电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂：
1.溴化乙锭（ethidium bromide, EB）最常用的核酸荧光染料，这种扁平分子可嵌入核
酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。激发荧光的能量来源于两个方面，一是核酸吸收波长为260nm的紫外线后能将能量传送给溴化乙锭，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这两方面的能量，最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。 EB-DNA 复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min，使非结合的EB褪色，这样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB，染色可在电泳过程中进行，能随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光易分解，应于4℃避光保存。
2.吖啶橙（acridine orange,AO）：吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外
线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg 和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。
3.银（Ag+）试剂： Ag+与核酸形成稳定复合物，然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒。AgNO3
等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链，双链DNA及 RNA都染成黑褐色。银染法的灵敏度比EB染色高200倍左右，比亚甲蓝染色高100~1000倍，在小于0.5mm厚的凝胶中，能检测出0.5ng的 RNA，其缺点是专一性不强，能与蛋白质，去污剂反应也产生褐色，而且对DNA的染色定量不准确。银与DNA稳定结合，对DNA有破坏作用，不适于DNA 片段回收的制备。
4.亚甲蓝（methylene blue）：可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。
染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5-8h（反复换水），带型肉眼可见，最低检测量为 250ng。
5.Gold View Ⅰ型核酸染色剂与溴化乙锭：Gold View是一种可代替溴化乙锭（EB）的新
型DNA燃料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA成红色荧光。通过小鼠皮下注射实验，尚未发现Gold View有致癌作用，而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Gold View代替EB不失为一种明智的选择。
实验操作步骤：100mL溶胶液在微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手）后加入10vL Gold View，轻轻摇匀后倒胶，待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。
注意事项：
1)胶厚度不要超过0.5cm,胶太厚会影响检测灵敏度
2)加入Gold View的琼脂样凝胶反复融化可能会对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不
明显。
3)Gold View在pH 3.6-7.0之间能更好的与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳
缓冲液。
4)由于Gold View产生绿色荧光，因此不适合于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像
系统保存图像。
5)含有Gold View的凝胶不适合于进行凝胶回收试验。要进行回收试验，请使用EB胶或
supper GreenⅠ型核酸染色剂。
6)Gold View特别适合于大片段DNA的检测（大于1kb的片段，检测灵敏度与EB相当）；
当DNA片段小于1kb时，检测灵敏度低于EB，特别是低于500bp的片段，Gold ViewⅠ型可能亮度很弱或者检测不到，如要检测小片段的DNA，请选用supper GreenⅠ型核酸染色剂，该染色剂适合检测所有片段大小的DNA片段。
7)虽然尚未发现Gold View有致癌作用，但由于Gold View溶液酸性较强，一次对皮肤，
眼睛会有一定的刺激，操作是应戴手套。
由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物，DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂，它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内，还可分为两大类：通透性核酸染料和非通透性核酸染料。生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。 分子生物学常用荧光核酸染料 荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色，以及定量PCR。 EB EB（溴化乙锭）本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。因其廉价且灵敏度高，一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。EB的使用非常简单方便，电泳结束后染色可获得最佳效果，也可以在制胶时加入进行前染。前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题。EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉，行为可怕”的家伙，一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶，但大多数人对EB还是“敬而远之”的，没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。偏偏对于搞分子生物学的人来说，跑胶就像吃饭一样平常，于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道，盼望EB的替代品早点出现在实验室。生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。 SYBR系列染料 说到EB的替代物，首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。自1993年SYBR核酸染料推出以来，就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎，成为明星产品之一。这一系列包括4种染料：SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性（SNP） 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，并且任何一种等位基因在群体中的频率不小于1%。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP是继RFLP 和STR后的第三代分子标记，具有数量多、分布广和遗传稳定等特点。它与许多疾病直接相关，是决定人类疾病易感性和药物反应差异的主要因素。因此，SNP分析对于群体遗传学、疾病相关基因的研究、新药研究、临床检验和分子诊断等领域有着重要作用。 荧光定量PCR中的SNP分析平台主要是基于等位基因特异性杂交原理，通过检测PCR过程中产生的荧光信号来区分等位基因，每检测一个SNP位点需要一对TaqMan探针(或分子信标)和一对位于检测位点的上下游引物。下面介绍一种新的基于荧光定量PCR 检测SNP位点的方法，它不需要设计特异性的TaqMan探针，只是通过溶解曲线的分析来区分等位基因，从而大大降低了检测成本。 该方法使用了两种不同的等位基因特异性正向引物，每个正向引物3′端的最后一个碱基对应于SNP位点的二等位基因，反向引物都一样，并使用荧光染料（SYBRGreenI）来检测PCR产物。纯合子基因组DNA只能被与其完全匹配的正向引物扩增，而杂合子基因组DNA能同时和两种正向引物结合扩增出两种PCR产物。 为了区分这两种扩增产物，我们在其中一个等位基因特异性引物的5′加一个20bp左右含GC重复序列。由于DNA的溶解温度主要与其片段长度和GC含量有关，经过修饰后的引物的长度和GC含量明显高于另一个等位基因特异引物，因此，使用这两种引物后的PCR扩增产物有着不同的Tm值。在PCR扩增结束后，运行一个溶解曲线程序，即让产物慢慢从60度升温到90度，从溶解曲线图上就可以分析出哪种等位基因参与了PCR扩增，由此也得到了相应的基因组的基因型。 补充一点： 1. 在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料掺入DNA 双链后荧光信号显著增强；当DNA变性时SYBR Green I染料释放出来，荧光急剧减少；随后在聚合延伸过程中引物退火并形成PCR产物，SYBR Green染料与双链产物结合，经检
棉织物的活性染料染色 姓名：商倪锋学号：08139126 班级:轻化工程081班 同组者：史千千 摘要：本实验采用活性艳蓝K--GR对全棉植物进行染色，染色后对活性染料的固色率和吸尽率的测定。 关键词： 活性染料，染色棉织物固色率吸尽率 Dyeing of cotton with active dyes Abstracts：in this paper，we use ReactivebrilliantblueK-GR dyeing cotton, after dyeing we use equipment to evaluate the fixation and exhaustion rate. The result show that reactive dyes on cotton fabric has not a higher exhaustion .fixation and low luster . . 前言： 棉织物是目前纺织市场应用最多的纤维之一，染棉织物可以用直接染料，活性染料进行染色，用直接染料染色后水洗牢度较差，很难达到客户的要求，同时在染色的过程中对染料的浪费也比较严重，吸尽率和固色率都比较低，本实验以活性艳蓝K--GR为染料对棉织物进行染色同时来测定活性染料的吸尽率和固色率。 一、实验目的 1、行选取染料及设计工艺，掌握活性染料对棉的染色过程，巩固所学的活性染料对棉纤维染色的基本理论知识，学会自己设计工艺处方和工艺条件，并进行染色试验。 2、会活性染料吸尽率和固色率的测定 二、实验原理 1、染色原理: 活性染料是一种含有能与纤维起反应形成共价键的活性基团的染料，常见的活性基团有二氯均三嗪型、乙烯砜型和一氯均三嗪型等三种，它们的反应能力各不相同，所以采用的工艺条件也不同，分别采用低温、中温和高温进行染色。 活性染料染色时通过纤维对染料的吸附、染料扩散进入纤维内部达到上染平衡，加入碱后，染料开始与纤维发生反应而固着，并重新达到一个平衡。染后进行皂煮，除去并未与纤维固着的染料或水解染料，提高色泽的鲜艳度。
环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed&GelGreen-真正的EB替代者 水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成环境污染。 G elRedTM和GelGreenTM是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的，极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。 目前，大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。例如，EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，且染色后背景荧光信号较高（图1）。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I，且毒性依然较高(图3）。GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的GelRed，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。但与SYBR Gold 不同，GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的GelGreen可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。GelGreen 无论是在预制凝 胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。实际上，GelRed 和 GelGreen ，特别是GelRed非常稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。同样重要的是，GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green 提高了安全性。独立的测试服务公司（Litron Laboratories, Inc.）进行的标准艾姆斯氏测试结果表明，在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下，GelGreen没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。见图3。相反，SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)），因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。
常见染料品种的染色机理 摘要:本文通过查阅资料、归纳总结，收集了几种常见的染料品种的性能，及其它们的染色机理.为染料化学的初学者提供了几种常见染料品种的染色机理. 关键字:酸性染料、中性染料、直接染料、活性染料、分散染料、染色机理 染料是一类有色的有机化合物,能使纺织品染成各种颜色.染料必须是能溶解或分散于水中,或者能用化学方法使之溶解,对纤维具有染着力,并具有使用要求的坚牢度.各种类别的染料,使丝织物染色或印花的原理各不相同,下面就介绍几种常见的染料品种及其染色机理. 1、酸性染料 酸性染料都能溶解于水，因为这类染料最初需要在酸性染浴中进行染色，所以叫酸性染料。酸性染料能染毛、丝、锦纶等纤维，色泽鲜艳，色谱齐全。色牢度较好。在使用过程中，按染色性能和用酸的强弱，分为强酸性染料和弱酸性染料。用于蚕丝织物染色的主要是弱酸性染料。 1.1、强酸性染料的染色机理 强酸性染料染色时，染液的PH值必定小于蛋白质纤维的等电点①，此时染料和纤维是借助离子键而结合的。因为当染液的PH值小于蛋白质纤维的等电点时，蛋白质纤维带弱的正电荷，为了维持电中性，必须相当数量的阴离子。随氢离子进入纤维内部若加入醋酸调节染液的PH值，那么首先进入纤维内部的应该是较染料阴离子小得多 ①等电点：对于二性离子而言，如果改变二性离子溶液的PH值，二性离子在电场中既不向阴极移动，也不向阳极移动，及总电荷等于零（及不带电荷）。那么此状态称为等电状态，此时的PH值即为二性离子的等电点。
的醋酸根离子，但由于醋酸根离子对纤维没有亲和力，所以最后吸附在蛋白质纤维上的还是染料阴离子，整个过程反应可以用如下表达式表示： HAc→H++Ac- +H N—R—COO-②+H+→+H3N—R—COOH 3 +H N—R—COOH+ Ac-→Ac-?+H3N—R—COOH 3 Ac-?+H3N—R—COOH+DSO3-③→DSO3-?+H3N—R—COOH+Ac- 1.2、弱酸性染料的染色机理 弱酸性染料和强酸性燃料的染色条件不同。弱酸性染料由于分子结构较强酸性染料复杂，染料分子量大，所以就提高了染料分子和纤维之间的范德华引力，也相应的增加了染料与纤维之间的氢键数目，所以不必借助大量的离子键来完成燃料的上染。染液的PH值大都控制在4.5—7之间（蚕丝纤维的等电点以上），虽然在弱酸或中性条件下，也有一部分染料是通过离子键与纤维结合的，但是由于染液的PH值在丝素的等电点附近，或超过丝素等电点，故染浴中没有足够的氢离子足以使纤维带正电荷，这时纤维呈中性或者是使纤维带负电荷，在它们与染液的结合过程中，范德华力和氢键起到了重要作用。 2、中性染料 中性染料又称为2 :1金属络合染料，外观都是粉末，均可溶于水，染料分子量大，上色后金属与纤维素分子结合，各项坚牢度都较好，日晒与气候牢度更为良好。 ②+H3N—R—COO-表示蛋白质纤维分子。 ③DSO3-表示染料色素阴离子。
第一章染色基本知识 1. 什么叫染色？它的目的和要求是什么？ 2. 物体为什么会有颜色？物体具有颜色的基本条件是什么？ 3. 什么叫染色牢度？常见的染色牢度有哪些？ 4. 什么叫浸染？什么叫轧染？各适用于何种织物的染色？ 第二章染色基本理论 TOP 1. 亲和力和直接性有何不同？ 2. 酸性染料染羊毛或聚酰胺纤维有无饱和值？用什么法其求出它？ 3. 何谓平衡吸附等温线？它分为哪几种类型？有何特点，方程式如何？ 4. 什么叫上染？上染过程分哪几个阶段？它和染色过程是否相同？ 5. 什么叫上染百分率？平衡上染百分率？它们在上染速率曲线上各有何特征？ 6. 染料在纤维中的扩散与染色效果有什么关系？影响扩散速率的因素有哪些？染料的扩散活 化能大小对扩散有什么影响？ 7. 试从染料的扩散速率、扩散活化能以及平衡吸附等方面说明温度对上染的影响。 8. 什么扩散边界层？染色时染液的流动对其有何影响？ 9. 染料在水溶液中有几种存在形式？染色时染料是以何种形式上染色？ 10. 浓度、温度及中性电解质对染料在溶液中的聚集有何影响？ 11. 在一般上染过程中，△H0和△S0为何是负值？根据△H0、△S0和T的关系式，讨论染色温 度T对平衡上染百分率的影响？ 12. 试说明某些酸性染料上染蛋白质纤维时，△S0为正值，即整个染色体系混乱度增加的原 因。 13. 什么叫稳态扩散、非稳态扩散？写出对应的Fick扩散方程式及其物理意义。 14. 什么叫无限染浴、有限染浴？它们在染色过程中各有何特点？ 15. 什么叫半染时间？在不同的染色条件下，其变化和哪些因素有关？ 16. 何谓孔道扩散模型和自由体积扩散模型？根据其基本理论简述纤维微结构的差异对染料扩 散速率的影响。 17. 什么叫初染率、移染性？染料的标准亲和力及染料的扩散性能对其有何影响？ 18. 为获得满意的染色效果，一般可通过哪些工艺条件来控制染料的上染速率。 19. 什么叫泳移、半匀染时间？ 第三章直接染料的染色 TOP 1. 直接染料染色时加入中性电解质的作用是什么？说明其作用原理。 2. 直接染料分为哪几个类型？各类有何特点？分别用什么方法来控制上染过程以纠正染色不 匀的现象。 3. 直接染料为何须进行后处理，常用的固色剂及其固色原理如何？
普知--关于遗传物质被碱性染料染色~ 碱性液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用1．2龙胆紫C笛HIN具有金属光泽的暗绿色粉末。能溶于水、三氯甲烷和醇；难溶于醚。加热至275℃分解。其1％一2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。 2染色剂的配制 2．1配方1醋酸一洋红染液取100mL45％冰醋酸，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗锈铁钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。 2．2配方2龙胆紫染液，取龙胆紫1～2g，溶解在100mL2％乙酸溶液中，直到溶液成深紫色为止(实验过程中视具体情况溶液可适当稀释)。保存在棕色瓶内。 3染料的作用机理 3．1碱性染料染色试剂的酸碱性与溶液的酸碱性不是一回事。染色试剂的酸碱性，其划分依据在于染料分子电离后的有色成分是阳离子还是阴离子，如果着色的基团是阳离子的为碱性染料，着色的基团是阴离子的为酸性染料 3_2染色机理龙胆紫能不能染DNA?还是只是把染色质上的蛋白质染色?或是DNA和蛋白质都被染色?上文提到，碱性染料的着色基团是阳离子，着色基团可以与细胞中的带负电荷部分牢固地结合。DNA是酸性物质，可电离出H，其余的部分就带上了负电荷。因此，带负电荷部分就能和碱性染料电离出的着色阳离子通过电荷问的引力作用牢固结合，而被染上颜色。有的染色作用随溶液中的pH值而变动。细胞的主要成分是蛋白质，它含有氨基和羧基，在酸性溶液中，当溶液的pH值小于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带正电荷，易被酸性染料染色；在碱性溶液中，当溶液的DH值大于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带负电荷。容易被碱性染料染色。所以，可以得出结论：碱性染料使染色体着色，使DNA和蛋白质都被染色。只不过这2种物质被染色的机理是不同的。 4碱性染料用酸配制的原因龙胆紫和洋红都溶于水和酒精。而做实验用的龙胆紫和洋红溶液。却都是用醋酸溶液配制的。这又是为什么呢?原因有2个：1)是为了染色物能方便地进入细胞内，又不会发生细胞膨胀。因为水和酒精这2种溶剂进入细胞的速度是很快的，容易引起细胞膨胀破裂。2)因为像洋红这种碱性染色剂溶于碱性溶液时，能使细胞质和细胞核都染色，只是细胞核较浓些，溶于酸性溶液(如醋酸)时，对染色质有高度的亲合力，对细胞质着色很浅。在煮沸的45％醋酸中加洋红使之饱和，再加入微量的铁离子，配制成的醋酸洋红溶液就能将核或染色体染成红色。如果用1％龙胆紫溶液对根尖进行染色，细胞核内都被
GoldViewⅠ型核酸染色剂使用说明 货号：G8140 规格：1.0ml（10000×） 保存：常温保存，有效期至少一年。 产品介绍： GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验，尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。 使用方法： 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入10ul GoldViewⅠ核酸染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。 注意事项： 1、胶厚度宜不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。 2、加入GoldViewⅠ的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。 3、GoldViewⅠ在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。 4、由于GoldViewⅠ产生绿色荧光，因此不适于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。 5、含有GoldViewⅠ的凝胶不适于进行凝胶回收实验。要进行回收实验，请使用EB或
GoldViewⅡ型。 6、GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。如果检测小片段的DNA,请选用GoldViewⅡ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。 7、虽然尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，但由于GoldViewⅠ溶液酸性较强，因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。 应用特点： 高效：GoldViewⅠ可以检测50ng级的DNA或RNA片段。其激发波长有多处，其中两处最强：230nm和490nm。安全：尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，使用该试剂不用接触EB（溴化乙锭）等有害物质。 相关试剂： D1200琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) D10106×DNA Lodding Buffer T106050×TAE缓冲液 E1027EB清除剂
一、实验目的 (1)自行选取染料及设计工艺，掌握活性染料对棉的染色过程，巩固所学的活性染料对棉纤维染色的基本理论知识，学会自己设计工艺处方和工艺条件，并进行染色试验。 (2)学会活性染料吸尽率和固色率的测定 二、实验原理 (1)染色原理:活性染料是一种含有能与纤维起反应形成共价键的活性基团的染料，常见的活性基团有二氯均三嗪型、乙烯砜型和一氯均三嗪型等三种，它们的反应能力各不相同，所以采用的工艺条件也不同，分别采用低温、中温和高温进行染色。 活性染料染色时通过纤维对染料的吸附、染料扩散进入纤维内部达到上染平衡，加入碱后，染料开始与纤维发生反应而固着，并重新达到一个平衡。染后进行皂煮，除去并未与纤维固着的染料或水解染料，提高色泽的鲜艳度。 活性染料浸染的上染曲线 由于活性染料在水溶液中要发生水解，从而影响活性染料的利用率，为了改善上述情况，现在开发出双活性基团甚至三活性基团的活性染料，可以使活性染料的固色率达到80%以上。 双活性基染料常见的有：含两个相同的一氯均三嗪型如国内KE型活性染料；含一个一氯均三嗪、一个为乙烯砜型的染料如国内M型活性染料。 (2) 固色原理: 活性染料与棉纤维的反应在碱性条件下，纤维素能形成纤维素负离子，能和活性染料发生亲核取代、加成反应，进而形成染料--纤维共价键，二氯均三嗪型较活泼，只需在较低温度下即可反应，而一氯均三嗪型则需在温度较高、碱性较强条件下才能反应。影响此反应的因素有很多。染料与纤维与水的反应为平行反应，因为水也是亲核试剂，反应条件机理相同。染料一经水解即失去与纤维的反应能力，固色率大为降低。从反应动力学研究得到，固着反应比水解反应快40倍左右，染色时PH一般为10~11为宜，X型可用碱性较弱的小苏打，对K型，则采用Na2CO3、Na3po4，甚至NaOH。染色温度具体根据不同染料性能而定。促染用元明粉，加入要掌握一多二早，分批加入的原则。浴比尽可能小些，以提高固色率。水解染料的存在，对纤维有一定的亲和力，但不够大，它会染着于纤维上，皂煮时不能完全煮下来，有时还会污染到其它纤维，特别是KN型染料耐碱牢度不高，易造成污染现象。水解染料的存在也是湿摩牢度较低的重要原因 ( 3 ) 加盐促染原理: 三、给定实验材料、药品及仪器 材料：丝光漂白棉布（各2g、8块） 药品：活性艳蓝K--GR，无水硫酸钠、碳酸钠、净洗剂EL-C
DNAGREEN核酸染料使用说明 货号：G7140 规格：0.5ml(10000×) 保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。 注意：DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请按照说明书操作。 产品简介： 目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I（属于花氰类染料）虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率下降。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料，其特点如下： 1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。 2.灵敏。检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。 3.稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。 4.无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。 5.使用方法多样。既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。 6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。 7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。 8.可用于RNA染色(也呈绿色)。 9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察（需要将胶放在黑色背景下）。由于避
免了UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。 使用方法: 电泳中染色： 本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。 1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN，混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料（如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰）。在100mL琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10uL，否则背景增强。注意：一定要保证琼脂糖彻底熔化，尤其是在第一次熔化胶的时候，否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。 2.将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意：一定要使用不含SDS等去污剂的上样液，否则SDS会跟染料结合，极大地降低灵敏度。 3.上样后电泳，电泳参数同常规的电泳。 4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意：不要使用波长为260nm或360nm的UV，否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高，还可以直接在日光下直接观察（需要将胶放在黑色背景下），避免UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。 5.用配置了520-550nm滤光片（一般呈黄色或深黄色）的相机拍照。注意：不要使用与EB兼容的红色滤光片（它能阻挡520-550nm的光）。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。 6.后续Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。 电泳后染色： 本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的 染色处理，染料用量较大，不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
高中生物课本中（必修+选修）中的所有染色剂？ 1、斐林试剂 配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml 2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml 临用时将甲、乙液等量混合 作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。 还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。 2、班氏尿糖定性试剂 配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。 3、双缩脲试剂 配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml B液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml 使用时，先加A液，后加B液 作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。 4、苏丹Ⅲ 配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中 作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。 5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。 作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。 6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液） 配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成 作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。 7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液 作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。 8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液 配制：将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成 作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察； （2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。
核酸染色剂 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂： 1.（ethidium?bromide,?EB）最常用的核酸，这种扁平分子可嵌入核 酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。激发荧光的能量来源于两个方面，一是核酸吸收波长为260nm的紫外线后能将能量传送给，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这两方面的能量，最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L?MgCl2中5min，使非结合的EB褪色，这样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。 在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB，染色可在电泳过程中进行，能随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光易分解，应于4℃避光保存。 2.（acridine?orange,AO）：吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在 254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L（pH7.0）中避光浸
GelRed核酸染料（10,000×水溶液） GelRed核酸染料特点 ● 无毒性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。 ● 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。 ● 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳 定，耐光性强。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟 且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。 ● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙 烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。 ●无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的 普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。 GelRed使用方法简介 1．胶染法（用法同EB）（推荐方法） （1）制胶时加入GelRed核酸染料。每50mL胶中加入5μL GelRed 核酸染料。 （2）按照常规方法进行电泳即可。 ◆注：此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。当染料稀释 在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热，从而与通常制备预制凝胶的方法相同。含有染料的预制凝胶可以成批制备，并可以长期保存直到使用。 2．泡染法 （1）按照常规方法进行电泳。 （2）用0.1M的NaCl水溶液按照3300﹕1的比例稀释GelRed浓缩液，混匀，制成3×GelRed染色溶液。（例如：在45mL水溶液中加入5mL 1M的NaCl溶液及15μL10,000× GelRed水溶液。） （3）将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色30分钟左右，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 ◆注：用泡染法染色时，染料用量较多。单次制备的染色溶液可重复使用3次左右。
1斐林试剂检测可溶性还原糖 原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀 注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现用现配,条件需要水浴加热. 应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断,如糖尿病、肾炎. 2 苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪 原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色 注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察. 应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪. 3 双缩脲试剂检测蛋白质 原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色 注意：双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温（不需要加热）. 应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定. 4 碘液检测淀粉 原理：淀粉+碘液→蓝色 注意：这里的碘是单质碘,而不是离子碘. 应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉 5 DNA的染色与鉴定 染色原理：DNA+甲基绿→绿色 应用：可以显示DNA在细胞中的分布. 鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色
应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂. 6 吡罗红使RNA呈现红色 原理：RNA+吡罗红→红色 应用：可以显示RNA在细胞中的分布. 注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色. 7 台盼蓝使死细胞染成蓝色 原理：正常的活细胞,细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色. 应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性. 8 线粒体的染色 原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色. 应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在. 9 酒精的检测 原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色. 应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶. 10 CO2的检测 原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄.
基因分子生物学实验——EB的染色原理 溴化乙锭（EtBr，EB）为芳香族荧光化合物，是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。是一种核酸染料，常在琼脂糖凝胶电泳中用于核酸染色；是一种强的诱变剂，可能也是一种致癌物或致畸剂。 EB与核酸的作用原理： 这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间，在紫外线激发下，未与核酸结合的溴化乙锭可被激发出橙红色萤光。在与DNA或双股RNA结合时，萤光强度会增强20倍，使得核酸电泳后的胶片可以辨识核酸的相对位置。在核酸分子中，EB分子插入到两层碱基对之间，发出红色荧光。在凝胶中加入终浓度为0.5μg/ml的EB，可以在电泳过程中随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。 问题讨论 1、溴化乙锭EB在琼脂糖凝胶电泳中先加与后加的区别？ 先加EB，染色与电泳同时进行： a. 加在胶里总体积小，所以比较方便节省； b. 会导致胶的整体背景稍微高些，比较暗； c. 长时间、长距离的电泳先加EB的话，信号强度会相应下降； d. 不宜用于核酸分子大小的确定和定量。 原因分析： EB带正电荷，中和核酸分子的负电荷，同时由于的他的嵌入增加了核酸分子的刚性，使迁移速率减慢，故不宜用于凝胶电泳测定核酸分子的大小。另外，由于在凝胶中，游离的EB分子向负极泳动，会使样品中前后各带染色不均匀，影响定量。 后加EB，染色在电泳完成后： a．可以减少污染，无背景色，图较漂亮； b. 相对浪费时间。 2、EB废物的如何处理？ EB废物的处理如下： (1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理： a. 将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml； b. 加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的25
红色荧光核酸染料使用说明 货号：E1020 规格：5ml（10mg/ml） 保存：室温避光储存，有效期至少1年。 产品说明： 红色荧光核酸染料是一种高度灵敏的荧光染色剂，常用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳后核酸染色。该染料与DNA结合后在紫外光透射仪激发下放射出橙红色荧光，可用Polaroid 底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。结合DNA染料的复合物荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的红色荧光核酸染料（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的DNA条带。 使用方法： 1、胶染：将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入5-10ul染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫光灯下观察拍照（注：由于在该染料存在的情况下，线状DNA 的电泳迁移率约降低15%）。 2、泡染：琼脂糖凝胶电泳后，将胶浸没在含有染料（0.5ug/ml）的电泳缓冲液或去离子水中，室温下染色15-45min（取决于凝胶厚度）。脱色时用去离子水或者1mM的MgSO4溶液室温浸泡约10-30min可降低背景荧光（可选）。 注意事项： 1，本品为强烈的诱变剂，使用时请注意安全。 2，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关试剂：
T10505×TBE缓冲液 T106050×TAE缓冲液 D10106×DNA Lodding Buffe M1060D2000DNA Ladder G8140GoldView I型核酸染色剂(10000×) G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) SY1020SYBR Green I(10000×) SY1040SYBR Green‖(10000×)
塑料着色原理 塑料着色就是利用加入着色剂对日光的减色混合而使制品着色。亦即通过改变光的吸收和反射而获得不同的颜色，如吸收所有的光时呈现黑色，如果只吸收一部分光(某一波长的光)，并且散射光的数量很小，那么塑料变成有色透明，而形成的颜色取决于反射光的波长；若全部反射则塑料呈白色。如未被吸收的光全部反射，那么塑料则变成“有色不透明”的，其颜色也取决于未被吸收光的波长。反射光表现为实色，散射光则为明色。通常将纯度较好，明度较大的红、黄、蓝三色称为原色，三原色中的任意两种相互调合，可以得到的各种不同颜色称为间色(二次色)，一种原色一种间色调合而成的颜色为再问色(三次色)，每个间色把合成它的二原色以外的原色称为干扰色，在配色时应防止干扰色的引入，否则使原有色光变得暗钝，影响颜色的明亮度。 用于塑料的着色物质有染料或颜料，染料一般能均匀溶于水中或特殊溶液中，或借助于适当化学药品而成可溶物，以达到着色的目的，它不单能使塑料表面着色，而且内部亦被浸入，颜料需调和于展色剂(油或树脂)中制成油墨、油漆等，涂于制品表面使其着色，也可将极细微的颗粒或膏状物等混于塑料内进行内外着色。 一、塑料的染色原理 塑料的染色与塑料的原液着色有很大区别，后者产生的颜色十分单调，不宜小批量多品种加工，尤其是对日用品如钮扣、发夹、玩具、装饰挂件以及机械配件等。塑料染色对色泽要求敏感的加工件无疑十分有用，并且大部分塑料都有染色官能团，可以用相应染料过仃染色而且其染色实际上是一种表面着色。 聚酯塑料的染色是靠温度或载体使结构紧密的聚酯链段出现“空隙”，让疏水性分散染料吸附-扩散-固着在被染基质内部，这种被染基质(固体)吸收的染料(固体)完全是处于溶解状态的。 聚酰胺用分散染料染色机理是依靠末端氨基和酰氨基对染料产生氢键和范德华力结合，上染率不受聚酰胺末端氨基的限制，加之染色时染浴的pH值适应范围较广，所以分散染料对聚酰胺有良好的覆盖性。再从大分子末端含有氨基的羧基看，还有类似羊毛的染色性质，可应用阴离子染料(酸性、直接、活性等染
GoldView II核酸染料说明书 货号：G8142 规格：0.5ml(5000×) 保存：-20℃，短期4℃保存。 注意：本产品属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。第一次使用前请融化后离心再开封。产品简介： GoldView II是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB强5-10倍，使用方法与之完全相同。GoldView II 与核酸结合后，最大吸收峰为497nm，另外，其在254nm处也有一强吸收峰，发射波长为520nm，在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。 通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。 本产品为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。 使用方法: 胶染： 由于GoldView II敏感度比EB高数倍，使用时，请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释，上样1-10μl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。对于待检测样品，通常仅需1-2μl即可。如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。凝胶回收请选择点染方法。 1.将50ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。 2.冷却至不烫手时加入10-15μl GoldView II(不能少于10ul)，轻轻摇匀，避免产生气泡。 第1页，共2页
染色得基本原理 就是利用染料在组织切片上给与颜色,使其与组织或细胞内得某种成分发生作用,经过透明后通过光谱吸收与折射,使其各种微细结构能显现不同颜色,这样在显微镜下就可显示出组织细胞得各种成分。染色剂与组织细胞相结合而使组织细胞着色得过程与物理与化学作用两者都有关系。 一、染色得物理现象 1、溶解性: 这种染色最典型得例子就就是脂肪染色,苏丹类染色剂为脂溶性染料,它可以被脂质溶解,使脂质着色,就就是利用染色剂在脂质中得溶解度大于在酒精等溶剂中得溶解度这一特性。因此,当苏丹类得酒精溶液与组织细胞中得脂质接触时,染色剂就从溶液中“转移”到脂质中去,而使脂质着色。 2、吸附作用: 较大物体有从周围介质吸附小颗粒到自身得特性。有些染色则就是染色剂分子通过渗透与毛细管作用而被吸收或沉淀到组织,细胞得小孔中去而着色得。例如活性炭吸附各种分子,甚至胶质与微生物等较大得颗粒一样。 二、染色得化学反应 酸性染料与碱性染料得染色作用常就是对立得,而不就是一致得。任何染料均可电离,离解出阳离子或阴离子。酸性染料中得酸性部分有染色作用得就是阴离子;碱性染料中得碱性部分有染色作用得就是阳离子,细胞内同时含有酸性与碱性物质,酸性物质与碱性染料中得阳离子相结合,如细胞核(含有核酸)黏液与软骨基质呈酸性部分被盐基性染料苏木素所染、反之碱性物质与酸性染料得阴离子相结合,如细胞浆及其内部得某些颗粒物质被酸性染料伊红所染。染料得颜色基不就是在阳离子,就就是在阴离子上,这些离子将因组织反应不同而发生化学结合,如显示含铁血黄素得普鲁士兰反应就是最典型得例子。但就是,大量染色得化学反应并不像铁反应那样明确,实际情况远为复杂。这就是因为蛋白质分子就是个分子量自几万至几百万得大分子,每个分子中含有很多阳离子与阴离子基因,在等电点时能形成游离得两性离子,如: P为蛋白质,就是具有两性得胶体物质。它呈酸性或碱性与环境得PH值有关,如溶液得PH值小于该蛋白质得等电点则此溶液对该种蛋白质即为酸性,蛋白质就带正电,将被酸性染色剂所着色。反之,溶液得PH值大于蛋白质得等电点,则此溶液对该蛋白质来说即为碱性,蛋白质带负电,将被带有阳离子得染色剂所浸染。 在日常工作中,长久固定于甲醛得组织切片,往往染色不良,尤其就是核得着色欠佳。这就是因为固定液甲醛氧化生成甲酸,组织亦随之变为酸性,所以不易被苏木素所着色,补救得办法就是,先用流水冲洗组织块,然后用碱性溶液如稀氨酒精等处理使之中与,恢复正常PH值后再进行染色。 大多数染色得原理至今仍未搞清楚。有些可能就是物理得,有些可能就是化学得,有些