第十五章流式细胞仪
一、名词解释
1.流式细胞仪：FCM是以激光为光源，集流体力学、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学技术和单克隆抗体技术等为一体的新型高科技仪器。
2.流式细胞术：应用FCM对于处在快速直线流动状态中的生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术，它是在单细胞水平上，对于这些生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术u，现已成为现代医学研究最先进的技术之一。
3.测量区：鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。
4.样品流：将特异荧光染料染色的单细胞悬液放入样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入FCM的流动室，沿流动室的轴心向下形成样品流。
5.鞘液流：鞘液流是一种稳定流动的液体，操作人员无法随意改变其流动的速度，样品流在鞘液流的环抱下形成流体动力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞信息。
6.延迟时间：从细胞通过测量区到水滴形成的时间大约为几十毫秒，这个时间成为延迟时间。
7.分选收获率：它指被分出的细胞占原来溶液中该细胞的百分比。
8.分选速度：它指每秒可提取所选细胞的个数，目前一般FCM的分选速度为300个/秒，高性能的FCM最高分选速度可达每秒上万个细胞。
9.分选纯度：它指FCM分选的目的细胞占分选细胞百分比，一般可达99%左右。
10.长通滤光片：长通滤光片使特定波长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过。
11.短通滤光片：特定波长以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回。
12.带通滤光片：带通滤光片允许一定波长范围的光通过。滤光片上有两个数值，一个为允许通过波长的中心值，另一个为允许通过光波段的范围。
二、选择题
【A型题】在五个选项中选出一个最佳答案。
1.流式细胞仪中的鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆形流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为（B）
A.敏感区
B.测量区
C.激光区
D.计算区
2.流式细胞仪使用的染色细胞受激光照射后发出荧光，同时产生（B）
A.电离照射
B.光散射
C.电磁辐射
D.光反射
E.光电子
3.流式细胞仪中的光电倍增管接收（B）
A.散射光
B.荧光
C.激光
D.射线
E.反光
4.流式细胞仪中的光电二极管接收（A）
A.散射光
B.荧光
C.激光
D.射线
E.反光
5.通过测量区的液柱断裂成一连串均匀液滴的原因是在（C）
A.在流动室上加上了频率为30kHZ的信号
B.在测量区上加上了频率为30kHZ的信号
C.在压电晶体上加上了频率为30kHZ的信号
D.在光电倍增管上加上了频率为30kHZ的信号
E.在光电二极管上加上了频率为30kHZ的信号
6.将悬浮分散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放入样品管，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，动力来自于（C）
A.激光
B.压电晶体
C.气体压力
D.荧光
E.散射光
7.流动室轴至外壁的鞘液向下流动，形成包绕细胞悬液的是（A）
A.鞘液流
B.细胞流
C.散射光
D.荧光
8.各类细胞的特性信息在测量区被测定的时间为（A）
A.在细胞形成液滴以前
B.在细胞形成液滴以后
C.在细胞形成液滴过程中
D.在细胞形成液滴前后
E.在细胞形成液滴一小时
9.样品流在鞘流的环抱下形成流体动力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过（C）
A.荧光照射区
B.散射光照射区
C.激光照射区
D.X光照射区
E.太阳光照射区
10.前向角散射可以检测（B）
A.细胞膜厚薄
B.被测细胞的大小
C.细胞质多少
D.核膜的折射率
E.DNA含量
11.在对细胞膜表面抗原的荧光检测时通常使用（C）
A.线性放大器
B.指数放大器
C.对数放大器
D.整数放大器
E.函数放大器
12.一般对DNA倍体测量时采用（A）
A.荧光信号的面积
B.散射光信号的面积
C.前向角散射信号面积和宽度
D.散射光信号的宽度
E.荧光信号的宽度
13.荧光信号的宽度常用来区分（D）
A.淋巴细胞
B.红细胞
C.白细胞
D.双联体细胞
E.单倍体细胞
14.光谱重叠校正的最有效方法是使用（E）
A.放大电路
B.荧光电路
C.散射光电路
D.衰减电路
E.双激光立体光路
15.若每秒钟产生4万个水滴，每秒钟流出的细胞时1000个，则平均每40个水滴中有（D）
A.三个水滴是有细胞的
B.二个水滴是有细胞的
C.四个水滴是有细胞的
D.一个水滴是有细胞的
E.五个水滴是有细胞的
16.流式细胞术对HIV感染者或AIDS发病者进行区分是通过（C）
A.测DNA凋亡峰
B.胞质抗原含量测定
C.动态监测T细胞亚群
D.测凋亡调节蛋白
E.DNA倍体含量测定
17.下落的水滴通过一对平行板电极形成的静电场时，带正电荷的水滴向（A）
A.带负电的电极板偏转
B.带正电的电极板偏转
C.不偏转
D.前向角偏转
E.侧向角偏转
18.鉴别良、恶性肿瘤的特异指标为（E）
A.非特异性酯酶含量测定
B.胞质抗原含量测定
C.DNA含量测定
D.过氧化物酶含量测定
E.DNA倍体含量测定
19.衡量流式细胞仪检测微弱荧光信号的重要指标是（A）
A.灵敏度的高低
B.荧光强度
C.散射光大小
D.精密度大小
E.准确度的高低
20.分辨率是衡量仪器测量精度的指标，通常用（D）
A.误差值表示
B.标准差值表示
C.灵敏度值表示
D.变异系数表示
E.精密度值表示
21.与前向角散射密切相关的是（B）
A.细胞直径
B.细胞直径的平方
C.细胞核的形状
D.血小板数量
E.病毒性质
22.流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞还是培养细胞，首先要保证是（E）
A.单倍体细胞悬液
B.双倍体细胞悬液
C.活细胞悬液
D.白细胞悬液
E.单细胞悬液
23.光路与流路校正的主要目的是确保（C）
A.激光光路稳定
B.样品流稳定
C.激光光路与样品流处于正交状态
D.荧光光路与样品流处于正交状态
E.散射光光路与样品流处于正交状态
24.为保证样品检测时仪器处于最佳工作状态，PMT校准采用（B）
A.样品
B.质控品
C.鞘液
D.生理盐水
E.缓冲液
25.为保证仪器在计数时的准确性，流式细胞仪应建立绝对计数（E）
A.样品
B.细胞
C.鞘液
D.细菌
E.标准品
26.样品和鞘液管道应用漂白粉液清洗的间隔时间为（D）
A.每月
B.每天
C.每季度
D.每周
E.每年
27.F CM显示激光器开启错误，引起故障的可能原因是（B）
A.激光器关闭
B.激光器门打开
C.流式细胞仪连接错误
D.清洗液少了
E.数据太大，难以处理
28.F CM显示清洗液高度警示，引起故障的可能原因是（E）
A.激光器关闭
B.激光器门打开
C.流式细胞仪连接错误
D.清洗液少了
E.清洗液传感器失灵
29.F CM显示数据处理速率错误，引起故障的可能原因是（A）
A.数据太大，难以处理
B.激光器门打开
C.流式细胞仪连接错误
D.清洗液少了
E.清洗液传感器失灵
【X型题】每题的备选答案有两个或以上正确答案。
1.流式细胞仪综合了（ABCE）
A.激光技术
B.电子技术
C.流体力学
D.生物化学
E.计算机技术
2.流式细胞仪广泛应用于（ACE）
A.细胞生物学
B.物理学
C.免疫学
D.电子学
E.血液学
3.FCM在细胞生物学研究中，应用频繁的领域是（ABCD）
A.细胞周期
B.DNA倍体
C.细胞表面受体
D.细胞表面抗原
E.病毒表面抗体
4.生物学颗粒的内容包括（ABCDE）
A.DNA
B.RNA
C.蛋白质
D.染色体
E.细菌
5.染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被（AD）接收
A.光电倍增管荧光检测器
B.细胞检测器
C.激光检测器
D.光电倍增管散射光检测器
E.DNA检测器
6.计算机通过储存、计算、分析流式细胞检测到的数字化信息，就可得到（BCDE）方面的信息
A.离子的多少
B.细胞的大小
C.核酸含量
D.酶的性质
E.抗原的性质
7.流式细胞仪的结构可分为（ABCDE）
A.流动室及液流驱动系统
B.激光光源及光束成形系统
C.光学系统
D.信号检测与分析系统
E.细胞分选系统
8.流动室的类型有（ACE）
A.在室内检测的流动室
B.激发型流动室
C.在空气中检测的流动室
D.荧光流动室
E.显微检测流动室
9.属于FCM光学系统的是（ABC）
A.透镜
B.滤光片
C.小孔
D.流动室
E.分选系统
10.F CM光学系统主要分为（ABE）
A.长通滤片
B.短通滤片
C.高通滤片
D.低通滤片
E.带通滤片
11.当细胞携带荧光光素标记物，通过激光照射区时，细胞内不同物质分别产生（BC）
A.激光信号
B.散射光信号
C.荧光信号
D.离子信号
E.反射信号
12.散射光分为（BD）
A.后向角散射
B.前向角散射
C.反向角散射
D.侧向角散射
E.正向角散射
13.目前采用前向角散射和侧向角散射这两个参数组合，可区分裂解红细胞处理后外周血中的（ABD）
A.淋巴细胞群体
B.单核细胞群体
C.血小板群体
D.粒细胞群体
E.红细胞群体
14.目前采用前向角散射和侧向角散射这两个参数组合，可区分未进行裂解红细胞处理的全血样品中的（CE）
A.淋巴细胞群体
B.单核细胞群体
C.血小板群体
D.粒细胞群体
E.红细胞群体
15.线性放大测量适合于检测（CDE）
A.细胞膜表面抗原的分布
B.单核细胞含量
C.总蛋白质含量
D.RNA含量
E.DNA含量
16.属于细胞分选器组成内容的是（BCDE）
A.细胞分布
B.水滴形成
C.分选逻辑电路
D.水滴充电
E.水滴偏转
17.影响延迟时间的因素为（ABCD）
A.平均延迟时间的不准确性
B.喷射液流的变化
C.水滴分离点的变化
D.细胞本身对水滴形成条件的影响
E.水滴的性质
18.流式细胞仪在免疫学中的应用包括（ABCD）
A.淋巴细胞功能分析
B.淋巴细胞及其亚群分析
C.化疗药物对肿瘤细胞的凋亡机制
D.肿瘤细胞的免疫检测
E.免疫分型
19.分选指标主要包括（ABCE）
A.分选速度
B.分选灵敏度
C.分选纯度
D.分选精密度
E.分选收获率
20.保证荧光信号产生的非常关键的技术是（ABDE）
A.荧光染料的选择
B.标记染色方法
C.鞘液的选择
D.细胞的选择
E.细胞的分离
21.FCM室内应注意（ABCD）
A.配空调
B.避光
C.防尘
D.除湿
E.不用除湿
三、简答题
1.简述流式细胞仪生物学颗粒分析原理。
经特异荧光染料染色后的单细胞悬液放入样品管，在气体压力作用下，悬液在样品管中的单细胞经管道进入FCM的流动室，沿流动室的轴心向下流动形成样品流。流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液的鞘液流，鞘液和样品流的喷嘴附近组成一个圆柱流束，与水平方向的激光束垂直相交。染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射，这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，经过计算机储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、核酸含量、酶和抗原的性质等信息。
2.简述流式细胞仪细胞分选原理。
当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或右偏转，落入指定的收集器内，不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的。
3.流式细胞仪依据什么进行分类？各类型有什么特点？
流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和科研型。临床型只有分析功能，没有分选功能，仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简单，易学易掌握。科研型既有分析功能又有分选功能，可加速将所感兴趣的细胞分选出来，并可将单个或指定个数的细胞分选到指定的容器里，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究。
流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。前者的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞直径，只能提高那个细胞内某种生物化学成分的参数，不能对细胞形态和亚细胞形态进行分辨。狭缝扫描流式细胞仪是一种高分辨率的检测仪器，被检细胞直径大于激光光斑直径，细胞通过光束时各部分被依次扫描，根据荧光信号的先后，就可得到一维的细胞轮廓组方图，可计算出细胞直径、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息。4.流式细胞仪主要应用在哪些领域？
流式细胞仪主要有下面的应用领域：免疫学、血液学、细胞生物学、肿瘤学、
AIDS 病检测、自身免疫性疾病相关HLA 抗原的分析和药物学。
5.流式细胞仪的基本结构由哪几部分组成？
分为流动室及液流驱动系统；激光光源及光束成形系统；光学系统；信号检测与
存贮、显示、分析系统；细胞分选系统五个部分。
6.简述流式细胞仪的液流系统的功能。
流动室内充满的鞘液，鞘液的作用是将样品流环抱。鞘液流是一种稳定流动的液体，操作人员无法随意改变其流动的速度，样品流在鞘流的环抱下形成动力学聚焦，是样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过激光照射区的时
间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。
7.流式细胞仪的流动室的作用是什么？
流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个孔径为430umx180um的长方形孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，这种流动室的光学特性良好，流速较慢，因而细胞受照时间长，可收集的细胞信号光通量大，配上广角收
集透镜，可获得很高的检测灵敏度和测量精度。
8.流式细胞仪的光源有什么特点？
激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，所以激光是
细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞的快速流动，某个细胞经过光照区
的时间仅为1us左右，且细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号微弱，与被照
射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。
9.流式细胞仪的光学系统组成和各种滤光片的作用是什么？
流式细胞仪的光学系统是由若干组透镜、滤光片和小孔组成，它们分别将不同波
长的荧光信号送入不同的电子探测器。滤光片分三类，主要作用是：长通滤光片
使特定波长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过；短通滤光片使特定波长
以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回；带通滤光片允许一定波长范围
内的光通过。
10.流式细胞仪所检测的信号有哪些？这些信号所代表的意义和作用是什么？
流式细胞仪所检测的信号有散射光和荧光信号。（1）散射光信号：散射光分为前
向角散射和侧向角散射，两个参数组合，可区分经裂解红细胞处理后外周血白细
胞中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个细胞群体，或在未进行裂解红细胞处理的
全血样品中找出血小板和红细胞等细胞群体。（2）荧光信号：一种是细胞自身在
激光照射下发出微弱的荧光信号，另一种经过特异荧光素标记细胞后，受激发照
射得到的荧光信号，通过对这类荧光信号的检测和定量分析能了解所研究细胞的
存在和定量。
11.流式细胞仪信号的测量方式和校正方法是什么？
流式细胞仪信号的测量方式和校正方法分为三类：（1）荧光信号线性测量和对数
测量：主要由电子线路完成；（2）荧光信号的面积和宽度：荧光信号的面积是采
用对荧光光通量进行积分测量，一般对DNA倍体测量时采用面积，荧光信号的
宽度常用来区分双联体细胞；（3）光谱重叠的校正：采用双激光立体光路技术的
四色FCM系统。
12.流式细胞仪分选器的组成和细胞分选原理是什么？
细胞分选器由水滴形成、分选逻辑电路、水滴充电及偏转三部分组成。通过压电
晶体的振动使自喷孔喷出的流束形成水滴，分选逻辑电路根据分选细胞的参数，给含有此参数的细胞液滴充电，充电的液滴经过电极偏转板时，依所带电荷不
同而偏向不同的电极板，在电极的下方放置收集容器，便可得到要分选的细胞。13.流式细胞仪的主要性能指标有哪些？
流式细胞仪的主要性能指标有：（1）荧光测量灵敏度；（2）仪器的分辨率；（3）前向角散射光检测灵敏度；（4）分析速度；（5）分选指标。
14.流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及哪几个方面？
流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及三
个方面：
（1）光路与流路校正主要目的在于确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的CV 值；
（2）PMT 校准采用质控品进行 PMT 校准，必要时进行电压补偿，以便仪器检测灵敏度不会因PMT 的放大功率降低而改变；
（3）绝对计数的校准采用绝对计数标准品建立绝对计数标准。
临床检验仪器复习题及 答案 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
《临床检验仪器学》 一、选择题 1.流式细胞仪检测细胞的大小的信号是.：前向角散射 2、VCS白细胞分类技术不包括：细胞化学染色技术 3.毛细管粘度计不适合检测：全血 4、尿液分析仪的测试项目中，与酸碱指示剂无关的项目是：尿葡萄糖 5.血细胞分析仪中对网织红细胞的检测原理: 光散射和细胞化学染色 6、关于光学显微镜的分辨率，下列有误的是：与照明光的波长成反比 7、流式细胞仪中的光电倍增管接收：荧光 8、前向角散射可以检测：被测细胞的大小 9、流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞,还是培养细胞，首先要保证是：单细胞悬液 10、电阻抗型血细胞分析仪的缺点是只能将白细胞按体积大小分为：三个亚群或二个亚群 11、有关血细胞分析仪的叙述不正确的是：高档次血细胞分析仪白细胞的分类计数很准确 12、双磁路磁珠法中，随着纤维蛋白的产生增多，磁珠的振幅逐渐：减弱 13、毛细管黏度计工作原理的依据是：泊肃叶定律 14、尿蛋白定性干化学检测法只适用于检测：清蛋白 15、流式细胞术尿沉渣分析仪的工作原理是：应用流式细胞术和电阻抗 16、BacT/Alert血培养瓶的底部含一个传感器，用于检测：二氧化碳
17、密度梯度离心法又称为：区带离心法 18、根据样品组份的密度差别进行分离纯化的分离方法是：等密度区带离心法 19、等密度区带离心法对于密度梯度液柱的要求是：液柱顶部的密度明显小于样品组份的密度，液柱底部的密度明显大于样品组份的密度 20、表示从转轴中心至试管最内缘或试管顶的距离的转头参数是：Rmin 21、pH玻璃电极对样本溶液pH的敏感程度取决于：电极的玻璃膜 22、PCO 电极属于：气敏电极 2 23、临床上大量使用的电解质分析仪，测量样本溶液中离子浓度的电极是：离子选择电极 24、通常血气分析仪中毛细管pH玻璃电极的pH测定范围是：0?10 25、为将血气分析仪气路系统所提供的气体饱和湿化，需经过的装置是：湿化器 26、世界上最早的自动生化分析仪是：管道式自动生化分析仪 27、具有空气分段系统的自动生化分析仪是：连续流动式自动生化分析仪 28、离心式自动生化分析仪特有的关键部件是：转头 29、自动分析仪中采用“顺序分析”原理的是：连续流动式自动生化分析仪 30、微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)的固相支持是：PVC微孔板 31、以空气为加热介质的PCR仪是：离心式实时定量PCR仪 32、能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为：原位PCR仪
第一章概论 一、名词解释： 1.灵敏度：检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比，即检验仪器对单位浓度或质量的被检物质通过检测器时所产生的响应信号值变化大小的反应能力，它反映仪器能够检测的最小被测量。 2.误差：当对某物理量进行检测时，所测得的数值与标称值(即真值)之间的差异称为误差，误差的大小反映了测量值对真值的偏离程度。 3. 噪音：检测仪器在没有加入被检验物品(即输入为零)时，仪器输出信号的波动或变化范围即为噪音。 4.最小检测量：检测仪器能确切反映的最小物质含量。最小检测量也可以用含量所转换的物理量来表示。如含量转换成电阻的变化，此时最小检测量就可以说成是能确切反应的最小电阻量的变化量了。 5.精度：对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价，是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念，其高低是用误差来衡量的，误差大则精度低，误差小则精度高。 6.可靠性：仪器在规定的时期内及在保持其运行指标不超限的情况下执行其功能的能力它是反映仪器是否耐用的一项综合指标。 7.重复性：在同一检测方法和检测条件(仪器、设备、检测者、环境条件)下，在一个不太长的时间间隔内，连续多次检测同一参数，所得到的数据的分散程度。重复性与精密度密切相关，重复性反映一台设备固有误差的精密度。 8.分辨率：仪器设备能感觉、识别或探测的输入量(或能产生、能响应的输出量)的最小值。 9.测量范围：在允许误差极限内仪器所能测出的被检测值的范围。 10.线性范围：输入与输出成正比例的范围。也就是反应曲线呈直线的那一段所对应的物质含量范围 11.响应时间：表示从被检测量发生变化到仪器给出正确示值所经历的时间。 12.频率响应范围：为了获得足够精度的输出响应，仪器所允许的输入信号的频率范围。 第四章紫外——可见分光光度计 1.分光光度计：能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器称为分光光度计。它具有分析精密度高、测量范围广、分析速度快和样品用量少等优点。根据所使用的波长范围不同可分为紫外光区、可见区、红外光区以及万用（全波段）分光光度计等。 2.吸收光谱：光照射到物质时，一部分光会被物质吸收。在连续光谱中某些波长的光被物质吸收后产生的光谱被称作吸收光谱。每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构和含量。 3.朗伯-比尔定律：是比色分析的基本原理，表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。当用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度 A 与液层厚度 b 及溶液浓度的乘积 c 成正比，此即朗伯-比尔定律。数学表达式为: A＝kbc。它适用于分子吸收和原子吸收。 4.摩尔吸光系数（ε）：摩尔吸光系数表示在一定波长下测得的液层厚度为 1cm, 溶液浓度 c 为1mol/L 时的稀溶液吸光度值。吸光系数与入射光波长、溶液温度、溶剂性质及吸收物质的性质等多种因素有关。当其它因素固定不变时，吸光系数只与吸收物质的性质有关，可作为该物质吸光能力大小的特征数据。 6.单色器：将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置，是分光光度计的关键部件。主要由入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜组成。 7.吸收池：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件，同时也决定着透光液层厚度，可用塑料、玻璃、石英或熔凝石英制成。在可见光范围内，常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区，需用能透紫外线的石英或熔凝石英制作。 8.光电管：利用碱金属的外光电效应制成的光电转换元件。按电极结构不同可分为中心阳极式、中心阴极式和平行平板式几种，按管内充气与否又可分为真空光电管与充气光电管两种。光电管的质量取决于阴极灵敏度、线性范围、最大、最小可测能量等几个重要技术指标。 9.光电倍增管：利用外光电效应与多级二次发射体相结合而制成的光电元件，由一个表面涂有光敏材料的阴极和若干个（通常为 9 个～13 个）二级电子发射极（打拿极）组成，其灵敏度比光电管高 200 多倍。有三个重要指标：波长效应、灵敏度和噪声水平。 10.波长准确度：指仪器波长指示器上所示波长值与仪器此时实际输出的波长值之间的符合程度。可用二者之差来衡量分光光度计的准确性。 11.波长重复性：是指在对同一个吸收带或发射线进行多次测量时，峰值波长测量结果的一致程度。通常取测量结果的最大值与最小值之差来作为衡量分光光度计的准确性指标之一。 12.光度准确度：指仪器在吸收峰上读出的透射率或吸光度与已知真实透射率或吸光度之间的偏差。该偏差
一选择题 （1）A型题（单项选择题，每题1分，共30分） 1.具有吞噬传递免疫信息在特异免疫中起重要作用的细胞是（） A中性粒细胞 B 单核细胞 C淋巴细胞 D 嗜碱性粒细胞 E红细胞 2.冲液后，计数池每个大格的体积是（） A 0.1u l B 0.01 ul C 1.0 ul D 0.0001 ul 3.血片经过瑞氏染色后，成熟红细胞呈鲜红色，白细胞核染色呈浅灰色， 其原因是PH为（） A 5.4 -6 B 7.4-8 C 6.5-7 D 8.2-8.6 E 8.7-9.4 4.三种粒细胞区别的要点是（） A细胞大小 B特异性颗粒 C染色质结构 D浆颜色 E核浆比例 5.下列除了哪种疾病外，均是中性粒细胞增加的疾病（） A猩红热 B尿毒症 C 流行性感冒 D 铅中毒 E化脓性阑尾炎 6.嗜酸性粒细胞一般分叶核常为（） A一叶 B二叶 C三叶 D四叶 E 五叶 7.在血液中，中性粒细胞杆状核以上幼稚细胞增多称为（） A核左移 B核右移 C中毒颗粒 D 逆行性变化 E杜勒氏小体 8.一种血红蛋白衍生物是棕红色，在波长540nm处，有一较宽的吸光带， 它是（） 9.大面积烧伤患者红细胞和血红蛋白相对增高的原因是（） A红细胞生成增多 B红细胞寿命延长 C 红细胞破坏减少 D 血液浓缩 E白细胞生成减少
10.诊断铅中毒的最佳指标是（） A.网织红细胞增多B低色素红细胞增多 C 靶红细胞增多D 点彩红细 胞增多 11使血沉明显加快的原因是（） A红细胞数量增多 B 大红细胞贫血 C 镰刀形红细胞贫血 D 球形红细胞贫血 E 红细胞凝集成团 12.关于魏氏血沉发测定下列哪项是错误的（） A.深静脉血1.6ml B 用血沉管吸抗凝血至零刻度 C与0.4ml抗凝剂混匀 D垂直立于血沉架上 E 室温静置半小时 13.关于血沉的说法下列哪项是错误的（） A.正常男性血沉生理变化不大 B 新生儿血沉加快C妇女月经期血沉可 加快 D 年龄超过50岁的老年人血沉可加快E 高原地区的居民血沉低于平原地区的居民 14.欲中和A型血清的天然抗体，可加哪一种唾液（） A A型分泌型唾液 B B型分泌型唾液 C O型分泌唾液 D A B型分 泌唾液 E 任何唾液 15.用标准血清鉴定血型，下列哪项的结果应判断为A型血（） A与抗A不凝，抗B凝抗A+B凝 B与抗A凝，抗B不凝抗A+B凝 C 与抗A凝，抗B凝抗A+B不凝 D与抗A不凝，抗B不凝抗A+B凝 E与抗A不凝，抗B凝抗A+B不凝
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好奇 心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程课时 太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学习了 流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我想对我 在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的粗浅认 识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化 学特征等参数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分 选并存贮。这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含 的可标记的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法 （免疫荧光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表： 流式细胞仪免疫荧光免疫印迹 优点1、明确阳性细胞比 例 2、同时检测多种蛋 白表达 3、蛋白定量容易 4、速度快，灵敏度 高 5、阳性细胞的 相对数量 6、明确组织和细 胞内定为 1、检测整体 表达情况 2、蛋白定量 较容易 缺点不能在组织和细胞 内定位1、蛋白定量困难 2、仅检测局部表 达情况 1、不能组织或细 胞内定位 2、不能确定阳性 细胞比例
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。 2、激光系统。经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。激光器又以氩离子激光器为普遍。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。
《临床检验仪器学》 一、选择题 I.流式细胞仪检测细胞的大小的信号是.：前向角散射2、VCS白细胞分类技术不包括： 细胞化学染色技术3.毛细管粘度计不适合检测：.全血4、尿液分析仪的测试项目中, 与酸碱指示剂无关的项目是:尿葡萄糖5.血细胞分析仪中对网织红细胞的检测原理：光散射和细胞化学染色6、关于光学显微镜的分辨率，下列有误的是：与照明光的波长成反比7、流式细胞仪中的光电倍增管接收：荧光8、前向角散射可以检测：被测细胞的大小 9、流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞，还是培养细胞，首先要保证是：单细胞悬液 10、电阻抗型血细胞分析仪的缺点是只能将白细胞按体积大小分为：三个亚群或二个亚群 II、有关血细胞分析仪的叙述不正确的是：高档次血细胞分析仪白细胞的分类计数很准确 12、双磁路磁珠法中，随着纤维蛋白的产生增多，磁珠的振幅逐渐：减弱13、毛细管黏度计工作原理的依据是：泊肃叶定律14、尿蛋白定性干化学检测法只适用于检测：清 蛋白15、流式细胞术尿沉渣分析仪的工作原理是：应用流式细胞术和电阻抗16、BacT/Alert 血培养瓶的底部含一个传感器，用于检测：二氧化碳17、密度梯度离心法又称为：区带离心法18、根据样品组份的密度差别进行分离纯化的分离方法是：等密度 区带离心法19、等密度区带离心法对于密度梯度液柱的要求是：液柱顶部的密度明显小于样品组份的密度，液柱底部的密度明显大于样品组份的密度20、表示从转轴中心至试管最内缘或试管顶的距离的转头参数是：Rmin 21、pH玻璃电极对样本溶液pH的敏感 程度取决于：电极的玻璃膜22、PCO2电极属于：气敏电极23、临床上大量使用的电解质分析仪，测量?样本溶液中离子浓度的电极是：离子选择电极24、通常血气分析仪中毛细管pH玻璃电极的pH测定范围是：0?10 25、为将血气分析仪气路系统所提供的气体饱和湿化，需经过的装置是：湿化器26、世界上最早的自动生化分析仪是：管道式自动生化分析仪27、具有空气分段系统的自动生化分析仪是：连续流动式自动生化分 析仪28、离心式自动生化分析仪特有的关键部件是：转头29、自动分析仪中采用“顺序分析”原理的是：连续流动式自动生化分析仪30、微孔板固相酶免疫测定仪器（酶标仪）的固相支持是：PVC微孔板31、以空气为加热介质的PCR仪是：离心式实时定量PCR 仪32、能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为：原位PCR仪33、PCR反应正确过程应为：变性一退火一延伸34、一步就可以摸索出最适合反应条件的PCR仪为：梯度PCR仪35、PCR基因扩增仪最关键的部分是：温度控制系统36、试剂空白变化速率：是在反应温度下试剂自身吸光度随时间的变化37、以下哪项不是微生物自动鉴定与药敏分析系统的性能特点：数据管理系统功能强大，但系统软件大多不可以不断升级。 38、全自动血凝仪中的免疫学方法，通常选用：免疫比浊法39、自动生化分析仪工作较长时间后个别项目出现系统误差，则首先考虑日因素是：.标准品是否变质40、比色杯清洗步骤中可以忽略的是：经吹干后可以继续循环使用41、使用（区带）转头离心时 不需要离心管，样品直接加至其中即可42、使用电阻加热和半导体冷却的PCR仪的恒 温方法属：变温金属块恒温法43、含2个加样针、灌注式加试剂装置、双圈反应盘的自 动生化分析仪的取样周期为6s,则测定单试剂法的工作效率为（1200 ）测试/h 44、测最电流变化的电极是：P02电极45、血培养仪的检测信号不包括：温度46、按血凝仪检测原理，下述中不属于凝固法的是：免疫比浊法47、流式细胞术尿沉渣分析仪应用的原理是：流式细胞术和电阻抗原理48、含1个加样针、1个加试剂针、 单圈反应盘的自动生化分析仪的取样周期为 4.5s,贝删定单试剂法的工作效率为（800 ） 测试/h 49、关于底物消耗限额参数，不正确的是：目的是提高监测精密度50、全自动尿沉渣分析仪中F1几乎极低而Fsc大小不等可以为：红细胞51、以下哪项不是微生物自动鉴定与药敏分析系统的性能特点：数据管理系统功能强大，但系统软件大多不可以不断升
精心整理 临床检验基础病例分析题一 病例：患者，男，45岁，上腹饱胀，厌食，体重减轻，消瘦和进行性贫血，胃痛呈持续性，进食后加重。 查体：上腹部有肿块，质坚硬，有压痛，可移动，腹腔内有积液。 12患者4常，体重无变化。既往体健，个人史、家族史无特殊。 体检：T 39．5℃，P 98次/分，R 22次/分，BP 122/83mmHg 。发育正常，营养中等，神志清楚，无皮疹，浅表淋巴结不大，咽部无充血，扁桃体不大，颈静脉无怒张，胸廓无畸形，呼吸平稳，左上肺叩浊，语颤增强，有湿哕音，心界不大，心率105次／分，律齐，无杂音，腹软，肝脾未及。
实验室检查：RBC：5．5×1012/L，Hb 145g/L，WBC：12．5×109/L；分类Nsg 75％，E 1．5％，L 22％，PLT 205×109/L，尿常规(－)，粪便常规(－)。 1．根据以上资料，请做出初步诊断并简述其诊断依据。 答：根据以上资料，初步诊断为：左侧肺炎(肺炎球菌性可能性大)。 其诊断依据为： ① ② ③ 2 天/28 查体： 苍白，贫血貌，皮肤粘膜无出血点，浅表淋巴结不大，巩膜无黄染，舌乳头正常，心肺无异常，肝脾不大。 实验室检查：血液检查：Hb：64 g/L，RBC：3．6×1012/L，MCV：78fl，MCH：18pg，MCHC：299g/L，HCT 28％，RDW 18％，外周血涂片红细胞以小红细胞为主；WBC：5．6
×109/L，分类：Nsg 68％，L 25％，M 2％，PLT:240×109/L，Reti 2．0%。尿蛋白(－)，镜检无异常，大便隐血(－)，血清铁9．5 μrnol/L(9～27μrnol/L)。1．根据以上资料，请做出初步诊断并简述其诊断依据? 答： (1)根据以上资料，该患者初步诊断为：①缺铁性贫血? ②月经过多原因待查? (2) ：299g/L 2 答： 急诊。 查体：急性病容，巩膜疑有黄染。右上腹有明显压痛伴肌紧张： 实验室检查：WBC 12.4×109/L，中性粒细胞80％，淋巴细胞20%：B超：胆囊明显增大，囊壁增厚，可见反射很强的胆石数个，最大约1．5cm，提示胆囊炎、胆石症。
《临床检验仪器学》复习题 一、名词解释 灵敏度线性范围预处理系统K系数TEM SEM STM 灵敏度数值孔径离子选择性电极血细胞分析仪（BCA) 尿液分析仪自动生化分析仪自动化程度电化学分析技术流式细胞术噪音线性范围响应时间漂移电化学分析技术参比电极待测电极预处理系统实验室自动化系统全实验室的自动化（TLA）临床实验室信息系统(LIS) 医院信息系统(HIS) 化学电池离心现象离心技术扩散现象相对离心力沉降系数沉降速度沉降时间自动化程度通道差孔间差零点漂移ELISA 化学发光电化学发光发光免疫分析技术电化学性质POCT 二、填空 高速（冷冻）离心机的结构包括_________、_________、_________、________、____________、_________、_________等. 临床实验室常用的离心方法包括、和三类. 显微镜的分辨率表达式是。 流式细胞仪主要在通常在____ 和____ 这两个角度接收并检测细胞散射光强度。 电子显微镜包括_________、_________、_________ 、___________ 、____________五部分。 电子透镜包括____ 和____ 两种。 扫描隧道显微镜是根据量子力学原理中的和而设计。 STM 的两种工作模式分别是____ 和____ 。 尿液分析仪的测试原理包括、和三个原理。 尿液分析仪的反射率= 。 尿液分析仪由：、和三部分组成。 尿有形成分检验包括和两方面的检验。 流式细胞仪主要接受细胞的____ 信号和____ 信号。 流式细胞仪的基本结构由_________、_________、_________ 、___________ 、____________五部分构成。 常用参比电极主要有____ 和____ 两种 流式细胞仪中鞘液的作用是。 自动血培养系统主要由、和所构成。 电子显微镜根据成像方式的不同可以分为____ 和____ 两种类型。 生化分析仪的光路按照单色器的位置可以分为____ 和____ 两种。 自动生化分析仪的类型按反应装置的结构可分为4类：_______________、_______________、_______________、_______________。 目前临床上常用的三类免疫标记方法是______________、___________________、____________________。 临床电化学分析仪器包括____ 和____ 两种 血气分析仪的包括基本电极包括_______________、_______________、_______________、_______________四种。 血气分析仪的pH系统使用和两种标准缓冲液来进行定标；氧和二氧化碳系统用两种混合气体来进行定标。第一种混合气中含；第二种含。 电化学发光免疫分析的发光反应底物有____ 和____ 两种 生化分析仪的分析效率是指。 A/D转换的含义是。 LCD器的中文全称是。 自动生化分析仪采用后分光的含义是指。 自动生化分析仪中的通道数是指。 微生物自动化系统一般可分_______________________和____________________________ 两类。 临床电化学分析仪主要有_____________、_____________两种。 单色器包括________、_____________、_____________三种类型。 样品前处理系统占检验总工作量的。 离心机按照离心速度大小分为________、_____________、_____________。 FCM分选指标包括________、_____________、_____________。
第一章血液标本采集和血涂片检查 一、选择题 （一）、A1型题（标准型） 1.静脉采血法的采血部位首选： A. 肘部静脉 B. 手背静脉 C. 内踝静脉 D. 股静脉 E. 颈静脉 2.WHO推荐成人皮肤采血部位为： A. 无名指指端内侧 B. 中指和无名指指端内侧 C. 中指指端内侧 D. 耳垂 E. 大拇趾 3.血细胞分析中最常用的染色法为： A. 吉姆萨染色 B. 瑞氏染色 C. HE染色 D. 罗氏染色 E. PAS染色 （二）、A1型题（否定型） 3. 下列那一种抗凝剂不能与血液中的钙离子结合： A. EDTA-K2 B. 草酸钠 C. 草酸铵 D. 肝素 E. 枸橼酸钠 四、论述题 1. 试述瑞氏染色法的原理及PH值对其的影响？ 参考答案 一、选择题 （一）、A1型题（标准型） 1.A 2.A 3.B （二）、A1型题3.D 四、论述题 1. ①瑞氏染色法的原理：瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美兰组
成的复合染料。瑞氏染料溶于甲醇后，解离为带正电的美兰和带负电的伊红。由于各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力不同，因此染色后呈现不同的色彩。如血红蛋白和嗜酸颗粒为碱性可与酸性染料伊红结合染成红色。细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美兰或天青结合染成紫蓝色或蓝色。中性颗粒呈等电状态，与伊红和美兰均可结合染成紫红色。此染色过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。 ②PH值的影响：细胞各种成分均为蛋白质组成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH值而定。在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红。在偏碱性环境中负电荷增多，易与美兰或天青结合，染色偏蓝。
名词解释 分辨率：显微镜可分辨的两点间的最小距离，即为显微镜的分辨率，它主要取决于照明波长以及物镜的球差系数。 朗伯比尔定律：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。 离子选择性电极：离子选择性电极是一类利用膜电势测定溶液中离子的活度或浓度的电化学传感器，当它和含待测离子的溶液接触时，在它的敏感膜和溶液的相界面上产生与该离子活度直接有关的膜电势。 数值孔径：数值孔径描述了物镜收光锥角的大小，而后者决定了显微镜收光能力和空间分辨率。数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者性能高低的重要标志。 鞘流技术：为了避免计数中血细胞从小孔边缘处流过及湍流，涡流的影响，发明的技术。具体做法是用一毛细管对准小孔管，细胞混悬液从毛细管喷出。同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区，保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞流，四周被鞘液围绕。 问答题 1、影响电泳的因素 答：电场强度、溶液的PH值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用 2、离心机的离心方法 答：差速离心法、密度梯度离心法、分析性超速离心法 3、酸度计的测定原理以及常用电极 答：酸度计的测定原理：酸度计的主体是一个精密电位计，将电极插在被测溶液中，组成一个电化学原电池，通过测量原电池的电动势并直接用PH值表示出来。传感电极根据被测液氢离子浓度不同而产生不同的电位，根据能斯特方程式，酸度计将所检测到的微小电压变化值换算成PH值。 常用电极有参比电极和测量电极，参比电极包括甘汞电极和Ag-AgCl电极，测量电极为玻璃电极 简答题 1、朗伯比尔定律的成立条件 答：①入射光为单色光②溶液浓度不能过大 2、分光光度计的类型 答：单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计 3、血细胞计数器的测量原理 答：当细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，其内外电极之间的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号，脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比，根据欧姆定律，细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度越大。经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。 4、常用的色谱仪有哪两种以及各自的特点 答：常用的色谱仪有气相色谱仪和液相色谱仪两种。 气相色谱仪具有高分辨率、高速度、高灵敏度以及选择性好等优点。但它只能用于被气化物
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器 的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好 奇心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程 课时太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学 习了流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我 想对我在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的 粗浅认识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化学特征等参 数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分选并存贮。 这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含的可标记 的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法（免疫荧 光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表：
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具 有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能 够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并 放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品 靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在 鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束 时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检 测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出 的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路 判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液 滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当 作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光 学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是 液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用 下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周 后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装 有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
第一章概论 1、一个优良的检验仪器应具有(P3)：灵敏度、分辨率和精度高，噪音和误差小，可靠性、稳定性和重复性好，响应时间短，测量范围、示值范围、频率响应范围和线性范围宽等性能指标。 2、最小检测量与分辨率的区别?（P5） 答：①分辨率：仪器设备能感觉、识别或探测的输入量（或能产生、能响应的输入量)的最小值。 3、精确度与灵敏度的区别？(P3) 答：①灵敏度：检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比，即检验仪器对单位浓度或质量的被检物质通过检测器是所产生的响应信号值变化大小的反应能力，他反应仪器能够检测的最小被测量。②精确度：对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价，是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念，其高低是用误差来衡量的，误差大则精度低，误差小则精度高。③区别： 4、精确度(P5)：对检测可靠度或检测结果可靠度的一种评价，是指检测值偏离真值的程度。精度是一个定性的概念，其高低是用误差来衡量的，误差大则精度低，误差小则精度高。 5、重复性(P5)：在同一检测方法和检测条件（仪器、设备、检测者、环境条件）下，在一个不太长的时间间隔内，连续多次检测同一参数，所得到的数据的分散程度。重复性与精密度密切相关，重复性反映一台设备固有误差的精密度。 6、准确度和精确度的区别。(P5) 第二章离心机 1、简述分析型超速离心机的工作原理。(P26) 答：分析型超速离心机主要由一个椭圆形的转子、一套真空系统和一套光学系统所组成。该转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置，此轴可使转子在旋转时形成自己的轴。转子在一个冷冻的真空腔中旋转，其容纳了两个小室：分析室和配衡室。配衡室是一个经过精密加工的金属块，作为分析室的平衡用。分析室的容量一般为1ml，呈扇形排列在转子中，其工作原理与一个普通水平转子相同。分析室有上下两个平面的石英窗，离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质，可以通过对紫外光的吸收（如对蛋白质和DNA）或折射率的不同对沉降物进行监测。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜，在检测系统的照相底板上产出一个“峰”。
临床检验仪器的常用性能指标：灵敏性，误差，噪音，最小检测量，精确度，可靠性，重复性，分辨率，测量范围和示值范围，线性范围，响应时间，频率响应范围。 光学显微镜的工作原理：利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。由两组会聚透镜组成光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组成为物镜；焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大，得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足，是通过仪器的机械调焦系统来实现的。 光学显微镜的基本结构：包括光学系统（物镜、目镜、聚光镜及反光镜）和机械系统（聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件） 光学显微镜照明设置部件：光源、滤光器、聚光镜、玻片。 光的吸收定律：即郎伯-比尔定律，是比色分析的基本原理。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。A=-lg I/I0=lg I0/I=lg 1/T=kbc 电阻抗型血细胞分析仪的计数原理：血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体，其电解质比稀溶液大。当血细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，其内外电极之间的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律，在恒电流电路上，电压变化与电阻变化成正比，电阻值又同细胞体积成正比，血细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道，经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出WBC、RBC、PLT。（该原理称库尔特血细胞检测原理 血细胞分析仪测定Hb的原理：除干式离心分层型、无创型外，各种BCA对Hb测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后，RBC溶解释放出Hb，后者与溶血剂中有关成分形成Hb衍生物，进入Hb测试系统。在特定波长（多为530~550nm）下进行光电比色，吸光度值与所含Hb含量成正比。与不同型号BCA配套的溶血剂不同，形成Hb衍生物也不同，吸收光谱也有差异，但最大吸收峰都接近540nm，因为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的氰化高铁（HiCN）法的最大吸收峰在540nm，仪器Hb的校正必须以HiCN值为标准。 尿液分析：是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液的物理学检查和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细
第一章血液一般检验的基本技术 ㈠单项选择题(A型题) 1. 成人静脉采血时，通常采血的部位是(A1型题)"实践技能" A 手背静脉 B 肘部静脉 C 颈外静脉 D 踝静脉 E 股静脉 [本题答案] 2. 静脉采血时，错误的操作是(A1型题)“实践技能" A 从向外消毒穿刺部位皮肤 B 进针时使针头斜面和针筒刻度向上 C 见回血后松开压脉带 D 未拔针头而直接将血液打入容器 E 如需抗凝应轻轻混匀 [本题答案] 4. EDTA盐抗凝剂不宜用于(A1型题)“实践技能" A 红细胞计数 B 白细胞计数
C 血小板计数 D 白细胞分类计数 E 凝血象检查和血小板功能试验 [本题答案] 6. 枸橼酸钠的抗凝原理是(A1型题)"基础知识" A 阻止凝血酶的形成 B 阻止血小板聚集 C 除去球蛋白 D 与血液中的钙离子形成螯合物 E 除去纤维蛋白原 [本题答案] 7. 关于抗凝剂，错误的叙述是(A1型题)"专业知识" A EDTA-Na2溶解度大于 EDTA-K2 B EDTA盐与血浆中钙离子生成螯合物 C 肝素作为抗凝血酶Ⅲ的辅因子而抗凝 D 枸橼酸钠可用于红细胞沉降率测定 E 枸橼酸钠可用于输血保养液 [本题答案] 8. 对草酸盐抗凝剂，错误的叙述是(A1型题)"基础知识"
A 草酸铵可使血细胞膨胀 B 双草酸盐可用于血细胞比容测定 C 对Ⅴ因子保护差 D 过去用于凝血象的检查 E 可干扰血浆中钾，钠和氯的测定 [本题答案] 9. ICSH建议，血细胞计数时首选抗凝剂是(A1型题)"基础知识" A EDTA-K2 B EDTA C EDTA-Na2 D 肝素 E 枸橼酸钠 [本题答案] 11. 肝素抗凝主要是加强哪种抗凝血酶的作用(A1型题)"基础知识" A 抗凝血酶Ⅰ B 抗凝血酶Ⅱ C 抗凝血酶Ⅲ D 抗凝血酶Ⅳ E 抗凝血酶Ⅴ
临床检验仪器学第四讲第12章血细胞分析仪 (Blood Cell Analyzer) 南京医科大学第一临床医学院 临床医学工程处 刘坚
?血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer)是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的 常规检验仪器。 ?血液分析仪主要完成以下两大功能: ⑴血细胞计数：红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白。 ⑵血细胞分类：白细胞中的淋巴、中性、嗜酸、嗜碱、单核、 幼稚细胞；红细胞中的网织红细胞。 ?根据计数/分类的测定值计算间接测定值 红血球容积比(HCT)、平均红血球血红蛋白含量(MCH)、 血小板容积比(PCT)，等等
1947年Coulter 发明了小孔电阻抗法 通过测量细胞的体积大小对细胞进行分类计数 主要是用来计数红、白细胞 该技术一直被各种血液分析仪沿用至今 1953年库尔特家族研制出全世界第一台血细胞计数仪：Model A Wallace H. & Joseph R. Coulter
血细胞计数(Blood count) 早期的血液分析仪主要用来计数红、白细胞全血细胞计数(Complete Blood cell Count) 增加光电比色系统用来同时测定血红蛋白 血小板可在同一仪器上与红细胞一起计数 利用直接测量到的项目运算得到间接计算 项目（如血球压积等参数） 不包括白细胞分类计数 测定标本采用机外人工处理的预稀释方式
白细胞分类计数 (Differential Leukocyte Cell Count) 带电脑的显微镜下辨认细胞的图象识别技术 效率低，受制片、染色技术的影响大 在计数细胞数不多时，重复性较差 没有得到普遍推广 阻抗法仪器检测白细胞“二分群、三分群” 仪器内部结构的进一步完善 微处理器分辨力的进一步提高 特殊溶血剂的应用 无法对细胞内部结构进行分析，准确性有限
山西大学研究生学位课程论文（2013 ---- 2014 学年第一学期） 学院（中心、所）：生物技术研究所 专业名称：微生物学 课程名称： 论文题目：流式细胞仪的原理及其应用 授课教师（职称）：崔晓东 研究生姓名：常姣 年级：研一 学号：201323001003 成绩： 评阅日期： 山西大学研究生学院 年月日
流式细胞仪的原理及其应用 姓名常姣专业微生物学 摘要本文简要论述了流式细胞仪( flowcyt ometry, FCM) 的工作原理, 并对其某些科学领域研究中的应用进行阐述, 包括在生物学、免疫学、临床学中的研究应用。 关键词 FMC；生物学；免疫学；临床学 流式细胞仪( fl o w c y to me tr y, F CM) 研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。近代流式细胞仪，由于单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛和重要，尤其在生物学中对细胞周期的动力学分析、细胞因子、细胞凋亡、信号传导、R N A / D N A 的分析、细胞表面受体及特异性抗原的分析等领域发挥着独特作用，具有操作简单、分析精确、重复性好、费用低廉、分析速度快等优点。 1流式细胞仪的构成及工作原理 流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液, 经荧光染料染色后加入样品管, 在一定气体压力下待测样品被压入流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列, 依次通过检测区, 被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后, 产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管(PMT) 接收。散射光分为前向角散射(forwardscatter, FSC) 和侧向角散射(sidescatter, SSC) 。前者主要反映被测细胞的大小, 后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等, 以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后, 经光电倍增管接收后转为电信号, 再经数/模转换器转换为可被计算机识别的数学信号, 以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来[1,2]。 流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选, 它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体, 可以产生高频振荡, 使液流断裂为均匀的液滴, 待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷, 当带电液滴通过电场, 便会在电场的作用下发生偏转, 然后落入相应的收集器中, 从而实现细胞分选[2]。 2流式细胞仪的应用 流式细胞术的应用，简单用一句话概括就是，凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测。其中细胞生物学领域是流式细胞术在基础研究中应用范围最广泛的领域，因为最初这个技术就是为此目的而设计的。 2.1流式细胞仪在生物学中的应用 流式细胞仪在生物学中的应用越来越广泛,如在细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、神经生物学、微生物学、分子免役学、植物学等等许多生物学基础学科的应用和在细胞凋亡、细胞周期调控、细胞因子及细胞分型等研究中的应用[3]。 2.1.1 对凋亡细胞的分析 细胞凋亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象, 在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持
第一章血液一般检验的基本技术㈠单项选择题(A型题) 1. 成人静脉采血时，通常采血的部位是(A1型题)"实践技能" A 手背静脉 B 肘部静脉 C 颈外静脉 D 内踝静脉 E 股静脉 [本题答案] B 2. 静脉采血时，错误的操作是(A1型题)“实践技能" A 从内向外消毒穿刺部位皮肤 B 进针时使针头斜面和针筒刻度向上 C 见回血后松开压脉带 D 未拔针头而直接将血液打入容器 E 如需抗凝应轻轻混匀 [本题答案] D 4. EDTA盐抗凝剂不宜用于(A1型题)“实践技能" A 红细胞计数 B 白细胞计数 C 血小板计数 D 白细胞分类计数 E 凝血象检查和血小板功能试验 [本题答案] E 6. 枸橼酸钠的抗凝原理是(A1型题)"基础知识" A 阻止凝血酶的形成 B 阻止血小板聚集 C 除去球蛋白 D 与血液中的钙离子形成螯合物 E 除去纤维蛋白原 [本题答案] D 7. 关于抗凝剂，错误的叙述是(A1型题)"专业知识" A EDTA-Na2溶解度大于 EDTA-K2 B EDTA盐与血浆中钙离子生成螯合物 C 肝素作为抗凝血酶Ⅲ的辅因子而抗凝 D 枸橼酸钠可用于红细胞沉降率测定 E 枸橼酸钠可用于输血保养液 [本题答案] A 8. 对草酸盐抗凝剂，错误的叙述是(A1型题)"基础知识" A 草酸铵可使血细胞膨胀
B 双草酸盐可用于血细胞比容测定 C 对Ⅴ因子保护差 D 过去用于凝血象的检查 E 可干扰血浆中钾，钠和氯的测定 [本题答案] D 9. ICSH建议，血细胞计数时首选抗凝剂是(A1型题)"基础知识" A EDTA-K2 B EDTA C EDTA-Na2 D 肝素 E 枸橼酸钠 [本题答案] A 11. 肝素抗凝主要是加强哪种抗凝血酶的作用(A1型题)"基础知识" A 抗凝血酶Ⅰ B 抗凝血酶Ⅱ C 抗凝血酶Ⅲ D 抗凝血酶Ⅳ E 抗凝血酶Ⅴ [本题答案] C 13. 关于双草酸盐抗凝剂，错误的说法是(A1型题)"专业知识" A 草酸钾可使红细胞缩小 B 草酸铵可使红细胞胀大 C 不可用于血细胞比容测定 D 过去用于凝血象的测定 E 目前应用较少 [本题答案] C 14. 凝血象检查时，抗凝剂最好用(A1型题)"专业知识" A EDTA-K2 B 38g/dl枸橼酸钠 C 109mmol/L枸橼酸钠 D 肝素 E 草酸钠 [本题答案] C 16. 关于细胞成分的特性，正确的说法是(A1型题)"基础知识" A 嗜酸性颗粒为酸性物质 B 中性颗粒为酸性物质 C 细胞核蛋白为碱性物质 D Hb为碱性物质 E 淋巴细胞浆为嗜酸性物质