分子生物学综合试验报告
综合实验Ⅰ.Southern杂交 （质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、 地高辛标记的Southern杂交） 一.实验目的 1.学习Southern杂交的原理及操作方法。 2.学习碱裂解法提取质粒的原理。 3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。 4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。 二.实验原理 利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR 进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP （dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。 PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。 地高辛随机引物法标记的原理：在随机引物法标记的反应液中，有随机合成的六聚核苷酸作为引物，dATP、dCTP、dGTP、dTTP和D1G-11-dUTP作为合成底物，以单链DNA作为模板，在Klenow酶的作用下，合成插入地高辛的DNA链。以地高辛标记的探针与靶基因DNA链杂交后，再通过免疫反应进行检测。一般通过酶标记地高辛抗体检测，就可以肯定杂交反应的存在。免疫检验一般用碱性磷酸酶系统，BClP/NBT显色，敏感性很高。 三．实验准备 1.实验材料： 含质粒的大肠杆菌DH5α，LB液体培养基， LB平板培养基 2.实验试剂： Taq DNA聚合酶，10×反应缓冲液（含25mmol MgCl2），dNTP，引物（P1、P2），溴乙啶 (EB) ，点样缓冲液Loading buffer（10×）：%溴酚蓝，40%甘油，目的基因及载体， 2×ligation 缓冲液，T4 DNA连接酶， L CaCl2，氨苄青霉素（100mg/mL）， TBE电泳缓冲液（5×）， DIG Random Labeling Mix（高效），Anti-DIG-AP Conjugate， BCIP/NBT Stock Solution，Blocking Reagent。 20×SSC：柠檬酸钠，3M NaCl，2×SSC：柠檬酸钠， NaCl， EDTA，变性液： NaOH， NaCl，中和度： Tris-HCl、、3M NaCl，Standard buffer：5×SSC、%(w/v) N-Lauroylsarcosine, % (w/v) SDS, 1% Blocking Reagent，Standard buffer+50% formamide，Anti-DIG-AP 碱性磷酸酶标记抗地高辛单抗体，BCIP/NBT储备液，冲洗液：0. 1M
医学科研实验设计的三大要素[关键词] 医学科研要素健康网讯: 熊国强(湖南医科大学卫生统计学教研室长沙410078)贺石林(湖南医科大学生理学教研室长沙410078)科研的基本要素包括处理因素、受试对象和实验效应。如用某种传统西药或中成药治疗缺铁性贫血病人，观察比较两组病人血红蛋白的上升趋势，该研究中所用的两种药物称为处理因素，缺铁性贫血病人称为受试对象，血红蛋白称为实验效应。如何正确选择三大要素是科研中专业设计的关键问题。处理因素(受试因素) 通常指由外界施加于受试对象的因素，包括生物的、化学的、物理的或内外环境的。但是生物本身的某些特征(如性别、年龄、民族、遗传特性、心理因素等)也可作为处理因素来进行观察。因此，研究者应正确、恰当地确定处理因素。一般应注意以下几点：①抓住实验研究中的主要因素。研究中的主要因素是按以往研究基础上(本人或他人)提出的某些假设和要求来决定的。一次实验涉及的处理因素不宜太多，否则会使分组增多，受试对象的例数增多，在实施中难以控制误差。然而，处理因素过少，又难以提高实验的广度和深度。因此，需根据研究目的的需要与实施的可能来确定带有关键性的因素。②找出非处理因素。除了确定的处理因素以外，凡是影响实验结果的其他因素都称为非处理因素，所产生的混杂效应也影响了处理因素产生的效应对比和分析，这些非处理因素又称混杂因素。例如上述两种不同药物治疗缺铁性贫血病人的试验，非处理因素可能有年龄、性别、营养状况等。如果两组病人的年龄、性别、营养等构成不一，则可能影响药物疗效的比较。因此设计时便设法控制这些非处理因素，只有这样才能消除它们的干扰作用，减小实验误差。③处理因素必须标准化。处理因素的强度、频率、持续时间与施加方法等，都要通过查阅文献和预备试验找出各自的最适条件，然后订出有关规定和制度，并使之相对固定，否则会影响试验结果的评价。如处理因素是药物，必须正确选择批号，给药途径和时间也应标准化和相对固定化。受试对象(研究对象) 受试对象的选择十分重要，对实验结果有着极为重要的影响。大多数医学科研的受试对象是动物和人，也可以是器官、细胞或分子。但中药种植中培育品系的研究则将药用植物列为受试对象。在医学科研中，作为受试对象的前提是所选对象必须同时满足两个基本条件：①必须对处理因素敏感；②反应必须稳定。因此，在观察新药的临床疗效试验中，应当选择中等程度中青年患者，只有这样才能显示疗效率高低的差别。受试对象的疾病应诊断明确(依照国内或国际统一的诊断标准)，且表现具有典型性。研究者必须深知病人的心理状况、情绪起落、病情程度、病程长短、生活习惯、个人嗜好、家庭经济收入、食品种类等都不同程度地影响疗效，这些影响因素必须很好地加以控制，使组间均衡化。根据研究目的不同，对实验动物的选择要求也不同。动物的选择应有针对性地注意种类、品系、年龄(月龄)、性别、体重、窝别和营养状况等。为保证实验效应的精确性，某些动物的生活环境还有严格要求。 [!--empirenews.page--] 试验效应试验效应内容包括试验指标的选择和观察方法两个部分。指标的选择有以下要求：①指标的关联性，选用的指标必须与所研究的题目具有本质性联系，且能确切反映被试因素的效应。所选指标是否具有关联性，充分反映了研究者的专业知识与技术水平。②指标的客观性，指标数据来源决定它的主、客观性质。主观性指标来自观察者或受试对象，易受心理状态与暗示作用的影响，在科研中一般尽量少用。客观性指标是指通过精密设备或仪器测定的数据，能真实显示试验效应的大小或性质；排除了人为因素的干扰。③指标的灵敏度，通常是由该指标所能正确反映的最小数量级或水平来确定。如溶液中物质含量的测定，除测出下限值以外，还可测出最低改变浓度来反映灵敏度。一般要求其灵敏度能正确反映处理因素对受试对象所引起的反应就够了，并非灵敏度越高越好。④测定值的精确性，精确性具有指标的精密度与准确度双重含义。准确度是测定值与真实值接近的程度。精密度是重复测定值的集中程度。从设计角度来分析，第一强调准确，第二要求精密。既准确又精密最好，准确但精密度不理想尚可，而精密度高但准确度低则不行。应当强调指标的精确性除与检测指标的方法、仪器、试剂及试验条件有关外，还取决于研究者的技术水平及操作情况。⑤指标的
第三章科研方法与思维方式 第一节典型科研方法 探索自然科学的奥秘是一项艰苦而又光荣的事业，它需要研究者以坚定的信念、顽强的意志和不懈的努力去探索和追求；同时，也要有正确的科研方法做指导才能有效地进行。方法问题是科研工作中的一个重要问题，事关科研工作的成效。科研方法是历代科学工作者集体智慧的结晶，是从事科学研究及技术发明的有效工具。 一．科研方法的层次 1．哲学方法 这是最根本的思维方法，是研究各类方法的理论基础和指导思想，对一切科学（包括自然科学、社会科学和思维科学）具有最普遍的指导意义，是研究方法体系的最高境地。 2．一般方法 一般方法是特殊方法的归纳与综合，它以哲学方法为指导，对各门学科研究具有较普遍的指导意义，也是连接哲学方法与特殊方法之间的纽带和桥梁。 3．特殊方法 特殊方法是适用于某个领域、某类自然科学或社会科学的专门研究方法，是构建研究方法体系大厦的基础。于各门学科具有自身的研究对象和特点，因此其研究方法各有所长。 二．典型的科研方法 (一) 观察 1．观察方法：观察方法是探索未知世界的窗口。 2．观察的意义：科学始于观察，积累原始资料，是科学发现和技术发明的重要手段。 3．观察的原则：客观性原则，全面性原则，典型性原则，辩证性原则。 4．观察的种类：直接观察，间接观察。
5．观察的偏差：主观因素，客观因素。 (二) 实验 1．实验方法：实验是发现科学奥秘的钥匙。 2．实验新特点：规模扩大化，测量精密化，操作自动化等。 3．实验的作用：简化和纯化研究对象，加速或延缓研究过程。 4．实验的类型：根据实验方式、作用、对象等因素，有多种分类方式。 5．实验的要求：规范，详细，真实，重复等。 6．实验的缺陷：实验假象，实验误差，实验限制等。 (三) 模拟 1．模拟方法：以相似理论为基础的一种理想化数值分析方法。 2．模拟的特点：在一定程度上可再现模型的运动规律。 3．模拟的种类：模拟有多种分类形式，如物理模拟、数学模拟、智能模拟等。 4．模拟的作用：缩短研制周期，培训复杂技术操作人员，安全迅速，节约高效。 5．模拟的不足：可用于最初实验研究，但不能代替真实的实验。 (四) 数学 1．数学方法：利用简明精确的形式化语言进行定量描述客观规律。 2．数学方法的特点：高度抽象，精确性，逻辑性等。 3．数学方法的作用：为各门科学研究提供定量分析和理论计算方法。 4．数学模型的类别：确定型、随机型、模糊型和突变型等。 6．数学模型的建立：数学模型建立流程如图4所示。 图4 数学模型建立流程图
医学科研实验设计的三大要素 医学科研实验设计的三大要素 医学科研实验设计的三大要素 2006-11-26 基础医学论文 熊国强(湖南医科大学卫生统计学教研室长沙 410078)贺石林(湖南医科大学生理学教研室长沙 410078) 科研的基本要素包括处理因素、受试对象和实验效应。如用某种传统西药或中成药治疗缺铁性贫血病人，观察比较两组病人血红蛋白的上升趋势，该研究中所用的两种药物称为处理因素，缺铁性贫血病人称为受试对象，血红蛋白称为实验效应。如何正确选择三大要素是科研中专业设计的关键问题。 处理因素(受试因素) 通常指由外界施加于受试对象的因素，包括生物的、化学的、物理的或内外环境的。但是生物本身的某些特征(如性别、年龄、民族、遗传特性、心理因素等)也可作为处理因素来进行观察。因此，研究者应正确、恰当地确定处理因素。一般应注意以下几点：①抓住实验研究中的主要因素。研究中的主要因素是按以往研究基础上(本人或他人)提出的某些假设和要求来决定的。一次实验涉及的处理因素不宜太多，否则会使分组增多，受试对象的例数增多，在实施中难以控制误差。然而，处理因素过少，又难以提高实验的广度和深度。因此，需根据研究目的’的需要与实施的可能来确定带有关键性的因素。②找出非处理因素。除了确定的处理因素以外，凡是影响实验结果的其他因素都称为非处理因素，所产生的混杂效应也影响了处理因素产生的效应对比和分析，这些非处理因素又称混杂因素。例如上述两种不同药物治疗缺铁性贫血病人的试验，非处理因素可能有年龄、性别、营养状况等。如果两组病人的年龄、性别、
营养等构成不一，则可能影响药物疗效的比较。因此设计时便设法控制这些非处理因素，只有这样才能消除它们的干扰作用，减小实验误差。③处理因素必须标准化。处理因素的强度、频率、持续时间与施加方法等，都要通过查阅文献和预备试验找出各自的最适条件，然后订出有关规定和制度，并使之相对固定，否则会影响试验结果的评价。如处理因素是药物，必须正确选择批号，给药途径和时间也应标准化和相对固定化。 受试对象(研究对象) 受试对象的选择十分重要，对实验结果有着极为重要的影响。大多数医学科研的受试对象是动物和人，也可以是器官、细胞或分子。但中药种植中培育品系的研究则将药用植物列为受试对象。 在医学科研中，作为受试对象的前提是所选对象必须同时满足两个基本条件：①必须对处理因素敏感；②反应必须稳定。因此，在观察新药的临床疗效试验中，应当选择中等程度中青年患者，只有这样才能显示疗效率高低的差别。受试对象的疾病应诊断明确(依照国内或国际统一的诊断标准)，且表现具有典型性。研究者必须深知病人的心理状况、情绪起落、病情程度、病程长短、生活习惯、个人嗜好、家庭经济收入、食品种类等都不同程度地影响疗效，这些影响因素必须很好地加以控制，使组间均衡化。根据研究目的不同，对实验动物的选择要求也不同。动物的选择应有针对性地注意种类、品系、年龄(月龄)、性别、体重、窝别和营养状况等。为保证实验效应的精确性，某些动物的生活环境还有严格要求。 试验效应试验效应内容包括试验指标的选择和观察方法两个部分。指标的选择有以下要求：①指标的关联性，选用的指标必须与所研究的题目具有本质性联系，且能确切反映被试因素的效应。所选指标是否具有关联性，充分反映了研究者的专业知识与技术水平。②指标的客观性，指标数据来源决定它的主、客观性质。主观性指标来自观察者或受试对象，易受心理状态与暗示作用的影响，在科研中一般尽量少用。客观性指标是指通过精密设备或仪器测定的数据，能真实显示试验效应的大小或性质；排除了人为因素的干扰。③指标的灵敏度，通常是由该指标所能正确反映的最小数量级或水平来确定。如溶液中物质含量的测定，除测出
分子生物学实验 设计实验 题目：在大肠杆菌中表达绿色荧光基因（EGFP ） 学院：生命科学学院 专业：生态学 教师：吴传芳 姓名/学号：余光辉/20 方成/20
一、实验目的 在大肠杆菌中表达绿色荧光蛋白 二、实验流程 三、实验试剂、材料及步骤 (一)质粒DNA的提取 1.原理 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌 体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后， 质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染 色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。 经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和 RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常 规亚克隆及探针标记等要求 2.试剂 LB培养液:胰蛋白胨（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeast extract）5 g，NaCl 5g， 琼脂（固体培养基）15g，用1N NaOH调pH 7.5。 溶液Ⅰ：50mmol/L 葡萄糖， 10mmol/ EDTA-Na， 25mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 溶液Ⅱ：0.4mol/L NaOH ， 2% SDS 临用前1：1配制。 溶液Ⅲ：5mol/L 醋酸钾60ml 冰醋酸11.5ml 双蒸水28.5ml 卡那霉素(20mg/mL) 抽提液（饱和酚：氯仿：异戊醇=25：24：1 ） 无水乙醇 70%乙醇 TE缓冲液或ddH2O
3.材料 含质粒pET-28a和pEGFP-N3菌液 1.5ml塑料离心管 EP管架 微量取液器和取液器吸头 常用玻璃器皿 4.实验步骤 （1）将带有质粒pET-28a和pEGFP-N3的大肠杆菌接种在液体培养基中（加氨苄青霉素50μg/mL），37℃培养过夜 （2）取培养菌液1.5mL置Eppendorf小管中，10000rpm×2min，弃上清液 （3）加入100μL溶液I，漩涡器上充分混匀，在室温下放置10 min （4）加入200μL新配制的溶液Ⅱ，轻轻翻转2~3次，使之混匀，冰上放置5 min （5）加入150μL冰冷的溶液Ⅲ，加盖后温和颠倒数次使混匀，产生白色絮状物，冰上放置15 min （6）10000rpm×5 min，取上清液于另一干净的离心管中 （7）向上清液中加入等体积（约400μL）酚/氯仿/异戊醇（25:24:1，v/v），振荡混匀，10000rpm ×10 min，将上清液转移至新的离心管中（8）加入等体积（约370μL）氯仿/异戊醇（24:1），混匀，离心2min ,取上清液于新离心管中 （9）向上清液加入2倍体积无水乙醇，混匀，-200C放置1h （10）12000rpm × 5 min，倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体 （11）加0.8mL70%乙醇，离心1 min，倒去上清液，真空抽干或室温自然干燥30min （12）加30μL ddH2O ，-200C保存备用 5.注意 （1）饱和酚（取下层）单独吸200μL，氯仿：异戊醇（24：1）吸200μL （2）制备质粒过程中，所有操作必须缓和，不要剧烈振荡（特别是加入溶液II 和III ），以避免机械剪切力对DNA的断裂作用 (二)DNA琼脂糖凝胶电泳检测 1.原理 在质粒提取的过程中，由于操作原因，提取的质粒可能有三种：线性DNA、 开环DNA 、闭环超螺旋DNA 。 当提取的质粒DNA电泳时,同一质粒DNA泳动速度：闭环超螺旋〉线状〉开 环。 但有时也有也会出现相反情况，因为与琼脂糖浓度、电流强度、离子强度及核 酸染料含量有关。 2.试剂 Gold view（DNA染料） 0.5×TBE缓冲液 上样缓冲液（6×） 3.材料 提取的pEGFP-N3和pET-28a ，琼脂糖，锥形瓶，一次性手套，胶铲，封口膜，
伽利略给我们的启示 摘要 第三学期由刘小兵老师和韩长明老师给我们上的《科学实验方法和实验设计》课涉及到在教学中的真正应用、动手、工艺以及思想方等各个方面，作为跨专业的我眼界大开，收获很大。本文拟从实验方法背后的思所体现的思想之角度谈谈我的认识。 正文 所谓实验，就是重现生活中发生的、需要用已有的或者发展后的科学知识加以解释的现象，由于任何自然界的现象都是错综复杂的，不可避免地会有干扰因素，不可能以纯粹的形态自然地展现在人们面前，力学现象也不例外。因此，人们要从生产和生活中遇到的各种力学现象抽象出客观规律，必定要有相当复杂的提炼、简化、复现、抽象等实验和理论研究的过程[1]。并通过人为控制变量的办法忽略其次要因素，将现象加以放大。而这又是一种理解抽象科学原理，发展科学原理的再好不过的方式。然而我觉得不管实验得如何成功，如何精彩，都离不开思想的指导，那些思想则通过合理巧妙，严谨而又科学的设计体现出来。作为科学实验之始祖的伽利略先生给我们很大的启发。 上课时，刘老师曾不止一次提到伽利略和他对落体运动及斜面问题的研究，而对我影响最大的是他的思想实验。 伽利略（1564——1642），意大利人，是一位伟大的物理学家。为了弄清楚运动的本质，他设计了如下的实验：让一个球沿斜面滚下。这样：球的速度将增大。若是给一个球一个起始的推动力让他沿斜面向上滚，他会慢下来（然后停下来并回头往下滚）。假设斜面近于水平，如果你曾让一个球沿一个小坡度的斜面滚下来过，你就会知道，
它很容易慢下来并停止，即使他是向下滚得。伽利略认识到这种减速是由于斜面和球的表面不光滑造成的，今天我们称其为摩擦。而伽利略关键的一步是通过略去（至少是在他头脑中略去）摩擦的效应而使实验理想化[1],这种事伽利略的伟大之处。更为精彩的是他采取了有特色的令人赞赏的一步：他考虑小坡度平面的极限情形，即理想的水平面，此时小球不会加速也不会减速，这种合理外推的思想是很值得我们借鉴的[2]。伽利略留给我们很多东西，最主要的是科学研究的方法，归纳起来，这些方法包括： 设计实验，以检验特定的假设。虽然细心观察的做法可以追溯到亚里士多德，伽利略最先通过用受控实验来检验特定的假设，从而改变了这一做法。 对现实世界进行理想化，以消除（至少在人的头脑中）任何可能掩盖主要效应的次要效应。 限制探究 范围每次只考察一个问题。伽利略和亚里士多德不同，他更细致的观察水平运动是怎样进行的，她发现没有摩擦力的条件下，物体不会慢下来。 一个好的实验固然精彩，而更可贵的是如何想出来的，能够结合知识进行创作，而这正是韩长明教授的长处，当然有了想法，在付诸行动的过程中需要过硬的基本功，这门课的最后几节是韩老师给我们上的，他从科学实验的创作及其所需的基本功等角度做了讲解并指导学生进行实践，很大程度上给同学们补了一下基本功，这样就可以确保同学们有想法便可以去实施，为接下来的实验设计做了很好的铺垫。 定量方法 伽利略尽最大努力进行测量。他懂得，能做出定量预测的理论更
大学生科研方法导论作业 课题申请书 学科分类社会医学 课题名称野生蝲蛄和家养蝲蛄的寄生虫感染情况调查课题申报人********** 院系专业及班级****************** 学号****************** 填表日期*************
1.选题：喇蛄俗称小龙虾，是寄生虫肺吸虫的第二宿主。江南地区许多小河、水田和水沟等水域都有它的踪迹。即使这些水域有的水质较差，它仍然能生活，喇蛄生命力很强，适应环境能力强。喇蛄除了寒冷的冬天在水底冬眠外，其他季节都能发现它。尤其在夏天，这些水域喇蛄数量很多，这时候很容易找到它。但很多市面上卖的都是很脏的水里捉的。蝲蛄的食物来源主要是植物秸秆、水草、螺蛳、小杂鱼和死掉的鱼类或同类的尸体，由于螯虾有吃腐尸的习惯，它们的身体中携带了大量的细菌和有毒物质。又因近年来，我国水源污染十分严重，长江流域出现大量的漂浮物堆积，政府部门虽然组织人力物力对这些污染物进行清理，但是这些污染源还是影响到水中生物的生活环境。因此人食用了这种环境下的小龙虾，便会产生不适的症状。例如皮肤病，肺吸虫感染等等。野生蝲蛄因其恶劣的生活环境给食用的人们带来的负面影响了它的食用及价值。但是喇蛄是口味鲜美、营养丰富、可制多种佳肴的海味，有菜中之"甘草"的美称。它的美味也让许多人看中了它能带来的经济价值，家养的蝲蛄是否能减少它本身的寄生虫或病原菌感染率能否为逐渐扩大的养殖户群带来更多的收益让人们放心食用也为蝲蛄开拓了市场成了越来越多人餐桌上的美食。将通过我们的科研研究来解决这一个问题，同时也给人们一个放心饮食环境。 2.研究目的：野生蝲蛄和家养蝲蛄的寄生虫感染情况调查，对比得出家养蝲蛄是否可以减少寄生虫的感染率以及减少病原体的携带率，给人们的饮食选择做出指导，保护人们的饮食健康，减少寄生虫冲口感染的机会。 3.研究方案： ①研究内容：喇蛄在水中行动比较迟缓，能用手直接捕捉，也可以用采集网（昆虫网）兜捕、钓捕。本次研究采用钓捕，在河道里钓取蝲蛄若干只，将从野外钓回来的蝲蛄放在缸里供养，待用。其次在各个养殖场各采购蝲蛄10只左右待用。分别取5只将在野外钓取得蝲蛄和采购的蝲蛄进行解剖，在显微镜下观察其内部器官，记录。最后将剩余的野生蝲蛄以及采购蝲蛄分别碾碎，洗涤去壳，过滤沉淀，取沉淀物在玻片上进行显微镜观察，分别比较观察1个视野和100个视野里寄生虫
一、实验名称:临时装片、切片、涂片的制作、观察与指导 二、实验目标:让学生通过独立自主的制作临时装片、切片、涂片的方法来感知细胞的形态与结构,从而使学生对细胞达到一定的认识,为以后的教学作下铺垫。制作临时装片的成功,对提高学生的生物学兴趣与生物科学素养都起着重要的作用。同时,这样锻炼了学生的动手能力,也培养了学生的自己动脑思考的能力。 三、实验方法及步骤: (一)实验材料:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、毛笔、滴管、擦镜纸;清水、碘酒溶液;西红柿、空心莲子草、洋葱;创可贴(切片时可能会有人受伤) (二)实验步骤: 1、临时装片的制作 ⑴准备 擦用擦镜纸把载玻片与盖玻片擦拭干净 改进:将洁净的纱布改为擦镜纸,擦拭玻片时要注意用左手的拇指与食指 夹住玻片的两端,右手的拇指与食指衬垫上洁净的纱布后,夹在玻片两面,同时擦拭,以防将玻片损坏, 滴用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水 改进:在制片时至少滴2滴清水,这样加盖玻片时,盖玻片下的空间中水 较充盈,气泡就少,细胞的活性也较好 取用刀片在洋葱表面上划“井”字(大约0、5cm2),用镊子撕取外表皮 问题:由于叶表皮皱缩、学生不熟练等,导致撕下的表皮薄膜过厚,在显微 镜视野中难以找到理想的观察对象,致使实验效果较差。 改进:首先将洋葱鳞片叶切成宽1、0-1、5 cm 的纵向窄条,再用刀片将 洋葱鳞片叶内侧表皮划成小块(切忌划透),然后用镊子夹住所划表皮的 边缘,将其轻轻取下(洋葱鳞片叶内侧表皮易与叶肉分离,操作简便)即 可。这一改进降低了实验操作难度,提高了制片质量。 放把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中,并展平 ⑵盖盖玻片 盖用镊子夹起盖玻片,使它的一边先接触载玻片上的水滴,然后缓缓地 放下,盖在要观察的材料上 ⑶染色 染:将玻片倾斜10度左右,从高的一侧滴入碘液,让其自己流入玻片。 问题: 染色时书中要求就是把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧,然后用吸 水纸从盖玻片的另一侧吸引,使染液浸润标本的全部。然而,部分同学可 能将盖玻片下所有水全部吸干,做出的装片会有很多的大气泡,且气泡将 细胞掩盖了,或者有人将气泡误认为细胞。 改进:染色时不用吸水纸吸水,而就是将玻片倾斜10度左右,这个角度一
科研设计的基本要素和原则 科研课题确定以后,能否取得满意的科研成果及达到预期的目标,在很大程度上取决于科研设计。科研设计就是制定课题研究的技术方案和计划实施方案,它是整个研究工作的蓝图,集中体现了课题课题研究人员的设想,构思。要想使科研设计达到直观,明晰,可供操作,便于实施,必须明确科研设计的基本要素和基本原则。 一科研设计的基本要素 任何一项研究总要包括受试对象,处理因素,观察指标或效应指标三个基本要素。下面对受试对象,处理因素,效应指标的要领及要求作一简要介绍。 1 受试对象 受试对象是指接受实验的动物或人,亦称实验对象,研究对象或观察对象。受试对象的选择非常重要,它对实验结果有着极为重要的影响,受试对象的选择合适与否,对实验成败是很关键的。如果进行动物实验,对实验动物的基本要求是对拟施加的处理因素反应敏感,反应稳定,尽可能近似与人,并且经济可行,容易获得。特殊要求是健康合格,种属一致,品系相同,年龄,窝别,体重差别不大,性别要求雌雄各半。 2 处理因素 就是为了不同的研究目的,加给研究对象以物理的,化学的或生物的各种条件被称为处理因素。在科学研究中,任何实验效应都是多因素作用的结果,我们要抓住主要的,带有关键性的几个因素。 3 实验效应指标 处理因素作用于受试对象所显示出的结果被称为效应。为了具体的,准确的反映出实验效应,就必然需要使用效应指标,指标不仅可以用来揭示实验观察对象的某些特征,也可以用来判断某些特定现象或事实的依据与标准。在医学研究中,不论那种类型的研究,要探索的因素必须通过具体的指标反映出来。 二研究设计的基本原则 1 对照的原则 就是确定实验中相互比较的实验组和对照组,对各组给予不同的处理,然后观察其效应。 对照的意义在于通过它消除和减少实验误差。在医学研究中,除了正常解剖生理数据的调查以外,都要有对照。对照基本要求是除了实验因素作有计划的变化外,实验组与对照组的其他条件应尽量保持一致。
分子生物学实验报告专业：****** 班级：*** 指导老师：** 学生姓名：*** 目录： 实验一质粒DNA的小量制备 实验二DNA的含量、纯度与分子量的电泳法测定 实验三感受态细胞的制备及转化 实验四PCR扩增技术与琼脂糖凝胶电泳检测 分子生物学基础实验 分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。 实验一质粒DNA的小量制备 一、实验原理 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，
如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。 所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。 质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 二、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、实验材料和试剂 材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。 试剂：
科研设计 一共6道题，每页6道题 单选类型试题： 1) 下面哪项不是实验性研究的优点： A. 可比性好，基线一致 B. 应用的普遍性好 C. 防止选择性偏倚好 D. 高质量的实验性研究是系统评价的可靠资源 2) 试验组和对照组的最佳分配比例是： A. 1:1 B. 2:1 C. 1:2 D. 3:2 3) 下面对于选择研究对象需遵循的原则描述错误的是： A. 选择对干预措施有效的对象 B. 选择预期发病率较高的对象 C. 选择干预对其影响较大的对象 D. 选择能将实验坚持到底的对象 4) 下面对类实验研究的描述错误的是： A. 具备有人为地施加影响因素的特点 B. 同实验性研究的根本区别是：或者没有相等的对照，或者不是用随机的原则分的组 C. 类实验性研究的最大优点是在实际人群中进行人为干预因素研究的可行性高 D. 类实验性研究在回答自变量和因变量的关系时，比实验性研究的可信度高 5) 双盲实验中不知道病人所用药物是试验药还是对照药的是： A. 研究者 B. 病人 C. 监查员 D. 以上均是 6) 实验设盲是为了避免： A. 医生的偏性 B. 病人的偏性 C. 评定者的偏性 D. 以上均是
论文材料的搜集一共6道题，每页6道题 单选类型试题： 1) 中国科学引文数据库属于： A. 参考数据库 B. 全文数据库 C. 语言数据库 D. 压缩数据库 2) 目前世界上最大和最广泛使用的学位论文数据库是： A. 中国优秀博硕士学位论文全文数据（CDMD） B. 万方学位论文 C. ProQuest博硕士论文数据库 D. 中国知网 3) 文献检索时应当先检索： A. 电子文献 B. 印刷版文献 C. 中文文献 D. 英文文献 4) 资料搜集时应注意： A. 正确确定检索途径 B. 检索课题主题概念的提取要准确、全面 C. ?检索策略要适时地加以调整 D. 以上都是 5) 国最大型的学术期刊数据库为： A. 中国学术期刊数据库 B. 中文科技期刊数据库 C. 万方数字化期刊 D. 中国知网 6) 百科全书属于： A. 检索类工具书 B. 参考性工具书 C. 语言性工具书 D. 管理性工具书
微生物学实验报告（格式标准） (生命科学专业) 教师：黎勇 目录索引
实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3 实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5 实验三常用培养基的配制7 实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8 实验五、微生物大小的测定与显微计数10 实验六环境中微生物的检测和分离纯化11 实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12 实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13 课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科 实验日期：指导教师：黎勇 实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。 〔基本原理〕 1. N2A=n2sinα 2. D=λ/2N.A 3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。 4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。 〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕： （一）油镜的使用 镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图 取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。 （二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察 （三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察 〔结果分析〕 1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。（描绘时按视野实际大小5－10倍绘制） 菌名：大肠杆菌菌名：金黄色葡萄球菌 放大倍数：100310（35）放大倍数：100310（35） 特殊结构：无特殊结构：无视野观察下微生物的形态 2、油镜使用时为什么必须干燥装片？ 防止水油分层，光受到折射而影响油镜性能的发挥 〔实验讨论〕 首次实验中有几个要点：一是按无菌操作取用菌；二是涂片技术的掌握；三是油镜使用技术。凡实验中学生的所思所想，如无菌操作技术要点、自行处理实验材料、失败与思考等均可进行讨论（如涂片时蒸馏水不宜过多、取用菌时防止菌被灼烫变形、取菌宜少不宜多等均是可以讨论的内容）。
绪论单元测试 1 【单选题】(20分) 第（）次工业革命，科学技术对生产力发展产生“量子效应”。 A. 二 B. 一 C. 三 D. 四 2 【判断题】(20分) 第三次工业革命的特征是信息化。 A. 对 B. 错 3 【判断题】(20分) 有什么样的研究方法，就有什么样的科学研究。 A.
错 B. 对 4 【多选题】(20分) 达尔文用（）提出了进化论。 A. 观察法 B. 实验法 C. 分类法 D. 比较法 5 【判断题】(20分) 用假说演绎法能够产生相对论。 A. 错 B. 对
第一章测试 1 【判断题】(20分) 研究的本质特性是系统性。 A. 对 B. 错 2 【判断题】(20分) 一项研究可以没有信度却具有效度。 A. 错 B. 对 3 【单选题】(20分) 研究者依赖被试对情境的解释，并尽量获取被试的语言和观点，结果被认为是基于某种特定情境的研究范式是（）。 A.
反实证主义 B. 变革主义者 C. 建构主义理论 D. 实证主义 4 【单选题】(20分) 实验结果取决于干预带来什么影响，实验结果就是()。 A. 自变量 B. 连续变量 C. 控制变量 D. 因变量 5 【多选题】(20分) 良好设计的特征有（）。 A. 避免混淆
B. 检验假设时统计的精确性 C. 排除偏差 D. 控制无关变量 第二章测试 1 【判断题】(20分) 科学问题是可以被实证的。 A. 对 B. 错 2 【判断题】(20分) 论文选题就是选择一个题目。 A. 错 B. 对
3 【单选题】(20分) 根据研究活动的特征或认识层次，研究可以分为（）。 A. 经验方法和理论研究 B. 定性研究方法和定量研究方法 C. 一般方法和特殊方法 D. 常规方法和非常规方法 4 【多选题】(20分) 研究问题的基本特性有（）。 A. 必须是可行的，是通过实验、观察、调查等可以寻找答案的问题 B. 简单而直接的问题，避免抽象而不具体的问题，以及有太多变量的问题 C. 具有挑战性的吸引人的问题 D. 有兴趣研究的问题
一、选择题 1.试验设计中强调必须遵守“随机、对照、重复、均衡”四大原则,其目的就是为了( ). A．减少过失误差、降低随机误差、消除系统误差； B．便于收集资料、便于统计处理、便于撰写论文； C．纯化“信号”、降低“噪音”、多快好省； D．仅用一、二次,最多十几次试验,就可得到可靠结果； 2.已知A、B、C都是三水平因素,且根据试验得知:A?B、B?C不可忽视.若希望试验次数尽可能少一些,试验设计时最好选择( ). A.拉丁方 B.正交设计 C.析因设计 D.交叉设计 3.为了研究一组因素X 1,X 2 ,……,X g 对一组肺癌患者生存时间长短的影响,对病人进行追踪随访观察,观察结果分为两档,即病人生存时间≤2 年和>2年,考察的危险因素有治疗方法(4种)、治疗前病人的状态(6种)、病人的年龄、癌细胞的类型(3种)等.问这种资料最适合选用什么统计方法分析( ). A.方差分析B.多元线性回归分析C.COX回归分析D.Logistic回归分析 4.为了研究一组因素X 1,X 2 ,……,X g 对一组肺癌患者生存时间长短的影响,对病人进行追踪随访观察,观察结果为病人的生存时间(年),含终 检数据,考察的危险因素有治疗方法(4种)、治疗前病人的状态(6种)、病人的年龄、癌细胞的类型(3种)等.问这种资料最适合选用什么统计方法分析( ). A.方差分析B.多元线性回归分析C.COX回归分析D.Logistic回归分析 5.某试验需在5%和15%两种氧浓度下进行,每种氧浓度分别使用甲、乙、丙、丁四种类似的药物对K 562 细胞进行抑制,每个试验条件下均重复4次试验(独立的4个样品,所含细胞的质和量都相同).观察的指标为计量资料,此设计称为( ). A.拉丁方 B.配对设计 C.析因设计 D.交叉设计 6.良好的实验设计,能减少人力、物力,提高实验效率,还有助于消除或减少( ). A.系统误差(偏性) B.随机误差 C.抽样误差 D.责任事故 7.对于由一个错误的实验设计所产生的实验数据,在进行数据处理之前,其补救方法靠( ). A.统计方法 B.数学方法 C.重做实验 D.重新设计,重做实验 8.试验设计中要求严格遵守四个基本原则,其目的是为了( ). A.便于统计处理 B.严格控制或消除随机误差的影响 C.便于进行试验 D.尽量减少或抵消非试验因素的干扰 9.某医生用针刺疗法治疗三种不同的疾病,目的在于弄清:针刺治疗对哪种病疗效最好,三种病人分别在甲、乙、丙三组接受相同的辅助治疗.该医生每天依次给甲、乙、丙三组病人(每组30人)一一扎针,这样做人为产生了( ). A.重复误差 B.随机误差 C.抽样误差 D.条件误差 10.为评价某药的降压作用,某单位随机选择50名高血压患者,记录每人服药前后的舒张压值,这种收集资料的过程,称为什么实验设计类型( ). A.析因设计 B.成组设计 C.配对设计 D.单组设计 11.对于一个试验而言,配伍组设计优于完全随机设计,这是因为( ). A.配伍组设计简单易行 B.降低了随机误差 C.降低了重要非试验因素的影响 D.可以分析两因素之间的交互作用 12.在某项试验研究中,想着重考察A、B、C三个试验因素分别取四个不同水平条件下对现测指标的影响,已知这三个因素之间不存在交互作用,为了使试验次数尽可能少些,应选择( ) A.析因设计 B.成组设计 C.配对设计 D.拉丁方设计 13.在某项试验研究中,想着重考察A、B、C三个试验因素分别取四个不同水平条件下对现测指标的影响,且需要考虑A?B和B?C,为了使试验次数尽可能少些,应选择( ) A.析因设计 B.正交设计 C.交叉设计 D.拉丁方设计 14.有人为研究甲、乙两种药物是否有协同或拮抗作用,设立了四个组,第一组为空白对照；第二组为单用甲药；第三组为单用乙药；第四组为甲、乙药合用.用小鼠作为受试对象,各组均用5只小鼠做试验,观察指标是与芗作用有密切联系的某种物质的含量.试验做完后,共测得20个试验数据,假定资料满足各种参数检验所需要的前提条件,为分析此资料,应选择( ). A.析因设计的方差分析 B.成组设计资料的t检验 C.单因素四水平设计资料的方差分析 D.交叉设计资料的方差分析 15.某地在钩虫病普查中,对粪检阳性者与阴性者各随机抽查10例,测定其血红蛋白量,为了解钩虫粪检阳性者与阴性者的血红蛋白量之间的差别是否有显著性意义.首先需判定此资料取自什么试验设计类型( ).A.配伍组设计B.成组设计C.配对设计D.交叉设计 16.开展一项科学研究,何时开始运用统计学知识？ A.有了试验数据之后 B.有了试验设计之后 C.从最初的试验设计开始 D.从计算机算出结果开始 17.有两种治疗某病的方法,为了比较这两种方法的疗效,需要将该病患者100人分配到甲、乙两治疗组中去,最佳的分组方法是: A．男性患者进入甲组,女性患者进入乙组. B．甲、乙两治疗组中两性患者人数接近相等. C．完全随机地分成两组. D．先按性别、病情进行配对,再在每对中用随机方法分组. 18.两因素A、B之间有显著性的交互作用,意味着: A．因素A的作用随因素B的作用增强而增强. B．因素A的作用随因素B的作用增强而减弱. C．一个因素各水平对试验结果的影响随另一个因素水平的改变而改变. D．一个因素各水平对试验结果的影响不随另一个因素水平的改变而改变. 19.从事一项医学研究,何时开始运用统计学知识？ A.试验结束之后 B.制定试验计划时 C.发表论文前 D.申报成果前 20.许多人习惯用单因素设计取代多因素设计,这样做在什么情况下易得出错误的结论？ A.样本含量较小时 B.实验者操作不太熟练时 C.因素之间独立时 D.因素之间有交互作用时 21.某研究者对所研究的问题缺乏了解,盲目开展实验,当实验过程(或结果)中出现异常现象时,他们常常: A.不能合理处置 B.胸有成竹 C.重做实验 D.用统计方法弥补