名词解释
1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿
主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。包括上游技术和下游技术。
2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包括获得目的基因、
构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物分离纯化、产品加工检验等步骤。
3.逆转录逆转录（reverse transcription）是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模
板合成DNA的过程。
4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后
在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。
5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的
5’端相同。是PCR的起始点。
6.表达载体所谓表达载体（expression vector）是指具有宿主细胞基因表达所需的调节控制
序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
7.克隆载体克隆载体（cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，
送进受体细胞中进行繁殖的工具。
8.载体载体（vector），指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至
受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
9.报告基因载体分子上有一种特殊意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经
进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。这种基因就是报告基因。
10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具
有转录起始的特异性
11.PCR聚合酶链式反应是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包括
变性、退火、延伸三个过程，并且多次循环。
12.包涵体包涵体（inclusion body）是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而
形成的晶体结构物。通常包涵体虽然具有正确的氨基酸序列，但是空间结构却是错误的。
13.蛋白表达系统蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过
这个体系实现外源基因在宿主细胞中表达的目的。
14.单克隆抗体由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为
单克隆抗体。
15.基因工程抗体基因工程抗体就是按不同的目的和需求，对抗体基因进行加工、改造和
重新装配，然后导入适当的受体细胞中表达得到的抗体分子。
16.改形抗体改性抗体（reshaped antibody,RAb）是指利用基因工程技术，将人抗体可变区
（V）中互补决定簇序列改换成鼠源单抗互补决定簇。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。
17.嵌合抗体在基因水平上将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来并在合适的
宿主细胞中表达，这种抗体叫做嵌合抗体（chimeric antibody）。
18.镶面抗体将鼠源单抗可变区中氨基酸残基改造成人源的，消除了异源性且不影响可变区
的整体空间构象。
19.单链抗体单链抗体(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗体重链可变区和轻链
可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成。scFv能较好地保留其对抗原的亲
和活性,并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。
20.双特异性抗体双特异性抗体（bispecific antibody,BsAb)是指具有两种抗原结合特性的抗体
21.展示技术
是在基因或突变体文库中选择有用的基因或突变体的一种高通量的筛选方法，该技术的特点是利用筛选基因的表型和基因型密切相连的特性，通过筛选表型而获得基因型
22.重组蛋白药物的复制
对专利期满的重组蛋白药物进行复制生产
23.易错PCR
易错PCR 是指通过改变PCR反应条件来调整PCR反应中的突变频率，降低聚合酶固有的突变序列的倾向性，提高突变谱的多样性，使得错误碱基随机地以一定的频率掺入到扩增的基因中，从而得到随机突变的DNA群体，最后用合适的载体克隆突变基因。
24.Gene 改组
DNA改组是指DNA分子的体外重组，是基因在分子水平上进行有性重组(sexual recombination)。通过改变单个基因(或基因家族，gene family)原有的核苷酸序列，创造新基因，并赋予表达产物以新功能。
25.盒式诱变
是一种定点突变技术，将目的基因的一段DNA删掉，并用人工化学合成所具有的突变核苷酸的双链寡核苷酸片段取代，产生相应的突变体。
26.大引物诱变法
一种简单的PCR定点诱变法，是以第一轮PCR扩增产物作为第二轮PCR扩增的大引物，只需三种扩增引物进行两轮PCR反应，即可获得突变体DNA
27.基因工程疫苗
使用DNA重组生物技术，把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。
28.新型疫苗
新型疫苗是采用生物化学合成技术、人工变异技术、分子微生物学技术、基因工程技术等现代生物技术制造出的疫苗，是近年来新发展的疫苗。其有别于传统常规疫苗。包括基因工程亚单位疫苗、重组疫苗、合成肽疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗和抗独特型抗体疫苗等。
29.灭活疫苗
灭活疫苗是先对病毒或细菌培养，然后用加热或化学剂（通常是福尔马林）将其灭活使其失去致病力，但仍保留免疫原性而制成的生物制剂
30.弱毒疫苗
弱毒疫苗，是一种病原致病力减弱但仍具有活力的完整病原疫苗，也就是用人工致弱或自然筛选的弱毒株，经培养后制备的疫苗。
31.合成多肽疫苗
用化学手段合成病原微生物的保护性多肽活表位并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成的疫苗。
32.基因缺失疫苗
用基因工程技术将病毒或细菌的致病性基因进行缺失，从而获得弱毒株活疫苗。
33.亚单位疫苗
指除去病原体中无免疫保护作用的有害成分，保留其有效的免疫原成分制成疫苗。
34.重组活载体疫苗
用基因工程技术将病毒或细菌构建成一个载体，把外源保护性抗原基因插入其中使之表达的活疫苗。
35.反向遗传操作
与经典的从表型改变到进行基因特征研究的思路相反，是指通过构建RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒cDNA 分子水平上对其进行体外人工操作
36.基因疫苗
基因疫苗指的是DNA疫苗，即将编码某种抗原蛋白的外源基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达合成抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。
37.核酸疫苗
核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接导入动物体细胞内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的
38.肿瘤疫苗
是通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。
39.避孕疫苗
避孕疫苗是一种具有科学性、长期性及可逆性的避孕方法。世界各国都在从事这方面的研究工作。其基本原理是通过提取一种抗原成分制成疫苗，给予受试对象产生相应的免疫反应，从而阻止受孕。此法只处于实验和研究阶段，尚未进入临床试验。
问答题、
1．制药基因的获得方法有哪些
制药基因获得的方法一般分为直接获得法和间接获得法。一般来说，所谓的直接获得法就是直接从基因组DNA中获得制药基因；而间接获得法要先获得mRNA、cDNA等，间接从基因组DNA中获得制药基因。但真核生物基因组不仅庞大，而且结构复杂，分离时还要尽可能排除内含子，所以常用间接法获得制药基因。具体方法常有两种：一是从cDNA文库克隆制药基因，首先以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后再合成双链DNA，并将双链DNA重组到质粒载体或噬菌体载体上，导入大肠杆菌宿主细胞进行增殖；二是通过RT-PCR以mRNA逆转录得到的cDNA第一条链为模板，设计特定的引物，扩增获得制药基因产物。但是RT-PCR分离制药基因必须以制药基因的序列已知为前提。
2．基因工程制药的内涵？
基因工程制药是根据所需要的蛋白药物，
3．什么是PCR?一般的PBL包括哪些步骤？
PCR是聚合酶链式反应，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）技术是利用酶促反应在体外指导特定DNA序列扩增的方法，以热变性的双链DNA分子为模板，利用引物和四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）为原料在DNA聚合酶的作用下大量扩增了特定的DNA片段。一般的PCR包括以下几个过程：
1.变性，DNA双链在高温下（一般为94℃）会解离成两条单链DNA分子。
2.退火，降低反应温度（约50℃），使专门设计的一对寡核苷酸引物与两条单链模板DNA
因发生退火作用而结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上。
3.延伸，将反应混合物的温度上升到72℃左右，此时在DNA聚合酶的作用下，引物的3端便开始依次参入脱氧核苷三磷酸分子，并沿着模板分子按照5——3方向延伸，合成新的DNA互补链。
4．什么是引物？引物设计的原则有哪些？
引物是人工合成的两端寡核苷酸序列，一个引物与目的基因一段的一条DNA模板链互补，另一个引物与目的基因的另一端的另一条DNA模板链互补。是PCR的起始点。
1.引物长度在15-30bp之间，而且上下游引物长度差别不能大于3bp.
2引物碱基的分布是随机的，理论上是分布均匀的。
3.GC碱基含量在45%——55%左右。
4.两个引物在3端必须与模板互补，在5端可以不互补。
5.自身连续互补碱基小于4个
6.引物之间连续互补碱基应小于4—5个
7.3端末位碱基最好不选A
5．基因工程载体的特性有哪些？
1能够在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制，尽管有外源基因的插入，这种稳定复制状态和遗传特性不会改变。
2易于从宿主细胞中分离、纯化。
3具有较小的分子量和松弛型复制子。、
4在载体DNA复制的非必需区内，存在有适当的限制性内切酶位点。
5具有能够观察的表型特征。
6．基因工程载体一般分为哪两类？分别适应于何种实验目的？
基因工程载体一般分为克隆载体和表达载体。克隆载体是携带外源基因进入宿主细胞，使外源基因在宿主细胞中繁殖的载体。适用于扩增重组质粒但不要求表达蛋白。表达载体是适合在宿主细胞中表达外源基因的载体，它必须具有强启动子和终止子，能够高效的转录来自外源基因的mRNA。适用于下游技术中蛋白质的表达。
7．cDNA的获得过程？
cDNA是以生物细胞内的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，再经过RNAse酶的作用消化RNA链，再以得到的cDNA单链为模板合成双链cDNA。并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体中增殖。
8．原核表达载体的基本元件有哪些？
原核表达载体的基本元件有
1启动子：启动子是指DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能启动mRNA合成的序列。
2阻遏子：使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录
3 SD序列：核糖体RNA识别结合位点
4选择标记：载体中的表达标记用于转化后的菌体筛选。
5转录终止子：在一个基因的3末端或是一个操纵子的3'末端往往有特定的核苷酸序列，且具有终止转录功能。
9．外源蛋白的表达形式有哪些？
1.以包涵体的形式表达外源蛋白，包涵体是存在于细胞质中一种不可溶的蛋白质聚集折叠形成的晶体结构物。
2以外分泌形式表达的外源蛋白，分泌型蛋白是指将外源基因的表达产物运输到周质或细胞外的一种表达方式。
3以融合蛋白的形式表达外源蛋白，融合蛋白是指由克隆在一起的两个或数个不同基因的编码序列组成的融合基因转译产生的单一多肽序列。
10．蛋白表达系统有哪些？列表比较其优劣及适用范围
P 43, 表2-3各种表达系统的比较
11．原核系统表达系统有哪些优缺点？
原核表达载体的邮电：遗传背景相对清楚、使用安全、易操作、表达量大、生产成本低、周期短，以及有大量可供选择的克隆或表达载体；主要缺点在于：①缺乏翻译后加工修饰系统，特别是缺少糖基化功能。②自身含有内毒素和毒蛋白，对纯化带来一定的难度。③蛋白不能正确折叠，复性较困难，多形成包涵体，提取步骤繁琐。
12．植物表达系统的优缺点？
经济实用，成本低，表达产物能进行正确的折叠，但产物的分离纯化难。适用于大分子量的蛋白，特别是药用蛋白。
13．酵母表达系统的优缺点？
兼具原核细胞良好的可操作性和真核系统的后加工能力，但存在产量低以及过度糖基化等问题。第二代酵母表达系统部分克服了过度糖基化缺点，有较好的分泌性、产量较高，但产物结构与天然分子仍有一些差异。
14．举例说明某基因工程药物的生产过程
15．单克隆抗体的制备过程？
每个B细胞只能与一种抗原决定簇特异性结合，并能产生一种只针对这一抗原决定簇的抗体，这种只能从一株克隆系中产生的抗体称为单克隆抗体。将B细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合就可以获得无限繁殖能力并可分泌均质抗体的杂交瘤细胞，具体过程为：
1.对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应。
2.得到相应的B淋巴细胞。
3.将小鼠骨髓瘤细胞与B细胞进行融合，再用特定的选择培养基筛选。
4.在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。
5.对上述杂交瘤细胞进行克隆培养和抗体检测。
6.最后，将杂交瘤细胞扩大培育，并提取单克隆抗体。
16．基因工程抗体的特点？
①通过基因工程技术的改造，可以最大程度降低抗体的鼠源性，降低甚至消除人体内对抗体的排斥反应。
②基因工程抗体的分子较小，穿透性强，更易到达病灶的核心部位。
③可以根据治疗的需要，制备多种用途的新型抗体。
④可以采用原核细胞、真核细胞或者植物细胞等多种表达系统产生大量的抗体分子，成本大大降低。
17．基因工程抗体研发中的关键问题是什么？如何解决？
基因工程抗议研发过程中最关键的问题是如何选择有效的体内抗原靶标，理想的抗原靶标应该具备以下条件：
①特异性，靶标抗原应该特意地分布于特定症状的细胞或组织
②均一性，靶标分子应该较均匀的分布于治疗对象上，不能存在量的高低、质的变异
③唯一性，在某个信号通道中该抗原具有不可替代（至少是关键性）的作用，其活性一旦被抑制，信号被切断，无旁路途经存在。
④有效性，对于治疗抗体而言，抗体抑制相应抗原的活性后可以有效地改变原来的症状，如细胞增殖、恶变等。
18．抗体基因的克隆途径有哪些？各有何优缺点？
抗体基因的克隆有三条途径杂交瘤细胞或浆细胞、B细胞自然基因库和合成基因库。
在杂交瘤细胞中，制备抗体的亲和性和阳性率都很高，且重链和轻链属自然配对。缺点是杂交瘤细胞只分泌单一特异性的单克隆抗体，结果限制了各种特异性抗体的选择范围。
B细胞含有抗体的全套自然基因库，能够代表机体所有初级B细胞含有的抗体基因的多样性，使用任何抗原都可能从中筛选到相应抗体。缺点是天然抗体库的偏向性，抗体从自然基因库中得到的抗体亲和性低，再次应答过程中存在交叉反应。
合成基因库融合细胞不稳定，不适宜多次的亲和成熟筛选。优点是抗原特异性高，制备抗体质量较高。
19．抗体基因克隆中有哪三个重要技术环节？
P109 ，这题绝逼不会考
20．改形抗体的制备过程？应用？优缺点？
改型抗体（RAB）是指利用基因工程技术，将人体可变区(V)中互补决定簇（CDR）序列换成鼠源单抗CDE序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体具体制备过程为：1、制备鼠杂交瘤细胞；2、克隆鼠可变区基因并测序；3、设计改形人可变区基因；4、构建改形人可变区基因；5、将人改形可变区基因和人恒定区基因连在一起。RAB使得多种特异的鼠源单抗有可能用于临床治疗，可生产通过人体免疫难以诱生的特异性抗人抗原抗体；缺点是构建方法复杂，费时费力；在获得抗体的晶体结构及在计算机模拟抗体的细微结构上还有很大困难，在降低免疫原性与保持抗体结合活性之间仍然存在着难以调和的矛盾，可供选着的人源FRs相对不足。
21．单链抗体的优缺点？应用？p122
优点1用于免疫诊断时成像清晰。
2.易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓度。
3.分子量小，免疫源性小，不易产生排异反应。
4.在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出;
5.易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等。
6.抗体基因结构简单，易操作。
缺点：稳定性低、功能单一、亲和力低
应用：1.在肿瘤诊断中的应用其用于放射性显影具有优势，在肿瘤定位诊断时图像清晰2在肿瘤治疗中的应用单抗与药物代谢酶相连用于治疗肿瘤
3.中和毒素和对病毒病的治疗
4.细胞内免疫将单抗基因导入细胞内并表达，利用抗体与抗原特异性结合的特性，
调节或改变细胞生物学特性，达到治病目的
22．双特异性抗体与单克隆抗体比较有哪些优点？p124
23．展示技术有哪些？比较其优缺点及应用p129.132.135.137
噬菌体展示技术、酵母展示、核糖体展示、细菌展示
24．你如何看待“重组蛋白药物的复制”现象？151
25．复制重组蛋白药物的基因技术流程有哪些？152
目的基因克隆、表达系统的选择和建立、稳定细胞系的建立、蛋白的高效表达、药物蛋白的纯化技术、体内和体外的检测方法建立、表达细胞的工业化培养、药物蛋白的大规模纯化技术、质量控制、临床试验、市场开发
26．为什么要改造和优化基因工程药物？方法有哪些？P154
定向突变：易错PCR、基因改组、大肠杆菌突变株、盒式诱变、
定点突变：寡核苷酸引物诱变、定位诱变、PCR诱变
27．人类基因组计划对基因工程新药研发有何影响？167
28．论述创新药物的研发策略有哪些？
29．疫苗的基本成分包括哪些？174
抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂、灭活剂及其它活性成分
30．构建重组活载体疫苗的一般原则？186
载体的选择:安全性、组织嗜性、容量；转移载体的构建：足够长的同源臂序列、适宜的启动子；外源基因插入位点的选择：非必须基因
31．基因疫苗与传统疫苗比较有何优缺点？187
能在宿主细胞中产生外源性蛋白、安全性好、制备简单、生产成本低、可引起广泛的细胞免疫和体液免疫
32．基因疫苗的研发原则？189
核酸疫苗的构建、核酸疫苗的接种方式、核酸疫苗免疫效果的影响因素、核酸疫苗的安全性问题
33．T细胞疫苗有何应用？191
治疗某些自身免疫病、治疗某些病毒性疾病
34．避孕疫苗有哪些？与其他避孕措施相比有何特点？195
抗精子疫苗、抗透明带疫苗、抗人类绒毛膜促性腺激素疫苗
既可以产生长达数月的避孕效果，又可以调节一些不育妇女的功能紊乱，具有抗生育作用但不干扰其他生殖生物学功能
35．什么是引物二聚体？产生原因是什么？
是在PCR反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，两个引物间有两个以上的
连续碱基序列互补
36．载体与目的DNA的链接策略有哪些？
1粘性末端连接，2平末端连接
37．什么是限制性核酸内切酶？基因工程上常用的是哪类？识别序列有何特点？
是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
2类
Ⅱ型限制性内切酶可特异性地识别呈双重螺旋对称结构的特定双链DNA序列并进行切割。Ecor1GAATTC
38．什么是多克隆位点？表达载体的多克隆位点与AUG在位置上有何关联？
具有多种单一的核酸酶切位点(多克隆位点)，可用于外源基因的插入，同时不影响载体的扩增和繁殖。指载体中限制酶位点集中分布的核苷酸序列区。
39．论述基因工程的一般操作过程
分切接转筛。目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定，其中基因表达载体的构建是基因工程的核心。
40．如何利用基因工程的手段实现G6PD的定向突变？
基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
2013-2014 年度第二学期基因工程期末考试 卷型： A 考试时间： 90 分钟满分：100分 一、名词解释（ 3×5） 限制性内切酶 ( 或其它工具酶 ) ：能在特异位点上催化双联 DNA分子断裂，产生相应的限制性 DNA片段 荧光定量 PCR: 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用 荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量 PCR: 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过 mRNA反转录成cDNA，再进行 PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的 生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。二、填空（ 1×15） 1.Cosmid 实际上是由 cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有 cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒 >开环质粒。 3.质粒 DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。 5.设计引物是一般要求 C+G的比例在 40%-60%，长度在 17-30bp 。 6.BAC 载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（ 2× 15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（ D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（ A.既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链 B. 只能作用于单链DNA C）DNA C.只能作用于双链 DNA D.只能作用于 RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（ A ） A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B. 可以抑制核糖体的转位 C. 可以与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D. 可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（ C） A. 依赖C. 依赖DNA的RNA 的DNA聚合酶 DNA聚合酶 B. D. 依赖 依赖 DNA的 RNA聚合酶 RNA的 RNA聚合酶 5.II类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）
5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点
名词解释 1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿 主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。包括上游技术和下游技术。 2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包括获得目的基因、 构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物分离纯化、产品加工检验等步骤。 3.逆转录逆转录（reverse transcription）是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模 板合成DNA的过程。 4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后 在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。 5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的 5’端相同。是PCR的起始点。 6.表达载体所谓表达载体（expression vector）是指具有宿主细胞基因表达所需的调节控制 序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。 7.克隆载体克隆载体（cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术， 送进受体细胞中进行繁殖的工具。 8.载体载体（vector），指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至 受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。 9.报告基因载体分子上有一种特殊意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经 进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。这种基因就是报告基因。 10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具 有转录起始的特异性 11.PCR聚合酶链式反应是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包括 变性、退火、延伸三个过程，并且多次循环。 12.包涵体包涵体（inclusion body）是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而 形成的晶体结构物。通常包涵体虽然具有正确的氨基酸序列，但是空间结构却是错误的。 13.蛋白表达系统蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过 这个体系实现外源基因在宿主细胞中表达的目的。 14.单克隆抗体由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为 单克隆抗体。 15.基因工程抗体基因工程抗体就是按不同的目的和需求，对抗体基因进行加工、改造和 重新装配，然后导入适当的受体细胞中表达得到的抗体分子。 16.改形抗体改性抗体（reshaped antibody,RAb）是指利用基因工程技术，将人抗体可变区 （V）中互补决定簇序列改换成鼠源单抗互补决定簇。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。 17.嵌合抗体在基因水平上将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来并在合适的 宿主细胞中表达，这种抗体叫做嵌合抗体（chimeric antibody）。 18.镶面抗体将鼠源单抗可变区中氨基酸残基改造成人源的，消除了异源性且不影响可变区 的整体空间构象。 19.单链抗体单链抗体(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗体重链可变区和轻链 可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成。scFv能较好地保留其对抗原的亲
2013-2014年度第二学期基因工程期末考试 卷型：A 考试时间：90分钟满分：100分 一、名词解释（3×5） 限制性内切酶(或其它工具酶)：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段 荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 （半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量） 星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。 二、填空（1×15） 1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。 3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%，长度在17-30bp 。 6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（2×15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C） A. 既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链DNA B.只能作用于单链DNA C. 只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（A ） A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位 C.可以与核糖体50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D.可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（C ） A. 依赖DNA的DNA聚合酶 B. 依赖DNA的RNA聚合酶 C. 依赖RNA的DNA聚合酶 D. 依赖RNA的RNA聚合酶 5.II 类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
知识点一基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA 重组技术。 注意：对本概念应从以下几个方面理解： 知识点二基因工程的基本工具 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)限制性内切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 (2)限制性内切酶的作用：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。 (3)限制性内切酶的切割方式及结果：①在中心轴线两侧将DNA 切开，切口是黏性末端。 ②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.DNA 连接酶——“分子缝合针” (1)来源：大肠杆菌、T4噬菌体 (2)DNA 连接酶的种类：E.coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶。 (3)作用及作用部位：E.coliDNA 连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，T4DNA 连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。 注意：比较有关的DNA 酶 (1)DNA 水解酶：能够将DNA 水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成磷酸、脱氧核糖和含氮碱基 (2)DNA 解旋酶：能够将DNA 或DNA 的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA 解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温(如94℃)、重金属盐的作用下，也可使DNA 解旋。(3)DNA 聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA 长链。 (4)DNA 连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA 的缺口。注意比较DNA 聚合酶和DNA 连接酶的异同点。 3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
名词解释 1. 基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿 主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。包括上游技术和下游技术。 2. 基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包括获得目的基因、构建重 组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物分离纯化、产品加工检验等步骤。 3. 逆转录逆转录(reverse transcription )是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模 板合成DNA的过程。 4. CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后 在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。 5. 引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的 5'端相同。是PCR的起始点。 6. 表达载体所谓表达载体(expression vector)是指具有宿主细胞基因表达所需的调节控制序列，能 使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。 7. 克隆载体克隆载体(cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，送进受 体细胞中进行繁殖的工具。 8. 载体载体(vector)，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至 受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。 9. 报告基因载体分子上有一种特殊意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经进入宿 主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。这种基因就是报告基因。 10. 启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具 有转录起始的特异性 11. PCR聚合酶链式反应是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包括 变性、退火、延伸三个过程，并且多次循环。 12. 包涵体包涵体(inclusion body)是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而形成的晶体 结构物。通常包涵体虽然具有正确的氨基酸序列，但是空间结构却是错误的。 13. 蛋白表达系统蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系 实现外源基因在宿主细胞中表达的目的。 14. 单克隆抗体由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗 体。 15. 基因工程抗体基因工程抗体就是按不同的目的和需求，对抗体基因进行加工、改造和重新装配， 然后导入适当的受体细胞中表达得到的抗体分子。 16. 改形抗体改性抗体(reshaped antibody,RAb )是指利用基因工程技术，将人抗体可变区 (V)中互补决定簇序列改换成鼠源单抗互补决定簇。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。 17. 嵌合抗体在基因水平上将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来并在合适的宿主细胞中 表达，这种抗体叫做嵌合抗体( chimeric antibody )。 18. 镶面抗体将鼠源单抗可变区中氨基酸残基改造成人源的，消除了异源性且不影响可变区的整体 空间构象。 19. 单链抗体单链抗体(single chain antibody fragment，scFv),是由抗体重链可变区和轻链可变区 通过15?20个氨基酸的短肽(linker)连接而成。scFv能较好地保留其对抗原的亲 和活性,并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。
2007-2008学年度东城中学高三生物第十二单元 基因工程练习题 1、基因工程又叫基因拼接技术。 (1)在该技术中，切割DNA 的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的 断开。限制酶切割产生的DNA 片段末端有两种形式，分别是 、 。 (2)基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为 、 两类，其中前者只可以连接 ，后者既可以连接 也可以连接 。 2.(10分)生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白。 （1） “分子手术刀” _ _ ， （2） “分子缝合针” ， （3） “分子运输车” 基因进入受体细胞的载体 。 （4）操作步骤：从人的___基因组文库_________获取目的基因；目的基因与 ____________结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入___________和 终止子。然后把基因表达载体导入牛的__受精卵__________，通过发育形成的牛 体细胞含人的_________________，成熟的牛产的的奶中含有 ___________________，证明基因操作成功。 （5）人的基因在牛体内能表达,说明人和牛___________ 3、限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G ↓GATCC —，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点 是—↓GATC —。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 （2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 （3）在DNA 连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割 后形成的黏性末端能否连接？为什么？ ４、聚合酶链反应（PCR ）是生物学家在实验室以少量 样品制备大量DNA 的生化技术，反应中新合成的DNA 又可以作为下一轮循环反应的模板。其过程如右图所示： （1）反应系统中应加入哪些物质？__少量样品基因、A TP 、DNA 解旋酶等酶4种游 —↓GATC —……—↓GATC — — CTAG ↑—……— CTAG ↑— 用酶Ⅱ切割 目的基因 — GATC —……— GATC — —CTAG —……—CTAG — 目的基因
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
一．单选题 1、下面是5种限制性内切酶对分子的识别序列和剪切位点图(↓表示剪切点、切出 的断面为黏性末端): 限制酶1:限制酶2: 限制酶3:限制酶4: 限制酶5:请指出下列哪组表达正确( ) A.限制酶2和4识别的序列都包含4对碱基 B.限制酶3和5识别的序列都包含5对碱基 C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同 D.限制酶1和2剪出的黏性末端相同 2、科学家用纳米技术制造出一种“生物导弹”,可以携带分子。把它注射入组织中,可以通过细胞的内吞作用的方式进入细胞内,被释放出来,进入到细胞核内,最终整合到细胞染色体中,成为细胞基因组的一部分,整合到细胞染色体中的过程,属于 ( ) A.基因突变 B.基因重组 C.基因互换 D.染色体变异 3、某病毒的基因组为双链,其一条链上的局部序列为,以该链的互补链为模板转录出相应的,后者又在宿主细胞中逆转录成单链(称为)。由这条链为模板复制出的单链上,相应的局部序列应为 ( ) A. B. C. D. 4、下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是( ) A.基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效 B.显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法 C.大肠杆菌最常用的转化方法是:使细胞的生理状态发生改变 D.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法 5、科学家已能运用基因工程技术,让羊合成并由乳腺分泌抗体。下列相关叙述中正确的是( ) ①该技术将导致定向变异 ②连接酶把目的基因与运载体黏性末端的碱基对连接起来形成氢键
③蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供资料 ④受精卵是理想的受体细胞 A.①②③④ B.①③④ C.②③④ D.①②④ 6、下面各项中与蛋白质工程没有直接关系的是( ) A.利用各种高科技手段分析蛋白质的分子结构 B.研究并改变某种蛋白质相关基因的碱基序列 C.设计和制造自然界中没有的人工蛋白质 D.用基因替换的方法治疗人的某种遗传病 7、下列关于基因工程技术的叙述,正确的是( ) A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 B.反应中温度的周期性改变是为了聚合酶催化不同的反应 C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 8、从某海洋动物中获得一基因,其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽。目前在的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物,首先要做的是( ) A.合成编码目的肽的片段 B.构建含目的肽片段的表达载体 C.依据氨基酸序列设计多条模拟肽 D.筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽 9、如图所示某湖泊的食物网,其中鱼、鱼为两种小型土著鱼,若引入一种以中小型鱼类为食的鲈鱼,将出现的情况是( ) A.鲈鱼的产量不能弥补土著鱼的减少量 B.土著鱼在与鲈鱼的竞争中处于劣势 C.浮游动物总量锐减后再急升 D.浮游植物总量急升后再锐减 10、在1957年,美国的生态学家H.T.Odum对佛罗里达州的银泉进行了生态系统营养级和能量流动的调查,下表是调查结果。表中的①②③④分别表示不同的营养级,⑤为分解者。表中NP=GP-R。下列叙述中不正确的是( )