食用菌母种的灭菌与培养
食用茵在生长过程中，会受到来自于自然界的各种有害微生物的侵染，这些有害微生物在食用菌栽培上我们通称为杂菌。杂菌能通过各种渠道污染培养基，使制种和栽培失败。因此在食用菌制种和栽培过程中，一个核心问题就是要采取各种措施做好培养基和空间的消毒灭菌工作。食用茵生产中常提到的灭菌和消毒是有本质区别的，灭菌是用物理或者化学的方法杀死物品或环境中所有微生物和芽孢的过程，消毒是用物理或者化学的方法杀死物体表面部分病原微生物的过程。(1)母种培养基的灭菌在母种培养基制作中常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法，它是最常用而且灭菌最彻底的一种方法。具体方法步骤及注意事项如下：①选锅、加水。选用手提式高压蒸汽灭菌锅，向灭菌锅内加水至水位标记高度。注意：水不可过多也不可过少，过少易烧干：过多棉塞易受潮，引起杂菌污染。②装入培养基。把培养基有序竖直排放人灭菌锅内，留开通气孔，并保证蒸汽流通。试管口和棉塞不能直接接触锅壁，上面要盖2层报纸或1层防水油纸，防止锅盖下面的冷凝水打湿棉塞。最后均匀拧紧锅盖上的螺丝，勿使漏气。③加热灭菌。将装入培养基的灭菌锅放置在2-3千瓦的电炉上进行加热，当压力升至0.05兆帕时，打开放气阀缓慢放气，让压力降至零，再放气10-15分钟，当有大量热蒸汽排出时，关闭放气阀升压灭菌。当压力升至0.11-0.12兆帕时，开始计时，并调节火力大小，始终维持所需压力30分钟。④停止加热，缓慢减压。在0.11-0.12兆帕压
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实验一食用菌母种制作 、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。 、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、 烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管(18x180mm、手术刀、镊子、75%酉精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。 三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA 培养基配方 马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1) 熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200 克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1 000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000 毫升。 (2) 分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5 左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。 (3、捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。 ( 4 、灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。 (5 、摆斜面，培养基长度约为试管长度的1 /2 。斜面试管上覆盖洁净的厚 毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水 ①菌种分离与培养 （1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要
求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。 （2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室内避光培养7-8 天，检查菌丝生长情况。 四、实验结果 每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。 五、作业 1. 食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？ 2. 组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作失败？ 实验二食用及药用菌原种制作技术 目的要求： 1、了解原种培养基的配制原理及过程；
1. 目的：规范消毒灭菌与隔离原则，强调双向防护，减少外源性医院感染，降低医院感染发病率，提升医 院的医疗服务品质。 2. 范围：全院各科室工作人员。 3. 权责： 医院感染管理科负责制度的修订、完善及督查，医务部、护理部、后勤中心等部门参与协作管理。 各部门负责人负责监督制度落实。 工作人员必须认真阅读，全面掌握相关文件及规程。 4. 定义：无。 5. 作业内容： 消毒与灭菌方法 医务人员必须遵守消毒灭菌原则，进入人体无菌组织、器官、腔隙，或接触人体破损皮肤、破损黏膜、组织的诊疗器械、器具和物品应进行灭菌；接触完整皮肤、完整黏膜的诊疗器械、器具和 物品应进行消毒。重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应行清洁，再消毒或灭菌，所有 医疗器械在检修前应先消毒或灭菌处理。 根据物品性能选用物理或化学方法消毒灭菌。耐热或耐湿物品灭菌首选物理灭菌法：手术器具及物品，各种穿刺针、注射器等首选压力蒸汽灭菌；油、粉、膏等首选干热灭菌。不耐热、不耐湿 的物品如各种导管、精密仪器、人工植入物宜采用低温灭菌方法如环氧乙烷灭菌、过氧化氢低 温等离子体灭菌或低温甲醛蒸汽灭菌等。消毒首选物理方法，不能用物理方法消毒的方选化学 方法。 化学灭菌或消毒可根据不同情况分别选择灭菌、高效、中效、低效消毒剂。使用化学消毒剂必须了解消毒剂的性能、作用、使用方法、影响灭菌或消毒效果的因素等，配制时应注意有效浓度， 并定期监测，记录。更换灭菌剂时，必须对用于浸泡灭菌物品的容器进行灭菌处理。 消毒隔离管理细则 医务人员上班时应着装整洁，一律穿工作服，工作场所不得进食和堆放食物。 手卫生执行卫生部2009年下发的《医务人员手卫生规范》(WS/T 313-2009)。 在实施标准预防的基础上，根据不同情况对感染患者采取相应隔离措施。接触特殊感染和隔离患者前必须戴手套、穿隔离衣并及时更换，严禁将污染手套、隔离衣接触其他物品；离开隔离区 域应使用手消毒剂。 无菌操作前注意周围环境应清洁无尘，洗手、戴口罩帽子、严格遵守无菌操作规程。
1、菌种：是指能够进一步繁殖的纯的菌丝体。 2、初生菌丝：是由孢子萌发形成的单核菌丝，又称一级菌丝。 3、代料栽培：在食用菌生产中，用农作物秸杆、废料等代替段木进行栽培的一种食用菌栽培形式，如袋 料、畦床栽培。 4、无菌操作：采用物理、化学的方法，将环境、用具中的杂菌彻底杀灭，使之形成无菌的状态，在这种 无菌的条件下进行食用菌生产操作称无菌操作。 5、灭菌：采用物理或化学的方法杀灭所有微生物（杂菌）的操作。 6、大型真菌：真核细胞型微生物，有典型的细胞核和完善的细胞器，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化 的菌类。 7、杂菌：指含有对真菌生长有害的其他微生物，如（放线菌、细菌等）。 8、发菌期：从接种到菌丝长满瓶或袋的时间。 3、发菌期：从接种到菌丝长满菌袋或菌瓶的时间。 9、排冷气：在利用高压锅灭菌前更将锅内的冷气排出，可以一次性排气，当气压上升至0.5时当排气阀 打开；也可在先打开排气阀，当温度上升至一定时，再关闭排气阀。 10、常压灭菌：即在常压下，利用常压灭菌锅将培养基内部及表面微生物杀死的一种灭菌方法，一般是 100℃蒸汽蒸制8-12小时。 1、锁状联合:在双核菌丝上的横隔膜处产生的一个具有特征性的侧生突起，它往往发生在菌丝顶部双核细 胞的两核之间。 2、担子果:高等担子菌承载担子及担孢子的一种高度组织化的结构。 3、菌环:内菌幕遗留在菌柄上的环状物，常在菌柄的上部。 4、初生菌丝:担孢子萌发后先形成芽管，继而伸长，生长成为管状的菌丝，并形成隔膜，对于多数食用菌 来说，隔膜使其成为单核的多细胞菌丝，这种单核菌丝就称为初生菌丝。 5、食用菌菌种:在适宜基质上生长良好并已充分蔓延，可用作食用菌生产的种源菌丝体。 6、栽培种:由原种移植到固体或液体培养基上扩大繁殖的菌丝体。 7、代料栽培:利用木屑以及棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯、麦麸等农副产品代替段木，以塑料袋、菌种瓶等为 容器栽培食用菌的技术。 8、灭菌:用物理或化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物（包括细菌的芽孢），使之达到无菌状态。 9、食用菌的驯化:野生大型可食用真菌经人类引种栽培并不断选择，逐渐成为人类所需的栽培品种的过程。 10、非病原病害:食用菌生长过程中由于受到不适宜的环境条件的刺激而引起的病害。 4.堆料发酵——把料拌好键堆，依靠微生物似的活动发酵，使料堆温度升至60~ 65℃达到杀菌灭虫的目的 5.次生菌丝——由单核菌丝培养转化而成又称双核菌丝 2、母种：用组织分离法得到的第一代菌丝体，又称一级种或试管斜面母种。 4、代料栽培：用锯末、棉子壳、秸杆等代替段木栽培的方法。 5、反季节栽培：不按正常季节进行的栽培。 1、按食用菌的生活方式不同，可将其分为寄生型、腐生型、共生型，三种类型，大部分食用菌属于腐生型。 2、菌种保藏在生产中应用最多的是低温保藏法，保藏温度为0～ 4 ℃度。 3、食用菌的营养物质种类繁多，根据其作用和性质可能分为碳源，氮源，无机盐，生长因子。 4、食用菌菌丝体，生长阶段和子实体生长阶段对环境条件要求呈现出一定规律性，对温度要求一般是前__高__后__低_，对湿度、光线、氧气要求一般是前__少___后__多___。 5、在菌种分离过程中多采用__组织分离法___法，对菌肉肥厚的子实体多采用___子实体（菌内）__组织进行分离进行接种； 1、食用菌菌种的生产，一般需要经过母种、原种和栽培种三级培养过程。 2、在无菌条件下____，进行的菌种移植操作称为无菌操作。 3、食用菌都是__异养型的生物，绝大数为___腐_生，少数为___寄_生或共_生。 4、平菇栽培不需灭菌，这种栽培方式称生料栽培_ 5、菌盖下面片层状的结构称___菌褶 6、营养液中加入1.5%~2%琼脂制成的培养基称____固体培养基_。 7、能够满足食用菌生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质称_营养物质。
实验一食用菌母种制作 一、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。 二、主要仪器设备及药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。 三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方 马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄 片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长 度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。 （3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。 （4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。 （5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养 （1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿备用。 （2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。 四、实验结果 每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。 五、作业 1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？
食用菌母种1级种培养基、 食用菌原种2级种培养基 简法生产与灭菌创新技术 湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场的科技人员经过多年探索实践，研究成功食用菌母种1级种试管培养基、食用菌原种2级种培养基简法灭菌创新技术。其技术涵盖了食用菌菌种母种1级种试管培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术和食用菌菌种原种2级种培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术。现将其技术要点介绍如下： 1. 食用菌菌种母种1级种试管培养基简法生产与复制创新技术 该技术采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。1支试管（18毫米×180毫米玻璃试管）装入颗粒培养基约10克，成本不足1角钱，棉花塞堵封试管口。一次可根据生产需要，制作分装试管500支～1000支。 2. 食用菌菌种原种2级种培养基简法生产与复制创新技术 该技术同样采用湖1北3省0宜85都市16湾市86食用16菌天
麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷粒、麦粒、玉米粒为原料。取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀即可。盛装原种2级种培养基的容器为250毫升输液瓶即生理盐水瓶。1瓶装入颗粒培养基约100克，成本不足5角钱，棉花塞堵封瓶口。一次可根据生产需要，制作分装100瓶～500瓶。 3. 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术 3.1 灭菌设备： 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术选用的灭菌设备为“苏泊尔”压力锅，即家庭做饭用的压力锅，又称家用高压锅。 3.2 灭菌操作： 向“苏泊尔”压力锅内注水5厘米深，将制备好的食用菌母种、原种培养基分别直立于压力锅内，盖上锅盖，生火灭菌40分钟～50分钟即可。 小结：该技术突破了传统方法需要用牛皮纸包扎试管口或瓶口棉花塞，全封闭高压灭菌却仍不能保证100%不湿棉花塞的难题，达到了不用专用高压灭菌锅，不用高档灭菌设备，不包扎棉花塞全裸露灭菌却100%不湿棉花塞的理想效果。其突出的特点是灭菌设备为家用炊具，可一锅多用，且价廉易购，灭菌方法简单实用，灭菌效果好。彻底解决了食用菌母种和原种制作难、消毒灭菌更难的技术难题，为食用菌种简法生产开拓出新天地。
消毒管理制度 根据《消毒管理办法》规定，制订本制度： 一、成立消毒管理组织，严格执行国家有关规范、标准和规定，定期开展消毒与灭菌效果检测工作。 二、按照批准的诊疗范围购置必须的消毒、灭菌设施，并保证正常使用。 三、加强对工作人员的消毒技术培训，掌握消毒知识，并按规定严格执行消毒隔离制度。 四、各种注射、穿刺、采血器具应一人一用一灭菌。凡接触皮肤、粘膜的器械和用品必须达到消毒要求。 五、建立并执行进货检查验收制度，采购消毒产品时，应当索取加盖鲜章的《生产企业卫生许可证》、《产品备案表》或者《卫生许可证》复印件。一次性使用的医疗用品用后应当及时进行无害化处理。 六、治疗换药处置工作前后均应洗手，各种治疗护理及换药操作应按清洁伤口、感染伤口、隔离伤口依次进行，感染性敷料应放在黄色防渗漏的污物袋内及时焚烧处理。 七、发现感染性疾病暴发、流行时，及时报告当地卫生局，并采取有效消毒措施。
应急物品保管和请领制度 一、各种物品必须有专人负责保管。 二、各种物品要摆放整齐、醒目。 三、要每日清扫、擦拭各项物品，保证物品清洁。 四、各项物品清洗、消毒后方可入库保管。 五、保管员要认真做好各项物品的请领和发放登记。 六、物品要保证充足，以备所需之用。 七、当物品回收时，一定要清点好数目再放回原处。 八、保管员要掌握每项物品所存放的方位和数量。 九、对损坏的应急物品要及时上报领导，并保存好做好记录，以备替换新的应急物品，保证应急物品的数量充足。
疫苗使用管理制度 一、第一类疫苗、第二类疫苗应到市疾控中心领取。 二、第一类疫苗每月必须下发到各接种单位，以保证应种儿童的正常免疫接种。 三、各种疫苗必须设专人管理、登记、储存、分发。 四、登记包括领取日期、批号、生产厂家、失效日期、领取数量、规格等等。 五、领取或接收第一类疫苗或第二类其它疫苗时，必须尽快装入冰箱内。必须按疫苗规定的温度装入冷冻室、冷藏室或低温冰箱内。 六、装入冰箱的疫苗必须距冰箱内壁5—10cm，不得紧贴冰箱内壁。 七、各种疫苗下发时，必须先下发短效期的，后下发长效期的。 八、下发一类或二类疫苗时，必须有登记，有下发日期、数量、批号、生产厂家、失效日期、经手人签字等。 九、每年的第四季度上报所需第一类疫苗计划。 十、指导与培训全县各级接种单位或接种医生对一类或二类疫苗的使用方法、注意事项、接种部位、剂量、异常反应等相关知识。 十一、冷链设备的管理人员每天应2次（上午和下午各1次）查看并填写温度记录表（双休日除外），随时查看冰箱是否正常运转。
丹麻镇锦州村食用菌种植实施方案 为发展农业生产，振兴农村经济，增加农民收入，根据青海省农牧厅“四五计划”要求，围绕丹麻镇农业发展规划，制定本实施方案。 一、指导思想坚持以科学发展观为指导，以建设现代农业、促进农民增收为目标，以市场 为导向，以食用菌示范基地为基础，以食用菌专业合作社建设为重点，科学规划，狠抓落实，突 出重点，以点带面，稳步、逐步整体推进，实现由传统农业向现代农业转变，走可持续发展的路 子。 二、任务目标按照青海省农牧厅“四五计划”项目安排，积极开展创业富民活动，充分发挥自身专业优势，结合累积技术和管理经验搞好示范基地，并作为锦州村食用菌种植技术现场观摩、培训和推广中心，带动锦州村民规模化种植食用菌，从而达到创业富民的目的。 三、工作重点 示范优质品种：主要是双孢菇、平菇等。 集成高产技术：本着节本增效、高产优质的原则，实现良种化，良种良法配套，综合防治病虫害，利用农作物秸杆栽培食用菌，拉长生物链条，开发高蛋白食品。 加强病虫害防控：优先采用科学育种、选用抗病品种、利用天敌、灯光诱杀等农业、生物和物理防治措施。化学防治坚持“预防为主，综合防治”的原则，在菇体生长期杜绝施用化学农药，无菇期适量使用低残农药，在突出生态、确保安全的前提下，掌握适时适期防治，把病虫危害降低到最小程度。 四、主要技术内容 （一）主推技术 该技术通过利用选育低温型优良食用菌品种进行反季节栽培，实现低温、高海拔地区成功栽培食用菌的目的，对于提高产量、增加农民收入、满足社会对食用菌日益增长的消费需求具有非常重要的意义，推广前景十分广阔。 1.品种选择及菌种生产技术。根据锦州村特殊气候条件，采用反季节栽培模式，推广应用优质 高产、适销对路及价值较高适宜反季节栽培的低温双孢菇、平菇和香菇，针对锦州村冷凉气候特点， 采用塑料大棚设施或空置平房，进行栽培。菌种生产按照食用菌菌种生产技术规程进行母种、原种、 栽培种生产。 2.培养料选用。栽培原料要求新鲜、无霉变，不含有毒有害物质，保持适宜的颗粒度和一定的吸水能力。培养料采用通风发酵处理和高压、常压灭菌，达到防霉速生增产的效果。 双孢菇具体配比如下（以100 平方米用料计算）：稻草3500斤，牛粪3000斤，过磷酸钙100 斤，石膏100斤，石灰60斤、尿素30千克、发酵剂5 千克、农药若干。
食用菌常见消毒灭菌方法 食用菌的消毒灭菌 在物品及空气中分布着大量微生物。进行食用菌生产必须树立严格的无菌观念，掌握和运用消毒、灭菌技术，严防杂菌污染，保证菌种优良纯正,使食用菌顺利生长发育，以获得较好的经济效益。消毒灭菌是排除杂菌干扰，为食用菌创造洁净生长环境的重要保证。也是食用菌生产中的一项基本技术。 几个重要概念： 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即只能杀死微生物的营养体，不能杀死微生物的休眠体。 防腐：是指用物理学或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法（如过滤、离心分离、静电吸附等）除去液体或气体中微生物的方法。 1.灭菌 杀死一定环境、物品中的一切微生物（包括芽孢），使一定范围内的微生物永远丧失生长繁殖能力，使之达到无菌程度，是灭菌的目的。经过灭菌的物品称“无菌物品”。灭菌可分为杀菌和溶菌。 杀菌是指菌体失活，但菌形尚存。溶菌是指菌体死亡后发生溶解、消失的现象。 2.消毒：杀死环境、物品中的病原菌（杀不死芽孢）,而对被消毒物品基本无害的方法为消毒。 3.防腐：暂时抑制其生长。使微生物暂时处于不生长、不繁殖、但又未死亡的状态，称为防腐。属于一种抑菌作用。 4.除菌用冲洗、过滤、离心、静电吸附等机械手段，除去微生物的方法为除菌。 消毒灭菌主要利用物理或化学因素。各种理化因子究竟能起到灭菌、消毒、防腐中的哪种效果，主要取决于本身的强度或浓度、作用时间、微生物对理化因子的敏感性及菌龄等综合因素的影响。任何消毒灭菌法的使用，必须达到既杀灭物品中的微生物，又不破坏其固有性质的目的。 物理消毒灭菌 食用菌生产中常用的物理消毒灭菌法是热力灭菌及紫外线灭菌,两者都属于强杀伤力因素。 一、热力灭菌 原理： 高温使菌体蛋白质、核酸、酶等重要细胞物质发生凝固或变性失活。日常生活中的炒、烧、烤、蒸、煮等对微生物都有一种短平快的效果。根据加热方式的不同，可分为干热灭菌和湿热灭菌两类。在实践中，可根据灭菌物品的性质和具体条件选用。 （一）干热灭菌利用火焰、热空气杀死微生物(适于耐烧、耐烤物品),干热灭菌以其快速在灭菌领域占有一席之地，干热灭菌器灭菌范围较窄。 (1)酒精灯烧接种工具、管口、瓶口→烧至红热(冷却用)简、快、彻底 (2)烘烤法(热空气) 适于体积较大的玻璃、金属器皿，试管、培养皿、三角瓶、烧杯、吸管等包装放入烘箱→160-170℃、2h断电→70℃以下取物。注意：升降温勿急；勿超180℃；用时随用随开包。干热灭菌简便易行，能保持物品干燥，但使用范围有限，只适用
一、检验科消毒隔离制度 一、人员： 1、医务人员衣帽整洁，不戴首饰，不留长指甲。 2、在各种操作前，应用流动水冲洗双手，操作后进行手消毒，可用洁肤柔或75％酒精棉球。 二、环境： 1、保持室内空气新鲜，环境清洁，每天开窗通风并用紫外线照射消毒，同时做好相关监测及登记工作。 2、室内空调定期清洗、消毒、并做好记录。 3、候诊椅、办公桌台面，地面等每日用500mg/L有效氯消毒液擦拭两次。但遇可疑的传染性疾病的病人或其分泌物时，应立即进行消毒。 三、物品： 1、医务人员必须遵守消毒灭菌原则：进入人体组织或无菌器官的医疗用品必须灭菌，各种注射、穿刺、采血器具必须贯彻一人、一用、一灭菌的方针，接触病人皮肤、黏膜的器械和用品必须消毒或灭菌。 2、无菌物品应存放于专柜或专格（抽屉），并保持清洁、干燥、整齐，在有效期范围内；无菌包有效期为半年；消毒包体积应<30×30×25㎝。 3、器材消毒： ⑴玻璃器材：采集标本的器材如玻片、试管要做到一人一用一消毒，污染的试管、滴管、离心管、玻片、玻棒、平皿等，应立即浸入含2000mg/L有效氯消毒液中浸泡1小时，再清洗干净、烘干。 ⑵止血带应一人一用，使用后浸入1000mg/l有效氯消毒液中浸泡1小时，冲净晾干。 ⑶贵重仪器：显微镜、离心机、天秤、细胞计数器械、冰箱等局部轻度污染，可用酒精棉球进行擦拭；若离心时离心管未密闭，试管破裂，液体外溢，应清洗离心机内部，特别是有可能受肝炎病毒等污染时，宜戴上手套用有效氯消毒液进行擦拭消毒，作用30min—60min。 4、医疗废弃物的处置： ⑴分类收集：按感染性、病理性、损伤性、药物性、化学性废物分类收集。 ⑵妥善处置：感染性废弃物置于专用黄色医疗废物包装袋内；安瓿、针尖等置于锐器盒内。 ⑶统一运送：处置好的包装合格的医疗废物由专人运送至中心医疗废物暂贮处，由专门处置公司前来收取。 ⑷遇特殊情况：如处置铜绿假单胞菌、厌氧菌、结核菌等感染伤口，按特殊菌种处理，更换敷料后分类置于双层专用黄色医疗废物包装袋内，按要求标示明显，统一处理。 二、预检、分诊消毒隔离制度 1、医务人员在上岗前必须衣帽整洁，操作前洗手、戴口罩。 2、办公桌面，治疗盘等每日用500mg/L的有效氯消毒液擦拭两次，但遇接诊可疑传染性疾病时，应立即进行消毒。 3、体温表使用后应先用棉球擦拭再浸泡。 4、体温表按要求进行消毒：第一道：2000mg/L有效氯消毒液浸泡5分钟，清水冲洗、擦干、甩表；第二道：2000mg/L有效氯消毒液浸泡30分钟；第三道：用冷开水冲洗后擦干后备用。消毒液每天更换一至二次。盛器加盖，每周总消。 5、按各传染病规定做好个人防护及自身准备工作。 6、按照病人主诉及症状，正确做好分诊工作。对于体温≥38的患者，应详细询问其它症状，发口罩、进行流行病学的相关调查，并做好专册登记。同时引导至发热门诊。对于肠道及肝
工厂化食用菌生产中杂菌污染的危害及消毒灭菌的防控措施 简介 食用菌作为21世纪朝阳产业，具有高蛋白，低脂肪，无污染，无公害。而且食药兼用的优势，被联合国粮农组织推荐为健康食品。已受到世界各国的广大消费者普遍青睐。然而食用菌生产中所涉及到的原料、用水、设备、空气等都有着大量的真菌、细菌、病毒等微生物和虫害，他们无时无刻不在于食用菌争夺养料和侵害食用菌。这些杂菌和病虫害给食用菌生产造成很大危害和损失，所以在食用菌育种和栽培中抑制和消灭有害微生物的活动，对食用菌进行纯培养是很有必要的，因此灭菌、消毒、防腐和除菌在食用菌生产中是非常重要的一环。 食用菌消毒灭菌几个重要概念 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料，容器，用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中，物体表面及环境中的一部分微生物。即只能杀灭微生物的营养体，不能杀灭微生物的休眠体。 防腐：是指用物理或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械方法（如奥克泰士冷雾机、奥克泰士气溶胶喷雾器等）除去液体或气体中微生物的方法。 消毒灭菌防腐除菌做为食用菌最重要的环节，它可以： 触及消毒办法及其消毒产品的选用； 触及各种类型消毒产品的功能及其好坏； 触及各种消毒产品的毒性及适用性、可逆性； 触及消毒产品对运用环境的温度、湿度要求，即消毒产品对环境的适应性； 触及消毒的机理与运用注意事项等等一系列问题。 食用菌消毒灭菌的重大意义 笔者经过调查发现有许多直接出产者到安排者直至媒体，从本质上讲对消毒能够说极不注重，许多人只把消毒视为食用菌出产中一种隶属的、非必须的东西来对待。他们在策划、安排食用菌出产时，脑筋里想的是菌种的优选与引入、出产设备的先进性、可靠性这些硬件，而对消毒这一重要问题住往不宵一顾，事到最终才草率的想到消毒的处理。 其实消毒是食用菌出产链中（培养料配比→拌料→装袋（瓶）→灭菌→预冷→冷却→接种（结菌）→排场→出菇→采收）从头到尾极具关鍵含义的环节，在这些环节中，前期比较重要的环节为“接种”。然而自然界里到处有微生物的存在，如空气、所有原料、水以及一切用具和器具的表面，这些微生物对食用菌菌种而言，都属于有害菌，即通常所说的杂菌。而这些“杂菌”在接种环节会大大影响接种成功率及日后食用菌外形长相的美观度，所以必须进行严格消毒灭菌。 消毒剂的选择 目前国内食用菌行业的消毒主要是采用以臭氧、紫外线、甲醛为代表的静态消毒方法，但上述消毒方法的最大缺点是对人体的损害大。如今，食用菌趋向于绿色发展趋势，急需消毒效果好，操作方便的绿色方法。本文笔者通过多年总结及结合食用菌行业特点，总结出消毒剂应具备的特性： 需要具有广谱高效的杀菌效果，一种消毒产品就能杀灭细菌、真菌、霉菌等病原
食用菌接种箱如何灭菌 在食用菌制种和栽培上，因各种原因引起的杂菌污染屡见不鲜。各种杂菌（如霉菌和细菌）几乎无一例外地都是竞争性的，它们和食用菌生活在同一培养基上，争夺食用菌的营养和生活空间，影响食用菌的生长；许多杂菌还通过产生一些有毒物质来抑制食用菌菌丝的生长。从某种意义上来说，食用菌制种和栽培的中心工作就是如何来防止和控制各种杂菌的污染，以获得菌丝体或栽培体的纯培养。在生产上搞好杂菌污染的防止和控制，其中重要的一环就是接种工作。展坤公司郝俊，经过整理食用菌培育客户多年来从事食用菌工作的经验，对接种所引起的污染及防止措施分析。 如下，供同行参考。1接种箱滋生霉菌引起的污染也许有人会认为，接种箱是用于接种的设备，要经常消毒，而且每次使用前都要经过消毒处理，怎么也会生长霉菌呢？其实，这是一种误解。首先，接种箱多为木质结构，木材中含有丰富的木质纤维素，它是各种霉菌生活的良好营养成分；其次，接种箱的使用随生产而具有季节性，每年都有较长一段时间闲置未用，在这段时间内，就极有可能出现霉菌污染。那么，在什么情况下接种箱才会出现霉菌污染呢？接种箱被污染多是出现在接种箱闲置未使用的时候，但笔者认为，引起污染的直接原因往往并不在这段时间，而是在生产季节接种箱被使用的时候。在使用接种箱时，生产者操作不规范或使用不当都会使接种箱过于潮湿，比如让培养基或菌料等撒落箱内而没有及时清理，或者由于接种箱内外温差较大，引起箱内而没有及时清理，或者由于接种内外温差较大，引起箱内热空气遇冷凝结成水珠等。接种箱受潮后，如果没有及时通风排湿，这样在接种箱闲置不使用的时候，就很容易滋生霉菌。 针对上述引起接种箱污染的原因，要防止污染，在实际工作中，1.是要在接种箱使用时，尽量降低接种箱内的湿度。要避免培养基、菌料或酒精棉球等直接落入箱内，如不谨掉入箱则应尽快清理；要避免接种箱内外出现温差而引起受潮，具体应做到：（1）料袋或料瓶灭菌后应充分冷却再进入接种箱内进行消毒处理，以免引起接种箱内温度过高；（2）消毒剂的用量要严格按照规定使用。目前常见的消毒剂如气雾消毒剂、福尔马林等，在使用时都是利用这些物质发生氧化反应来产生烟雾或蒸汽，从而达到对空气消毒的目的。我们知道，氧化反应往往会产生大量的热量，因此，在保证消毒效果的前提下，消毒剂的使用不宜过量；（3）
组织培养法制备食用菌母种 一、实验目的 1、学会母种培养基的配制方法。 2、掌握组织分离的方法和技术。 3、掌握无菌操作技术。 二、实验内容 1、母种培养基（马铃薯综合培养基）的配制。 2、菌种分离和培养。 三、实验材料 材料：白玉菇、杏鲍菇、金针菇。 仪器：超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、培养皿、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水夹、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯、镊子。 试剂：75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1等。四、实验步骤 1、母种培养基的配制 培养基配方： 马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸—二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 5mg~10mg、琼脂18～20g、水1000ml，Ph5.5～6。 培养基配制： （1）首先给马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200g，放入铝锅中用1000ml 清水加热煮沸，维持20min左右，煮到软而不烂为止，用双层湿纱布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热，待琼脂熔化后，添加葡萄糖及其他成分，搅拌均匀后装入三角瓶中，塞上棉塞，棉塞上方用牛皮纸包好，用高压灭菌锅进行灭菌。用牛皮纸包好9个培养皿，一起进行灭菌。0.1MPa,121℃,30min. （2）在超净工作台上，将已灭菌的三角瓶中的培养基趁热倒入9个已灭菌的培养皿中，等待凝固之后就可以进行接种了。 2、菌种的分离与培养 （1）种菇的选择与消毒： 选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害，无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。
（2）组织块的切取： 将平板培养基放进超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）消毒0.5小时以上，关闭紫外灯20min后，再开始进入接种室内进行接种。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3—0.5cm3的小方块组织，将其移接到平板培养基上，移植3—4块组织块，要分布均匀。 注：金针菇的菌柄较细，菌盖较小，故可用这种方法分离组织块：左手抓住菌柄，右手持长柄镊子沿菇柄方向去掉菌盖，这时菌柄顶端露出弧形的生长点，取生长点的组织块。 （3）菌丝培养： 接种后置于25℃恒温箱中培养，2—3天后可见组织块周围产生白色绒毛状菌丝，此时每天都要检查杂菌污染情况。培养7—10天后，菌丝即可长满平板，菌丝长满平板即为一级种（母种）。
消毒灭菌管理制度 1.医务人员必须树立无菌观念，规范着装，工作时间必须按照标准预防要求，采取必要的防护措施。 2.医务人员必须严格遵守消毒灭菌原则，进入人体无菌组织、器官、腔隙或接触人体破损皮肤、粘膜、组织的诊疗器械、器具和物品必须灭菌：接触完整皮肤、粘膜的诊疗器械、器具和物品必须消毒。 3.重复使用的医疗器械、器具和物品，使用后彻底清洗干净，再消毒或灭菌，其中特殊感染性疾病(病毒、气性坏殖、突发不明原因传染病)病人用过的医疗器械、器具和物品使用后先消毒、彻底清洗干净，再消毒或灭菌； 4.所有医疗器械、器具、仪器设备在检修前必须先清洁，消毒或灭菌处理后再进行检修。 5.医院所有房屋改造、扩建等施工时，施工区域周围搭建适当的屏障物以防止粉尘的扩散。对于可能会产生少量粉尘的短期建设项目可以使用预制的塑料幕布或塑料薄膜；而对于正在进行的、长期的建设项目使用其他耐久、结实的屏障物。 6.根据物品的性能选用物理或化学方法进行消毒灭菌。耐热、耐湿物品灭菌采用压力蒸汽灭菌：不耐热、不耐湿物品采用低温灭菌：不耐热、耐湿物品采用低温灭菌：耐热不耐湿物品采用干熱灭菌。 7.化学灭菌或消毒，可根据不同情况分别选择灭菌、高效、中效、低效消毒剂。使用化学消毒剂必须了解消毒剂的性能、作用、使用方法、影响灭菌或消毒效果的因素等，配制时注意有效浓度，并定期监
测。更换消毒剂时，必须对用于浸泡消毒物品的容器进行灭菌处理， 8.空气消毒采用空气消毒机每日消毒1-2次：床单元采用床单元消毒机进行终末消毒处理。 9.一般诊疗用品的消毒 (1)按触完整皮肤的器具清洁与消毒方法：接触皮肤的一般诊疗用品如血压计袖带、听诊器，保持清洁，若有污染应随时以清洁剂与水清洁。血压计袖带若被血液、体液污染应在清洁的基础上采用含氯消毒剂(500mg/L)浸泡30min后再清洗干净，晾干备用。听诊器可在清洁的基础上选用75% 乙醇擦拭消毒。 (2)接触完整粘膜的器具清洁与消毒方法：接触未破损粘膜的器具如扩阴器、开口器、舌钳、压舌板、口表、肛表等器具，用后应先清洗去污，再消毒：耐高温的器具如扩阴器、开口器、舌钳、压舌板可选用压力蒸气灭菌后于燥保存备用，不耐高温的器具如口表、肛表等可在清洁的基础上采用75%乙醇或采用含氯毒剂(1000mg/L)浸泡30min后，清水冲洗净，擦干，清洁干燥保存备用。 (3)连续使用的氧气湿化瓶、氧气面罩、麻醉面罩及雾化器、早产儿暖箱的湿化器、胃肠减压器、吸引器、引流瓶等器材，必须每日在清洁的基础上，采用含氯消毒剂(500mg/L)浸泡消毒，上述器具的终末消毒耐高温的管道与引流瓶可采用压力蒸气灭菌，不耐高温的部分可清洁后用含氯消毒剂(500mg/L)浸泡30mim后(如遇肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等感染的病人污染的器具应采用1000mg/L含氯消毒剂浸泡30min-45min)清水冲净,晾干，清洁干燥封闭保存备用。湿
食用菌实习总结 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
实习总结 实习是事业，其意义在于奉献；实习是科学，其价值在于求真；实习是艺术，其生命在于创新。 实习周里，在唐老师和徐老师的指导下，我与同学们一起参与并顺利完成学院为我们准备的实习计划。在实习过程中两位老师奉行甘为人梯、传承文明、引导未来、为人师表的观念，为我们解答困惑，亲手指导实验操作不辞辛劳，体现他们的优秀教师职业素质。在此总结时向唐玉琴、徐济责两位老师致以由衷的感谢！ 一、学习内容 主要有以下几个部分： 1.对食用菌实验室培养进行培养基配制与灭菌（一级培养基和二级培养 基）； 2.在室外进行食用菌采摘（一次在校园采摘，另一次在锅底山采 摘。）； 3.一级菌种的分离、转管与培养； 4.二级菌种的接种与培养。 灭菌方式： 热力灭菌有湿热灭菌和干热灭菌两种形式。湿热灭菌主要包括高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、沸水灭菌、间歇灭菌等多种方式。 高压蒸汽灭菌步骤： 加水装锅密封加热排放冷空气升压保压出锅斜面摆放 实验设备、工具及药品： 接种箱、超净工作台、酒精灯、接种针、镊子、接种刀、石炭酸 菌种分离方法： 组织分离法、基内菌丝分离法、孢子分离法。组织分离法又分为子实体组织分离法、胶质菌类子实体分离法、菌核组织分离、菌索组织分离 切取组织块接种： 无菌解剖刀从盖与柄中部纵切在无菌区域内接种菇撕成两半用解剖刀在盖与柄交界处刻成田字格用接种针挑取组织块放入斜面培养基中央塞上棉塞贴好标签 附：（PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g） 二、实习感悟
一、名词解释（每题3分，共18分） 1．食用菌：高等真菌中能形成大型肉质或胶质子实体或菌核类组织并能供食用的菌类总称，俗称菇、蕈、耳。 2．菌种：是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。 3．培养基：根据食用菌对营养、水分、酸碱度的要求，人为配制成的供食用菌生长发育的基质。 4．菌种分离：就是用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。 5．灭菌：是应用物理和化学方法杀灭物品表面和内部所有的微生物，是一种彻底的灭菌方法。 6．消毒：是应用物理和化学方法使欲消毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生物致死，是一种不彻底的灭菌方法。 二、填空题（每空0.5分,共20分） 1．无论哪一种食用菌，都是由（菌丝体）和（子实体）两大部分组成。 2．伞状子实体的菌肉可分为两类，即（丝状菌肉）和（泡囊状菌肉）。 3．菌环是由（内菌幕）遗留下来的。 4．菌托是由（外菌幕）遗留下来的。 5．食用菌在生长发育中所需要的营养物质主要有四大类，即（碳源）、（氮源）、（矿质元素）和（生长因素）。 6．制种一般包括四个基本环节，即（配制培养基）、（灭菌）、（接种）和（培养）。 7．对一级菌种培养基通常采用高压蒸汽灭菌，所要求的压力为 （ 1.1kg/cm2），温度为（121℃），时间为（20~30min ）。 8．菌种分离成功的关键是（无菌操作）。
9．接种的设备有（净化工作台）、（接种箱）和（接种室）。10．菌种一般分为三种类型，即（一级菌种）、（二级菌种）、（三级菌种）。 11．一级菌种的容器为（试管），规格为（ 18～20mm×180～200mm）。 12．制作棉塞的棉花应是（普通皮棉）。 13．为判断灭菌是否彻底，灭菌之后一定要（检验灭菌效果）。 15．食用菌在（发菌或菌丝生长）期不需要光照，应避光培养。 16．根据自然状态下食用菌营养物质的来源，一般将食用菌分为三种不同的营养类型，即（腐生性食用菌）、（寄生性食用菌）和（共生性食用菌）。 17．香菇属于（低温变温）结实性菌类。 18．平菇属于（层菌）纲、（伞菌）目、（侧耳）科、（侧耳）属。 19．鸡腿菇菌丝体具有（不覆土）不出菇的特点。 20．代料栽培是指（是指利用农业、林业、工业生产的下脚料（如木屑、棉子壳、稻草、废棉、酒糟等）为主要物质，再加入一定的辅助原料配制成培养料，用来代替传统的段木或原木来栽培各种食用菌的方法） 三、单项选择（多选无分）（每题2分,共10分） 1.下列说法中，正确的是（ C ）。 A．食用菌就是蘑菇。 B．食用菌是能供食用的微生物。 C．食用菌是可供食用的大型真菌的总称。 D．食用菌是可供食用的大型伞菌的总称。 2.绝大多数食用菌喜欢( C )环境。 A．酸性 B．碱性 C．偏酸性 D．偏碱性 3．制二、三级种时，要将培养料放入常压灭菌灶中蒸8-10小时，其目的是（ C ）。 A．将培养料蒸熟，便于菌丝体吸收利用。 B．使培养料软化，同时也可改变其PH值。
组织分离法制备食用菌母种（8学时） 一、实验的目的和要求 1、学会母种培养基的配制方法。 2、掌握组织分离的方法和技术。 3、掌握母种转管继代培养技术。 4、掌握无菌操作技术。 二、实验内容或原理 （1）母种培养基配制。 工艺流程：培养基配方培养基的配制灭菌 摆斜面 （2）菌种分离与培养（本实验以组织分离为例）。 工艺流程：种菇的选择与消毒组织块的切取菌丝培养 三、实验材料 仪器：超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯。 试剂：75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1等。 四、实验步骤 （1）母种培养基配制 A、培养基配方：以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。 B、培养基配制：首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。 C、分装试管：培养基配制后应趁热分装。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。
D、灭菌：灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀,排出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽,以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染. E、摆斜面：当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。 (2)菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例） 种菇的选择与消毒：选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。 组织块的切取：将斜面培养基放进超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面三刀半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。 菌丝培养：接种后置于25℃恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面。菌丝长满试管即为一级种（母种）。（可进行母种转管继代培养。） 思考题： 1、组织分离获得菌种的理论依据是什么？ 2、用组织分离方法获得的母种，为什么要进行出菇试验后才能用于生产？
食用菌生产应选择适宜本地生长的优质、高产、高抗的优良菌株，严禁使用有杂质菌污染和虫害迹象以及退化、老化的劣质菌种。严格接种程序，确保接种成功率。接种室要求干净、干燥、密闭、远离污染源。灭好的菌袋或菌瓶进入接种室内。接种室内事先应经过消毒。接种工具、接种人员的双手要用2%过氧化氢银离子或75％酒精消毒。接种要迅速准确，接种量不宜太小。 在食用菌生产中，一旦杂菌污染将直接造成培植失败，所以严格控制各个生产环节的微生物。虽然消毒工作十分重要，但大多数的食用菌生产者并不十分清楚消毒灭菌的科学原理和各种消毒方式的优缺点，所以无法制订行之有效的消毒制度，导致日常消毒工作比较随意，消毒效果不理想。 食用菌生产消毒需要先了解各个环节的消毒要求和消毒方式的优势，然后选择最合适的方案。 一、组培实验室 食用菌培养实验室和接种间是最关键环节，无菌接种工作室和无菌超净工作台是必需的，它可以很大程度的降低组培操作和无菌培养过程中的污染几率。实验室和接种间每1-2周进行一次杀孢子工作，均匀喷洒杀孢子剂杀灭空间内的霉菌等杂菌，控制整理菌落水平。 臭氧和紫外线是比较常见的微生物控制方式，是日常控制微生物的有效方式，但需要注意这两种方式主要是控制，其对孢子的杀灭效率有效，应每1-2周采用专用杀孢子剂处理一次。 关于甲醛熏蒸。甲醛熏蒸是常用的空间消毒方式，但甲醛属于剧毒，对人体有强致癌效应，应谨慎使用。生态灭菌方法为3%过氧化氢银离子溶液，均匀喷洒，10ml/m3。可以达到彻底杀孢子剂的效果，过氧化氢银离子无色无味，生态型孢子剂，对人体和植物没有任何危害。 二、操作台与器具灭菌 无菌操作台、接种机、接种枪等器具需要严格消毒灭菌。目前常用的是75%酒精，浸泡或擦拭方式消毒。酒精的具有较好的杀菌效力且没有残留，是目前最常用的消毒方式，但酒精只有在75%浓度下才具有较好的消毒效果，酒精易挥发，浓度下降后杀菌效力急剧降低，所以酒精的实际使用效果不太理想，存储和成本也较高。 与75%酒精对比，使用2%过氧化氢银离子溶液的杀菌效力更高，对真菌、霉菌、细菌等杂菌均具有高效杀灭作用。过氧化氢银离子持久稳定，成分下降对杀菌效力几乎没影响，也是生态无残留的，可以完全代替酒精。 过氧化氢银离子可以通过浸泡、喷雾、擦拭等多种方法消毒，在杀菌效力、存储和使用成本上比酒精更具优势。 三、预冷车间（冷却室）消毒 灭菌后的料瓶或料袋应采用高压灭菌，然后进入冷却室内冷却。料袋在冷却过程