糖化血红蛋白测定标准化
糖尿病（Diabetes Mellitus）是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的（长期）损伤、功能障碍和衰竭。2003年全球糖尿病患者数量接近2亿，预测2005年将再增加1倍，人群患病率将从0.67%上升到2.3%。中国现有糖尿病患者4000万，占全球总数的1/5。我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿，占医疗总费用的4%。监测血糖水平，对糖尿病的诊治是非常重要的，监测结果可用于评价治疗效果、调节饮食、活动和治疗，以达到最好的血糖控制效果。血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息，但无法评价一段时期内的平均血糖控制水平。糖化蛋白测定，主要是糖化血红蛋白和血清蛋白测定，进一步完善了糖尿病的实验室检测手段，其检测结果可以定量过去数月和数星期的血糖平均水平。
糖化血红蛋白（Glycated hemoglobin, GHB）实验通常是检测由血红蛋白和葡萄糖经缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比,积累并持续于红细胞120天生命期中。由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反应过去120天内的平均血糖水平。GHB检测用于常规实验室始于二十世纪七十年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。临床实验室中应用的GHB 检测方法主要分为两大类，一类方法基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换色谱、电泳和等电聚焦方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验，每种方法各有优缺点，对临床实验室而言，尚无“最佳”方法可以选择。虽然方法不同，结果的表示不同，但在正确操作和解释的情况下，方法间可以有较好的相关性，并能为临床提供有用的信息。
基于在美国进行的糖尿病控制和并发症临床研究（diabetes control and complications trial, DCCT），表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，及血浆葡萄糖水平与HbA1c水平间的关系。在此基础上，美国糖尿病协会（American Diabetes Association）提出了糖尿病治疗的建议，指明测定HbA1c重要性，并在世界范围内被广泛应用。为了更好地应用DCCT的结果治疗糖尿病人，为临床医生提供准确的实验室数据，美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（National Glycohemoglobin Standardization Program, NGSP）指导委员会于1996年完成。这一工作使得美国临床实验室间GHB测定的结果有了大的变化：2000年，90%实验室以HbA1c 报告糖化血红蛋白的结果，所有参加NGSP活动实验室测定结果的室间CV小于5%，HbA1c结果与靶值的偏差小于0.8%。目前，美国绝大多数实验室报告的结果，均可溯源至DCCT结果，使对糖尿病及其并发症的治疗和预防工作有了统一的参考标准。美国临床实验室标准委员会（NCCLS）采纳了NGSP的GHB测定的标准化模式[2]。
一、NGSP实验室网络
NGSP由执行委员会和实验室网络组成（图1）。实验室网络中包括管理核心（NETCORE），一级中心参考实验室（CPRL），一级参考实验室（PRLs）和二级参考实验室（SRLs）。
管理核心（NETCORE）负责直接与执行委员会联系，分析全部网络监测数据并转送执行委员会审批，向合格的实验室或厂家颁发证书。一级中心参考实验室依据在DCCT项目中使用的方案[5]，使用Bio-Rex 70树脂HPLC方法测定HbA1c，建立基准。虽然，采用的方法有一定缺限（如受HbF、变异血红蛋白的干扰，且测定速度较慢），但长期稳定性（CVs﹤3%）是NFSP 考虑其作为参考方法的主要依据。一级参考实验室作为中心参考实验室的后备支持，采用相同的实验方法，并确保结果可溯源至CPRL。其他网络实验室为SRLs，可使用不同的实验方法，但必须溯源至CPRL方法。每个SRL都应得到NGSP相应的证书，并可直接参与生产厂家的校准工作。
NGSP实验室网络中的各实验室都必须依据NCCLS EP5-A文件进行方法精密度评估，并每月参加用新鲜血样本进行的实验室间比对（n=100）和依据NCCLS EP9-A文件进行的偏差评估（表1）。NGSP实验室网络与各临床实验室和生产厂家协同工作，完成校准、颁发证书和能力验证工作。
二、标准化计划的应用
GHB测定标准化计划的目的是：校准实验室测定方法、为检测方法和实验室颁发证书、及指导常规实验室开展室间质量评价活动。
在检测方法获得证书前，生产厂家必须确保他们的检测结果与实验室网络的结果具有可比性，厂家可在网络实验室的帮助下，达到以上目的。同时，必须按规定的程序进行方法精密度检测和室间比对。在全部数据经管理核心评审合格后，可获得合格证书。检测实验室也可按相同程序获得相应证书，参加网络实验室比对检验的实验室可获得“水平1”证书，否则，为“水平2”证书。
GHB标准化计划的效益，临床实验室可以通过参加能力验证活动获得，这种活动通常使用由网络实验室定值的新鲜血样本，评估结果的偏差和实验室间及方法间的可比性。标准方法的使用，让实验室检测结果与DCCT实验结果结合起来，从而更好地服务于临床医生和糖尿病患者。
三、 GHB 测定方法的选择
为保证实验室结果可以溯源至DCCT的结果，且在实验室具有可比性，美国糖尿病协会（ADA）建议只使用NGSP验证的GHB实验方法[6]，除具可比较性外，这些方法还具有较好的精密度，通常总不精密度＜5%。GHB实验的方法原理不同，各有优缺点，影响因素亦不相同。临床实验室可根据所用的方法，明确易受的干扰因素：如不同血红蛋白组分、高HbF; 餐后急性产生的可逆性葡萄糖血红蛋白中间产物（不稳定GHB或pre-A1c），同时，样本的保存对某些实验方法有较大的影响。
四、GHB测定国际标准化
1995年国际临床化学组织（IFCC）建立了工作组，以研发HbA1c测定的原级参考物和参考方法为目的，在其建立的实验室网络中，使用纯化的HbA1c和HbA0进行校准，并致力于建立与NGSP网络结果间的联系。实验结果显示，IFCC的HbA1c结果略低于NGSP结果。在NGSP 的中心参考实验室内将建立IFCC参考方法[1]。
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义
糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。
1HbA1c的临床意义
糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。
1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。
1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。
1．3作为糖尿病的病情监测指标
1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。
1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。
1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。
1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。
1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。
1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。
1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法
2．1乳胶凝集反应法
乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出HbA1c占Hb的百分含量，测定时，仪器多采用660nm单色光做主波长，800nm单色光做副波长，通过标准曲线得出实测值。由于这种试验其标准曲线是非线性的，所以在测定前，首先用随试剂盒一起带有的5种不同浓度的定标液，做出5点非线性标准曲线。曲线和数值存在生化仪的贮存器中，测定样品时，实测出的吸光度值A与标准曲线比较，由仪器CPU求出实测样品中的HbA1c百分含量。乳胶凝集反应法测定HbA1c简便、不用增加仪器，可直接用自动生化分析对样品进行快速测定。该方法也可以用手工的方法，在酶标仪进行测定，是目前使用较多的方法。但是乳胶凝集反应法其准确性和重复性均有欠缺。
2．2离子交换高压液相色谱法HPLC
使用离子交换高压液相色谱HPLC（high pressure liquid chromatography）来测定HbA1c的百分含量目前被认为是分析HbA1c的金标准。采用HPLC方法工作的全自动糖化血红蛋白分析仪器，以其快速、简便、精巧、准确等特点，受到越来越多用户的欢迎。
色谱分析是一类利用混合物的各组分在不同相上的分配差别，在两相物质相对运动过程中，将混合物中的各种成份分离开的一种分析技术。液相色谱是以液体或固体为固定相，以液体为液动相的色谱法的总称。色谱法又叫色层或层析，这一技术在生命科学研究中用于生物活性物质的分析；生物活性物质是以混合物形式存在，人类血液中的蛋白质有上千种，只有把混在一起的被测蛋白分离出来，才能准确测定；在HbA1c的测定时，可以通过高精度HPLC，将HbA1c从Hb中分离出来，才能得到准确的数值。在生命科学研究中，活性物质的分离主要应用的是液相柱色谱。这种技术诞生于20世纪初叶，俄国化学家茨维特把植物色素混合液置于装有碳酸钙吸附剂的玻璃管顶端，用石油醚洗脱后，在玻璃柱上出现了几组颜色不同的色带，这些色带随着不断的洗脱，越分越开，先后从玻璃柱下端流出，茨维特把这样一种用流体洗脱色素混合液，使之通过碳酸钙做固定相从而实现分离的技术，起名叫“色谱法”。这种方法被推广用于分离许多混合物中的各种物质，被分离物质已和颜色无关了，但“色谱”分析的名称仍沿用至今。当然更贴切的名称应该叫“层析法”。早期的“色谱柱”体积大，做固定相的物质颗粒大，分离时需要大量的洗脱液。并且洗脱液靠重力流动，分离时间长，效率低。随着科学技术的进步，20世纪60年代，人们研制出新型液相柱，同时采用高压输液泵自柱上端为洗脱液加压，大大加速了洗脱液的流速，开发出相应的高灵敏度的检测器，新的分析仪器—高压液相色谱仪在70年代诞生，很快就占领了分析化学的舞台。特别是在生命科学的研究中，HPLC技术由于对被测物活性影响小，几乎可以测定生物医学中所有的非发挥性物质，如近年来利用离子交换HPLC法测定血液中的HbA1c的百分含量，被认为是糖尿病诊断的金
标准。
3糖化血红蛋白自动分析仪
糖化血红蛋白自动分析仪采用离子交换HPLC法测定HbA1c。离子交换HPLC法，是利用能交换离子的材料为固定相来分离离子型化合物的方法。仪器使用阳离子交换柱进行HbA1c 的百分比测定；当一定量的全血样品被取样针吸入到进样装置内，在稀释部分被溶血，释放出红细胞中的血红蛋白Hb，并由稀释液稀释，稀释好的已经溶血的样品，由高压泵注入离子交换柱。柱内的固定相是最新开发的非多孔性，不溶和可渗透的交联高聚物，上面分布固定的带电荷基团和能游动的配衡离子；样品通过过滤器从交换柱顶端加入后，由三种不同浓度的盐洗脱缓冲液（流动相）洗脱，使样品向下移动。此时溶液中所含血红蛋白（Hb）的各种组份即与固定相上能移动的离子进行交换，样品中的血红蛋白多种组分在固定相上连续进行可逆的交换吸着和解吸作用，而3种不同离子浓度的盐液，形成线性梯度洗脱，洗脱液No1叫起始缓冲液，含低离子浓度的盐，洗脱液No2、No3缓冲液，其离子浓度依次增高很多，这种流动相离子浓度的改变对分离效果的影响非常明显，前面洗脱出来的组分分离效果好，色谱峰很窄，后面组分也能在很短时间内洗脱出来，大大缩短了分离时间；所以全自动血红蛋白分析仪，在1分多钟内、Hb中的多种成份被分离成6个部分，其中的HbA1c、HbF、HbA1被有效、精确的分离；由交换柱流出的Hb成分到达仪器的检测器，检测器内装有发射单色光的发光二极管，通过双波长可见光比色法测定HbA1c、HbF、HbA1三个参数。仪器的检测器检测出分离后HbA1c、HbF、HbA1组分的吸光度值，与HbA1c标准品吸光度值比较，分析计算出结果，最后以百分率表示的Hb组分结果与色谱图一起打印出来。
离子交换柱HPLC法对全血直接测定HbA1c，其批内和批间变异系数CV均可以小于1%（CV < 1%），结果精确，HbA1c检测结果不受存在的变异型血红蛋白及其衍生物的影响，特别适合于糖尿病人的监控。
随着糖尿病发病率的逐年攀升，糖尿病患者人群逐渐扩大，中国已成为继印度之后位居第二位的糖尿病国家。据WHO流行病学调查资料统计，按目前糖尿病的增长速率，到2025年全世界糖尿病人口将由1995年的1亿3000万达到3亿，其中发达国家将由5100万增长到7200万，增长率为42％，而在发展中国家将由8400万增长到2亿3000万，增长率达到了170％，也就预示着在发展中国家糖尿病将成为社会巨大的负担。
中国糖尿病的患病率则由1980年的1.0%上升到1994年的2.5％和1996年的3.2%(人口年龄在20～75岁之间)。Inter Asia
2003年研究结果显示，中国成人的糖尿病患病率为5.5%，35～74岁的成年人中，男性的患病率为5.2%(约有1270万)；女性的患病率为5.8%(约1330万)。如按总人口计算，2000～2001年中国共有约3000万糖尿病患者，但是被诊断的只占23.6%(710万)。
目前我国糖尿病患者约4500多万，其中绝大部分为2型糖尿病。由于生活方式的不同，城乡患病率差别很大，城市人口2型糖尿病患病率平均为4.8%，但并发症控制率不足20%，已确诊的因糖尿病导致的高血压患者有1200万、脑卒中患者500万、冠心病患者600万、尿
毒症患者50万。专家指出，血糖控制不达标是造成这一现象的重要原因，而糖化血红蛋白是衡量血糖控制水平的重要指标。
糖化血红蛋白和血糖有何差别?
血糖是从食物中的碳水化合物分解而来的血液中的单糖,通常仅指葡萄糖。血糖测试结果反映的是即刻的血糖水平。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。
糖化血红蛋白是糖尿病监测的“金标准”
随着人们对糖尿病知识的逐步了解，多数人已意识到空腹和餐后2小时血糖监测的重要性，并常常把二者的测定值作为控制血糖的标准。其实不然，空腹和餐后2小时血糖是诊断糖尿病的标准，而衡量糖尿病控制水平的标准是糖化血红蛋白。空腹血糖和餐后血糖是反映某一具体时间的血糖水平，容易受到进食和糖代谢等相关因素的影响。糖化血红蛋白可以稳定可靠地反映出检测前120天内的平均血糖水平，且受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素干扰不大。因此，国际糖尿病联盟推出了新版的亚太糖尿病防治指南，明确规定糖化血红蛋白是国际公认的糖尿病监控“金标准”。如果空腹血糖或餐后血糖控制不好，糖化血红蛋白就不可能达标。
认识糖化血红蛋白
糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。糖化血红蛋白越高表示血糖与血红蛋白结合越多，糖尿病病情也越重。糖化血红蛋白的英文代号为HbA1c。
糖化血红蛋白的特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：（1）与血糖值相平行。血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。（2）生成缓慢。由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降。由于吃饭不影响其测定，故可以在餐后进行测定。（3）一旦生成就不易分解。糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平。（4）较少受血红蛋白水平的影响。糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白水平的影响。
糖化血红蛋白的控制标准
糖化血红蛋白能够反映过去2～3个月血糖控制的平均水平，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。世界权威机构对于糖化血红蛋白有着明确的控制指标，ADA（美国糖尿病学会）建议糖化血红蛋白控制在小于7％，IDF（国际糖尿病联盟）建议糖化血红蛋白控制标准为小于6.5％，目前我国将糖尿病患者糖化血红蛋白的控制标准定为6.5％以下。
糖化血红蛋白与血糖的控制情况
4%～6%：血糖控制正常。
6%～7%：血糖控制比较理想。
7%～8%：血糖控制一般。
8%～9%：控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构及运动，并在医生指导下调整治疗方案。
＞9%：血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。
糖化血红蛋白控制水平与糖尿病并发症
临床上，只有30％左右的糖尿病患者能做到定期监测糖化血红蛋白。良好的血糖控制是预防并发症的关键，而血糖监测在很大程度上取决于患者本人的认知和行动。由于大部分患者选择可靠性不高的日常监测手段，目前超过60%的2型糖尿病患者的糖化血红蛋白控制不理想。糖化血红蛋白长期控制不稳定的影响是多方面的，它会改变红细胞对氧的亲和力，加速心脑血管并发症的形成；如果眼睛内的晶体被糖化，则会引发白内障。此外，它可引起肾小球基底膜增厚，诱发糖尿病肾病，并引起血脂和血粘度增高。糖化血红蛋白升高，是心肌梗死、脑卒中死亡的一个高危因素。在男性患者中，糖化血红蛋白每增加1%，死亡率的相对危险性增加24%，女性患者增加28%。一旦糖化血红蛋白超过7％，发生心脑血管疾病的危险性就增加50％以上。
糖尿病患者的糖化血红蛋白控制水平没有阈值，随着糖化血红蛋白水平的降低，越接近正常值，糖尿病的并发症降低越明显，DCCT、UKPDS等国际大规模临床试验得出结论，证实糖尿病患者经强化治疗后糖化血红蛋白水平可以显著降低，各种并发症风险也明显减少。英国前瞻性研究证实糖化血红蛋白每下降1％，糖尿病相关的死亡率降低21％；心肌梗死发生率下降14％；脑卒中发生率下降12％；微血管病变发生率下降37％；白内障摘除术下降19％；周围血管疾病导致的截肢或死亡率下降43％；心力衰竭发生率下降16％。因此，糖化血红蛋白对糖尿病患者来说是一项非常重要的监测指标，它的高低直接决定将来各种严重影响糖尿病患者生活质量的慢性并发症的发生和发展。糖尿病患者定期监测糖化血红蛋白具有非常重要的意义，有助于帮助患者改善血糖控制水平，促进患者的血糖达标，从而减少并发症的发病率，从根本上改善糖尿病患者的生活质量。
测定糖化血红蛋白的注意事项
发现治疗中存在的问题。如果糖尿病患者经常监测血糖都显示控制较好，而糖化血红蛋白偏高，则需考虑是否平时监测血糖不够全面（如只测空腹血糖而忽略了餐后血糖），或者可能血糖仪测出的数值不够准确（如机器老化，试纸受潮、过期等）。
如果某位糖尿病患者血糖波动较大，经常发生低血糖，继而又发生高血糖，由于糖化血
红蛋白是反应血糖的平均值，所以其糖化血红蛋白完全有可能维持在正常范围。在这种情况下，它的数值就不能反映真正的血糖变化了。同时，糖化血红蛋白还受红细胞的影响，在合并影响红细胞质和量的疾病（如肾脏疾病、溶血性贫血等）时，所测得的糖化血红蛋白也不能反映真正的血糖水平。
指导治疗方案的调整。在临床治疗中，如能同时测定血糖与糖化血红蛋白，可以更好地全面判断病情，及时调整治疗方案。当空腹血糖超过患者糖化血红蛋白对应的预测值时，则显示近期血糖控制不好，可能与采血时紧张、劳累、晚餐进食过多、治疗不当、急性并发症等有关，需要调整治疗方案。比如某糖尿病患者定期监测糖化血红蛋白均在6%～7%，而最近一次为8.2%，这表明以往的治疗方案已不能较好地控制血糖，需要重新调整方案。相反，如果空腹血糖低于糖化血红蛋白对应的预测值，甚至达到正常标准，则显示近期血糖控制良好，治疗对症。
因此，普及糖尿病知识，更新治疗理念，监测并保持糖化血红蛋白达标，更早、更合理地使用胰岛素等药物治疗，对于控制糖尿病并发症的发生发展尤为重要。目前临床提倡对2型糖尿病患者采取积极治疗方法：尽早药物治疗、尽早联合治疗。糖尿病患者血糖控制未达到目标或治疗方案调整后，应每3个月检查一次糖化血红蛋白；血糖控制达到目标后也应每年至少检查2次糖化血红蛋白。
血糖达标的三个标准
血糖达标的三个标准是空腹血糖、餐后2小时血糖及糖化血红蛋白均达标。很多糖尿病患者只重视空腹和餐后2小时血糖，而忽视了糖化血红蛋白的检测。事实上，如果仅空腹和餐后血糖达标，而没有控制好糖化血红蛋白，就证明血糖控制仍未达标。
只有空腹血糖控制在4.4～6.1毫摩尔/升之间，餐后2小时血糖控制在4.4～8.0毫摩尔/升之间，糖化血红蛋白控制在6.5%以下，才能达到理想的控制目标，即不仅要控制基础状态下的空腹高血糖，还要控制负荷状态的餐后高血糖，这两个血糖都控制好了，糖化血红蛋白才能降到理想水平，进而延缓和防止多种并发症的发生。
糖化血红蛋白（HbA1c）的测定及意义 对糖尿病患者而言，糖化血红蛋白是很重要的病情衡量指标，然而据2006年开始的IMPROV ETM全球项目的最新研究显示，51％的患者从未听说过糖化血红蛋白，10％以上的医师每年对患者进行的糖化血红蛋白检测不到一次。在中国，只有1/4的医师认识到糖化血红蛋白是衡量血糖控制的重要标准。 正常人有三种血红蛋白：HbA、HbF、HbA2，而成人红细胞中主要含有HbA。在用层析法分离血红蛋白时，可洗脱出3种含糖成分即：HbA1a、HbA1b、HbA1c，合称为糖化血红蛋白。H bA1c是葡萄糖化血红蛋白，另两种是其他糖形成的糖化红蛋白。糖化血红蛋白由HbA在代谢过程中与葡萄糖结合形成，因而它可准确地反映血中葡萄糖水平。 糖化血红蛋白的测定方法主要有：高压液相法、比色法、层析法、电泳法及免疫法等。 正常参考值：健康成人HbA1平均为6.5%，范围5.0%～8.0%。 临床意义： 1．糖化血红蛋白的测定用于评定糖尿病的控制程度。当糖尿病控制不佳时，糖化血红蛋白浓度可高至正常2倍以上。因为糖化血红蛋白是血红蛋白生成后成糖类经非酶促结合而成。它的合成过程是缓慢且相对不可逆的，持续存在于红细胞120天生命期中，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比。因此，糖化血红蛋白所占比率能反映测定前1-2个月内平均血糖水平。本项目的测定已成为糖尿病较长时间血糖控制水平的良好指标。如果HbA1的浓度高于10%，胰岛素的剂量就需要调整。在监护中的糖尿病患者，其HbA1的浓度改变2%，就具有明显的临床意义。 2．该项目的测定不能用于诊断糖尿病或判断天-天间的葡萄糖控制，亦不能用于取代每天家庭检查尿或血液葡萄糖。 3．HbA1c水平低于确定的参考范围，可能表明最近有低血糖发作、Hb变异体存在或红细胞寿命短。 4．任何原因使红细胞生存期缩短，将减少红细胞暴露到葡萄糖中的期间，随之HbA1c%就会下降，即使这一时间平均血液葡萄糖水平可能是升高的。红细胞寿命缩短的原因，可能是溶血性贫血或其他溶血性疾病、镰状细胞特征、妊娠、最近显著的血液丧失或慢性血液丧失等。 6.5％――不能“作弊”的标准 在血糖控制中，糖化血红蛋白是专家们非常关注的问题。糖化血红蛋白是红细胞内的葡萄糖与携带氧气的血红蛋白起化学反应形成的物质。一般情况下，人体内被“糖化”的血红蛋白占全部血红蛋白的4％～6％，而糖尿病患者则要明显增高. 微小改善可明显减少并发症 糖尿病患者的糖化血红蛋白（HbA1c）能够反映过去2～3个月血糖控制的平均水平，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。英国前瞻性研究证实HbA1c每下降1％，糖尿病相关的死亡率降低2 1％；心肌梗死发生率下降14％；中风发生率下降12％；微血管病变发生率下降37％；白内障摘除术下降19％；周围血管疾病导致的截肢或死亡率下降43％；心力衰竭发生率下降16％。
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述 2007年3月19日 糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述 冯念伦范卫华刘捍东 （山东省立医院济南250021） 糖尿病(DM),主要是2型糖尿病的发病率，目前在世界上无论发达国家还是发展中国家均明显增加，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症已经成为病人至残和早亡的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。 有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有1000亿美元，糖尿病已经成为世界各国的主要保健卫生问题，对糖尿病及其并发症防治的研究是2０世纪后２０年国际卫生保健研究的重点之一。 临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近2-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c有多种方法，目前临床上比较常用的方法有两种：乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法；分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。 1、糖化血红蛋白（HbA1c）的形成及特点 血液中红细胞内的血红蛋白Hb会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应, 血红蛋白Hb的β链N末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的加成反应,，形成不稳定的中间产物--- 醛亚胺（前GHbA1c）迅速重排成不可逆的酮胺，然后缓慢重构形成HbA1c。 糖化血红蛋白HbA1c的特点： 1．1 糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量与即时所检测到的血糖水平无关。 1．2 由于红细胞在外周血中的寿命是90 －120天，所以糖化血红蛋白HbA1c百分比反映了测定前２－３个月的血糖平均水平。而GHbA1c的合成始终在进行，其糖化程度与血液中的葡萄糖浓度及持续时间呈正相关；病人用药治疗后，较血糖、尿糖含量下降晚３－４周，糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量是对糖尿病长期控制有重要意义的一项指标。 2、测定糖化血红蛋白HbA1c的方法 测定糖化血红蛋白HbA1c的方法有（1）离子交换高压液相色谱法HPLC；包括：离子交换色谱及亲和色谱；（2）微柱法；（3）免疫分析法，包括：放射免疫法、酶免疫法和乳胶免疫凝集法。（3）电泳法
血红蛋白的测定方法 血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。 1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。此法为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。 2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。 3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，但仍然有公害问题。 4）碱羟血红蛋白（AHD 575nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。 5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。 近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。有些溶血剂内虽加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，仪器要经过HiCN标准液校正后，才能进行Hb测定。仪器法测定血红蛋白精确度CV约为1%.
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与 仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1 HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1 增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2 降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3 作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1 作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2 不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3 可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4 当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达 2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。 1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。 1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。 2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法 2．1乳胶凝集反应法 乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出
糖化血红蛋白——提高糖尿病诊断效率的新手段 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科贾伟平教授、包玉倩教授的课题组对中国人糖尿病诊断方法的研究又取得新进展，其研究成果最近被世界著名的四大综合性医学期刊之一——英国医学会官方月刊《British Medical Journal》在线发布，并配发了专家述评。 糖尿病是目前严重危害人类健康的三大慢性病之一。近期在中国4.6万余人的调查显示，20岁以上人群糖尿病的患病率达9.7%，糖尿病前期的患病率达15.5%，目前估计中国糖尿病患者数已达9240万。空腹血糖及口服葡萄糖耐量试验是诊断糖尿病的常用方法。但是，无论进行口服葡萄糖耐量试验或检测空腹血糖均有时间及采样要求，需要空腹或多次取血，因此受试者依从性较差。近年来有学者将糖化血红蛋白（HbA1c）这个评价糖尿病血糖控制水平的监测指标引入到糖尿病诊断领域。HbA1c检测的优势在于方便、易行、不受进餐时间以及短期生活方式改变的影响，变异性小，反映出的血糖情况相对稳定。 2009年6月美国糖尿病学会（ADA）、国际糖尿病联盟（IDF）和欧洲糖尿病学会（EASD）组成的国际专家委员会建议HbA1c≥6.5%可作为诊断糖尿病的标准。2010年ADA指南已将HbA1c≥6.5%列为糖尿病的诊断标准之一，将HbA1c≥6.0%作为糖尿病的筛查标准之一。然而，应用HbA1c诊断糖尿病的切点存在种族差异。贾伟平的团队在上海社区人群中进行空腹血糖、口服葡萄糖耐量试验以及HbA1c诊断糖尿病效率的研究。研究结果提示，在社区普通人群中HbA1c≥6.3%诊断效率等同于空腹血糖≥7.0 mmol/l。而在糖尿病的高危人群（包括年龄≥45岁、体重指数≥24 kg/m2）中HbA1c≥6.3%诊断效率明显优于空腹血糖≥7.0 mmol/l，也优于用HbA1c≥6.5%诊断糖尿病的效率。 目前中国的大部分综合性医院都有HbA1c检测仪，中国卫生部正在实施HbA1c检测的质量控制体系。HbA1c 诊断及筛查糖尿病为临床实践提供了新的补充方法，HbA1c在任何时间都能够采样，可以提高受试者的检测顺应性，使得一部分不符合空腹采血要求以及不愿接受口服葡萄糖耐量试验的糖尿病患者被及时诊断。贾伟平的团队又提供了来自中国人群研究的HbA1c诊断的切割点即HbA1c≥6.3%，这为医生提高糖尿病的诊断效率提供了新手段。 2010年全球HbA1c标准化测定共识 糖基化血红蛋白的浓度（通称糖化血红蛋白，HbA1c）反映过去2-3个月的平均血糖水平，是评价长期血糖控制的金标准。1984年首次提出其标准化测定的问题［1］，但直到1993年DCCT研究［2］发表后，科学家和临床医师才开始重视这一问题。那时由于缺乏全球统一的标准化手段，各国均使用自己的检测方法，比较著名的有：美国进行了全国糖化血红蛋白标准化项目（NGSP），主要依据ＤＣＣＴ研究中使用的高效液相色谱（HPLC）法。瑞典使用离子交换色谱法。日本采用日本糖尿病学会发明的HbA1c 定标法（共有6个定标仪）。 这些方法的共同缺陷是缺少初级和次级参照物。为了克服这一缺点，满足全球测定标准化的要求，达到欧盟对诊断性医疗仪器（IVD）的要求，国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC) 成立了专门的工作组，研究一个可供追溯的参照系统。 这套系统包括与内蛋白酶Glu-C共孵育、清除β链氮端的六肽、用质谱法或毛细管电泳法分离、定量糖基化以及非糖基化的六肽［3］。被检测物为葡萄糖与β链氮端形成稳定化合物的糖化血红蛋白分子。纯化的HbA1c和HbA0 由人类血液中提取，按照一定比例混合，形成初级参照系统(PRMS)中的参照物。PRMS［4］的值有用于次级参照物（SRMs;全血)。次级参照物由生产厂家用来定标其仪器。已经建立了一个实验室网络来完成和维护初级参照系统。 由于其灵敏性更高，采用IFCC新的标准化方法会使HbA1c的百分比稍有降低。对于某些患者可能会使血糖控制恶化［5］，IFCC建议使用SI数值（mmol/mol），可以减少IFCC单位与DCCT/NGSP
糖化血红蛋白
糖化血红蛋白 糖化血红蛋白（GHb）是血液葡萄糖通过非酶作用，经细胞膜与红细胞内血红蛋白-链颉氨酸结合形成的产物，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比。糖化血红蛋白的形成是不可逆的，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖的平均浓度有关，不受每天血浆葡萄糖浓度大小波动而变化，也不受运动或食物的影响，因此糖化血红蛋白是反映过去6~8周的平均血糖浓度，这可为评估血糖的控制情况提供可靠的实验室指标。通常所说的HbAlc为Hb的色谱分离中的一个成分，并非为一个特指物质，只有与葡萄糖相结合的Hb才被称为Glyco-sylatedHemoglobin （GHb），而现在临床上把HbAlc和GHb常视为同义词。 中文名糖化血红蛋白 本质血红蛋白与血糖结合的产 物 反应类型不可逆反应英文代号HbA1c 领域生物学 反应患者近8～12周的血糖控 制情况 目录
?1基本简介 ?2研究历史 ?3基本内容 ?4区别血糖 ?5检测方法 ?6操作过程 ?7监测意义 ?8控制标准 ?9结果解释 ?10注意事项 ?11临床意义 ?12标准检测 1基本简介 编辑 人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。糖化血红蛋白的英文代号为HbA1c。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。
糖化血红蛋白（GHb）是指血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白。当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。人体内红细胞的寿命一般为120天，在细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因此糖化血红蛋白水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关。是判定糖尿病长期控制的良好指标。 2研究历史 编辑 糖化血红蛋白于1958年被使用色谱法首次从其它类型的血红蛋白中分离出来，并于1968年被分类为一种糖蛋白。1969年，人们发现糖化血红蛋白在糖尿病患者中的数量增加。1975年研究者们得到了生成糖化血红蛋白的反应式。 自从1968年第一次描述了在糖尿病患者中发现的异常血红蛋白以来，关于葡萄糖及其他碳水化合物与血红蛋白结合的糖化产物的术语，已经变化几次。自从1986年，IUPAC-IUB（国际纯化学与应用化学联合会）已经推荐使用糖化血红蛋白这一名称，即非酶促
血红蛋白含量测定 发表时间：2011-04-27T15:02:00.683Z 来源：《中外健康文摘》2011年第2期供稿作者：马骅1 刘海虹2 [导读] 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。马骅1 刘海虹2 (1黑龙江省临床检验中心 150008)(2中国造血干细胞捐献者资料库黑龙江省管理中心 150008) 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)2-0049-02 【关键词】血红蛋白生理检测 血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。每个血红蛋白分子有4条多肽链，每条折叠的多肽链中，包裹1个亚铁血红素。亚铁血红素由原卟啉和1个铁原子组成。血红蛋白分子量为64 458D。 (一)血红蛋白生理 每分子血红蛋白中的4个亚铁血红素含有4个Fe2+原子，可结合4个氧分子。因此，64 458 g血红蛋白，含铁4×55.84，可结合4×22.14 L氧，即每克血红蛋白含铁3.47 mg(即铁占0.347％)，可结合氧1.38 ml。 血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸收光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症或做血红蛋白的定量测定。 (二)氰化高铁血红蛋白测定法 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。现就氰化高铁血红蛋白(HiCN)法介绍如下： 1.原理血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，新生或的高铁血红蛋白再与氰结合成稳定的棕红色的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，在规定的波长和液层厚度条件下，具有一定的吸光系数，根据吸光度，可求得血红蛋白浓度。 2.方法取HiCN转化液5ml，加末梢血20μl，混匀后静置5分钟，用光径1.0 cm，波长540 nm的分光光度计测定吸光度OD(以水或稀释液调“0”)，求得每升血液中血红蛋白含量。 (三)血红蛋白测定的质量控制 血红蛋白测定的质量控制除了所用量器必须事先校准外(允许误差，5 ml吸管为2.5％，血红蛋白吸管为1％)，还要进行下面几项质量控制。 1.多仪器的线性校正取50 g／L、100 g／L、150 g／L、200 g／L的HiCN标准参考液，在λ540 nm测出其A值(以HiCN转化液为空白)，标准状态下其值应分别为0.135、0.271、0.407、0.543，如测定值与理论值不符合。 日常工作中测得的A值×367.7×K=Hbg／L或者将一血红蛋白含量较高的样品，分别稀释成1／4、1／2、3／4和原液四个梯度进行线性校正，仪器在200 g／L范围内应有良好线性，重复性试验 CV应≤2％。 2.比色皿的光径和透光度标准比色皿的光径和透光度应符合下述标准：光径1 cm的比色皿误差应<0.005 cm。 3.质控物的应用用来校准仪器和控制实验准确度的制品称为参考品；用于控制实验精密度的制品称为质控品(物)。 4.质控要求手工操作OCV≤3％，RCV≤6％，EQA DI≤2。 (四)红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 通常情况下，单位容积血液中红细胞数量与血红蛋白量大致呈平行的相对应关系。健康成人的红细胞数与血红蛋白量的比例约为100：3，故两者测定的意义大致相同。但在某些情况下，特别是在红细胞内血红蛋白浓度发生改变的贫血时，两者的减少程度往往不一致。如小细胞低色素性贫血时，血红蛋白的降低程度较红细胞明显，大细胞性贫血时，红细胞数量减少程度比血红蛋白下降程度明显，因此同时对患者的红细胞和血红蛋白量进行比较，对诊断就更有意义。 1.红细胞及血红蛋白增多是指单位容积血液中红细胞数及血红蛋白量高于正常参考值高限。一般来讲，经多次检查，成年男性红细胞>6.0×1012／L，血红蛋白>170 g／L；成年女性红细胞>5.5×1012／L，血红蛋白>160 g／L时即认为红细胞血红蛋白增多。一般分为相对增多和绝对增多两类： (1)相对增多：指因血浆容量减少，造成红细胞数量相对增加。见于严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤、慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲状腺功能亢进症危象、糖尿病酮症酸中毒等疾病。 (2)绝对增多：临床上称为红细胞增多症，是一种由多种原因引起红细胞增多的症候群。按发病原因可分为继发性和原发性两类。 ①继发性红细胞增多症：是一种非造血系统疾病，发病的主要原因是因为血液中促红细胞生成素增多。 ②原发性红细胞增多症：即真性红细胞增多症，是一种原因未明的以红细胞增多为主的骨髓增殖性疾病，目前认为是多功能造血干细胞受累所致。其特点是红细胞持续性显著增多，甚至可达(7～10)×1012／L，血红蛋白180～240g/L，全身总血容量也增加，白细胞和血小板也有不同程度增多。本病属慢性病和良性增生，但具有潜在恶性趋向，部分可转变为白血病。 2.红细胞及血红蛋白减少指单位容积循环血液中红细胞数、血红蛋白量都低于正常参考值低限，通常称为贫血。临床上根据血红蛋白减低的程度将贫血分为4级：①轻度：血红蛋白<参考值低限至90g/L；②中度，90～60g/L；③重度：60～30g/L；④极重度：<30g/L。参考文献 [1]刘兰廷,黄如衡.高铁血红蛋白简易测定法[J];军事医学科学院院刊;1986年03期. [2]陈耀强,王婧,万家义,谢均.血红蛋白的分子结构及与其载氧功能相关的药物研究进展[J];绵阳师范学院学报;2004年05期. [3]沈高山,谷怀民,闫天秀,魏华江.亚硝酸钠和氧合血红蛋白反应的拉曼光谱[J];中国激光;2008年09期. [4]李清文,高宏,黄昊,王义明,冯军,罗国安.血红蛋白与NO分子间相互作用的电化学表征[J].高等学校化学学报;2001年08期.
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(3), 163-170 Published Online August 2017 in Hans. https://www.doczj.com/doc/d05461628.html,/journal/aac https://https://www.doczj.com/doc/d05461628.html,/10.12677/aac.2017.73022 Methods for Detection of Glycosylated Hemoglobin Zongli Huang, Zhirong Gan, Wan Lan, Jiating Hou, Xiaozhen Feng, Guocheng Han* College of Life and Environmental Sciences, Guilin University of Electronic Technology, Guilin Guangxi Received: Jul. 3rd, 2017; accepted: Jul. 28th, 2017; published: Jul. 31st, 2017 Abstract Diabetes mellitus is one of the highest morbidity in the world. At present, the detection of glycosy-lated hemoglobin has become the standard diagnostic method of diabetes monitoring. Hemoglo-bin plays an important role in human body, as a macromolecular protein which is mainly respon-sible for carrying oxygen. And the combination of high blood glucose in patients with diabetes will induce glucose and hemoglobin in HbA1c generation function, blood oxygen capacity, so the de-termination of glycosylated hemoglobin in blood shows great significance. There are more than 30 methods used for the determination of glycosylated hemoglobin in clinical laboratories. According to the principle of the reaction, which can be divided into two categories, the first category is based on the different charge of GHb and non GHb, including ion exchange chromatography, electropho-resis, isoelectric focusing, etc. The second category is based on the structural characteristics of GHb, including affinity chromatography, ion capture, immunization, etc. This article overviewed detection methods of glycosylated hemoglobin in clinical practice. Keywords Diabetes Mellitus, Standard Diagnostic, Hemoglobin, Glycosylated Hemoglobin, Detection 糖化血红蛋白的检测方法 黄宗利，甘志荣，兰万，侯嘉婷，冯小珍，韩国成* 桂林电子科技大学生命与环境科学学院，广西桂林 收稿日期：2017年7月3日；录用日期：2017年7月28日；发布日期：2017年7月31日 *通讯作者。
糖化血红蛋白应用 一、糖化血红蛋白基本知识 糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，它的英文代号为HbA1c。它最早于1958年通过色谱法首次从其它类型的血红蛋白中分离出来，并于1968年被分类为一种糖蛋白。1969年，人们发现糖化血红蛋白在糖尿病患者中的数量增加。1975年研究者们得到了生成糖化血红蛋白的反应式。 血糖和血红蛋白结合生成的糖化血红蛋白是不可逆反应，糖化血红蛋白与血糖浓度成正比，并且保持120天左右。这是由于人体内红细胞的寿命一般为120天，在红细胞死亡前，血液中HbAlc含量也会保持相对不变。因此HbAlc水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，可以稳定可靠地反映出检测前120天内的平均血糖水平。糖化血红蛋白和一般的血糖检测相比，几乎不受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素干扰。因此糖化血红蛋白的应用也越来越多。 二、糖化血红蛋白临床应用 糖化血红蛋白最重要的应用就是对糖尿病的辅助诊断。由于糖化血红蛋白可在体内保持120天左右，因此，它可以反映糖尿病人2-3个月的血糖变化，和一次血糖测定相比，数据比较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。所以HbA1c 是目前国际公认的糖尿病监测的“金标准”。一般建议糖尿病患者每年应至少接受两次HbA1c测定。 一般认为糖化血红蛋白检测水平 4%～6%：血糖控制正常。 6%～7%：血糖控制比较理想。 7%～8%：血糖控制一般。 8%～9%：控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构及运动，并在医生指导下调整治疗方案。 ＞9%：血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。 另外糖化血红蛋白可使内皮素活性增加，从而使血管收缩，使血样升高，最终引起心脑血管疾病，因此对于冠心病合并糖尿病患者中,，HbAlc检测可很好地评估病人的患病程度和血糖控制情况。 三、糖化血红蛋白检测方法及标准化问题 糖化血红蛋白目前常用的检测方法有：离子交换层析法、亲和层析法、免疫法、电泳法（等电点聚集法）、酶法等等。其中离子交换层析法应该是其中的金标准。而免疫法操作便捷、通量大、成本低，已成为国际的主流方法，据统计，目前全球有近70%的厂商使用的是免疫法。
如对您有帮助，请购买打赏，谢谢您！ 糖化血红蛋白检测的临床意义 血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 糖化血红蛋白是指血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白。 当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。人体内红细胞的寿命一般为120天，在细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因些糖化因红蛋白水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关。是判定糖尿病长期控制的良好指标。 糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为4-6%；许多研究发现糖尿病患者如查能将糖化血红蛋白水平降低至8%以下，糖尿病的并发症将大大降低，如果糖化血红蛋白>9%，说明患者待续性高血糖，会发生糖尿病性肾病,动脉硬化,白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。因此，有关专家建议,如果糖尿病患者血糖控制已达标准，并且血糖控制状态较为了平稳，每年至少应该接受2次糖化血红蛋白检测；对于那些需要改变资料方案，或者血糖控制状态不稳定的患者，及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每三个月进行一次糖化血红蛋白测定。 糖化血红蛋白的检测可以指导临床更好地制定糖尿病例患者的诊疗方案。如果某位患者每天仅在早餐前测定空腹血糖，发现这个值为130mg/ml,处于政党范围内;但再检测糖化血红蛋白却发现为11%，这意味着该患者在过去的3个月内平均血糖水平已接近270mg/ml，暗示其将来发生糖尿病并发症的危险性非常高,。尽管早餐前血糖结果尚满意，但是一天其它时间的血糖水平却严重超标，需要对患者饮食，运动及药物治疗作出重新评估，并作出相应调整,此外患者还需较现在更为频繁地测定血糖。 综上所述，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，糖尿病患者应定期检测糖化血红蛋白，并据此制定，修正相关治疗方案。 对于糖尿病患者来说，糖化血红蛋白（hba1c）是一个非常重要的检测指标。通过检测糖化血红蛋白可以了解糖尿病患者过去2～3个月内血糖控制的平均水平，它不受患者偶尔一次的血糖升高或降低的影响。英国糖尿病前瞻性研究证实，糖化血红蛋白每下降1%，糖尿病患者发生死亡的几率就会降低21%，发生心肌梗死的几率就会下降14%，发生中风的几率就会下降12%，发生微血管病变的几率就会下降37%，需要做白内障摘除手术的几率就会下降19%，因周围血管疾病而导致截肢或死亡的几率就会下降43%，发生心力衰竭的几率就会下降16%。 1、作为糖尿病患者长期血糖控制的评价指标；糖化血红蛋白（HbA1c）的测定目的在于消除波动的血糖对病情的控制观察的影响，因而对血糖波动较大的Ⅰ型糖尿病患者，测定糖化血红蛋白（HbA1c）是一个有价值的血糖控制指标。对于2型糖尿病患者，血糖和尿糖测定较简单和经济，且能较可靠地反映病情的控制，故测定糖化血红蛋白（HbA1c）的意义低于1型患者，但可作为辅助检查，用于判定口服药是否失效而须用胰岛素治疗。 2、有助于对糖尿病慢性并发症的认识；血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 3、用于糖尿病的诊断；健康人HbA1c为4.0%-7.7%(6.5±1.5%), 未控制的DM病人HbA1c 可高达10%-20%；随机检测HbA1c，若＜8%，多不考虑糖尿病。HbA1c＞9%，预报糖尿病的标准度约为78%，灵敏度为68%，特异性94%；HbA1c＞10%，则有80%以上为糖尿病，灵敏度43%，特异性99%，有效率86%。所以，目前并不主张单独用HbA1c来诊断糖尿病，原因是精确度不高，有时造成临床解释困难。
糖化血红蛋白定量检测标准操作规程（SOP） 1．项目名称、检验方法名称 ●糖化血红蛋白 ●微粒色谱法 2．方法学原理 本试剂盒包含多孔性滤膜装置，含试剂的试管和洗涤溶液。试剂能溶解红细胞并特异性沉淀血红蛋白因子，其中蓝色的硼酸缀合物能和糖化血红蛋白上的Cis-diols相结合。血液加入试剂中，红细胞立即溶解，使全部的血红蛋白都沉淀，硼酸缀合物就和糖化血红蛋白中的cis-diol结构相结合。血液和试剂混合后加入滤膜装置，所有沉淀的血红蛋白，不管是和缀合物结合的或未结合的都保留在滤膜的顶部。过量的显色缀合物就被洗涤液洗掉。通过NycoCard READERⅡ金标定量仪测定蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的强度，可以计算样品中的HbAlc的百分比。 3．试剂品牌、规格、内含物 ●挪威Nycocard ●规格及内含物 1)反应板（含滤膜）1×24块 2)试剂R1 1×24×0.2ml 含有锌的甘氨酰胺缓冲液，染料硼酸缀合物及表面活性剂。 3)洗涤液R2 1×2.0ml 吗啉缓冲液及表面活性剂。 4)未提供的材料 〃5μl吸管或毛细管，用于加样品 〃25μl吸管，用于加反应混合物及洗涤液 4．仪器品牌、型号 ●挪威Nycocard ●Reader II 5．操作步骤 1)分离血红蛋白和糖化血红蛋白加5μl全血于含R1的试管中，混匀，放置3分钟。 （注意：保证在混合后毛细管是完全空的。） 2)样品的使用再混匀，得到均匀的悬液，用吸管加25μl悬液到反应板中，吸管头离反应孔0.5cm，将吸管内的液体快速加入反应孔的中部。让悬液渗入滤膜，等候15－20秒。 （注意：避免气泡。） 3)洗涤加25μl洗涤液R2于反应板，让洗涤液完全渗入滤膜。等待10秒钟。（注意：避免气泡。） 4)结果测定在5分钟内用仪器NycoCard READER II读取结果。
影响糖化血红蛋白测定的因素及 实验室检测注意事项 （张秀明，中山大学附属中山市人民医院检验医学中心主任）糖化血红蛋白A1c（hemoglobin A1c，HbA1c）是评价糖尿病血糖控制水平的首选指标，并且与糖尿病慢性并发症的发生和发展密切相关。近年来，许多国家糖尿病学会和WHO推荐将其作为糖尿病的首选诊断标准，拓宽了HbA1c的应用范围。然而在某些特定的情况下，尤其是当病人有血红蛋白变异体存在时常导致HbA1c测定结果的极度异常或与血糖水平不一致，甚至误导临床；而且多种因素可致HbA1c出现假性升高或降低，不能准确反映糖尿病病人血糖控制状况，影响临床诊断和治疗。本文简要讨论糖化血红蛋白的生物化学特性，重点介绍糖化血红蛋白的测定方法、血红蛋白变异体对HbA1c测定的干扰，以及引起HbA1c 假性升高或降低的因素，并提出实验室检测注意事项。 一、HbA1c的生物化学： 成人血红蛋白（hemoglobin，Hb）通常由HbA（97％）、HbA2（2.5%）和HbF（0.5%）组成。在健康人，几乎94%的HbA是非糖化的血红蛋白即HbA0，而6%的是糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）即HbA1。HbA1又包括HbA1a、HbA1b 和HbA1c，前二者含量较少约占GHb的1%，HbA1c是主要的糖化血红蛋白，约占GHb的5%。HbA1a又由HbA1a1和HbA1a2组成，两者分别是血红蛋白β链N-末端与1，6-二磷酸果糖和6-磷酸葡萄糖发生糖基化作用的产物，HbA1b是血红蛋白β链N-末端与丙酮酸的结合物，HbA1c由葡萄糖与血红蛋白β链N-末端的缬氨酸残基缩合而成。 HbA1c的形成主要依赖血糖浓度和红细胞寿命。全部过程经历两个非酶促反应：第一步是快速反应期，葡萄糖粘附在血红蛋白N-末端的缬氨酸残基上，形成一个不稳定的醛亚胺中间产物即Schiffs碱；第二步是Schiffs碱经历漫长的葡糖胺（Amadori）重排反应形成稳定的酮胺化合物即HbA1c；或逆向转变成葡萄糖和血红蛋白。由此可以看出，HbA1c与血液中葡萄糖浓度密切相关，因红细胞的平均寿命是120d，理论上HbA1c可反映过去120d血糖的平均水平，但在红细胞120d寿命中，近期血糖水平对HbA1c的检测值贡献更大，标本采集前30d的影响达50%，而采前集第31～90d的影响为40%，而91～120d的影响仅为10%，因此，HbA1c检测主要反映过去2～3月的平均血糖水平。 红细胞寿命受基因学、血液学和相关疾病等因素的影响，当解释临床结果时必须考虑这些因素，特别是能改变红细胞生成和红细胞结构的因素，临床医生应知晓这些因素可能导致
糖化血红蛋白检测及临床意义 血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 糖化血红蛋白是指血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白。 当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。人体内红细胞的寿命一般为120天，在细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因此糖化因红蛋白水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关。是判定糖尿病长期控制的良好指标。 糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为4-6%；许多研究发现糖尿病患者如查能将糖化血红蛋白水平降低至8%以下，糖尿病的并发症将大大降低，如果糖化血红蛋白>9%，说明患者待续性高血糖，会发生糖尿病性肾病,动脉硬化,白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。因此，有关专家建议,如果糖尿病患者血糖控制已达标准，并且血糖控制状态较为平稳，每年至少应该接受2次糖化血红蛋白检测；对于那些需要改变资料方案，或者血糖控制状态不稳定的患者，及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每三个月进行一次糖化血红蛋白测定。 糖化血红蛋白的检测可以指导临床更好地制定糖尿病例患者的诊疗方案。如果某位患者每天仅在早餐前测定空腹血糖，发现这个值为130mg/ml,处于正常范围内;但再检测糖化血红蛋白却发现为11%，这意味着该患者在过去的3个月内平均血糖水平已接近270mg/ml，暗示其将来发生糖尿病并发症的危险性非常高,。尽管早餐前血糖结果尚满意，但是一天其它时间的血糖水平却严重超标，需要对患者饮食，运动及药物治疗作出重新评估，并作出相应调整,此外患者还需较现在更为频繁地测定血糖。 综上所述，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，糖尿病患者应定期检测糖化血红蛋白，并据此制定，修正相关治疗方案。 对于糖尿病患者来说，糖化血红蛋白（hba1c）是一个非常重要的检测指标。通过检测糖化血红蛋白可以了解糖尿病患者过去2～3个月内血糖控制的平均水平，它不受患者偶尔一次的血糖升高或降低的影响。英国糖尿病前瞻性研究证实，糖化血红蛋白每下降1%，糖尿病患者发生死亡的几率就会降低21%，发生心肌梗死的几率就会下降14%，发生中风的几率就会下降12%，发生微血管病变的几率就会下降37%，需要做白内障摘除手术的几率就会下降19%，因周围血管疾病而导致截肢或死亡的几率就会下降43%，发生心力衰竭的几率就会下降16%。 1、作为糖尿病患者长期血糖控制的评价指标；糖化血红蛋白（HbA1c）的测定目的在于消除波动的血糖对病情的控制观察的影响，因而对血糖波动较大的Ⅰ型糖尿病患者，测定糖化血红蛋白（HbA1c）是一个有价值的血糖控制指标。对于2型糖尿病患者，血糖和尿糖测定较简单和经济，且能较可靠地反映病情的控制，故测定糖化血红蛋白（HbA1c）的意义低于1型患者，但可作为辅助检查，用于判定口服药是否失效而须用胰岛素治疗。 2、有助于对糖尿病慢性并发症的认识；血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 3、用于糖尿病的诊断；健康人HbA1c为4.0%-7.7%(6.5±1.5%), 未控制的DM病人HbA1c 可高达10%-20%；随机检测HbA1c，若＜8%，多不考虑糖尿病。HbA1c＞9%，预报糖尿病的标准度约为78%，灵敏度为68%，特异性94%；HbA1c＞10%，则有80%以上为糖尿病，灵敏度43%，特异性99%，有效率86%。所以，目前并不主张单独用HbA1c来诊断糖尿病，原因是精