱼皮”，味道鲜美，是宴席上的珍品。此外，作为药用，其肉性味甘、咸平，无毒，具有健脾补气、滋补强身之功效。用其熬油，主治小儿疳积。尾毒的毒液是一种氨基酸和多肽类的蛋白质，其药性咸、寒，有小毒，对于中枢神经和心脏具有一定的效应，有清热消炎、化结、除癥之功效。尾刺研末入药，对治疗胃癌、食道癌、肺癌、乳腺炎、咽喉炎、疟疾、牙痛、魟鱼尾刺刺伤均有一定疗效。其肝除作为制作鱼肝油的原料外，煮食后能治夜盲症。 但是，国内外对赤魟的生物活性研究还处于起步阶段，其应用研究和应用基础几乎空白，资源量丰富、营养药用价值高的赤魟仅处于被人们日常食用的阶段。上文所述赤魟的药用价值大多都是对赤魟尾刺提取物、赤魟肝脏活性蛋白、赤魟软骨多糖或其软骨活性蛋白的研究。 如肖湘等对赤魟肝脏活性蛋白体外抗氧化作用的研究[2]，采用硫酸铵沉淀、Sephadex-G150柱层析的方法从赤魟肝脏分离活性蛋白，测定活性蛋白清除超氧阴离子自由基、羟自由基和抑制脂质过氧化作用，结果显示分离得到的三个蛋白峰均具有很强的抗氧化作用。 罗红宇等对赤魟软骨黏多糖的制备研究[3]，探索利用碱浸提和酶法去蛋白从赤魟
银屑病与血管生成因子(一) 摘要:银屑病是一种炎症性疾病，血管生成是银屑病病理改变的特征之一。作为银屑病发生发展必不可少的条件，血管生成相关因子在银屑病发病机制中的研究日益受到重视。现就目前若干银屑病血管生成研究中较热点的血管生成相关因子：血管内皮生长因子，肝细胞生长因子，胸苷磷酸化酶，血小板反应蛋白等的研究进展作一综述。 银屑病是一种常见的复发性、炎症性皮肤病。以角质形成细胞（KC）过度增生、炎症细胞浸润、新生血管形成为其组织病理三要素。目前研究表明：银屑病皮损处的真皮乳头层微血管扩张迂曲，通透性增高，血管数量增多，并认为这种变化主要发生在毛细血管后微静脉1]。银屑病中最先发生的病理改变是血管的分布和形成的改变1,2]。在银屑病患者非皮损皮肤中亦常能见到异常扩张的血管2]。银屑病的复发则与皮损内真皮乳头内皮细胞的过度表达有关。且银屑病患者皮肤血管生成只与表皮变化有关，而与真皮无关3]。微血管是皮肤组织与循环血液进行物质交换的场所。因此对银屑病血管生成的研究有助于揭示银屑病的发病机制，并指导临床治疗。目前有关银屑病血管生成，特别是一些血管生成相关因子以及抗血管生成药物治疗银屑病的研究日益受到重视。 促血管生成物质诱导血管生成的过程大致可分解为以下几步：①内皮细胞激活；②基底膜和细胞外基质降解；③内皮细胞增生，并迁移到血管周围基质形成管腔；④新生血管网络系统形成。现就近几年在银屑病研究中的若干热点血管生成因子的研究进展综述如下4,5]。 一、血管内皮生长因子 血管内皮生长因子（VEGF）又名血管通透性因子（VPF），有4种不同的亚型，在人类细胞中的氨基酸残基数分别为121，165，189，2066]，是由同一基因因mRNA剪接差异而生成的不同表达产物。VEGF在体内可以增加血管通透性，促进血管生成；在体外则作为内皮细胞选择性的有丝分裂原。VEGF是内皮细胞特异性的，它能改变内皮细胞的基因表达。VEGF 与血管内皮细胞表面的两个酪氨酸激酶受体kdr与flt-1结合，使胞浆内Ca++浓度上升，刺激三磷酸肌醇（IP3）聚集，这一作用被认为与磷酸肌醇特异性的磷脂酶C有关6,7]。Siemeister 等8]报道：人工合成的VEGF变异体能抑制VEGF介导的受体自动磷酸化和内皮细胞增生。其增加血管通透性的作用可能是通过囊泡-液泡细胞器（vesicular-vacuolarorganelleVVO)起效的6]。VEGF能上调囊泡-液泡细胞器功能，调节血管基底膜上窗孔的开放或关闭，它的促血管通透性增加的作用较组胺强50000倍9]。另有报道，VEGF在冠状动脉内皮细胞中可能是通过一氧化氮/鸟苷酸环化酶信号级联（guanylatecyclasesignalingcascade）放大起作用的10]。Detmar等9]报道，VEGFmRNA及蛋白表达水平在银屑病患者皮损中明显增加，而在正常人皮肤中几乎没有VEGFmRNA表达。患者非皮损处VEGFmRNA及蛋白水平表达亦增加，且出现银屑病早期病理改变。研究发现VEGF染色位于基底层上（suprabasal）的KC胞浆内，kdr 与flt-1的mRNA则表达于活动期皮损的真皮乳头层微血管内皮细胞上，在正常人或皮损更深部位则无kdr与flt-1的mRNA表达。同时发现，转化生长因子/表皮生长因子（TGF-α/EGF）对培养的人KC中VEGFmRNA的表达有剂量依赖的诱导上调作用，TGF-α/EGF受体在银屑病皮损中表达也明显增高。TGF-α能刺激VEGF合成分泌。另外VEGFmRNA和TGF-αmRNA在表皮KC的相同定位也在一定程度上证实了上述观点。最近有研究表明，KC通过自分泌成纤维细胞生长因子FGF-4（bFGF)上调VEGFmRNA来表达其血管生成活性11]。 由此可见VEGF所介导的银屑病血管生成过程是：表皮KC在受到刺激后能通过自分泌或旁分泌的形式释放细胞因子，促进VEGF表达，而VEGF则通过内皮细胞上的特异性受体kdr 和flt-1使胞内发生一系列改变，促使血管通透性增加及血管内皮细胞增生、迁移，最终导致新生血管形成。 二、肝细胞生长因子 肝细胞生长因子（HGF）又名扩散因子（SF），是由基质细胞（stromalcell）、成纤维细胞及
中药抗肿瘤血管生成研究进展 （作者：__________ 单位： __________ 邮编：____________ ） 【摘要】抗肿瘤血管生成为肿瘤的治疗提供了新的契机，中药均为有效的血管生成抑制剂，具有廉价无毒等优点，随着其抗肿瘤，血管生成等机制方面研究的不断深入，中草药极有希望成为理想 而全面的癌症预防和治疗药物。 【关键词】肿瘤血管抑制因子综述 近年来中药或有效成分抑制肿瘤血管生成研究非常活跃，也具有明显的广度和深度。 1中草药研究动态 1.1去甲斑蝥素范跃祖等观察了去甲斑蝥素（NCTD对胆囊癌肿瘤血管生成的抑制作用及其机制NCTD可有效抑制、破坏胆囊癌肿瘤血管生成,进而抑制胆囊癌的增殖与生长。其机制可能与NCTD诱导血管内皮细胞凋亡、直接破坏血管内皮细胞、改变血管内皮细胞PCNA/凋亡比、下调血管生成因子VEGFA n期2和上调血管抑制因子TSP TIMP2表达有关［1］。 1.2小檗碱小檗碱（berberine）为黄连（毛茛科植物）、黄柏等
（芸香科植物）植物的一种生物碱，作为抗菌药已有悠久的历史。初步研究表明它在体内、体外对多种肿瘤细胞具有较强的抑制和杀伤作用 :2］。娄金丽等研究小檗碱对bFGF活化人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其对肿瘤新生血管形成作用的机制。方法：MTT法检测小檗碱对bFGF活化HUVEC勺增殖作用；流式细胞仪检测用药后细胞周期的变化；激光共聚焦扫描显微镜下观察药物对细胞形态、细胞内钙的影响；流式细胞仪检测小檗碱对细胞凋亡的作用。结果：小檗碱能明显抑制bFGF活化的HUVE（增殖,且存在剂量依赖关系；使细胞在GG以G1期的比例明显增多；使细胞核浓缩、甚至裂解成碎块，同时使细胞内钙增多；并诱导活化HUVEC 发生细胞凋亡。结论：小檗碱可能通过将bFGF活化的HUVEC田胞周期阻滞在G期G1期，抑制活化HUVEC勺增殖；诱导活化HUVEC田胞发生凋亡等机制,阻止新生血管形成，发挥其抗肿瘤作用］3］。 1.3白藜芦醇白藜芦醇是广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中的一种多酚类化合物，目前至少已经在21个科，31个属的72 种植物中发现了白藜芦醇。早期研究发现，白藜芦醇具有保护心血管， 调节血脂、抗病原微生物、护肝等多种生物学作用。自从Jang等于1997年系统报道了白藜芦醇的抗肿瘤作用后，迄今已发现白藜芦醇能通过多种途径抑制肿瘤细胞的起始，促进，发展三个阶段，而且可以抑制肿瘤血管形成。1.对内皮细胞的作用，能够直接抑制血管内皮细胞的增生，迁移及诱导其凋亡，从而抑制血管的生成。 2.对血管生
人血管内皮细胞生长因子A（VEGF-A）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中VEGF-A含量。 实验原理 用纯化的VEGF-A抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的VEGF-A抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的VEGF-A呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制 1、酶标板：一块（96孔） 2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成2,000pg/ml，1,000pg/ml，500 pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。如配制1,000pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）2,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、样品稀释液：1×20ml。 4、检测稀释液A：1×10ml。 5、检测稀释液B：1×10ml。 6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
血管新生概念及其调控因子网络 1.1病理性血管新生与治疗性血管新生 任何组织损伤后的修复都离不开血管生成，血管生成是组织修复的中心。血管生成过程包括血管新生、血管发生和原已存在的血管剪切重构形成的成熟毛细血管网。血管新生，是指毛细血管从原血管以出芽方式形成新血管床的过程。通常存在于胚胎形成和产后组织正常生长的过程中，成年女性生殖系统子宫内膜血管的周期性反复重建和组织受损后正常的修复也有血管生成的参与。在这些过程中，血管生成的启动受到多种因素的控制，仅随刺激信号的出现开启短暂时间，然后即被关闭。所以，体内血管的生长与抑制处于动态平衡，以保持相对静止状态，当这一状态一旦被打破，即导致许多疾病的发生[5]。在创伤、缺血、炎症、伤口愈合、肿瘤生长、糖尿病性视网膜病、风湿性关节炎、牛皮癣等许多病理条件下亦可发生新的血管形成。血管新生包括以下几个过程[6]：①小血管(常常为毛细血管后静脉)基底膜和基质的降解，参与这一过程的有胶原酶、尿激酶型纤溶酶原激活物等；②内皮细胞在趋化因子的作用下发生迁移，bFGF、VEGF、IL-8等对这一过程均具有促进作用；③内皮细胞增殖；④在内皮芽生的基础上形成管腔；⑤芽生的管腔相互融合成环状血管分支，形成三维管状结构，允许血流通过；⑥血管周细胞进一步构建血管结构；⑦血管周围基膜的形成。 血管新生性疾病即指与微血管异常生长有关的疾病，表现为血管生成的过度与缺陷。自1971年Folkman[7]提出：“三维生长的肿瘤 2mm×2mm×2mm之后是绝对血管生成依赖性”的观点后，血管生成的研究受到了广泛的关注，并取得飞速进步。探讨血管生成发生机理和研制逆转血管生成病变的治疗方法和药物是近年医学研究的热点课题。其中，抑制血管新生（抗病理性血管新生）研究与肿瘤的治疗密切相关；而对促进血管新生（治疗性血管新生）的研究多围绕冠状动脉侧枝循环的治疗展开。冠状动脉粥样硬化和渐进型冠状动脉闭塞常能形成侧枝循
?２９４８?［２２］ ［２３］ ［２４］ ［２５］ ［２６］匡堂筮述！Ｑ塑生！Ｑ旦箜！！鲞笙！！翅丛！ｉｉ型塾！！！唑！！！塑：Ｑ堕！Ｑ鲤：！！！：！§，盟！：！！ ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｓｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄｎｕｃｌｅａｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄｄｉｓｒｕｐｔｓｉｔｓｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎｉｎｌｙｓｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ，２００ｒ７，６（６）：１８０４．１８１３． ＨｕｈＨＪ。ＰａｒｋＣＪ，ＪａｎｇＳ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｌ（ＭＤＲｌ），ｍｕｈｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ（ＭＲＰ）ａｎｄｌｕｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＲＰ）ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａ—ｃｕｔｅｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．ＪＫｏｒｅａｎＭｅｄＳｃｉ，２００６，２１（２）：２５３－２５８． ＢｅｒｇｅｒＷ，Ｓｐｉｅｇｌ—ＫｒｅｉｎｅｃｋｅｒＳ，ＢｕｃｈｒｏｉｔｈｎｅｒＪ。ｅｔａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓ—ｓｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｍａｊｏｒｖａｕｌｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｓｔｒａｃｙｔｉｃｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＩｎｌＪＣａｎｃｅｒ．２００１，９４（３）：３７７－３８２． ＢｅｒｇｅｒＷ，ＥｌｂｔｉｎｇＬ，ＭｉｃｋｓｃｈｅＭ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｖａｕｌｔｐｒｏｔｅｉｎＬＲＰｉｎｈｕｍａｎｎｏｎ—ｓｍａｌｌ—ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ：ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙｓｈｏｒｔ—ｔｅｒｍｅｘｐｏｓａｒｅｔｏａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｄｒｕｇｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ。２０００，８８（２）：２９３－３００． ＳｔｅｉｎＵ，ＢｅｒｇｍａｎｎＳ，ｓｃｈｅ艉ｒＧＬ，ｅｔａ１．ＹＢ—ｌｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｂａｓａｌａｎｄ５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｅｉｌ－ｉｎｄｕｃｉｈｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｍａｊｏｒｖａｕｌｔｐｒｏ－ｔｅｉｎ（ＭＶＰ）ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００５，２４（２２）：３６０６－３６１８． １ｋｕｔａＫ，ＴａｋｅｍｕｒａＫ，ＳａｓａｋｉＫ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｕｈｉｄｒｕｇｒｅ－ ｓｉｓｔａｎｅｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｉｓｐｌａｔｉｎｉｎｈｕｍａｎｎｏｎ—ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕｌｌ，２００５，２８（４）：７０７－７１２．［２７１Ｉ（ｊｔａｚｏｎｏＭ，Ｓｕｍｉｚ．ａｗａＴ，ＴａｋｅｂａｙａｓｈｉＹ，ｄａ／．Ｍｕｈｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅｌｕｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａ ＳＷ－６２０ｃｅｌｌｓｌＪ１．ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒｌｎｓｔ，１９９９。９１（１９）：１６４７－１６５３．［２８】ＬｅｗｉｎＪＭ，ＬｗａｌｅｅｄＢＡ，ＣｏｏｐｅｒＡＪ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｄｉｒｅｃｔｅｆｆｅｃｔｏｆｎａｃｌｅ— ａｒｐｏｒｅｓｏｉｌｎｕｃｌｅａｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｓｐａｒｉｎｇｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎＪ】．Ｊ Ｕｒｏｌ。２００７．１７７（４）：１５２６一１５３０． ［２９】ＹａｓｕｎａｍｉＴ，ＷａｎｇＹＨ，ＴｓｕｊｉＫ，ｅｔａ１．Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｄｕｈＴ－ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ【Ｊ１．ｋｕｋＲｅｓ， ２００７．３１（４）：４６５－４７０． ［３０］樊娟，周慧，张丽，等．急性白ＪｌＩＬ病细胞肺耐药相关蛋白的表达及其临床意义［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２００７，１４（１９）： １４７７－１４７９． ［３１］ＫｏｕｒｔｉＭ，ＶａｖａｔｓｉＮ，ＧｏｍｂａｋｉｓＮ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ１（ＭＤＲＩ），ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１ （ＭＲＰＩ），ｌｕｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＲＰ），ａｎｄｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｒｅ? ｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＣＲＰ）ｇｅｎｅｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｏｕｔｃｏｍｅｉｎｃｈｉｌｄ— ｈｏｏｄａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．ＩｎｔＪＨｅｍａｔｏｌ，２００７， ８６（２）：１６６－１７３． 收稿日期：２００９－０３－３０修回日期：２００９－０７－１０ 血小板第四因子抗肿瘤血管生成研究进展 张华１△（综述），任宏轩ｈ，伍治平２（审校） （１．云南省肿瘤医院内二科，昆明６５００１８；２．云南省肿瘤研究所，昆明６５００１８） 中图分类号：Ｒ７３０．５文献标识码：Ａ文章编号：１００６－２０８４（２００９）１９－２９４８－０３ 摘要：血小板因子４是由活化的血小板ｏｔ颗粒分泌的趋化因子，属于ＣＸＣ４家族，具有抗肿瘤血管生成的活性，属于内源性的血管生成抑制因子。其可以通过多种机制抑制肿瘤的血管生成，如抑制血管内皮细胞生长园子、碱性成纤维细胞生长园子介导的血管内皮的增殖；削弱ｐ２１的下调，抑制内皮细胞分裂、增殖；抑制基质金属蛋白酶的表达，防止新生血管向周围组织的蔓延等。从而有效抑制肿瘤的新生血管形成。 关键词：血小板因子４；肿瘤血管生成；抗血管生成 ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＡｎｔｉ—ｔｕｌｎｏｒＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＰｌａｔｅｌｅｔＦａｃｔｏｒ．４Ｚ托４ＮＧＨｕａｌ．兄ＦＮＨｏｎｇ．ｚ“Ⅱ，ｌ‘．删Ｚｈｉ－ｐｉｎ９２．（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｙｎｎ，ｚⅡｎＰｒｏｖｉｎｃｅＴｕｍｏｒＨｏｓｐｉｔａｌ。Ｋｕｎｍｉｎ９６５００１８，傩ｉ—ｗ；２．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｙ“ｎ№ｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００１８．吼ｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｌａｔｅｌｅｔｆａｃｔｏｒ－４ｉｓａｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｌｅａｓｅｄｂｙｔｈｅａｃｔｉｖａｔｅｄｐｌａｔｅｌｅｔｉｎｔｈｅｐｌａｓｍａ．ｗｈｉｃｈｉｓｉｎ．ｄｅｘｅｄｉｎｔｈｅＣＸ（＝４ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ．Ｉｔ ｈａｓａｎｔｉ?ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｃｔｉｖｉｔｙ．ｉｓｔｈｅａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｉｖｏ．ＴｈｒｏｔＩｇｈａｖａｒｉｅｔｙｏｆｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ｐｌａｔｅｌｅｔｆａｃｔｏｒ－４ｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＳＵ（－ｈａｓｉｎｈｉｈｉｔｉｎｇＶＥＣＦ。ｂＦＧＦ－ｍｅｄｉ．ａｔｅｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ．ｗｅａｋｅｎｔｈｅｄｏｗｎｗａｒｄｏｆｐ２１．ｉｎｈｉｂｉｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｅｅｌｌｄｉｖｉｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ．ｔｏｐｒｅｖｅｎｔｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｓｐｒｅａｄａ．ｒｏｕｎｄｔｈｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｎｎｓｏａｓｔｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｌａｔｅｌｅｔｆａｃｔｏｒ－４；Ａｎｇｉｏｇｅｎａｓｉｓ；Ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ 目前恶性肿瘤已成为威胁人类健康最严重的一 类疾病，肿瘤的发病率和病死率都日益增高。临床 上绝大多数的肿瘤患者死于肿瘤的远处转移。血管 生成在肿瘤转移中起到了非常重要的作用。同时也 是肿瘤转移的必需条件…。血小板因子４（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆａｃｔｏｒ－４，ＰＦ４）属于内源性血管生成抑制因子，它可以 通过多种机制抑制肿瘤的血管生成，是近几年研究 的热点［２３。 １ＰＦ４及其生物学活性 早在１９４８年，Ｃｏｎｌｅｙ就发现血小板减少患者对肝素的敏感性异常增加，从而推测血小板可能释放某种具有中和肝素抗凝活性的因子，此后被其他学者陆续证实，并部分纯化了这种血小板蛋白，并命名为ＰＦ４。因其有中和肝素的作用又称其为肝素结合蛋白或抗肝素因子。ＰＦ４是由巨核细胞合成的，生理状态下存在于巨核细胞及血小板ａｔ颗粒致密体中，在血小板黏附、聚集等 活化状态下以高分子质量蛋白多糖一ＰＦ４复合物的形 式释放。因此，它可以作为巨核细胞分化成熟以及 血小板活化的一种标志物∞Ｊ，但是最近研究显示单 核．巨噬细胞在细菌、真菌、脂多糖、酵母多糖及血小 板碱性蛋白等的刺激下也可以分泌ＰＦ４ＨＪ。酶联免 疫吸附法测定其在正常人血浆中的浓度为０．９ ～５．５斗ｇ／ＬⅢ。 ＰＦ４属于人趋化因子超家族Ｃ．ｘ—Ｃ亚族，含有 ７０个氨基酸，由４个单体组成，每个单体相对分子质 量为７．８×１０３，单体是Ｎ端的可变区通过二硫键锚万方数据
血管内皮生长因子在肝癌中的作用 [关键词] 血管内皮生长因子;肝癌;血管生成;文献综述 肝细胞肝癌(HCC)属于多血管性实体瘤,实体瘤若没有血管生成提供足够的血供,其直径不会超过2 mm,肿瘤不能持续生长并发生坏死。因此,血管生成在肿瘤的发生发展中起至关重要的作用,肿瘤的血管生成由多种血管生长因子调控,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与其受体(vascular endothelial growth factor receptors,VEGFR)在肿瘤血管生成中起最重要的作用。作者就肝癌中VEGF与VEGFR的研究进展进行简要综述。 1 VEGF结构和作用 VEGF是1989年由Ferrara发现的,是最重要的血管生成调节因子。VEGF家族属于血小板源性生长因子(PDGF)/VEGF超家族成员,有同源二聚体结构,在单体肽链上含有8个半胱氨酸残基。VEGF家族至少包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盘生长因子(PIGF)以及T.f. svVEGF等7个成员,其中T.f. svVEGF是最近在蛇毒中发现的[1]。 人VEGF基因位于染色体6P21.3,全长28 kb,由8个外显子和7个内含子组成,其cDNA基因长14 kb,编码相对分子质量为34~45 000的同源二聚体糖蛋白。亚基之间通过二硫键相连,如果二硫键断裂,则丧失所有生物学活性。VEGF基因经过转录水平的剪切可产生5种不同的转录子,人类至少有5种VEGF,分别由121、145、165、259和206个氨基酸组成。其中VEGF206含有全部8个外显子序列,VEGF189和VEGF165分别缺失部分或全部第6外显子,VEGF121缺失第6、7外显子,VEGF145则保留了第1、8外显子,VEGF165的表达有某种优势。VEGF 的N端含有26个疏水性氨基酸组成的信号肽,主要由基因结构中的第1外显子编码。除VEGF121和VEGF145外,其余的VEGF均部分或全部与细胞表面含肝素的蛋白聚糖结合。VEGF165是发挥生物学效应的主要成分,通过与VEGFR结合而发挥生物学作用。 VEGF是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,其生理学上主要功能有:(1)选择性增强血管内皮细胞有丝分裂,刺激内皮细胞增殖并促进血管形成;(2)增强血管尤其是微小血管的渗透性,使血浆蛋白等大分子外渗沉积在血管外的基质中,为新生毛细血管网的建立提供营养。VEGF对肿瘤的影响机制可能有[2]:(1)促进肿瘤血管形成,这与VEGF能增加血管通透性、促进血管内皮细胞增殖、促进血管支持物生长有关。VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-1、VEGFR-2等均参与此机制。(2)促进肿瘤淋巴管生长,参与此功能的主要为VEGF-C、VEGF-D及受体VEGFR-3,与肿瘤生长和淋巴管转移密切相关。 (3)对肿瘤细胞的细胞动力影响。目前VEGF对肿瘤细胞增殖的影响还存在着争论,但对抑制肿瘤细胞凋亡的作用已获得一定的共识,VEGF可诱导抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,直接抑制肿瘤细胞的凋亡。(4)增强肿瘤细胞对放疗的耐受性及影响免疫功能。VEGF降低癌细胞对放射线的敏感性,可能与血管的形成相关。而对
1 血管生成相关机制 1.1 新血管的形成与结构 一个细胞需要生存，则必须围绕血管，即靠近血管约100~200μm。这个距离是氧气弥散距离的极限。如果没有血管供应，单个肿瘤的极限体积大小介于0.2~3mm之间，依肿瘤细胞来源不同而大小有所差异。处于这个极限大小下，肿瘤细胞的增生与死亡达到平衡。如果肿瘤想扩大自身体积，则必需求助于新生血管。 血管生成过程实际上就是沿着血管排列的血管内皮细胞增殖过程。血管内皮细胞是人体内寿命最长的细胞之一。正常情况下，它们每七年才分裂增殖一次。如果照这种速度产生新生血管，那么血管的更新过程则非常缓慢，所以该过程一定得加快。血管生成过程是受严密调控的过程，该过程处于血管生成激活物或促进因子和其它必需过程（促进血管内皮细胞增殖）与血管生成抑制因子（阻止血管生成过程）的共同调控之下。该调控也被称为―血管生成开关‖（angiogenic switch）（图1）。 通常情况下，抑制因子的作用都要强于促进因子，也就是说―开关‖常常处于关闭状态。如果出现了足够多的促进因子，则―开关‖被打开，开始形成新血管。 血管生成过程中最重要的一环就是血管内皮细胞的增殖和迁移。肿瘤细胞缺氧或受到其它一些信号调节时会合成、分泌血管生成促进因子。血管内皮细胞迁移与分裂增殖机制见图2。
肿瘤细胞分泌的内皮细胞生长因子等物质与血管内皮细胞上的受体分子结合，刺激其释放蛋白水解酶（proteolytic enzyme）。该蛋白水解酶可以降解血管周围的基质。这样，为血管内皮细胞的迁移和进一步分裂做好了准备。血管内皮细胞经过不断的分裂增殖以及向前迁移，逐渐形成管状结构，最终形成新生血管。 由于肿瘤组织中生成新生血管的过程没有受到严密调控，因而肿瘤组织中的新生血管与正常组织中的新生血管在结构上差异明显。肿瘤组织中的新生血管非常不规则，有很多分支和旁路。血管不完全由血管内皮细胞构成，有些地方的管壁竟然由肿瘤细胞覆盖而成。血管的通透性非常高，因为没有正常的基底膜围绕在血管周围，血管内皮细胞间的连接非常少。另外，血管周围也没有正常运作的控制血压的平滑肌细胞。 1.2血管生成因子（angiogenic factor） 有数十个不同的分子参与血管生成过程的调控。肿瘤细胞、血管内皮细胞、基质细胞、血细胞或细胞外基质都可以合成血管生成促进因子和抑制因子。在所有这些调控因子中，有两大家族是最重要的血管生成促进因子，那就是血管内皮细胞生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF，图3）和成纤维细胞生长因子（Fibroblast Growth Factor, FGF）。 VEGF家族拥有6名成员（图4），而FGF家族则包括酸性和碱性成纤维细胞生长因子。