丙酮酸（pyruvic acid PA）含量测定试剂盒使用说明
货号：BC0970
规格：50管/48样
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。操作步骤：
一、丙酮酸提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的
比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、取300μL样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中，混匀，静置2min，加入500
μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。
三、丙酮酸含量计算：
1、标准条件下测定回归方程为y=0.0466x+0.0675；x为丙酮酸钠含量（μg/mL），
y为吸光值。
2、按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μg/mL）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×
(A-0.0675)
3、按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×
(A-0.0675)÷Cpr
4、按照样品质量计算
丙酮酸含量（μg/g鲜重）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675)÷W
5、按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量（μg/104cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)
V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）
体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法）说明书 【产品名称】通用名称：游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法） 英文名称：Nonestesterified fatty acid Assay Kit (Enzymic Method)（NEFA ） 【包装规格】R1：2?60ml 、R2：2?20ml ；R1：2?45ml 、R2：2?15ml ；R1：1?45ml 、R2：1?15ml ； 校准品（选配）：1?2ml （1个水平）。 【预期用途】用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的含量。 临床上主要用于高血脂症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。 【检验原理】游离脂肪酸和辅酶A 在乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）的作用下反应生成乙酰辅酶A 。乙酰辅酶A 在乙酰辅酶A 氧化酶（ACOD ）的作用下生成H 2O 2，随后通过Trinder ’s 底物在过氧化物酶（POD ）的作用下生成有色物质。 【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。试剂R1：乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）0.8KU/L 、MgCl 2(氯化镁)5mmol/L 、吐温-20 0.1%；试剂R2：乙酰辅酶A 氧化酶(ACOD)20KU/L 、过氧化物酶（ POD ）30KU/L 、吐温-20 0.1%；校准品：含十六（烷）酸水溶液。校准品可以溯源至北京华宇亿康校准品，注：校准品浓度见每批瓶标示。不同批号试剂盒中各组分不可以互换。 【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃避光条件下保存可以稳定365天。试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定15天。备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。 【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。 【样本要求】 1、空腹静脉采血，样本为新鲜的血清样本。 2、样本采集后立即离心分离，并在当日检测，如当日不能检测，冷藏2℃～8℃下可稳定48h ；避免反复冻融。 【检验方法】 （1）双试剂无需配制，直接使用。 （2）试验条件：样本（S ）：5 μl 试剂1(R1) ：225 μl 试剂2（R2）：75 μl 温度：37 ℃ 测定类型：终点法 主波长：546 nm 副波长：700 nm 反应方向：向上 方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后5分钟的反 应吸光度。 测定空白吸光度（A 1） 测定反应吸光度（A 2） 0 5 10 （反应时间：10min ） 37℃ （3）校准程序：使用配套校准品进行校准，每次更换试剂批次时都应进行校准。校准后，各实验 室要用质控品验证。如果质控结果不在可接受范围值内，则需要进行重新校准。 （4）质量控制程序：选用Randox2、3（HN1530、HE1532）进行质量控制。各实验室建立各自的 质控频率和可接受范围值。当测定结果超出可接受范围时，有必要采取相应措施。 （5）结果的计算 （A 2 - A 1）样本 NEFA （mmol/L ）= ———————— × 校准品浓度(mmol/L) （A 2 - A 1）校准品 【参考区间】（0.129～0.769） mmol/L （建议各实验室建立自己的参考区间）。依照《医学研
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD法） 适用范围：本产品适用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸（NEFA）含量。 1.1 产品规格 1.2主要组成成分
注：校准品、质控品具有批间、赋值特异性，具体值详见靶值单。 2.1外观 2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无破损； 2.1.2 试剂1：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.3 试剂2：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.4 校准品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.5 质控品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。2.2 净含量 净含量不低于标示值。 2.3 空白吸光度 在主波长546nm、副波长700nm、37℃条件下，试剂空白吸光度A≤0.2。 2.4 线性范围 （0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；
（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.5分析灵敏度 在产品说明书规定参数设定条件下，测定浓度1.0mmol/L的样本，吸光度变化△A≥0.05。 2.6 精密度 2.6.1批内重复性 CV≤10.0%。 2.6.2 批间差 相对极差R≤10.0%。 2.7 准确度 与已上市产品比对：（0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.8 校准品 2.8.1 均一性CV≤5.0% 2.8.2 开瓶稳定性：开瓶后3天，相对偏差不超过±10.0%。 2.9 质控品 2.9.1赋值有效性：测定值在质控靶值范围内。 2.9.2 均一性：CV≤5.0%。 2.9.3 开瓶稳定性：开瓶后3天，测定值在质控靶值范围内。 2.10 稳定性
实验四柠檬酸含量的测定 实验目的 1．掌握配制和标定NaOH标准溶液的方法。 2．进一步熟练滴定管的操作方法。 3．掌握柠檬酸含量测定的原理和方法。 主要试剂和仪器 仪器：4F滴定管；锥形瓶；容量瓶；移液管（25mL）；烧杯；洗瓶。 试剂：邻苯二甲酸氢钾（基准物质， 100-1250C干燥1小时，然后放入干燥器内冷却后备用）；NaOH固体；柠檬酸试样；0.2%酚酞乙醇溶液。 实验原理 大多数有机酸是固体弱酸，如果有机酸能
溶于水，且解离常数Ka ≥10-7，可称取一定量的试样，溶于水后用NaOH 标准溶液滴定，滴定突跃在弱碱性范围内，常选用酚酞为指示剂，滴定至溶液由无色变为微红色即为终点。根据NaOH 标准溶液的浓度c 和滴定时所消耗的体积V 及称取有机酸的质量，计算有机酸的含量。 n n 1(H A)(H A)100%1000c V M n m ω??=??样 有机酸试样通常有柠檬酸，草酸, 酒石酸, 乙酰水杨酸, 苯甲酸等。滴定产物是强碱弱酸盐,滴定突跃在碱性范围内,可选用酚酞为指示剂。用NaOH 标准溶液滴定至溶液呈粉红色(30s 不褪色)为终点。 实验步骤 1．0.10 mol ·L -1 NaOH 溶液的配制及标定 0.10 mol ·L -1 NaOH 溶液的配制同实验一。 准确称取0.4-0.6 g 邻苯二甲酸氢钾，置
于250 mL 锥形瓶中，加入20-30 mL水，微热使其完全溶解。待溶液冷却后，加入2-3 滴0.2%酚酞指示剂，用待标定的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色，半分钟内不褪色，即为终点（如果较长时间微红色慢慢褪去，是由于溶液吸收了空气中的二氧化碳所致），记录所消耗NaOH溶液的体积。平行测定3次。 2.柠檬酸试样含量的测定 用分析天平采用差减法准确称取柠檬酸试样约1.5g，置于小烧杯中，加入适量水溶解，定量转入250mL容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀。 用25mL移液管移取上述试液于250mL锥形瓶中，加入酚酞指示剂1～2滴，用NaOH标准溶液滴至溶液呈微红色，保持30秒不褪色，即为终点。记下所消耗NaOH溶液体积，计算柠檬酸质量分数。如此平行测定3次，相关数
丙酮酸的测定方法内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
实验七丙酮酸含量的测定 一、实验目的 掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原理和方法。 二、实验原理 植物样品中的组织液，用三氯乙酸去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸—2,4—二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色可用分光光度计测量，与已知丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。 三、实验器材与试剂 1、.实验器材 分光光度计；研钵；具塞刻度试管：20mL×8；容量瓶：100mL×2；移液管： 1mL×15mL×4； 量筒：10mL×1；离心机；天平； 大蒜、大葱或洋葱 2、试剂 （1）8%三氯乙酸(当日配制置冰箱中备用)
（2）1.5mol/L氢氧化钠 （3）0.1%2,4—二硝基苯肼:称取2.4—二硝基苯肼100mL，溶于2mol/LHCl中配成100mL溶液，盛入棕色试剂瓶，保存于冰箱内。 （4）丙酮酸钠 四、实验操作步骤 1.丙酮酸标准曲线的制作： 称取丙酮酸钠7.5mg于烧杯中，用8%三氯乙酸溶解，转入100mL容量瓶中，并用8%三氯乙酸定容，此液为60μg/mL的丙酮酸原液。 取6支试管，按下表数据配制不同浓度的丙酮酸标准液： 1.5mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀显色，在520nm波长下比色。做标准曲线。 2.植物样品组织液的提取： 称取植物样品（大蒜、大葱或洋葱）5g，于研钵中加入少许石英沙及少量8%三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用8%三氯乙酸洗入100mL容量瓶中（沙留在研钵内），
定容至刻度。静置30min，取10mL匀浆液离心（4000r/min）10min，取上清液备用。 3.组织液中丙酮酸的测定1.5mol/L氢氧化钠溶液，摇匀显色。在520nm波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得丙酮酸的含量。 五、结果处理 式中：A—标准曲线中查得的丙酮酸克数。 六、思考题：测定丙酮酸含量的基本原理是什么？
游离脂肪酸N E F A检测 的临床意义 文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
游离脂肪酸(NEFA)检测的临床意义 游离脂肪酸（NEFA）是指血清中未与甘油、胆固醇等酯化的脂肪酸，又称非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸。正常情况下，血浆中含量极少，仅占总脂肪酸含量的5%～10%，在血浆中半衰期2～3分钟，主要与血清蛋白结合转运到全身组织利用。 游离脂肪酸(NEFA)有很强的细胞毒性，可损害细胞膜、线粒体和溶酶体膜等，引起细胞内微器损害，而且能增强细胞因子毒性，在许多疾病的病理生理中起重要作用。 游离脂肪酸在临床上的应用: 一、游离脂肪酸与心血管疾病 1.与动脉粥样硬化的关系高浓度NEFA能引起高纤维蛋白原血症，血粘度升高，血管纤溶活性降低，血管壁纤维蛋白原沉积，对肝素有拮抗作用。高纤维蛋白原常促使血小板及红细胞凝集，纤溶活性降低，使动脉向着粥样硬化方向发展，原有的粥样硬化加重。 2.与心律失常的关系急性心肌梗塞早期，心肌对游离脂肪酸的利用明显增加，并可动员脂肪组织中游离脂肪酸进入血液，使血浆游离Ca2+浓度降低，并使氧化磷酸化解偶联，诱发心率失常。 3.与缺血心肌收缩力的关系高浓度NEFA可加重缺血心脏泵功能的损害。有氧条件下NEFA 不改变心肌的收缩功能，而在低氧、缺氧条件下则可降低其收缩力，增加其静息张力，浓度越高，抑制作用越强，甚至还会引起心肌挛缩。 二、游离脂肪酸与代谢综合症 代谢综合征(MetabolicSyndrome)，也称X综合征(XSyndrome)、胰岛素抵抗综合征(InsulinResistanceSyndrome，IRS)，它包括一系列与胰岛素抵抗有关的代谢及生理紊乱，包括：中心性肥胖、高血压、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖耐量减低、脂代谢紊
快速检测试剂盒化学反应原理 1.硫氰酸钠：白色斜方晶系结晶或粉末，易溶于水、乙醇、丙酮等溶剂，水溶液呈中性， 遇铁盐生成血红色的硫氰化铁，遇亚铁盐不反应，与硫酸生成黄色的硫酸氰钠，与钴盐作用生成深蓝色的硫氰化钴，与银盐或铜盐作用生成白色的硫氰化银或黑色的硫氰化铜沉淀，在空气中易潮解。 2.液体石蜡：即矿物油，珍珠大米的检测方法：取大米于样品杯中一半体积，加入70℃以 上的热水至样品杯近满处，用洁净牙签轻轻搅动30秒以上，静置片刻使溶液温度降低到50℃以下(固体石蜡的熔点为50～65℃)，如果样品中掺有石蜡，液面上会出现细微的油珠，随着温度的降低和时间的延长液体石蜡的油珠会聚集加大，固体石蜡的油珠会结成白色片状物浮于液面上。 3.工业碱：一般指（碳酸钠）、工业烧碱（氢氧化钠）、工业重碱（碳酸氢钠）。碳酸钠也 被称为纯碱。碱性溶液遇到酚蓝试剂变成紫红色，碳酸钠与钙的可溶性盐生成沉淀，而氢氧化钠或者碳酸氢钠遇到钙的可溶性盐则不会发生沉淀。 4.甲醇：工业酒精，甲醇经氧化试剂氧化后形成甲醛，甲醛可与品红-亚硫酸作用生成蓝紫 色化合物。（氧化剂配制：高锰酸钾-磷酸溶液，混合后不容易保存，所以分开配制逐一添加。品红-亚硫酸溶液：混合后不易保存，同样是分开配制逐一添加。亚硫酸为亚硫酸钠与盐酸配制所得，可百度。） 5.甲醛：乙酰丙酮法原理是利用甲醛与乙酰丙酮及氨生成黄色化合物二乙酰基二氢卢剔啶 后，412nm下进行分光光度测定。此法最大的优点是操作简便，性能稳定，误差小，不受乙醛的干扰，有色溶液可稳定存在12hr；缺点是灵敏度较低，最低检出浓度为 0.25mg/L，仅适用于较高浓度甲醛的测定；方法缺点是反应较慢，需要约60min；SO2 对测定存在干扰(使用NaHSO3作为保护剂则可以消除)。变色酸法也称铬变酸法,甲醛在浓硫酸溶液中可与变色酸(1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸)作用形成紫色化合物。该法的优点是操作简便、快速灵敏；缺点是在浓硫酸介质中进行，不易控制，且醛类、烯类化合物及NO2等对测定有干扰。酚试剂法原理是甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含量成。正比副品红法原理是在甲醛存在下，亚硫酸根离子与副品红生成紫色络合物，其最大吸收峰在570nm处，检测限为50μg/L。本法的优点是简便灵敏，其它醛和酚不干扰测定；缺点是褪色快，灵敏度不高，易受温度影响，使用了有毒的汞试剂。AHMT法原理是甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，3－三氮杂茂（AHMT）在碱性条件下缩合,然后经高碘酸钾氧化成6- 基-5-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯紫红色化合物,比色定量。该方法优点是抗干扰能力强，对乙酰丙酮法、MBTH法及副品红法干扰严重的六胺对此测定方法无干扰，因此，该法是测定树脂交联过程释放甲醛的有效方法；灵敏度较高，最低检出限为0.01mg/m3，较适宜与一般情况下室内空气的检测；缺点是颜色随时间逐渐加深，要求标准溶液的显色反应和样品溶液的显色反应时间必须严格统一，在显色体系最大吸收波长550nm测定，Co2+、Cu2+干扰测定。溴酸钾－次甲基蓝法原理是在酸性介质中，甲醛可促进溴酸钾氧化次甲基蓝反应，降低体系吸光度的特点来快速测定甲醛含量。次甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，在H2SO4介质中加入KBrO3能使其吸收峰微降，而再加入甲醛后，其吸光度会显著下降，△A降低与甲醛浓度成正比。银－Ferrozine法原理为水合氧化银能氧化甲醛并被还原为Ag，产生的Ag与Fe3+定量反应生成Fe2+，Fe2+与菲洛嗪（Ferrozine）形成有色配合物 6.溴酸钾：见附页。 7.硫酸镁：络合滴定法取供试品适量，加水溶解，以铬黑T为指示剂，用乙二胺四醋酸钠 滴定液（0.05mol/L)滴定至溶液自紫红色转变为纯蓝色。每1mL乙二胺四醋酸钠滴定液
丙酮酸（pyruvic acid PA）含量测定试剂盒使用说明 货号：BC0970 规格：50管/48样 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。 产品说明： 丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。操作步骤： 一、丙酮酸提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的
比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。 2、取300μL样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中，混匀，静置2min，加入500 μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。 三、丙酮酸含量计算： 1、标准条件下测定回归方程为y=0.0466x+0.0675；x为丙酮酸钠含量（μg/mL）， y为吸光值。 2、按照血清（浆）体积计算 丙酮酸含量（μg/mL）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6× (A-0.0675) 3、按照蛋白浓度计算 丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46× (A-0.0675)÷Cpr 4、按照样品质量计算 丙酮酸含量（μg/g鲜重）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675)÷W 5、按照细菌或细胞密度计算 丙酮酸含量（μg/104cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675) V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒（ACS-ACOD酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的浓度。 1.1产品规格 1.2 组成成分 1.2.1 试剂组成 试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L；
辅酶A 0.5mmol/L； ATP 3 mmol/L； 乙酰辅酶A合成酶（ACS ） 0.4KU/L； ）2mmol/L； 氯化镁（MgCl 2 偶联终点比色法结合成份（Trinder结合成份）0.5g/L； 表面活性剂和稳定 剂＜1%； 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L； 乙酰辅酶 A 氧化酶（ACOD ）30KU/L； 过氧化物酶（POD ） 45KU/L； 4-氨基安替比林（4AAP） 1.5g/L； 表面活性剂和稳定剂＜1% 1.2.2 校准品的组成 单水平的液体校准品，在50mM pH7.0的磷酸盐缓冲液中添加十六烷酸纯品，稳定剂<0.5%；定值范围：0.8-1.2mmol/L。 1.2.3质控品的组成 两个水平的液体质控品，在牛血清(20g/L)中加入十六烷酸纯品，添加的牛血清的比例为5%-10%，稳定剂<0.5%；目标浓度范围：低水平（0.30-0.60）mmol/L，高水平（0.80-1.20）mmol/L。 2.1 外观 液体双试剂：试剂1：无色或淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。
校准品：无色或淡黄色澄清液体。 质控品：无色或淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度 试剂空白吸光度应≤0.3。 2.4 分析灵敏度 浓度为0.5mmol/L时，吸光度差值的绝对值在0.01-0.2范围内。 2.5 线性 在(0,3.0]mmol/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.995；在(0,1.2] mol/L 时绝对偏差不超过0.18mmol/L；在（1.2,3.0]mmol/L范围内的相对偏差不超过±15%。 2.6 精密度 变异系数CV应≤6% 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8 准确度 回收实验：回收率在90%-110%。 2.9 质控品赋值有效性 测定值在质控靶值范围内。 2.10校准品溯源性要求
丙酮酸含量测定 一、目的：丙酮酸是一种重要的中间代谢物。通过本实验掌握测定植物组织中丙酮酸含量的原理和方法，增加对代谢的感性认识。 二、原理：植物样品组织液用三氯乙酸除去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与 2,4- 二硝基苯阱反应，生成丙酮酸一 2 ， 4 一二硝基苯踪，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色深度可用分光光度计测量。与同样处理的丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。 三、仪器、试剂、材料 1、1.5 mol/L NaOH 2、 8% 三氯乙酸 3、 0.1% 2,4 一二硝基苯肼 4 、丙酮酸标准液 5、.材料大蒜的鳞茎。 四、操作步骤 1、.植物材料提取液的制备 称取 0.5—1g大蒜于研钵内加适量 8% 三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用 8% 三氯乙酸洗入 25ml 容量瓶，定容至刻度。塞紧瓶塞，振摇提取，静置 30min 。取约 10ml 匀浆液离心（ 4000 r/min ） 10min ，上清液备用。 2、标准曲线制作（略） 3、.组织液中丙酮酸的测定 取 1. 0ml 上清液于一刻度试管中，加 2ml 8 ％三氯乙酸，加 1.0ml 0.1％2.4 －二硝基苯肼液，摇匀，再加 5.0 ml 1.5mol/L, NaOH 溶液，摇匀显色，10min 后在 520 nm 波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得测定管的丙酮酸含量。 五、结果处理
丙酮酸含量（mg/g鲜重）=A*V*稀释倍数/样品重(g)*1000
式中， A 为在标准曲线上查得的丙酮酸的微克数。 V为提取液体积。 六、注意事项 1. 所加试剂的顺序不可颠倒，先加丙酮酸标准液或待测液，再加 8% 三氯乙酸，最后加 1.5mol/ L NaOH 。 2 .应反应 10min 后再比色。
2.1.4游离脂肪酸测定方法2.141 试剂 乙醇-乙醚混合溶液：无水乙醚与95沱醚1:1（V）混合，每100mL溶剂加入0.3mL酚酞指示剂 0.1M KOH标准溶液：称取5.8gKOH溶于1000mL新沸冷却蒸馏水中，摇匀，按下 法标定其摩尔浓度。称取在125 C烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾 0.8608g ,精确至0.0002g ,置于250mL锥形瓶中，以50mL蒸馏水溶解， 加入2-3滴酚酞指示剂，用上述KOH容液滴定至粉红色，同时做空白试 验，KOH标准溶液摩尔浓度M G— （V V。）0.2042 式中：G—邻苯二甲酸氢钾质量，g V —KOH容液用量，mL V 。一空白试验KOH溶液的用量，mL 0.2042 —每mol邻苯二甲酸氢钾的质量,g 计算结果：M KOH二0.86080.0942 （44.85 0.10） 0.2042 1獅酞指示剂：1g酚酞溶于100mL95乙醇中 2.1.4.2 仪器 250mL锥形瓶，25mL滴定管分析天平 2.2.5游离脂肪酸（FFA）含量的测定⑴: 精确称取样品5.0g，置于锥形瓶中，用水浴微热熔融，加入预先中和的乙醚、乙醇混合液50mL使之溶解，加入1%酚酞5滴，然后用氢氧化钾标准溶液滴至呈粉红色，10s 内不退色为终点，记录消耗氢氧化钾标准液的毫升数。游离脂肪酸质量分数（以油酸计）为
m 式中FFA 游离脂肪酸的质量分数 V-消耗氢氧化钾标准溶液的体积（mL C-氢氧化钾标准溶液的浓度（mol/L ） 282-油酸的摩尔质量（g/mol ） m 样品质量（g ） 2.1.5游离氨基酸测定方法 2.1.5.1 试齐I 」 40%中性甲醛：40mL 甲醛溶于60mL 蒸馏水中，用1mol/L NaOH 调pH 为8.1 0.1%百里酚酞：0.1g 百里酚酞溶于90mL 乙醇，加水至100mL 0.1M NaOH B 准溶液：称取110gNaOH 溶于100mL 无CO 的水中，摇匀，注入聚乙烯容器 中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管量取5.1m 上层清液，用无CO 的水稀释至1000mL 摇匀。 称取0.75g 于105-110 C 烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，加入无 CO 水溶解，加2滴酚酞指示液，用配好的NaOH 底至溶液呈粉红色， 并保持30s ，同时做空白实验。NaOH 标准溶液的摩尔浓度 M NaOH m 1000 (V 1 V 2)M 式中:m —邻苯二甲酸氢钾 质量， g V 1 —NaOH 体积，mL V 2 —空白试验消耗NaO 啲体积， mL M —邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量， 204.22g/mol 计算结果： M NaOH =—— 0.7512 1000 — =0.11026 (33.41 0.05) 204.22 FFA V C 282 1000 100
商品号/79370 干扰物检查A PLUS Interference Check.A Plus 说明干扰物检查A PLUS试剂盒是用于检测胆红素（游离型、结合型）、溶血、乳糜等物质对检查结果影响程度的干扰物检查用的专用试剂盒。 制品成分 1、胆红素*F(游离型）－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 2、胆红素*F(空白）－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 3、胆红素*C(结合型）－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 4、胆红素*C(空白）－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 5、溶血血红蛋白－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 6、溶血血红蛋白（空白）－－－－－－－－－－－－2mL*1 7、乳糜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 8、乳糜（空白）－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 使用方法 各瓶用精制水2mL溶解，当天使用。（根据所需添加浓度不同，精制水量不同） 操作方法 1、溶解后的样本（干扰物质）1.0ml和事先准备好的混合血清9.0ml混合制成样本A 2、溶解后的样本（空白）1.0ml和事先准备好的混合血清9.1ml混合制成样本B 3、样本A和样本B按以下表格配制稀释系列 对照 1/10 2/10 3/10 4/10 5/10 6/10样本A----0.10.20.30.40.50.6 样本B 1.00.90.80.70.60.50.4 7/10 8/10 9/101 样本A0.70.80.9 1.0 样本B0.30.20.1---- 4、对以上稀释系列进行检测 组成 1、胆红素*F（游离型）T-BIL# 牛蛋白 3.2g/dL Tris.缓冲液 Ph8.5100mmol/L 2、胆红素*F（空白）牛蛋白 3.2g/dL Tris.缓冲液 Ph8.5100mmol/L 3、胆红素*C（结合型）T-BIL/D-BIL# 牛蛋白 4.0g/dL Tris.缓冲液 Ph8.020mmol/L 4、胆红素*C（空白）牛蛋白 4.0g/dL Tris.缓冲液 Ph8.020mmol/L 5、溶血血红蛋白溶血血红蛋白＃ 蔗糖10g/dL
丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法) 简介： 丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。 丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用酶催化法，该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD +，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH 的减少量，进而计算出丙酮酸含量。 通过分光光度比色法(酶标仪)测定340nm 处吸光度的下降速率，据此通过比色分析就可以计算出PA 水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于 本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 ② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。 ③ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。 2、 配制标准品工作液：取丙酮酸标准(25mmol/L)稀释液，使浓度达到0.5mmol/L ，即为 标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)。4℃避光保存24h 有效。 编号 名称 TC0754 120T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(25mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 1ml RT 试剂(C): PA 显色液 C1: PA Assay buffer 30ml 4℃ 避光 C2: NADH 3支 -20℃ 避光 临用前，按C1:C2=10ml:1支的比例混合，即为PA 显色液。 试剂(D): LDH solution 0.2ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
游离脂肪酸在肝脏疾病和癌症中的应用 游离脂肪酸定义： 游离脂肪酸（NEFA）是指血清中未与甘油、胆固醇等酯化的脂肪酸，又称非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸(nonesterified fatty acid)。正常情况下，血浆中含量极少，仅占总脂肪酸含量的5%～10%，在血浆中半衰期2～3分钟，主要与血清蛋白结合转运到全身组织利用。 游离脂肪酸(NEFA)有很强的细胞毒性，可损害细胞膜、线粒体和溶酶体膜等，引起细胞内微器损害，而且能增强细胞因子毒性，在许多疾病的病理生理中起重要作用。 游离脂肪酸在肝脏疾病和癌症中的应用: 非酒精性脂肪肝病是代谢综合征的一种重要临床表现，从简单的脂肪肝到脂肪性肝炎，肝硬化，直至肝癌。非酒精性脂肪肝病的重要表现就是三酰基甘油（TAG）在肝脏的堆积。在非酒精性脂肪肝病患者中，其堆积于肝脏的三酰基甘油60%是游离脂肪酸（NEFA），来源于血浆游离脂肪酸池，血浆游离脂肪酸的浓度直接决定了进入肝脏的游离脂肪酸的绝对量，与非酒精性脂肪肝病的发病机制密切相关。据相关文献，在禁食状态，80%的脂肪酸由脂肪组织生成并释放到血浆游离脂肪酸池中，哪怕在进食状态下，此数值仍达到60%，因此由脂肪组织过度生成的脂肪酸将经由血浆游离脂肪酸池流入肝脏，从而造成三酰基甘油在非酒精性脂肪肝病患者肝脏中形成堆积[1]。高浓度的游离脂肪酸作用于肝细胞可致肝细胞线粒体肿胀和通透性增加，肝细胞变性、坏死和炎性浸润。即使极低浓度的游离脂肪酸也可改变粘膜的通透性，导致粘膜受损，损伤内皮细胞。因此，血清或肝脏中NEFA浓度略有增加即可损伤肝细胞。 检测血浆游离脂肪酸浓度可作为癌症死亡率的独立相关指标（相对风险可达1.66，95% 置信区间1.25,2.21，根据年龄，吸烟史，心率和体质指数调整）[2]。高浓度血浆游离脂肪酸可作为癌症死亡的预示，尤其是在最高浓度的20%患者中，如果是与吸烟或酒精相关癌症中，则其预示性将更为强烈。众所周知，过多饱和脂肪饮食，将导致某些癌症的发生。在禁食状态下，储存的甘油三酯将分解为游离脂肪酸，造成游离脂肪酸在人体中循环流通。高血压、伴胰岛素抵抗的糖尿病、向心性肥胖，系统性的游离脂肪酸循环流通升高，已经被证实可作为某些癌症的风险因子，如胰腺癌，肝癌，肾癌和子宫内膜癌等。升高的游离脂肪酸可作为这些癌症的常规检测指标[2]。游离脂肪酸可能与癌症诱发和生长相关，但是目前仍没有明确的关于这方面的解释。 无论如何，在肝脏疾病中检测游离脂肪酸对于监测肝脏疾病进程非常有效，而对于癌症病人检测游离脂肪酸，其强烈的癌症患者死亡率预示性则更加具有临床价值。 参考文献： [1] High Plasma Nonesterified Fatty Acids Are Predictive of Cancer Mortality but Not of Coronary Heart Disease Mortality: Results from the Paris Prospective Study, Am J Epidemiol Vol. 153, No. 3, 2001:292-298 [2]Contribution of adipose tissue and de novo lipogenesis to nonalcoholic fatty liver disease, J Clin Invest. 2005;115(5):1139–1142.
丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法) 简介： 丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。 丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用酶催化法，该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD +，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH 的减少量，进而计算出丙酮酸含量。 通过分光光度比色法(自动分析仪或分光光度计)测定340nm 处吸光度的下降速率，据此通过比色分析就可以计算出PA 水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于 本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 ② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。 ③ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。 2、 配制标准品工作液：，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)。4℃避光保存24h 编号 名称 TC0755 50T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(25mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 5ml RT 试剂(C): PA 显色液 C1: PA Assay buffer 90ml 4℃ 避光 临用前，按C1:C2=30ml:1支的比例混合，即为PA 显色液。 试剂(D): LDH solution 0.4ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～ 120mg/100ml）。 血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。 血糖浓度的调节 血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。 神经系统的调节作用 神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。 下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另
一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。 下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。 激素 使血糖浓度降低的激素 :胰岛素 使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素 它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。 在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。 胰岛素 使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。 诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。 通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。 胰高血糖素 主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。 肾上腺素
丙酮酸（PA）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC2200 规格：50T/48S 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体9mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存； 丙酮酸钠标准液，1mg/mL：液体1mL×1瓶，4℃保存。 产品说明： 丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。 操作步骤： 一、丙酮酸提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提 取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取 液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清 （浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 4、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100、50、2 5、12.5、6.25、3.125、1.5625、0g/ml。
游离脂肪酸（NEFA）测定试剂盒（ACS-ACOD法） 适用范围：用于体外定量测定人体血清中游离脂肪酸的含量。 1.1 试剂盒包装规格 试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml； 试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml；试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。校准品（选配）：1×1ml；1×3ml。 质控品（选配）：1×1ml；1×3ml。 1.2试剂盒主要组成成分
2.1 外观 试剂1：无色至淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。 校准品：无色至淡黄色澄清液体。 质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 在37℃、600 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.3。 2.4 分析灵敏度 测定浓度为0.5mmol/L样本时，吸光度变化值（ΔA）应在（0.01，0.2）范围内。 2.5 线性范围 在（0，3）mmol/L范围内，线性相关系数r应不小于0.995。在[1，3）mmol/L 范围内线性相对偏差应不大于±15%；测定浓度（0，1）mmol/L时线性绝对偏差应不大于±0.15mmol/L。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于6%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度 回收试验：回收率应在85%～115%之间。 2.9 质控品赋值有效性 测定结果在靶值范围内。 2.10 校准品溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至企业工作校准品。 2.11 稳定性 效期稳定性：试剂盒在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒进行检验，试验结果满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8、2.9的要求。
货号: QS2400 规格：50管/24样游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）含量测试盒 可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。 测定原理： 在弱酸性条件下，FFA与铜盐反应生成铜皂，在715nm处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。 自备实验用品及仪器： 研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。 试剂组成和配制： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存。 样品中FFA提取： 2、血液：将所取血液，室温静置1 h 后，于4 ℃ 离心机3500 rpm离心15min，取上清0.1mL， 加1.2mL试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 3、组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提 取液体积(mL)为1：5~12的比例（建议称取约0.1g组织，加入1.2mL试剂一）加入试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 4、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1.2的比例（建议 500万细胞加入1.2mL试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；震荡提取3h，然后8000g，4℃，离心10min，取上清待测。 测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到715 nm。 2. 对照管：取上清液1mL，加0.5mL试剂二，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿，调零。 3. 测定管：取上清液1mL，加0.5mL试剂三，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿，测定吸光值，记为A。 注意：对照管每个样品都需要测定一次。 FFA含量计算公式： 标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994 1.血液中FFA含量计算 FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V3×V1÷V2)=1600×(A-0.0055) 2. 组织、细菌或细胞中FFA含量计算 （1）按样本蛋白浓度计算 第1页，共2页