DNS比色法测还原糖标准曲线绘制及测定Tr21培养液中初始和最终还原糖及总糖含量实验报告
1.研究背景
木霉菌在发酵过程中，利用碳源导致发酵液中糖含量的变化，其中还原糖是一个主要的反映参数。还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）在碱性条件下生成棕红色物质（3-氨基-5-硝基水杨酸），在一定范围内，棕红色物质颜色深浅的程度与还原糖的含量呈一定的比例关系。糖含量的不同变化一定程度上体现着Tr21不同的生长阶段，从而为控制及优化发酵过程提供科学依据。
2.实验目的
3，5-二硝基水杨酸比色法测定Tr21发酵液中还原糖含量，利用糖含量这个参数，控制发酵过程。
3.实验原理
在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色
4.实验材料
发酵液（5天）：Tr121（A2）
实验材料：3，5-二硝基水杨酸，氢氧化钠，苯酚，亚硫酸钠，酒石酸钾钠，葡萄糖，蒸馏水
实验器材：可见分光光度计，电子天平，真空干燥箱，数显恒温水浴锅，离心机，移液器，枪头，500ML容量瓶，试管，500 ml 烧杯，1000ml量筒
5.实验方法
5.1试剂配制
（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕
色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液
5.2 、葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
试剂
管号
0 1 2 3 4 5 6 7 8
葡萄糖
标准液
(ml)
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
蒸馏水
(ml)
2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4
水杨酸
溶液
(ml)
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
葡萄糖
含量
(mg)
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却
到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
λ
=540nm
处测定
吸光度
0 0.077 0.2 0.319 0.424 0.543 0.655 0.761 0.856
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线，如图一：5.3.1 培养液中初始总糖与还原糖的测定
准确量取5ml培养液，定容至50 ml，作为还原糖测定样品液。
准确量取1ml发酵液并加蒸馏水定容至10ml放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到50ml，用于
总糖测定。
试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml) 0 1.0 1.0
蒸馏水(ml) 2.0 1.0 1.0
水杨酸(ml) 1.50 1.50 1.50
将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再
向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
λ=540nm处测定
0 0.311 0.228
吸光度
样品溶液中还原糖
0 0.594 0.44
和总糖
5.3.2发酵液中最终总糖与还原糖的测定
发酵液2500rpm离心20min，取5 ml，作为还原糖测定样品液。
准确量取5ml发酵液悬液放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 5ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到50ml，用于总糖测定。
试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml) 0 1.0 1.0
蒸馏水(ml) 2.0 1.0 1.0
水杨酸(ml) 1.50 1.50 1.50
将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再
向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
λ=540nm处测定
0 0.15 0.014
吸光度
样品溶液中还原糖
0 0.299 0.05
和总糖
测定后，取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量。
6. 结果处理
按下式计算出样品中还原糖和总糖的浓度：
还原糖浓度（g/ml）= m /V*稀释倍数/1000
总糖浓度（g/ml）= m /V*稀释倍数*0.9/1000
式中：m──反应液中还原糖或总糖的质量：mg；
V──反应液的体积：ml；
1000──mg换算成g的系数。
得：
初始培养液中：
还原糖浓度（g/ml）=0.594/1*10/1000
=5.94/1000
总糖浓度（g/ml）=0.44/1*50*0.9/1000
=19.8/1000
最终培养液中：
还原糖浓度（g/ml）=0.299/1*1/1000
=0.299/1000
总糖浓度（g/ml）=0.05/1*10*0.9/1000
=0.45/1000
图一：
实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 马铃薯总糖含量测定 实验目的 1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法； 2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法； 3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法； 4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。 实验原理 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理 3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程； 2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理 先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。 实验操作 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 （1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用 （2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1） 按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。并记录A540nm处测得的各浓度及样品对应的OD值。 （3）葡萄糖标准曲线定制微机数据处理和回归方程（详见表2）及标准曲线的绘制见图1 2. 马铃薯总糖含量测定操作 （1）马铃薯淀粉的制备（此处略，学生实验报告需补充完整） （2）马铃薯淀粉水解待测液配制（2mg/mL）准确称取干燥恒重后的自制淀粉250mg，加入100mL 蒸馏水和2mL20%硫酸，在沸水浴中加热水解，直到水解彻底后，用20%氢氧化钠溶液中和，至pH = 6.8～7.0后，将反应液转入250mL 容量瓶中，补加蒸馏水定容至250mL，配制成浓度为2mg/mL的淀粉水解后，即总糖测定的样品液，冰箱保存备用。 （3）马铃薯淀粉水解待测液还原糖测定（操作方法详见表1）
实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法 一、目的要求 1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 二、实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。反应方程式如下： CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4 COONa COONa ︱∣ CHOH CHO╲ ∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2O CHOH CHO╱ ∣∣ COOK COOK COONa COONa ∣CHO ∣CHOH CHO╲∣CHOH ∣ 2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓ CHO╱∣CHOH ∣ ∣CH2HO ∣CH2OH COOK COOK 亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型 (蓝色) （无色） 三、实验试剂 1、碱性酒石酸铜甲液：称取7.5g硫酸铜 ( CuSO 4?5H 2 O) 及0.025g次甲 基蓝，溶入水中并稀释至500mL。 2、碱性酒石酸铜乙液：称取25g酒石酸钾钠及37.5g氢氧化钠，溶于水中，再加入2g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 3、乙酸锌溶液：称取10.95g乙酸锌，加1.5mL冰乙酸，加水溶解并稀释至50mL。 4、亚铁氰化钾溶液：称取5.5g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至50mL。
生物化学综合实验报告 题目：3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖 姓名: 学号： 同组成员： 分院(系)： 专业班级： 指导教师： 完成日期：年 月日
1.实验目的 用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量 2.实验原理 先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。 3.实验仪器和试剂 试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl，6mol/L NaOH 仪器：25,100ml容量瓶、1,5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱 4.实验步骤 一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0.2、0.4、0.6、 0.8、1.0毫升在加入蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1.5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。 二、还原糖提取:取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液，用100ml容量瓶定容得还原糖待测液。
总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水搅匀，100摄下恒温水浴30min，冷却，NaOH调节PH至中性，离心，滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液。 测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1.0、1.0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0.5毫升，蒸馏水2.0、1.0、1.0、1.5、1.5毫升，DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度。 5数据处理
实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 一、实验目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 小麦面粉；广范pH试纸。 2．主要仪器 （1）大试管：2×20cm×14 （2）烧杯：100mL×3 （3）三角瓶：100mL×1 （4）容量瓶：100mL×3 （5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4 （6）吸耳球、玻璃棒 （7）恒温水浴锅 （8）漏斗、滤纸 （9）白瓷缸、电炉 （10）精度天平
（11）分光光度计 3．试剂（已制备） （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。 （3）6mol/L HCl和6mol/L NaOH 。 四、操作步骤 1．制作葡萄糖标准曲线 取7支2×20cm大试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，用流动水冷却至室温，用蒸馏水补充至20mL （即各加入16.5mL蒸馏水），震荡混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 2．样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液用100mL容量瓶定容，混匀，过滤，滤液作为还原糖提取液，待测。 （2）总糖的水解和提取 准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6mol/L HCl，置沸水浴中加热水解30min。待三角瓶中的水解液冷却后，用6mol/L NaOH中和（大约10mL左右），用广范pH试纸测试中和到pH=7，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液1 mL，移入另一9mL水的试管中，混匀，稀释10倍作为总糖待测液。 （3）显色和比色 取7支2×20cm大试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，用7号管进行空白调零。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
1.目的 掌握直接滴定法测还原糖的原理、操作、条件及注意事项。 2.原理 样品经前处理提取还原糖，在加热条件下，直接滴定一定量的碱性酒石酸铜标准溶液，以次甲基蓝作指示剂，根据样液消耗体积，计算样品中还原糖量。3.试剂 3.1碱性酒石酸铜标准溶液（还原糖因数f/mg·10mL-1） 3.1.1甲液:称取23.10g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中 并稀释至100mL 3.1.2乙液: 称取115.33g酒石酸钾钠及33.30氢氧化钠，溶于水中，用水稀 释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中瓶中 3.2乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至 100mL. 加水溶解并稀释至100mL 3.3亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释 至100mL 3.4盐酸 3.5葡糖糖标准溶液：精密称取7.0000g经过98~100℃干燥至恒量的纯葡 萄糖加水溶解，并以水稀释至1000mL.此溶液每毫升相当于7mg葡糖 糖 4.仪器 碱式滴定管、电炉 5.样品 硬糖（m样=5.8002g） 6.操作 6.1样品处理 称取样品5.8002g置于小烧杯中，加40mL水，40℃微热溶解，冷却后加40mL水，调节PH至中性，加水定容至100mL，过滤后收集滤液即为样品溶液。 6.2标定碱性酒石酸铜溶液 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置150mL三角锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，置于电炉上加热至沸（要求控制在2min内沸腾），然而趁热以每秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖的总体积。同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲液乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质
葡萄酒中还原糖和总糖的测定 一、实验目的 掌握还原糖和总糖的测定的基本原理，学习费林试剂法测定还原糖和总糖的操作方法。 二、实验原理 还原糖和总糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 利用费林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。 三、试剂和材料 3.1 盐酸溶液（1＋1）。 3.2 氢氧化钠溶液：200 g／L。 3.3 标准葡萄糖溶液2.5 g／L：精确称取2.5g（称准至0.0001g）在105～110℃烘箱内烘干3h并在干燥器中冷却的葡萄糖，用水溶解并定容至1000 mL。 3.4 次甲基蓝指示液10g／L：称取1.0g次甲基蓝，溶解于水中，稀释至100mL。 3.5 费林溶液 费林溶液Ⅰ：称取34.7g 硫酸铜(CuSO4*5H2O)，溶于水，稀释至500mL。 费林溶液Ⅱ：称取173g酒石酸钾钠和50g NaOH，溶于水，稀释至500mL。 使用时将溶液Ⅰ、Ⅱ按等体积混合。 四、实验步骤 4.1费林溶液标定预备试验： 吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ各 5.00 mL 于250 mL 三角瓶中，加50 mL 水，摇匀，在电炉上加热至沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液
实验六检测生物组织中还原糖的实验 一、教学目标 1、初步学会生物组织中还原糖的鉴定方法，领悟并能描述该实验的实验原理。 2、比较不同实验材料所做的实验结果，探索该实验的理想实验材料。 3、培养学生的动手操作能力，培养学生树立实事求是、认真严肃的的科学态度。 二、学情分析 学生在《第一节 - 细胞中的元素和化合物》的学习中，学生对糖的概念有了明确的认识，对于生物组织中哪些含糖类型，怎么鉴别还原糖还不清楚。通过本节实验教学让学生对颜色反应这一类验证实验有一个总体把握，再则让学生体会出生物学上一些典型的实验现象是要选择实验材料是关键，以及实验中要注意每一步实验方法。 三、实验原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu 2 O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： 2NaOH+CuSO 4 Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2 (淡蓝色沉淀) -CHO+2Cu(OH) 2-COOH+Cu 2 O(砖红色沉淀)+2H 2 O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 本实验能利用还原糖能与斐林试剂发生颜色反应的特性，通过一系列实验检测生物组织中是否含有还原糖。
实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 171850044钱诗晨 一、实验目的 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。 二、实验原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。 三、实验器材 1.面粉 2.试管 3.吸管 4.水浴锅 5.电炉 6.紫外可见分光光度计 7.PH试纸 8.容量瓶 9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗 10.电子分析天平 面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝 四、实验试剂 1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。 3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。 4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。 5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 五、实验操作 1.葡萄糖标准溶液曲线的制作 取干净试管6支，按表7进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线
实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定
一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液：称取15.00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0.05g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。
实验六水果硬糖中还原糖量的测定 一、实验内容 用直接滴定法测定水果硬糖中还原糖的含量。 二、实验目的与要求 1、进一步巩固和规范氧化还原滴定操作。 2、理解还原糖测定原理及操作要点。 3、掌握水果硬糖中还原糖测定的操作技能。 4、学会控制反应条件，掌握提高还原糖测定精密度的方法。 三、实验原理 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝作指示剂，在终点稍过量的还原糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。最后根据样品液消耗体积，计算还原糖量（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液）。 四、试剂 （1）碱性酒石酸铜甲液：称取15.00 g硫酸铜（CuSO 4 ·5H 2 O）及0.05 g 次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000 mL。 （2）碱性酒石酸铜乙液：称取50.00 g酒石酸钾钠及75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 mL贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 （3）葡萄糖标准溶液：精确称取1.0000 g经过（99±1）℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后加入5 mL盐酸，并以水稀释至1000 mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。 五、仪器 酸式滴定管，可调式电炉（带石棉板）、电子天平（1mg）、150mL锥形瓶、250 mL容量瓶、玻璃珠 六、操作方法 1、样品处理：准确称取（准确至0.01g）样品（提前研成粉末）置于250 mL 容量瓶中加水溶解定容，摇匀，即为样液。 2、标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 mL葡萄糖标准溶液，控制在2 min 内加热至沸，趁沸以每1滴/2s 的速度继续滴加葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖或其他还原糖标准溶液的总体积，同时平行操作3份，取其平均值，计算每10 mL（甲、乙液各5 mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。 ｍ 1＝Ｖ 1 ×ｍ 2 式中：ｍ 1 －10 mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各5 mL）相当于还原糖（以葡萄糖计）的质量，mg； Ｖ 1 －平均消耗还原糖标准溶液的体积，mL ｍ 2 －1mL还原糖标准溶液相当于还原糖的质量，1mg 3、样品液预测 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每1滴/2s 的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积（样品中还原糖浓度根据预测加以调节，以0.1g/100g为宜，即控制样液消耗体积在10mL左右，否则误差大）。 4、样品溶液的测定 吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管加比预测体积少1mL的样品溶液，控制在2 min内加热至沸，准确沸腾30s，趁沸继续以每1滴/2s的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。同法平行操作3次，求平均消耗体积。 七、结果处理 1、数据记录
实验一、生物组织中还原糖的鉴定[教案] 一、课型：新授课 二、教学目标： 1、知识与技能目标 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）体验实验操作过程中的操作问题，讨论实验指导的关键。（3）培养学生分析、解决问题的能力，坚持实事求是的科学态度。 2、过程与方法 （1）通过简单演示实验，创建情景，引入新课题。 （2）通过PPT、探究学习和讨论等方法来获得信息。 （3）通过讲解、演示、PPT展示、课堂练习以及课后习题等，让学生加深对生物组织中还原糖的鉴定的理解。 3、情感态度与价值观 （1）通过学生实验和演示实验，进一步培养学生动手、观察、分析的实验能力。 （2）能将所学的知识与生活、环境、社会等实际问题相联系，并运用到生活中去，发展学习的兴趣 三、教学重、难点 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握验证实验及探索实验的设计技巧，从而培养创新思维能力。
四、教具准备： 1、PPT课件。 2、实验材料：（1）实验仪器：解剖刀、研钵、漏斗、纱布、漏斗 架、烧杯、试管、试管架、酒精灯、石棉网、三脚架、试管、胶头滴管、量筒。 （2）实验材料：斐林试剂A液：0.1g/ml的NaOH 溶液、斐林试剂B液：0.05g/ml的CuSO4溶液SiO2、H2O、苹果、土豆、菠菜。 五、课时安排：1课时。 六、教学方法： 讲授法、讨论交流、练习法、问答法、演示法、多媒体辅助教学法等。 七、教学过程： 情境导入： 【老师】同学们，上课了。今天老师给大家带来了一个小魔术。 【展示】一个装有刚配好的斐林试剂的试管。 【老师】这是一种蓝色的溶液。 【展示】一个装有苹果汁的试管。 【设问】这是刚榨好的苹果汁，猜猜我要干什么？很简单，我要把苹果汁倒入蓝色溶液的试管中，那大家猜猜会有什么变化呢？ 【学生】思考回答 【老师】抽问
实验七-食品中还原糖的测定(综合性)
实验七面粉中还原糖的测定（综合性实验） 课程：食品检验与分析班级：2011级食品1、2班地点：A13-0405 指导教师：蔺芳 （一）直接滴定法 一、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还 原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和 麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次 甲基蓝作为指示剂，用样液直接滴定标定过的碱 性酒石酸铜溶液，达到终点时，稍过量的还原糖 把蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色，而显出氧 化亚铜的鲜红色。根据样品液消耗体积，计算出 样品中还原糖的含量。各步反应式（以葡萄糖为例）如下： (1) Cu 2SO 4 ＋2NaOH = 2Cu(OH) 2 ↓＋Na 2 SO 4 (2) Cu(OH) 2＋KNaC 4 H 4 O 6 = KNaC 4 H 2 O 6 Cu ＋2H 2 O (3) C 6H 12 O 6 ＋6KNaC 4 H 2 O 6 Cu＋6H 2 O = C 6 H 12 O 7 ＋ 6KNaC 4H 4 O 6 ＋3Cu 2 O↓＋H 2 CO 3 从上述反应式可知，1mol葡萄糖可以将
6mol Cu2＋还原为Cu+。但实际上此反应为非定量反应，即不能根据反应式直接计算出还原糖含量。因此在测定过程中要严格遵守所规定的操作条件，如热源强度(电炉功率)、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等。 二、适用范围及特点 本法又称快速法，特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。三、试剂及玻皿配置 仪器 1. 200mL 烧杯 2 个 2. 100mL、250mL、1000mL 容量瓶各 1 个 3. 5.0mL 移液管 4 支 4. 25mL、 100mL 量筒各 1 个 5. 250mL 锥形瓶 4 个 6. 800W 电炉 1 个 7. 恒温水浴锅、干燥箱 8. 碱式滴定装置 1 套 9. 玻璃珠（适量） 10. 滤纸、漏斗及过滤装置 11. 分析天平 试剂 1. 碱性酒石酸铜甲液：称取 15g硫酸铜(Cu2SO4·5H2O )及 0.05g次甲基蓝，溶于水中
实验一总糖和还原糖含量的测定 （3,5－二硝基水杨酸法） 一、目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理: 在NaOH存在的条件下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 黄色桔红色 三、试剂和器材 1、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即葡萄糖浓度为1.0mg/ml。 6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 2、材料 山芋淀粉 四、器材 723型分光光度计，分析天平，水浴锅，研钵，烧瓶，试管若干等。
五、操作 1、葡萄糖标准曲线制作 取干净试管6支，按表1进行操作。以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。 管号 0 1 2 3 4 5 试剂 标准葡萄糖溶液∕ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水∕ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 DNS试剂∕ml 2 2 2 2 2 2 沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水∕ml 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖含量∕mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 A540nm0 0.051 0.110 0.150 0.205 0.253 2、样品中还原糖的提取与测定 准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。于50℃恒温水浴中保温0.5h，不时搅拌，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到100ml离心管中，于4000r∕min下离心5min，沉淀用20ml蒸馏水洗一次，再离心，将两次离心的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml，混匀，作为还原糖待测液。取1ml进行还原糖含量测定。 3、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。再向烧瓶中加入6mol/L HCl 10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解完毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml 于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液。取1ml 总糖水解液，测定其还原糖含量。 六、结果处理 1、各浓度标准葡萄糖溶液按表1进行反应后，溶液吸光值见表1。以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。如图1所示。
Record the situation and lessons learned, find out the existing problems and form future countermeasures. 姓名：___________________ 单位：___________________ 时间：___________________ 总糖实验报告
编号：FS-DY-20502 总糖实验报告 糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。 首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法
使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法 3、学习分光光度法测定的原理和方法 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基 的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用
实验报告：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 一、实验原理： 1. 某些化学试剂能使生物组织中得有关化合物产生特定的反应。 2. 糖类中的还原糖，如、与发生作用，生成。 3. 脂肪可以被染成橘黄色，或被染成红色。 4. 蛋白质与发生作用，产生反应。 二、材料用具： 实验材料：苹果或梨匀浆，花生种子，豆浆。 用具：双面刀片，试管，试管夹，大小烧杯，小量筒，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜等。 试剂：斐林试剂，甲液：质量浓度为，乙液：质量浓度为；苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂：A液：质量浓度为，B液质量浓度为。 三、方法步骤： （一）还原糖的检测和观察 ①向试管内注入2ml 。（选择具体材料） ②向试管内注入斐林试剂，（甲液和乙液再注入。） ③将试管放入盛有的大烧杯中加热。 ④观察试管中出现的颜色变化。 （二）脂肪的检测和观察 制作花生子叶临时装片，用显微镜观察花生子叶细胞的着色情况。 ①取材：取一粒花生子叶，去掉。 ②切片：用刀片在花生子叶的上平行切下若干薄片，放入盛有清水的培养皿中待用。 ③制片：从培养皿中选取的切片，用毛笔蘸取放在载玻片中央，在花生子叶薄片上滴2—3滴，染色。用吸水纸吸去染液，再滴加1—2滴溶液。洗去浮色，用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精，滴一滴，盖上盖玻片，制成临时装片。 ④观察：在下找到花生子叶的最薄处，移到，将物象调节清楚，换上观察，视野中央被染成的脂肪颗粒清晰可见。 （三）蛋白质的检测和观察 ①向试管内注入（选择具体材料）。 ②向试管内注入双缩脲试剂，摇匀。 ③向试管内注入双缩脲试剂，摇匀。 ④观察试管中出现的颜色变化。
一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)××1/10×n 式中：Vo--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml n---------样品稀释倍数 六、思考题：
（1） 还原糖的检测和观察 常用材料：苹果和梨试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/ml的NaOH；乙液：0.05g/ml的CuSO4）注意事项：①还原糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖；②甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用；③必须用水浴加热 颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色 （2）脂肪的鉴定 常用材料：花生子叶或向日葵种子 试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液 注意事项： ①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。 ②酒精的作用是：洗去浮色 ③需使用显微镜观察 ④使用不同的染色剂染色时间不同 颜色变化：橘黄色或红色 （3）蛋白质的鉴定 常用材料：鸡蛋清，黄豆组织样液，牛奶 试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/ml的NaOH；B液：0.01g/ml的CuSO4） 注意事项： ①先加A液1ml，再加B液4滴 ②鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比 颜色变化：变成紫色 （4）淀粉的检测和观察
常用材料：马铃薯 试剂：碘液 颜色变化：变蓝 细胞的基本结构和功能的关系 细胞主要由细胞膜、细胞质和细胞核组成。是生命活动的基本单位。 细胞能够正常完成各项生命活动的前提条件是细胞保持完整性。 植物细胞和动物细胞的区别是有液泡和细胞壁，动物细胞有中心体。植物细胞有叶绿体。 植物细胞的外面还有一层细胞壁，化学成分是纤维素和果胶。 植物细胞壁的功能是支持和保护的作用。 最能体现细胞与细胞之间功能差异的是：细胞器的种类和数量。 （1）细胞膜的结构和功能： ①细胞膜主要成分：脂质和蛋白质，还有少量糖类； ②细胞膜成分特点：脂质中磷脂最丰富，功能越复杂的细胞膜，蛋白质种类和数量越多。 ③欧文顿得出的结论是：细胞膜是由脂质组成的。科学家用丙酮从人的红细胞中提取脂质， 在空气—水界面上铺展成单分子层的面积是红细胞表面积的2倍，得出的结论是：细胞膜中的脂质分子排列为连续的两层。科学家用发绿色荧光和红色荧光的染料标记小鼠细胞和人细胞表面的蛋白质分子，然后将两种细胞融合，得出的结论是：细胞膜具有流动性。 细胞膜的功能：①将细胞与环境分隔开，保证细胞内部环境的相对稳定；②控制物质出入细胞；③进行细胞间信息交流。
《生物化学》实验指导书 适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学
孝感学院生命科学与技术学院 生物化学实验细则 为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能, 特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。 1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。 2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实验组的同学不准进入实验室。 3. 进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。 4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。 5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。 6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。 7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。 8. 实验后，要及时完成实验报告。
实验一还原糖和总糖的测定一一3,5-二硝基水杨酸比色法. (1) 实验二油脂酸价的测定 (5) 实验三蛋白质的提取及浓度测定？（紫外吸收法） (7) 实验四淀粉酶活力的测定 (9) 实验五酶的激活和抑制作用 (13) 实验六氨基酸的分离鉴定一一纸层析法 (14) 实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法 (16) 实验八琼脂糖凝胶电泳技术一一DNA样品检测 (18)
实验一 还原糖和总糖的测定一一 3,5-二硝基水杨酸比色法 、目的与要求 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利 用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含 量(还原糖以葡萄糖含量计)。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分 光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应 乘以0.9。 小麦面粉(1000 g) 2?主要仪器 3. 试剂 (1) 1mg/mL 葡萄糖标准液 100 mg ,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转 移到100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100 mL ,混匀，4C 冰箱中保存备用。 (2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂 3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂：称取6.5 g DNS 溶于少量热蒸馏水中， 溶解后移入1000 mL 容量瓶中，加入2 mol/L 氢氧化钠溶液325 mL ,再加入45 g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.实验材料 (1)具塞玻璃刻度试管: 20 mL X 11 (2)滤纸 (3)烧杯：100 mL X 2 (4)三角瓶：100 mL X 1 (5 )容量瓶: 100 mL X 3 (6)刻度吸管：1mL X 1 ； 2 mL X 2; 10 mL X 1 (7)恒温水浴锅 (8)煤气炉 (9)漏斗 (10)天平 (11)分光光度计 准确称取80 C 烘至恒重的分析纯葡萄糖