卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用小议
发表时间：2010-09-01T17:41:04.937Z 来源：《中外健康文摘》2010年第18期供稿作者：石凤燕[导读] 卡式微柱凝胶法是抗原，抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。
石凤燕（攸县人民医院湖南攸县 412300）
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)18-0075-02 【摘要】目的分析卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的作用。方法将900位名病人同时采用卡式微柱凝胶法和传统的手工操作法作血型鉴定。结果卡式微柱凝胶法正确率为100%，手工正定型法为97.78%，正定型+反定型为100%，但在操作标准化、特异性、灵敏度、客观性方面，前者明显优于后两者。结论卡式微柱凝胶法可提高血型鉴定的检验质量。【关键词】微柱凝胶法血型鉴定
近年来，卡式微柱凝胶检验法（以下简称“卡式法”）已在全国各级医院中，普遍运用，用来作血型鉴定的检验方法，相对于从前国内各级医院用手工操作作血型鉴定来说，卡式法结果准确，操作简单，时间短，试剂用量小；环境污染因此下降。我院自2006年1月开始用卡式法来作血型鉴定的检测工作。并对900名住院病人作了卡式法与手工操作的平行实验，并对结果进行了比较，现将比较的结论与相关分析报道于下。
1 材料和方法
1.1仪器孵育器：Diamed-ID（达亚美） ID-Incubator 37SⅠ专用孵育器。离心机:Diamed-ID（达亚美） ID-Centrifuge 12SⅡ专用离心机。
1.2试剂
1.2.2手工试剂抗A、抗B血清为长春生物制品研究所生产。生产批号20051104 单克隆抗D为台湾贝索公司生产。
1.3 标本来源
我院2006年10月至2007年7月外科住院病人900名，其中男623人，女277名。年龄11～86岁。抽取左肘静脉2ml，肝素抗凝，同时分别用卡式法和手工操型作鉴定血型。
1.4方法
1.4.1卡式检测法按达亚美公司卡氏血型鉴定手册进行。取Diamed-ID ABO/Rh 血型鉴定卡一个，标记病人的姓名病历号等，撕去卡上的锡纸膜。配制 5%的红细胞悬液（25ul病人RBC+0.5ml Diluent2低离子缓冲液）在A.B.D孔分别加入10ul抗A抗B抗D，标准血清。在
A.B.D孔分别加入已配制的2%病人红细胞悬液10ul，37℃孵育15分钟，离心，按说明书提示标准判读结果。
1.4.2手工操作按《全国临床检验操作规程》[1] 规定，正向定型和反向定型加正向定型试管法进行。
2 结果
将上述两种方法的鉴定结果进行比较，凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者，将血液红细胞用生理盐水洗涤3次，再用两种方法重复测定，作正确率比较。
3 讨论
卡式微柱凝胶法是抗原，抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小，使分子筛只让游离分子通过，从而达到分离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。达亚美公司生产的 ABO/Rh卡既可以应用于ABO血型系统的检验，又可以进行Rh血型系统中抗D的鉴定。同时，还可以通过反定型方法，对个体的血型同时鉴定。这与《全国临床检验操作规程》对血型鉴定要求，同时通过正反向定型来准确鉴定ABO血型是相一致的。且操作简单，敏感性特异性都高于手工正定型法。而正反定型相结合，虽弥补了正定型的不足。但在标准化等操作方面，同卡式检测法比较却有较大的差距。 Lapiere [2] 等报道，他们所发明的凝胶离心技术和良好的重复性。卡式法的优点是采用标准化定量工作，减少了操作人员的随意性，且重复性好。由于用了凝胶分子筛技术，将凝集的，游离的红细胞分开，使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[3]，所要标本量少，操作容易，省去了繁锁的洗涤过程，不再耽心抗人球蛋白抗体被中和，而产生假阳性。也便于保存，一般而言，在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录，以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。塑料卡易销毁，不污染环境总之，卡式微柱凝胶法即使对无经验的操作者而言，结果判读，要比试管法更可靠，加上操作简单，省时，用试剂少，成本低，污染环境少，是一个值得推广的血型鉴定好方法。
参考文献
[1] 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程 [M] 南京：东南大学出版社，1997：89-91.
[2] Lapiere Y. Rigal D Adam J etal.The gel test：a new way to detectred cell antigen-anti body reaction Transfusion，1990，30 : 109-113.
[3] 彭道波，兰炯采，王梁平，等.用微柱凝试验进行交叉配血[J].中国输血杂志，2001，14（4):232.
[4] 郑强. 卡式微柱凝胶法在我院血型鉴定中的应用总结[J] 中国保健,17(5):267-268.
血型鉴定微柱凝胶法 1.目的： 采用正反定型对受检者进行血型鉴定 2.职责： 严格按照血型鉴定试剂说明书操作 3.适用范围： 血库工作人员 4.原理： 凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。 5.试剂、仪器及所需材料 ℃保存，主要成分：IgM性质抗-A单克隆试剂：细胞株HA4、ADD、HA5、HA3，来源于河北医科大学生物医学工程中心； IgM性质抗-B单克隆试剂：细胞株BAD、BDF、HB4，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM性质抗-D单克隆试剂：细胞株RUM-1，来源于英国Millipore公司。 %-1%的A型和B型红细胞 %的生理盐水：安徽双鹤药业有限责任公司 LB-3000医用低速离心机一次性吸管一次性塑料试管 6.标准种类及收集要求 样本应符合《临床输血技术规范》要求，应无严重溶血、无脂血及无纤维蛋白存在，EDTA抗凝的血液标本。 7.检测环境条件： 18-25℃，湿度30%-70% 8.操作程序
血型卡有六个凝集管。其中第一管为抗A凝胶，第二管为抗B凝胶，第三管为抗D凝胶，第四至六管为中性胶。 用生理盐水将待检者的压积红细胞配置成%-1%浓度，分别加入第一至第三管和第六管微管中，每管50ul。 将A型、B型红细胞分别加入到第四和第五管中，每管50ul。
将待检者血浆分别加入到第四至第六管中。每管25ul。 混匀后置专用离心机离心5分钟。 离心结束后，取出观察结果并记录。 9.结果判定 10.注意事项 为了便于鉴别，抗A微管中内容物为蓝色，抗B微管中内容物为黄色，抗D微管中内容物为乳白色，其他三个中性胶中内容物为乳白色。 使用血型卡前重新离心后使用。 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时，不可使用。 撕开凝胶卡的封口膜时，不可用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉感染。 红细胞悬液的浓度为%-1%，浓度过高或过低会影响检测结果。血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀，呈现假阳性反应。 如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
1.0 原理 ABO 血型鉴定操作规程 2.0 3.0 4.0 5.0 5.1 5.2 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 7.0 7.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A 和（或）抗-B。 原始样品要求 5 mL 静脉全血。 样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。 检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 所需材料和设备 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 检测操作过程 将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各100 L 。 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。 1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。 结果判断 凝集强度判断标准见表 1。 表1 凝集强度判断标准表
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一. 原理 根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、 AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。 二. 试剂和材料 1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注） 2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注； 3.受检者血清； 4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三. 方法 1 .试管法 （1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。 （2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。 （3）立即以 1000r ／min 离心 1mino
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、 B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 (1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试
剂； 5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬 液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物 均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。
ABO血型鉴定操作规程 111.01.0.0.0 原理原理原理原理 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定型正定型是指用已知抗正定型 -A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定型是指用已知反定型反定型 A1 型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A和（或）抗-B。 222.02.0.0.0 原始样品要求原始样品要求原始样品要求原始样品要求 5 mL静脉全血。 333.03.0.0.0 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。 444.04.0.0.0 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 555.05.0.0.0 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备
5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 666.06.0.0.0 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程 6.1 将受检标本以 1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 6.2 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50μL ，其余管加入受检血浆/血清各 100μL 。 6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50μL ，摇匀。 6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各 50μL ，摇匀。 6.6 1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。
微柱凝胶抗人球蛋白法 1. 目的 为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。 2. 适用范围 适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。 3. 职责 医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。 4. 原理 红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。 5. 所需设备和试剂 普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡 6. 检测环境条件 室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。 7. 操作步骤 7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。 7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。 7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min或2500r/min 离心1min。 7.4取出，判定结果，结果判定标准按下： 阳性 4+ 表示RBC绝大部份凝聚于凝胶表层 3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层 2+ 表示部份RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
微柱凝胶法血型鉴定操 作规程 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
微柱凝胶法 1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml 2原理： 2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）； 2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶； 2.3凝胶间隙具有分子筛作用。凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部； 2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。 3操作： 3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。 3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul 3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟 3.4离心结束后在白色背景前观察结果 4结果判断： A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
5.注意事项 5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。 5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。 5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。 5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。 5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。 5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。 6.方法评价 卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。
ABO血型鉴定操作规程 1.目的:定性鉴定患者ABO血型 2.适用范围:适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测 3.方法及原理: 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A 型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。可用已知的抗A、抗B试剂血清鉴定红细胞上有无对应的A抗原/B抗原（正定型），采用已知A型红细胞和B行红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/ 和抗-B抗体（反定型），必须从正定型和反定型两项试验来确定样本的ABO血型。 4.试剂与设备 4.1试剂抗-A、抗-B定型试剂（单克隆抗体）；0.9%生理盐水；2%—5%A、B和O型试剂红细胞悬液 4.2试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。 红细胞悬液的配制 悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴） 2 5 10 20 1 1 1 1 2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4） 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。 4.3设备透明光洁试管、显微镜、血清学专用水平离心机 5.样本采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 5.2标本要求：
ABO血型鉴定（生理盐水法） 1. 原理 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。 2. 标本采集 2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 2.2 标本要求： 2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。 2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 冻疮，则主张采耳垂血。 3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 保存不超过48小时。 4. 标本运输：室温运输 5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 6. 试剂 6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂 6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司 6.3 试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓
卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用分析 发表时间：2012-02-02T15:17:07.463Z 来源：《中外健康文摘》2011年第39期供稿作者：张迎明[导读] 卡式微柱凝胶法可提高血型鉴定的检验质量。 张迎明（辽宁省葫芦岛市中心医院 125001） 【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）39-0201-01 【摘要】目的分析卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用。方法将800名病人同时采用卡式微柱凝胶法和传统的手工操作法作血型鉴定。结果卡式微柱凝胶法正确率为100%，手工正定型法为97.65%，正定型+反定型为100%，但在操作标准化、特异性、灵敏度、客观性方面，前者明显优于后两者。结论卡式微柱凝胶法可提高血型鉴定的检验质量。【关键词】微柱凝胶法血型鉴定 近年来，卡式微柱凝胶检验法（以下简称“卡式法”）已在全国各级医院中，普遍运用，用来作血型鉴定的检验方法，相对于从前国内各级医院用手工操作作血型鉴定来说，卡式法结果准确，操作简单，试剂用量小；环境污染因此下降。我院自2005年7月开始用卡式法来作血型鉴定的检测工作。并对800名住院病人作了卡式法与手工操作的平行实验，并对结果进行了比较及分析。 1 材料和方法 1.1仪器孵育器：Diana(戴安娜）lncubador专用孵育器。离心机: Diannafuge专用离心机。 1.2试剂 1.2.1卡式法试剂DG Gel ABO-CDE卡，A1红细胞、B红细胞、O红细胞。 1.2.2手工试剂抗A、抗B血清为长春生物制品研究所生产。单克隆抗D为上海血液生物医药有限责任公司生产。 1.3标本来源 我院2005年10月至2006年7月外科住院病人800名，其中男522人，女278名。年龄11～86岁。抽取左肘静脉2ml，肝素抗凝，同时分别用卡式法和手工操型作鉴定血型。 1.4方法 1.4.1卡式检测法按戴安娜公司卡氏血型鉴定手册进行。取DG Gel ABO-CDE血型鉴定卡一个，标记病人的姓名病历号等，撕去卡上的锡纸膜,在A、B、D、C、E五孔各加入病人红细胞悬液50ul,在ctl、A1、B孔分别加入O、A1、B红细胞，离心后按说明书提示标准判读结果。 1.4.2手工操作按《全国临床检验操作规程》[1] 规定，正向定型和反向定型用试管法进行。 2 结果 将上述两种方法的鉴定结果进行比较，凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者，将血液红细胞用生理盐水洗涤3次，再用两种方法重复测定，作正确率比较。 3 讨论 卡式微柱凝胶法是抗原，抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小，使分子筛只让游离分子通过，从而达到分离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。戴安娜公司生产的ABO/CDE卡既可以应用于ABO血型系统正反定型的同时检验，又可以进行Rh血型系统中抗C、抗D、抗E的检验，符合《全国临床检验操作规抗程》对血型鉴定要求，且操作简单，敏感性特异性都高于手工正定型法。且正反定型相结合，弥补了正定型的不足。 卡式法的优点是采用标准化定量工作，减少了操作人员的随意性，且重复性好。由于用了凝胶分子筛技术，将凝集的，游离的红细胞分开，使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[2]，所要标本量少，操作容易，省去了繁锁的洗涤过程，不再耽心抗人球蛋白抗体被中和，而产生假阳性。也便于保存，一般而言，在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录，以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。塑料卡易销毁，不污染环境。 总之，卡式微柱凝胶法即使对无经验的操作者而言，结果判读，要比试管法更可靠，加上操作简单，省时，用试剂少，成本低，污染环境少，是一个值得推广的血型鉴定好方法。 参考文献 [1] 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程 [M] 南京：东南大学出版社，1997：89-91. [2] 彭道波，兰炯采，王梁平，等.用微柱凝试验进行交叉配血[J].中国输血
ABO血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。
4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。 注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏 感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。 3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液 液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。 4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生 溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页 1 目的 指导工作人员进行ABO血型实验。 2 适用范围 血型检验岗位工作人员 3 职责 负责送检标本ABO血型的检测工作。 4 【原理】 ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。 【标本】 1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。 【器材】 载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。 【试剂】 1.1 抗-A、抗-B试剂 1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液 1.3 受检者血清 1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液 1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管 【操作步骤】 2.1 试管法 2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。 2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。 2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。 2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴
于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏
血型鉴定操作规程
血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；
5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可 以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。
微柱凝胶抗人球蛋白 法s o p
微柱凝胶抗人球蛋白法 1. 目的 为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。 2. 适用范围 适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。 3. 职责 医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。 4. 原理 红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。 5. 所需设备和试剂 普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡 6. 检测环境条件 室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。 7. 操作步骤 7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。 7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。 7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min或2500r/min 离心1min。 7.4取出，判定结果，结果判定标准按下： 阳性 4+ 表示RBC绝大部份凝聚于凝胶表层 3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层 2+ 表示部份RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
血型鉴定微柱凝胶法 1. 目的：采用正反定型对受检者进行血型鉴定 2. 职责：严格按照血型鉴定试剂说明书操作 3. 适用范围：血库工作人员 4. 原理：凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。 5. 试剂、仪器及所需材料 5.1 ABO/RhD 血型定型检测试剂卡：江阴立博医药生物技术有限公司，产品注册号：国械注准20163400855 ，包装： 6 孔/卡，12 卡每盒。储存要求：18-25 C保存，主要成分：IgM性质抗-A单克隆试剂：细胞株HA4、ADD 、HA5 、HA3 ，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM性质抗-B单克隆试剂：细胞株BAD、BDF、HB4，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM 性质抗-D 单克隆试剂：细胞株RUM-1 ，来源于英国Millipore 公司。 5.2 0.8%-1% 的A 型和B 型红细胞 5.3 0.9% 的生理盐水：安徽双鹤药业有限责任公司 5.4 LB-3000 医用低速离心机一次性吸管一次性塑料试管 6. 标准种类及收集要求 样本应符合《临床输血技术规范》要求，应无严重溶血、无脂血及 无纤维蛋白存在，EDTA 抗凝的血液标本。 7. 检测环境条件： 18-25 C,湿度30%-70% 8. 操作程序
8.1 血型卡有六个凝集管。其中第一管为抗A 凝胶，第二管为抗B 凝胶，第三管为抗 D 凝胶，第四至六管为中性胶。 8.2 用生理盐水将待检者的压积红细胞配置成0.8%-1% 浓度，分别加入第一至第三管和第六管微管中，每管50ul 。 8.3将A型、B型红细胞分别加入到第四和第五管中，每管50ul。
微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程 1、目的 为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。 2、适用范围 本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。 3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。 4、试验方法及原理 4.1试验方法：凝胶测试法 4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。 5、样本采集和处理 受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血3~4ml于专用管（紫色头管）内，分离出血浆。红细胞配成0.8%的悬液，供血者血样以同样方法分离血浆，并配制0.8%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。
6、试剂： 6.1 0.9%的生理盐水； 6.2戴安娜合血卡； 7、仪器： 7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机； 7.2DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器； 7.3DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ 8、操作程序： 8.1工作准备： 8.1.1生理盐水室温平衡。准备样本。标记合血卡。 8.1.2 0.8%-1%样本红细胞制备：加25μl样本压积红细胞 悬浮液于2ml戴安娜2号稀释液中。 8.1.3于1号管中（主侧）加入50μl献血者红细胞（0.8%）。25μl受血者血浆或血清。 8.1.4 2号管中（次侧）加入50μl受血者红细胞（0.8%）。25μl献血者血浆或血清。 8.1.5 37℃孵育15分钟。 8.1.6 离心10分钟。判断结果，并作好记录。 9、结果判断：1+至4+为抗人球配血不相容；—（0）为配 血相容，可以输注。 10、医学解释： ABO交叉配血试验是检查供、受血者血液中是否含有不相合
微柱凝胶技术操作规程 SXYJ-GZ-0228 1目的规范微柱凝胶技术检测操作。 2适用范围采用微柱凝胶技术进行抗人球蛋白试验。 3职责检测者负责按此程序进行微柱凝胶技术操作。 4材料与设备Biovue工作站系统（包括孵育器、离心机）、微柱凝胶卡（Anti-IgG,-C3d;polyspecific）、低离子增强液（BLISS液）、微量加量枪、吸头等、KUBOTA KA-2200型离心机、0.9%无菌生理盐水；根据检测需要准备相应的抗血清及试剂红细胞。5操作方法 5.1待检标本的准备及要求 5.1.1患者血清准备不抗凝血样3-5ml，退缩充分，离心3000rpm/5min分离出血清备用。 5.1.2红细胞悬液的准备 EDTA抗凝血样3400rpm/2min（KA-2200型离心机Ⅲ档离心2次）压积红细胞。取另一小试管作好标记加入190ul生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成4%红细胞悬液；或加入1ml生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成0.8%红细胞悬液。 5.2直接抗人球蛋白试验 5.2.1取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条； 5.2.2加入4%待检红细胞悬液10 ul； 5.2.3离心5min，观察结果。 5.3间接抗人球蛋白试验（添加法） 5.3.1打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条； 5.3.2每孔加BLISS液50ul； 5.3.3加入10ul4%红细胞悬液、或者20ul抗体筛选试剂红细胞（sanquin公司）、或者25ul 反定型试剂O细胞（北京金豪公司）； 5.3.4加入患者血清或试剂抗血清40ul； 5.3.537℃孵育15min，离心5min，观察结果。 5.4间接抗人球蛋白试验（重悬法） 5.4.14%红细胞1ml加入3ml生理盐水，900g离心5min，弃上清加入4mlBLISS液，配制 成浓度为1%的红细胞悬液； 5.4.2打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
. ..血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。