微生物检验技术 B卷参考答案及评分标准
动植物检疫专业2009级 2011-2012 学年第一学期
一、填空题(共20分，每空1分)。
1. 分离纯化与接种技术微生物计数法
2. 红无
3. 大肠菌群致病菌
4. 三氯化铁绿色
5. 铜绿假单胞菌大肠埃希菌
6. 靛基质尿素酶
7. 链激酶血凝块溶解
8．血液、血清、腹水乙型（β -）溶血链球菌
9. 副溶血弧菌绿
10. 卵黄琼脂平板S.S琼脂平板
二、判断题（共 10 分，每小题 1 分,用“√”表示对，“×”表示错)。
1.√
2. ×
3. √
4. √
5. ×
6. ×
7. √
8. √
9. ×10. √
三、名词解释题（共20分，每小题2分)。
1、兰氏分群：兰氏（Lancefield)用温热的稀盐酸浸出C抗原，与特异性血清作沉淀反应，将链球菌分为20个血清群（A-V，缺I和J）。
2、暴烈发酵：产气荚膜梭菌牛乳培养基培养时能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“暴烈发酵”。
3、增菌培养基：能够给微生物提供较适当的生长环境从而使微生物大量繁殖的培养基。
4、粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
5、肠杆菌科细菌；是一大群生物学性状近似的革兰氏阴性杆菌。多数是肠道的正常菌群，少数为病原菌。肠杆菌科细菌种类繁多，如埃希菌属、沙门菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属等。
6、类酵母型菌落：外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，它是由伸长的芽生孢子形成，如白色念珠菌。（由于部分单细胞真菌出芽繁殖后，芽管延长不与母细胞脱离，而形成假菌丝，此假菌丝伸入培养基，形成表面似酵母型菌落、培养基内有假菌丝的类酵母型菌落。）
7、cytopathic effect（CPE）：是指细胞病变效应，病毒在细胞内增殖的结果，常常导致细胞损伤，甚至将其杀死，因而在低倍显微镜下可以看到不同现象，常见的为细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。
8、病毒滴度：样本中病毒的浓度，通过用系列稀释的病毒接种细胞培养、鸡胚或实验动物,检测病毒增殖的情况而确定。可用PFU／mL表示。
9、血凝试验：许多动物病毒,如正黏病毒科、副黏病毒科、腺病毒科的成员,能够凝集某些动物(如鸡、小鼠、豚鼠、人)的红细胞。这些病毒含有可与红细胞结合的蛋白质,引起红细胞凝集。利用这种特性,可做血凝试验来检测这些病毒的存在。
10、中和试验: 是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。
四、简答题(共30分，每小题5分)。
1、简述真菌毒素的产生条件及检验方法。
参考答案：
真菌毒素的产生条件：①首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质、温度和湿度。②基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。一般而言，真菌产毒菌株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物源基质上产毒能力较低。③霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为25~30℃，低于l0℃或高于40℃生长减弱，产毒素能力也会受到影响。④基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切相关，基质含水量在17%~18%时为真菌产毒素的最适条件。(3分)
检测真菌毒素有许多方法：如检测黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法等。生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠做毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。ELISA法操作简便，并具有安全快速高效、费用低，适用于大批量标本的筛选。(2分)
2、简述食品微生物检验的一般流程。
参考答案：
（1）样品的采集与送检(1分)
采集的样品必须具有代表性和均匀性，能全面反映被检样品的卫生状况。需要填写采
样单。
样品的送检要求：要快速运送：不要超过3小时；易变质的样品要冷藏，若路途遥远，无需冷冻样品可保持在1~5℃低温下运送；需保持冷冻状态的样品，可保存在泡沫塑料隔热箱，维持0℃；送检过程，要注意防污染、防散漏、防变质；要填写送检申请单，以供检验人员参考。
（2）检验前的准备(1分)
①准备好所需的各种仪器。
②按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷却后送无菌室备用。
③准备好所用的各种试剂，制备好普通营养琼脂或其他选择性培养基。
④做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌30~60min.
⑤工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。
⑥工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌室。
（3）样品的预处理(1分)
不同样品要采用不同的处理方法，均需要在无菌条件下进行操作。
（4）常规微生物(1分)
测定细菌的菌落总数和大肠菌群数。
（5）致病微生物的检测(1分)
致病菌既能够引起人们发病的细菌。对不同的食品和不同的场合，应该选择一定的参考菌群进行检验。
（6）提交检验结果的报告
3、细胞培养有哪些类型和方法，并比较它们的优缺点？
参考答案：
(1) 原代细胞培养(1分)
动物组织经胰蛋白酶消化，使细胞分散而得，单个细胞，再生长于培养器皿中。各种组织都能制备，最常用者为肾和睾丸等，胚胎和幼畜的细胞较易生长。
优点：病毒对天然宿主的细胞最易感；适宜于病毒的分离。
缺点是有时携带潜伏病毒。
(2) 二倍体细胞株培养(2分)
原代细胞长成单层后用胰蛋白酶或EDTA钠将细胞从玻面消化下来，使细胞分散成单个细胞。然后加入新营养液，再分装于玻瓶中长成单层。如此可以连续传代，细胞的染色体数与原组织中一样，仍为二倍体，因此称为二倍体细胞。
优点：细胞碎片较少，潜伏病毒容易发现，对病毒的易感性与原代细胞差别不大。二倍体细胞可以大量培养，将多余细胞在液氮罐中贮存，随时取用，甚为方便。
(3) 传代细胞系培养(2分)
与上述两类细胞不同，这类细胞可在体外无限制分裂下去，有些从肿瘤组织而来，有些从细胞株转化而来。它们的染色体数目常不正常，称为异倍体。
优点：容易培养，生长迅速，传代方便，随时可以获得。
缺点：对病毒分离不够敏感，也不能用此直接制备疫苗，因为接种到动物体内有引起肿瘤的潜在危险。在实验室传代日久,有的可能污染。
4、简述病毒感染单位的测定方法。
参考答案：
常用于病毒感染单位测定的技术有空斑试验、终点稀释法、荧光-斑点试验、转化试验等,最常用的是前两种。（1分）
空斑试验是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的空斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。根据样本的稀释度和空斑数,计算每毫升空斑形成单位(PFU),即可确定病毒的滴度。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。（2分）
终点稀释法用于测定几乎所有种类的病毒滴度,包括某些不能形成空斑的病毒,并可用以确定病毒对动物的毒力或毒价。将病毒做系列稀释,选择4~6个稀释度,接种一定数量的细胞、鸡胚或动物,每个稀释度做3~6个重复。使用细胞培养,可通过CPE来判定组织培养半数感染量(TCID50)。在鸡胚或动物,是以死亡或发病来测定。以感染发病作为指标时,可计箅半数感染量(ID50);以体温反应作为指标时,可计箅半数反应量(RD50) 。用鸡胚测定时,可计算鸡胚半数致死量(ELD50)或鸡胚半数感染量(EID50) （2分）
5、简述溶血试验的原理，写出其试验方法、溶血类型及现象。
参考答案：
1、原理（2分）
某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。
2、试验方法（2分）
（1）平板法
将培养物接种于血平板培养基上，36±1 ℃培养24～48h，观察结果。
溶血试验的溶血类型及现象
α（甲型）溶血: 菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。
β（乙型）溶血: 菌落周围出现较宽的透明溶血环。
γ（-丙型）溶血: 菌落周围无溶血环。
（2）试管法
将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1 ℃培养16～18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。
3、结果观察与记录（1分）
有溶血现象，为阳性，记+；无溶血现象，为阴性，记-
6、金黄色葡萄球菌有哪些培养特性和生化特性？
参考答案：
（1）普通培养基上生长良好，在麦康凯琼脂平板不生长。（1分）
（2）血平板上生长更佳，致病菌株β溶血。（1分）
（3）产生金黄色色素。（1分）
（4）高度耐盐：可在10~15%NaCl肉汤中生长。（1分）
（5）分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。（1分）
五、问答题(共20分，每小题10分)。
1、详细叙述TSI（Triple Sugar Iron）试验的方法、原理和现象，并分析大肠杆菌、沙门
氏菌、志贺氏菌在TSI琼脂培养基上应该产生何种现象？
参考答案：
1、三糖铁（TSI）试验原理（2分）
三糖铁（TSI）琼脂培养基含有乳糖、葡萄糖、蔗糖为可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出，酸性呈黄色，碱性呈红色；硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，与硫酸亚铁中的铁盐生成黑色硫化铁。
2、三糖铁试验的现象（2分）
如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄；如果只可以利用
葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色；如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底部变黑。
3、试验方法（2分）
称取本品 64.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,加热煮沸 1分钟,分装于 16mm× 150mm 试管,121℃高压灭菌 15 分钟制成斜面长 4-5cm,底部长2-3cm。以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
4、志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S，培养基斜面为红色，下部为黄色。大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S，培养基全部变黄，底部被抬高。沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气，培养基底部变黑。
（4分）
2、描述新生隐球菌的微生物学特性，检验过程采用哪些方法？
参考答案：
微生物学特性：在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4～6μm，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌大1～3倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。常采用墨汁负染色法，在黑色景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。（3分）
检验方法：
(1) 标本直接镜检（1分）
用病人脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速方法。
常规细胞染色可发现隐球菌，但易误诊和漏诊。如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。
(2) 抗原检测（1分）
用乳胶凝集试验、ELISA、和单克隆抗体法等免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床上的常规诊断方法。
(3) 核酸检测（1分）
可用痰液、支气管吸出物等标本核酸检测方法有DNA探针法、PCR探针法等，用于检测的探针、引物主要选自保守区的重复序列。可检出新生隐球菌，并可区别类型，是新生变种还是格特变种。非致病性隐球菌不被检出。
(4) 分离培养（1分）
将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐球菌在25℃和37℃生长，而非病原性隐球菌在
37℃时不生长。培养2—5d后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。
(５) 鉴定（3分）
1）酚氧化酶试验：接种L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，经2～5d培养，呈棕黑色菌落。
2）脲酶试验：能产生脲酶分解尿素琼脂培养基中的尿素形成NH4+和CO2，使pH升高，培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵母菌为阴性。
3）糖同化及发酵试验：能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵多糖类，不能同化硝酸盐。非致病性隐球菌不能同化肌醇。
3、如何进行病毒的鉴定，详述病毒鉴定的步骤与方法。
参考答案：
1、初步鉴定（4分）
(1)根据临床表现、流行病学特征与标本来源，初步判定属于哪一类病毒。
(2)根据生物学特性：①细胞病变效应；②血吸附和血凝作用；③干扰现象；
(3)病毒的理化特性测定：①代谢抑制法鉴定病毒核酸类型;②脂溶性试验;③耐酸性
试验;
包括病毒核酸型鉴定、耐酸性试验、脂溶剂敏感性试验、耐热性试验、胰蛋白酶敏感试验等。通常以细胞或鸡胚培养为观察体系,应设立已知病毒为对照。
鉴定病毒核酸型：①代谢抑制法，添加氟脱氧尿核苷(FUDR)或类似物于病毒培养物中,病毒复制被抑制者,即为DNA病毒,否则为RNA病毒,也可用DNA酶或RNA酶分别作用,以判定核酸的性质。绿豆芽酶可降解单股核酸,用它可进一步鉴定核酸是单股或双股。②可直接用纯化的病毒核酸通过电镜观察,对其进行鉴定。但技术要求较高。③近年来,PCR核酸测序技术的应用使得病毒核酸型鉴定的可行性大为增加。
2、接种动物的观察：根据动物的感染范围,可初步推断属于何种病毒。接种动物的观
察是非常重要的,通过观察试验动物的反应有时也可初步鉴定何种病毒。每天都需要观察,有时1d需要观察数次。（2分）
3、最终鉴定：病毒的最终鉴定需要免疫学方法、电子显微镜与免疫电子显微镜技术等
特异性方法加以鉴定。（4分）
(1)病毒的血清学鉴定：血清中和试验、血清抑制试验、免疫荧光试验；
病毒分离后,可用已知的抗病毒血清或单克隆抗体,对分离毒株进行血清学鉴定,
以确定病毒的种类、血清型及其亚型。常用的血清学试验有血清中和试验、血
清抑制试验等。此外,可采用一些血清学技术如免疫沉淀技术和免疫转印技术分
析病毒的结构蛋白成分。
(2)病毒的分子生物学鉴定：分子生物学技术已广泛应用于病毒的鉴定；包括病毒
基因的PCR扩增及其序列分析,核酸杂交技术,病毒全基因组序列测定分析等,从而可获得分离毒株的基因组信息,依据基因组序列绘制遗传进化树分析比较分离毒株的遗传变异情况,确定分离毒株的基因类型。
《微生物检验技术》期末考试试题(A 卷) 一、名词解释(每小题3分，共15分) 1、菌落 2、正常菌群 3、消毒 4、噬菌体 5、最小抑菌浓度（MIC ） 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊结构 有 、 、 、 。 2.细菌生长繁殖的条件是 、 、 和气体。 3．病原菌的致病作用与 、 及 有密切关系。 4.诊断血清是用 免疫家兔等动物后取其 而制成的。一般置于 保存，使用时应避免 ， 降低效价。
5．K—B法中抑菌圈直径的大小与药物的最低抑菌浓度呈关系，即抑菌圈愈大，MIC值、细菌对药物的敏感程度。 6．、和可作为甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌的鉴别试验。 7．淋病奈瑟菌主要以方式传播，引起。 8.细菌对待测药物的敏感程度可分为、、 三级。 三、选择题(每小题1.5分，共30分)： 1、属于非细胞型微生物的是（） A、真菌 B、细菌 C、放线菌 D、病毒 E、螺旋体 2、革兰染色所用染液的顺序是（） A、稀释复红—碘液—95％乙醇—结晶紫 B、稀释复红—95％乙醇—碘液—结晶紫 C、结晶紫—碘液—95％乙醇—稀释复红 D、结晶紫—95％乙醇—碘液—稀释复红 E、稀释复红—结晶紫—碘液—95％乙醇 3、靛基质试验又称（） A、甲基红试验 B、尿素分解试验 C、硫化氢生成试验 D、吲哚试验 E、糖发酵试验 4、对人体无害的细菌代谢物是（）
A、热原质 B维生素 C、外毒素 D、内毒素 E、侵袭性酶 5、正常人体不存在细菌的部位是（） A、体表 B、口腔 C、大肠 D、尿道口 E、血液 6、实验室对接种针（环）、试管口的灭菌方法是（） A干烤法 B、流通蒸汽法 C、烧灼 D、焚烧 E、煮沸法 7、卡介苗是由何种变异而产生的（） A、形态变异 B、结构变异 C、毒力变异 D、耐药变异 E、酶活性变异 8、病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起严 重的全身症状，称为（） A、毒血症 B、菌血症 C、败血症 D、脓毒血症 E、 病毒血症 9、哪种动物不是微生物学检验中常用的实验动物（） A、小白鼠 B、豚鼠 C、裸鼠 D、家兔 E、马 10、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点（） A、凝固酶试验阳性 B、产生溶血素 C、分解 甘露醇 D、产生耐热核酸酶 E、胆汁溶菌试验阳性 11、在普通琼脂平板上生长的化脓性细菌是（） A、金黄色葡萄球菌 B、乙型链球菌 C、肺炎
第一章细菌检验基本技术 一、形态学检查 意义：1.为后续的进一步检验提供参考依据 2.迅速了解标本中有无细菌及菌量的大致情况 3.对少数具有典型形态特征的细菌可以做出初步诊断，为临床选用抗菌 药物治疗起重要的提示作用。 分为：染色标本和不染色标本的检查 1、不染色标本的检查：用于观察细菌的动力及运动情况。常用方法有压滴法和悬滴法。 2、染色标本检查：检查的内容：对标本合格与否进行评价；了解标本有无细菌及大致菌量；根据细菌形态、染色性质等对病原菌初步识别分类，决定进一步的生化反应鉴定血清学鉴定、并为临床选择用药提供帮助。 常用染色方法有：革兰染色（常用）、抗酸染色（结核病、麻风病）、荧光染色（结核、麻风、白喉、痢疾）、负染色（墨汁负染色法用于新型隐球菌检查）、特殊染色（鞭毛染色、荚膜染色、异染颗粒（白喉））。 二、培养与分离技术（关键） 目的：鉴定细菌的种类和保存菌种，为进一步确定细菌的致病性、药物敏感性提供依据。 牛肉膏无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。 流感嗜血杆菌需要X因子和V因子。 理想的凝固物质具有的特性：本身不被细菌利用；在微生物生长温度范围内保持固体状态，凝固点的温度对微生物无害；不因消毒灭菌而破坏，透明度好，黏着力强。（琼脂最合适） 半固体培养基琼脂含量 0.3%~0.5%；固体培养基1.5%~2.0%。 培养基质量检验：1、无菌试验：将灭菌后的培养基置35℃温箱培养过夜，判定是否灭菌合格。2、效果检验：按不同的培养要求，接种相应菌种（符合要求的标准菌种），观察细菌的生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基是否符合要求。 制备好的培养基存放于冷暗处或4℃冰箱，一般不超过七天，如果用塑料袋密封。保存期可延长，但至多两周。 专性需氧：结核分枝杆菌、霍乱弧菌 微需氧菌（5%氧气、10%二氧化碳、85%氮气）：空肠弯曲菌，幽门螺杆菌兼性厌氧菌：大多数病原菌 专性厌氧菌：破伤风梭菌、脆弱拟杆菌 二氧化碳培养（5%~10%二氧化碳）：淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、布鲁菌 菌落是单个细菌在培养基上分裂繁殖而成的肉眼可见的细菌集落。 菌苔是由众多菌落连接而成的细菌群落。 三、生物化学鉴定技术 1、碳水化合物代谢试验 2、蛋白质和氨基酸代谢试验 3、碳源利用试验 4、呼吸酶类试验 5、其他
检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级） 1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名--VRir us 结尾的单词,亚科名--VRir inae结尾的单词,科名--VRir idae结尾的单词。目名—VRir ales。2004年ICTV 公布病毒分为：73个科、11个亚种、289个属。 2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。 3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。 各药敏纸片间距不少于24mm，距平板内缘不小于15mm。 药物敏感实验判定标准：抑菌圈直径（毫米）：20以上极敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。 多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。 4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CIE）、免疫印迹技术。 5.病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。 PCR技术—是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60℃（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5’→3’端延伸，合成与模板互补的DNA链。），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR特异性的决定因素，PCR反应中TaqDNA聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。 变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性发生改变。3）增色效应。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"，Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA的变性(单链)状态。 基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）—主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。 核酸杂交（基因探针杂交技术）--是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率＞70%（≥69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在20%--60%同一属内不同菌种，同源性
微生物室上岗人员操作技术基础测试卷A(化妆品） 说明：1.本试卷命题范围为化妆品微生物检测标准汇编·操作规程及相关专业基础知识 2.本测试为闭卷考试，满分为120分，时间为120分钟 3.本测试在人员入职后进行，以检验人员对工作的掌握程度。 姓名：测试时间：年月日 阅卷：成绩： 一、填空题（44*1） 1. 化妆品微生物检验项目包括：、、 、、。 液体供检样品前处理时，水溶性样品用溶解，油溶性样品用溶解。 4.在测定霉菌和酵母菌时，虎红培养基中含有，以抑制其他细菌的生长。 5. 化妆品粪大肠菌群检测时，报告被检样品中检出粪大肠菌群应符合的条件：、、 、。 6.金黄色葡萄球菌革兰氏染色镜检结果为：革兰氏，排列成 状，芽孢，荚膜，致病性葡萄球菌。 7.在电压220V时，普通30W直管型紫外线灯，在室温为20~25℃的使用情况下，紫外线辐射强度（垂直1m处）应≥ 8.卵磷脂吐温80培养基灭菌条件为℃高压灭菌分钟. 9.金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上, 菌落直径为 ,颜色呈 ,边缘为色 ,周围为一带 ,在其外层有一 .圈。一般认为阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力. 10.检测粪大肠菌群时，所用的双料乳糖胆盐培养基中，溴甲酚紫的作用是 培养基原理是：蛋白胨提供源和源；糖是大肠菌群可发酵的糖类；磷酸氢二钾是；琼脂是培养基凝固剂； 伊红和美蓝是剂和剂，可抑制革兰氏阳性菌，在酸性条件下产生沉淀，形成色菌落或具黑色中心的外围的菌落。 12.高压灭菌锅必须每个月进行一次灭菌效果评价，用菌进行评价检验，而平时也要用进行检测。 13. 10-1 和10-2两个稀释度每ml的菌落数分别是260,28，则菌落总数报告值为
微生物实验室要求 微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验 室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、 检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告； 药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开 实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告， 造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经 计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。
微生物检验的基本操作技术 一、无菌操作技术 1、定义 是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法； 无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。 2、内容 无菌操作技术主要包括两方面： 1）创造无菌的培养环境。包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等； 2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。 3、无菌操作原则 1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净； 2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等； 3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边； 4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒； 5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处； 6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。 二、无菌操作的环境要求 1、无菌室 （1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；
食品微生物检验技术复 习题 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
名词解释 样品（sample）是指从某一总体中抽出的一部分。 食品采样（sampling）是指从较大批量食品中抽取能较好地代表其总体样品的方法。 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 菌落总数：指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使每一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。 V-P试验：某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。 生理生化试验：微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 硫化氢（H2S）试验：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。 增殖培养基: 在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。 外源性污染：食品在生产加工、运输、贮藏、销售食品过程中不遵守操作规程或不按卫生要求使食品发生污染称为外源性污染，也称为第二次污染． 环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。 微生物性食物中毒：食用被微生物或微生物毒素污染的食品而引起的中毒称为微生物性食物中毒。 无菌接种操作：培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这过程叫做无菌接种操作。 菌落：指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。 细菌总数：指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。 大肠菌群：系指一群在37度能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。 淀粉水解试验：某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 糖酵解试验：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。甲基红（Methyl Red）试验：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至以下，使甲基红指示剂变红。 靛基质（Imdole）试验：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。尿素酶（Urease）试验：有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。氧化酶（Oxidase）试验：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验：试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面，静置10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。选择培养基:在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。鉴别培养基: 在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。 无菌技术:指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。玻片凝集法：是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。试管凝集法：是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。 沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。大肠菌群MPN：大肠菌群MPN是采用一定的方法，应用统计学的原理所测定和计算出的一种最近似数值。 大肠菌群值：大肠菌群值是指在食品中检出一个大肠菌群细菌时所需要的最少样品量。内源性污染：凡由动物体在生活过程中，由于本身带染的微生物而造成食品的污染者，称为内源性污染，也称第一次污染．食品腐败变质：是指食品受到各种内外因素的影响，造成其原有化学性质或物理性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程．
29微生物检验技术基 础知识
一、以下每一道考题下面有A、B、C 、D、 E 五个备选答案。请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 1机体抵抗病原微生物的屏障结构包括 A皮肤与黏膜 B血脑脊液屏障 C胎盘屏障 D免疫系统 E B和C 2有关内毒素的描述哪一项是错误的 A均由革兰阴性菌产生 B其化学成分为脂多糖 C160℃，2～4小时才被破坏 D毒害效应具有组织器官选择性 E毒性作用较弱 3下列描述哪一项是错误的 A病原菌致病力的强弱程度称为毒力 B毒力主要由侵袭力和毒素所决定 C破伤风毒素属于内毒素 D侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力E以上均不是 4下列哪种成分不属于外毒素 A 脂多糖 B 痉挛毒素 C 肉毒毒素 D 表皮剥脱毒素 E霍乱肠毒素 5下列哪种成分不属于外毒素 A 金黄色葡萄球菌肠毒素 B产毒性大肠杆菌肠毒素 C 白喉毒素 D 表皮剥脱毒素 E 类脂A 6内毒素的毒性作用包括 A发热反应 B白细胞反应 C内毒素血症与内毒素休克 D以上都是 E A和C 7慢性志贺菌感染的病程一般在多少以上A2周 B1个月 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
C 2个月 D6周 E 7周 8志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为 A1天之内 B1～3天 C5～7天 D7～8天 E 8天以后 9下列关于结核分枝杆菌描述正确的是A类脂质为胞壁中含量最多的成分 B产生外毒素 C产生内毒素 D耐药性低 E 一般采用革兰染色 10我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过多少个大肠杆菌 A1个 B 3个 C 5个 D7个E8个 11大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖并具有下列何种特征者为阳性 A产酸 B产酸产气 C产酸不产气 D产气不产酸 E以上都不产生 12下列何种细菌为革兰阴性菌 A脑膜炎奈瑟菌 B结核分枝杆菌 C铜绿假单细胞 D枯草芽胞杆菌 E白喉棒状杆菌 13下列何种细菌为革兰阳性杆菌 A大肠杆菌 B铜绿假单细胞 C产气肠杆菌 D结核分枝杆菌 E肺炎克雷伯杆菌 14下列何种细菌为革兰阴性球菌 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3
《微生物检验技术》课程标准 课程代码： 建议课时数：150 适用专业：医学检验技术 一、课程的性质 《微生物检验技术》课程作为校企合作、工学结合的一门课程，在医学检验课程体系中占有重要地位，是医学检验专业的一门重要的专业核心课程，同时也是国家医学检验职业资格考试的五大内容之一。《微生物检验技术》课程是医学检验的重要部分，培养学生掌握常规微生物检验技术的基本知识和基本技能，使他们具有微生物检验技术的实际操作能力，为后续课程和岗位职业能力打下良好的基础。 1．课程设置的依据 打破以知识传授为主要特征的传统学科课程模式，转变为以任务引领型课程为主体的课程模式，让学生通过完成医学临床标本微生物学检测等相关知识结构，并发展职业能力。本课程是以微生物检验顺序为线索进行设计的。以工作任务为中心整合理论与实践，实现理论与实践的一体化。教学过程中，通过院校合作，校内实训基地建设等多种途径，采取临床医院与学校教学交替等形式，充分开发学习资源，给学生提供丰富的实践机会。教学效果评价采取过程评价与结果评价相结合的方式，通过理论与实践相结合，重点评价学生的职业能力。 2．课程内容确定的依据 课程内容的确定紧紧围绕工作任务完成的需要来进行，同时又充分考虑了职业教育对理论知识学习的需要，并融合了获取相关职业资格证书对知识、技能和态度的要求。 主要依据：①以微生物检验技术的工作过程为主线安排教学内容，体现真实微生物检验的工作流程，注重教学内容衔接性。②以微生物检验技术典型的工作任务为载体设计教学内容。引入临床案例，内容来源于真实的工作项目，引入微生物检验操作规范、技术标准和职业资格标准。体现知识学习的应用性，能力培养的递进性和素质培养的职业性。③课程内容可适当拓展，删减一些已经过时的陈旧的知识内容，将微量化、快速化检测技术及半自动化、自动化仪器使用和新技术纳入《微生物检验技术》课程内容中。注重学生可持续发展能力的培养，为学生的终身学习着想。突出课程教学的先进性和实用性。④以职业素养、职业道德、职业能力培养为目标设计考核评价体系，融入医院、企业文化、提倡职业精神。 3．课时安排说明 本课程安排在第二学年第3、4学期，建议学时数为150学时，理论教学68学时，实践教学82学时。
微生物检验试题 1.下列对微生物概念表述正确的是 A.仅存在于人体 B.结构复杂，形体微小 C.可用肉眼进行观察 D.原虫不属于微生物 E.卡氏肺孢子虫属于微生物 2.下列不属于原核细胞型微生物的是 A.大肠埃希菌B新型隐球菌 C肺炎衣原体D厌氧性放线菌 E解脲脲原体 3.属于非细胞型微生物的是 A.朊粒 B.细菌 C.真菌 D.衣原体 E.支原体 4.医院感染是指 A.患者在住院前三天发生的感染 B.患者在住院前一天发生的感染 C.患者在住院期间发生的感染 D.患者出院后一天发生的感染 E.患者在住院后三天发生的感染 5.下列对临床微生物检验的工作原则表述错误的是 A.确保临床标本可靠 B.微生物学定性分析 C.全面了解机体病原微生物 D.快速准确提供信息 E.加强与临床联系 6.革兰阳性细菌细胞壁具有很强抗原性的成分是 A.外膜 B.肽聚糖 C.磷壁酸 D.聚糖骨架 E.五肽交联桥 7.下列菌有细胞壁外膜层的是 A.粪肠球菌 B.溶血葡萄球菌 C.新型隐球菌 D.产酸克雷伯菌 E.克柔假丝酵母菌 8.具有脱硫氢基作用的细菌是 A.金黄色葡萄球菌 B.肺炎链球菌 C.脑膜炎奈瑟菌
D.奇异变形杆菌 E.流感嗜血杆菌 9.能使菌体蛋白变性或沉淀的消毒剂是 A.高锰酸钾 B.过氧乙酸 C.过氧化氢 D.低浓度苯酚 E.高浓度苯酚 10.监测高压灭菌器灭菌效果应选用 A.嗜热脂肪芽胞杆菌ATCC7953 B.金黄色葡萄球菌A TCC25923 C.大肠埃希菌ATCC25922 D.枯草芽胞杆菌黑色变种ATCC9372 E.铜绿假单胞菌ATCC27853 11.不属于口腔中常见正常菌群的是 A.卡他布兰汉菌 B.大肠埃希菌 C.甲型和丙型链球菌 D.表皮葡萄球菌 E.白假丝酵母菌 12.淘米水样粪便、有腥臭味，符合的疾病是 A.细菌性痢疾 B.重症霍乱 C.病毒性腹泻 D.阿米巴痢疾 E.肠伤寒 13.鉴定致病性金黄色葡萄球菌最常用的试验是 A.耐热DNA酶试验 B.血浆凝固酶试验 C.甘露醇分解试验 D.KIA E.MIU 14.抗酸染色检查的是 A.大叶性肺炎 B.细菌性脑膜炎 C.细菌血流感染 D.结核病、麻风 E.淋病 15.具有嗜冷性的菌为 A.奇异变形杆菌 B.产酸克雷伯菌 C.小肠结肠炎耶尔森菌 D.黏质沙雷菌 E.摩氏摩根菌
微生物检验技术课程综合化改革探讨 摘要：文章从培养实用型检验专业人才出发，分析三年制高职医学检验技术专业的课程设置和教学现状，从理论和实验两方面采取一系列措施进行教学改革，强调微生物检验技术课程综合化改革的必要性并对改革路径进行探讨。 关键词：微生物检验技术；教学现状；教学改革 微生物检验技术是医学检验技术专业学生必修的专业课程，也是一门应用性、实践性极强的学科。医学检验技术教学团队作为省高校教学团队，积极提高该课程的教学质量，立足课程基本要求，大胆改革，使学生具备扎实的理论知识和实践技能，能够直接上岗，增强就业竞争力。 1课程设置和教学现状分析 按照高职医学检验课程改革方案，医学检验技术专业五门专业课在第三学期”并行”开设，导致学生学习任务过重，课程内容之间也难以衔接，教学效果欠佳；理论课教学内容偏多，教与学的难度加大，而实验课仍然是传统的教学模式，即教师示范，然后学生模仿，且主要以验证性实验为主，难以发挥学生的主观能动性，导致学生对实验课也只是疲于应付，不利于学生创新能力的培养。 2理论教学改革
2.1优化教学内容《微生物检验技术》这本教材综合了微生物学、免疫学和流行病学等学科的内容，主要是研究感染性疾病的诊断方法，为临床医生合理用药提供依据。因此，这门课程的教学质量直接影响学生在临床工作中的工作能力[1]。为此，我们对教学内容进行了改革，将教学内容分为三大块：第一大块，首先介绍微生物的基本概念、在微生物检验过程中会使用到的一些基本技术和检验方法，使学生对微生物的相关理论知识有个大致的了解，为学生后续学习奠定基础；第二大块，主要介绍临床上常见的病原微生物的生物学特性、微生物学检验方法及临床意义，并将第一块中讲到的检验技术和检验方法运用到病原微生物的检验中来，让学生对整个学习内容有个纵向的了解；第三大块，模拟临床工作实际，介绍各种临床标本的微生物学检验，使学生学会收集标本和处理标本，并能够对检验结果进行分析，从而提高学生分析问题和解决问题的能力。与此同时，根据临床微生物的发展，对教学内容及时调整，微生物检验涉及到的微生物有三大类八大种，而对于三年制高职医学检验技术专业学生来说，如果每一种都精讲，势必造成学时严重不足，而且没有针对性，重难点不突出，学生学习起来很费力，这时教师可根据临床开展需要，对于临床分离率比较高的微生物，例如，化脓性球菌、肠杆菌科细菌、非发酵菌科细菌、流感病毒、乙型肝炎病毒、SARS 病毒等内容，要精讲；而
食品微生物检验的内容及检测技术 食品安全检验过程的主要内容 食品微生物的检验。食物在生产过程中以及放置过程中会受到环境中微生物的损坏或影响，在部分研究中，将食品中细菌数量对食品的损坏程度作为食品安全检测的首 要内容。在食品微生物的检验过程中，我们主要对人体有害微生物进行检验，其中在食品安全检验过程中，因为食品中有多种微生物共存现象，所以在检验前，微生物检验员要把不同的菌体进行分离，这样才能更加清楚的了解各种微生物的数量及菌体的分布情况，包括生产型食品微生物，如醋酸杆菌，酵母菌等和使食物变质的微生物，如霉菌、细菌等和食源性病原微生物如溶血性大肠杆菌，肉毒杆菌等。对食品原辅料微生物的控制和产成品微生物的检验是保证食品安 全的重要途径。 针对食品致病菌的相关检验。不同的致病菌会对人们的身体健康有不同程度的危害，像我们在生活中经常吃到的大米，有些不法商家将发霉的大米加工后再次放入市场进行二次销售，虽然经加工后，在外表上和普通大米没啥两样，但这种大米中含有黄曲霉这一致病菌，据可靠信息表明，黄曲霉的危害性十分巨大，如果人们长时间吃这样的大米，出
现癌症的风险要比常人高出很多倍，由此可见，食品中致病菌的检验是保证我们能吃到放心食品十分关键的微生物检 测技术，所以我们在致病菌的检验上对不同种类的致病菌进行定量严格检验。如乳制品和肉制品的致病菌主要是黄曲霉菌和大肠杆菌，而蛋制品中则容易出现染沙门菌、大肠菌群、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，罐头食品容易出现肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌。 食品微生物检验中的主要特点 对食品检测要求相对较高。在食品微生物的一系列检验中，由于食品中涉及的微生物种类较多，因此加大了食品微生物检验的难度。国家标准或行业标准对不同食品中微生物的含量特别是致病菌的含量有明确的要求。在食品的运输过程中，食品致病菌以及其他微生物对相应的食品有一定的污染，随着微生物种类的增多，检测人员需要对食品受致病菌影响的程度、食品保质期以及其他相关的标准进行测量，难度会随着微生物种类的增多而复杂。所以在微生物检验上我们对每一阶段的食品安全检测都要重视，在各个微生物的测量上，相关的检测技术要求就有所提高。 食品微生物检验效率。随着食品市场的商品流通提高，人们对食品需求不断增加，而食品安全问题却在日益严重，为了保障人们在能够及时满足食品种类和数量要求的同时，进一步促进食品安全的保障措施落实，必须加强食品安
1 病例标本送检，一般常规进行的检验包括 A. 直接涂片镜检，分离培养，生化反应和血清学试验 B. 药敏试验，动物实验，生化反应和血清学试验 C. 直接涂片镜检，分离培养，药敏试验，动物试验 D. 直接涂片镜检，药敏试验，动物试验和血清学试验 E. 染色镜检，药敏试验，动物试验和血清学试验 答案: A 解析: 2 医疗机构污水微生物样品应采集 A. 各科室冲洗流入下水道的污水 B. 患者使用后流入的污水 C. 污水贮存池内的污水 D. 该机构污水最终排放口的污水 E. 手术室流出的污水 答案: D 解析: 3 能形成草绿色溶血环的细菌是 A. 甲型溶血性链球菌 B. 表皮葡萄球菌 C. 炭疽杆菌 D. 丙型溶血性链球菌 E. 嗜血杆菌 答案: A 解析: 4 同一水源，同一时间采集多类检测指标的水样时，应先采集哪项指标的水样 A. 挥发性酚 B. 金属 C. 有机物 D. 微生物 E. 放射性 答案: D 解析: 5 用于PCR实验的仪器称为 A. 色谱仪 B. 质谱仪 C. 酶标仪 D. 紫外透射仪 E. DNA扩增仪 答案: E 解析: 6 PCR是 A. 补体结合试验 B. 血凝抑制试验
C. 聚合酶链反应 D. 酶联免疫吸附分析 E. 肥达反应 答案: C 解析: 7 不会使医疗机构污水中总游离余氯结果偏低的因素是 A. 水样经强光照射 B. 水样经过振荡 C. 水样经过高温 D. 水样立即检测 E. 水样放置一段时间后检测 答案: D 这是2013年微生物检验技术考试原题，因为时间匆忙，刚刚整理完50道题，请考生关注我的空间或者百度“新浪博客卫生资格考试”，另有复习指导书电子版免费赠！ 8 游泳池水细菌总数培是 A. 36℃，24h B. 37℃,48h C. 28℃,24h D. 28℃,48h E. 44℃,24h 答案: B 解析: 9 醋酸纤维膜电泳主要用于 A. 小分子多肽分离 B. 抗原或抗体分离 C. 免疫球蛋白分离 D. 盐的分离 E. 糖的分离 答案: C 解析: 10 生活饮用水采样后如不能立即检验，其保存温度和时间为 A. ﹣2℃,4h B. ﹣4℃,6h C. 0℃,4h D. 2℃,4h E. 4℃,4h 答案: E 解析: 11 在做证实试验时，挑取蜡样芽胞杆菌在选择性培养基上的典型菌落的数目为 A. 5个 B. 10个
考试试题—微生物检验 考试日期：姓名：分数： 一、填空题 1、抽样量一般应为检验用量的 3 倍，抽样时如发现有异常或可疑的样品，应抽选有疑问的样品。 2、样品在检验前应保存在干燥处，并存放在有“待检验”标识的区域，待检样品严禁开启，以防样品检验前受到污染。 3、菌检室在检验前打开紫外灯消毒 30 分钟。 4、检验时，细菌使用营养琼脂培养基，酵母菌用 YPD琼脂培养基，霉菌用虎红琼脂培养基。 5、供试液分别稀释成 1：10，1：100，1：1000 等比例，用吸管吸取每一稀释级的供试液 1 ml，注入 2 个平皿中。 6、细菌培养是在 30-35 ℃下培养 48±2 小时。 7、菌检试验完成后，检验员应及时填写《菌检报告》，一式二份，送市场部一份，技术质管部一份。 8、霉菌、酵母菌培养是在 25-28 ℃下培养，药品培养 72±2 小时， 食品培养五天。 9、接到市场部的《菌检申请单》后，检验员按《菌检作业指南》进行 试验，并填写《菌检记录》。 10、消毒后，培养基须放在 45 ℃的水沐浴锅内恒温。 11、菌落计数，一般在平板背面用肉眼直接点数，必要时用放大镜，以防遗漏。 12、平板上有片状或斑样菌落蔓延生长以及平板受到污染时，该平板计数无 效。 13、同一稀释级的菌落数为2个平板的平均数，若2个平板菌落数相差在 1 倍以上时，该稀释级不宜采用。但2个平板菌落数均在 15 个以下时除外。 14、供试品一般按批号抽样，采用随机抽样方法抽样。 15、供试品制成供试液后，应在 1 小时内注皿操作完毕。 16、若只有一个稀释级的平均平板菌落数在计数范围内，将该稀释级的平均平板菌落数乘以稀释倍数，为报告菌数。
[医学类试卷]临床医学检验技术初级（士）（微生物学及检验）模拟试 卷5 1 下列微生物中，属非细胞型微生物的是( ) （A）细菌 （B）支原体 （C）衣原体 （D）病毒 （E）放线菌 2 属于真核细胞型微生物的是( ) （A）病毒 （B）细菌 （C）支原体 （D）立克次体 （E）真菌 3 细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是( ) （A）形态微小，结构简单
（B）原始核，细胞器不完善（C）二分裂方式繁殖 （D）有细胞壁 （E）对抗生素敏感 4 真核细胞型微生物的特点是( ) （A）典型的核结构 （B）体积微小 （C）有细胞壁 （D）无完整细胞器 （E）对抗生素敏感 5 细菌的基本结构不包括( ) （A）细胞膜 （B）细胞质 （C）核质 （D）细胞壁 （E）菌毛
6 质粒是细胞的( ) （A）核质DNA （B）胞质DNA （C）核质RNA （D）胞质RNA （E）极体 7 下列不是细菌的特殊结构的是( ) （A）异染颗粒 （B）荚膜 （C）芽胞 （D）菌毛 （E）鞭毛 8 关于菌毛的叙述，错误的是( ) （A）多见于革兰阴性菌 （B）有普通菌毛与性菌毛 （C）在光学显微镜下看不到
（D）是细菌的运动器官 （E）普通菌毛与细菌的致病力有关9 血琼脂上的溶血环不包括( ) （A）δ溶血 （B）α溶血 （C）β溶血 （D）γ溶血 （E）双环溶血 10 细菌L型的特点错误的是( ) （A）对青霉素敏感性降低 （B）对表面活性剂敏感性增高（C）革兰染色均为阳性 （D）高度多形性 （E）抗原性改变 11 细菌按抗原结构不同而分为( ) （A）血清型
卫生系列高级专业技术资格考试参考资料 （微生物检验技术专业——副高级） 一、专业知识 1、本专业知识 全面掌握医学微生物学、生物化学、医学免疫学、分子生物学的理论和相关知识，包括：致病性微生物的分类、鉴定，常见细菌、病毒、真菌的检验技术、相关免疫学和分子生物学方法，有关的仪器设备的工作原理、使用方法，检验结果的病原学、卫生学意义。 熟悉与本专业有关的法律、法规、标准及技术规范。 2、相关专业知识 熟悉传染病学、流行病学、卫生统计学等相关学科的理论知识。 二、专业实践能力 1、能独立完成传染性疾病或食物中毒疾病及环境样品的检验工作，根据专业能熟练进行体液、分泌物、排泄物、食品、食品添加剂、包装材料、水质和涉水产品、卫生用品、医疗用品、化妆品等样本的采集，致病微生物学指标和血清学指标检测，能为疾病诊断、疫情处理及公共卫生管理提出正确的建议和意见。 2、了解常用分子生物学实验技术及应用范围。 三、学科新进展 了解本专业国内外现状和发展趋势，不断吸取新理论、新知识、新技术，并能应用于实践。 附录 一、细菌检验方法
1、常规分离方法 2、生化鉴定技术 3、免疫学检测技术 4、核酸鉴定技术 5、药敏试验 二、细菌种类 1、化脓性细菌：葡萄球菌属、链球菌属、奈瑟菌属、假单胞菌属。 2、肠道感染细菌：埃希菌、志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、幽门螺杆菌、弯曲菌。 3、厌氧性细菌：厌氧芽胞梭菌、无芽胞厌氧菌。 4、呼吸道感染细菌：结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、嗜肺军团菌、百日咳鲍特菌。 5、动物源性细菌：布氏菌属、炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶氏菌。 6、放线菌 7、螺旋体：钩端螺旋体、梅毒螺旋体、疏螺旋体。 8、支原体 9、立克次体 10、衣原体 三、病毒检验方法 1、常见病毒的分离及培养方法 2、常见病毒病的实验室诊断方法（包括：抗原、抗体及核酸 检测方法等）。
绪论 1.微生物的定义与特点;微生物的分类。 一、微生物的概念与特点 1.微生物（microorganism）是一群个体微小，结构简单，肉眼不能直接看见，必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能观察到的微小生物的总称。 2.微生物的特点 个体微小，结构简单 比表面积大，吸收多，转化快 繁殖快，代谢强 适应强，易变异 种类多，分布广 1.微生物类型 根据微生物大小、结构和组成不同分为三类型 2.病原微生物的定义病原微生物：是指能引起动物、植物或人类产生疾病的微生物。 3.医学微生物学的发展简史。 .微生物的发现与研究 （1）列文虎克发明显微镜，最早观察到微生物；微生物学研究的创始人：巴斯德、科赫、李斯特 第一章细菌的基本性状 第一节细菌的形态与结构 1.细菌细胞壁的结构和功能，肽聚糖结构及其化学组成；革兰阳性与革兰阴性细菌细胞壁的主要区别 （一）细胞壁 化学组成与结构，革兰染色共有组分：肽聚糖 特殊组分：G+ 菌、G-菌不同 革兰阳性菌细胞壁特殊组分：磷壁酸 革兰阴性菌细胞壁特殊组分：外膜
革兰阴性菌细胞壁肽聚糖:聚糖骨架、四肽侧链 2.细胞壁的功能： （1）维持细菌固有形态和抵抗低渗作用。（2）物质交换作用。（3）屏障作用。（4）免疫作用。（5）致病作用。（6）与细菌药物敏感性有关。 G+菌与G-菌细胞壁结构比较 ?细菌细胞膜的结构与真核细胞基本相同，由磷脂和多种蛋白质组成，但不含胆固醇。 ?细菌细胞膜可形成一种特有的结构，称中介体。 2.细菌荚膜、鞭毛和菌毛的功能。 荚膜： 功能： 有抗吞噬和抵抗杀菌物质的杀菌作用，增强细菌的侵袭力，构成细菌致病力的重要因素之一。②具有免疫原性。③鉴别细菌和血清学分型 鞭毛：功能：细菌的运动器官 菌毛 普通菌毛：具有黏附性，与细菌致病性有关。 性菌毛：与细菌的遗传变异相关 3.芽胞结构特点、意义、与消毒灭菌的关系；细菌L型的形态特征、检验要点。 芽胞：某些细菌（主要为革兰阳性杆菌）在一定条件下，细胞质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形的小体。 L型细菌：细胞壁缺陷的细菌。 常发生在作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中。 根据细胞壁缺陷程度分： 原生质体（完全失去细胞壁，见于G+菌，仅在高渗环境中存活) 原生质球（细胞壁部分缺损，见于G-菌，在高渗或非高渗环境中均能存活） 4.G+菌和G-菌细胞壁结构的差异及其意义。 第二节细菌的生理 细菌的生长条件,生长周期及各期的特点;IMViC试验的组成及机制;细菌分解及合成代谢产物的种类及意义。 细菌的生长繁殖
微生物检验职称考试基础知识模拟试题(一) A1题型 1、脊髓灰质炎病毒主要经过下列哪一个途径传播 A、呼吸道途径 B、血液途径 C、破损皮肤 D、粪-口途径 E、性传播 正确答案D 2、脊髓灰质炎病毒主要侵犯下列哪一个部位 A、脊髓前角运动神经原 B、脊髓上部 C、脊髓下部 D、大脑 E、小脑 正确答案A 3、医院获得性肺炎中，以下列何种微生物引起的肺炎多见 A、流感嗜血杆菌 B、铜绿假单胞菌 C、肺炎链球菌 D、军团菌 E、肺炎支原体 正确答案B 4、伯氏疏螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠 E、猪 正确答案A 5、回归热螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠 E、猪 正确答案C 6、杜通氏螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠
E、猪 正确答案A 7、志贺菌属中，下列哪一项不正确 A、在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落 B、K抗原为型特异型抗原 C、O抗原为群特异性抗原 D、分解葡萄糖，产酸不产气 E、分解乳糖，产酸产气 正确答案E 8、下列细菌中，不属于肠杆菌科 A、伤寒沙门氏菌 B、空肠弯曲菌 C、奇异变形杆菌 D、痢疾志贺氏菌 E、枸橼酸杆菌 正确答案B 9、宋氏志贺氏菌有两个变异相，急性患者分离的菌株一般是 A、Ⅰ相 B、Ⅱ相 C、Ⅰ相或Ⅱ相 D、Ⅰ相和Ⅱ相 E、以上都不对 正确答案A 10、有关细菌培养基的描述，哪项是不正确的 A、按物理状态可分为液体、固体和半固体三类 B、SS培养基属于鉴别培养基 C、血琼脂平板属于营养培养基 D、蛋白胨水为常用的基础培养基 E、庖肉培养基属于厌氧培养基 正确答案B 11、肠道杆菌中，重要的荚膜或包膜抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、伤寒的Vi抗原 D、以上都是 E、以上都不是 正确答案C 12、新从病人分离的肠道杆菌菌落是 A、R型 B、S型 C、R或S型 D、R和S型 E、以上都不对 正确答案B