WB试剂配方
SDS-上样缓冲液(2X) 100ml （100 mM Tris-Cl (pH 6.8)；4% (w/v) SDS；0.2% (w/v) bromophenol blue；20% (v/v) glycerol；200mM DTT (dithiothreitol)
Tris-base 1.2114g
SDS 4g
bromophenol blue 0.2g
glycerol 20ml
ddH2O 定容至80ml
1M DTT 20ml
Store the SDS gel-loading buffer without DTT at room temperature. Add DTT from a 1 M stock just before the buffer is used.
配胶：
30%丙烯酰胺（商品化29:1）
Tris-HCl：
（1）分离胶（PH8.8）1.5M
称取Tris-base（MW121.14）91.855 g，先ddH2O 400ml，用盐酸调pH=8.8后，定容至500ml
（2）浓缩胶（PH6.8）1M
称取Tris-base（MW121.14）60.57 g，先ddH2O400ml，用盐酸调pH=6.8后，定容至500ml 10% SDS
称取10g SDS粉末，溶于入100ml ddH2O即可，可80℃水浴加热，易于溶解。
10%APS（过硫酸铵）: 称取1 g过硫酸铵；加入10 ml的ddH2O，将固体粉末彻底溶解；贮存于4℃。
TEMED（商品化）
SDS-PAGE电泳缓冲液（25mM Tris, 192mM Glycine, 0.1%SDS）25℃，pH约为8.6
Tris-base(MW121.14) 3.03g
Glycine(MW75.07) 14.41g
SDS 1g
加ddH2O定容至1000ml
转移缓冲液
称取14.3g Glycine，2.9g Tris.base，200ml 甲醇定容至1L，存于4℃
10x 丽春红染液
丽春红S 2g
三氯乙酸30g
磺基水杨酸30g
加ddH2O定容至100ml
用时稀释10倍
10x TBS母液（1L）
20mM Tris-base 24.228g
150mM NaCl 87.75g
先溶于800ml ddH2O，用浓HCl调pH=7.2-7.4，后定容至1L
用时先稀释成1xTBS，并补加入1‰Tween-20后配成1xTBS-T
封闭液
5% milk：称取5g脱脂奶粉，溶于100ml 1xTBST；3% BSA：称取3g BSA粉末，溶于100ml 1xTBST
发色液
ECL Plus western blottingdetection system 和Advance ECL western blotting detection system，以及SuperSignal West PicoChemiluminescent
（等级强度Advance>ECL Plus> west pico）
（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配制方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。
（pH5.2）□配制量100mL □配制方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配制方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配制方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱
1、2，4－二硝基苯肼溶液 I．在15mL浓硫酸中，溶解3克2，4－二硝基苯肼。另在70mL95％乙醇里加20mL 水，然后把硫酸苯肼倒入稀乙醇溶液中，搅动混合均匀即成橙红色溶液（若有沉淀应过滤）。 Ⅱ．将1.2克2，4一二硝基苯肼溶于50mL30％高氯酸中，配好后储于棕色瓶中，不易变质。 I法配制的试剂，2，4－二硝基苯肼浓度较大，反应时沉淀多便于观察。Ⅱ法配制的试剂由于高氯酸盐在水中溶解度很大，因此便于检验水中醛且较稳定，长期贮存不易变质。2、卢卡斯（Lucas）试剂 将34克无水氯化锌在蒸发皿中强热熔融，稍冷后放在干燥器中冷至室温。取出捣碎，溶于23mL浓盐酸中（比重1.187）。配制时须加以搅动，并把容器放在冰水浴中冷却，以防氯化氢逸出。此试剂—般是临用时配制。 3、托伦（Tollens）试剂 I．取0.5mL10％硝酸银溶液于试管里，滴加氨水，开始出现黑色沉淀，再继续滴加氨水，边滴边摇动试管，滴到沉淀刚好溶解为止，得澄清的硝酸银氨水溶液，即托伦试剂。 Ⅱ．取一支干净试管．加入1mL5％硝酸银，滴加5％氢氧化钠2滴，产生沉淀，然后滴加5％氨水，边摇边滴加，直到沉淀消失为止，此为托伦试剂。 无论I法或Ⅱ法，氨的量不宜多，否则合影响试剂的灵敏度。I法配制的Tollens试剂较Ⅱ法的碱性弱，在进行糖类实验时，用I法配制的试剂较好。 4、谢里瓦诺夫（Seliwanoff）试剂 将0.05g间苯二酚溶于50mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100mL。 5、希夫（Schiff）试剂 在100mL热水中溶解0.2g品红盐酸盐，放置冷却后，加入2g亚硫酸氢钠和2mL浓盐酸，再用蒸馏水稀释至200mL。 或先配制l0mL二氧化硫的饱和水溶液，冷却后加入0.2g品红盐酸盐，溶解后放置数小时使溶液变成无色或淡黄色，用蒸馏水稀释至200mL。 此外，也可将0.5g品红盐酸盐溶于l00mL热水中，冷却后用二氧化硫气体饱和至粉红色消失，加入0.5g活性炭，振荡过滤，再用蒸馏水稀释至500mL。 本试剂所用的品红是假洋红（Para-rosaniline或Para-Fuchsin），此物与洋红（Rosaniline或Fuchsin）不同。希夫试剂应密封贮存在暗冷处，倘若受热或见光，或露置空气中过久，试剂中的二氧化硫易失，结果又显桃红包。遇此情况，应再通入二氧化硫，使颜色消失后使用。但应指出，试剂中过量的二氧化硫愈少，反应就愈灵敏。 6、0.1％茚三酮溶液 将0.1g茚三酮溶于124.9mL95％乙醇中，用时新配。 7、饱和亚硫酸氢钠 先配制40％亚硫酸氢钠水溶液，然后在每100mL的40％亚硫酸氢钠水溶溶液中，加不含醛的无水乙醇25mL，溶液呈透明清亮状。 由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质，所以上述溶液也可按下法配制：将研细的碳酸钠晶体（Na2CO3?10H2O）与水混合，水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜，然后在混合物中通入二氧化硫气体，至碳酸钠近乎完全溶解，或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中，至碳酸钠全部溶解力止，配制好后密封放置，但不可放置太久，最好是用时新配。 8、饱和溴水 溶解15克溴化钾于100mL水中，加入10g溴，振荡即成。 9．莫利许（Molish）试剂
Western blot常用试剂配方 1. 丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30% AB（100ml） 丙烯酰胺29 g 双丙烯酰胺1g 加蒸馏水至100ml，过滤，棕色瓶保存。 2. 10% SDS：（10ml） 电泳级SDS 1 g 蒸馏水9 ml 初始PH约为，用针尖蘸少许浓盐酸调PH 至，定容至10ml。（四甲基乙二胺）（成品） 4. Lower-buffer （1.5M Tris-Cl PH ）：50ml Tris-base 9.085 g 蒸馏水45 ml 加浓盐酸（约）调PH至后定容至50ml，4℃保存。 5. upper buffer（1.0M Tris-Cl，PH ）：50ml Tris-base 6.055 g 蒸馏水44 ml 加浓盐酸调PH至后定容至50ml，4℃保存。 6. 10%过硫酸铵（10% AP）：新鲜配制 称取0.05g AP于EP管中，储存于-20℃，用时溶于蒸馏水7. 5 × loading buffer：（1ml）50ml upper buffer ml 甘油（丙三醇）ml 25ml
SDS g 5g DTT 0.0385 g 溴酚蓝 加蒸馏水溶解后定容至1ml。取加蒸馏水配成工作液。8. 5 × running buffer：（1000ml） Tris-base 15.1 g 甘氨酸（Glycine）94 g SDS 5 g 加蒸馏水溶解后定容至1000ml。用时加4000 ml蒸馏水。 9. 考马斯亮蓝染液：100ml（可重复利用） 甲醇30 ml 冰乙酸10 ml 蒸馏水60 ml 考马斯亮-250 0.05 g 10. 考马斯亮蓝脱色液500ml：现用现配 乙酸（10%）50ml 甲醇（30%）150ml 加蒸馏水定容至500ml。 11. Transbuffer（PH ）：100ml 现用现配 Tris-base 0.3028 g 甘氨酸 1.4872 g 甲醇20 ml 加蒸馏水定容至100ml。 12. 10 x 丽春红染液（储存液）：（可重复利用） （用时用蒸馏水稀释为1 X 的）染色后用纯水脱色
常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
常规试剂配制和测定方法 一、溶液的配制 1. Mandels营养盐溶液（1000 mL） 名称重量（g） 硫酸铵（(NH4)2SO4）14 磷酸二氢钾（KH2PO4）20 尿素（H2NCONH2） 3 硫酸镁（MgSO4·7H2O） 3 氯化钙（CaCl2·2H2O） 4 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 2. Mandels微量元素溶液（1000 mL） 名称重量（g） 氯化钴（CoCl2·6H2O） 硫酸锌（ZnSO4·7H2O） 硫酸锰（MnSO4·H2O） 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O） 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1）取：3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）7.5 g 氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2）加入：酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）216.0 g 苯酚（在50 ℃水浴中融化）mL 偏重亚硫酸钠（Na2S2O5） 6.0 g
（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。 注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 4. 考马斯亮蓝G-250的配制（1000 mL） 称考马斯亮蓝G-250 100 mg即0.1g溶于50mL 95%乙醇中，加入100 mL 85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含%（w/v）考马斯亮蓝 G-250，%（w/v）乙醇，%（w/v）磷酸。 5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000 mL） 名称分子量Mn 重量(g) 柠檬酸（C6H8O7·H2O）210 210 NaOH 40 准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始）。（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为） 6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定 （1）标准糖溶液的配制 准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。 取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液。 取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖。（2）标准方程的测定： ①葡萄糖/木糖标准方程的测定
实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30
注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃；
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
生物学常用试剂配制 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
常用试剂 储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。 操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。 EDTA（PH ） 组分浓度: mol/L EDTA（MW：） 配制量: 500ml 配制方法: 1．称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。 2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。 3．用NaOH调节调节pH值至（约需加入20g固体NaOH），当pH 接近时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。 4．高温高压灭菌后，室温保存半年。 5M NaCl 组份浓度： 5mol/L NaCl (MW： 配制量： 1L 配制方法： 1.准确称取氯化钠，置于1L的蓝盖瓶中。 2.用去离子水溶解并稀释至1L。 3.高温高压灭菌后，常温保存。 CaCl2 组份浓度：L CaCl2 (MW： 配制量： 50ml 配制方法: 1.准确称取氯化钙 g于50ml的conical tube中。 2.用去离子水溶解并稀释至500ml，用μm滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conical tube。 3.贮存于4℃。 50% 甘油 组分浓度： 50%(V/V) glycerol 配制量： 100ml 配制方法: 1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶中： 100% glycerol 50ml 2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。 3.高温高压灭菌，4℃保存。 4.使用时，到超净台分装。 Amp-氨苄青霉素（钠盐） 放置：置于4°C冰箱
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
https://www.doczj.com/doc/f811095735.html, 常用试剂配制及显色方法 （一）通用显色剂 1．重铬酸钾——硫酸 一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。 喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物 （1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高 显色的灵敏度。 （2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。 4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。 5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。 6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。 溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。 7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。 8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。 临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。 10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。 溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。 11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II
常用试剂的配制 【2,4-二硝基苯肼试剂】 Ⅰ．取3g 2,4-二硝基苯肼溶于15mL浓硫酸中。将此酸性溶液慢慢加入70mL95%乙醇中，再加蒸馏水稀释到90mL，搅动混合均匀即成橙红色溶液（若有沉淀应过滤）。 Ⅱ．将1.2g 2,4-二硝基苯肼溶于50mL30%高氯酸中。配好后储于棕色瓶中，不易变质。 I 法配制的试剂2,4-二硝基苯肼浓度较大，反应时沉淀多便于观察。Ⅱ法配制的试剂，由于高氯酸盐在水中溶解度很大，因此便于检验水溶液中的醛且较稳定，长期贮存不易变质。 【饱和亚硫酸氢钠溶液】 先配制40%亚硫酸氢钠水溶液。然后在每100mL的40 %亚硫酸氢钠水溶液中，加不含醛的无水乙醇25mL，溶液呈透明清亮状。如有少量的亚硫酸氢钠结晶析出，必须滤去或倾斜上层清液。 由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质，所以上述溶液也可按下法配制：将研细的碳酸钠晶体（Na2CO3·10H2O）与水混合，水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜。然后在混合物中通入二氧化硫气体，至碳酸钠近乎完全溶解，或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中，至碳酸钠全部溶解为止。配制好后密封放置，但不可放置太久，最好是用时新配。 【Schiff（希弗）试剂】 配制方法有三种: 1．将0.2g对品红盐酸盐溶于100mL新制的冷却饱和二氧化硫溶液中，放置数小时，直至溶液无色或淡黄色，再用蒸馏水稀释至200mL，存在于玻璃瓶中，塞紧瓶口，以免二氧化硫逸散。 2．溶解0.5g对品红盐酸盐于100mL热水中，冷却后通入二氧化硫达饱和，至粉红色消失，加入0.5g活性炭，震荡过滤，再用蒸馏水稀释至500mL。 3．溶解0.2g对品红盐酸盐于100mL热水中，冷却后，加入2g亚硫酸钠和2mL浓盐酸，最后用蒸馏水稀释至200mL。 品红溶液原是粉红色，被二氧化硫饱和后变成无色的Schiff试剂。醛类与Schiff试剂作用后，反应液呈紫红色。 酮类通常不与Schiff试剂作用，但是某些酮类(如丙酮等)能与二氧化硫作用，故当它与Schiff 试剂接触后能使试剂脱去亚硫酸，此时反应液就出现品红的粉红色。 Schiff试剂应密封贮存于暗冷处，倘若受热见光或露置空气中过久，试剂中的二氧化硫易失，结果又显桃红色，遇此情况，应再通入二氧化硫，使颜色消失后使用。但应指出，试剂中过量的二氧化硫愈少，反应就愈灵敏。 【Fehling（斐林）试剂】 Fehling试剂由Fehling A和Fehling B组成，使用时将两者等体积混合，其配法分别是：Fehling A：将3.5g含有五结晶水的硫酸铜溶于100mL水中即得淡蓝色的Fehling A试剂。 FehlingB：将17g五结晶水的酒石酸钾钠溶于20mL热水中，然后加入含有5g氢氧化钠的水溶液20mL，稀释至100mL即得无色清亮的Fehling B试剂。 由于氢氧化铜是沉淀，不易与样品作用，因此，用酒石酸钾钠存在时氢氧化铜沉淀溶解，形成深蓝色的溶液：
氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。
2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml
常用试剂配制方法 氨试液 取浓氨水200ml，置1000ml量杯中，加水稀释至500ml。 碱性酒石酸铜试液：配600ml。 （1）取硫酸铜结晶20.8g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml试剂瓶中备用。（可长期保存） （2）取酒石酸钾钠结晶103.8g与氢氧化钠30g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml 试剂瓶中备用。（需新鲜配制） 临用前将两液等量混合，即得。 0.2％酚酞指示液：配500ml。（可长期保存） 粗称酚酞1g，置500ml量杯中，加95％乙醇500ml，使溶解，即得。 0.02mol/l氢氧化钠滴定液：配500ml。（可长期保存） 取氢氧化钠0.4g，置500ml量杯中，加水使溶解成500ml。 稀硝酸：配4000ml。（可长期保存） 取硝酸（16mol/L）210ml，置3000ml烧杯中，加水稀释至2000ml。配2次。 标准氯化钠溶液（10ug/ml）：配1000ml。（可长期保存） 精称氯化钠16.5mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100μg/ml）临用前，精密量取储备液100.0mL，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 8．硝酸银试液：配500ml。（需新鲜配制） 取硝酸银8.75g，置500ml量杯中，加水溶解至500ml。 9．稀盐酸：配3000ml。（可长期保存） 取盐酸（12.5mol/L）702ml，置5000ml烧杯中，加水稀释至3000ml。 10．标准硫酸钾溶液（100ug SO4-2/ml）：配500ml。（可长期保存） 精称硫酸钾90.5mg，置100ml烧杯中，加水溶解后，转移至500ml量瓶中。 11．25%氯化钡：配3000ml。（可长期保存，第二年如混浊，过滤） 粗称BaCl2750g，置5000ml烧杯中，加水超声溶解并稀释至3000ml（澄清）。 12．标准铅溶液（10ugPb/ml）：配600ml 。 精称硝酸铅16mg，置50ml烧杯中，加硝酸0.5ml与水5ml溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100ugPb/ml）（放冰箱长期保存） 临用前，精密量取储备液10.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 13．稀醋酸：配2000ml 。（可长期保存） 粗量冰醋酸（17.5mol/L）60ml，置1000ml量杯中，加水稀释至1000ml，调pH3.5。 14．醋酸盐缓冲液（PH3.5）：配2000ml。（包括阿司匹林的重金属检查，需新鲜配制） 粗称醋酸铵250g，置1000ml量杯中，加水250ml溶解后，加7mol/L 盐酸溶液380ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH值至3.5（电位法指示），用水稀释至1000ml，即得。 15．硫代乙酰胺试液：配1200ml。（需新鲜配制） （1）粗称硫代乙酰胺8g，置500ml烧杯中，加水200ml超声溶解，转移至试剂瓶中（硫代乙酰胺液），置冰箱中保存。（需新鲜配制） （2）配制1mol/L NaOH 1000ml：粗称NaOH 40g，置1000ml量杯中，加水溶解至1000ml。取600ml NaOH，200ml水，800ml丙三醇在3000ml烧杯中混匀（混合液）。转移至试剂瓶中，置冰箱中保存。（可长期保存）临用前取混合液1000ml，硫代乙酰胺液200ml，置80℃水浴上加热30秒，冷却，分装。
分子生物学常用试剂的配制 分子生物学常用试剂的配制 1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入： 细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g 细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。 LB 琼脂平板的配制： 先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖15g /L，同法高压蒸汽灭菌20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。 2．琼脂糖凝胶的配制 根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻
璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在800ml 去离子水中溶入Tris 碱6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用HCl 调整pH 至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。 P2 的配制：在950ml 去离子水中溶入NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至1 升。 P3 的配制：在500ml 去离子水中溶入醋酸钾294.5g，用冰醋酸调整pH 值至5.5，用去离子水调整容积至1升。 4．常用缓冲液： TE pH 7.4 10mmol/LTris·Cl (pH7.4) 1mmol/L EDTA(pH8.0) pH 7.6 10mmol/LTris·Cl (pH7.6) 1mmol/L EDTA(pH8.0) pH 8.0 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) STE(亦称TEN) 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris·Cl (pH8.0)
常用溶液的配制 信息来源：生物谷更新时间：2004-12-21 1:33:00 一、常规溶液 (一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS) 甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液 Na2HPO49.465g 蒸馏水加至1000ml 乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液 KH2P049.07g 蒸馏水加至1000m1 分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表: pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 (二)0.3％台盼兰染液 称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。 (三)0.5％酚红指示剂 酚红0.5g 0.1N(0.4％)NaOH 15ml
双蒸水85ml 将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 (四)5.6％NaHCO3溶液 称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存) (五)10μg／ml秋水仙素 秋水仙素lOmg 生理盐水100ml 装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。 (六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液 将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。 (七)2％柠檬酸钠 称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。 （八）0.2％次甲基兰染液 称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。 (九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液 洋红lg 醋酸90ml 蒸馏水 110ml