人类组织正常及永生化细胞 英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞 动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞
收稿日期:2009-07-13 基金项目:973计划前期预研专项(2008CB517304)作者简介:陈志刚(1984-),男,湖北仙桃人,浙江大学医学院附属第二医院硕士生,从事肿瘤干细胞相关研究. 结肠癌干细胞研究进展 陈志刚 综述,黄 建 审校 (浙江大学医学院附属第二医院肿瘤外科,浙江杭州310009) 摘要:肿瘤干细胞(cancer ste m ce l, l CSC )是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的肿瘤细胞,许多研究已证实在包括结肠癌在内的多种实体瘤中存在肿瘤干细胞。虽然CSC 在肿瘤细胞总数中只占很小比例,但是在肿瘤的起源、发展、转移以及复发等方面均有重要的作用,本文为此就其相关进展作一综述。 关键词:结肠肿瘤;肿瘤干细胞;肿瘤标记,生物学;信号传导;肿瘤转移;复发 中图分类号:R 735.3+5 文献标志码:A 文章编号:1001-1692(2010)01-0103-03 自1997年Bonnet 等 [1] 首次通过细胞表面标志CD34+ CD38- 分离出人急性粒细胞白血病干细胞来,人们又相继在乳腺癌 [2] 、脑瘤 [3] 、结肠癌 [4-5] 等实体肿瘤中证实了肿瘤干细胞(cancer ste m cel,l CSC )的存在。CSC 是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,虽然在肿瘤细胞总数中只占很小比例,但与肿瘤复发、转移和治疗失败等密切相关。由于CSC 多处于休眠状态,且存在ABCG2等天然的耐药机制,所以传统抗癌药物难有效杀灭。 结肠癌是西方国家常见的肿瘤,占肿瘤相关死亡的第二位。我国结肠癌发病率以每年4.2%的速度递增,排第三或第四位。如能从研究CSC 角度深入分析结肠癌的临床生物学特性,则为结肠肿瘤的防治提供新线索和思路,为此本文就结肠癌干细胞相关进展作一综述。1 结肠癌发生、发展的干细胞起源 结肠癌干细胞和正常干细胞都具有自我更新能力和多向分化潜能,是否表示结肠癌干细胞起源于正常干细胞?事实上多数结肠上皮细胞存活时间很短,而结肠癌发生、发展则需要累积数年的突变,结肠干细胞寿命较长,其突变可导致肠上皮组织结构功能异常和内环境稳定失调,进而促使肿瘤的发生。 关于正常干细胞发展为结肠癌的潜能,Odoux 等[6] 提供了证据。最近Ver m eulen 等 [7] 又提出结肠癌是 单细胞起源,他们证实起源于单个干细胞克隆球的结肠癌具有相似的异质性。 此外,Bo m an 等 [8] 证明结肠癌干细胞主要通过 对称分裂来进行过度扩增,这种扩增在肿瘤起始与进展中均有着重要作用。为了研究结肠癌干细胞在肿瘤转移中的作用,B rabletz 等 [9] 提出了/迁移的 CSC 0的概念。他们认为静止的CSC 可经过上皮-间质(epithe li a -l m esenchy m al transition ,E MT )转化为 /迁移的CSC 0,从而可以导致肿瘤播散。一旦肿瘤干细胞到达新的部位,可通过间质-上皮转化形成转移灶。但是Odoux 等 [6] 认为并不是每一个CSC 都 能转移,他们提出了一种随机模型,即每一个干细胞获得随机突变,但只有那些适于生存、增殖、侵袭的CSC 才能转移。 2 结肠癌干细胞相关信号通路 E MT 过程涉及多个信号通路,包括W n t 信号途径、PI3K /AKT 途径、受体酪氨酸激酶Ras -MAPK 途径等 [11] ,同时这些通路还与干细胞的增殖和分化相 关。W nt 信号通路(APC /B -caten i n /Tcf4)异常是结肠癌进展过程中最关键的事件之一[10] 。Bo m an 等 [8] 认为:APC 基因突变后,W nt 蛋白与细胞膜表 面的受体结合,APC 蛋白不能与Ax in 形成支架蛋白,导致B -ca ten i n 在胞内大量累积并进入核内,作为转录因子TCF -4的辅助因子,共同激活Survivi n 基因。Survivin 具有抑制细胞凋亡,维护细胞活性和调节细胞有丝分裂的功能。Survivin 高表达导致增殖性细胞数量增多和细胞S 期的调控机制失控,破坏细胞增殖分化之间的平衡,CSC 也因之过度增殖,进而起始结肠癌。且已有证据表明Survi v in 仅在腺泡基底部有表达 [12] 。Chu 等 [13] 也证实结肠癌中 CD44high 细胞核B -caten i n 高表达。此外还有研究 表明,No tch 信号通路与W nt 信号通路有交通,对维持细胞的未分化和增殖状态有重要作用 [14] 。 S MAD /B MP 信号通路可抑制干细胞生长,可与W nt # 103#实用肿瘤杂志2010年 第25卷 第1期
结肠癌 1、恶性息肉 定义：息肉中有癌细胞浸润穿透粘膜肌层到达粘膜下层（pT1），pTis不属于恶性息肉。 预后良好组织学特征：1或2级分化，无血管、淋巴管浸润，切缘阴性。 如果带蒂或广基息肉，镜下切除后标本破碎或切缘未能评估或具有预后不良的组织学特征，建议行结肠切除和区域淋巴清扫。 2、AJCC建议至少需检出12枚淋巴结才能准确判断为II期结肠癌。可切除的结肠癌首选的手术方式是结肠切除加区域淋巴结整块清扫。 3、KRAS第2外显子的12（最常见）和13密码子突变者不能从EGFR抗体靶向治疗中获 益，即野生型使用靶向治疗。KRAS突变为结直肠癌发生中的早期事件，故其突变状态在原发灶与转移灶表现出高度的一致性。所有诊断为IV期的转移性患者均应行肿瘤组织基因测序。 4、如KARS无突变，检测BRAF（PCR扩增或直接DNA测序分析）。BRAF V600E突变者预后差，野生型OS20+个月，突变者10+个月，不能从EGFR抗体靶向治疗中获益。 5、可切除原发灶与肝、肺转移灶应行根治性切除，可同期或分期切除，可分次切除。 6、FOLFOX或CapeOX治疗3个月后或出现严重的神经毒性（＞3度）时应考虑停用OXA，并用5-FU类+贝伐维持至肿瘤进展，可再用OXA。 7、初始治疗使用西妥昔单抗或帕尼单抗治疗，二线不应再用；两药一种治疗失败后不建议使用另一种。 8、西妥昔单抗适于与含伊立替康的方案联用，若不能耐受伊立替康可单药西妥昔单抗。 9、II期中高危及III期需行辅化，除非临床试验贝伐、C225、帕尼单抗或伊立替康不应用。 10、术后辅化：身体允许情况下越早越好，超过3个月不再行放化疗 高危II期（T3-4N0M0）及III期（T1-4N1-2M0）应予术后辅化。 高危因素：具有不良预后因素包括T4、组织学分化差（3或4级）、血管淋巴管浸润、肠梗阻、局部穿孔的T3、肿瘤太近切缘、切缘不可评价或切缘阳性、标本检出淋巴结过少（少于12枚）。 II期高危可选5-Fu/LV、卡培他滨、5-Fu/LV/OXA 如考虑5-Fu单药辅化的II期患者应行MMR检测（DNA错配修复蛋白，mismatch repair），具有MSI-H（微卫星不稳定性，microsatellite instability）的II期患者预后好，不会从辅化中获益。在进行MSI检测的同时检测18qLOH（18q杂合性缺失）为不良预后因素。 建议在所有50岁以下结肠癌患者中开展MMR蛋白检测，由于该群体患HNPCC 可能性增加。 III期推荐6个月辅化，共8-12周期，FOLFOX为1类证据并作为首选标准治疗方案（FOLFOX4与m FOLFOX6），CapeOX为2A类；不适合OXA可选单药卡培他滨或5-Fu/LV （单药卡培他滨疗效至少与5-Fu/LV相当） 如T4肿瘤浸润周围固定结构，或肿瘤复发时应考虑给予放疗同期辅助5-Fu为基础的化疗 11、MSI通常由MMR基因或MLH1启动子甲基化导致重复序列的插入或缺失，从而产生DNA微卫星长度的变化。 12、晚期或转移性疾病 原发灶未处理的同时性转移患者，如未发生急性梗阻或穿孔，全身化疗首选 结直肠癌肝转移瘤的部分切除或减瘤手术对生存无益 对初始不可切除的转移性疾病，在术前化疗开始后2个月要重新评估手术切除性，对继续接受术前化疗的患者也应每2个月重新评估一次手术的可能性。
中药单体华蟾素抗人结肠癌细胞作用和机制研究 研究目标:观察中药单体华蟾素(Cinobufagin,简称为CBG)抗结肠癌(Colon cancer)细胞作用,明确其作用机制。研究方法和内容:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞集落试验(Clonogenicity assay)、Brd U酶联免疫吸附测定(ELISA)检测华蟾素处理不同时间后,对结肠癌细胞存活及细胞增殖的影响;TUNEL细胞核 染色方法、Annexin V-碘化丙啶(PI)流式细胞仪(FACS)法,及Histone-DNA ELISA 法、检测华蟾素对结肠癌细胞凋亡的作用;碘化吡啶(PI)流式细胞仪法观察CBG 干预后结肠癌细胞周期的变化;运用免疫印迹(Western blot)方法检测CBG干预后结肠癌细胞内质网应激(ER应激)、m TOR复合物1(m TORC1)等信号通路水平 的活化水平;导入持续活化的S6K1质粒(CA-S6K1),观察药物干预后CBG体外抗结肠癌细胞活性的变化;建立裸鼠荷瘤模型,观察CBG在体抗结肠癌细胞的活性。 研究结果:CBG显著抑制人结肠癌细胞及原代人结肠癌细胞的存活和增殖。 CBG对正常人结肠上皮细胞无显著毒性作用。 CBG诱导结人结肠癌细胞凋亡,并导致结肠癌细胞周期G2-M期阻滞。CBG激活结肠癌细胞内ER应激通路。 使用内质网应激抑制剂(Salubrina),caspase-12抑制剂(z ATADfmk)或CHOP 沉默(通过目的性sh RNAs)的方法能够明显的减弱CBG诱导的结肠癌细胞的死亡 和凋亡。CBG抑制结肠癌细胞内m T ORC1的活化,而导入持续活化的S6K1质粒抑制CBG诱导的抗增殖作用。 CBG腹腔注射抑制裸鼠中HCT-116皮下移植瘤生长。分析肿瘤组织发现,CBG 干预的瘤组织中存在CHOP上调和m TORC1失活。 研究结论:CBG具有显著的体外及在体抗结肠癌细胞作用,其作用机制可能