坐骨神经-腓肠肌标本的制备
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一、实验目的：
1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。
2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
二、实验原理：
1.蟾蜍处死：
将蟾蜍的脑和脊髓用毁髓针捣毁后，蟾蜍即死亡。捣毁脑是为了将蟾蜍的感觉和运动中枢破坏，同时也使蟾蜍的意识消失，既避免解剖过程中蟾蜍感到痛苦，也避免蟾蜍有意识的反应；捣毁脊髓是为了破坏蟾蜍的周围神经系统，避免蟾蜍自然的非意识的反应（乱动）。总之，双毁髓就是为了是蟾蜍在之后的解剖过程中无任何干扰实验的反应。
2.坐骨神经-腓肠肌标本的制备：
坐骨神经直接支配着腓肠肌的反应，刺激坐骨神经的神经干，腓肠肌会产生收缩反应。一次阈上刺激，腓肠肌会产生一个周期的收缩舒张过程，从而可以被信号采集系统采集，并通过计算机和相关软件转化成可视的收缩舒张曲线。便于研究神经和肌肉的信号、反应关系和规律。
三、实验器材与试剂：
（一）实验动物及器材：
蟾蜍、常用蛙类手术器械（如：毁髓针、剪刀、解剖刀等）、蛙板、玻璃划针、固定针、培养皿、滴管、棉花、粗棉线等。
（二）实验试剂：
任氏液（近似两栖动物内环境液，配制因子很多，不同于生理盐水）
四、实验方法与步骤：
1、蟾蜍处死，损毁脑和脊髓：
a.学会持拿蟾蜍的方法：一般用左手持拿蟾蜍，用小指和无名指夹住蟾蜍两后腿，中
指自然搭在蟾蜍腹部，食指和拇指可自由活动。处死时，一般用拇指按住蟾蜍背部，
食指将蟾蜍头鼻下压，以便使下针处清晰易找。
b.处死：按上述方法持拿，用毁髓针沿头部中线从鼻尖轻轻向后滑过，约在双眼连线
中点后方某点，可感到有一下陷小窝，用针轻按，蟾蜍一般会有明显反应。在此处下针。将毁髓针垂直插入，会感觉到颅骨破碎的声音，立即将毁髓针向后放倒，将针尖从破碎处，并旋转捣毁脑部；然后将毁髓针拔出少许，向前放倒，向后插入同样旋转捣毁脊髓。蟾蜍即被处死。
2、去除躯干上部及内脏：
将蟾蜍腹部朝上放在蛙板上，将四肢用固定针固定。用剪刀将蟾蜍腹部按正三角形样剪开，使腹腔完全暴露，将棉花塞在腹腔中，用力按住并向头部方向推去。将内脏全部推往头部，露出白色的脊柱和两侧的一对白色的坐骨神经。从下往上数，在第三和第四节椎骨之间剪断，并以此为界将蟾蜍剪为两半。弃去上半部分和内脏。下半部分留用。
3.剥皮：
取蟾蜍下半部分，右手蘸任氏液后捏住三节椎骨，左手拽住蟾蜍外皮向下撕拉。将剥皮后的蟾蜍下半部分浸在任氏液中约三四十秒，备用。
4.分离两后肢：
将剥皮后的蟾蜍后肢从任氏液中取出，放在蛙板上。用剪刀沿中线将三节椎骨小心地剪为对称两半，注意切勿剪断坐骨神经。从后部用碎骨钳将蟾蜍骨盆部骨头对称剪为两半，并用剪刀彻底剪开分离。将分开的一半后肢浸在任氏液中，备用。
另一后肢继续剥制标本。
5.制备坐骨神经-腓肠肌标本：
将一半后肢放在蛙板上，固定（注意将腓肠肌朝上摆放）。滴几滴任氏液润湿，然后用玻璃划针将坐骨神经和腿部肌肉剥离，并将肌肉清除干净，注意不要将坐骨神经损伤和腓肠肌。将股骨与椎骨分离，并将股骨从下三分之一处剪断，将上三分之二节股骨弃去；用玻璃划针从腓肠肌跟腱处横插入，向上划开，从而将腓肠肌与骨膜分离。
用玻璃划针将一根较粗棉线勾过骨肉间隙，用棉线自跟腱中部系紧，用剪刀从跟腱末端剪断，并在膝盖下端将小腿骨剪断。得到坐骨神经-腓肠肌标本。
五、注意事项：
1.解剖蟾蜍时，注意下剪要准，不要剪破内脏或大血管，造成大出血。
2.在剥皮时，右手应捏紧三节椎骨，不要直接捏在坐骨神经上，以免破坏坐骨神经。
3.在实验操作过程中，要不断用任氏液润湿标本，尤其是神经，以防神经损坏。
六、思考题：
1．剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？
答：剥去皮肤的后肢，不能用自来水冲洗。因为机体各部分要行使正常的功能，必须处在相应的内环境中，比如使用任氏液，就可以近似模拟两栖动物的内环境。若直接
使用自来水则会使实验肌肉及神经不能正常工作。
2．金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？
答：若神经，会使神经传导中断或减弱，以致肌肉不能正确接收神经作出的反应指令，不能出现正确的收缩曲线；若用金属器械碰压、触及或损伤腓肠肌，则肌肉反应的
强度和频率可能会发生变化，也是不能对刺激做出正常的反应，从而不能出现正确
的收缩曲线。
七、实验小结：
通过本次实验，我组同学学习了蛙类动物双毁髓的实验方法及原理，掌握了坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法，对解剖蟾蜍过程中的各种注意事项、制备坐骨神经-腓肠肌标本须注意的各种操作进行了分析。基本上达到了本次实验的目的与要求。
实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析 实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml，配成％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和的磷酸缓冲液）
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备和 不同强度和频率对肌肉收缩的影响 一、实验摘要 1.目的：掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本基 本操作以及蛙类手术器械的使用方法。学习微机生物信号采集处理系 统和换能器的使用。记录在刺激时间、强度变化率恒定的条件下，不 同强度和频率的电刺激对肌肉收缩的影响。 2.方法：应用蛙类捉拿方法并且毁脑脊髓后制备坐骨神经-腓肠肌标本， 用锌铜弓分别刺激坐骨神经和腓肠肌，观察肌肉变化。再利用张力换 能器将压力变化转换为电信号，用微机生物信号采集处理系统记录不 同强度和频率对肌肉收缩的影响的变化曲线。 3.结果：用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。在保持足够的刺激 时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨神经的刺激 强度(脉冲振幅)和改变电脉冲刺激频率可发现当电压低于阈值的强 度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，刺激电压达到 阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。刺激强度逐渐增 大，总收缩张力增加。当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部 兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。 4.结论：在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激， 所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最 大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。介于阈刺激和最大刺激间 的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。 二、关键词：坐骨神经、腓肠肌、兴奋性、阈值 三、引言：刺激神经使神经细胞产生兴奋，兴奋沿神经纤维传导，通过神经肌接头的化学传递，使肌肉终板膜上产生终板电极，终板电极可引起肌肉产生兴奋（即动作电位），传遍整个肌肉纤维，再通过兴奋-收缩耦联使肌纤维中粗、细肌丝产生相对滑动，宏观上表现为肌肉收缩。[1] 四、材料和方法 1.实验对象：蟾蜍 2.实验仪器：张力换能器、微机生物信号采集处理系统、剪刀、铁碗、 培养皿、锌铜弓、玻璃分针、大头针、蛙板、尖头镊子、棉线、针形 引导电极 3.实验药品和试剂：任氏液 4.实验方法： 1)观察蟾蜍毁脑脊髓前后四肢肌张力的变化。用锌铜弓分别刺激坐 骨神经和腓肠肌，观察肌肉的反应。 2)毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以食指压其头部前端使 其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即 将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织； 再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内， 捣毁脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一 毁脑脊髓的蟾蜍。否则须按上法再行捣毁。
坐骨神经-腓肠肌标本制备 一、实验目的要求 1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。 2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。 3、了解电刺激的极性法则。 二、实验原理 1、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 2、细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。 三、实验材料和仪器 1、实验材料：牛蛙 2、实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液 四、实验步骤 1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证 2、双毁髓 一只手握住牛蛙，使其背部向上。用拇指压住牛蛙背部，食指按压其头部前端，另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向下触划，触及凹陷处即为枕骨大孔。将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。将针尖向前刺入颅腔内搅动，此时为单毁髓；将毁髓针退回枕骨大孔，针尖转向后方，与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓，完成双毁髓。 3、坐骨神经-腓肠肌标本制备 （1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置，沿脊柱两侧横向切口剪断体壁，去除断口以上肢体和内脏放入污物缸。剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。 （2）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉，一只用于剥制标本，一只放入任氏液中保存。 （3）分离坐骨神经：将后肢标本脊柱端腹面向上，趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。先在腹腔面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经,然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的肌肉缝内将坐骨神经与周边的结缔组织分离直到腘窝，但不要伤及神经，其分支待以后用手术剪剪断肌肉。 （4）游离腓肠肌：同样用玻璃分针将腓肠肌与其下的结缔组织分离并在其跟腱处穿线、结扎； （5）分离股骨头：捏住股骨，剪去并刮净周围肌肉，保留股骨的后2/3，剪断股骨; （6）检验标本：用手术镊轻提标本的脊椎片，再用经任氏液蘸湿的锌铜弓接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，则表示标本机能正常。轻提腓肠肌上的结扎线，将标本放入任氏液中保存15-20分钟后进行实验。 （7）电刺激的极性法则验证：用棉线在神经干中间部位进行结扎，以阻断神经传导兴奋的能力。用锌铜弓跨越结扎线刺激坐骨神经干。使锌极在腓肠肌一端刺激，观察腓肠肌收缩发
坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位 的观察与传导速度的测定 一、实验目的： 1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。 二、实验材料： 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。 三、实验原理： 神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在离体神经干的一段施加刺激，从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位。神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的。但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。
如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。即可按照公式v=m/s来计算出兴奋的传导速度。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为3-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维，传导速度在正常室温下为35-40 m/s。 神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期性的变化，其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生的周期性变化，首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋，然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激，用于检查神经的兴奋阈值和所引起的动作电位的幅度，以判定神经兴奋性的变化。 四、实验方法及步骤： 1、坐骨神经干标本制备 （1）破坏脑与脊髓： 取蛙一只，用自来水冲洗干净，左手持蛙，用食指下压其吻部，拇指按压在其骶髂关节下方，使其头尽量前俯，右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划，至触及头颈部正中的凹陷处，即为枕骨大孔的位置。用探针在凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再将其针尖转向前刺入颅腔，左右搅动探针，彻底捣毁脑组织；然后缓慢地把探针退至枕骨大孔处，将其转向后方，与脊柱平行捻动探针使其刺入整个椎管，彻底捣毁脊
课程名称：坐骨神经腓肠肌实验教研室：生理学教研室任课教师：朱亮授课章节：细胞的基本功能授课专业和年级：医疗06级 授课学时：4学时授课时间： 坐骨神经腓肠肌实验 一、坐骨神经腓肠肌标本制备 【实验原理与目的】 蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。所制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。 本实验目的在于学习破坏蛙类脑脊髓法，掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术、并获得兴奋性良好的标本，为以后有关实验打下基础。 【实验对象】 蛙或蟾蜍。 【实验器材和药品】 1．器械蛙类动物手术器械一套，包括普通剪刀、小手术剪刀、镊子、探针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板、玻璃板、固定针等。 2．药品任氏液。 3．其它瓷盘、培养皿、小烧杯、棉花、棉线、纱布、滴管等。 【实验步骤和观察指标】 1.破坏脑和脊髓取蟾蜍一只，用布包裹蟾蜍四肢躯干露出头部，用左手握住蟾蜍，并用食指按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头前端沿中线向尾方划触、触及凹陷处即枕骨大孔的所在。将探针由凹陷处垂直刺入，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端转向头方，向前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁脑组织。如探针确在颅腔内，术者可感觉出针在四面皆壁的腔内。脑组织捣毁后，将探针退出；再由枕骨大孔刺入，并转向尾方，与脊髓平行刺入脊管，以破坏脊髓。脑和脊髓是否完全破坏，可检查动物四肢肌肉的紧张性是否完全消失。拔出探针后，同一干棉球压迫针孔，以止其出血（见图3-1-1-1）。另一方法是去脑后再捣毁脊髓。
实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备 一、实验目的 1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别） 2、离体标本实验（与在体标本实验的区别） 3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理 4、掌握离体标本的制备及手术训练 可 集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。慢性动物实验适用于观察某一器官或组织在正常情况下的功能以及在整体中的作用地位，但不宜用来分析某一器官或组织细胞生理功能的详细机制。与急性动物实验相比，慢性动物实验的干扰因素较多，实验条件较难控制。 2、锌铜弓的作用及原理 锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。由铜片和锌片两种金属制成。锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。
通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。 3、蟾蜍作为生理学实验模式生物的优点 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观 处各扎一细线，然后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧髂骨向反方向分离，使耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条置于浸有任氏液的玻璃板上。 （（2）、（3）两步可变为一手捏住脊柱后端，一手抓着蟾蜍头部向两侧拉开，可直接分离两腿，蟾蜍皮肤仍留在蟾蜍上身部。若试验中当堂进行坐骨神经-腓肠肌兴奋性实验，则不需浸泡入任氏液） （4）游离坐骨神经和剪断股骨：认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位，用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经
实验一坐骨神经腓肠肌标本制备 目的学习坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。 原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。 实验对象蟾蜍 实验用品蛙类手术器械、烧杯、培养皿、棉球、纱布、细丝线、任氏液、粗剪刀、蛙板等。 实验步骤 1.破坏脑和脊髓左手持蛙，用食指压其头部前端，使头前俯。右手持探针由头端沿正中线向后划，触到凹陷即为枕骨大孔，将探针由此垂直刺入。再将探针折向前方，插入颅腔内并左右搅动捣毁脑组织。再将探针退回至进针处，针尖转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。此时蟾蜍四肢瘫软，表明脑脊髓已完全破坏。 2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱。左手握住后肢，右手持剪刀沿脊柱的断口向下剪开两侧的皮肤及肌肉，再剪除已下垂的躯干上部及内脏。 3.剥皮剪掉肛门周围的皮肤，左手捏脊柱断端（勿触碰神经），右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉两后肢皮肤。将标本背位放于表面有少许任氏液的蛙板上，洗净双手及用过的器械。 4.游离坐骨神经沿脊柱两侧用玻璃分针分离坐骨神经，用线在坐骨神经靠近脊柱处结扎并剪断。左手捏住脊柱，右手持剪刀从背面剪去向上突出的尾骨。然后从腹面沿中线将脊柱剪成两半。捏住两侧下肢带骨用力向两侧掰，使耻骨联合处脱臼，再从耻骨联合中央剪开两后肢，一后肢放入盛有任氏液的平皿中备用，一后肢用玻璃分针划开梨状肌及其附近的结缔组织，循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂隙处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针将腹部的坐骨神经小心勾出来，手执结扎神经的线，剪断坐骨神经的所有分支，一直游离至膝关节。 5.完成坐骨神经腓肠肌标本的制备将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，在股骨中部剪去`上段股骨。再在跟腱处以线结扎，剪断并游
损伤离体蟾蜍坐骨神经对腓肠肌收缩的影响 摘要：目的：本实验通过设置自身对照，观察损失离体蟾蜍坐骨神经对腓肠肌收缩情况和生物电变化来研究神经损伤对肌肉收缩功能的影响。方法：通过生物信号采集处理系统给予激损伤前后的离体蟾蜍坐骨神经相同强度和频率的刺激。观察记录神经与骨骼肌的生物电和相应的收缩情况，对比损伤神经前后，神经干动作电位（action potential，AP）、肌电、肌肉收缩的图像变化。结果：损失前，依次出现神经干动作电位（action potential，AP）、肌电、肌肉收缩的波形，说明坐骨神经和腓肠肌均有生物电、腓肠肌有明显肌肉收缩；损伤后，只出现神经干AP的波形，说明坐骨神经仍有生物电，而腓肠肌生物电消失，肌肉不收缩。结论：损伤离体蟾蜍坐骨神经后，再刺激神经，其骨骼肌就不会随之产生肌膜AP以及收缩现象。骨骼肌的收缩需要神经传导兴奋，神经损伤后肌肉因无法接受神经传导的兴奋而无法收缩。关键词：离体蟾蜍；神经损伤；生物电；肌肉收缩 Abstract: Objective: To observe the gastrocnemius bioelectric and contraction change of damaged isolated toad sciatic nerve to explore the influence of never injury on muscle contraction. Methods: By virtue of stimulating toad in vitro sciatic nerve before injury and after, to observe the corresponding record bioelectric nerve and skeletal muscle contraction. Result: Before injury, the sciatic never and gastrocnemius were bioelectric, muscle contracted; after injury, the sciatic never is still bioelectrical, but gastrocnemius bioelectric disappear, muscle does not shrink. Conclusion: Skeletal muscle contractio need for conduction of exciting never, muscle can not shrink after never injury due to unacceptable excitation. Keywords: isolates toad; never injury; bioelectricity; muscle contraction 引言：肌肉是构成动物体的主要组织，其主要功能是当受到来自神经的刺激时产生收缩，进而引起动物体内外的各种运动。[1] 骨骼肌去神经支配后出现肌萎缩和收缩功能的丧失，肌纤维发生与萎缩相关联的系列形态学和组织学变化。近年来随着技术水平和理论研究的进展，治疗效果有了很大的提高，但仍未达到满意的效果。[2]周围神经损伤后神经及其所支配的骨骼肌功能的恢复是当今运动创伤康复及外科领域中较为棘手的问题之一，故本文试探其机理。 1.材料和方法 1.1 实验对象 蟾蜍 1.2 实验药品和试剂 任氏液、蒸馏水 1.3 实验仪器 蛙类手术器械一套（粗剪刀一把、组织剪一把、镊子一把、探针一根、玻璃分针两把、蛙钉四个、蛙板一个、培养皿一个、滴管一个、棉线若干），张力换能器，肌槽，刺激电极，铁架台，生物信号采集处理系统，微机，标本屏蔽盒。 1.4 实验方法 1.4.1实验系统连接和参数设置 张力换能器的输出端与生物信号采集处理系统的输入通道相连。启动RM6240系统软件，在系统软件窗口设置仪器参数。点击“实验”菜单，选择“神经干动作电位、肌电、肌肉收缩”项，调节刺激强度为2V。设置通道一、二参数为生物电，通道三为张力。 1.4.2离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制作 （1）捣毁蟾蜍脑脊髓：取蟾蜍一只，左手握蛙，以食指压其头部前端使其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，
观察结果： 用已经湿润的铜锌弓两端先后接触坐骨神经，可观察到腓肠肌产生一次收缩。 并且课观察到先用铜极接触，后用锌极接触时坐骨神经的收缩强度大于先用锌极接触后用铜极接触的收缩强度。 讨论分析： 铜锌弓在溶液中沾湿以后，锌的表面店里出正离子，里面形成负离子，而铜的表面电离出负离子，里面形成正离子。当铜锌弓接触或组织时，电流便沿着锌片，活组织，铜片的方向流动产生刺激反应。所以锌相当于正极，而铜相当于负极。正极的电势高于负极。所以锌极后接触坐骨神经时，收缩的强度比较大。 任氏液的组成模拟了两栖动物的血浆成分，含有神经传导所需的钠离子钾离子葡萄糖等物质，并起维持渗透压的作用。 神经与肌肉是可兴奋组织，神经细胞的静息膜电位为外正内负，坐骨神经接受一次刺激时，膜对钠离子的通透性增加，细胞外的任氏液中的钠离子顺浓度梯度内流，导致膜内负电位减小，当达到阈电位时，钠离子通道全部开放，钠离子大量内流，细胞内正电荷增加，膜内负电位从减小到消失，进而出现膜内正电位。动作电位产生。由于任氏液是导电的，于是在膜的兴奋段和未兴奋段之间，会由于电位差的存在而产生电荷的移动。于是刺激就顺着坐骨神经传导。 当传递到腓肠肌时，即由神经兴奋到肌肉收缩，这个过程就是神经传导电信号，电信号传导至神经-肌肉节点即为突触，轴突末梢膜的钙离子通道开放，膜对钙离子的通透性增加，钙离子就由细胞外进入轴突内。钙离子浓度增高可促进大量囊泡向接头前膜靠近，囊泡膜与接头前模发生融合而破裂，囊泡中的递质乙酰胆碱通过胞作用释放入接头间隙，电信号转化为了化学信号，递质作用于突触后膜（也就是肌肉细胞膜），产生胞内信号，使储存于肌质网中的钙离子释放，引起肌肉收缩。 整个标本包括了神经中枢，传出神经即坐骨神经，效应器即腓肠肌。缺少接收器和传入神经。 结论： 整个标本不是一条完整的反射弧，不是一次反射，只能算为反应。 电刺激可以通过坐骨神经传导并能是腓肠肌产生收缩。说明标本制备成功。
实验方案 实验外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。 2、初步掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体G－带在染色体识别中的意义。 3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征及其 识别。 二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。 染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。 在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。 正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。 染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。 表1 人染色体组型及其特征
华南师范大学实验报告 学生姓名 学号 专 业生物科学 年级、班级 课程名称生理学实验 实验项目 实验类型 实验时间 2013年4 月11日 实验指导老师 实验评分 实验四、五 蛙的坐骨神经-腓肠肌标本的制备与肌肉收缩特性的分析 ⒈实验目的 1.1学习蛙类动物双毁髓的方法。 1.2学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及其制备方法。 1.3学习电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。 1.4观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。 1.5观察骨骼肌单收缩、肌肉收缩的总和、不完全强直收缩和完全强直收缩的现象。 ⒉实验原理 2.1腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应 2.2阈下刺激：强度过小不引起肌肉收缩反应的刺激。 阈刺激：能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度。 最大的收缩反应：全部肌纤维同时收缩。 最适刺激强度：引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度。 2.3单收缩：肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应。分为三个时期：潜伏期（从刺激开始到收缩开始这一段无明显外部表现的时间）、收缩期（由潜伏期末到肌肉开始收缩至收缩达到高峰的时间）和舒张期（从收缩高峰开始，曲线较缓慢地下降至基线的时间）。 2.4两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经-肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的过程，肌肉出现两个分离的单收缩；如果刺激间隔小于单收缩的时程而大于不应期，则出现两个单收缩反应的重叠，即收缩的总和；但如果第二个刺激在第一个收缩反应的不应期内，则第二个刺激不产生收缩反应。 2.5强直收缩：当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应叠加的现象。
不完全强直收缩：当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，后一收缩发生在前一收缩的舒张期。 完全强直收缩：当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，后一收缩发生在前一收缩的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉出现持续的收缩状态。 ⒊实验材料 3.1材料：蛙 3.2试剂：任氏夜 3.3器材：张力传感器，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、 毁髓针），蛙板，固定针，培养皿，滴管，纱布，棉线 ⒋实验步骤 4.1坐骨神经-腓肠肌标本的制备 洗干净实验动物 双毁髓 剥离后肢 分离两后肢 分离坐骨神经 游离腓肠肌 分离股骨头 标本检验 4.2电刺激 把标本通过张力传感器与生理信号采集系统相连 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系 确定阈上刺激 以阈上刺激给予标本的神经单刺激、连续刺激观察单收缩的时程、总和的过程以及强直收缩产生的过程 ⒌实验结果 5.1阈刺激强度下蛙的腓肠肌收缩情况 通道1 (V )通道2 (m V )图1 蛙腓肠肌阈刺激的分析 注：刺激强度为80mV ；频率为1Hz ；单脉冲
实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2 3 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高
生物实验报告 姓名: 班级: 日期: 同组者: 实验序号: 实验题目:坐骨神经-腓肠肌标本的制备 实验目的:1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2(学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 实验原理:两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单， 易于控制和掌握。 因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌 标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率 与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性 等。 实验对象:蟾蜍 实验器材:常规手术器械(粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、 眼科镊)蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培 养皿、任氏液、滴管、手术线等。 实验方法及步骤: 1、破坏脑脊髓 部位枕骨大孔。如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。 2、剪去躯干上部及内脏 在骶髂关节前1 cm处用金冠剪(粗剪)剪断脊柱(可在下肢前端)。沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。
3、剥后肢皮肤 左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。 4、分离两腿 用金冠剪剪去尾骨杆(骶骨)，沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离(切勿伤及神经)，将两腿浸于任氏液中。 5、游离坐骨神经 取一后肢，腹面向上(背位)，固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。用金冠剪 剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。 将标本改为背面向上(腹位)固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。再沿坐骨神经沟(半膜肌和股二头肌的肌间缝)分离坐骨神经。用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。 6、游离腓肠肌 用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。这样就制备了一个附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的完整标本。
蛙坐骨神经–腓肠肌标本制备 11 实验1 蛙坐骨神经–腓肠肌标本制备、 刺激频率对肌肉收缩的影响 【目的要求】 1.学习坐骨神经–腓肠肌标本的制备方法。 2.分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响。 【原理】 刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间(即单收缩)时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩;若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩;若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。 【器材】 蟾蜍或蛙;任氏液;二道生理记录仪、双脉冲刺激器、肌槽、常规手术器械、玻璃分针、毁髓针、锌铜弓、解剖盘、烧杯、滴灌、任氏液等。 【步骤】 1、双毁髓:左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯;右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以毁脑组织。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向
后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。 2、剥制后肢标本:左手持手术镊提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。剪开腹壁肌肉，用手术镊提起内脏，翻向头部，在看清支配后肢的脊神经发出部位后，于其前方剪断脊柱。 3、分离两后肢:将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。 4、分离坐骨神经:将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经，股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐11 11 骨神经，剪断盖在上方的梨状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。 5、分离股骨头:沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，保留股骨的后2/3，剪断股骨。 6、游离腓肠肌:在腓肠肌跟腱下穿线并结扎，提起结扎线，剪断肌腱与胫腓骨的联系，游离腓肠肌，剪去膝关节下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的联系，制备出完整的坐骨神经-腓肠肌标本。标本应包括:坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨四部分。 7、检验标本:用任氏液沾湿的锌铜弓的两极接触神经，如腓肠肌发生收缩，则标本机能正常，把标本固定在肌槽上。 8、连接好装置，调节适宜的灵敏度及刺激强度，开动记录仪，走纸速度为 10mm/s,用手控触发开关，以单脉冲刺激神经，记录肌肉的单收缩曲线。 9、分别用1 Hz、2 Hz、3 Hz、4 Hz、6 Hz、12 Hz、24 Hz、30Hz等频率去刺激坐骨神经，记录肌肉的收缩曲线。
生物实验报告记录坐骨神经腓肠肌标本制备
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坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位的观察与传 导速度的测定 一、实验目的： 1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。 二、实验材料： 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。 三、实验原理： 神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在离体神经干的一段施加刺激，从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位。神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的。但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。 如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。即可按照公式v=m/s来计算出兴奋的传导速度。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为3-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维，传导速度在正常室温下为35-40 m/s。 神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期
坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位的观察与传 导速度的测定 一、实验目的： 1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。 二、实验材料： 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。......感谢聆听 三、实验原理： 神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在离体神经干的一段施加刺激，从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位。神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的。但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。......感谢聆听 如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。即可按照公式v=m/s来计算出兴奋的传导速度。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为3-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维，传导速度在正常室温下为35-40 m/s。......感谢聆听 神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期性的变化，其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生的周期性变化，首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋，然后在前一兴奋及其恢复过程不同时
实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备 一、实验目的 1. 学习蛙类动物双毁髓的实验方法 2. 学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法 3. 通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴奋组织的概念。 二、实验原理 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。因此，常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 三、实验器材 蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液 四、实验步骤 1. 制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓） 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。 2. 剥制后肢标本 剪除上肢和内脏在骶髂关节上0.5-1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。 剥皮左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。 3. 分离两后肢 将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。 4. 分离坐骨神经 将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在蛙板上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部(即与脊神经相接的部位)，背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断(或用玻璃分针扯断)梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处。取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移离开股骨。 5. 分离股骨头 沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，保留1 cm股骨头并剪断股骨。提起腓肠肌上的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。 6. 游离腓肠肌 用手术镊(尖头镊)在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。提起结线，游离腓肠肌。7. 检验标本 用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板。再用任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经，如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。提起腓肠肌上的结扎线，