实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl
（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L
□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl
（pH8.8）□配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L
□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL
500 mM EDTA（pH8.0）20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠
（pH5.2）□配制量100mL
□配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
□配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。
NaCl 8 g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27g
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵
□配制量100mL
□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS□组份浓度10％（W/V）SDS
□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。
10、2 N NaOH□组份浓度2N NaOH
□配制量100mL
□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
11、2.5 N HCl□组份浓度2.5 N HCl
□配制量100mL
□配置方法1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
2. 室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度5 M NaCl
□配制量1L
□配置方法1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL 的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度20％（W/V）Glucose
□配制量100mL
□配置方法1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用）□配制量1L
□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1M Tris-HCl（pH8.0）25mL 0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL
20％Glucose（1.11M） 45mL
dH2O 910mL
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II□组份浓度250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS 50mL
2N NaOH 50mL
2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
16、Solution III□组份浓度3M KOAc，5M CH3COOH
（质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5mL
2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500mL。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
17、0.5M EDTA□组份浓度0.5 M EDTA
(pH8.0) □配制量1L
□配置方法1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
18、1 M DTT□组份浓度1 M DTT
□配制量20mL
□配置方法1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
19、10mM ATP□组份浓度10mM ATP
□配制量20mL
□配置方法1. 称取121mg Na2ATP?3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
3. 适量分成小份，-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin□组份浓度100mg/ml Ampicillin
（100mg/ml）□配制量50mL
□配置方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
2、IPTG □组份浓度24mg/mL IPTG
（24mg/mL）□配制量50mL
配置方法1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
3、X- Gal□组份浓度20mg/mL X- Gal
（20mg/mL）□配制量50mL
□配置方法1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl
□配制量1L
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基□组份浓度 1％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W/V）NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量1L
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。
7. 4℃保存。
6、TB培养基□组份浓度 1.2％（W/V）Tryptone
2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
□配制量1L
□配置方法1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M
K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基□组份浓度1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量1L
□配置方法
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解
2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。
6. 均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
0.05％（W /V）NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
□配制量1L
□配置方法
1. 配制250mM KCl溶液。在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl 后，定容至100mL。
2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。
3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
NaCl 0.5g
4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至
7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。
9、SOC培养基□组份浓度 2％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
0.05％（W /V） NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
20mM 葡萄糖
□配制量100mL
□配置方法
1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。
3. 4℃保存。
10、2×YT培养基□组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 16g
Yeast Extract 10g
NaCl 5g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
11、Φb×broth培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4?7H2O
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
MgSO4?7H2O 5g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
12、NZCYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）Yeast Extract
0.1％（W/V） Casamino Acid
1％（W /V）NZ胺
0.5％（W /V）NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Yeast Extract 5g
Casamino Acid 1g
NZ胺10g
NaCl 5g
MgSO4?7H2O 2g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
13、NZYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W /V）NZ胺
0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O □配置方法NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基□组份浓度1％（W /V） NZ胺
0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O □配置方法NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的□配置方法1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。
配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L
Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L
Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L
Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L
2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。
3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度 1％（W
/V）Tryptone
平板培养基 0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W/V）NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
0.5％（W /V） IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5％（W /V） Agar
□配制量1L
□配置方法1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG （24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
8. 4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度
1.2％（W /V） Tryptone
平板培养基 2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（W/V）Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
0.024mg/mL IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5％（W /V） Agar
□配制量1L
□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M
K2HPO4）100mL。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal （20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
8. 4℃保存平板。
生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L
□配制量2L
□配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液□组份浓度0.5mol/L
□配制量2L
□配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
4、0.2％葡萄糖标准溶液□组份浓度0.2％
□配制量1L
□配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L
5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清□组份浓度250μg/mL
白蛋白标准液□配制量2L
□配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲
□配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，
加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。
2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中，
加入0.25g硫酸铜?5水，溶解。
3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。
4. 4℃保存，可用一周。
7、Folin试剂乙
□配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g，
钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，
浓盐酸25mL，充分混合。
2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年
注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L 略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。
8、DNS试剂
□配置方法1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。（3，5-二硝基水杨酸试剂）
2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。
3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。
9、5％蔗糖溶液□组份浓度5％
□配制量1L
□配置方法称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。10、0.1mol/L蔗糖溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量1L
□配置方法称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。
11、20％乙酸溶液□组份浓度20％
□配制量1.2L
□配置方法量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。
12、30％（W/V）Acrylamide
□组份浓度30％（W/V）Acrylamide 0.05％
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
Acrylamide 290g
BIS 10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无
毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
13、40％（W/V）Acrylamide
□组份浓度40％（W/V）Acrylamide 0.05％
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
Acrylamide 380g
BIS 20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
14、10％（W/V）过硫酸铵
□组份浓度10％（W/V）过硫酸铵
□配制量10mL
□配置方法1.称取1g过硫酸铵。
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
3.贮存于4℃。
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。
15、考马斯亮蓝R-250染色液
□组份浓度0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇，
10％（V/V）冰醋酸
□配制量 1L
□配置方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。
2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。
4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。
5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。
16、考马斯亮蓝染色脱色液
□组份浓度10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
醋酸100mL
乙醇50mL
dH2O 850mL
2.充分混合后使用。
17、凝胶固定液
□组份浓度50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量100L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
甲醇500mL
醋酸100mL
dH2O 400mL
2.均匀混合后室温保存。
18、凝胶处理液
□组份浓度50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
甲醇50mL
戊二醛10mL
dH2O 40mL
2. 均匀混合后室温保存。
19、凝胶染色液
□组份浓度0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水，(SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠
□配制量100L
□配置方法1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。
20％硝酸银2mL
浓氨水1mL
4％氢氧化钠1mL
dH2O 96mL 2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液
会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。
3.本染色液应现用现配，不宜保存。
20、显影液
□组份浓度0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。
柠檬酸50mg
甲醛0.2mL
2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。
3.室温保存。
21、45％乙醇溶液□组份浓度45％
□配制量1L
□配置方法量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。
22、5％的十二烷基硫酸钠溶液□组份浓度5％
（W/V）□配制量0.1L
配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。
23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂
配置方法取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。
24、1.6％乙醛溶液□组份浓度1.6％
□配制量0.1L
□配置方法取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。25、二苯胺试剂
□配置方法1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，
2.再加入8mL高氯酸混匀。
3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。
注意：配制完成后试剂应为无色。
26、15％三氯乙酸溶液□组份浓度15％
□配制量2L
□配置方法称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。
27、1％谷氨酸溶液□组份浓度1％
□配制量 0.5L
□配置方法1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
3. 最后用去离子水定容至0.5L。
28、1％丙酮酸溶液□组份浓度1％
□配制量0.5L
□配置方法1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
3. 最后用去离子水定容至0.5L。
29、0.1％的碳酸氢钾溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。
30、0.05％的碘乙酸溶液□组份浓度0.05％
□配制量0.25L
□配置方法称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。
31、Locke氏溶液□配制量2L
配置方法称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。
32、0.2mol/L的丁酸溶液□组份浓度0.2mol/L
□配制量1L
□配置方法1.量取18mL正丁酸试剂。
2.用1mol/L的氢氧化钠中和。
3.再用去离子水定容至1L。
33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量10L
□配置方法称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。
34、0.1mol/L的碘溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量1L
□配置方法1.称取碘12.7g和碘化钾25g。
2.用去离子水溶解并定容至1L。
3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。
35、10％氢氧化钠溶液□组份浓度10％
□配制量2L
□配置方法称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。
36、10％盐酸溶液□组份浓度10％
□配制量0.2L
□配置方法量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。37、0.1％标准丙氨酸溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。
38、0.1％标准谷氨酸溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。
39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液□组份浓度0.1％
□配制量 1L
□配置方法称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。
40、酚溶液
□配置方法在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。
41、0.5％淀粉溶液□组份浓度0.5％
□配制量 0.1L
□配置方法称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。42、对羟基联苯试剂
配置方法称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中，配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮
或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，
应摇匀后使用。
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液□组份浓度0.2mol/L
（pH 6.0）□配制量1L
□配置方法1. 称取磷酸氢二钠?12水8.82 g。
2. 称取磷酸二氢钠?2水27.34g。
3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。
注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。
2、洗脱液□组份浓度0.15mol/L
（含0.15mol/L氯□配制量10L
化钠的0.005mol/L□配置方法1.称取氯化钠87.66g。
pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的
磷酸缓冲液250mL溶解。
3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。
3、0.3mol/L磷酸缓冲液□组份浓度0.3mol/L
（pH7.8）□配制量0.5L
□配置方法1.准确称取磷酸氢二钠?12水49.150g。
2.磷酸二氢钠?2水2.000g。
3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。
注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。
4、0.2mol/L乙酸缓冲液□组份浓度0.2mol/L
（pH4.6）□配制量 2L
□配置方法1.准确称取乙酸钠?3水54.44g。
2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。
5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸□组份浓度0.2mol/L
缓冲液□配制量各1L
（pH 2.6、4.6、6.6）
□配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取
Na2HPO4?12水143.256g，用去离子水定容至2L。
2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸?1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。
3. pH2.6、
4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：
pH值A（mL）B（mL）
2.6 109.0 891.0
4.6 467.5 532.5
6.6 72
7.5 272.5
4. 按上表混匀后，4℃保存。
6、20×SSC 缓冲液□配制量 1L
（pH7.0）□配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。
2.准确称取88.2g柠檬酸钠?2水。
3.溶解于800mL去离子水中。
4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
5.加去离子水定容至1L。
注意：按实验需要可分装后高压灭菌。
10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。
7、0.15mol/L氯化钠-□组份浓度0.15mol/L
乙二胺四乙酸二钠□配制量1L
缓冲液□配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。
（pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
3. 溶于800mL去离子水中。
4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。
5.加去离子水定容至1L。
8、1/15mol/L的磷酸盐□组份浓度0.15mol/L
缓冲液□配制量1L
（pH7.6）
□配置方法
1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。
2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4? 2水11.876g （或磷酸氢二钠?12水2
3.894g）用去离子水溶解定容至1L。
3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。
9、5×Tris-GlycineBuffer□组份浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS
（SDS-PAGE电泳缓冲液）□配制量 1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tris 15.1g
Glycine 94g
SDS 5.0g
2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。
10、5×SDS-PAGE□组份浓度250mM Tris-HCl（pH6.8）
Loading Buffer 10％（W/V）SDS
0.5％（W/V）BPB
50％（V/V）甘油
5％（W/V）β-巯基乙醇
□配制量5mL
□配置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。
1M Tris-HCl 1.25mL
SDS 0.5g
BPB 25mg
甘油2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
常用缓冲溶液的配制方法 磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/ 升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g 柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g
乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL 甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 甘氨酸分子量=75.07; 0.2M 溶液含15.01克/升。 pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。 Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。 Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。 pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g
实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30
注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃；
常用缓冲液的配制（TBS，PBS） 科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅 这是各种缓冲液的配制方法 1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。 （BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB液（PH7.6） 先配制0.05MTB液： Tris 60.75g 1N HCL 约420ml 双蒸水至1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)
最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点： ?磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。 ?因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。 ?磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。 表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制 pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 2 7.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.0 注：根据Green(1933)的资料汇编。 用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值： pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃) 表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 1 7.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L） X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 ) 甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为28.40克/升。 - Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含35.01克/升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为21.01克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化 钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量， mol/L 溶液为29.41克/毫升。 ;
22 # 7．磷酸盐缓冲液 242 Na2HPO4·12H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 NaH2PO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：pKa1＝，pKa2＝ 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1～4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。 《 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 > 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。 硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。 ) 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2mol/L 溶液为28.40克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2mol/L 溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1mol/L 溶液为21.01克/升 20%盐酸溶液如何配置： 取浓盐酸（质量百分比浓度为36.5%）一个体积（如100毫升），加入到96.5毫升水中就可以了。36.5%*100*1.17=20%*mm=213.5(克)所需水的质量为;213.5-117=96.5克，也就是96.5毫升水。 PH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 1 9.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55
生物化学实验常用缓冲液的配制方法 1、0.2mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度0.2mol/L （pH 6.0）*配制量1L *配置方法 1. 称取磷酸氢二钠.12水8.82 g。 2. 称取磷酸二氢钠.2水27.34g。 3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。 2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L （含0.15mol/L 氯化钠的 0.005mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液）*配制量10L *配置方法 1.称取氯化钠87.66g。 2.用0.2mol/L pH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。 3.用去离子水稀释至10L。室温保存。 3、0.3mol/L 磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L （pH7.8）*配制量0.5L *配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。 2.磷酸二氢钠.2水2.000g。 3.用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释10 倍使用。 4、0.2mol/L 乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L （pH4.6）*配制量2L *配置方法 1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。 2.加入23mL冰乙酸，溶解。 3.用去离子水溶解并定容至2L。 4℃保存。 5、0.2mol/L 磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 2. 6、4.6、6.6）*组份浓度0.2mol/L *配制量各1L *配置方法 1.母液A（0.2mol/L 的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4.12 水143.256g，用去离子水定容至2L。 2.母液B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸.1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。 3. pH2.6、 4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： pH值A（mL）B（mL） 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 72 7.5 272.5 4.按上表混匀后，4℃保存。 6、20×SSC 缓冲液*配制量1L（pH7.0） *配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。 2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。 3.溶解于800mL去离子水中。 4.加入数滴10mol/L 氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
https://www.doczj.com/doc/dc586146.html, 常用试剂配制及显色方法 （一）通用显色剂 1．重铬酸钾——硫酸 一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。 喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物 （1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高 显色的灵敏度。 （2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。 4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。 5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。 6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。 溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。 7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。 8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。 临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。 10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。 溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。 11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II