、流式细胞术常用试剂
1、10％NaN 3：将 10gNaN3 溶解于 100ml 蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化 酶反应中可不使用 NaN 3。
2、 3％ BSA/PBS ： 100ml PBS 中加入 3g BSA ，使之溶解，再加入 0.2ml 10％的 NaN 3。
3、500mmol/L EDTA ：将 186g EDTA?Na 2?2H 2O 溶解于 400ml 蒸馏水中，用 NaOH 将 PH 调 至 8.0 ，补充蒸馏水至 500ml ，分装，高压灭菌，室温保存。
4g 多聚甲醛溶于100ml PBS ，加入数滴 NaOH ，在通 PH 至 7.4，使用前新鲜配制。
5、消化液： 0.25％胰蛋白酶（用培养液或 PBS 配制）或 0.25％胰蛋白酶与 0.02％ EDTA 的 混合液。
6、红细胞裂解液： NH 4CI 4.16g , KHCO 3 0.5g , EDTA?2Na 0.02g ，溶于 100ml 水中，调 PH 至 7.2，补充蒸馏水至 500ml ， 4 度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂： 0.1mmol/L PBS 液（PH 7.4）+ 1 % BSA + 0.1% Na 2N 3。 8、常用细胞破膜
剂： PBS 液（PH 7.4） + 1% FBS （或 BSA ） + 0.1% NaN 3+ 0.1% saponin （Sigma
的效果不错） 。 9、流式细胞染色洗涤液：含 2%的 BSA 、 0.1%NaN3 的 PBS （PH 7.4）。
10、PI 染液（保存液，10务用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI 溶于10ml PBS ,加入2mg 无DNA 酶的RNA 酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加 0.3ml ?0.5ml PI 染液。
11、Hanks 液的配制（BSS ，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、 组织培养液）
原液 A
NaCl 160g
MgSO 4?7H 2O 2g
KCl 8g
MgCl?6H 2O 2g
CaCl 2 2.8g
溶于 1000ml 双蒸水
原液 B
1） N a 2HPO 4?12H 2O 3.04g
KH 2PO 4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于 800ml 双蒸水
2） 0.4%酚红溶液：取酚红 0.4g 置玻璃研钵中，逐滴加入 0.1N NaOH 并研磨，直至完全溶 解，约加入 0.1N NaOH 10ml 。将溶解的酚红吸入 100ml 量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留 的酚红4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将 风柜中于 60 度加热，使其溶解，调整
液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml 。
将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml 即为原液 B 。应用液：原液 A 1 份原液 B 1 份双蒸水18 份
混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的5.6 % NaHCO3调PH至7.2?7.6。
12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）
A 液（0.2mol/L NaH 2PO4 水溶液）：
NaH2PO4?H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。
B 液（0.2mol/L Na2HPO4水溶液）：
Na2HPO4?7H2O 53.6g 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
不同PH 值PB 的配制：
A液xml （参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/L PB。
PH x/ml y/ml
5.7 93.5
6.5
5.8 92.0 8.0
5.9 90.0 10.0
6.0 8
7.7 12.3
6.1 85.0 15.0
6.2 81.5 18.5
6.3 7
7.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 3
7.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51.0 49.0
6.9 45.0 55.0
7.0 39.0 61.0
7.1 33.0 67.0
7.2 28.0 72.0
7.3 23.0 77.0
7.4 19.0 81.0
7.5 16.0 84.0
7.6 13.0 87.0
7.7 10.0 90.0
7.8 8.50 91.0
7.9 7.00 93.0
8.0 5.30 94.7
13、PBS 的配制
配制PBS,只要在相应的PB基液中加入8.5g/L NaCI即可。
二、常用激活剂
1激活剂PMA :用DMSO配制成0.1mg/ml，分装20ul/管，—20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：100 稀释储存液,终浓度为20ng/mI。
2、激活剂离子霉素:用乙醇配制成浓度为0.5mg/ml 的储存液,—20 度保存。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10 稀释储存液,终浓度为1ug/ml。
3、Staphylococcal enterotoxin B（SEB）:用无菌无叠氮钠PBS 调节浓度0.5mg/mL , 4 C储存，SEB 终浓度10ug/mL 。
4、C D3 :包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞。
5、CD28 :加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。
6、阻断剂Bregeldin A :用DMSO配制成浓度为5mg/ml的储存液，分装20ul/管，—20度
保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1 : 10稀释储存液，在激活过程最后4?
5小时使用BFA，终浓度为10ug/ml。
7、阻断剂莫能菌素：用DMSO配制成浓度为1mg/ml的储存液，4C储存至少4个月，实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10稀释储存液,终浓度为2umol/L。
三、常用抗体标记荧光染料的特性及其应用
1、FITC :激发波长488nm，最大发射波长525nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1 通道检测；
3）可用于荧光显微镜技术
4）荧光强度易受PH 值影响, PH 值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor 488 :激发波长488nm，最大发射波长519nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1 通道检测；
3）具有超乎寻常的光稳定性,非常适用于荧光显微镜技术；
4）在较宽的PH 值范围内保持稳定（PH4?10）。
3、Cy3 :激发波长488nm，最大发射波长570nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2 通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。
4、Cy5 :激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL4通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE:激发波长488nm,最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR :激发波长488nm，最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610 :激发波长488nm，最大发射波长628nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）荧光强度高；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor 647 :激发波长488nm，最大发射波长668nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）不易湮灭；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
9、PE-Cy5 :激发波长488nm，最大发射波长670nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4）可与FITC、PE搭配，荧光干扰小、补偿小，但不宜与APC搭配。
5）与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、PE-Cy5.5 :激发波长488nm，最大发射波长694nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4）可与FITC、PE、APC搭配，荧光干扰小、补偿小，是APC比较理想的搭配。
11、PE-Alexa Fluor 700 :激发波长488nm，最大发射波长723nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）光淬灭性很强，要绝对避光。
12、PE-Cy7 :激发波长488nm,最大发射波长767nm。
1 ）在Beckman Coulter 流式细胞仪的FL4 通道检测，BD 细胞仪FL3 通道检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）光淬灭性很强,要绝对避光；
4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小，补偿小，是比较理想的搭配。
13、T R :激发波长595nm，最大发射波长615nm。
1）其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪；
2）荧光不易淬灭,可用于荧光显微镜。
14、APC :激发波长633/635nm，最大发射波长660nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）在BD 细胞仪的FL4 通道检测,在Beckman Coulter 细胞仪只有配备双激光器的FC500 才能检测到。
15、A PC-Cy5.5 :激发波长633/635nm，最大发射波长668nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）主要用于四色以上的流式细胞术。
16：PerCP:激发波长488nm，最大发射波长677nm。
1 ）在Beckman Coulter 流式细胞仪的FL4 通道检测, BD 细胞仪FL3 通道检测；
2）可于FITC、PE 搭配,荧光光谱重叠少,对随细胞的特异性结合少,但量子产量较低, 适用于较高表达物的检测。