1．营养肉汤
成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基
成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。
3．MRS培养基
成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄
（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。
4．脱脂乳培养基
成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。
5．培养基A
成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。
6．PTYG培养基
成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。7H2O 0.48g，NaCO3
10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
7．豆芽汁液体培养基
成分：豆芽汁10mL，磷酸氢二铵1g，KCL 0.2g，MgSO4.7H2O 0.2g，琼脂20g。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，0.04%的溴甲酚紫酒精溶液（黄色5.2~6.8紫色）作为指示剂，115℃灭菌20min。
豆芽汁制备：将黄豆芽或绿豆芽200g洗净，在1000mL中煮沸30 min，纱布过滤得豆芽汁、补足水分至1000mL。
8．麦芽汁琼脂培养基
成分：优质大麦或小麦，蒸馏水，碘液。
制法：取优质大麦或小麦若干，浸泡6~12h，置于深约2cm的木盘上摊平，上盖纱布，每日早、中、晚各淋水一次，麦根伸长至麦粒两倍时，停止发芽晾干或烘干。
称取300g麦芽磨碎，加1000mL水，38℃保温2h，再升温至45℃，30min，再提高到50℃，30min，再升至60℃，糖化1~1.5h。
取糖化液少许，加碘液1~2滴，如不为蓝色，说明糖化完毕，用文火煮半小时，四层纱布过滤。如滤液不清，可用一个鸡蛋清加水约20mL调匀，打至起沫，倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤，即可得澄清麦芽汁。用波美计检测糖化液浓度，加水稀释至10倍，调pH5~6，用于酵母菌培养；稀释至5~6倍，调pH7.2，可用于培养细菌，121℃灭菌20min。
9．查（察）氏培养基
成分：NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4. 7H2O 0.5g，KCL 0.5g，FeSO4.7H2O 0.01g，蔗糖30g，琼脂15~20g，蒸馏水1000mL，pH值自然。
制法：加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
10．马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
成分：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖（或蔗糖）20g，琼脂20g，水1000mL。
制法：pH值自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块，称取200g加入1000mL蒸馏水，煮沸20min，用纱布过滤，滤液补足水至1000mL，再加入糖和琼脂，溶化后分装，121℃灭菌20min。另外，用少量乙醇溶解0.1g氯霉素，加入1000mL培养基中，分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。
11．PY基础培养基
成分：蛋白胨0.5g，酵母提取物1.0g，胰酶解酪胨(Trypticase) 0.5g，盐溶液Ⅱ4.0mL，蒸馏水1000mL。
盐溶液Ⅱ成分：CaCL2 0.2g，MgSO4.7H2O 0.48g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，NaHCO3 10.0g，NaCL 2.0g，蒸馏水1000mL。
制法：加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
12．甘露醇琼脂培养基（MSA）
成分：牛肉浸膏1g，月示胨NO.3（Difco）10g，D-甘露醇10g，NaCL 75g，琼脂约13g，酚红0.025g，水1000mL，pH7.2~7.6
制法：按量将各成分（酚红除外）混合，加热使完全溶解，调pH至7.4±0.2。加1%的酚红溶液2.5mL，混匀。121℃高压灭菌15min
13．高氏一号（淀粉琼脂）培养基（主用于放线菌、霉菌培养）
可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCL 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g，FeSO4.7H2O 0.01g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.2~7.4，121℃灭菌20min。
14．淀粉铵盐培养基（主要用于霉菌、放线菌培养）
可溶性淀粉10g，（NH4）2SO4 2g，K2HPO4 lg，MgSO4.H2O lg，NaCL 1g，CaCO3 3g，蒸馏水1000mL，pH7.2~7.4，121℃灭菌20min。若加入15~20g琼脂即成固体培养基。
15．麦氏培养基（醋酸钠琼脂培养基）
葡萄糖1.0g，KCL 1.8g，酵母汁2.5g，醋酸钠8.2g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH自然，0.7kg/cm2灭菌30min。
16．高盐察氏培养基(用于霉菌和酵母菌计数、分离用)
硝酸钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁（MgSO4 7H2O）0.5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，氯化钠60g，蔗糖30g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，115℃灭菌30min。
注：①分离食品和饮料中的霉菌和酵母可选用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基和/或孟加拉红培养基。②分离粮食中的霉菌可用高盐察氏培养基。
17．糖、醇类发酵基础培养基
（1）一般细菌常以休和利夫森二氏培养基
蛋白胨5g，NaCL 5g，K2HPO4 0.2g，糖醇(葡萄糖或其它糖、醇)10g，琼脂5~6g，1％溴甲酚紫（溴百里香草酚蓝）3mL，蒸馏水1000mL，pH7.0~7.2，分装试管，培养基高度约4.5cm，115℃灭菌20min。
（2）芽孢菌培养基
(NH4)2HPO4 1.0g，KCL 0.2g，MgSO4.7H2O 0.2g，酵母膏0.2g，琼脂5~6g，糖或醇类10.0g，蒸馏水1000mL，溴甲酚紫（0.04％）15mL，pH7.0~7.2，分装试管，培养基高度约4~5cm，112℃灭菌30min。
（3）乳酸菌培养基
蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏5g，吐温80（Tween 80）0.5mL，糖或醇10g，琼脂5~6 g，蒸馏水（自来水）1000mL，加入1.6％溴甲酚紫溶液约1.4mL。以上调pH6.8~7.0，分装试管，112℃灭菌30min。
18．硝酸盐培养基（硝酸盐还原试验用）
蛋白胨5.0g，KNO3 0.2g, 蒸馏水1000 mL，pH7.4，每管分装4~5mL，121℃灭菌15~20min。吲哚实验培养基：1％胰蛋白胨，调pH7.2～7.6，分装1/3~1/4试管，115℃灭菌30min。19．硫化氢试验（纸条法）培养基
蛋白胨10g，NaCL 5g，牛肉膏10g，半胱氨酸0.5g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.4，分装试管，每管液层高度4~5cm，112℃灭菌20~30min。另外将普通滤纸剪成0.5~1cm宽的纸条，长度根据试管与培养基高度而定。用5％~10％的醋酸铅将纸条浸透，然后用烘箱烘干，放于培养皿中灭菌备用。
20．尿素培养基(尿酶试验)
成分：蛋白胨1.0g，葡萄糖1.0g，NaCL 5.0g，KH2PO4 2.0 g，0.4％酚红3.0mL，琼脂20.0g，20％尿素100.0mL，pH7.1~7.4。
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH值，加入琼脂，加热熔化并分装于三角瓶，121℃灭菌15min，冷却至50~55℃，加入过滤除菌的尿素溶液，分装于灭菌试管内，摆成琼脂斜面备用。
21．氮源利用基础培养基
KH2PO4 1.36g，NaH2PO4 2.13g，MgSO4 7H2O 0.2g，FeSO4.7H2O 0.2g，CaCL2 0.5g，葡萄糖10.0g，蒸馏水1000mL。
将需要测定的氨基酸、氨态氮（如磷酸氢二氨）、硝态氮（如硝酸钾）加入到上述基础培养
基中，使其终浓度为0.05~0.1％，如测定菌不能利用葡萄糖为碳源，可用其它碳源代替（终浓度为0.2~0.5％），另做一份不加氮源的空白对照，调pH7.0~7.2，分装于试管，每管4~5mL，112℃灭菌20~30min，制备出的培养基要求无沉淀。
22．甲基红培养基（M.R及V-P试验用）
蛋白胨7.0g，葡萄糖5.0g，K2HPO4（或NaCL）5g，水1000mL，pH7.0~7.2，每管分装4~5mL，115℃灭菌30min。
23．动力、靛基质、尿素（MIU）综合培养基（用于检验细菌运动性、吲哚、尿素酶用）
蛋白胨（含色氨酸）30 g，KH2PO4 2g、NaCL 5g、琼脂3 g、0.2%酚红酒精溶液2mL、尿素20g、蒸馏水1000mL。分装于小试管，112℃灭菌15min，灭菌后液体应呈淡黄色。
24．半固体培养基（用于细菌的动力试验）
牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，琼脂3~5g，蒸馏水1000mL，pH7.2~7.4，熔化后分装试管（8mL）121℃灭菌15min，取出直立试管待凝固。
25．M17琼脂培养基（分离、培养乳球菌等的选择培养基）
植物蛋白胨5g，酵母粉5g，聚蛋白胨5g，抗坏血酸0.5g，牛肉膏2.5g，MgSO4 7H2O 0.01g，ß-甘油磷酸二钠19g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌15min。
26．蛋白胨水溶液（靛基质试验用）
蛋白胨20.0g，NaCL 5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.4，121℃灭菌15min。
27．精氨酸双水解酶实验培养基
成分：蛋白胨1g，氯化钠5g，K2HPO4 0.3g，L-精氨酸10g，琼脂10g，酚红0.01g，蒸馏水1000mL。
制法：除酚红外，将以上各成分溶解，调节pH7.0~7.2，加入指示剂，分装试管，培养基高约4~5cm，121℃灭菌20min备用。
28．葡萄糖氧化发酵培养基
成分：蛋白胨2g，氯化钠5g，1％溴百里酚蓝水溶液3mL，琼脂5~6g，K2HPO4 0.2g，葡萄糖1％，蒸馏水1000mL。
制法：除溴百里酚蓝外，溶解以上各成分，调节pH值为6.8~7.0，分装试管，用115℃灭菌20min备用。
29．假单胞菌选择培养基（PSA）
基础成分：多价胨16g，水解酪蛋白10g，硫酸钾10g，氯化镁1.4g，琼脂11g，甘油10mL，蒸馏水1000mL，pH7.1±0.2。
CFC选择添加物：溴化十六烷基三甲胺10mg/L，梭链孢酸钠10mg/L，头孢菌素50mg/L。
制法：先将基础成分加热煮沸使之完全溶解，121℃，15min条件下灭菌。冷却到50℃备用。当基础培养基冷却到50℃后加入溶解后过滤除菌的CFC补充物，完全混合后倒平板备用。
30．乳糖胆盐发酵培养基
成分：蛋白胨20g，猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃，15min高压灭菌.
注：双料乳糖胆盐培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
31．伊红美兰琼脂培养基
成分：蛋白胨20g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红Y溶液20mL，0.65%美兰溶液10mL，蒸馏水1000mL，pH7.1。
制法：将蛋白胨、磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，高压灭菌121℃，15min备用。
临用时，加入乳糖，并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美兰溶液，摇匀，倾注平板。
32．乳糖发酵培养基
成分：蛋白胨20g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：将蛋白胨、乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃，15min高压灭菌。
33．胰酪胨大豆肉汤
成分：胰酪胨（或胰蛋白胨）17g，植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3g，氯化钠100g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水1000mL。
制法：将上述成分混合，加热并轻轻搅拌溶液，分装后121℃15min高压灭菌。最终pH7.3±0.2。
34．7.5%氯化钠肉汤
成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠75g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：将上述成分加热溶解，校正pH，分装试管，121℃15min高压灭菌。
35．豆粉琼脂
成分：牛心消化汤1000mL，琼脂20g，黄豆粉浸液50mL，pH 7.4~7.6。
制法：将琼脂加在牛心消化汤中，加热溶解，过滤。加入黄豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃15min高压灭菌。
36．血琼脂平板
成分：豆粉琼脂100mL，脱纤维羊血（或兔血）5~10mL。
制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装灭菌试管，摆成斜面。
37．aird-Parker氏琼脂平板
成分：胰蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母膏1g，丙酮酸钠10g，甘氨酸12g，氯化锂（LiCL·6H2O）5g，琼脂20g，蒸馏水950mL，pH7.5。
增菌剂的配法：30~50%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存在冰箱内。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25℃，矫正pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时，加热融化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄-亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。
38．肉浸液
成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，蒸馏水1000mL，pH 7.4～7.6。
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后矫正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃，30min高压灭菌。
39．兔血浆
成分：柠檬酸钠0.106 mol/L（31.3g Na3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸馏水中）
制法：一份加兔血9份混合后离心2000rpm，10min吸取上清液即为兔血浆。
40．肠毒素产毒培养基
成分：蛋白胨20g，胰消化酪蛋白200mg，氯化钠5g，磷酸二氢钾1g，氯化钙0.1g，硫酸镁0.2g，菸酸0.01g，蒸馏水1000mL，琼脂10~12g（固体透析培养用），pH7.2~7.4。
41．葡萄糖肉浸液肉汤
成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄，氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃30min高压灭菌。
42．牛心浸液
成分：绞碎牛心500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。
制法：将绞碎牛心500g，混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃，30min高压灭菌。
43．匹克氏肉汤
成分：含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL，1：25000结晶紫盐水溶液10mL，1：800三氮化钠溶液10mL，脱纤维兔血（羊血）10mL。
制法：将上述已灭菌的各种成分，无菌依次混合，分装于无菌试管内，每管2mL，保存冰箱内备用。
44．胰蛋白胨大豆胨琼脂（TSA）
成分：胰蛋白胨15g，大豆胨5g，氯化钠5g，琼脂约13g，蒸馏水1000mL，pH7.1～7.5。
制法：按量将各成分溶解，加热使完全溶解，调pH值，121℃，15min灭菌。
45．缓冲蛋白胨水(BP)培养基
成分：蛋白胨l0g，NaCL5g，Na2HPO4.12H20 9g，H2PO4 1.5g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：121℃灭菌15min，沙门氏菌前增菌使用。
46．氯化镁孔雀绿(MM)增菌液
成分：
甲液：胰蛋白胨5g，NaCL 8g，KH2P04 1.6g，蒸馏水1000m1
乙液：MgCL2 40g，蒸馏水100mL
丙液：0.4％孔雀绿水溶液
制法：分别按上述成分配好后，121℃灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL以无菌操作混合即成。
47．四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
成分：多胨或胨1g，CaCO3 10g，Na2S203 30g，蒸馏水1000m1。
制法：将各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100m1。分装时应随时振荡，使其中的CaCO3混匀。121℃灭菌15min备用。临用时每100m1培养基中加入碘溶液2m1、0.1％煌绿1m1。
48．亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液
成分：蛋白胨5g，乳糖4g，亚硒酸氢钠4g，Na2HPO4 5.5g，KH2PO4 4.5g，L—胱氨酸0.01g，蒸馏水1000m1，pH7.0。
制法：将除亚硒酸氢钠和胱氨酸以外的各种成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，冷却备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，冷却，以无菌操作与上液混合。再加入1％L-胱氨酸—氢氧化钠溶液1m1。分装于灭菌瓶中，每瓶l00mL。
49．亚硫酸铋琼脂(BS)培养基
成分：蛋白胨10g，牛肉膏5g，葡萄糖5g，FeSO4 0.3g，Na2HPO4 4g，煌绿0.025g，柠檬酸铋铵2g，Na2SO4 6g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.5。
制法：将前5种成分溶解于300mL蒸馏水中，再将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50m1蒸馏水溶解。将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃左右。将以上三液合并，补充蒸馏水至1000m1，校正pH，加0.5％煌绿水溶液5mL ；摇匀。冷却至50~55℃，倾注平板。
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程中不宜过分加热，以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。
50．DHL琼脂培养基
成份：蛋白胨20g，牛肉膏3g，乳糖10g，蔗糖10g，去氧胆酸钠1g，Na2S203 2.3g，柠檬酸钠1g，柠檬酸铁铵1g，中性红0.03g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.3。
制法：除中性红和琼脂外，将其他成分溶解于400m1蒸馏水中，校正pH值。再将琼脂溶于600mL蒸馏水中，两液合并，加0.5％中性红水溶液6mL，待冷至50~55℃，倾注平板。
51．HE琼脂培养基
成份：月示胨12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖２g，水杨素2g，胆盐20g，NaCL 5g，琼脂20g，蒸馏水1000m1，0.4％溴麝香草酚蓝溶液16mL，Andrade指示剂20mL，甲液20mL，乙液20m1。
制法：将前七种成分溶解于400mL蒸馏水中。作为基础液，加入甲液和乙液，校正pH值为7.5，再加入指示剂；将琼脂溶于600m1蒸馏水中。二者合并，待冷至50~55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌；②Andrade指示剂：酸性复红0.5g，1M NaOH溶液16m1，蒸馏水100mL。制法为：将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。数小时后如果复红退色不全，再加氢氧化钠溶液1~2mL。③甲液：Na2S203 34g，柠檬酸铁铵4g，蒸馏水100m1。④乙液：去氧胆酸钠10g，蒸馏水100mL。
52．S.S.琼脂
（1）基础培养基
成分：牛肉膏5g，月示胨5g，三号胆盐3.5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL。
制法：将牛肉膏、月示胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中，将琼脂溶于500m1蒸馏水中，二液混合，121℃灭菌15min备用。
（2）完全培养
成分：基础培养基1000mL，乳糖10g，柠檬酸钠8.5g，Na2S203 8.5g，10％柠檬酸铁溶液10m1，1％中性红溶液2.5m1，0.1％煌绿溶液0.33m1。
制法：加热熔化基础培养基，按比例加入上述染料以外的各成分，充分混合均匀，校正pH 值为7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h内使用；煌绿溶液配好后应在10d 以内使用。
53．靛基质试验培养基
成分：蛋白胨10g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.3~7.5。
制法：称取各成分，加入水中加热溶化。用1mol/L NaOH调至pH 7.4~7.5。分装小试管，每管约3mL，116℃，15min高压灭菌后4~10℃保存备用。
54．三糖铁琼脂（TSI）
成分：蛋白胨20g，硫代硫酸钠0.2g，乳糖10g，蒸馏水1000mL，硫酸亚铁铵0.2g，蔗糖10g，酚红0.025g，氯化钠5g，牛肉膏5g，琼脂12g，葡萄糖1g，pH7.4。
制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min后放置高层斜面备用。
55．尿素琼脂
成分：蛋白胨1g，葡萄糖1g，0.4%酚红溶液3mL，蒸馏水1000mL，氯化钠5g，磷酸氢二钾2g，琼脂20g，20%尿素溶液100mL，pH7.2±0.1
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min，冷至50~55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%。最终pH为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
56．ONPG培养基
成分：邻硝基酚β－D-半乳糖昔(O－NitropHenyl－β－D－galactopyranoside) (ONPG) 60mg，0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL，1%蛋白胨水(pH7.5) 30mL
制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
57．氨基酸脱羧酶试验培养基（赖氨酸培养基）
成分：蛋白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖1g，蒸馏水1000mL，1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液1mL，L－氨基酸或DL－氨基酸0.5或1g/100mL，pH6.8。
制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸等各种氨基酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。
58．氰化钾(KCN)培养基
成分：蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.225g，磷酸氢二钠5.64g，蒸馏水1000mL，0.5%氰化钾溶液20mL，pH7.6。
制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度为1∶10000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
59．丙二酸钠培养基
成分：酵母浸膏1g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾0.6g，磷酸二氢钾0.4g，氯化钠2g，丙二酸钠3g，0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL，蒸馏水1000mL，pH6.8。
制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
60．氧化酶试验试剂
（1）1% 盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
（2）1% 四甲基对苯二胺溶液：将四甲基对苯二胺1.0g溶于100.0mL蒸馏水即可。通常使用新鲜配制的试剂，如放置于冷藏库，可在配制后7天内使用。
（3）1% α-萘酚－乙醇溶液。
61．亚硒酸盐煌绿增菌液
成分：蛋白胨5g，酵母膏5g，甘露醇5g，牛磺胆酸钠1g，20％亚硒酸氢钠溶液20m1，0.25mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL，2％煌绿水溶液0.25mL，蒸馏水900m1。
制法：将前三种成分溶于水中，调节pH值为7.0，加入牛磺胆酸钠，加热溶解调pH值（其中干鸡蛋白样品pH8.2土0.1；其它干蛋品pH7.2土0.1，冰蛋品pH7.0土0.1）（具体数值如下）121℃灭菌15min，放冷备用，此为甲液；称取4g亚硒酸氢钠，溶于19mL蒸馏水中，即为20％亚硒酸氢钠溶液20mL，12l℃灭菌15min，放冷备用，此为乙液；精确称取K2HPO4(无水)2.18g，KH2PO4(无水)1.71g，溶解于蒸馏水中，定容至100mL。12l℃灭菌15min，放冷备用，此为丙液；称取煌绿(灿烂绿)0.2g溶于10mL蒸馏水中，即为2％煌绿水溶液，此为丁液。用前将乙液和丙液依次加入甲液中，复查混合液的pH值，加入煌绿溶液。无菌操作分装于无菌烧瓶或试管内，每瓶150m1。培养基应在1~5d内使用。
62．GN增菌液
成分：胰蛋白胨20g，葡萄糖1g，甘露醇2g，柠檬酸钠5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸氢二钾
4g，磷酸二氢钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
63．苯丙氨酸培养基
成分：酵母浸膏3g，DI－苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g ) 2g，磷酸氢二钠1g，氯化钠5g，琼脂12g，蒸馏水1000mL，
制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。
64．西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分：氯化钠5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g，磷酸二氢铵1g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL，pH6.8。
制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min后放成斜面。
65．葡萄糖铵培养基
成分：氯化钠5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g，磷酸二氢铵1g，磷酸氢二钾1g，葡萄糖2g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL，pH6.8。
制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min后放成斜面。
66．麦康凯琼脂
成份：蛋白胨17g，月示胨3g，猪(牛、羊)胆盐5g，NaCL 5g,，琼脂17g，蒸馏水1000m1，乳糖10g，0.01％结晶紫水溶液10m1，0.5％中性红水溶液5m1。
制法：将蛋白胨、月示胨、胆盐和氯化钠溶于400mL蒸馏水内，校正pH值至7.2。将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解。合并两液，分装于烧瓶内，121℃灭菌15min备用。临用时加热溶化上述琼脂，趁热加入乳糖。冷至50~55℃时加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
67．肠道菌增菌肉汤（EE肉汤）
成分：蛋白胨10g，葡萄糖5g，牛胆盐20g，磷酸氢二钠8g，磷酸二氢钾2g，煌绿0.015g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。注意必须使用纯净的牛胆盐和煌绿，减少对受损且数量极少的肠杆菌的生长抑制。
68．克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基成分：血消化汤(pH7.6) 500mL，琼脂6.5g，硫代硫酸钠0.1g，硫酸亚铁铵0.1g，乳糖5g，0.2%酚红溶液5mL。
下层培养基成分：血消化汤(pH7.6) 500mL，琼脂2g，葡萄糖1g，0.2%酚红溶液5mL。
制法：取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别加入琼脂，加热溶解。分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养基分装于灭菌的12mm×100mm试管内，每管约2mL。115℃高压灭菌10min。将上层培养基放在56℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内，使其凝固。等下层培养基凝固后，以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5mL并放成斜面。
69．Elek氏培养基(毒素测定用)
成分：胨20g，麦芽糖3g，乳糖0.7g，氯化钠5g，琼脂15g，40%氢氧化钠溶液1.5mL，蒸馏水1000mL，pH7.8。
制法：用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分，煮沸并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合，分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
70．EC增菌液（36）
成分：胰蛋白胨20g，胆盐1.5g，乳糖5g，NaCL5g，无水KH2PO4 1.5g，无水K2HPO4 4g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
制法：将各成分溶于水中，调pH值，依据实验需求分装三角瓶或试管。121℃灭菌15min 备用。之后，如果通过灭菌细菌滤器添加1‰的20mg/L新生霉素，即为改良EC增菌液。
71．改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）
成分：蛋白胨7g，眎胨3g，猪胆盐5g，山梨醇10g，NaCL 5g，琼脂18g，0.5%中性红水溶液5mL，0.01%结晶紫水溶液10mL，亚碲酸钾2.5mg，头孢肟0.05g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：除山梨醇、指示剂和抑菌剂外，其余成分溶于水中，溶解后调pH值。115℃灭菌20min。临用时溶化培养基，冷至50℃，加入山梨醇、灭菌的结晶紫和中性红；加入过滤除菌的1％亚碲酸钾250μL和50g/L头孢肟1mL，混匀，倾注倒平板。
72．LST肉汤
成分：胰蛋白胨或胰酪胨（Tryticase）20g，NaCL 5.0g，乳糖5.0g，K2HPO4 2.75g，KH2PO4 2.75g，月桂基硫酸钠0.1g，蒸馏水1000mL。
制法：将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。
73．MUG-LST
LST肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG），使终浓度为0.1g/L。
74．甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
成分：蛋白胨10g，牛肉膏1g，甘露醇10g，氯化钠10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，0.2%酚红溶液13mL，50%卵黄液50mL，多粘菌素B 100国际单位/mL，pH7.4。
制法：将前面五种成分加入于蒸馏水中，加热溶解，校正pH，加入酚红溶液。分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶加入50%卵黄液5mL及多粘菌素B 10000国际单位，混匀后倾注平板。
75．酪蛋白琼脂
成分：酪蛋白10g，牛肉膏3g，磷酸氢二钠2g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，0.4%溴麝香草酚蓝溶液12.5mL，pH7.4。
制法：将除指示剂外的各成分混合，加热溶解(但酪蛋白不溶解)，校正pH。加入指示剂，分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，倾注平板。
注：将菌株划线接种于平板上，如沿菌落周围有透明圈形成，即为能水解酪蛋白。
76．木糖－明胶培养基
成分：胰胨10g，酵母膏10g，木糖10g，磷酸氢二钠5g，明胶120g，蒸馏水1000mL，0.2%酚红溶液25mL，pH7.6。
制法：将除酚红以外的各成分混合，加热溶解，校正pH。加入酚红溶液，分装试管，121℃高压灭菌15min，迅速冷却。
77．动力-硝酸盐培养基（A法）
成分：蛋白胨5g，牛肉膏3g，硝酸钾1g，琼脂3g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
制法：加热溶解，校正pH。分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。
78．甲萘胺－醋酸溶液、对氨基苯磺－醋酸溶液（硝酸盐培养基）
成分：硝酸盐0.2g，蛋白胨5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂：
（1）甲萘胺－醋酸溶液：将甲萘胺0.5g溶解于5mol/L乙酸溶液100mL中。
（2）对氨基苯磺－醋酸溶液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于5mol/L乙酸溶液100mL中。
79．氯化钠结晶紫增菌液
成分：蛋白胨20g，氯化钠40g，0.0l％结晶紫溶液5mL，蒸馏水1000mL，pH9.0。
制法：除结晶紫外其他按上述成分配好，加热溶解，约加3％氢氧化钾溶液4.5mL，校正pH，加热煮沸，过滤，再加入结晶紫溶液，混合分装试管，121℃高压灭菌15min备用。
80．3.5％氯化钠三糖铁琼脂
成分：蛋白胨20g，牛肉膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化钠35g，硫酸亚铁铵0.2g，硫代硫酸钠0.2g，琼脂12g，酚红0.025g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸使琼脂溶化，加入0.2%酚红溶液12.5mL，摇匀，分装试管，121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
81．TCBS琼脂（配方1)
成分：酵母膏5g，蛋白胨10g，蔗糖20g，硫代硫酸钠10g，柠檬酸钠10g，牛胆酸钠3g，牛胆汁粉5g，氯化钠10g，柠檬酸铁1g，溴麝香草酚蓝（2%溶液）20mL，草酚蓝（1%溶液）4mL，琼脂15g，pH8.6。
制法：将上述成分加蒸馏水至1000mL，混合，使全部溶解，校正pH为8.6，加热煮沸，不需高压灭菌，倾注平皿15~20mL。
注：不分解蔗糖的副溶血性弧菌，在此培养基上生长呈绿色菌落，分解蔗糖的细菌呈黄色菌落。
82．TCBS琼脂（配方2）
成分：酵母浸膏5g，蛋白胨10g，硫代硫酸钠10g，枸橼酸钠10g，牛胆粉8g，蔗糖20g，氯化钠10g，柠檬酸铁1g，溴麝香草酚兰0.04g，麝香草酚蓝0.04，琼脂约13g，水1000mL，pH8.5~8.7。
制法：除指示剂外，将剩余成分混合于1000mL水中，煮沸溶解。调至pH8.5~8.7，加入指示剂，混匀。再次煮沸1~2min。无需高压灭菌。
83．改良Camp—BAP培养基
成分：胰蛋白胨10g，蛋白胨10g，葡萄糖1g，酵母浸膏2g，氯化钠5g，焦亚硫酸钠0.1g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，硫乙醇酸钠1.5g，万古霉素10mg，多粘菌素B 2500国际单位，两性霉素B(AmpHotericin B) 2mg，头孢霉素（CepHalosporin）15mg，亦可用Ceporan)
脱纤维羊血50mL，pH7.0土0.2。
制法：除抗生素和羊血外，将其他成分混合，加热溶解，校正pH到7.0土0.2。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。此为布氏琼脂基础培养基；临用前，加热溶解基础琼脂，冷至60℃。每100mL基础琼脂中，加入脱纤维羊血5mL、抗生素混合液0.5mL及两性霉素B，头孢霉素混合液0.5mL，摇匀，倾注平板。
注：两性霉素B，头孢霉素混合液配法：称两性霉素B 2mg和头孢霉素15mg，加5mL蒸馏水混合即成。
84．甘氨酸培养基
成分：布氏肉汤1000mL，琼脂粉1.6g，甘氨酸(glycine)10g。
制法：将以上成分混合，加热溶解，校正pH7.0，分装试管，每管4mL，121℃高压灭菌15min，备用。
85．Skirrow氏培养基
成分：蛋白胨15g，胰蛋白胨(typtone) 2.5g，酵母浸膏5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水l000mL，甲氧苄氨嘧啶(trimethoprin，TMP) 5mg，万古霉素(vancomycin) 10mg，多粘菌素B(po1ymyxin) 2500国际单位，冻溶马血70.0mL，pH7.4。
制法：除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外，其他成分混合溶解。校正pH7．4，装瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此即血琼脂基础培养基。临用前，加热溶解基础培养基，冷至60℃。每100mL基础培养基中，加入冻溶二次的马血及TMP、抗生素混合液0.5mL，摇匀，倾注平板。
86．庖肉培养基
成分：牛肉浸液1000mL，蛋白胨30g，酵母浸膏5g，磷酸二氢钠5g，葡萄糖3g，可溶性淀粉2g，碎肉渣适量，pH7.8。
制法：称取新鲜除脂肪和筋膜的牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol／L氢氧化钠溶液25mL，
搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。
87．卵黄琼脂培养基
成分：基础培养基为肉浸液1000mL，蛋白胨15g，氯化钠5g，琼脂25~30g，pH7.5。
50％葡萄糖水溶液。
50％卵黄盐水溶液。
制法：基础培养基分装每瓶100mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化，冷至50℃，每瓶内加50％葡萄糖水溶液2mL和50％卵黄盐水悬液10~15mL，摇匀，倾注平板。
88．EB增菌液.
成分：胰胨17g，多价胨3g，酵母膏6g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水1000mL，pH7.2~7.4。
制法：121℃高压灭菌15min，使用前加吖啶黄溶液15mg/L、萘啶酮酸溶液40mg／L和放线菌酮50mg／L，此三种成分要过滤除菌或无菌配制。
89．胰酪胨大豆琼脂（TSAYE）
成分：胰胨17g，多价胨3g，酵母膏6g，氯化钠5g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5g，琼脂15g，蒸馏水l000mL，pH7.2~7.4。
制法：加热溶解，调pH值，分装，121℃高压灭菌15min备用。
90．硫酸铁铵半固体(SIM)
成分：胰胨20g，多价胨6g，硫酸铁铵0.2g，硫代硫酸钠0.2g，琼脂3.5g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：加热溶解，调pH值，分装，121℃高压灭菌15min备用。
91．改良的McBride琼脂(MMA)
成分：胰胨5g，多价胨5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，氯化钠5g，磷酸氢二钠lg，苯乙醇2.5 mL，无水甘氨酸10g，氯化锂0.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.2~7.4。
制法：加热溶解，调pH值，分装，121℃高压灭菌15min备用。
92．STAA培养基
成分：蛋白胨20.0g，酵母提出物2.0g，磷酸氢二钾1.0g，硫酸镁1.0g，甘油15mL，琼脂13.0g，乙酸铊50mg，链霉素-硫酸盐500mg，环己酰亚胺50mg，蒸馏水1000mL，pH7.0±0.2。
制法：除乙酸铊，链霉素-硫酸盐，环己酰亚胺外，其余缓慢加热使其完全溶解；121°C下灭菌15min。冷却到50°C后，在无菌条件下加入上述三种物质的过滤除菌水溶液。
93．马丁（Martin）孟加拉红-链霉素琼脂培养基
成分：葡萄糖10.0g，蛋白胨5.0g，磷酸二氢钾1.0g，硫酸镁0.5g，孟加拉红33.4g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH5.5~5.7。
制法：以上各成分溶解、调pH、分装，于121℃，20min高压灭菌。倒平板前按每10mL培养基加1mL0.03%链霉素溶液（含链霉素30mg/mL）。
94．Ames检测营养肉汤液体培养基
成分：牛肉膏0.5g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100mL，pH7.2~7.5。
制法：加热溶解，调pH值，分装于三角瓶中121℃，20min高压灭菌。
95．Ames检测底层培养基
成分：葡萄糖20g，柠檬酸(C6H8O7·H2O) 2g，磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g，琼脂粉12g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
制法：加热溶解，调pH值，分装于三角瓶中115℃，20min高压灭菌。
96．Ames检测顶层培养基的制备
成分：脂粉0.6g，氯化钠0.5g，加蒸馏水90mL。
制法：以上溶液加10mL0.5mol/L组氨酸－生物素溶液，分装灭菌。
97．氨苄青霉素培养基和氨苄青霉素－四环素培养基（1000mL）
成分：底层培养基910mL，磷酸盐贮备液20mL，40%葡萄糖溶液50mL，组氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL，0.5mol/L生物素6mL，0.8%氨苄青霉素溶液3.15mL，0.8%四环素溶液0.25mL。
制法：以上成分除抗生素外，均分别单独灭菌，使用时无菌操作混合；使用灭菌细菌滤器加入氨苄青霉素溶液，即为氨苄青霉素培养基，摇匀，铺平板；无菌同时加入氨苄青霉素和四环素就是氨苄青霉素－四环素培养基
98．组氨酸－生物素培养基(1000mL)
成分：底层培养基914mL，磷酸盐贮备液20mL，40%葡萄糖溶液50mL，组氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL，0.5mol/L生物素6mL。
制法：以上成分均已分别灭菌，用时无菌操作混匀。
99．CM液体培养基
KNO3 3g，KH2PO4 1g，MgSO4.7H2O 0.5g，蛋白胨10g，酵母粉5g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，pH6.5~6.8，15磅灭菌20min。
100．HMM（高渗MM）培养基
KNO3 3g，KH2PO4 1g，MgSO4.7H2O 0.5g，微量元素液2mL，葡萄糖20g，蔗糖0.6M，1.6％~1.8％琼脂粉，蒸馏水1000mL，pH6.5~6.8，121℃灭菌20min。
101．结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA）
成分：酵母提取物3.0g，蛋白胨7.0g，氯化钠5.0g，3号胆盐1.5g，乳糖10.0g，中性红0.03g，结晶紫0.002g，蒸馏水1000mL。
制法：将各成分加入蒸馏水中（染料配成1%的水溶液过滤后加入），加热煮沸，使各成分完全溶解，调节pH至7.4±0.1。冷却至45℃倒入灭菌平皿，置2~-8℃保藏，4周内使用。
102．显色培养基琼脂（X a-GLcA）
成分：蛋白胨20.0g，牛肉膏5.0g，氯化钠5.0g，琼脂20.0g，5-溴4-氯3吲哚a-D葡萄糖苷0.08g，蒸馏水1000mL。
制法：将各成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH7.3±0.1，分装适当容器，121℃高压灭菌3min。
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
培养基成分及其作用 植物生长发育需要多种营养和生长调节物质，当其缺乏时，生长发育受阻，形态不正常。在植物组织快繁过程中，培养物生长发育所需的营养和生长因子，主要靠培养基供给。因此，完全培养基的成分除了水分外，还要包括无机营养、有机物营养、生长调节物质及其他附加物等。 一、无机营养物 无机营养物即无机盐是植物生长发育所必需的，根据植物对无机盐需要的多少，将其分为大量元素和微量元素。 1. 大量元素 大量元素在植物体内含量占干物重的0.1-10%，其浓度一般大于0.5mmol/L，包括氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)，若加上碳(C)、氢(H)、氧(O)，则有9种元素。在离体培养中，其C、H、O三元素是从人工加入的糖类获得的，H、O元素也可以从培养基所含的水分中获得，而其余6种矿质元素要从加入的适量的无机盐类来获取。无机氮常以硝态氮(如KNO3)和铵态氮(如NH4NO3)两种形式供应，多数培养基都是二者兼而有之。 2. 微量元素 植物所需的微量元素包括铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(Mo)、氯(Cl)等，植物对其需要量极微，在植物体内含量占干物重的0.01%以下，起生长发育所需的浓度一般小于0.5mmol/L，稍多则产生毒害。碘(I)虽不是植物生长的必需元素，但几乎在所有的培养基中都含有碘元素，有些培养基还加入了钴(Co)、镍(Ni)、钛(Ti)、铍(Be)，甚至铝(Al)等元素。 3. 铁盐 铁是用量较多的一种微量元素，是许多重要氧化还原酶的组成成分，在植物叶绿素的合成过程中起到重要的作用。若以硫酸铁和氯化铁为供铁源，培养基的pH值会达到5.2以上，形成氢氧化铁沉淀，使培养物无法吸收而出现缺铁症，故在培养基配制时，常用硫酸亚铁和EDTA二钠配成螯合态铁，成为有机态铁方被培养物吸收和利用;也可用EDTA铁盐，作为铁的供应源。 这些元素参与培养物机体的建造，构成植物细胞中的核酸、蛋白质、叶绿体、酶系统和生物膜所必需的元素。 二、有机营养成分
植物组培培养基的成分 培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。 大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。 人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。 怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地
用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。 植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分 水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。
药剂学试题及答案 第三章灭菌制剂与无菌制剂 一、单项选择题【A型题】 1.下列哪一术语是判断热压灭菌过程可靠性的参数（） A Z值 B D值 C F0值 D F值 E K值 2.用热压灭菌器灭菌时所用的蒸汽是（） A流通蒸汽 B 过热蒸汽 C湿饱和蒸汽 D饱和蒸汽 3.以下关于热原的叙述正确的是（） A 脂多糖是热原的主要成分 B 热原具有滤过性因而不能通过过滤除去 C 热原可在100℃加热2h除去 D热原可通过蒸馏避免 4.在注射剂中具有局部止痛和抑菌双重作用的附加剂是（） A 盐酸普鲁卡因 B 盐酸利多卡因 C 苯酚 D 苯甲醇 E 硫柳汞 5.制备注射剂的环境区域划分哪一条是正确的（）
A 精滤、灌封、灭菌为洁净区 B 精滤、灌封、安瓿干燥灭菌后冷却为洁净区 C 配制、灌封、灭菌为洁净区 D 灌封、灭菌为洁净区 E 配制、精滤、灌封、灯检为洁净区 6.氯化钠的等渗当量是指（） A 与1g药物呈等渗效应的氯化钠量 B 与1g氯化钠呈等渗效应的药物量 C 与1g药物呈等渗效应的氯化钠克当量 D 与1g氯化钠呈等渗效应的药物克当量 E与1mg氯化钠呈等渗效应的药物毫克当量 7.注射剂质量要求的叙述中错误的是（） A．各类注射剂都应做澄明度检查 B．调节pH应兼顾注射剂的稳定性及溶解性 C．应与血浆的渗透压相等或接近 D．不含任何活的微生物 E．热原检查合格 8.关于热原的叙述中正确的是（） A．是引起人的体温异常升高的物质 B．是微生物的代谢产物 C．是微生物产生的一种外毒素 D．不同细菌所产生的热原其致热活性是相同的E．热原的主要成分和致热中心是磷脂 9.对热原性质的叙述正确的是（）
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25（22)克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克 枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克 纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升 马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升 制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。 质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。
热原的去除及验证 热原(Pyrogens)是微生的代谢产物。大多数细菌都能产生，致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌所产生的热原。霉菌甚至病毒也能产生热原。 含有热原的输液注入人体，大约半小时以后，就使人体发冷、寒战、体温升高、身痛、出汗、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至40℃，严重者出现昏迷、虚脱，甚至有生命危险。 热原反应的温度变化曲线，因热原种类不同而有差异。一般先经过一个短的潜伏期后，温度略微上升，然后又略微下降，接着又很快上升，并出现一个高峰，根据这种现象而导致一个假设：即细菌性热原本身不引起发热反应。但热原使多型核白细胞(polymorphonucler leucocyte)及其他细胞释放一种内源性热原(endogenous pyrogen)，虽然有人提出内源性热原可能是蛋白质或脂蛋白(lipoprotein)组成，但其确切组成尚未肯完，它作用于视丘下部体温调节中枢，可能引起5-羟色胺的升高而导致发热[1]，热原的致热量因菌种而异，由于注射途径不同，引起发热反应的程度也有差异。 1.热原的组成 热原是微生物的一种内毒素，它存在于细菌的细胞膜和固体膜之间。内毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白质所组成的复合物，其中脂多糖(lipopolysaccharide)是内毒素的主要成分，具有特别强的热原活性，因而大致可以认为内毒素=热原=脂多糖。脂多糖的化学组成因菌种不同而异，从大肠杆菌分出来的脂多糖中有68%～69%的糖(葡萄糖、半乳糖、庚糖、氨基葡萄糖、鼠李糖等)，12～13%的类脂化合物，7%的有机磷和其它一些成分。热原的分子量一般为10 105 左右。 热原的结构
2.热原的性质(1)耐热性 一般说来，热原在60℃加热1小时不受影响，100℃也不会发生热解，在180℃3～4小时，250℃30～45分钟或650℃1分钟可使热原彻底破坏。虽然已经发现某些热原具有热不稳定性，但在通常注射剂灭菌的条件下，往往不足以使热原破坏，这点必须引起注意； (2)滤过性 热原体积小，约在1～5nm之间，故一般滤器均可通过。即使微孔滤膜，也不能截留。但活性炭可以吸附热原； (3)水溶性 热原能溶于水； (4)不挥发性 热原本身不挥发，但在蒸馏时，往往可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水，故应设法防止； (5)吸附性 热原对许多分子有亲和性，优其是蛋白质类，因此较难去除。 (5)其它 热原能耐受酸碱和化学试剂的处理，但热原能被强酸、强碱破坏，也能被强氧化剂如高锰酸钾或过氧化氢所钝化，超声波也能破坏热原。热原对干涸的耐受性较强。 3.污染热原的途径(1)从溶剂中带入 这是注射剂出现热原的主要原因。蒸馏器结构不合理，操作不当，注射用水贮藏时间过长都会污染热原。故应使用新鲜注射用水，最好随蒸随用； (2)从原料中带入 容易滋长微生物的药物，如葡萄糖因贮存年久包装损坏常致污染热原。用生物方法制造的药品如右旋糖酐、水解蛋白或抗生素等常因致热物质未除尽而引起发热反应； (3)从容器、用具、管道和装置等带入 因此在生产中对这些容器用具等物要认真处理，合格后方能使用； (4) 制备过程中的污染 制备过程中，由于室内卫生条件差，操作时间长，装置不密闭，均增加污染细菌的机会，而可能产生热原； (5)从输液器带入 有时输液本身不含热原，但仍发现热原反应。这往往是由于输液器具(如输液吊瓶、胶皮管等)污染所致。
常用培养基概念及配 方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制
基础细胞培养基通常指基础合成培养基，主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质（核酸降解物、氧化还原剂等）。 据不同细胞和研究目的，选用合适培养基,?还可补加新成分。?如杂交瘤中常用DMEM加丙酮酸钠、2-巯基乙醇（相当于胎牛血清可透析组分的作用）。 合成培养基使用时加5-30%血清。 1． 199细胞培养基及其改良品种 1950年Morgan等设计，除BSS外，含有53种成分，为全面培养基，广用于各类细胞培养，广泛用于病毒学、疫苗生产。 2． BME细胞培养基 基础Eagle培养基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMEM等。 3． MEM细胞培养基 低限量Eagle培养基（Minimal Essential Medium），1959年修改，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 4． DMEM细胞培养基及其改良品种 DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基，各成份量加倍，分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。生长快，附着稍差肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 5． IMEM细胞培养基 IMEM由Iscove's改良的Eagle培养基，增加了几种氨基酸和胱氨酸量。 6． RPMI-1640细胞培养基 Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等，广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞，也用做悬浮细胞培养 7．Fischer’s细胞培养基 用于白血病微粒细胞培养。 8． HamF10、F12细胞培养基 1963年、1969年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培养。 9． DMEM/F12细胞培养基 DMEM和F12细胞培养基按照1:1比例混合效果最佳，营养成分丰富，且可以使用较少血清，或作为无血清培养基的基础培养基。 10． McCoy5A培养基 1959年MeCoy为肉瘤细胞设计，
按照培养基的成分来分 培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。 (1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 养基三类。 (1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。 (2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。 (3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
培养基和霉菌培养基等四类。 常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等。 养基。 (1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。 (2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。 (3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。
培养基 培养基是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。 一主要培养基配方: 1．CC培养基(mg/L) 2．NB培养基 3．N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
4．MS培养基 是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 5．MSM培养基 6.改良怀特培养基 是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培养基，
提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。 二培养基的配置 在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042+，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放人冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 母液的配制方法： ?单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用a:b表示，即每b 毫升溶液中含有a毫克溶质。 ?混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液，浓度可用a mg/L表示，即配制一升培养基吸取该母液a ml. ?生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2，4—D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶，加入温水定容。生长素常配成1mg／ml的溶液贮于冰箱中备用。 ?细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后，再加入温水冷却后定容， ?铁盐配法（MS为例）：在装有400ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒苛性钠，溶解后加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至500ml，置于冰箱中备用。
热原和细菌内毒素 一、热原(progon) 医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。 为提高药品质量和用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。 家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。所以，在半个多世纪以来热原检查法，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。 但随着制药工业的发展和临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。这种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业发展的需要。其缺点： ①标准化程度低，无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。 ②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。 ③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗生素、生物制品等），实验结果难以判断。 ④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种药品需要几百元/次，而鲎试剂仅几十元/次。 综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。 什么是热原？目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。 欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。 二、细菌内毒素（Endotoxin） 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。其化学成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）的细胞壁层的脂多糖，其化学成份主要是由O-特异性链、核心多糖、类脂A 三部分组成。(附图1) <一>、O—特异性链：位于脂多糖分子最外层的多糖链，是由3—5个单糖（一般不多于25个）连成为一个多糖链。其单糖包括戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基已糖、脱氧已糖等，单糖的种类、位置和排列顺序和空间构型，因菌种不同而异。因此，它决定菌体热原的特异性。 <二>核心多糖：核心多糖的变异性较小，位于类脂A和0—特异性链（内层）之间，在结构上分为内核心和外核心。外核心含有数种己糖，包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等组成。内核心含有庚糖及特殊的酮糖（3-脱氧-D-甘露糖-辛酮糖KDO）。这部分结构对不同菌株的LPS基本相似，而且KDO是以不耐酸的酮糖链与类脂A的氨基葡萄糖连接，是构成内毒素脂多糖的核心部分。
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基 蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克 水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基 在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基 牛肉 500克 蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。 将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基） 可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克
FeSO4 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基 马铃薯 200克 蔗糖 10克 琼脂 20克 水 1000毫升 自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基 将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克 蔗糖 30克 琼脂 15～20克 水 1000毫升 自然pH
培养基的类型及应用 培养基种类繁多,根据其成份、物理状态和用途可将培养基分成多种类型。 1．按成份不同划分 (1)天然培养基(complexmedium) 这类培养基主要以化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物组成,牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria-Bertani)培养基也是一种复合培养基,其组成见表4-10。 常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表4-11)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡罗卜汁、椰子汁等,嗜粪微生物(coprophilousmicroorganisms)可以利用粪水作为营养物质。复合培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。 (2)合成培养基(syntheticmedium) 合成培养基是由化学成份完全了解的物质配制而成的培养基，也称化学限定培养基(chemicallydefinedmedium),高氏1号培养基和查氏培养基就属于此种类型。配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。 2．根据物理状态划分 根据培养基中凝固剂的有无及含量的多少,可将培养基划分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种类型。 (1)固体培养基(solidmedium) 在液体培养基中加入一定量凝固剂即为固体培养基。理想的凝固剂应具备以下条件:1.不被所培养的微生物分解利用;2.在微生物生长的温度范围内保持固体状态。在培养嗜热细菌时,由于高温容易引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;3.凝固剂凝固点温度不能太低,否则将不利于微生物的生长;4.凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;5.凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;6.透明度好,粘着力强;7.配制方便且价格低廉。常用的凝固剂有琼脂(agar)、明胶(gelatin)和硅胶(silicagel)。表4-12列出琼脂和明胶的一些主要特征。 对绝大多数微生物而言,琼脂是最理想的凝固剂,琼脂是由藻类(海产石花菜)中提取的一种高度分支的复杂多糖；明胶是由胶原蛋白制备得到的产物,是最早用来作为凝固剂的物质,但由于其凝固点太低,而且某些细菌和许多真菌产生的非特异性胞外蛋白酶以及梭菌产生的特异性胶原酶都能液化明胶,目前已较少作为凝固剂；硅胶是由无机的硅酸钠(Na2SiO3)及硅酸钾(K2SiO3)被盐酸及硫酸中和时凝聚而成的胶体,它不含有机物,适合配制分离与培养自养型微生物的培养基。 除在液体培养基中加入凝固剂制备的固体培养基外,一些由天然固体基质制成的培养基也属于固体培养基。例如,由马铃薯块、胡罗卜条、小米、麸皮及米糠等制成固体状态的培养基就属于此类。如生产酒的酒曲，生产食用菌的棉子壳培养基。 在实验室中,固体培养基一般是加入平皿或试管中，制成培养微生物的平板或斜面。固体培养基为微生物提供一个营养表面,单个微生物细胞在这个营养表面进行生长繁殖,可以形成单个菌落。固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分） 渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月
目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
培养基大全 2009-12-03 13:33:15 阅读30 评论0 字号：大中小 1．营养肉汤 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，。 制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。 2．营养琼脂培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，。 制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高 压灭菌备用。 3．MRS培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O ，MnSO4 4H2O ，（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至~，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。 4．脱脂乳培养基 成分：牛奶，蒸馏水。 制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。 5．培养基A 成分：蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，，琼脂，水1000mL。制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至~，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。 6．PTYG培养基 成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL， 琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐，盐溶液4mL。 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至~，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。 盐溶液制备：无水氯化钙，K2HPO4 ，KH2PO4 ，MgSO4 。7H2O ，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL， 溶解后备用。
1、毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白： 基础盐培养基BSM:硫酸钙0. 93 g/ L ,硫酸钾18.2 g/ L ,七水硫酸镁14.9 g/ L ,柠檬酸三钠1.47 g/ L ,微量元素2mL/ L ,甘油40 g/ L ,硫酸铵10 g/ L ,磷酸钾缓冲液(pH 6.0) 0.1 mol/ L 。 微量元素主要成分: 五水硫酸铜6.0 g/ L ,碘化钾0.08 g/ L ,一水硫酸锰3.0 g/ L ,二水钼酸钠0.2 g/ L ,硼酸0.02 g/ L ,硫酸钙0.5 g/ L ,氯化钴0.5 g/ L ,氯化锌20.0 g/ L , 七水硫酸亚铁65.0 g/ L , 硫酸5.0 mL/ L ,生物素0.2 g/ L 。试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。 发酵将50μL 种子液接种于5 mL 的YPG培养基中,30 ℃振荡培养18222 h ,转接到装有100mL 基础盐培养基的500 mL 带挡板的摇瓶中。转速180 r/ min ,温度30 ℃培养,每8 小时用浓氨水调节发酵液pH 值至610 。约48 h 时,取样检测甘油浓度,待甘油耗尽后加入甲醇开始诱导。诱导期培养温度为28 ℃,pH 值调节至710[526 ] ,每12 h 补加体积分数015 %的纯甲醇和10 mg/ L 的亚硒酸钠,对照发酵液不添加亚硒酸钠。诱导96 h 后停止发酵。 2、重组人血清白蛋白在毕赤酵母表达中的降解控制 PBM：甘油40g/L，磷酸（85%）26.7 g/L，二水硫酸钙0.6 g/L，硫酸钾9.5 g/L，七水硫酸镁7.8 g/L，氢氧化钾2.6 g/L，PTM1 2ml/L，生物素0.00004 g/L，硫胺0.00019 g/L，浓氨水调节为所需pH，试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。 PTM1：Invitrogen公司提供的标准配方。 发酵：生长期温度为30℃，pH用浓氨水调节，培养期间每4h调节一次维持原pH值，甘油耗尽后甲醇诱导，诱导过程中每12h补加体积分数0.5的纯甲醇，摇床转速180r/min，摇瓶为500ml的底部有挡板的三角瓶，装液量50mml。 3、High-Level Expression of Recombinant Human Serum Albumin from the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris with Minimal Protease Production and Activation Basal Batch Medium