不熟练引起的人为故障。做好班前准备工作，清洁工作，检查线路，加纯净水、送电、预热灭菌器。在预热过程中要随时触摸灭菌器锅壁，检查是否预热均匀，以及时发现E5出现的故障。
加强灭菌员的责任心：进行低温灭菌应提前通知临床各科准备好被灭菌物品，统一由收送人员收回。避免灭菌器开始运行后加减物品现象。在放入气罐时，为了防止气罐倾斜或倒斜，要妥善放置并人为加以巩固，防止出现E30故障。
环氧乙烷灭菌器运行过程漫长。选择37℃，全程约18小时，选择54℃，全程约15小时。一般在下午4点开始运行，灭菌员在开始后3小时内不得离开工作岗位，灭菌器预处理阶段需要约1小时40分钟，当运行至进程条4位，也就是穿刺加药阶段需要5分钟时间。然后进入灭菌阶段，显示进程条5位方可离开。避免Ｅ30故障未被发现，影响临床物品的需要。及时发现及时采取补救措施，重新放置环氧乙烷气罐直到进入灭菌。
2 结果
经过认真分析和排查，定期检修设备，在灭菌器运行一定时间后加强中间环节的观察，记录参数变化。灭菌器运行正常，极少发生故障。满足临床各种微创手术、腔镜手术等器械的供应需求[2]。提高了对临床科室服务的满意度，提高了设备使用率。
3 讨论
环氧乙烷气体（亦称氧化乙烯气体，简称EO）是目前已知最有效的一种广谱，高效的气体灭菌剂，对物品穿透力强，可达到物品深部，杀灭大多数病原微生物，包括细菌繁殖体、芽孢、病毒和真菌，由于它能与微生物的蛋白质、DNA和RNA发生非特异性烷基化作用，对器械不产生任何腐蚀［3］。不管发生什么故障，首先应根据现象分析故障发生的可能原因，以及涉及到的管路和电路，然后注意排除，最后找出真正的故障点进行检修。环氧乙烷低温灭菌器故障的发生不仅与零部件的使用寿命和内在的质量有关，还与安装是否到位、使用用方法正确与否以及日常保养都有很大的关系。做好我们的正确使用和日常维护保养，是延长设备使用寿命和减少故障的必要条件。
参考文献
［1］黄靖雄.环氧乙烷灭菌[J].中华医院感染学杂志,2004，14（12）：1435-1439.
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［3］王萍.EO低温灭菌柜使用中出现的故障分析及解决方法[J].医疗卫生装备,2004,10（5）:1325-1326
赤芍对早期糖尿病肾病大鼠肾脏AngⅡ、ET-1、PKC及
TGF-β
1
的影响
郑亚萍 刘春杰
[摘要] 目的观察赤芍对早期糖尿病肾病大鼠的作用及赤芍对肾脏血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1(ET-1)、蛋白激酶C(PKC)及转化因子-β
1（TGF-β
1
）的影响。方法腹腔注射STZ制备糖尿病肾病大鼠模型，随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组以及高、中、低赤芍组（腹腔注射5、15、30g/kg），8周后测定大鼠血糖、血脂及肾功能指标（尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白），放射免疫法测定肾脏AngⅡ、ET-1含量，免疫组织化学染色法检测肾脏
TGF-β
1及PKC表达。结果与正常对照组相比，糖尿病肾病组大鼠血糖、血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白明显升高，AngⅡ、ET-1含量和TGF-β
1
、PKC表
达增强(均P<0.01)；与糖尿病肾病组相比，赤芍能呈浓度依赖性的降低糖尿病肾病大鼠血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白，明显下调肾脏ET-1、TGF-β
1及PKC(均P<0.01)，AngⅡ虽有下调趋势，但与糖尿病肾病组相比无明显差异性(P>0.01)。结论赤芍能改善糖尿病早期肾功能，其机制可能主要与抑制
肾脏ET-1表达继而下调PKC及TGF-β
1
水平有关。
[关键词] 糖尿病肾病； 内皮素-1；血管紧张素Ⅱ；转化因子-β
1
；蛋白激酶C
[Abstract]Objective To investigate the effects of Radix Paeoniae Rubra on intrarenal Ang II, ET, PKC and TGF-β1 in rats withearly diabetic nephropathy (DN). Methods Strep tozotocin-induced diabetic Sprague-Dawley rats were randomly divided into 5 groups: normol control group, DN model group, treated with low, middle and high dose Radix Paeoniae Rubra groups. The level of blood glucose, total cholesterol (TC), total triglycerides (TG), blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (Scr), and 24 hours proteinuria were measured after 8 week, the expression of
TGF-β
1
and PKC were determined by immunohistochemistry and the concentrations of Ang II and ET-1 were determined by radioimmunoassay in the 8th week. Results The concentrations of TC, TG, BUN, Scr and 24 hours proteinuria increased signi? cantly in diabetic group, which were down-
regulated by Radix Paeoniae Rubra. The expressions of TGF-β
1
and PKC, the concentrations of Ang II and ET were higher in the DN group than those
in the normal control group (P<0.01). The level of ET, PKC and TGF-β
1
were decreased (P<0.01), but the concentrations of Ang II was not obvious decreased (P>0.05) in the groups treated Radix Paeoniae Rubra. Conclusion The protective effect of Radix Paeoniae Rubra on kidney in diabetic rats
is obviously, which may be associated with the supression of ET-1/PKC/TGF-β
1
path.
[Key words] Diabetic nephropathy; ET-1; Ang II; TGF-β1; PKC
doi:10.3969/j.issn.1009-4393.2012.23.013
作者单位：462002 漯河医学高等专科学校生理教研室 （郑亚萍） 药理教研室 （刘春杰）
糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最常见且最严重的并发症之一，最终导致慢性肾功能不全，是糖尿病致残致死的重要原因[1]。赤芍能活血祛瘀，具有降脂、抗栓的作用，其组成的方剂具有明显保肾疗效[2]，但目前单方赤芍对糖尿病肾病的作用尚少见报道。本研究通过观察赤芍对DN早期肾功能及肾脏局部血管紧张Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1(ET-1)含量及蛋白激酶C(PKC)、转化因子-β1（TGF-β1）表达的影响，初步探讨赤芍对DN发生、发展的作用以及可能机制。1 材料与方法
1.1 实验动物 体重200～250g的雌性SD大鼠，由郑州大学医学院实验动物中心提供。
1.2 试剂 链脲佐霉素（STZ，Sigma公司产品）；赤芍注射液（漯河医专分析测试中心）；AngII、ET-1放射免疫试剂盒（中国人民解放军东亚放免所）； TGF-β1、PKC酶联免疫试剂盒（美国 Santa Cruz 公司）。
1.3 DN模型和分组 采用左肾摘除加高糖高脂饮食加小剂量STZ 30mg/kg腹腔注射制备糖尿病肾病模型，以注射72h后血糖高于16.7mmol/L，为DN模型建立成功[3]。大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病肾病组（DN组）、赤芍组分别腹腔注射高、中及低剂量赤芍（5、15、30g/kg），正常对照组和糖尿病肾病组给予同剂量的生理盐水腹腔注射，1次/日,连续给药8周。
1.4 标本采集及处理 第8周末收集各组大鼠24h尿，离心后-20℃保存；动物麻醉称重，股动脉放血，离心后血清-80℃保存；取右肾去包膜后于4%甲醛固定。
1.5 赤芍对血糖、血脂的影响 用OLYMBUSAU-600全自动生化仪测测大鼠血糖、血总胆固醇（TC)及甘油三酯（TG）。
1.6 赤芍对血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）及24h尿蛋白影响 用OLYMBUSAU-600全自动生化仪测测大鼠尿素氮、血肌酐，采用双缩脲法测定24h尿蛋白的含量。
1.7 赤芍对肾脏AngⅡ、ET-1的影响 称取200mg肾组织，剪碎，加入0.15mol/L乙酸，水浴煮沸后在冰浴下用电子恒速组织匀浆器研磨匀浆，离心后取上清液，AngⅡ、ET-1及TGF-β1含量按相应的放免试剂盒说明操作。
1.8 赤芍对肾脏PKC、TGF-β1表达的影响 肾组织切片常规制片后加入一抗TGF-β1/PKC，
37℃孵育1h、滴加生物素二抗后、DAB显色，具体步骤按说明书进行，显色强度用LEICA Qwin图像系统处理分析，染色强度以光密度值（OD值）表示。
1.9 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件，计量资料用（x ±s）描述，组间比较采用 2分析，P <0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 赤芍对DN大鼠血糖、TC及TG的影响 DN组总胆固醇及甘油三酯明显高于对照组(P <0.01)，血糖值与对照组相比无统计学意义；而与DN组相比，赤芍组总胆固醇及甘油三酯值显著降低（均P <0.05），说明糖尿病肾病总胆固醇及甘油三酯明显升高，赤芍能抑制这种作用（表1）。
2.2 赤芍对DN大鼠肾功能指标的影响 与对照组相比，DN组显著增加BUN、Scr及24h尿蛋白（P <0.01）,而OMA抑制糖尿病肾病大鼠的BUN、Scr及24h尿蛋白增加，且作用呈浓度依赖性，说赤芍可改善糖尿病肾病大鼠的肾功能（表2）。
2.3 赤芍对DN大鼠肾脏AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β1的
影响 与对照组相比，DN组AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β1显著增加（均P <0.01）,而赤芍抑制糖尿病肾病大鼠的ET-1、PKC及TGF-β1增加，且作用呈浓度依赖性，说赤芍可改善糖尿病肾病大鼠的肾功能（表3）。
表1 赤芍对DN大鼠血糖、TC及TG的影响（x ±s）组别n （只）血糖(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)正常对照组10 6.34±1.04 1.35±0.140.97±0.21DN组12
25.13±2.64b
19.34±7.28b
3.38±0.33b
赤芍组5g/kg 1523.19±2.34b 13.35±3.56bc 3.07±0.25b 15g/kg 1524.34±2.75b 9.43±2.11bc 2.37±0.22bc 30g/kg
15
23.01±2.18b
5.09±0.56ad
1.12±0.21ad
注：a P <0.05,b P <0.01 vs 正常对照组；c P <0.05，d
P <0.01 vs DN组。
表2 赤芍对DN大鼠BUN、Scr及24h尿蛋白的影响（x ±s）组别n （只）BUN(mmol/L)Scr(μmol/L)24h尿蛋白(mg/24h)
正常对照组10 6.39±0.8327.36±5.7815.24±2.47DN组12
15.57±1.21b
84.38±9.37b
47.59±10.66b
赤芍组
5g/kg 1512.15±1.43b 72.33±8.99bc 40.16±9.34bc 15g/kg 1510.27±1.15bd 53.47±7.14bd 32.45±8.36bd 30g/kg
15
8.03±0.94ad
38.19±6.38ad
21.29±3.54ad
注：a P <0.05,b P <0.01 vs 正常对照组；c P <0.05，d P <0.01 vs DN组。
表3 赤芍对DN大鼠肾脏AngII、ET-1、PKC及TGF-β1的影响(x ±s)组别
n
(只)
AngII (ng/g)ET-1(ng/g)PKC (平均光密度)TGF-β1
(平均光密度)正常对照组10 6.93±1.37
42.37±9.37
15.39±7.227.2±1.13DN组12
24.67±3.15b 124.59±14.83b
32.15±8.35b
25.3±2.36b
赤芍组5g/kg 1522.11±2.65b 110.67±13.48bc 29.56±8.37bc 22.47±2.57bc 15g/kg 1521.38±2.48b 83.36±8.94bc 23.86±7.47bd 16.69±2.04bc 30g/kg
1521.08±1.96b
59.28±7.43ad
18.39±7.34ad
11.37±1.73ad
注：a P <0.05,b P <0.01 vs 正常对照组；c P <0.05，d P <0.01 vs DN组。
3 讨论
糖尿病肾病发病机制一直是研究热点，目前认为高血糖是发生肾脏微血管病变的先决条件，高血压及高血脂引发的微循环障碍是加速疾病进展的重要因素,其他如氧化应激、炎症介质及细胞因子包括AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β1等也参与糖尿病性肾病发病及恶化。
中医将糖尿病肾病归属于消渴、水肿、尿浊等范畴，其病机是以气阴两虚为本，瘀血、痰湿为标，治则应补气利水，活血化瘀。赤芍能抑制血栓形成、下调血浆总胆固醇、甘油三酰及过氧化脂质，并通过改善脂蛋白组分比值、抑制血小板聚集发挥抗动脉硬化作用[4]。本实验证实赤芍能呈浓度依赖性的下调糖尿病肾病大鼠血浆总胆固醇及甘油三酯的同时可以降低BUN、Scr及24h尿蛋白，发挥保护肾脏的作用。
ET-1是一种收缩血管的生物活性肽，现发现它可促进
肾小球上皮细胞和系膜细胞增生，刺激细胞外基质合成[5-6]； TGF-β1被认为是糖尿病肾病发病密切相关的生长因子，可促进肾脏细胞增殖及基质合成并抑制其降解，发挥强大的促纤维化作用[7-8]。ET-1呈剂量依赖性增加TGF-β1的表达及活化,延缓肾纤维化的进展,在大鼠近端肾小管细胞TGF-β1可以刺激ET-1基因表达,因此ET-1、TGF-β1形成了一个正反馈机制强化各自基因表达，导致肾脏损害[6]。本实验数据显示DN大鼠肾脏AngⅡ、ET-1含量及PKC、TGF-β1表达明显增加，赤芍注射后后肾组织ET-1生成减少，TGF-β1表达水平下降，但AngⅡ生成无明显变化,提示赤芍可能通过减少肾组织ET-1的生成来降低TGF-β1的表达。
PKC信号转导通路能诱导多种细胞因子包括TGF-β1的表达，促使肾小球滤过增加、肾小球硬化和基质积聚，导致DN的发生、发展[9]，近年来证实糖尿病患者随尿蛋白量的增加，血浆 PKC 浓度明显增高，抑制PKC的活性可以延缓或阻止DN的发生[10]；本实验也显示赤芍可降低PKC表达的同时，TGF-β1表达也下调，提示PKC通过TGF-β1参与了抗肾脏纤维化、保护肾脏的过程。
另一方面，PKC表达和ET-1含量有明显相关性，推测可能是肾组织ET-1生成增多，ET-1与相应受体结合后，促进细胞内DAG含量增多，从而活化PKC所致。
总之，赤芍对糖尿病肾病具有保护作用，其保护机制可能是通过调节血脂代谢紊乱，抑制ET-1/PKC/TGF-β1通路来实现的。
参考文献
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膝关节置换患者围手术期钠、钾、钙离子水平的变化及
临床意义
刘子桃 黄永明
[摘要] 目的 研究骨科膝关节置换患者手术前后钠、钾、钙3种离子水平的变化，并探讨其临床意义。
方法 回顾性分析42例行膝关节置换患者手术前后血浆钠、钾、钙水平的变化。结果 膝关节置换术后患者血浆钙的水平明显低于术前(P <0.01)，而血浆钠及钾水平在手术前后无明显差异。术后低钙血症的发生率为90.48%，其下降幅度与术中出血量呈正相关，与手术时间、年龄、性别无明显的相关性,同时发现与低钙血症相关的临床表现罕
见。结论 膝关节置换术后常常导致低钙血症，虽然与低钙血症相关的临床症状较罕见，但作为体内重要的电解质、神经递质和凝血因子，建议围手术期常规监测钙离子水平并及时处理低钙血症。
[关键词] 关节置换；围手术期；钙离子
doi:10.3969/j.issn.1009-4393.2012.23.014
作者单位：510000 广东省广州市广东省中医院大学城医院骨科 （刘子桃 黄永明）
膝关节置换手术近年来发展迅速，而膝关节置换手术为骨科大手术，且患者多为中老年人[1]，故围手术期的处理显得尤为
重要，围手术期的电解质平衡是手术安全及术后顺利康复的重要保证，而钙离子作为体内重要的电解质、神经递质和凝血因子，活跃地参与细胞内、外的多种代谢。但钙离子在临床上却远远没有
像钠离子、钾离子那样受到临床医生的重视。本文针对42例膝关
节置换患者围手术期血钠、钾、钙水平的变化进行统计、分析与研究，探析其变化规律及临床意义。
1 资料与方法1.1 一般资料 42例患者均为2010年3～12月在我院骨科的住院病人，其中男10例，女32例，年龄54～82岁，平均（65.53±10.21）岁。均行膝关节置换手术，手术均由同一医疗组完成，麻醉方式均为腰硬联合麻醉，手术历时为65～230min，平均（147±32）min，术中出血量为80～1100ml，平均（401±123）ml。
大鼠肾纤维化模型 肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。 单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。 1.实验动物 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 7d，14d，21d，28d 4.建模方法 1术前一晚禁食,自由饮水。 2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。 4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 5置于加热垫至其苏醒。假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。 6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。 5.模型的评价 5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。
?专题笔谈?糖尿病肾病的诊断与治疗 糖尿病肾病的发病情况及危害 王德全 张秀英 (山东医科大学附属医院250012) 据WHO1997年报道,全世界已诊断的糖尿病患者目前约1.35亿,估计2025年将达到3.0亿。在发达国家,特别是发展中国家,糖尿病发病率呈上升趋势。目前,糖尿病是仅次于心血管病、肿瘤而居第三位的致死性疾病。1 糖尿病肾病的发病情况 自胰岛素应用以来,糖尿病患者因急性并发症(如酮症酸中毒)而死亡者已显著减少。但随着糖尿病患者寿命的延长,慢性并发症已成为糖尿病患者的主要死因,其中糖尿病肾病所致尿毒症是主要死因之一。据北京、天津糖尿病协作组调查,男、女糖尿病患者尿蛋白阳性率分别高达54.2%和55.2%。尤其是青少年起病的1型糖尿病,糖尿病肾病是其主要死因。A nder sen等对1364例1型糖尿病患者进行了长达25年的随访,39%发展为糖尿病肾病,发病率于糖尿病发病10年后迅速上升,20～30年最高,累积发病率约为40%～50%,随访结束时死亡者中的66%死于尿毒症。成年起病的Ⅱ型糖尿病患者,其糖尿病肾病发病率为5%～10%,其合并糖尿病肾病的绝对数远超过1型糖尿病。可见,必须高度重视糖尿病肾病的危害性。 2 糖尿病肾病的危害 2.1 糖尿病肾病的自身危害 糖尿病引起的肾脏病变可累及肾血管、肾小球、肾小管和间质,其中糖尿病性肾小球硬化症是糖尿病特有的肾脏并发症,称为糖尿病肾病。若在20岁以前确诊糖尿病,以后的20年内约50%患者发生糖尿病肾病,20年以上者几乎达100%。糖尿病肾病起病隐袭,进展也较缓慢。初期常无临床症状,蛋白尿也是间歇性的,易被忽视。一旦出现持续性蛋白尿,则不可逆转,肾小球滤过率由代偿性升高降至正常水平,继以大约每月1m l/min的速度下降。1～2年后出现高血压,血压升高加重尿蛋白的排泄,加速糖尿病肾病的进展,而肾脏病变本身又导致血压更为升高,形成恶性循环。6～7年后血清肌酐上升,肾功能进行性减退。一般来说,从尿蛋白到死于尿毒症平均为10年,尿蛋白> 3.0g/d者多在6年内死亡。 2.2 糖尿病肾病的社会危害 糖尿病是一种终生性疾病,长期治疗对患者的生活及精神造成很大压力,昂贵的费用是患者家庭的巨大负担。糖尿病肾病的发生和发展更加重了治疗的困难性,降低了生活质量。据统计,由糖尿病肾病导致尿毒症者较非糖尿病者高17倍。在美国,因肾功能衰竭而进行透析或肾移植治疗的患者中,由糖尿病引起者占25%～30%,是终末期肾病的最常见原因。在欧州和日本,糖尿病肾病是接受肾移植的第2位原因。糖尿病肾病患者进行血液透析治疗时常因血管病变而需多次造瘘,易形成空气栓塞,感染率亦由此升高。Jacobs等报道欧州1098例维持性血液透析患者,其第1年存活率为67%,第2年存活率为49%,1型糖尿病患者的死亡率约为非糖尿病患者的2.5～ 3.0倍。肾或胰—肾联合移植是目前治疗晚期糖尿病肾病最有效的办法。自采用环孢霉素作为免疫抑制剂以来,肾移植的5年存活率明显升高,但糖尿病患者由于心、脑血管合并症和感染率升高,肾移植的5年存活率仍较非糖尿病者低10%。且由于供体来源困难和经济等方面的原因,亦限制了应用。 糖尿病肾病的病理生理和病理 杜兆鹏 谌贻璞 (北京中日友好医院100029) 糖尿病肾病(D N)是糖尿病的主要长期并发症之一,其发病机理复杂,遗传易感性和长期高血糖状态导致的一些细胞因子及(或)生长因子的增多等因素可能参与其病理生理的改变。高血糖引起肾小球细胞外基质(ECM)生成增多,降解减少及ECM积聚导致的肾小球损伤,即为糖尿病肾病的病理生理和病理。 1 糖尿病肾病的病理生理 1.1 高血糖损伤肾小球的途径 高血糖通过非酶促反应与游离的氨基等基团形成Schiff碱基,经过进一步重排、脱水形成高级糖化终末产物(A GE),它通过下列途径引起肾小球损伤。A G E及糖化的低密度脂蛋白可使系膜细胞(M Sc)中的转化生长因子 (T GF- )、血小板源生长因子(P DG F)表达增多;高糖也可直接使M Sc等因有细胞产生T G F- 、PD GF以及碱性成纤维细胞生长因子(b-F G F)、血管内皮生长因子(VEG F)、生长激素(GH)/胰岛素样生长因子-1(I GF-1)等,高糖还可使M Sc产生过多的单核细胞趋化肽-1(M CP-1),使巨噬细胞(M )浸润到系膜区加重局部的炎症反应。上述因子可通过自分泌、旁分泌及内分泌途径起作用,其中T GF- 和PD GF可能作为最后的共同介质,通过二酰基甘油—蛋白激酶C及蛋白酪氨酸激酶信息传递途径,使M Sc产生过多的Ⅳ型胶原、层粘蛋白、纤粘连蛋白等,引起ECM的积聚及肾小球硬化,而且也使近曲小管上皮细胞肥大及肾间质纤维化。另外A G E、肾小球内高压、血管紧张素Ⅱ(AGⅡ)、内皮素(ET)和氧化的脂蛋白可增强上述细胞因子的表达及作用。另外,A GE通过与肾小球ECM ? 37 ? 1999年第39卷第6期山东医药
小鼠肾脏移植模型具体步骤及说明 动物案例 57BL/6、BALB/C 造模方法 血管吻合采用供受体腹主动脉和下腔静脉端-侧连续缝合，尿路重建采用供受体输尿管端-端吻合 供体手术 腹部正中切口，选择左肾作为供肾，显露左肾及血管，游离左肾血管下方1.0～1.2cm处的腹主动脉及下腔静脉，结扎并剪断其侧支和左侧精索动静脉、左肾 上腺动静脉，游离左肾及输尿管，阻断远心端腔静脉和腹主动脉，于左肾血管上方分别结扎阻断腹主动脉和下腔静脉，并在左肾血管下方约5mm处剪断下腔静脉，以使灌注液从此处流出，6号套管针穿刺腹主动脉远端，拔取针芯，低压、匀速(0.8～10ml/min)注入10～15ml4℃的H-CA液，直至从下腔静脉流 出清凉的灌注液和左肾变为黄白色为止。灌注完毕，在结扎线以上剪断腹主动脉和腔静脉，在左肾输尿管中段剪断输尿管。此时左肾、血管及输尿管均已完 全游离，将左肾及其附带的血管、输尿管放入4℃H-CA液中保存。 受体手术 腹部正中切口，肠管右置，盐水纱布覆盖，充分暴露左肾及血管。将4℃肝素盐水2ml(50U/ml)注入右侧腹膜后进行全身肝素化。以5/0的线结扎肾蒂，行包膜下肾切除。游离左肾动脉下方1.0～1.2cm处的腹主动脉和下腔静脉，并结 扎其所有的侧支，在腹主动脉的预计吻合口处，仔细剪去部分血管外膜，以备血管吻合。在受体大鼠腹部左侧，将供肾放在两层冰棉片之间，维持供肾的低温状态。分别在左肾血管下方和髂血管水平处用阻血夹阻断下腔静脉和腹主动脉的血流。判断确无血液回流后，将下腔静脉和腹主动脉分别纵向剪开一与供
体血管口径相吻合的小口，长约4～6mm。在6～10倍手术显微镜视野下，先吻合动脉后吻合静脉，第1针从12点的位置开始，用9/0线做连续吻合血管右侧壁直至6点位置，然后连续吻合左侧壁，每侧缝6～7针，以同样的方法吻合下腔静脉。吻合结束后，开放阻血夹，可见供肾迅速转红，肾动脉有明显搏动，肾静脉充盈。如果吻合口有渗血，轻压2～3min，不要随便加针，以免造成吻合口狭窄。 尿路重建 血管吻合成功后，观察2～3min，见供肾输尿管蠕动并有清亮的尿液流出时开始重建尿路。在平受体左肾下极水平处锐性游离受体输尿管并剪断，修剪供体输尿管至合适长度，肝素盐水冲洗断端。25倍显微镜视野下，用11/0的显微手术缝线两定点法间断1～2针吻合输尿管前壁，以两定点牵引线翻转至输尿管后壁，间断1～2针吻合供受体输尿管后壁，完成尿路重建后，观察吻合口有无狭窄和血栓，若输尿管蠕动正常，将肠管左置，肾包膜下行受体右肾切除。 关腹 腹腔无出血渗血及棉球滞留后，将肠管复位。将肝素盐水2～4ml注入腹腔，以补充受体体液丢失并防止血栓形成。用1/0线腹壁分层连续缝合关腹。 造模周期 约1h一对 模型成功率 90%
四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官AngⅡ 和CGRP表达的影响 【摘要】目的探讨四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法选择健康雌性Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组，每组8只。双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型，免疫组化法测定心、脑、肾组织中AngⅡ和CGRP的表达。结果肾性高血压组大鼠各器官CGRP和AngⅡ表达水平较正常对照组均显著升高。四逆汤治疗组大鼠各器官CGRP表达水平较肾性高血压组均明显降低；四逆汤治疗组大鼠AngⅡ在肾脏和心脏的表达水平较肾性高血压组均明显降低，但在脑组织中的表达差异无显著性。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑组织中血管活性物质AngⅡ和CGRP的表达水平，发挥其血压调节作用。 【关键词】四逆汤高血压肾性心脏肾脑血管紧张素降钙素基因相关肽大鼠 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the effects of Sinitang on the expressions of angiotensinⅡ(AngⅡ) and calcium gene related peptide (CGRP) in the main target organs of renal hypertension rats.MethodsTwenty four healthy female Wistar rats were evenly divided into normal control (NC) group, renal hypertension (RH) group and Sinitang treatment (ST) group. The renal hypertension models were established by clipping both renal arteries. The expressions of AngⅡand CGRP in tissues of heart,
生理学报 Acta Physiologica Sinica , December 25, 2007, 59 (6): 796-804 https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, 796 研究论文 Received 2007-05-16 Accepted 2007-06-08 This work was supported by the National Natural Science Fundation of China (No. 30470627). * Corresponding author. Tel: +86-21-54237716; Fax: +86-21-64171179; E-mail: lulimin@https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, 肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达 贺 明1，黄娅林2，张 琳3，姚 泰1，陆利民1,* 复旦大学上海医学院1生理学与病理生理学系；2医学神经生物学国家重点实验室，上海 200032; 3上海交通大学医学院生理学系，上海 200025 摘 要：近年发现的肾素(原)受体(renin/prorenin receptor, RnR)已被证明具有生物学功能，在心、肾及多种细胞表达。本文旨在观察RnR 在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)和肾脏中是否表达，及其表达的细胞部位，并用RnR 的多肽阻断剂肾素原“柄区肽” (handle region peptide, HRP)与RnR 结合后观察受体复合物进入细胞的过程与定位。结果显示，RnR 主要存在于大鼠肾脏皮质肾小球系膜区和体外培养的MCs 的细胞核周围胞浆和细胞膜。将FITC 标记的HRP (FITC-HRP)加入细胞培养液后30 s 到30 min 期间，可观察到FITC-HRP 由培养液转移到胞浆内并进入细胞核。用免疫荧光和激光共聚焦技术观察到，HRP 与RnR 的共定位主要位于细胞膜和细胞核周围胞浆；在30 min 时，一部分HRP 已进入细胞核，而RnR 没有进入细胞核内，仍主要位于细胞核周围胞浆。上述结果提示，RnR 与其配基结合后进入细胞内并发挥生物学效应。 关键词：肾素(原)受体；肾素原“柄区肽”；系膜细胞；肾素-血管紧张素系统中图分类号：R 334+.1 Expression of renin/prorenin receptor in rat kidney and cultured mesangial cells HE Ming 1, HUANG Ya-Lin 2, ZHANG Lin 3, YAO Tai 1, LU Li-Min 1,* 1 Department of Physiology and Pathophysiology; 2 National Key Laboratory of Medical Neurobiology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 3 Department of Physiology, Medical College of Shanghai Jiaotong University, Shang-hai 200025, China Abstract: The renin/prorenin receptor (RnR) has recently been cloned and demonstrated to exist in different cells in the cardiovascular and renal systems, playing an important role in physiological and pathophysiological situations. In the present study, we used immunofluorescence method to identify whether and where the RnR expressed in cultured rat renal mesangial cells (MCs) and rat kidney.By using the prorenin handle region peptide (HRP) as a decoy peptide of the RnR, we observed the distribution of the HRP-RnR complex in the MCs. Our results showed that the RnR was localized in the perinuclear zone and plasma membrane of the MCs. At the organ level, the RnR was observed in the mesangium of cortical glomeruli in rat kidney. The FITC-labeled HRP (FITC-HRP) translocated from cell culture medium into the cytoplasm within 30 s. Colocalization of the HRP and RnR was observed mainly on the cell membrane and in the perinuclear zone of cytoplasm by using immunofluorescence and confocal microscopy. At 30 min the FITC-HRP was mainly observed in the nucleus while the RnR remained in the perinuclear zone of cytoplasm. Taken together, our results confirm the expression of RnR in the renal MCs. It is suggested that internalization of the RnR after binding with its ligand is at least one of the pathways through which the RnR exerts its biological actions. Key words: renin/prorenin receptor; handle region peptide of prorenin prosegment; mesangial cells; renin-angiotensin system
中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 3347 Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China Mai Hai-xing★, Master, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China maimark24@ https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, Correspondence to: Chen Li-jun, Doctor, Professor, Master’s supervisor, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, Received: 2010-10-26 Accepted: 2010-12-02 解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 麦海星★，男，1981年生，广东省阳江市人，汉族，2008年解放军第四军医大学毕业，硕士，主要从事肾脏移植的研究。 maimark24@ https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, 通讯作者：陈立军，博士，教授，硕士生导师，解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, 中图分类号:R617 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2011)18-03347-04 收稿日期：2010-10-26 修回日期：2010-12-02 (20101026009/W ? W) 大鼠原位肾脏移植模型的建立★ 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军 Rat models of orthotopic kidney transplantation Mai Hai-xing, Qu Nan, Zhao Li, Huan Chen, Wang Ya-lin, Li Xue-chao, Li Jian-tao, Chen Li-jun Abstract BACKGROUND:There are many ways to prepare kidney transplantation models in rats; however, there are still many problems about operation time, transplantation effect and so on. OBJECTIVE: To study the microsurgical technique of establishing a reliable rat model of orthotopic kidney transplantation. METHODS: Kidney transplantation was performed from SD to Wistar strain (allogeneic),the donor’s artery and renal vein were put on the self-make rubber septum and underwent the end to end anastomosis surgeon with the receptor’s arteriae renalis and renal vein. After that, the donor’s bladder valva was inosculated with the receptor’s bladder. All the rats were divided into two groups: control group and Cyclosporin A (CsA) group, each group included 30 rats. The control group received 1 mL D-hanks each day after transplantation; the CsA group received subcutaneous injection of CsA for 15 mg/kg. The serum creatinine levels were observed at days 3, 5 and 10 after transplantation, pathological changes were also observed at 10 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: Rat orthotopic kidney transplantation was performed in 60 rats, and the successful rate was 85%. The serum creatinine level in the CsA group was lower than that in the control group (P < 0.05), but the survival time in the CsA group was longer than that in the control group (P < 0.05). Allografts of the control group exhibited typical severe acute rejection. It is indicated that this rat model of kidney transplantation is a reliable model with good reproducibility and high achievement ratio. Mai HX, Qu N, Zhao L, Huan C, Wang YL, Li XC, Li JT, Chen LJ.Rat models of orthotopic kidney transplantation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3347-3350. [https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html,] 摘要 背景：目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。 目的：探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。 方法：以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组，对照组移植后每日腹腔内输注1 mL D-hanks 液；环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A 15 mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3，5，10天测定血肌酐值，移植后第10天，光镜下观察移植肾病理改变。 结果与结论：大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5，10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P < 0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P < 0.05)，移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好，具有较高的成功率。 关键词：模型，动物；肾；移植；显微外科；大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.028 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军.大鼠原位肾脏移植模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3347-3350. [http://www.crte https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html,] 0 引言 大鼠是目前器官移植实验中最常用的实验动物[1-5]。由于大鼠的肾血管短，手术视野小，端端吻合难度较大，因而以往实验大多采用端侧吻合，但这须阻断大鼠体循环，导致其下半身在吻合期间处于缺血状态。当开放血管夹后，将发生严重的缺血-再灌注损伤[6-9]。有的方法采用带有与供肾动脉和肾静脉相连的主动脉和下腔静脉片，分别与受者肾动脉、肾静脉端端吻合，膀胱与膀胱吻合，但术中往往发现主动脉与肾动脉管径相差甚远，吻合后容易漏血。另一种方法利用供、受体动、静脉袖口式套叠，此方法提高了受体的存活率并缩短了手术时间，但因所用的套管管径有限，在翻转血管壁形成袖口时，使血管腔变狭小，影响移植肾脏血流的恢复，腹腔静脉与肾静脉作端端吻合时，因静脉壁薄弱常引起静脉壁撕裂而导致手术失败。 不阻断大鼠体循环的肾血管端端吻合原位肾移植技术的建立，避免了上述的缺点，采用端端吻合法减少了供肾的缺血-再灌注损伤，术后动物的存活率较采用端侧吻合者有明显提高[10-12]。 实验采用供体肾动脉、肾静脉分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合的方法。施行大鼠肾移植。
大鼠肾脏冰冻切片的体会 发表时间：2016-03-01T14:17:27.000Z 来源：《中国综合临床》2015年9月供稿作者：张丽娥[导读] 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 张丽娥 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００ 【中图分类号】R５８７．２【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８５７－０１ ０．引言由于肾脏组织质地柔软,含水量高,或在取材过程中肾组织与水分接触, 突遇低温,易形成冰晶,快速冷冻切片的制作难度大,我们通过对大鼠肾脏的冰冻制片,总结经验如下. １材料使用德国产Leica—CM１９５０型冰冻切片机,Leica一次性刀片,冷冻组织包埋剂(O．C．T．),AF固定液,改良Gill苏木素染色液,２％碳酸氢钠返蓝液,逐级梯度酒精,中性树胶. ２方法２．１取材及包埋２．１．１取新鲜大鼠肾脏标本常规取材,标本要新鲜,无需固定,严禁浸入甲醛, 酒精,生理盐水等液,尤其是不可以用酒精固定,酒精固定后组织将无法冷冻.２．１．２将样本托放入冰冻切片机的冻台上预冷,加少许O．C．T．,在OCT 未完全冻结前快速的将组织放于样本托上,在组织周围适量的补充O．C．T,待包埋剂约１/３未冻结时压上冷冻锤,打开加强冷冻,使组织快速冷冻.２．１． ３冰冻切片机温度设定在－１６oC—－１８oC为宜.冷冻时间一般为１min~２min.冷冻时间过长,组织易变硬变脆,细胞结构会发生改变,难于切片.２．１．４包埋组织时应将组织周边多留出O．C．T．用于牵引展开切片,O．C．T．中的小气泡应尽量去除,以免切片时挤压旁边组织产生皱褶,影响切片效果. ２．２切片组织切片厚度设定为５um－６um.刀具提前安放好,调整好刀具角度,切片时控制好操作窗,以利保温.肾脏组织细胞比较致密,若时间过长会变脆且易碎,在冰冻切片时可用手指轻压组织回温,再进行切片. ２．３固定切片后立即放入AF固定液固定３０s—１min,不可待切片干后再固定,这样会造成细胞核染色质不清晰,呈现毛玻璃样改变,细胞胞浆边界不清等组织细胞的退变现象. ２．４染色封片固定好的冰冻切片在苏木素染液中染色３０s—５０s,经１％盐酸分化,２％碳酸氢钠水溶液返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 制好的切片核浆对比分明,红蓝适度,颜色鲜艳,达到理想染色效果. ３讨论与分析:３．１冰晶是由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,胞质内与组织间隙未结合的水分析出形成的.肾脏因其组织结构,在组织冷冻过程中,组织内易产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生,最佳的办法一是使用冻锤:新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形.应该待O．C．T．凝固６０％~７０％时,再将冻锤轻压在组织上, 这样既能防止冰晶的产生,又能得到较平整的切面;另一种方法为使用液氮冷冻,可将组织放入液氮中２s－３s,待组织冻至８０％时即可取出制片,否则过冻会引起组织发脆,冻头与组织分离[２]. ３．２将包埋剂放入－１０OC或－４OC冰箱内保存,包埋剂要使用OCT,而不能用胶水等替代,因OCT 的主要成分为PVP,其能通过渗透的作用将细胞内的水分移出,减少冰晶形成. ３．３冰冻的速度与样品的表面积和体积成正比,取材时组织块尽可能薄,０．２cm 为宜,扁平状冷冻速度快,切片的前几张冰晶少,越后冰晶越多,切片不能求快,而要确保切片质量,力争一次完成一张高质量的切片[１]. ３．４可预先做好OCT冻头,将冻头上的OCT 修平,有利于将组织放平,再在冰冻机内在肾组织上滴加OCT,有利于OCT迅速降温,避免组织复温,减少冰晶形成. ３．５肾脏冰冻制片时易产生不规则裂痕,与切片时温度和切片速度有关,操作时应注意操作窗不要开太大,免工作箱的温度升高;OCT的用量太少易产本皱褶,滴加OCT时要上下俩端多,俩侧少,同时要注意OCT不要有小气泡. ３．６冰冻切片机应安放在冷室内,避免压缩机反复工作,仪器要定期维护,除霜,清洁消毒. 总之,冰冻切片技术是病理科最重要的常规工作之一,也是较难掌握的病理实验技术.要做好一张冰冻切片需要病理技术人员具有严格的责任心、严谨的工作态度、丰富的工作实践经验[３]在日常的工作中还需不断摸索经验提高切片质量,冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 参考文献[１] 陈乐真,徐庆中,陈国璋手术中病理诊断图鉴１版北京:科学技术文献出版社,２００５:２(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[２] 范慧,陈立华,刘宇冷冻切片的制作体会及常见问题分析．诊断病理学杂志,２００８,１３８(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[３] 吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学,２００９,３０(６):４９３．
大鼠肾移植模型制作 大鼠肾移植模型目前仍是肾移植实验研究中非常有价值和常用的动物模型。这一模型具有许多优点：显微外科技术的应用使建立稳定可靠的实验动物模型成为可能；大鼠繁殖快，成本较低；有大批基因型明确的纯系大鼠供选择如SD大鼠、Wistar大鼠等。这一术式的基本方法如下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、实验动物及麻醉 根据实验目的选择同一品系或不同品系的大鼠，一般8～10周龄，体重150～250g，供鼠雌雄不限，受鼠最好为雄性大鼠，供受者体重相仿。腹腔注射0.3％戊巴比妥2ml/100g或氯胺酮 10mg/100g体重或已醚吸入麻醉均可。 三、供肾切取术 腹部正中切口，切开皮肤、腹直肌和腹膜，充分暴露左肾，以湿纱布覆盖周围组织器官。 1.供肾血管游离：使用棉签和无齿眼科镊钝性分离左肾动静脉及其分支，游离与其连接的腹主动脉和下腔静脉，结扎肾上腺动、静脉。在游离完毕的左肾动脉上方和右肾动脉下方的腹主动脉部和腹主动脉远端及左肾静脉上下方的下腔静脉各以1号细丝线围绕，勿结扎。
2.左肾原位灌洗：以Lee氏夹阻断左肾动脉下方的腹主动脉血流，以血管钳夹闭腹主动脉和下腔静脉远端，在肾动脉以下的腹主动脉上切一小口插管，注入500u/ml肝素等渗盐水2ml使全身肝素化，然后相继结扎左肾动脉以上的腹主动脉和左肾静脉以下的下腔静脉，在左右肾静脉开口之间剪断下腔静脉，进行低温灌洗。用4℃等渗盐水10ml/min自腹主动脉插管处推注，灌洗5分钟，见左肾和附属血管完全苍白，停止灌注。 3.输尿管、膀胱分离：以小弯蚊式钳轻轻提起膀胱底，钝性分离膀胱和输尿管，并逐渐延伸至左肾门，注意适当保留部分输尿管周结缔组织（其内有输尿管滋养血管），整块剪下左肾肾血管、灌洗段腹主动脉和下腔静脉、左输尿管及膀胱，立即置入4℃平衡盐溶液中保存。 4.供肾处理：4℃平衡盐溶液冰浴中修剪供肾血管、输尿管和膀胱。把连接肾动脉的腹主动脉修剪成一3×2mm2的椭圆形动脉瓣，并将连接左输尿管的膀胱亦修剪成直径3mm的膀胱瓣。 四、供肾原位移植术 受者麻醉后，将肠管推向右侧，湿纱布保护内脏器官和周围组织，用自制拉钩牵引暴露左肾及其周围组织。 1.受者血管游离：如前述钝性分离左肾动、静脉及其分支，并分离此处下腔静脉、腹主动脉和左输尿管肾门端，仔细除去左肾动脉根部腹主动脉血管外结缔组织，并结扎此处腹主动脉分支。用眼科剪锐性分离左肾，4号丝线结扎肾动、静脉远心端和左输尿管肾门部，将连有左肾动脉根部的腹主动脉完全分离，小心去除血管外结缔组织，并结
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明 ?原型物种人 ?来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法 ?模式动物品系SD大鼠，SPF级，雄性，体重220g~250g ?实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组 ?实验周期24h or 72h ?建模方法1. 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2. 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备 皮。 3. 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4. 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5. 分两层缝合开口，待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲 养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。麻 醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。 ?应用疾病模型
1. 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。 2. 肾系数检测 摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。 肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g） 3. 肾小管坏死的评分 每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数 4％多聚甲醛溶液固定48h。常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片进行HE染色和PAS染色。 对照组大鼠肾小球、肾小管及肾间质结构基本正常。在模型组，随着再灌注时间的延长呈现不同程度的肾脏病理改变，可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾小球病变不明显。
雌雄大鼠肾脏结构的性别差异 王丽英，王建林 兰州大学生命科学学院，兰州（730000） E-mail：wang_ly05@https://www.doczj.com/doc/cd4993132.html, 摘要：应用大体解剖与光镜对雌雄大白鼠的肾的结构指数、肾小球的的大小、肾小囊的大小以及肾小囊与肾小球的比值进行了比较研究，结果发现在肾的结构指数中，髓质厚度的百分数、髓质相对厚度、右肾乳头厚度的百分数有显著差异；髓质面积的百分数，髓质相对面积以及左肾厚度的百分数差异不显著；雌雄个体的肾小球大小、肾小囊的大小以及肾小囊与肾小球的比值均存在显著差异。 关键词：大鼠；肾；结构；性别差异 1 引言 肾脏是机体最主要的排泄器官，以形成尿液的方式排出各种水溶性的代谢终产物、多余的水分、无机盐以及药物和有害物质等，对机体的水盐代谢和离子平衡起调节作用，以维持机体内环境稳定。除此之外，也是体内药物代谢和排泄的重要器官[1]。近年来，对肾的研究主要集中在肾病理研究方面，如肾结石的治疗等。但对肾结构的研究相对来说则较少。1982年，Tatsuo Sakai和Katsumasa Kawahara利用半薄连续切片对日本蝾螈的肾脏及其结构进行了观察[2]。此后，有科学家研究了东北虎、西非蚓螈等动物的肾脏结构（谭超等，2003年；M?bjerg，N.，2004年）[2, 3]。但是他们均没有对雌雄个体进行比较。人们早已发现，兽类肾的形态结构和浓缩尿的能力都对干旱缺水环境有一定的适应关系。那些对缺水环境适应比较好的动物，其肾髓质的相对比例较大，肾结构指数较高，能产生较浓的尿以减少排泄时的失水。早在1988年倪建英等对江豚小肾结构指数和尿浓缩能力进行研究的时候，就对雌雄江豚肾的结构指数进行了比较，结果并没有发现有显著性差异。本论文对大鼠肾的结构指数是否存在性别差异进行研究，以期为实验动物学和动物解剖学提供一些实验数据和理论依据。 大鼠的肾实质只有一个锥体，故只有一个肾叶，因此称单叶肾或单锥体肾，但其结构却是与多锥体肾的一个锥体相同，所以鼠的肾相当于多锥体肾的一个肾锥体，同时也相当于分叶肾的一个小肾。所以计算比较简单。 2材料和方法 2.1 实验动物 四月龄的健康Wistar成年大鼠，雌雄各8只，平均体重为218.0±19.85 g，购自兰州大学医学实验动物中心。 2.2方法 2.2.1相对肾重的测定： 称取并记录每一只实验动物的体重，乙醚麻醉，心脏灌注，取其左右两肾，分别称其重量，记录数据。然后计算其相对肾重（总的肾重除以体重）。 2.2.2雌雄大鼠各个肾结构指数的测定： [4]用于测定肾结构指数的材料固定于10%中性福尔马林溶液中。六项肾结构指数分别
肾脏组织病理 主要的染色方式： HE染色显示各种细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，主要用于观察细胞的种类和数量、坏死及管型成分。观察的病变包括：肾小球的增生、坏死及渗出性病变，肾小管上皮细胞损伤，间质水肿、间质出血、炎细胞浸润、血管炎症等。 PAS染色显示基底膜、系膜基质、糖原及糖蛋白呈紫红色，细胞核呈蓝色，能很好的显示肾小球和肾小管的基底膜，主要用于观察肾组织的基本结构，进而发现病变，判断病变性质、累及部位和轻重程度，同时根据基底膜轮廓还能判断固有细胞种类。观察的病变包括：肾小球基底膜增厚，毛细血管袢塌陷，包曼囊壁病变，透明滴，硬化，系膜细胞和基质增多，系膜溶解，毛细血管袢内/外增殖；肾小管上皮细胞内蛋白吸收滴，肾小管基底膜增厚，肾小管炎；血管透明变性，动脉内弹力层分层等。 Masson-Trichrome三色染色显示基底膜、系膜基质和型胶原呈绿色（或蓝色，取决于使用亮绿或甲苯胺蓝），免疫复合物、纤维素样坏死、血栓均呈红色，细胞核呈蓝黑色，主要用于观察坏死性病变、免疫复合物沉积。观察的病变包括：肾小球免疫复合物沉积，血栓，纤维蛋白，血小板；肾小管萎缩，间质纤维化；血管血栓等。 PASM-Masson染色显示基底膜和系膜基质呈棕黑色，细胞质及免疫复合物呈红色，胶原呈绿色/或蓝色（取决于套染中使用亮绿或甲苯胺蓝），该染色对肾小球结构的显示较PAS染色更为精细，主要用于观察基底膜，免疫复合物及特殊沉积物。观察的病变包括：肾小球基底膜“钉突”和空泡，基底膜双轨，基底膜和包曼囊壁断裂，间质纤维化和动脉内弹力层分层等。 免疫荧光、免疫组化冰冻切片较好，足细胞标志物如（nephrin WT-1, podocin 等，查看足细胞病变、肾小球硬化 病理观察（电镜） 肾小球： 1.肾小球总数、球性、节段硬化的肾小球、缺血性肾小球 2.病变分布：局灶或弥漫，节段或球性 3.增生：系膜增生、毛细血管内增生或渗出性，浸润细胞类型或数量 4.K-W结节
糖尿病肾病中足细胞损伤的研究 摘要：肾小球脏层上皮细胞也叫足细胞，是高度分化的终末细胞，位于肾小球基底膜（GBM）最外层。相邻足细胞间相互交联的足突形成裂孔，覆盖于其上的细胞外物质称为裂孔隔膜。裂孔隔膜作为一个巨大的选择性滤过屏障，在防止蛋白流失方面起到主要的作用。足细胞通过α3β1整合素和肌营养不良蛋白聚糖（DGs）粘连在肾小球基底膜上。足细胞损伤导致蛋白尿、肾小球肥大以及肾小球基底膜增厚，可能转化为慢性肾衰竭。本综述主要探索了在糖尿病条件下足细胞一些结构和功能的改变以及在糖尿病肾病发生发展过程中它们的作用。 关键词：糖尿病肾病；足细胞损伤；发病机制 糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病常见微血管并发症，约 1/3的糖尿病患者会发展为DN[1]。研究表明，足细胞损伤在糖尿病肾病发病机 制中发挥重要的作用，是晚期肾病的首要原因[2]。在DN特性研究中，足细胞损伤形式主要表现为肾小球肥大、足突融合、足细胞数目减少，进而导致肾小球硬化，形成蛋白尿等。 1、肾小球肥大 糖尿病肾病中由于肾小球和肾小管肥大的作用患者肾脏会典型的增大，其中炎症细胞渗透、细胞外基质累积以及血流动力学等因素也与之相关[3]。 糖尿病早期肾小球肥大从而导致细胞密度降低，引起代偿性足细胞肥大。足细胞肥大在糖尿病肾病中较为常见，其致病机制为在整个细胞周期中，细胞在 G1期中蛋白质合成增加，随后分裂素诱导的联合效应进入细胞周期以及细胞在 G1/S间期的阻滞共同导致了细胞肥大[4]。细胞周期的发生发展过程依赖于一系 列蛋白酶的激活和表达，如CDKs，调节亚基，细胞周期蛋白（cyclin）等[5]。一些细胞周期蛋白或CDKs复合物只作用于细胞周期的特定阶段，而其他的则广泛作用于各阶段。对于G1期来说，细胞周期蛋白D、E和A都起到重要作用[6]。 细胞周期蛋白D在G1期激活较早，和CDK4/CDK6形成复合物并且调节G1期进程。在G1期晚期，细胞周期蛋白E和A则被激活，其与CDK2形成的复合物对 G1/S间期的过渡是必不可少的。对于细胞的生长来说，细胞周期蛋白D调节着 细胞增生、肥大的效果，而E则决定细胞生长模式是否趋向于肥大增生[7]。CDK 阻滞剂调节Cyclin/CDK复合物的激酶活性[8]。INK家族（p15,p16,p18,p19）阻断G1期CDKs，然而Cip/Kip家族（p21,p27,p57）在G1/S间期阻断CDKs活性[9][10]。 在足细胞肥大机制方面的研究中, p27Kip1是细胞周期依赖性激酶/细胞周期 复合物的一个抑制剂，Xu[11]发现高糖可诱导足细胞p27Kip1表达上调,使足细胞 不能进入细胞周期进行正常的细胞分裂，进而促进足细胞肥大。敲除p27Kip1基 因后，糖尿病小鼠足细胞肥大明显减轻，肾小球硬化、小管间质化及血管损害也有所改善[12]。高血糖刺激足细胞后，血管紧张素Ⅱ(angⅡ)参与了足细胞肥大的病发过程，因而给予血管紧张素受体抑制剂能抑制p27Kip1表达、阻止细胞肥大[11]。和肾小球系膜细胞相比较而言，由于CDK阻滞剂表达水平较高所以成熟的足细 胞在正常条件下既不会合成DNA也不会增殖[13]。但在糖尿病状况下，足细胞也会像肾小球系膜细胞一样经历一个膨胀过程，从而导致细胞尺寸变大[14]。Petermann等[14]证实了在体外实验中肾小球毛细血管血压上升的条件下，机械 牵张会减少细胞周期的进程以及诱导野生型和单型p27-/-足细胞肥大，而不会诱