常见革兰阳性球菌鉴别
葡萄球菌属
鉴定及鉴别要点
1、葡萄球菌属与微球菌属的鉴别：
葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小；而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，并且菌体较大。
2、葡萄球菌属与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，触酶试验阳性；链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。
表葡萄球菌属与微球菌科其他菌属的鉴别
注：各表中的d 为反应不定。
表常见葡萄球菌的鉴别
链球菌属
触酶试验阴性，分解葡萄糖产酸不产气，除肺炎链球菌外，链球菌不分解菊糖。
鉴定
杆菌肽敏感试验：95%以上的化脓性链球菌对杆菌肽（每纸片含0.04单位）敏感，抑菌环≥10毫米为敏感。
CAMP试验：无乳链球菌CAMP试验为阳性，其它链球菌为阴性。
Optochin敏感试验：几乎所有的肺炎链球菌都对Optochin敏感。抑菌环≥18毫米为敏感。
β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
表β-溶血性链球菌的主要生物学特性
注：PYR：L-吡咯烷酮-萘酰胺水解。d：为反应不定。
非β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
肠球菌属：肠球菌属细菌γ或α溶血，触酶试验一般为阴性，有些菌株可产生假阳性。本属细菌的主要生化特征及鉴别见表表肠球菌属常见菌种的生化特征
1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡
萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名 凝固 酶触酶溶血 硝酸 盐 海藻 糖 半乳糖 苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚 种 +++++- 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+--- 施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND 中间葡萄球菌++d+++ 海豚葡萄球菌++++-ND S.lutrae++++++ 猪葡萄球菌d+-++- 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
青岛农业大学 兽医微生物学课程论文 题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定 姓名： 学院：动物科技学院 班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新 二0一四年四月十二日
链球菌和葡萄球菌分离鉴定 班 2012 指导教师温建新 摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。 关键词：葡萄球菌；链球菌 引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇. 链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。
病原性球菌及检验 一、葡萄球菌属 （1）分类.......................了解 （2）临床意义...................熟悉 （3）生物学特性.................熟练掌握 （4）微生物学检验...............熟练掌握 （一）生物学特 1.形态与结构 本属细菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则排列，形似葡萄串状，在脓汁或液体培养基中，可呈单个、成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。 2.培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高。最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。在普通琼脂平板上经37℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐、不透明菌落，直径为2～3mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶素。 在液体培养基中生长迅速、呈均匀混浊状。 3.生化反应 本属菌触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。致病性葡萄球菌一般能分解
甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。 4.抗原 葡萄球菌的抗原包括蛋白抗原和多糖抗原。 （1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性。存在于葡萄球菌的表面，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。 （2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性。 协同凝集试验 5.分类 （1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA及表型特征等将葡萄球菌分为19个种。继之，各国学者又从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。 （2）古典分类法：根据其产生色素的不同分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。 1965年，葡萄球菌国际分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），凝固酶阳性葡萄球菌主要为金黄色葡萄球菌。CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。 6.抵抗力 对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。 （二）致病性 1.侵袭性疾病 ⑴皮肤及软组织感染，如毛囊炎、疖、痈等； ⑵全身性感染，如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等； ⑶呼吸道感染，如支气管肺炎、肺炎、脓胸等； ⑷医院内感染。 2.毒素性疾病
1．概述 链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。 3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非β溶血链球菌的鉴别见表1。 表1 非β溶血链球菌的鉴别 菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌+ + - 牛链球菌- - + 其他草绿色链球菌群- - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见《质量管理程序》。 6. 检验结果解释与分析 6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出
医院感染中肠球菌对抗生素耐药性分析 发表时间：2010-02-01T09:43:37.263Z 来源：《中外健康文摘》2009年第32期供稿作者：张淑萍 [导读] 肠球菌属是医院感染的主要条件致病菌之一，可引起人体各种器官的感染 张淑萍（上海市杨浦区中心医院检验科上海杨浦 200090） 【中图分类号】R378 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)32-0042-02 【摘要】通过采用回顾性调查方法统计近3年来临床标本肠球菌分离情况，应用VITEK-32微生物系统分析肠球菌临床感染及其对抗生素的耐药性。得出结论：肠球菌的检出率和耐药率都呈上升趋势，应引起临床的重视，合理使用抗菌药物，是减少医院感染的有效措施。【关键词】肠球菌医院感染耐药性 肠球菌属是医院感染的主要条件致病菌之一，可引起人体各种器官的感染。随着抗菌药物的广泛应用，肠球菌属耐药性有所增加，特别是耐高浓度氨基糖苷类抗生素及耐万古霉素肠球菌的增多，肠球菌引起的医院感染有明显增多的趋势。为了解我院肠球菌的临床感染及其耐药特性，我们对近年临床分离的肠球菌及其体外药敏情况进行了分析。 1 材料和方法 1.1菌株来源菌株来自2006年1月至2008年10月我院各科患者的尿液、脓性分泌物、痰液等临床标本，共培养分离383株肠球菌。 1.2试剂与仪器 VITEK-32全自动微生物分析仪及配套鉴定卡和药敏卡，均为法国梅里挨公司产品。质控菌为粪肠球菌（ATCC 29212）和金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。 2 结果 2.1肠球菌的菌种分布肠球菌共383株，其中粪肠球菌207株，占54%；屎肠球菌127株，占3 3.2%；鹑鸡肠球菌35株，占9.1%；鸟肠球菌8株，占2%；铅黄肠球菌6株，占1.6%。 2.2 383株肠球菌在各种临床标本中的分布 2.3主要肠球菌药敏结果 3 讨论 肠球菌可引起尿路感染、菌血症、肺炎、脑膜炎、心内膜炎等多种感染症。本实验结果显示，在近3年多时间中，共分离到383株肠球菌，主要为粪肠球菌和屎肠球菌占87%。菌种来源显示，尿液占首位（50.9%），其次为脓液分泌物（225%），痰标本占第三位（18%），以上3类标本共占91.4%。肠球菌所致感染最多见于尿路感染，多与尿路器械的操作、流置导管、尿路结构异常有关，为仅次于大肠埃希菌的第二位引起尿路感染的病原菌[1]。创伤及肺部感染也较为常见，可能与创伤暴露部位的感染以及介入性的操作（呼吸机、插管）等容易并发肠球菌感染有关。提示应加强此类疾病的医院内感染的预防和控制。 本研究显示，万古霉素和力奈唑烷对3种肠球菌均保持较高的敏感性（耐药率＜10%），肠球菌对四环素耐药率为40%-55%之间，对青霉素的耐药率＞80%。粪肠球菌对呋喃妥因的耐药率9.2%，对莫西沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为36.2%、44%。屎肠球菌对呋喃妥因的耐药率为48.8%，对莫西沙星和左旋氧氟沙星的耐药率分别为82.7%、86.6%。高浓度庆大毒素和高浓度链霉素的耐药率在不同菌种间差异较大，粪肠球菌分别为36.2%、33.8%，而屎肠球菌则为63%、58.2%，鹑鸡肠球菌为39.4%、54.5%，这些耐高浓度庆大霉素和高浓度链霉素的菌株，是因为产生了氨基糖苷钝化酶，当它们与作用于细胞壁的抗菌药物联用时不具协同作用，从而给临床抗感染治疗带来困难。屎肠球菌与粪肠球菌及鹑鸡肠球菌进行比较，屎肠球菌的耐药率明显偏高，提示屎肠球菌的耐药机制可能与粪肠球菌及鹑鸡肠球菌不同，因此，临床实验室应对肠球菌鉴定到种的水平，以便指导临床合理使用抗生素。 耐力古霉素肠球菌（VRE）的出现给临床治疗带来了困难，其耐药机制主要为细胞壁肽聚糖前体末端发生改变，使万古霉素不能与之结合而失去抗菌活性。VRE所致严重感染目前尚无满意可靠的治疗方法，应依据药敏试验结果和临床情况选择用药，并宜联合用药。许多文献报道，利奈唑胺在体外对粪肠球菌及屎肠球菌包括VRE均有较好的抑菌活性[2]，并经美国FDA批准可用于治疗耐万古霉素屎肠球菌感染。 近年来，国内外报道耐万古霉素的肠球菌呈逐渐增加的趋势，这就提示临床合理使用万古霉素，以保持肠球菌对万古霉素的高度敏感性。 参考文献 [1]汪一萍，倪语星，孙景勇，等.社区与院内尿路感染的病原学比较及抗生素耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2005，15（5）：586-589. [2]朱德妹，张婴元，周乐，等.利奈唑胺的体外抗菌作用研究[J].中国感染与化疗杂志，2008，8（2）：81-88.
实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定 一、实验目的 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害，我们要分离出它们并研究。 二、实验原理 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8um左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1—2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10—15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，V—P反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 三、实验材料和设备 1.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（13%NaCl）：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠130g，琼脂15g，蒸 馏水1000ml，121℃灭菌20min后倒平板。 肉汤培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。 甲苯胺兰-DNA平板 2.试剂 磺胺类药物、革兰氏染液 3.仪器和设备 显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环。 四、实验方法 金黄色葡萄球菌的分离： 1.称取5g土样，在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，再加入200ul 磺胺类药物，振荡10min，使土样充分混匀。利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。 2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中，30℃，200rpm，24h。 3.取培养好的菌液，按梯度稀释法稀释土壤悬液，依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后，分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃培养箱中培养24h。利用高盐培养基抑制其他细菌的生长，从而分离金黄色葡萄球菌。 金黄色葡萄球菌的鉴定： 1.菌落形态：菌落较小，较湿，较透明，边缘整齐，隆起。
病原性球菌的检验 一、葡萄球菌属Staphylococcus ?广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。 ?致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中 毒等。 分类与分型 1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。 （2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。 （3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。 （4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。 （5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。 金黄色葡萄球菌的致病性 ?用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。 ?肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对
抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。 ?造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和 81型菌株。 ?引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。 金黄色葡萄球菌的流行病学 ?作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的 鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌及其检验 ?革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。无芽胞、鞭毛，大 多数无荚膜，个别形成荚膜。致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。培养及生化特性 1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。），在麦康凯琼脂平板不生长。 2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血 3. 产生金黄色
色素 4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。 5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。 6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素 3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶 抗原性 1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。 A群多糖抗原化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基（金黄色葡萄球菌）。 B群多糖抗原化学组成是磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺甘油残基。 2. 蛋白质抗原：细胞壁的一种表面蛋白，人源菌株含SPA （Staphylococcus protein A)，能与多种哺乳动物IgG Fc片
第三节肠球菌属 广泛分布在自然界，常栖居人、动物得肠道与女性生殖道，就是引起医院内感染得重要病原菌。 一、分类： 链球菌科，具有D群链球菌得D抗原，过去就是属于链球菌属得D 群，但种系分类法用DNA杂交研究发现，证实粪肠球菌与屎肠球菌不同于链球菌属细菌，与链球菌同源程度低，所以现将其从链球菌属中划分出来，命名为肠球菌属。由16SrRNA序列分析与核酸杂交等，证实有19种肠球菌，分成5群，临床标本分离得多属于群2。 二、临床意义： 最多见于尿路感染，多与尿路器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关，就是重要得医院感染病原菌。腹腔与盆腔创伤时肠球菌也就是常见细菌。肠球菌引起得菌血症常发生于有严重基础疾病得老年人、长期住院接受抗生素治疗得免疫功能低下得患者。近年来不断上升得肠球菌感染率与广泛使用抗生素出现得耐药性有关。 三、微生物特性： G+球菌，单个、成双或短链状排列，琼脂平板上生长得细菌呈球杆状，液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞与荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 兼性厌氧菌，最适温度35℃，大多数菌株在10℃与45℃均能生长。所有菌株在含6、5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。
多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），氧化酶（-），触酶（-）但某些菌株触酶可出现弱（+）。当粪肠球菌培养于含血得培养基中，可合成细胞色素氧化酶或触酶或两者皆有。 含D群链球菌D抗原。 与链球菌得显著区别： 能在高盐（6、5%NaCl）、高碱（pH9、6）、高胆汁（40%）培养基、10℃与45℃均能生长、对许多抗菌药物表现天然耐药 四、微生物检查： （一）检验程序：图6-3 （二）标本采集： 血、尿、创伤标本等，标本1h内接种完毕。 （三）标本直接检查： G染色镜检 （四）分离培养与鉴定： BAP 若标本中含G-杆菌，可用选择鉴别培养基： ①叠氮胆汁七叶苷琼脂——可抑制G-菌生长，肠球菌分解七叶苷为黑色菌落； ②哥伦比亚多黏菌素-萘啶酸琼脂（CAN）与苯乙基乙醇琼脂（PEA）。35℃、24h形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0、5~1mm大小得圆形菌落，羊血平板上为α溶血或不溶血，粪肠球菌得某些菌株在马
文件页码：1/3 1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖半乳糖苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚种+ + + + + - 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+ - + - - - 施氏葡萄球菌聚集亚种+ + + + - ND 中间葡萄球菌+ + d + + + 海豚葡萄球菌+ + + + - ND S.lutrae + + + + + + 猪葡萄球菌 d + - + + - 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制
第十三章病原性球菌及检验 一、A1 1、下列哪种菌种保存方法是目前最有效的保存方法 A、普通琼脂斜面保存法 B、半固体穿刺保存法 C、干燥保存法 D、冷冻干燥保存法 E、脱脂牛奶保存法 2、能在高盐（6.5%NaCl）、40%胆汁培养基上生长的细菌是 A、大肠埃希菌 B、草绿色链球菌 C、B群链球菌 D、肠球菌 E、表皮葡萄球菌 3、在6.5%氯化钠培养基中能生长的细菌有 A、A群链球菌 B、B群链球菌 C、C群链球菌 D、肺炎链球菌 E、肠球菌 4、卡他布兰汉菌在形态方面与何种细菌相似 A、流感嗜血杆菌 B、脑膜炎奈瑟菌 C、军团菌 D、放线菌 E、支原体 5、下列细菌中，哪一种为革兰阴性球菌 A、草绿色链球菌 B、肺炎球菌 C、化脓链球菌 D、卡他布兰汉菌 E、肠球菌 6、关于乙型溶血型链球菌，下列哪项是错误的 A、是链球菌属中致病力最强的 B、感染容易扩散 C、可引起超敏反应性疾病 D、产生多种外毒素，故可用类毒素预防 E、对青霉素敏感
7、肺炎链球菌的主要致病物质是 A、透明质酸酶 B、溶血毒素 C、普通菌毛 D、荚膜 E、外毒素 8、治疗链球菌引起的感染，应首选 A、红霉素 B、链霉素 C、青霉素 D、克林霉素 E、多黏菌素 9、链球菌分类的依据是 A、能否产生血浆凝固酶 B、产生色素颜色的不同 C、鞭毛抗原的不同 D、在血琼脂培养基中溶血现象的不同 E、传播途径的不同 10、脑膜炎奈瑟菌在人体的定植部位一般为 A、肠道黏膜 B、口腔黏膜 C、皮肤表面 D、鼻咽部 E、脑膜 11、下列哪种细菌感染一般不侵入血流 A、葡萄球菌 B、淋球菌 C、脑膜炎球菌 D、伤寒杆菌 E、链球菌 12、分离培养淋病奈瑟菌时，不能采用的方法是 A、标本要立即送检 B、标本要保湿保暖 C、在含5%～10%CO2的环境中培养 D、接种于预温的巧克力色血平板上 E、厌氧环境培养 13、以下叙述正确的是 A、淋病奈瑟菌感染主要由呼吸道传播 B、淋病奈瑟菌为革兰阳性球菌
病原性球菌及检验 球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。 对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。 一、葡萄球菌属 (一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。 (二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。 1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。 2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。 (三)抗原 本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。 1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。 2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。有型特异性，分A、B、C三型。 (四)标本接种 1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。 2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。 3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。 (五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。在20%CO2环境中，有利于毒力产生。最适温度37℃，最适PH7.4。DNA中G+C含量：30-39%。
文件页码：1/3 1．概述 链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。 3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非β溶血链球菌的鉴别见表1。 表1 非β溶血链球菌的鉴别 菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌+ + - 牛链球菌- - + 其他草绿色链球菌群- - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见《质量管理程序》。
微生物培养耐药机制修改规则 在微生物报告中，我们经常会遇到一些简单的耐药机制，有时候抗生素药敏结果做出来是敏感，我们也要修改为耐药，我们一定要了解这些常见修改规则。主要包括以下四条： 一、葡萄球菌属 当出现苯唑西林（MIC）、头孢西丁(KB)耐药或耐甲氧西林葡萄球菌检测试验阳性时，将所有的β-内酰胺酶类（比如：青霉素、头孢洛林等）抗生素敏感的结果修正为耐药。 二、大肠埃希菌、肺炎克雷伯、产酸克雷伯、奇异变形杆菌 1、当ESBL试验阳性时，不再对所有的青霉素类和头孢菌素（含酶抑制剂除外）以及氨曲南敏感的结果修改为耐药，只需要提示：产ESBL肠杆菌科细菌，应当报一些β-内酰胺酶类药物的耐药性； 2、当出现头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松或头孢泊肟检测结果为不敏感时，推测可能产ESBL和或Ampc,不再对所有的青霉素类和头孢菌素（含酶抑制剂除外）及氨曲南敏感的结果修正为耐药，只需要提示：产ESBL肠杆菌科细菌，应当报一些β-内酰胺酶类药物的耐药性。 三、流感嗜血杆菌 当出现β-内酰胺酶阴性且氨苄西林或阿莫西林耐药时，要将阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林\舒巴坦、头孢克洛、头孢他美、头孢尼西、头孢丙烯、头孢呋辛和氯碳头孢的敏感结果修正为耐药。 四、葡萄球菌和链球菌
当出现红霉素诱导克林霉素耐药试验阳性时，需要将红霉素、克林霉素、奎奴普丁/达福普汀的敏感结果修正为耐药。 除了以上这几条外，还有的我们需要注意，那就是天然耐药，我们虽然做出来可能是敏感的，也要将敏感结果去掉，一般不用报告该药，因为天然耐药的抗生素临床一般无效。 常见天然耐药参考如下： 肠杆菌科： 1、弗氏柠檬酸杆菌：氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素I代（头孢唑啉、头孢噻吩）、头霉素类（头孢西丁、头孢替坦）、头孢菌素II代（头孢呋辛）。 2、克氏柠檬酸杆菌：氨苄西林、哌拉西林、替卡西林。 3、产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素I代（头孢唑啉、头孢噻吩）、头霉素类（头孢西丁、头孢替坦）、头孢菌素II代（头孢呋辛）。 4、大肠埃希菌：此菌对β-内酰胺类药物无天然耐药。 5、赫氏埃希菌和肺炎克雷伯菌：氨苄西林、替卡西林。 6、蜂房哈夫尼菌：氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素I代（头孢唑啉、头孢噻吩）、头霉素类（头孢西丁、头孢替坦）。 7、摩根摩根菌：氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢菌素I代（头孢唑啉、头孢噻吩）、头孢菌素II代（头孢呋辛）、四环素类/替加环素、呋喃妥因、多粘菌素B、黏菌素。
精心整理1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2.标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌 O/F试 ”为3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。
精心整理 应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。 6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。 7.临床意义 金黄等， 等。 MRSA 物。 8. [1] [2] [3]
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定（食品检验） 1.金黄色葡萄球菌检验程序： 2.金黄色葡萄球菌鉴定程序： （1）：金黄色葡萄球菌在Baird-parker平板上菌落直径为2mm-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一周浑浊带，外围有一层透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 （2）：染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。
（3）：血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。取 新鲜配置血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。 （4）：结果判定：符合（1）、（2）、（3），可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
2019 第十三章病原性球菌及检验 一、A1 1、肺炎链球菌革兰染色镜下形态为 A、革兰阳性呈栅栏状排列 B、革兰阳性呈葡萄状排列 C、革兰阳性呈矛头状排列 D、革兰阴性呈链状排列 E、革兰阴性呈矛头状排列 2、下列叙述与卡他布兰汉菌无关的是 A、革兰阴性双球菌，形似脑膜炎奈瑟菌 B、营养要求高 C、产DNA酶 D、氧化酶阳性 E、还原硝酸盐为亚硝酸盐 3、生化反应中，氧化酶和触酶均阳性的病原菌是 A、葡萄球菌 B、链球菌 C、肠球菌 D、卡他布兰汉菌 E、大肠埃希菌 4、能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（PH9.6）条件下和40%胆汁培养基上生长的细菌是 A、大肠埃希菌 B、草绿色链球菌 C、乙型溶血性链球菌 D、肠球菌 E、表皮葡萄球菌 5、生化反应中，氧化酶和触酶均阴性，PYR试验结果阳性的病原体是 A、奈瑟菌 B、链球菌 C、肠球菌 D、大肠埃希菌 E、卡他布兰汉菌 6、腐生葡萄球菌是下列哪种疾病的常见致病菌 A、亚急性细菌性心内膜炎 B、类风湿关节炎 C、蜂窝织炎 D、尿路感染 E、风湿热 7、关于金黄色葡萄球菌，下列哪种说法是错误的 A、耐盐性强
B、在血平板上形成完全透明的溶血环 C、引起化脓性感染时病变比较局限 D、不易产生耐药性，抵抗力强 E、革兰阳性菌 8、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点 A、血浆凝固酶试验阳性 B、产生溶血素 C、分解甘露醇 D、产生耐热核酸酶 E、胆汁溶解试验阳性 9、葡萄球菌致急性胃肠炎的致病因素是 A、杀白细胞素 B、溶血毒素 C、肠毒素 D、血浆凝固酶 E、红疹毒素 10、化脓性炎症，其脓汁黏稠、病灶局限，这是由于病菌产生了 A、玻璃质酸酶 B、血浆凝固酶 C、耐热核酸酶 D、链道酶 E、葡激酶 11、用于监测血浆凝固酶的细菌为 A、肺炎链球菌 B、表皮葡萄球菌 C、甲型溶血性链球菌 D、乙型溶血性链球菌 E、金黄色葡萄球菌 12、不符合脑膜炎球菌送检标本要求的是 A、采集标本注意无菌操作 B、采集标本立即送检 C、采集标本一般在使用抗菌药物之前 D、根据该病原菌主要存在部位取材 E、标本送检过程中要保持低温和干燥 13、对低温敏感的细菌是 A、肺炎链球菌 B、脑膜炎奈瑟菌 C、脆弱类杆菌 D、伤寒沙门菌 E、布鲁菌
肠球菌检测 致病性检测耐药性检测肠球菌鉴定 1.07肠球菌为革兰阳性（G+）球菌，广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。 细菌分类学上，肠球菌属早期并不存在，现今的一些菌种本归属于链球菌属,1989年，依据Facklam和Collins的分类，肠球菌属内包括十二个种及一个变异株，它们是：粪肠球菌（E.faecalis）屎肠球菌（E.faecium) 鸟肠球菌(E.avium)酪黄肠球菌(E.casseliflavus) 坚忍肠球菌(E.durans)鸡肠球菌E.galinarum) 芒地肠球菌(E.mundii)恶臭肠球菌(E.maladoratum) 希拉肠球菌(E.hirae)孤立肠球菌（E.solitarius） 棉子糖肠球菌(E.raffinosus)假鸟肠球菌(E.pseudoavium) 粪肠球变异株(E.faecalis var)。 肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、棉子糖肠球菌等21个种。 鉴定 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有溶血或溶血环的菌落。在康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。 操作步骤 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 科标生物检测中心从事饲料、土壤肥料、微生物及生物制剂、化妆品及日化用品、木材及木制品、其他生物材料等生物相关产品的性能测试、成分分析以及配方研发等工作。09
蒈1．概述 蒅葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 芀2.标本类型 袈血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 薈3.鉴定 袆3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 羂3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 袁3.3生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 蚈3.4鉴别要点 羃3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 蚄3.4.2与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 蚀3.4.3与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 螈3.4.4凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 莄表1凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 膂菌名葿凝固 酶 袇触 酶 螅溶 血 袄硝酸 盐 膈海藻 糖 羇半乳糖 苷酶 膆金黄色葡萄球菌金黄色亚种莂+ 芁+ 肇+ 莃+ 肄+ 羀- 肇金黄色葡萄球菌厌氧亚种螄+ 蒁- 蝿+ 膇- 膄- 芃- 螁施氏葡萄球菌聚集亚种芇+ 薅+ 蚁+ 薀+ 莇- 羆ND 莃中间葡萄球菌荿+ 蒇+ 肃d 袁+ 膈+ 薆+ + - ND