i3型紫外/可见分光光度计仪器使用说明书
济南海能仪器有限公司
目录
第一章仪器的应用领域．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 第二章仪器的工作环境．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 第三章仪器的技术参数．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 第四章仪器的工作原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1、琅伯-比尔定律．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
2、琅伯-比尔定律在实用过程中的可靠性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 第五章仪器的外部结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
1、主机外表面图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
2、操作面板图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7 第六章内容介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
一、仪器功能简介（结构图）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
二、仪器开机和使用之前的注意事项．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
三、仪器开启和自检．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
四、光度测量功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
五、定量测量（含标准曲线功能）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
六、系数法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
七、系统设定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 20 第七章仪器的日常维护与保养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 23 第八章常见问题判断与检修．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 24 第九章常见问题解答．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 27
第一章仪器的应用领域
i3型紫外可见分光光度计，因波长范围是:200-1000nm的连续光谱，所以能在紫外、可见、近红外光谱区域对样品物质作定性和定量分析。此系列仪器，结构简单、稳定可靠、读数准确，广泛应用于高校基础教学、医疗卫生、临床检验、石油化工、环境保护、冶金和电力等领域，是理化实验室常用的分析类仪器。
第二章仪器的工作环境
1、仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃～35℃，相对湿度不超过85%。
2、使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。
3、在测量过程中，尽量避免强光照射。
4、空调和电风扇尽量不要直接对着仪器吹，避免影响仪器内部的热平衡，从而影响测量结果。
5、远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备，以免受干扰。
6、供给仪器的电源电压为AC220V±22V或AC110V±11V，频率为50Hz或60Hz,并装有良好的接地线，建议使用1000W以上的电子交流稳压器或交流稳压器，以加强仪器的抗干扰性能。
7、尽量不要在具有腐蚀性气体的环境中长期使用仪器，不利于仪器的保养。
8、放置仪器的房间内应保持洁净，仪器外表面也应经常保持清洁。
第三章仪器的技术参数
产品型号i3
波长范围190-1000nm
光谱带宽2nm
波长准确度±1nm
波长重复性0.3nm
光度准确度±0.5%T
光度重复性0.2%T
稳定性0.001A/h
杂散光≤0.05%T
数据输出USB口
打印输出并行口
显示系统128*64位液晶显示器
光源进口氘灯，钨灯
光度显示范围0-200%T、-0.3-3A、0-9999C
外形尺寸420*300*160mm
第四章仪器的工作原理
1、琅伯-比尔定律
分光光度计的工作原理主要是基于琅伯-比尔定律，18世纪初，琅伯在前人的基础上，进一步研究了物质对光的吸收与物质厚度的关系，并于1760年指出：如果溶液的浓度一定，则光对物质的吸收程度与它通过的溶液厚度成正比，这就是琅伯定律，其数学表达式为：
A=lgI。/I=K。b
式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；b为液层厚度（即光程）；K。为比例常数。
1852年，比尔研究了各种无机盐的水溶液对红光的吸收后指出：光的吸收和光所遇到的吸光度的数量有关；如果吸光物质于不吸光的溶剂中，则吸光度和吸光物质的浓度成正比，这就是比尔定律，其数学表达式为：
A=lgI。/I=K1C
式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；K1为比例常数。将琅伯定律和比尔定律结合起来，则为琅伯-比尔定律，公式如下：
A=lgI。/I=K2bC
式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；b为液层厚度（即光程）；K2为比例常数。
比尔定律认为：当一束平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比，这就是琅伯-比尔定律的真正物理意义，它是光度分析中定量分析的最基础、最根本的依据，也是紫外可见分光光度计的基本原理。
2、琅伯-比尔定律在实用过程中的可靠性
琅伯-比尔定律假设的分析条件与实际的分析条件有偏离，因此在使用中就会出现可靠性的问题。在琅伯-比尔定律的推导中，至少有三个假设是与实际不相符的：第一：假设采用的是单色光；第二：入射光是平行光；第三：吸光粒子的行为相互无关，而且不论其数量和种类如何都是如此。此外，样品的处理、测量的光程、杂散光的影响、噪声的影响、光谱带宽的影响、化学因素的影响以及其他因素的影响都会使定律发生偏离。
A、非单色光
在比尔定律的推导过程中，都是采用单色光，而实际中不可能是真正的单色光，即使是选用仪器上设置的最小光谱带宽也是如此，非单色光的谱带宽度与使用仪器的光谱带宽有关，所用的光谱带宽越大，非单色光的谱带宽度就越大，光谱纯度就越差，由于实际的非单色光与假设的单色光不符，就产生了琅伯-比尔定律的偏差。
B、非平行光
假设入射到样品上的光是真正的平行光，这在实际中也是不可能。不管在何种情况下，入射到样品上的光，总是有一个孔径角。这与假设入射到样品上的光是平行光不符，也产生了琅伯-比尔定律的误差（如图4.1为通过比色皿的实际光路）。
图4.1 通过比色皿的实际光路
C、吸光物质成分之间的相互作用
在琅伯-比尔定律的推导中，假设所有的吸光粒子（分子或离子）的行为都是相互无关的，但是，这种情况只有在稀溶液（浓度≤0.01mol/L）中才存在。因为在浓度增大时，往往产生某些附加效应，如聚焦、聚合或缔合作用、水解以及络合物配位数的改变等，这样就影响到物质的吸光效应。吸光粒子之间的相互作用必将改变吸光成分或被激发的成分，或改变电荷分布，从而改变对所吸收的入射光能量的要求，导致吸收峰的位置、形状和高度随着浓度的增加而改变。
D、浓度对琅伯-比尔定律的影响
琅伯-比尔定律所描述的物质对光的吸收值（吸光度A）、光程（b）和物质的浓度（C）成线性关系。但是，这只是在稀溶液时才成立。因为在高浓度时吸收成分之间的平均距离将缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布都会相互受到影响，将改变它们对特定辐射的吸收能力，这种影响的程度取决于物质的浓度，它可使吸光度与浓度之间的线性关系发生偏离。
E、其他因素对琅伯-比尔定律的影响
杂散光、噪声、光谱带宽、化学因素和其他因素都会对琅伯-比尔定律产生影响。
我们在常规的测试中很少考虑到以上因素的影响。
第五章仪器的外部结构1、主机外表面图
2、操作面板图
功能键描述：
用于测量模式（T，A，C，F）的切换
用于系统参数设定显示屏
SET MOD E
用于波长设置
校空白键，用于调0.000 Abs 和100.0 %T
用于打印测试结果及数据删除
上键，选择向上移动
下键，选择向下移动
返回上级菜单和停止键
确认键，用于数据和菜单的确认
GOTO λ
ZERO
PRINT CLEAR
ESC STOP ENTER START
第六章内容介绍
本章将详细为您讲解本系列仪器具体的操作。本章有以下内容：
一、仪器开机和使用之前的注意事项
确定仪器的使用环境以及对仪器能否正常使用的判定。二、仪器开启和自检
详细说明仪器开启和自检的过程。
三、光度测量功能
详细说明光度测量功能的操作使用步骤和方法。
四、定量测量（含标准曲线功能）
详细说明定量测量中标准曲线法的操作使用步骤和方法。五、系数法
详细说明定量测量中系数法的操作使用步骤和方法。
六、浓度单位选择
详细说明浓度单位的选择方法。
七．系统设定
详细介绍仪器的波长校正、灯源的开关、暗电流校正等
一、仪器开机和使用之前的注意事项
1.1、确认仪器的使用环境是否符合仪器要求的使用环境（参考第二章）。
1.2、仪器在连接电源时，应检查电源电压是否正常，接地线是否可靠，在得到确认后方可接通电源使用。
1.3、在开机之前，需先确认仪器样品室内是否有物品挡在光路上，样品架是否定位好（一般是移动过样品架后需要注意的）。
1.4、仪器的预热以及判定仪器是否能正常使用
1.4.1、接通电源后，最好预热半个小时后使用，这样确保读出的数据更可靠。
1.4.2、若是新仪器，预热半个小时后，在T或A状态下观察仪器是否稳定，若稳定可正常使用。一般在T（A）状态下出现99.9（0.001）、100.0（0.000）、100.1（-0.001）来回跳动或小幅度的末位数字连续跳动，属于正常现象，因为此款仪器显示的是真值，灵敏度相对较高。
1.4.3、若仪器出现大幅度跳动，须与厂家取得联系，确定原因或解决问题后，方可正常使用。
1.4.4、若仪器长期未用，预热时间应相对长一些，同时在使用前，应观察其稳定性，要求与上述新仪器一样。
1.4.5、仪器使用前应对所用的比色皿进行配对处理，因为它能直接影响到您的测试结果。公司所标配的原装比色皿都是经过配对测试的，一般差值应控制在0.2%T以内。比色皿的透光表面，不能有指印或未洗净的残留痕迹。
1.4.6、注意待测溶液的浓度是否在仪器的测量范围内，建议将溶液配制成吸光度在0.09A～0.9A范围内，因为这样测出的数据更准确。
二、开启和自检
2.1仪器开启
用电源线连接上电源，打开仪器开关，仪器开机后进入系统自检过程。
2.2 系统自检
在自检状态，仪器会自动对滤色片、灯源切换、检测器、氘灯、钨灯、波长校正、系统参数和暗电流进行检测。
★注意：“灯切换”和“氘灯”这两个选项只在i3紫外可见分光光度计系列仪器
中支持，i2可见分光光度计系列仪器中没有这两项功能。系统自检检测项目界面（如图2.1）。
仪器使用说明书
图2.1 系统自检界面
2.2.1 系统自检错误
如果某一项自检出错，仪器会自动鸣叫报警，同时显示错误项，用户可按任意键跳过，继续自检下一项。
如：若暗电流太大，超出限定范围，仪器在自检到此项时，便不能通过，后面出现×号。此时可按任意键跳过，系统将继续自检下一项（如图2.2）。
图2.2 系统自检时“暗电流”出现错误
自检不过时应主动和厂家取得联系，或根据第八章内容进行故障判断和排除。
2.3 系统预热
仪器开机后，因电器件需要预热一定的时间后方可达到稳定状态；另外氘灯周围环境也需要一定时间方能达到热平衡，所以仪器需要预热约20分钟后，方可正常使用。
自检结束后，仪器进入预热状态，预热时间为20分钟，预热结束后仪器会自动检测暗电流一次。预热时可以按任意键跳过（如图2.3）。
图2.3 系统预热
2.4进入系统主菜单
仪器自检结束后进入主界面（如图2.4）。
图2.4 系统主界面
按
键可以在T, A, C, F 间自由转换，分别实现透过率测试，吸光度测试，标准曲线和系数法等功能。
三、透过率测试
在此功能下，您可进行固定波长下的透过率测量，也可以将测量结果打印输出。 3.1设定工作波长
在系统主界面下，系统的默认功能选项为透过率测试，此时直接按 键可以进入波长设定界面（如图3.1）。
图3.1 波长设定
用 或 键来改变波长值，每按一次该键则屏幕上的波长值相应增加或减0.1nm ， 按 键确认。
提示：可以长按此二键，则数字会快速变化，直至到您所需的波长值为止，按 键确认。波长设置
完成后自动返回上级界面。
3.2调0.000A/100.0%T
按 键对当前工作波长下的空白样品进行调100.0%T 。
★注意：在调100.0%T 之前记得将空白样品拉（推）入光路中，否则调100.0%T 的结果
不是空白液的100.0%T ，使得测量结果不正确。
校100.0%T 完成后，把待测样品拉（推）入光路，此时屏幕上显示的即为该样品的透过率值。如需进行数据记录，则可按如下步骤进行。 3.3多样品测量
GOTO λ ZERO MODE ENTER ENTER
把空白样品拉（推）如光路，按
键进入数据记录界面，进入该界面后系统自动校空白。把待测样品拉（推）入光路，按 键，则系统自动记录该次测量结果并显示在屏幕上。如需测试其他样品，则重复上述步骤即可。（如图3.2）。
图3.2 测量步骤
★注意：每一屏只可显示5行数据，其余数据可通过上下键 或 进行翻页显示。
3.4数据打印与清除
数据存储区最多可存储200组数据。如果您想打印或清除已测量数据，可在测量结果显示界面下，按 键，进入打印或删除选择界面（如图3.3示）。用上下键选择对应的
操作即可。若因误操作进入此界面或不想删除数据可按 键返回上级界面，或选定“取
消”后按 键返回上级界面。
图3.3 数据打印/删除
★注意：如果系统未连接打印机，则选择“打印数据”后系统会报警返回。如果连接打印机且正常打印
ENTER START
E S C ENTER ENTER
START
CLEAR
CLEAR
后，系统会将所有数据全部清除。
四、吸光度测试
按 键切换到A 模式（如图4.1所示）。
吸光度测试的所有操作与透过率测试相同，可参考上面所述。
图4.1 进入吸光度测试界面 五．标准曲线法
标准曲线法是用已知浓度的标准样品，建立标准曲线，然后用所建立的标准曲线来测量 未知样品浓度的一种定量测试方法。本节将详细介绍新建标准曲线的步骤、用标准曲线测试待测样品浓度、打开已存储的标准曲线和删除标准曲线的步骤等。 5.1 进入标准曲线法主界面（C 模式）
按 键直至光标切换到C 上即进入标准曲线模式（如图5.1）。在此功能下，您
可以利用标准样品建立标准曲线，并可用所建标准曲线对未知样品浓度进行测试；
图5.1 进入标准曲线法主界面
5.2标准曲线法功能框架图（如图5.2）
MODE
MODE MODE MODE
图5.2标准曲线法功能框架图
5.3 新建曲线
在标准曲线法主界面下，用上下键
和 ，选定“新建曲线”（新建曲线左边圆圈内有圆点，表示选定），按 键进入建立标准曲线步骤。根据仪器界面的提示逐
步操作（如图5.3）。
图5.3 新建标准曲线具体操作步骤图
第一步：选定“新建曲线”后，按 键，进入标准样品个数设定界面。根据您自己的需要，按上下键 和 选择标准样品个数（如图5.4）
，按 键确认。
图5.4样品个数设定界面
ENTER
START
ENTER
标准曲线法
新建曲线
打开曲线
删除曲线
选择曲线 显示曲线信息 数据记录测量 设定工作波长 数据打印 数据删除
输入标样个数 输入标样浓度 显示曲线信息 数据记录测量 设定工作波长 数据打印 数据删除
选择曲线 确认删除曲线 删除曲线
建立曲线
ENTER ENTER ENTER ENTER
ENTER
★注意：1）标样数的设定范围为：1 – 12。
2）请在此界面下进行波长设定，设定方法见上一节图3.1. 第二步：标准样品浓度设定
当样品个数输入完成后自动进入图5.5所示界面。
图5.5 1号样品浓度设定界面
1）此时请将参比样拉入光路，然后按
键校空白。 2）根据提示将1号标样拉入光路，并输入1号标准样品的浓度。输入方法如下： 光标最初停留在第一位上闪烁，此时按上、下
键，则该位数字会在0-9和小数点间变化，选择您需要的数字并按
键确认，则光标会自动移动到第二位上。用同样的方法输入第二位及以后各位的数字。当输入完最后一位数字后按
键，则系统会自动记录其吸光度值并转入2号标样浓度输入界面，如图5.6所示。
图5.6 2号样品浓度设定界面
3）此时将2号标样拉入光路，并参照1号标样的输入方法输入2号标样的浓度。 4）重复上述步骤，直至最后一个标样的浓度输入完成。
第三步：绘制标准曲线
当最后一个标样的浓度输入完成并按 键确认后，系统会自动显示所建立的标准曲
线与曲线方程和相关系数R 。（如图5.7所示）
图5.7 仪器绘制出的标准曲线界面
★ 注意：
1）
浓度的设定范围为：0 – 9999.9，否则视为无效，需要重新输入。标准样品一
ENTER ZERO
ENTER ENTER
般按照浓度由低向高依次放入光路中，即1号样品往往是配制的标准样品中浓度最低的。
2）
仪器在曲线建立过程中，若系统认为采入的数据有误（有可能是操作错误，也有可能是溶液配制有问题），则会蜂鸣3声后返回主界面，且标准曲线无法正常绘出。
第四步：进入浓度测试界面
在标准曲线显示界面下，按
键即可进入浓度测试界面。如图5.8所示
图 5.8 进入浓度测试界面
第五步：未知样浓度测定
将参比溶液拉（推）入光路中，调0.000A/100.0%，再将未知浓度的样品拉（推）入光
路中，按 键，显示器上便可显示相应样品的浓度（如图5.8）。重复上述步骤，可以
完成多个样品的浓度测试。
第六步：数据的打印或删除
系统最多可以存储200组测试数据。若按 键即可进入打印选择界面（如图5.9），
如果仪器连接了打印机，可以选择“打印数据”，然后按
进行数据打印；如果系统未连接打印机且用户仅想清除存储数据，可直接选择“删除数据”后按
键确认。如果用户进入此界面后不想进行任何操作，可以直接选择“取消”按
键退出，也可以直接按
键退出。 ★注意：打印数据后，系统内的存储数据将被清除。
图5.9 进入打印选择界面
5.4打开曲线
所有建立的曲线都会被自动存储在系统里并按顺序自动编号。下次使用时可以直接调出
曲线进行测试，无需重复建立。当您想调用曲线时，在标准曲线法主界面下，用上下键
START START PRINT ENTER ESC START
ENTER ENTER
选定“打开曲线”（打开曲线左边圆圈内有圆点表示选定），按
键即可
进入已建曲线选择界面。（如图
5.10）。
图5.10进入已建曲线选择主界面
系统共可存储50条标准曲线。进入曲线选择界面后，用上下键 和 将光
标移动到您需要的曲线方程上，按 键确认，则系统会显示出曲线。再按
键即
可用所选定的曲线对未知浓度样品进行测试（如图5.11）。具体操作步骤同前所述。
图5.11选择曲线和测量界面
5.5 删除曲线
此功能用来删除已保存的曲线，若要删除某条曲线，在标准曲线法主界面下，用上下键
和 ，选定“删除曲线”，按 键进入删除曲线选择界面。用上下键 和 选定您要删除的曲线方程，按 键进入删除再确认界面。选择“是” 并按 键后曲线方程即被删除，同时返回上级菜单。如不想删除曲线，可选择“否”后按 键返回上级菜单，也可直接按 键返回。（如图5.12）。
ENTER
START
ENTER ENTER START
ENTER
ENTER E S C ENTER
ENTER ENTER
ENTER
ENTER
图5.12 删除曲线步骤
六、 系数法（F 模式）
系数法是工作曲线法的简单应用，如果用户已知曲线方程，可以直接将方程的系数K 和B 输入仪器，并利用该方程进行未知浓度样品的测试。
6.1 进入系数法:
在定量测量主界面下，按
键即可进入系数法测量主界面（如图6.1）。
图6.1 进入系数法（F
模式）界面
6.2 设定系数K
用上下键 和 将光标移动到“曲线参数K ”上，按 键确认，系统即进入K 设定界面。K 值的设定方法同前面建立标准曲线中浓度的输入方法相同，在此不再赘述。需要指出的是在输入K 值前，首先要对K 值的正负进行选择。（如图6.2）
当K 值的最后一位输入完成后，系统自动返回到上一级界面。
图6.2 进入K 设置界面
6.3 设定系数B
用上下键 和 将光标移动到“曲线参数B ”上，按 键确认，系统即进入参数B 设定界面。方法同K 值设定。（图6.3）
图6.3 进入参数B 设定界面
★注意：系数K 和B 的设定范围为：-9999.9 – 9999.9，否则系统会蜂鸣三声提示输入
无效，您需要重新输入。
ENTER MODE
MODE ENTER
ENTER ENTER
722N可见分光光度计操作规程 （IATF16949-2016/ISO9001-2015） 一、使用步骤 1、连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能； 2、接通电源，使仪器预热20分钟。（不包括仪器自检时间）； 3、用
2、仪器使用完毕应盖好防尘罩。可在样品室及光源室内放置硅胶袋防潮，但开机时一定要取出； 3、长期不用仪器时，尤其要注意环境的温度、湿度，定期更换硅胶。 4、工作条件：环境温度：5~35℃；相对湿度：不大于85%RH； 三、期间核查 1、波长范围检查：主机正常开机并预热30分钟，模式为“透射比”档， 转动波长旋钮至波长范围两端按100%T健,应能正常调节100%T,开样品室盖时按0%T应能正常调节0%T。 2、透射比重复性检查：将主机波长设定至550nm，仪器调0%T，调100%T。 置入透射比为40%T左右并在附近平坦吸收的样品(例如:中性滤光片)连测三次检查显示值,其最大差值应在±0.3%T内。 3、定点噪声检查：设定波长在550nm，仪器调0%T，调100%T，设定标尺至“吸光度”，观察显示窗内数字跳动在0.002A范围内。 4、波长重复性检查：设置标尺为“透射比”，采用分光光度计通用的镨钕滤光片作样品。以空气为空白，仪器调0%T，调100%T，将样品置入光路，读出在520~540nm波长范围内与样品标准峰值相对应的波长值。重复三次,波长读数误差不应大于±1nm。 5、核查周期：半年一次 四、设备维护 1、为确保仪器稳定工作，电压波动较大的地方，建议用户配备220V稳压器； 2、仪器接地要良好； 3、干燥剂应保持其干燥性，发现变色立即更换或活化后再用；
紫外可见分光光度计常见故障的排除 光源部分： （1）故障：钨灯不亮； 原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率最高）； 检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。 处置：更换新钨灯； （2）故障：钨灯不亮； 原因：没有点灯电压； 检查：保险丝被熔断； 处置：更换保险丝，（如更换后再次烧断则要检查供电电路）； （3）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯寿命到期（此种原因几率最高）； 检查：灯丝电压、阳极电压均有，灯丝也可能未断（可看到灯丝发红）； 处置：更换氘灯； （4）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯起辉电路故障； 检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，如果灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后依然如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的几率最大。 处置：需要专业人士修理； 二．信号部分： （1）故障：没有任何检测信号输出； 原因：没有任何光束照射到样品室内；
检查：将波长设定为530nm，狭缝尽量开到最宽档位，在黑暗的环境下用一张白纸放在样品室光窗出口处，观察白纸上有无绿光斑影像； 处置：检查光源镜是否转到位？双光束仪器的切光电机是否转动了（耳朵可以听见电机转动的声音）？ （2）故障：样品室内无任何物品的情况下，全波长范围内基线噪声大； 原因：光源镜位置不正确、石英窗表面被溅射上样品； 检查：观察光源是否照射到入射狭缝的中央？石英窗上有无污染物？ 处置：重新调整光源镜的位置，用乙醇清洗石英窗； （3）故障：样品室内无任何物品的情况下，仅仅是紫外区的基线噪声大； 原因：氘灯老化、光学系统的反光镜表面劣化、滤光片出现结晶物； 检查：可见区的基线较为平坦，断电后打开仪器的单色器及上盖，肉眼可以观察到光栅、反光镜表面有一层白色雾状物覆盖在上面；如果光学系统正常，最大的可能是氘灯老化，可以通过能量检查或更换新灯方法加以判断； 处置：更换氘灯、用火棉胶粘取镜面上的污物或用研磨膏研磨滤光片（注意：此种技巧需要有一定维修经验者来实施）； （4）故障：样品室放入空白后做基线记忆，噪声较大，紫外区尤甚； 原因：比色皿表面或内壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白样品对紫外光谱的吸收太强烈，使放大器超出了校正范围； 检查：将波长设定为250nm，先在不放任何物品的状态下调零，然后将空比色皿插入样品道一侧，此时吸光值应小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干净或使用了玻璃比色皿；同样方法也可判断空白溶液的吸光值大小； 处置：清洗比色皿，更换空白溶液； （5）故障：吸光值结果出现负值（最常见）； 原因：没做空白记忆、样品的吸光值小于空白参比液； 检查：将参比液与样品液调换位置便知； 处置：做空白记忆、调换参比液或用参比液配置样品溶液； （6）故障：样品信号重现性不良；
Lambda 750 紫外/可見/近紅外分光光度計使用說明 Lambda 750資料獲取（Data Collection）頁是一個圖形化的設置介面，但需要設置的參數是類似的，下面就以掃描方法設置為例來看看每一個專案的情況。 以掃描方法為例，資料獲取頁面讓您設置掃描的開始和結束範圍，縱座標類型和狹縫寬度。其他可以設置的參數包括掃描速度（Scan speed）、資料間隔（Data interval）、迴圈次數（Number of cycles）等。 設置掃描範圍時，開始（Start）值必須大於結束（End）值。不然的話數值將被互換。 縱座標類型從下拉清單中選擇。可選擇的縱座標類型（Ordinate mode）有： A ——Absorbance，吸光度 %T ——Transmittance，透過率
E1 ——樣品光路能量值 E2 ——參考光路能量值 %R ——Reflectance，反射率 狹縫寬度（Slit width）的選擇： 狹縫寬度在紫外／可見範圍內以nm表示， 通常選擇狹縫寬度為所測量的譜帶寬度的五分之一到十分之一之間，設置寬的狹縫可以 增加能量，提高信噪比，但同時會降低解析度和準確度，並且可能引起譜帶增寬；設置一個較小的狹縫可以增加解析度和光度計的準確度，但會降低信噪比。 掃描速度（Scan speed）——掃描速度（nm / min）。從下拉清單中選擇需要的掃描速度，慢掃描速度適用於窄峰，並且可以改善信噪比，使用較快地掃描速度適用於寬峰。如果選擇快速掃描，資料間隔會被自動設定。 資料間隔（Data interval）——採樣的數據間隔（nm） 迴圈次數（Number of cycles）——迴圈（重複）掃描的次數。 最快迴圈（Cycle as fast as possible）——儘快地迴圈，一個迴圈結束就立即開始下一個。 迴圈時間（Cycle time）——自行輸入一個迴圈時間，並選擇時間單位。迴圈 時間必須比最小迴圈時間長。 燈切換（Lamp change）——切換使用氘燈或鎢燈進行測量的波長位置（nm）。 如果您關心的光譜峰正好位於默認的切換波長（326 nm）附近，編輯改變該波長缺
实训二紫外可见分光光度计的校正 一、实训目的 1、了解紫外-可见分光光度的基本构造。 2、熟悉紫外可见分光光度计的操作技术。 3、熟悉校正波长和测量吸收值精度的原理和方法。 二、仪器与试剂 1、仪器：紫外-可见分光光度计，石英吸收池（1cm），容量瓶（1000m1），烧杯。 2、试剂：0.0600g→1000ml的K2Cr2O7的硫酸标准溶液（0.005mol/L），NaI溶液（10g/L），NaNO2溶液（50g/L）。 三、实训原理 紫外-可见分光光度计是单光束手工操作仪器，备有钨灯及氢灯两种光源，可用于可见及紫外光区。它是具有色散能力较高的单色器，狭缝可调，可得到较纯的单色光，适用于定性鉴别和定量分析。 新仪器启用前或仪器修理后或长期使用后均需对仪器的性能进行检定。仪器的性能主要是波长准确度与重现性、单色器的分辨能力、吸光度的准确性和重现性及杂散光等。 四、实训操作 1、吸收池配对性试验 每次测定前，应先用蒸馏水做吸收池配对性试验。两个吸收池透光率T相差应＜0.5％。 2、波长准确性与重现性 校验波长是否准确，可用谱线校正法。在吸收池中置一白纸挡住光路，转动波长至486nm附近，遮光观察白纸上蓝色斑。轻微移动波长，至使此蓝色光斑最亮时止。根据调整的波长范围观察所得到的相应颜色，并进行对比核对，判断波长的准确性。 3、吸收度的准确性与透光率重现性 在紫外-分光光度计中用作读取透光率的电位器的精度可达到0.2％，但是，由于其他原因，例如电压变化等，实际测得的透光率误差大于0.2％。一般要求透光率的精度、稳定性和重现性不超过0.5％。透光率的准确性可用已知吸光系数的物质核对，常用的是重铬酸钾。取在120℃干燥至恒重的基准K2Cr2O7约60mg，精密称定，用H2S04溶液(0.005mol／L)溶解并稀释至1000ml，摇匀。按下表规定的吸收峰与谷波长处测定。 将测得的吸光度，计算出其吸光系数，取平均值与表中规定值核对，如相对偏差在土1％以内，则透光率准确性好。K Cr O的H S0溶液（0.005mol／L)的E cm1% 透光率重现性可结合透光率准确性实验同时进行，即在固定波长、溶液浓度以及狭
721可见分光光度计使用说明书 目次 1 仪器的主要用途．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（1） 2 仪器的工作环境．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（1） 3 仪器的主要技术指标及规格．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（1） 4 仪器的工作原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（1） 5 仪器的光学系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（2） 6 仪器的电子系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（3）6.1 放大器线路简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（3）6.2 放大器稳压电源线路简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（4） 6.3 钨灯稳压电源线路简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（4） 7 仪器的结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（9） 8 仪器的安装使用与维护．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（14） 9 仪器的调校与故障修理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（15）9.1 仪器的调校．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（15） 9.2 仪器使用问答．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（17） 10 仪器的成套性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（23） 11 仪器的保管及免费修理期限．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（23） 产品执行标准的编号：Q／YXLZ41－2002 I
752紫外可见分光光度计 一、仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。 τ=I/Io log I/Io=KCL A= KCL 从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。 二、仪器的安装、使用、安装 1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。 2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。 使用：仪器使用前需开机预热30min。 本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F 1SD 2 ▽／0％ 3?／100％ 4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。 A——吸光度（Absorbance） T——透射比（Trans） C——浓度（conc） F——斜率（Factor） (2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置） 5SD键：该键具有2个功能 a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。 b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。 6 ▽／0％键：该键具有2个功能 a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。 b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。而按键开始自动减1。 7 ?／100％键；该键具有2个功能 a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。 b）上升键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动加1，如果按住本键不放，自动加1会加快速度，如果F值为1999后，再按键它会自动变为0，再往键开始自动加l。 例如：设置斜率为1500。 方法一 T）按A／τ／C／F键切换到F状态。 b）如果当前F值为1000，则按?／100%键，直到F值为1500。 C）再按SD键，表示当前的F值为1500，然后自动回到C状态，假如所测的A值为0．234，则此时显示C值为0351。
722型可见光分光光度计的操作编制：刘文玖 1适用范围 本规程适用于722型可见光分光光度计的操作。 2操作步骤 检查仪器电源接线牢固，接地良好，将仪器灵敏度钮置于“1”（放大倍数小），选择开关置于“T”。 插上电源插头，开启电源开关，指示灯亮。调节波长手轮至所需波长，调节T ＝100％钮至显示投射比T＝（70～100）％。仪器在此状态下预热15分钟（说明书是20分钟），显示数字稳定后即可进行下一项工作。 打开样品室盖（光门自动关闭，光电管不受光），调节T＝0％钮，使数字显示为“00.0”。 盖上样品室盖，将参比池推入光路，调节T＝100％钮，使数字显示“100.0”，增大灵敏度档，再调整0％和100％。 重复开样品室盖调T＝0％和盖上样品室盖调T＝100％的操作，至仪器显示稳定。 2，6 将选择开关置于“A”，调节吸光度调零钮，使数字显示为“0.000”，将样品池推入光路，数字显示值即为吸光度值。 直接读出被测物浓度的操作方法：装一份标准溶液于吸收池中，将选择开关置于“C”，将标准溶液推入光路，调节浓度钮，使数字显为标准液浓度值，将样品推入光路，数字显示即为样品的浓度值。 读完数以后应立即打开样品室盖。 测量完毕，取出吸收池，洗净。各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，切断电源。 3、注意事项 各旋钮、拉杆要按规定的方向平稳的移动，不可用力过猛。 样品室要保持干燥，如将比色液洒落其中，应及时清理干净。 不得用手接触吸收池的透光面，只能用镜头纸或脱脂棉轻轻擦拭，避免硬的物
品划伤透光面。 不同仪器的吸收池不要混用，以免引起测定误差。 为延长光源使用期限，要尽量减少开关次数，在短时间的工作间隔内可以不关灯。刚关闭的光源灯不能立即重新开启，要等其冷却到室温后再开。仪器连续使用时间不得超过3个小时，若需长时间使用，最好间隙30分钟。更换光源时，不要用手接触灯的窗口，以免再窗口玻璃上留下痕迹。 单色器不可随意拆动。注意定期更换内装的干燥剂。 吸收池被有色物质污染时，用3mol/L的盐酸和等体积的乙醇混合液洗涤吸收池，再用自来水、蒸馏水冲洗。 检测器要保持干燥，光电元件必须避免不必要的曝光，在测定过程中要随时关闭光闸，光电池在不用时要遮断光源，整台仪器避免在阳光下照射。 十四.分光光度计维护保养规程 1.保持室内干燥。 2.保持外表洁净 3.干燥剂有一半变白时及时更换。 4.不能放在阳光直射的地方。 5.不得长时间闭合试样室盖，以延长光电管寿命。 6.大幅度改变测试波长时，在调整0和100后稍待片刻，当数字稳定后重新调整0 和100后即可工作。 7.不能随意挪动位置，以保证测试的准确性。
紫外可见分光光度计 一．基本简介 紫外可见分光光度计简介1852年，比尔(Beer)参考了布给尔(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所发表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液层厚度相等时，颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例，从而奠定了分光光度法的理论基础，这就是著名的比尔朗伯定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人将此理论应用于定量分析化学领域，并且设计了第一台比色计。到1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。此后，紫外可见分光光度计经不断改进，又出现自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，使光度法的灵敏度和准确度也不断提高，其应用范围也不断扩大。 [1]从仪器理论上讲，各种紫外可见分光光度计，都是根据比耳定律设计的；而比耳定律研究的是在平行光、单色光的条件下，物质对光的吸收。但是，紫外可见分光光度计的单色器不可能得到真正的单色光。并且，单色器系统不同，它产生的单色光的纯度（光谱带宽）也不同，并且光通过物质时，也不可能是真正的平行光。因此，严格地说，实际工作中，任何紫外可见分光光度计，都不可能真正满足比耳定律。所以，紫外可见分光光度计都是针对近似平行光、近似单色光的条件设计的。所以，就看谁设计、制造仪器最能满足或接近比耳定律（或产生的比耳定律的偏离最小），谁的仪器到了使用者手里，由于非平行光或非单色光产生的分析误差最小，谁的仪器就最好（当然还有杂散光、噪声、稳定性等要求）。这就是从仪器学理论，去看紫外可见分光光度计的设计、制造误差的最根本、最本质的问题；也是使用者从仪器学理论去看紫外可见分光光度计的分析误差的最根本、最本质的问题。 二．工作原理 吸收光谱 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
722可见分光光度计 使 用 说 明 书 精密科学仪器
目录 第一章设计原理与主要用途 2 第二章仪器的工作环境 2 第三章仪器的安装 3 第四章主要技术指标及规格 3 第五章仪器视图与构件名称 3 第六章仪器使用操作说明4 第七章仪器的应用问题解决方案11 附录A 仪器验收13
第一章 设计原理与主要用途 一、原理 分光光度计的基本原理是：物质在光的照射下会产生对光吸收的效 应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同物质都具有其 各自的吸收光谱。因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就 会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的 比例关系，即符合比耳定律。 0I I T = abc T I I A ===1lg lg 0 其中：T —透射比 A —吸光度 I 0—入射光强度 a —吸收系数 I —透射光强度 b —溶液的光程长度 c —溶液的浓度 由上式可以看出当吸收系数a 与光程长度b 不变时，吸光度与溶液 浓度成正比。本仪器正是依据这一原理而设计的。 二、用途 本仪器可供物理、化学、医学、生物学等学科进行科研或供化学工 业、食品工业、制药工业、冶金工业、临床生化、环境保护部门进 行各种物质的定性定量分析。 第二章 仪器的工作环境 一、仪器的运输和存储 本仪器在运输过程中必须防雨淋、曝晒及剧烈冲击。 本仪器存储时应包装完好的存储于有遮蔽的仓库，周围无酸性气体、 碱及其它有害物质。仓库的环境温度在-25℃～40℃之间，相对湿度 不大于85%。 二、仪器的使用环境 避开直射的场所和有较大气流流动的场所。 请不要安放在有腐蚀性气体及灰尘多的场所。 应避开有强烈振动和持续振动的场所。 应远离发出磁场、电场和高频电磁波的电气装置。 仪器应放在可载重的稳定水平台面上，仪器背部距墙壁至少15cm 以 上，以保持有效的通风散热。 避开高温高湿环境 使用温度： 室温 5℃～40℃
721可见分光光度计使用方法 一、开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 二、波长调整 转动波长旋钮，并观察波长显示窗，调整至需要的测试波长。 注意事项：转动测试波长调100%T/0A后，以稳定5分钟后进行测试为好(符合行业标准及质监局检定规程要求)。 三、设置测试模式 按动“功能键”，便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下：*开机默认的测试方式为吸光度方式 四、结果打印(721型无此功能) 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机)。 五、光源切换(适用于752、754、755B型) 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源，所以需要波动光源切换杆来手动的切换光源。建议的光源切换波长为340nm，即200nm-339nm适应氘灯，340nm-1000nm使用卤素灯。 注意事项：如果光源选择不正确，或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 六、比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。适应比色皿一套两只，供紫外光谱区使用，置入样品架时，两只石英比色皿上标记Q或箭头方向要一致。玻璃比色皿一套四只，供可见光谱区使用。 石英比色皿和玻璃比色皿不能混用，更不能和其他不经配对的比色皿混用。用手拿比色皿应握比色皿的磨砂表面，不应该接触比色皿的头光面，即透光面上不能有手印或溶液痕迹，待测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品的测试精度。比色皿在使用完毕后应立即清洗干净。 七、调T零(0%T) 1.在T模式时，将遮光体置入样品架(如图七所示)，合上样品室盖，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键，显示器上显示“00.0”或“-00.0”，便完成调T零，完成调T零后，取出遮光体。 注意事项：1.测试模式应在透射比(T)模式； 2.如果未置入遮光体合上样品室盖，并使其进入光路便无法完成调T零；
UV2600型紫外分光光度计操作规程 一、开机 1.打开仪器电源。 2.打开电脑，点击UV Analyst 进入光谱分析软件。 3.软件将自动搜索仪器端口，点击“联机”，软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式 根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“波长扫描”“时间扫描”“定点测量”“定量测量”“核酸测量”和“蛋白质测量” 【波长扫描】主要用以检测样品对一定范围波长光的吸收情况，以便对样品进行定性测量。 1.点击左侧主功能栏中的“波长扫描”即可进入波长扫描界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以扣除空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 注意：在“基线测量”中所选择的基线必须与参数设置中基线一致！ 【时间扫描】是检测样品在特定波长范围内吸光度（或透过率）随时间的推移而发生变化情况。主要用以检测样品的稳定性或进行化学动力学研究。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以后扣除样品空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 【定点测量】是检测样品在特定波长中的吸光度（或透过率）。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“自动校零”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“测量”，以完成样品的吸光度（或透过率）的测量。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【定量测量】可通过检测标准样品或输入特定的系数建立标准曲线后测量样品的浓度值。
紫外-可见分光光度法标准操作程序 1 简述 紫外-分光光度法是通过被测物质在特定波长处或一定波长长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法的在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰化合物无吸收，则可用本法作检查。物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的。因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200-400nm)或可见光区(400-850nm)产生吸收。通常使用紫外分光光度计的工作波长范围为 190-900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯－比尔（Lambert-beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：Ａ=log1/T=ECL 式中Ａ为吸光度； Ｔ为透光率； Ｅ为吸收系数； Ｃ溶液浓度； Ｌ为光路长度。 如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml），光路长度(L)为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。如溶液的浓度(C)为摩尔浓度(mol/L)，液 层厚度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 2 仪器 紫外-可见分光光度计：主要由光源、单色器，样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。 可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯-为了满足紫外 和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束 分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收
TU-1901/1900操作规程 一、开机 1．1 依次打开打印机、计算机，Windows完全启动后，打开主机电源。 二、仪器初始化 2．1在计算机窗口上双击图标，仪器进行自检，大约需要四分钟。如果自检各项都“”，软件自动进入工作界面，预热半小时后，可以进行测量工作。 三、测量 A：光度测量 参数设置： 单击按钮（上方或左侧），进入光度测量。单击设置光度测量的参数：具体输入： 1.清除以有的波长点，输入要测量的波长值（从长波到短波）添加到测量波长点内； 2.重复测量次数，是否计算平均值，SD，RSD，等要求； 3.选择光度模式（一般为T%或Abs）； 4.单击退出参数设置，进行测量。 校零和测量： 单击,将两个样品池中都放入参比溶液，单击。仪器自动完成校零，校零完成后，取出外池的参比溶液。倒掉取出的参比溶液，放入样品溶液，单击；即可测出样品的Abs 或T%值。 测量完成后，可以随时进行打印或保存。 B：光谱扫描 参数设置： 单击，（上方或左侧）进入光谱扫描。单击，设置光谱扫描参数，具体输入： 1．波长范围（先输长波再输短波）； 2．测光方式（一般为T%或Abs）； 3．扫描速度（一般为中速）； 4．采样间隔（一般为1nm或0.5nm）； 5．显示范围（一般为0--1）。 6．单击退出参数设置。 基线校正： 单击，将两个样品池中都放入参比溶液单击，校零完成后单击存入基线，取出外池的参比溶液。 样品的光谱扫描： 倒掉取出的参比溶液，放入样品单击进行扫描， 当扫描完毕后，单击查看检出图谱的峰、谷相对应的波长值及Abs值。可以根据需要，调整阈值增加或减少检出的峰和谷数量 测量完成后，可以随时进行打印或保存。 C：定量测量 参数设置 单击（上方或左侧），进入定量测量；单击，设置具体参数：
紫外可见分光光度计及其应用 科技论文写作期末作业 西北民族大学生命科学与工程学院 11级生物技术(1)班 符朝方 学号:P112114841 紫外可见分光光度计及其应用 李诗哲 西北民族大学生命科学与工程学院兰州 730100 摘要:紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。下面介绍了紫外分光光度计的原理、结构及其特点，并介绍了它在生物领域的应用及其他方面的应用1引言:紫外可见分光光度计是一类很重要的分析仪器，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理行业，紫外可见分光光度计都获得了日益广泛的应用。 2原理:紫外可见分光光度法 【1】紫外可见分光光度法是根据物质分子对波长为200~760nm的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长的光线能量小，波长短的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了人射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有不同的分子、原子和不同的分
子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的 某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 【2】2.1有机化合物的紫外可见吸收光谱 有机化合物的电子跃迁 与紫外可见吸收光谱有关的电子有三种[[4]，即形成单键的σ电子、形成双键的π电子以及未参与成键的n电子。 跃迁类型有:σ?σ*、n?σ*，π?π*、n?π四种。 饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ?σ*，n?σ*跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区，吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。不饱合机化合物的电子跃迁类型为n?π*，π?π*跃迁，吸收峰一般大于200nm. 2.2有机化合物的吸收带 吸收带(absorption band):在紫外光谱中，吸收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。 (1)R吸收带 (2)K吸收带 (3)B吸收带 (4)E吸收带 2.3无机化合物的紫外可见吸收光谱 无机化合物的UV-Vis光谱吸收光谱主要有:电荷 迁移跃迁及配位场跃迁。 (1)电荷迁移光谱
722可见分光光度计使用说明书 1．仪器的主要用途 722可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的的分析。仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一 2．仪器的工作环境 2．1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃~35℃，相对湿度不超过85%。 2．2使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。 2．3 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。 2．4 电扇不宜直接向仪器吹向，以免影响仪器的正常使用。 2．5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 2．6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2．7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐 蚀气体的场所使用。 3 仪器的主要技术指标及规格 3．1 光学系统：单束光、衍射光栅。 3．2 波长范围：330nm~800nm。 3．3 光源：钨卤素灯12V30W。 3．4 接收元件：光电池。 3．5 波长准确度：≤±2nm。
3．6 波长重复性：1nm。 3．7 光谱带宽：＜6nm。 3．8 杂散光：0.7%τ（在360nm处）。 3．9 透射比测量范围：0.0%τ~100.0%τ。 3．10 吸光度测量范围：0.000A~1.999A。 3．11 浓度直读范围：0000~1999。 3．12 透射比准确度：±1.0%τ。 3．13 透射比重复性：0.5%τ。 3．14 噪声：≤0.3%τ。 3．15 稳定性：亮电流≤0.5%τ/3min， 暗电流≤0.2%τ/3min。 3．16 电源：AC220V±22V，50Hz±1Hz。 3．17 外型尺寸：570mm×400mm×260mm。 3．18 净杂散光测量范围：18 净重：22kg。 4．仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物 质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理--比耳定律。 τ=I/I0 logI0/I=KCL A=KCL
应用 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。 基本原理 分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= kcl 式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 组成 各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 1.光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2．单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。 3.吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。 4、检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。 5、信号显示系统 常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
U-3900分光光度计简易操作说明书 1. 开机 插上电脑、主机电源，打开电脑、主机开关。 2. 打开测试软件，进行自检（自检时不放任何东西，自动进行），自检后主机预热15-20min 再开始测量。 3. 基线校正 将两个比色皿装上空白样放入样品槽中，合上盖子。单击baseline，工作界面出现use1，单击ok，开始扫描，扫描结束出现绿色标示“ready”后即可进行下步操作。 4. 样品最大吸收波长扫描 4.1点击屏幕右侧
4.2 在instrument标签栏data mode选ABS（吸光度）； 在Start/end wavelength根据需要设置起始扫描波长（可在199-1099nm间任意设定）； 在scan speed一栏中设置合适得扫描速度（一般选取中间值，如300nm/min）。 其它默认。 4.3 在monitor标签栏，Y-axis Max和Min可根据实际样品的abs峰值调整，其它默认。
4.4 在processing和Report标签栏，一般取默认设置。 4.5
5. 样品标准曲线的绘制 5.1 配制标准试样（一般5个）。 5.2 点击屏幕右侧
紫外-可见分光光度计操作规程 (TU1810) 1．目的：制订本标准的目的是为规范检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。 2．适用范围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。 3．职责：QC检验员对本标准的实施负责。 4．程序： 4.1 简述 紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。 朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。其常用表达式为，式中为系数： A=ε·ι·C 式中A为吸光度； ε为吸收系数； C为溶液浓度； ι为光路长度。 如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表示。如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，
则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 4.2 仪器 紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。 4.2.1 仪器测量条件选择 1.测量波长的选择 通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收原则，以获得最高的分析灵敏度。而且在λmax附近，吸光度随波长的变化一般较小，波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小，可得到较好的测定精密度。但在测量高浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以保证校正曲线有足够的线性范围。如果λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选用灵敏度低一些的波长进行测量，以减少比耳定律的偏差。 2.适宜吸光度范围的选择 任何光度计都有一定的测量误差，这是由于测量过程中光源的不稳定、读数的不准确或实验条件的偶然变动等因素造成的。由于吸收定律中透射比T与浓度C是负对数的关系，从负对数的关系曲线可以看出，相同的透射比读数误差在不同的浓度范围中，所引起的浓度相对误差不同，当浓度较大或浓度较小时，相对误差都比较大。因此，要选择适宜的吸光度范围进行测量，以降低测定结果的相对误差。 在实际工作中，可通过调节待测溶液的浓度或选用适当厚度的吸收池的方法，使测得的吸光度落在所要求的范围内。 3.仪器狭缝宽度的选择 狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。狭缝宽度过大时，入射光的单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度的方法是：测量吸光度随狭缝宽度的变化。狭缝的宽度在一个范围内，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。因此，在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，即是所欲选取的合适的狭缝宽度。
UV-2600型紫外分光光度计操作指导书 1概况 1.1仪器概况： UV-2600型紫外分光光度计是由日本岛津（Shimadzu ）生产制造，与功能强大的操作软件UVProbe 结合，操作简单方便，且符合SH/T0181方法的测量精度要求。 1.2主要技术参数 1.3使用条件 操作温度：15～35℃ 操作湿度：30%～805% 2仪器结构 仪器由UV-2600型紫外分光光度计和计算机组成。 3操作步骤 3.1 开机 在使用前先确认仪器和计算机的工作电源，检查仪器样品室应无遮挡光路的物品。确认后先开启计算机，然后开启仪器电源。待分光光度计外侧的指示灯显示绿色时，启动电脑桌面上的UVPROBE 程序。 首先从下拉式菜单的仪器项上追加需要的仪器，操作完毕如下图①所示，然后点击上图的连接键②，这样仪器与计算机连接（当然，中间的通讯电缆的连接、通讯口的指定等都是
必须的，此处不再赘述）并开始下示的初始化面。 初始化大约需要5分钟左右，进行一系列的检查和初置，如一切顺利通过就可以开始测定。 3.2 测定 首先选择测定的方式，在主菜单上能发现右图 所示的各键，自左至右 分别为： ①报告生成器：用于制作各种格式的报告。 ②动力学测定方式：一般测定吸收值随时间的变化，通常用于酶反应随时间的变化。 ③光度测定（定量）方式：可进行多波长、单波长、峰高或峰面积定量。校准曲线可使用多点、单点、K 因子等方法。由于具有自定义方程的功能，DNA/蛋白质测定等以前需 ① ② ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩ ⑾ ⑿ ⒀ ⒁
要特殊选购的软件才能进行的工作，使用UVPROBE 可自编程序进行测定。 ④光谱测定方式：可进行紫外可见区的光谱测定。 3.3光谱测定方式 3.3.1参数的设定 点击菜单栏上的键，即可出现如下图所示的选择测定条件的画面： 在此对话框中可选择波长测定的范围、扫描的速度、采样间隔等条件。 点击图中［试样准备］标签，可输入重量、体积、稀释因子、光程长等信息。 点击图中［仪器参数］标签，可选择测定种类（吸收值、透射率、能量、反射率）以及通带（狭逢）等条件。 点击主菜单上的 键，可分别开关图象面板（图中的左键）、数据处理面板 （中）以及方法面板（右键）。 3.3.2 光谱测定 首先点击上图的②进行基线校正，然后点击③波长设置到500nm ，再点击①自动调零。 数据处理面板 方法面板 图象面板 ① ② ③ ④ ⑤