细菌的芽孢染色
姓名：高山山
学号：200900140024
同组者：董川郜思齐韩殿鹏李天任赫婷婷
一、实验目的
1. 掌握细菌的涂片技术。
2. 掌握细菌芽孢染色技术。
3. 初步学习无菌操作技术。
二、实验内容
1. 学习细菌芽孢染色的操作技术。
2. 初步学习无菌操作技术。
三、实验材料和用具
球形芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis)的斜面菌种。
吕氏美蓝染色液、5%孔雀绿水溶液、0.5%沙黄水溶液、香柏油、擦镜液、无菌水；
显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸等。
四、操作步骤
(1)取37℃培养18～24h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定
(2)于涂片上滴人3～5滴5%孔雀绿水溶液。
(3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。
(4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5)用0.5%番红水溶液复染l.5min，水洗。
(6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。
五、注意事项
1．载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄。
2. 涂片务求均匀，切忌过厚；在革兰氏染色过程中，不可使染液干涸；脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌；脱色不够，则会使阴性菌被染成阳性菌；老龄菌因体内核酸减少，会使阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。
3．供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜。
4．加热时使用载玻片架子及试管夹，以免烫伤。
5．使用染料的时候要尽量避免沾在衣物上。
6．加热载玻片过程中应保持薄片受热均匀，以防烧裂玻片。
7．染色必须待玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。
8．加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，解热并购则芽孢难以着色。
六﹑实验结果与分析
Ⅰ实验结果
在芽孢染色的过程中，前两次第一次因加热过快而导致染液沸腾，第二次因玻片受热不均而导致玻片断裂，第三次虽然没有发生上述事故，但是在观察时并没有观察到芽孢及细菌，说明芽孢和细菌没有染上色，最终宣告实验失败。
Ⅱ结果分析
第三次实验没有染色成功的原因可能如下：
（1）染色时间太短；
（2）冲洗过程中，冲洗水流的流速过快，冲洗时间过长而导致将玻片上细菌冲洗掉。
七．小结：
通过本次试验，掌握了细胞芽孢染色的步骤及其原理，但是在操作上仍需要继续加强练习。在芽孢染色的过程中，前两次第一次因加热过快而导致染液沸腾，第二次因玻片受热不均而导致玻片断裂，第三次虽然没有发生上述事故，但是在观察时并没有观察到芽孢及细菌，说明芽孢和细菌没有染上色。原因可能如下：（1）染色时间太短；（2）冲洗时间太长，将玻片上细菌冲洗干净。
经过本次试验，更加认识到自身操作上的不足，以后应该加强练习。另外，实验过程中要全面思考，注意一下可能导致实验失败的细节。
参考文献：
沈萍陈向东《微生物学实验（第四版）》高等教育出版社