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碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

简介:

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法,其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合,并经氧化生成红色醌式结构物,呈深浅不一的红色,产物红色越深,说明碱性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法测定吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:

自备材料:

1、 离心管或小试管

2、 水浴锅或恒温箱

3、 比色杯

4、 分光光度计

操作步骤(仅供参考):

1、 配制标准品工作液:取出Phenol 标准(1mg/ml)恢复至室温后,取溶解于ddH 2O ,使

浓度达到,即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。

编号 名称

TE0007 50T TE0007 100T Storage

试剂(A): ALP Assay buffer 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(B): ALP 显色液 25ml 50ml -20℃ 避光 试剂(C): 显色基液

75ml 150ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml

2ml

RT

使用说明书

1份

2、 准备样品:

① 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离

心取上清,冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。

② 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的

测定,尿液通常也可以直接用于测定,冻存,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。

③ 高活性样品:如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或

PBS 等进行稀释,如鸡血清、血浆可稀释后检测。

3、 加样:按照下表设置对照管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免

产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。

4、 用分光光度计,以0号管(ddH 2O)调零,读取对照管、标准管、测定管的吸光度(即A

对照、A 标准、A 测定),如无法检测,亦可检测吸光度,一般应数小时内检测完毕。

计算:碱性磷酸酶金氏活性单位的定义:在37℃条件下,100ml 待测样品与显色底物(即

ALP 显色液所含物质)作用15min ,产生1mg 酚为一个金氏单位。 以系列Phenol 标准(1~5号管)对应的金氏单位为x 轴,以相应的A 标准(1~5

号管)

为y 轴,绘制标准曲线。以A 测定-A 对照的差值为实际的吸光度,用该差值与标准曲线进行

对比,求出酶活力单位。

0 1 2 3 4 5 Phenol(0.05mg/ml)(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4

0.5

ddH 2O(ml)

0.55 0.45 0.35 0.25 0.15 0.05 相当于金氏单位(U/L)

10

20

30

40

50

加入物(ml)

对照管 标准管 测定管 Phenol 标准(1~5号管) — 0.55 — 待测样品

— — 0.55 ALP Assay buffer

0.50 0.50

0.50

水浴中孵育。

ALP 显色液(37℃提前温育)

0.50

0.50

0.50

立即混匀,水浴中准确孵育。

显色基液 1.50 1.50 1.50 待测样品

0.55

参考区间(37℃):

健康成年人3~13金氏单位

健康儿童5~28金氏单位

注意事项:

1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。

2、如果没有分光光度计,也可以使用酶标仪测定。

3、所测样本的值高于标准曲线的上限,应稀释样品后重新测定。

4、空白管如果显红色,说明ALP显色液不可用,应丢弃。

5、加入显色基液时,应迅速,并且及时混匀,否则显色不充分。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。

相关:

编号名称

CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)

CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

DC0032 Masson三色染色液

DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)

NR0001 DEPC处理水(0.1%)

PS0013 RIPA裂解液(强)

PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)

组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 微量法

组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书微量法 货号:BC1595 规格:100T/48S 产品说明: AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。 自备仪器和用品: 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制: 试剂一:液体×1瓶,4℃保存。 试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品:液体×1支(EP管中),2μmol/mL酚标准液,4℃保存。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂 一)进行冰浴匀浆,4℃、10000rpm离心10min,取上清液待测。 2.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。 二、测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。 2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。 3.空白管:取EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;

加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。 4.标准管:取EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min; 加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。 5.对照管:取EP管,加入40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂 四120μL,混匀;最后加入4μL上清液,混匀后于510nm测定吸光度,记为A对照管。 6.测定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min; 加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。 其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。 三、AKP/ALP活性计算: a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.血液中AKP/ALP活力计算 活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。 AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品:2μmol/mL;V反总:反应体系总体积(mL),1020μL=1.02mL;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.020mL;V样总:1mL;T:反应时间(min),15min。 2.组织中AKP/ALP活性计算 (1)按蛋白浓度计算 活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr (2)按样本质量计算 活性单位定义:37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T

组织及血液碱性磷酸酶试剂盒说明书

货号: QS2002 规格:50管/24样碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,AKP/ALP) 活性测定试剂盒说明书 可见分光光度法 注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义: AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。 测定原理: 在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP 活性。 自备仪器和用品: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制: 试剂一:液体×1瓶,4℃保存。 试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品:液体×1支(EP管中),2 μ mol/mL酚标准液,4℃保存。 粗酶液提取: 1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加 入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。 2.细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建 议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。 3.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。 测定步骤: 1. 分光光度计预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。 3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸馏水,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A空白管。 4. 标准管:取EP管,加入20μL标准品,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A标准管。 5.对照管:取EP管,加入20μL上清液,200μL蒸馏水,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A测定管。 6. 测定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A测定管。 第1页,共2页

碱性磷酸酶活性测定

碱性磷酸酶活性测定 磷酸酶 磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。试验表明,土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用;某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况(特别是磷的状况)。 基本原理: 土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、ɑ-或?-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时,能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性:碱性磷酸酶(用PH10的硼酸盐缓冲液),中性磷酸酶(用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液),酸性磷酸酶(用PH5.0的乙酸盐缓冲液) 试剂配制: 1)甲苯 2)0.5% 磷酸苯二钠 3)硼酸盐缓冲液(PH9.6与PH10.0):称取12.404g硼酸(H3BO3)溶于700ml 去离子水,用稀NaOH溶液调节至PH10.0,用去离子水稀释至1000ml 4) 氯代二溴对苯醌亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%的乙醇溶解,贮于棕色瓶中,存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 5)标准溶液:(a)母液:1g酚溶于蒸馏水中,并稀释至1000ml,溶液保存在暗色瓶中;(b)工作液:10ml溶液(a)稀释至1000ml(1ml含10ug酚)6)0.3%硫酸铝溶液 标准曲线绘制: 取0,1,3,5,7,9,11和13ml酚工作液(b),置于50ml容量瓶中,每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定。以光密度为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线。 操作步骤: 1)取5g风干土置于200ml三角瓶中,用2.5ml甲苯处理 2)处理15min后,加入20ml 0.5%磷酸苯二钠 3)将反应混合物置于37℃恒温箱中,培养24h后,在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。 4) 无土对照:不加土样,其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度,整个实验设置一个对照 5)无基质对照:对每个土样,设置以等体积的水代替基质,其他操作与样品实验相同。

骨碱性磷酸酶250的平衡方法

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢 骨碱性磷酸酶250的平衡方法 导语:骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标,我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值,可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧,我们这 骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标,我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值,可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧,我们这方面的内容关注的比较少,但是骨碱性磷酸酶250却与我们每天的生活息息相关,但是现在很多人出现了骨碱性磷酸酶250不平衡的情况,如果出现问题就会威胁我们的身体健康,所以我们一定要想办法平衡它,那么骨碱性磷酸酶250怎么平衡呢,下面就让我们跟随文章来一起了解一下吧。 平衡方法: 1.碱性磷酸酶升高主要与肝脏和胆囊疾病有关,但是任何检查项目判断疾病都是要相互联系的,不可单一来看。如果仅仅是ALP升高,且升高幅度不大,转氨酶、胆红素、GGT、B超等都正常的话,基本没有什么大碍。小孩母亲是大三阳,有可能在怀孕或生产过程中将病毒传染给孩子,小孩如果也是乙肝病毒携带者的话,只要转氨酶、胆红素正常,B超没问题就可以不予治疗,只要做到每半年检查肝功能、B 超一次即可。肝功能正常的乙肝病毒携带者是不需要任何治疗的,平时做到饮食均衡,不要熬夜,不要喝酒,不要服用有损害肝脏副作用的药物,心情开朗就可以避免发病。但由于免疫激活,有些人到一定年龄后就可能发生肝炎,这时才需要服用护肝、抗病毒药物治疗。 2.如果是生理性的原因,就属于正常现象,大家不必担心。如果是病理性的原因,患者首先要弄清楚是哪种病引起的,并在医生的指导下积极主动地进行治疗。乙肝患者碱性磷酸酶偏高,主要还是由于乙 预防疾病常识分享,对您有帮助可购买打赏

土壤酶活性测定方法

土壤酶活性测定方法 土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法) 一、原理 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的,它仅能水解尿素,水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性,与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高,中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质,根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚,来分析脲酶活性。 二、试剂 1)甲苯 2)10%尿素:称取10g尿素,用水溶至100ml。 3)柠檬酸盐缓冲液(PH6.7):184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾(KOH)溶于蒸馏水。将两溶液合并,用1mol/LNaOH将PH调至6.7,用水稀释定容至1000ml。 4)苯酚钠溶液(1.35mol/L):62.5g苯酚溶于少量乙醇,加2ml甲醇和18.5ml丙酮,用乙醇稀释至100ml(A液),存于冰箱中;27gNaOH溶于100ml水(B液)。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合,用蒸馏水稀释至100ml。 5)次氯酸钠溶液:用水稀释试剂,至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。 6)氮的标准溶液:精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml,得到1ml含有0.1mg 氮的标准液;再将此液稀释10倍(吸取10ml标准液定容至100ml)制成氮的工作液(0.01mg/ml)。 三、操作步骤 称取5g土样于50ml三角瓶中,加1ml甲苯,振荡均匀,15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液,摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤,过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中,再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。(靛酚的蓝色在1h 内保持稳定)。 标准曲线制作:在测定样品吸光值之前,分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液,移于50ml容量瓶中,然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照,以等体积的蒸馏水代替基质,其他操作与样品 实验相同,以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照,不加土样,其他操作与样品实验相同,以检验试剂纯

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法,其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构,呈较深的黄色,产物黄色越深,说明碱性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法测定处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成: 自备材料: 1、 水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、 酶标仪 操作步骤(仅供参考): 1、 配制显色工作液: 取出1支pNPP ,恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ,混匀, 冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、 配制标准品工作液:取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后,取10μl 溶解于190μ 编号 名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份

2.1土壤酸性磷酸酶活性测定

土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约,尤其是磷酸酶的参与,可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明,磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关,与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 (1)0.5%磷酸苯二钠(用缓冲液配制)。 (2)pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液(pH=5.0) A:0.2mol/L 醋酸溶液(11.5mL,稀释至1000mL) B:0.2mol/L 醋酸钠溶液(16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL) 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 (3)氯代二溴对苯醌亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%乙醇溶解,贮于棕色瓶中,存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 (4)酚的标准溶液: 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中,稀释至1L,贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L(每毫升含0.01mg酚)。 (5)甲苯。 (6)0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制:取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液,置于50ml容量瓶中,每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定。以吸光度为横坐标,浓度为纵坐标(mg)绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中,加2.5ml 甲苯,轻摇15min后,加入20ml 0.5%磷酸苯二钠(用醋酸盐缓冲液配制),仔细摇匀后放入恒温箱,在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中,然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时,呈现蓝色,在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性,以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚(mg)=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中, 碱性磷酸酶活性部位呈红色,位于胞桨。 组成: 操作步骤(仅供参考): 1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP 固定液固定,水洗。 2、滴加配制好的ALP 孵育液,放入湿盒中,避光孵育,水洗。 3、Lea 苏木素染色液复染或甲基绿染色液复染。 4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。 染色结果: 临床意义: 1、 类白血病反应积分明显增高,未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。 2、 急性细菌性感染积分明显增高,病毒性感染积分多正常或减低。 3、 再生障碍性贫血积分常增高,PNH 、MDS 积分常减低。 编号 名称 DE0004 4×2ml DE0004 4×10ml DE0004 4×20ml Storage 试剂(A): ALP 固定液 2ml 10ml 20ml RT 避光 试剂(B): ALP 孵育液 B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 临用前,按B1:B2=1:1比例混合,即为ALP 孵育液,即配即用。 试剂(C): Lea 苏木素染色液 2ml 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml 20ml RT 避光 使用说明书 1份 ALP 活性部位 红色 细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

骨源性碱性磷酸酶

骨源性碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶即为NBAP. 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一,它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来,当骨头中钙盐沉淀不足时,该酶分泌增多,骨中钙盐充足时就分泌减少,所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性,籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下: 正常水平≤200u/L 预防水平 250u/L 医疗水平 300u/L 你好!骨源性碱性磷酸酶是用于检测佝偻病的一个指标,当缺少维生素D和钙时,骨头钙化不好时,它会升高,但一般明显升高才有诊断意义。你孩子的结果只比参考值的上限(200)高10,可以是实验误差造成,也可以是佝偻病的早期造成,是不必过度担心,补充维生素D和钙剂,过些日子再复查一次,很可能就正常了。 追问 昨天医生给我宝宝开了龙牡浸在壮骨颗粒和复方三维右酸钙糖浆,可是我的宝宝复方三维右酸钙糖浆吃不下,有没有什么别的药让他可以吃的 回答 你好!如果我没有记错的话,龙牡壮骨颗粒中已含有维生素D和钙,你的孩子缺维生素D和钙并不重,已经够了,两种都吃恐怕不是很必要。 补维生素d 最天然的方法是,多晒太阳,晒太阳可帮助身体合成维生素d ,可以说是没副作用的补VD方法 另外,就是吃含补维生素d 多的食物做成的粥或汤, 而通过食物摄取维生素D是不会引起中毒的。含量较多的食物有大马哈鱼、红鳟鱼、鳕鱼肝油、比目鱼肝油、奶油、鸡蛋、鸡鸭肝等动物肝脏以及牛奶等,或是买回维生素d的保健品进行补VD

土壤酶活性测定方法综合

土壤酶活性测定方法 1、土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法) 一、原理 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的,它仅能水解尿素,水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性,与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高,中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质,根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚,来分析脲酶活性。 二、试剂 1)甲苯 2)10%尿素:称取10g尿素,用水溶至100ml。 3)柠檬酸盐缓冲液():184g柠檬酸和氢氧化钾(KOH)溶于蒸馏水。将两溶液合并,用1mol/LNaOH将PH调至,用水稀释定容至1000ml。 4)苯酚钠溶液(L):苯酚溶于少量乙醇,加2ml甲醇和丙酮,用乙醇稀释至100ml (A液),存于冰箱中;27gNaOH溶于100ml水(B液)。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合,用蒸馏水稀释至100ml。

5)次氯酸钠溶液:用水稀释试剂,至活性氯的浓度为%,溶液稳定。 6)氮的标准溶液:精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml,得到1ml含有氮的标准液;再将此液稀释10倍(吸取10ml标准液定容至100ml)制成氮的工作液(ml)。 三、操作步骤 称取5g土样于50ml三角瓶中,加1ml甲苯,振荡均匀,15min后加10ml10% 尿素溶液和20ml PH 柠檬酸盐缓冲溶液,摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤,过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中,再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。(靛酚的蓝色在1h内保持稳定)。 标准曲线制作:在测定样品吸光值之前,分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml 氮工作液,移于50ml容量瓶中,然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照,以等体积的蒸馏水代替基质,其他操作 与样品实验相同,以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照,不加土样,其他操作与样品实验相同,以检验 试剂纯度和基质自身分解。

碱性磷酸酶测定试剂盒注册技术审查指导原则(2016年修订版)

附件1 碱性磷酸酶测定试剂盒注册 技术审查指导原则 (2016年修订版) 本指导原则旨在指导注册申请人对碱性磷酸酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对碱性磷酸酶测定试剂盒的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件,不涉及注册审批等行政事项,亦不作为法规强制执行,如有能够满足法规要求的其他方法,也可以采用,但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的,随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 碱性磷酸酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血

清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类: 1.连续监测法(磷酸对硝基苯酚底物法) 碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚(4-NPP),生成对硝基苯酚(4-NP),在特定波长处监测吸光度变化速率,可计算碱性磷酸酶活性。 2.比色法(磷酸苯二钠底物法) 碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠,生成游离酚,酚与4-氨基安替比林结合,经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物,在特定波长处监测吸光度值,可计算碱性磷酸酶活性。 从方法学考虑,本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量测定的体外诊断试剂,不包括干化学和酶联免疫检测试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》(国家食品药品监督管理总局令第5号)、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》(食药监械管〔2013〕242号),碱性磷酸酶检测试剂属于酶类检测试剂,管理类别为Ⅱ类,分类代号为6840。 二、注册申报资料要求

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测,记录患儿两种检测结果,给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后,骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%,显著高于血钙检测准确率73.75%,对比结果具有统计学意义(P<0.05)。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据,但血钙误诊率较高,而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高,临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断,从而提高患儿诊断正确率及治疗效果,保障其预后及生活质量。 标签:骨源性碱性磷酸酶;血钙;对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病,发病原因主要为机体中钙营养严重丢失,目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日~12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究,从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果,为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据,现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例,年龄1~6岁,平均年龄( 2.98±1.02)岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织(WHO)制定的佝偻病诊断标准;②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病;③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病;④体温正常,无骨折、强直性骨关节炎等疾病;⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测,记录患儿两种检测结果,给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本,骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法,由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒,以检测结果不大于200U/L为阴性,反之为阳性;血钙采用偶氮砷法检测,由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂,以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性,反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析,计量资料采用t检验(由x±s表示),计数资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值

作者单位:100044北京大学人民医院检验科[葛艳玲(现工作单位100035北京积水潭医院检验科)] 通讯作者:张正,电子信箱:zhangzh4768@https://www.doczj.com/doc/fc7804258.html, ?临床实验诊断研究? 骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值 葛艳玲 张正  【摘要】 目的 检测恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤及转移性骨肿瘤患者血清中的总碱性磷酸酶 (T ALP)和骨型碱性磷酸酶(BALP)活性,以观察T ALP和BALP在骨肿瘤的鉴别诊断中的价值及在监 测恶性骨肿瘤治疗中的作用。方法 对2004年积水潭医院骨肿瘤科收治的40例恶性骨肿瘤、40例 良性骨肿瘤及14例转移性骨肿瘤患者,采用法国临床化学会推荐的速率法测定血清T ALP及酶联免 疫吸附(E L I S A)方法测定BALP水平。结果 恶性骨肿瘤组的T ALP活性为(325155±356136)U/L, BALP活性为(177119±240167)U/L,与同龄对照组T ALP(120170±70159)U/L,BALP(61130± 44145)U/L比较有统计学意义(P<0105)。转移性骨肿瘤组的T ALP(100114±35139)U/L,BALP (32193±15168)U/L,与同龄对照组T ALP(57164±11106)U/L,BALP(19192±7153)U/L比较有 显著性统计学意义(P<0101)。而良性骨肿瘤组与同龄对照组相比无统计学意义(P>0105)。同时 恶性骨肿瘤与其他两组比较也都有统计学意义(P<0101),并且恶性骨肿瘤组患者化疗前后的结果 也有统计学意义(P<0105)。结论 血清T ALP和BALP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的 生化指标,并对骨肿瘤的鉴别诊断及疗效观察具有一定的临床意义。作为骨肿瘤的检测指标,血清 BALP比T ALP更为特异和敏感。 【关键词】 碱性磷酸酶; 骨肿瘤 Appli ca ti on of bone2spec i f i c a lka li n e phospha t a se i n bone tu m or GE Yan2ling,ZHAN G Zheng1 D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing U niversity Renm ing Hospital,B eijing100044,China(G E Yan2ling, D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing J ishuitan Hospital,B eijing100035,China) Corresponding author:ZHAN G Zheng,Em ail:zhangzh4768@yahoo.co https://www.doczj.com/doc/fc7804258.html, 【Abstract】 O bjecti ve To deter m ine the seru m levels of t otal alkaline phos phatase(T ALP)and bone2s pecific alkaline phos phatase(BALP)in patients with malignant bone tu mor,benign bone tu mor and malignant tu mor metastasized t o the bone and t o exp l ore the value of T ALP and BALP in identifing and diagnosing of bone tu mor,als o in monit oring the effect of therapy about malignant bone tu mor1M ethods  Seru m T ALP and BALP in40malignant bone tu mor patients,40benign bone tu mor patients and14malignant tu mor metastasized t o the bone patients in2004were studied1Seru m T ALP was assayed by SF BC rate method and BALP by enzy me linked i m mu mo abs orbence assay(E L I S A)1Results The seru m levels of T ALP and BALP were(325155±356136)U/L and(177119±240167)U/L res pectively in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(120170±70159)U/L and (61130±44145)U/L(P<0105)1The seru m levels of T ALP and BALP were(100114±35139)U/L and (32193±15168)U/L res pectively in malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup were als o significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(57164±11106)U/L and(19192±7153)U/L(P<0101) 1The seru m levels in benign bone tu mor gr oup were higher than those of the sa me age contr ol gr oup,but the t w o gr oup s have no significantly statistics(P>0105)1A t the sa me ti m e,the seru m levels in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of benign bone tu mor gr oup and malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup(P<0101)1The seru m levels of T ALP and BALP in p re2therapy malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of post2therapy(P<0105)1Conclusi on Seru m T ALP and BALP were sensitive and convenient bi oche m ical indexs which reflected metabolis m of patients of bone tu mor1Moreover,they have clinical i m portance f or differential diagnosis and observati ons of therapy1 A s an index of bone tu mor,seru m BALP was more s pecific and sensitive than T ALP1 【Key words】 A lkaline phos phatase; Bone tu mor 骨肿瘤虽不是常见病,但在骨科领域内占有重 要地位。骨肿瘤的诊断必须是临床、影像和病理三

土壤酶活性测定方法

土壤酶活性测定方法 一、蔗糖酶: 3,5-二硝基水杨酸比色法 1. 试剂配制 (1)2N氢氧化钠200mL:称取16g 氢氧化钠,用蒸馏水溶解,定溶于200mL容量瓶中。 (2)3,5-二硝基水杨酸溶液1000mL:称5g二硝基水杨酸,溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中,再加300g酒石酸钾钠,用蒸馏水稀释至1000mL(不超 过7天)。 (3)1/15M 磷酸氢二钠1000mL:23.867g N a2HPO4·12H2O溶于1000mL蒸馏水中。 (4)1/15M 磷酸二氢钾1000mL:9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。 (5)pH5.5磷酸缓冲液100mL:5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) (6)8%蔗糖1000mL:称取80g蔗糖,用水溶解,稀释至1000mL。 (7)甲苯。 (8)标准葡萄糖溶液(1mg/mL)1000mL:取少量葡萄糖在真空干燥箱中,于55℃条件下真空干燥至恒重。然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄 糖母液(10mg还原糖/ml)。取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准 葡萄糖液(1mg/ml); 2. 操作步骤 (1)标准曲线绘制:分别取标准葡萄糖液0.4mL,0.8 mL,1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中,另取一管做空白对照。用蒸馏水补足至10mL。加入3.0mL 3,5-二硝基水杨酸,沸水浴5min,随即在自来水流下冷却。最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。 比色后,以光密度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。 (2)土壤蔗糖酶活性测定:称5.00g土样,置于50mL三角瓶中,注入15.0mL 8%蔗糖溶液,5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。到时取出,6000rpm离心10min。取1.0mL上清液(新鲜土样所吸取的上清液体积为1.0mL;风干土及保存1个月的土样所吸取的上清液体积为0.5mL)于50mL比色管中,然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。 为消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差。每一土样需做无基质对照。整个实验需作无土壤对照。 3.结果计算 蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。 葡萄糖(mg)=(a-b)×c 式中 a---从标准曲线查得的样品(加了基质)对应的葡萄糖浓度,mg/mL; b---从标准曲线查得的样品对照组的葡萄糖浓度,mg/mL; c---换算成1g土的系数。 二、脲酶: 靛酚比色法 1. 试剂配制 (1)pH6.7柠檬酸盐缓冲液1L:取184g柠檬酸溶于300mL蒸馏水中,另取147.5g KOH溶于水,再将两种溶液合并,用1N NaOH将pH调至6.7,并用水稀至1L。 (2)苯酚钠溶液:称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中,加2mL甲醇和18.5mL丙酮,然后用乙醇稀释至100mL(A液),保存在冰箱中。称取27g NaOH溶于100mL 水中(B液),保存在冰箱中。使用前,取A、B两液各20mL混合,并用蒸馏 水稀释至100mL备用。 (3)次氯酸钠溶液100mL:取10%的次氯酸钠溶液9mL,用水稀释定容于100mL 容量瓶中,即活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。 (4)10%尿素溶液500mL:取50g尿素,用水稀释至500mL。 (5)甲苯。

碱性磷酸酶显色剂使用方法

5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT (四唑硝基蓝)是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 使用方法 1. 在膜或组织切片,最后一次洗涤完毕后,加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存;组织切片或细胞样品,显色反应终止后,可以用中性红复染染色 干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种 碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶,同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 成骨细胞染色方法 以ALP为目标物的检测方法: 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下,以镁离子作为激活剂,能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸,磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙,再与硝酸钴作用形成磷酸钴,经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 (1)将无菌的玻片放入培养皿中,传代时加入适量的细胞悬液,作细胞爬片,呆细胞长满玻片后取出。 (2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min,蒸馏水冲洗数次。 (3)入孵育液中,37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 (4)2%硝酸钴中浸3-5min,蒸馏水洗数次。 (5)1%的硫化铵中2min,自来水冲洗,自然干燥,封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法: 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液(PH 9.2)50ml 六偶氮副品红0.5ml

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求beiken

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法) 适用范围:本品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格 1.2产品组成成分 试剂盒由试剂A 、试剂B 组成,各组分见表2。 表2 试剂组成 2.1外观 试剂为澄清、透明溶液,无沉淀及絮状悬浮物,外包装完整无破损。 2.2净含量 用通用量具量取,试剂的净含量应不少于标示量。 2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度

用试剂盒测试生理盐水,在405nm的波长下测试,1cm光径下试剂吸光度值不大于0.80。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 用试剂盒测试生理盐水,试剂空白吸光度变化率ΔA/min,应不大于0.005。 2.4分析灵敏度 测试一定浓度的碱性磷酸酶,120U/L的碱性磷酸酶引起的吸光度变化率ΔA/min 大于0.024。 2.5线性区间 试剂线性在[25,750] U/L区间内,线性相关系数│r│应不小于0.990,当检测范围在[25,100)U/L区间内,绝对偏差不超过±10U/L;当检测范围在[100,750]U/L区间内,相对偏差不超过±10%。 2.6精密度 2.6.1重复性 用质控品重复测试所得结果的变异系数CV应不大于5%。 2.6.2批间差 用同一水平浓度的质控品分别测试3个不同批号的试剂盒,其相对偏差不大于10%。 2.7准确度 进行比对试验(与国内批准上市的试剂盒进行比对),用线性回归方法计算两组结果的相关系数(│r│应不小于0.990)及每个浓度点的偏差。当测试值在[25,40)U/L区间内,偏差不超过±4 U/L;当测试值在[40,750]U/L区间内,偏差不超过±10%。 2.8稳定性 试剂贮存在2℃~8℃条件下,有效期为18个月。有效期满后,分别检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项,结果符合各项要求。

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