微生物的培养与应用
一、单选题
1．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是
A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数
B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落
C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果
【答案】C
【解析】
试题分析：计数时一般选取菌落在30～300之间的平板，C错误。
考点：本题意在考查土壤中微生物的分离与计数的问题，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点的能力。
2．用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点有几项
①可以用相同的培养基
②都要使用接种环进行接种
③都需要在火焰旁边进行接种
④都可以用来计数活菌
A. 一项
B. 二项
C. 三项
D. 四项
【答案】B
【解析】①平板划线法或稀释涂布平板法都是在固体培养基上进行的，所以①描述正确；
②平板划线法接种用接种针，稀释涂布平板法接种要用涂布器，所以②描述错误；③不论是平板划线法还是稀释涂布平板法都需要进行无菌操作，在酒精灯火焰旁进行，所以③描述正确；④平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种；稀释涂布平板法可以用来计数活菌，所以④描述错误；综上所述，正确的是①③，选B。
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】微生物的纯化培养
3．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌( )
A. 接种环、吸管、培养基、接种室
B. 吸管、接种环、培养基、接种箱
C. 培养基、接种环、吸管、接种箱
D. 培养皿、吸管、培养基、双手
【答案】B
【解析】接种环属于接种用的金属工具，需要用灼烧灭菌；吸管在使用前保持干燥，需要用干热灭菌；培养基应该用高压蒸汽灭菌；接种室、接种箱需要用紫外线照射灭菌；双手可以用医用酒精消毒；综上所述，选B。
【点睛】总结常见灭菌方法的应用：高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌；干热灭菌适用于需要保持干燥的空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌；无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌；微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
4．下列有关微生物培养的说法，正确的是（）
A. 制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板
B. 分离能分解纤维素的细菌，要以纤维素作为培养基中唯一碳源
C. 配置培养不同微生物的培养基时都要将pH调至中性或微碱性
D. 在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌
【答案】B
【解析】制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，消毒知识杀死部分微生物，灭菌则是彻底消灭所有微生物，A错。只有能分解纤维素的细菌才能从培养基的纤维素获取碳源，其他微生物不能，B正确。培养霉菌的培养基要将pH调至酸性，细菌为中性或微碱性，C错。在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，如果PH升高，表示该细菌能够分解尿素，D错。
【考点定位】微生物的培养相关知识
5．关于灭菌和消毒的叙述，错误的是
A.接种环、接种针用灼烧的方法灭菌
B.灭菌是杀死物体内外所有微生物
C.消毒是杀死物体内外绝大多数的微生物
D.高压蒸汽灭菌的原理是使细菌DNA变性
【答案】D
【解析】
试题分析：微生物实验中一定要防止杂菌污染，接种环、接种针常用灼烧的方法灭菌，A正确；灭菌是为了杀死物体内外所有微生物，B正确；消毒是杀死物体内外绝大多数的有害微生物，C正确；高压蒸汽灭菌的原理是使细菌蛋白质和DNA变性，D错误。
考点：本题考查灭菌和消毒的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。
6．在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图且甲乙的对应位置不变。有关叙述，错误的是
A．配制培养基时需进行髙压蒸汽灭菌
B．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C．图示接种过程中接种环至少灼烧了5次
D．甲中a区域为划线的起始位置
【答案】D
【解析】
试题分析：为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行髙压蒸汽灭菌，A正确；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，B正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，从图示甲中4次划线接种就可推出，接种过程中接种环至少灼烧了5次，C正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，根据甲乙对应区域对比，甲中a区域为划线的结束位置，D错误。
考点：平板划线法
【名师点睛】平板划线法注意事项：
（1）接种环的灼烧
①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物
②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端
③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者
（2）灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种
（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连
（4）划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破
7．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是( )
①等培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板
②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞
③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰
④用左手的拇指和食指打开皿盖
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖
⑥等待平板冷却 5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上
A. ①②③④
B. ④⑤⑥
C. ③⑤
D. ①②④⑥
【答案】C
【解析】①培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，①错误；②不能将灭过菌的培养皿放在桌面上，因为桌面上可能有杂菌，②错误；③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温防止杂菌污染，③正确；④用右手的拇指和食指打开皿盖，④错误；⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，并通过酒精灯火焰，⑤正确；⑥等待平板冷却5～10分钟，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，⑥错误；综上所述，选C。
8．MS培养基与微生物的培养基相比，需要提供大量的（）
A.无机营养
B.蔗糖
C.甘氨酸和微生素
D.激素
【答案】A
【解析】
9．下列哪一种方法能将T2噬菌体的DNA标记上32P
A．用含32P标记的大肠杆菌培养
B．用含32P标记的植物细胞培养
C．用含32P标记的动物细胞培养
D．用含32P标记的固体培养基培养
【答案】A
【解析】
试题分析：T2噬菌体是一种寄生在大肠杆菌体内的病毒，在侵染细菌时，DNA进入到细菌的细胞中，而蛋白质外壳仍留在细菌细胞外；在噬菌体的DNA的指导下，利用细菌细胞中的物质来合成噬菌体的组成成分。因此用含32P标记的大肠杆菌培养T2噬菌体，才
能使T2噬菌体的DNA标记上32P，A项正确，B、C、D三项均错误。
考点：本题考查噬菌体侵染细菌的实验的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
10．在细菌的连续培养过程中，要以一定速度不断添加新的培养基，同时以同样速度放出老的培养基。右图表示培养基的稀释率（培养基的更新速率）与培养容器中营养物质浓度、细菌代时（细菌数目增加一倍所需的时间）、细菌密度的关系。下列相关叙述不正确的是
A．在稀释率很低的情况下，稀释率的增加会导致细菌密度增加
B．稀释率从a到b的变化过程中，细菌生长速度不断提高
C．稀释率超过b点后，营养物质浓度过高导致细菌死亡率增大，细菌密度降低
D．为持续高效地获得发酵产品，应将稀释率控制在b点附近
【答案】C
【解析】
试题分析：当稀释率大于b点的时候，营养物质的浓度还会进一步增加，代时也还会进一步缩小，但是由于培养液更新的速度太快，细菌很快就会随“老”的培养基被放出而在这个培养环境中存留的时间非常的短暂，最后导致细菌的密度较低。C错误。ABD叙述正确，本题选C。
考点：连续培养法
点评：本题考查了学生的曲线及试验分析能力，难度较大，解题的关键是会分析不同条件下曲线之间的关系。
11．获得纯净培养物的关键是（）
A. 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B. 接种纯种细菌
C. 适宜环境条件下培养
D. 防止外来杂菌的入侵
【答案】D
【解析】试题分析：防止杂菌入侵，是获得纯净培养物的关键。在实验室培养微生物，一方面要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面要保证其他微生物无法混入。
考点：微生物的培养
12．单细胞蛋白是指（）
A．单个植物细胞培养得到的高纯度蛋白质
B．单个动物细胞培养得到的高纯度蛋白质
C．单个细菌细胞分泌的蛋白质
D．通过发酵获得的大量微生物菌体
【答案】D
【解析】
试题分析：单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量微生物菌体，这是其定义。
考点：本题考查单细胞蛋白。
点评：基础题，考生熟悉单细胞蛋白定义可轻松作答。
13．某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了四个实验，实验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，下列有关说法正确的是
A．培养基灭菌时间长短是造成污染的主要原因
B．污染主要来源于组织培养所用的离体组织
C．灭菌后可以添加HCl或NaOH来调节培养基的pH
D．为调节培养温度可以在培养时加清水降温
【答案】B
【解析】
试题分析：随培养灭菌时间的变化，污染率在一定范围内波动，可见污染主要不是培养基灭菌时间短造成的，A错误；随离体组织灭菌时间变化，污染率曲线变化明显，说明污染主要来源于组织培养所用的离体组织，B正确；调节培养基的 pH 值要在灭菌前，C 错误；调节培养温度不可以在培养时加清水降温，D错误。
考点：本题主要考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。
14．需要在火焰旁操作的有
①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤ B．②③④⑤
C．③④⑤ D．②③④
【答案】D
【解析】
试题分析：②称取土壤、③土壤溶液稀释、④涂布平板等操作均需在火焰旁进行，以防止杂菌污染。因此，D项正确，A、B、C项错误。
考点：微生物的分离和培养
15．下列关于高中生物学实验的原理、方法或选材的叙述，正确的是
A. 制作果醋时，通氧不足或温度过低会使发酵受影响
B. 利用稀释涂布平板法对细菌计数时需借助于显微镜
C. 对提取出的胡萝卜素进行纸层析鉴定，在纸层析过程中，滤纸可放在普通烧杯中
D. 固定化酶和固定化细胞技术中，反应产物对固定化酶的活性没有影响
【答案】A
【解析】醋酸菌是嗜氧菌，也是嗜温菌，因此制作果醋时，通氧不足或温度过低会使发酵受影响，A正确；利用稀释涂布平板法对细菌计数时，通过肉眼即可数出菌落数，不需借助于显微镜，B错误；在纸层析过程中，滤纸放在装有层析液的密封的玻璃瓶中，C错误；某些反应产物可能与酶结合，致使酶的结构产生变化，从而改变酶的催化活性，因此固定化酶和固定化细胞技术中，反应产物对固定化酶的活性可能有影响
D错误。
16．用蔗糖、奶粉和经蛋白酶水解后的玉米胚芽液，通过乳酸菌发酵可生产新型酸奶，下列相关叙述错误的是( )
A．蔗糖消耗量与乳酸生成量呈正相关 B．酸奶出现明显气泡说明有杂菌污染C．应选择处于生长旺盛的乳酸菌接种 D．只有奶粉为乳酸发酵提供氮源
【答案】D
【解析】
试题分析：蔗糖作为乳酸菌的碳源被乳酸菌利用产生乳酸，蔗糖消耗量多，乳酸生成量多，A正确；乳酸菌是厌氧菌，呼吸的产物是乳酸，不产生二氧化碳，若酸奶出现气泡，说明有需氧菌存在，B正确；对数期的菌快速分裂，代谢旺盛，菌体形态和生理稳定，常用作生产用菌种和科研材料，C正确；经蛋白酶水解后的玉米胚芽液也可以为乳酸菌提供氮源，D错误。
考点：本题主要考查乳酸发酵的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间的内在联系的能力。
【答案】AD
【解析】
试题分析：酵母菌发酵形成果酒，属于真核细胞，具有核膜包围的细胞核，代谢类型是异养兼性厌氧型；A正确。醋酸菌发酵形成果醋，属于原核细胞，没有核膜包围的细胞核，代谢类型是异养需氧型；B错误。腐乳制备需要毛霉，属于真核细胞，代谢类型是异养需氧型；C错误。泡菜制备乳酸菌，属于原核细胞，代谢类型是异养厌氧型；D正确。
考点：果酒、果醋、腐乳和泡菜制备的菌种。
点评：本题比较简单，意在考查学生的识记和理解能力。
18．以下化学物质或者微生物的检测方法对应错误的是（）
A．酒精--溴麝香草酚蓝水溶液 B．大肠杆菌--伊红美蓝
C．尿素分解菌--酚红指示剂 D．纤维素分解菌--刚果红
【答案】A
【解析】
试题分析：A．酒精需要用酸性的重铬酸钾检测；溴麝香草酚蓝水溶液用于检测二氧化碳，A错误；B．当大肠杆菌分解乳糖产酸时，细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽，B正确；C．尿素分解菌可以利用脲酶将尿素分解成二氧化碳和氨，氨会使含酚红指示剂的培养基呈现红色，C正确；D．刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖没有这种反应。故可以用刚果红培养基将纤维素分解菌鉴别出来，D正确。
考点：探究酵母菌的呼吸方式；培养基对微生物的选择利用
二、非选择题
19．）【生物——生物技术实践】
2007年，我国利用秸秆生产车用燃料乙醇的关键技术获得了重大突破，目前已顺利进入工业化实验阶段。实验显示，每4吨秸秆（玉米、麦草秸秆等）可生产1吨燃料乙醇。秸秆的主要成分是纤维素，通过自主创新，我国已经掌握了纤维素的水解技术。请回答：（1）利用玉米秸秆生产乙醇首先选用_______________酶处理秸秆，使之转化为发酵所需的_________等物质，然后进行发酵，获得乙醇。
（2）在培养分离纤维素分解菌的过程中，接种微生物可以采用平板划线法和