黄连中生物碱的提取与分离工艺研究综述
李芯玲 118318119
前言：黄连为多年生草本植物,是我国传统中药,在我国中西部地区分布广泛,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其根、茎味极苦,苦味源于所含的多种生物碱。
关键词：黄连，生物碱。提取，工艺研究
正文：黄连生物碱具有抗病毒、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血糖及免疫调节
等作用,在食品、保健、医药等领域应用非常广泛。【1】黄连是一种常见的中药，具有清热燥湿，泻火解毒的功效，主要有效成分为小檗碱，巴马汀，药根碱和
黄连碱。【2】目前，国内外对黄连生物碱的提取工艺，主要有回流提取法、酶
解提取法,稀酸盐析法,超声辅助提取法以及微波辅助提取等。
回流提取法常用水、乙醇等为提取剂，浸出液加热蒸馏，提取剂馏出后再
冷凝，重新回到浸出器中继续进行浸提,直至有效成分回流提取完成，一般步
骤为在一定量的黄连粉末中加入适量的乙醇，回流提取总生物碱，抽滤，最后
将滤液烘干得到生物碱。【3】但是乙醇比水易挥发，所以在生物碱提取液浓缩时，醇提比水提更容易，提取率较高，且乙醇无毒，适合大规模工业化生产，
具有广阔的前景，但耗时较长，并需要多次回流提取，才能有效提取完全，此外，提取过程中会有其他的成分溶出，因而杂志含量高。
酶解提取法的原理是利用纤维素的催化作用将纤维素水解成水溶性糖，使
细胞壁破裂，有效成分溶出，酶解法提取生物碱的一般步骤为取一定量的黄连
粉末，经酶解，盐析，碱化，然后结晶。采用酶解法提取总生物碱的提取率比
传统的乙醇回流发高出了24%，【4】该法省时，消耗少，生物碱得率相对较低，而且无毒无害，无污染，后处理简单等优点，属于绿色环保型提取工艺，符合
当前低碳经济的要求，但是酶解发提取对酶解的温度，时间等都有较高的要求，不同产地的黄连以及酶的种类不同，提取的工艺条件也有所差别。此外，酶的
价格也比较的高。所以在提取工艺的推广开发上有一定的影响。
稀酸盐析法的机理是利用在酸性溶液中小檗碱的硫酸的溶解度大，而盐酸
盐在冷水中溶解度非常小的性质。先加入硫酸使小檗碱转变为硫酸盐溶于酸，
接着加入盐酸再转化为盐酸盐而析出用0.3%硫酸水加热回流提取黄连须中总
生物碱,用石灰乳调节提取液pH为5～6,过滤;滤液用JG-101树脂吸附,用不同
洗脱剂分步洗脱;重结晶获得药根碱和小檗碱单体,盐析获得黄连总生物碱;用
HPLC分析黄连生物碱及总碱含量。结果用2%氢氧化钠洗脱,酸中和后重结晶
得药根碱单体;再用70%酸性甲醇(1%H2SO4)溶液洗脱总生物碱;洗脱液中加入2%NaCl沉淀并重结晶得小糪碱单体;上清液加20%NaCl沉淀获得余下总生物碱。【5】此工艺技术成本低廉，工艺成熟简单，产率稳定，但在提取过程中使
用盐酸和硫酸，对环境造成污染，而且容易腐蚀设备，有逐渐被淘汰的趋势。【6】
超声辅助提取是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶液内气泡的
形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品有效成分分散。增大样品于萃取溶剂
之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。提取小檗碱时，
因为小檗碱是季胺碱，易溶于热水，甲醇，乙醇，所以采用甲醇超声溶解，提
取完全，不易氧化变色，操作简便。【7】与传统的乙醇提取法相比，超声波提
取法用时短，效率高。【8】无需高温，长压下即可萃取，可避免高温高压对黄
连生物碱的破坏，提取物有效成分含量高，有利于进一步的精制。但超声技术
易受功率限制，工业化生产存在难度。
微波辅助提取法的原理是用微波电磁能转化为热能，使细胞内的温度迅速
上升，从而使细胞内的压力大于细胞壁所能承受的压力，导致细胞破裂，有效
成分流出。如采用紫外分光光度法,以黄连中总生物碱提取量为评价指标,对比了微波辅助萃取、超声辅助萃取、超声-微波联用辅助萃取、微波-超声联用辅助
萃取黄柏中总生物碱,比较了4种不同萃取方式对提取量的影响。结果表明,在
萃取黄连中总生物碱时,微波萃取优于超声萃取和超声-微波联用萃取;微波萃取
和微波-超声联用萃取相比较,黄连中总生物碱提取量相差不大,说明微波萃取黄
连中总生物碱比较完全,微波萃取后没有必要再用超声萃取。【9】通过实验比较
传统提取法与微波提取法，在提取率方面的优势，表明微波提取法是最佳方法。【10】但是微波在使用过程中升温很快，而且不易控制。
目前黄连生物碱提取多为工艺条件的报道，对于后续的精制和分离方面不多，有待进一步的深入研究，因为高纯度的小檗碱具有更大的用途和更高的价格。此外，还要加大黄连生物碱的应用性研究，以拓展其更广泛的应用，同时
加快产品的开发推广工作。相信随着科研人员的不断努力，有关黄连生物碱的
提取研究必将获得更多可喜的成果。
【1】陈倩倩 ,王瑞瑞 , 孙阿惠 , 刘军海, 黄连中生物碱提取工艺的研究进展,[J]江西食品工业，2011，4
【2】卢佳，张素娟，钱广生，李章万，付春梅，亚临界水提取法提取黄连中的4种生物碱[J].华西药学杂志2008，23（6）
【3】张启云，徐国良，孙立波，正交设计法优化黄连总生物碱的提取工艺【J】.江西中医学院学报2010，22（3）
【4】李倩霞，赵青，蒋林，酶法提取黄连总生物碱的研究【J】.现代中药研究与实践，2009，23（4）
【5】柳明,叶小利,梁艳婷,王亮,蓝萍,陈新,黄文文,李学刚. 黄连须根总生物碱及单体的联产工艺研究[J]. 时珍国医国药. 2010(07)
【6】王道武，郑金龙，庞雪，张龙，由黄连混合生物碱制备巴马汀【J】.制药技术，2012，6
【7】陈力，刘砚韬，申向黎，黄连中盐酸小檗碱含量的测定方法研究【J】.中国药业，2007，16（21）
【8】黄志强，周民杰，毛献，黄连中小檗碱的超声波提取工艺及数学模拟【J】.应用化工，2006，35（7）
【9】肖谷清,龙立平,王姣亮,李浩. 微波、超声及其联用萃取黄连中总生物碱的对比研究[J]. 光谱实验室. 2010，03
【10】邓海燕，姬亚雄，康礼强，黄连素提取工艺比较研究【J】.科技创业月刊，2010，12
工艺与设备 中草药中生物碱的提取与分离 蔡艳华赵红卫钟本和 (四川大学化工学院,成都,610051) 摘要 生物碱是许多中草药的有效成分。因其具有广泛的生理功能,引起了人们的关注。本文综述了近年来不同的提取和分离方法在生物碱中的应用原理。指出了各方法的优缺点及其今后发展的方向。 关键词:中草药生物碱提取纯化 1前言 生物碱是动植物中一类具有碱性的含氮物质。它们大多是极有价值的药物。中草药含有很多种生物碱,中草药的疗效大多是由所含的生物碱而来。 近年来生物碱作为中草药中的有效成分之一成为研究的热点。提取工艺是生物碱工业化生产的首要环节,特别是其提取和分离操作[1]。传统的生物碱提取分离方法能耗、物耗大,杂质多,效率低。针对这种情况,众多学者从不同角度对中药材中生物碱的提取分离进行了优化和改进[3)22]。本文就生物碱的提取分离技术,特别是几种新兴技术进行了综述。 2生物碱的提取方法 211传统提取方法 绝大多数生物碱是利用溶剂提取法进行提取。生物碱在溶剂中的溶解符合/相似相溶0的规律。极性强的生物碱亲水性较强,易溶于极性溶剂;弱极性生物碱亲脂性较强,易溶于弱极性溶剂。游离的生物碱大多亲脂性较强,而生物碱盐一般亲水性较强。按极性强弱可将生物碱提取溶剂分为极性溶剂、半极性溶剂和非极性溶剂[2]。 21111极性溶剂 极性溶剂有水、甘油、二甲亚砜等。水是最常用的强极性溶剂。具有碱性的生物碱在植物体中多以盐的形式存在,可直接以水作为提取溶剂。而弱碱性或中性生物碱则以不稳定的盐或游离的形式存在,这部分生物碱的亲水性比较弱,为增加其溶解度,可以采用酸水为提取液,使生物碱与酸生成盐而溶出。水提取物不易稳定,易染菌,此外含果胶,黏液质类成分的水提物难于过滤,影响分离操作。 21112半极性溶剂 半极性溶剂有乙醇、丙酮、丙二醇等。乙醇是最常用溶剂,游离的生物碱及盐类一般都能溶于乙醇。它可与水、甘油、丙二醇以任意比例混溶提取生物碱。有时也可采用醇酸溶液作提取剂。 21113非极性溶剂 非极性溶剂有乙醚、石油醚,氯仿、脂肪油、乙酸乙酯、液体石蜡等。以盐的形式存在于植物细胞中的生物碱采用非极性溶剂提取时,必须先使生物碱转变成游离碱后再用溶剂提取。非极性溶剂提出的总生物碱一般只含有亲脂性生物碱,不含水溶性生物碱。这种方法得到的生物碱杂质较少,易于进一步纯化。但溶剂渗入能力较弱,需反复提取。 溶剂提取法按具体操作可分为浸渍法、渗漉法、煎煮法、热回流法和连续回流法(索氏提取法)。21114浸渍法 浸渍法是将处理过的药材用适当的溶剂在常温
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定 黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。 黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。 [目的要求] 1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。 2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。 3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。 [实验原理] 小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。 小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
N +OH - O O OCH 3OCH 3N O O OCH 3 OCH 3 OH NH CHO O O OCH 3 OCH 3 季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色） N + O O OCH 3 OCH 3 小檗碱（黄连素） 掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。 N + H 3CO H 3CO OCH 3 OCH 3 掌叶防己碱 本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。 [实验内容] 一、提取分离
黄连中生物碱的提取分离及检识 （杨翊涵中药学一班 1302010138） 【摘要】黄连为多年生草本植物,是我国传统中药,在我国中西部地区分布广泛,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其根、茎味极苦,苦味源于所含的多种生物碱。本文总结整理了黄连中小檗碱提取分离实验过程的步骤方法，注意事项，并且整理了黄连中生物碱的有效成分、存在形式，生物碱的溶解性规律，以及实验过程中各种提取液，添加试剂的目的、原理与效果。【关键词】黄连生物碱小檗碱提取分离检识 1.1黄连有效成分 黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。 黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存
在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。 1.2小檗碱 小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。 2.1实验原理 生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连
黄连生物碱 (1)结构类型 黄连生物碱主要包括小檗碱、巴马丁、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、木兰碱等，均属于苄基异喹啉衍生物，除木兰碱为阿朴菲型外都属于原小檗碱型，且都是季铵型生物碱。以小檗碱含量最高(可达10%)，有抗菌、抗病毒作用。药根碱属于酚性季胺碱。 (2)小檗碱的理化性质 1)性状：小檗碱为黄色针状结晶，加热至110℃变为黄棕色，于160℃分解。盐酸小檗碱加热至220℃分解，生成红棕色的小檗红碱。 2)碱性：小檗碱属季铵型生物碱，可解离而呈强碱性，其pKa值为11.50。 3)溶解性：游离小檗碱能缓缓溶解于水中，易溶于热水或热乙醇，在冷乙醇中溶解度不大。小檗碱的盐酸盐在水中的溶解度较小，较易溶于沸水，难溶于乙醇。小檗碱与大分子有机酸，如甘草酸、黄芩苷、大黄鞣质等结合，形成的盐在水中的溶解度都很小。 4)互变异构小檗碱一般以季铵型生物碱的状态存在，可以离子化呈强碱性，能溶于水，溶液为红棕色。但在其水溶液中加入过量强碱，季铵型小檗碱则部分转变为醛式或醇式，其溶液也转变成棕色或黄色。醇式或醛式小檗碱为亲脂性成分，可溶于乙醚等亲脂性有机溶剂。 (3)小檗碱的鉴别反应 小檗碱除了能与一般生物碱沉淀试剂产生沉淀反应外，还具有两个特征性检识反应。 1)丙酮加成反应：在强碱性下，盐酸小檗碱可与丙酮反应生成黄色结晶性小檗碱丙酮加成物。 2)漂白粉显色的反应：在小檗碱的酸性水溶液中加入适量的漂白粉(或通入氯气)，小檗碱水溶液即由黄色转变为樱红色。 3)小糪红碱反应：盐酸小檗碱加热至220左右分解，生成红棕色小糪红碱，继续加热至285左右完全熔融。 4)变色酸反应：为亚甲二氧基的显色反应，试剂为变色酸和浓硫酸，阳性反应：红色。 (4)提取分离： 分离小檗碱，形成盐酸盐，分离甲基黄连碱，形成硫酸盐。 1) 常采用碱水加石灰乳提取(加碱后是药材中的生物碱盐转变为游离性的生物碱，游离季胺碱易溶于水)。 2) 用酸水提取，利用小檗碱含氧酸(硫酸、磷酸)的盐溶解度大于非含氧酸盐，根据碱性碱性强弱或溶解度的不同进行。 (5)生物活性：抗菌抗病毒
黄连中生物碱的提取与分离工艺研究综述 李芯玲 118318119 前言：黄连为多年生草本植物,是我国传统中药,在我国中西部地区分布广泛,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其根、茎味极苦,苦味源于所含的多种生物碱。 关键词：黄连，生物碱。提取，工艺研究 正文：黄连生物碱具有抗病毒、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血糖及免疫调节 等作用,在食品、保健、医药等领域应用非常广泛。【1】黄连是一种常见的中药，具有清热燥湿，泻火解毒的功效，主要有效成分为小檗碱，巴马汀，药根碱和 黄连碱。【2】目前，国内外对黄连生物碱的提取工艺，主要有回流提取法、酶 解提取法,稀酸盐析法,超声辅助提取法以及微波辅助提取等。 回流提取法常用水、乙醇等为提取剂，浸出液加热蒸馏，提取剂馏出后再 冷凝，重新回到浸出器中继续进行浸提,直至有效成分回流提取完成，一般步 骤为在一定量的黄连粉末中加入适量的乙醇，回流提取总生物碱，抽滤，最后 将滤液烘干得到生物碱。【3】但是乙醇比水易挥发，所以在生物碱提取液浓缩时，醇提比水提更容易，提取率较高，且乙醇无毒，适合大规模工业化生产， 具有广阔的前景，但耗时较长，并需要多次回流提取，才能有效提取完全，此外，提取过程中会有其他的成分溶出，因而杂志含量高。 酶解提取法的原理是利用纤维素的催化作用将纤维素水解成水溶性糖，使 细胞壁破裂，有效成分溶出，酶解法提取生物碱的一般步骤为取一定量的黄连 粉末，经酶解，盐析，碱化，然后结晶。采用酶解法提取总生物碱的提取率比 传统的乙醇回流发高出了24%，【4】该法省时，消耗少，生物碱得率相对较低，而且无毒无害，无污染，后处理简单等优点，属于绿色环保型提取工艺，符合 当前低碳经济的要求，但是酶解发提取对酶解的温度，时间等都有较高的要求，不同产地的黄连以及酶的种类不同，提取的工艺条件也有所差别。此外，酶的 价格也比较的高。所以在提取工艺的推广开发上有一定的影响。 稀酸盐析法的机理是利用在酸性溶液中小檗碱的硫酸的溶解度大，而盐酸 盐在冷水中溶解度非常小的性质。先加入硫酸使小檗碱转变为硫酸盐溶于酸， 接着加入盐酸再转化为盐酸盐而析出用0.3%硫酸水加热回流提取黄连须中总 生物碱,用石灰乳调节提取液pH为5～6,过滤;滤液用JG-101树脂吸附,用不同 洗脱剂分步洗脱;重结晶获得药根碱和小檗碱单体,盐析获得黄连总生物碱;用
实验六：咖 啡 因 的 提 取 【实验目的】 1、学习生物碱提取及其衍生物的制备方法； 2、学会升华操作； 【实验原理】 咖啡碱具有刺激心脏，兴奋大脑神经和利尿等作用。主要用作中枢神经兴奋药。它也是复方阿斯匹林（A. P. C ）等药物的组分之一。现代制药工业多用合成方法来制得咖啡碱。 茶叶中含有多种生物碱，其中咖啡碱（或称咖啡因,caffeine ）含量约1%-5%，丹宁酸（或称鞣酸）约占11%-12%，色素、纤维素、蛋白质等约占0.6%。咖啡因是弱碱性化合物，易溶于氯仿、水、热苯等。 咖啡碱为嘌呤的衍生物，化学名称是1，3，7-三甲基-2，6-二氧嘌呤，其结构式与茶碱，可可碱类似。 嘌呤（Purine ） 咖啡因(Caffeine) 茶碱(Guanine) 可可碱(Adenine) 含结晶水的咖啡碱为白色针状结晶粉末，味苦。能溶于水、乙醇、丙酮、氯仿等。微溶于石油醚，在100℃时失去结晶水，开始升华。120℃时升华显著，178℃以上升华加快。无水咖啡因的熔点为238℃ 从茶叶中提取咖啡因，是用适当的溶剂（氯仿、乙醇、苯等）在脂肪提取器中连续抽提，浓缩得粗咖啡因。粗咖啡因中还含有一些其它的生物碱和杂质，可利用升华进一步提纯。咖啡因是弱碱性化合物，能与酸成盐。其水杨酸盐衍生物的熔点为138℃，可借此进一步验证其结构。 【操作过程和实验装置图】 N N NH N 12 3 67 9 CH 3 3 CH 3 N N O O N N N O O CH 3 NH N CH 3N N N CH 3 HN N O O 3
1、生物碱及其衍生物的提取与制备方法。 2、升华操作 流程 图2.8.2 常压升华装置 【实验关键和注意事项】 （1）滤纸套筒大小要合适，以既能紧贴器壁，又能方便取放为宜，其高度不得 超过虹吸管；要注意茶叶末不能掉出滤纸套筒，以免堵塞虹吸管；纸套上面折成凹形，以保证回流液均匀浸润被萃取物，也可以用塞棉花的方法代替滤纸套筒。用少量棉花轻轻阻住虹吸管口。 （2）瓶中乙醇不可蒸得太干，否则残液很粘，转移时损失较大。 （3）生石灰起吸水和中和作用，以除去部分酸性杂质。 （4）在萃取回流充分的情况下，升华操作是实验成败的关键。升华过程中，始 终都需用小火间接加热。如温度太高，会使产物发黄。注意温度计应放在合适的位置，使正确反映出升华的温度。 【主要试剂及产品物理常数】
黄连中生物碱的提取分 离及检识 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]
黄连中生物碱的提取分离及检识 （杨翊涵中药学一班 1302010138） 【摘要】黄连为多年生草本植物,是我国传统中药,在我国中西部地区分布广泛,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其根、茎味极苦,苦味源于所含的多种生物碱。本文总结整理了黄连中小檗碱提取分离实验过程的步骤方法，注意事项，并且整理了黄连中生物碱的有效成分、存在形式，生物碱的溶解性规律，以及实验过程中各种提取液，添加试剂的目的、原理与效果。 【关键词】黄连生物碱小檗碱提取分离检识 1.1黄连有效成分 黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。 黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。 1.2小檗碱 小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识 （一）目的要求 学习提取精制和检识黄连中的小檗碱，通过实验要求： 1．掌握小檗碱的结构特点和理化性质。 2．熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。 3．了解盐酸小檗碱的检识方法。 （二）主要化学成分的结构及性质 黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 、峨嵋野连Coptis omeiensis (Chen)C.Y.Cheng 或云连Coptis teeta Wall.的根茎。黄连的根状茎含多种生物碱，主要为小檗碱（黄连素），约5％～8％，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。叶含小檗碱1.49％。 小檗碱(berberine)：分子式(C 20H 18NO 4)＋，分子量336.37。系季铵生物碱。游离小檗碱为黄色针状结晶（乙醚），mp.145℃，能缓缓溶于冷水（1∶20），可溶于冷乙醇（1∶100），易溶于热水或热乙醇，难溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚。盐酸小檗碱(C 20H 17NO 4·HCl ·2H 2O)，为黄色结晶，微溶于冷水（1∶500），易溶于沸水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗碱( (C 20H 18NO 4)2·SO 4·3H 2O)，溶于水（1∶30），溶于乙醇。重硫酸小檗碱(C 20H 18NO 4·HSO 4)为黄色结晶或粉末，溶于水（1∶150），微溶于乙醚。 N O C H 3 O C H 3O O + N + H O C H 3O H O C H 3O C H 3C H 3 小檗碱 木兰碱 （三）实验原理 根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小，而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。因此，从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉，然后向提取液中加入10％的食盐，在盐析的同时，也提供了氯离子，使其硫酸盐转变为氯化小檗碱（即盐酸小檗碱）而析出。
Dictamnine 白鲜碱；Skimmianine 茵芋碱； Fagarine 青椒碱；Robustine ； <分子式> C12H9NO2 <相对分子质量> 199 <性状>棱柱粉末。又称白鲜胺，白藓碱。棱柱结晶(由乙醇中结晶)，熔点133℃。溶于热乙醇和氯仿，微溶于乙醚，难溶于水。其盐酸盐为针状结晶(由乙醇中结晶)，熔点170℃(分解)。其苦味酸盐为黄色棱晶(由乙醇中结晶)，熔点1.63℃。存在于芸香科植物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的根。 芸香科植物白鲜的根；芸香科植物欧白鲜；芸香科植物花椒属竹叶椒的根；芸香科植物阿诺梯花椒的茎；芸香科植物得卡瑞花椒的茎皮；芸香科植物刺异叶花椒的根；芸香科植物蚬壳花椒的茎；芸香科植物乔木状花椒的叶；芸香科植物崖椒的茎皮；芸香科植物两面针；芸香科植物松风草的地上部分；芸香科花椒属植物梅宇崖椒的树皮；芸香科植物的树皮；芸香科植物似番樱桃叶芸香草地上的部分；芸香科植物火山生芸香草的全草；芸香科植物的茎；芸香科植物的根和茎；芸香科的叶；芸香料的树皮 <生物活性>强心和对平滑肌的作用；松弛血管的作用；抗真菌和DNA光毒性作用；皮肤光损害作用；抗血小板聚集作用；昆虫拒食作用。 防己提取物 【英文或拉丁名】：Stephania Tetrandra extract 【产品规格】：Tetrandrine12% Fangchinoline6% 【包装规格】：25kg/paper drum 【产品介绍】：药材为防己科植物石蟾蜍Stephania tetrandra S. Moore的根。棕色粉末。
【化学成分】：含多种异喹啉生物碱，主要有粉防己碱(tetrandrine )、防己诺林碱(fangchinoline)、轮环藤酚碱(cyclanoline)、二甲基粉防己碱(dimethyltetrandrine) 以及小檗胺(berbamine)等。 【功能主治】：利水消肿，祛风止痛。用于水肿脚气、小便不利、风湿痹痛、湿疹疮毒、高血压症。 【备注】： 植物形态多年生落叶缠绕藤本。茎纤细，有纵条纹。叶互生，宽三角状卵形，先端钝，具小突尖，基部截形或略心形，两面均被短柔毛，全缘，掌状脉5条；叶柄盾状着生。花小，单性，雌雄异株；雄花序为头状聚伞花序，排成总状，萼片4，花瓣4，雄蕊4，花丝连成柱状体，上部盘状，花药着生其上；雌花萼片、花瓣与雄花同，心皮1。核果球形，熟时红色。花期5-6月，果期7-9月。 生于山坡、丘陵地带的草丛及灌木林缘。主产浙江、安徽、湖北、湖南。 采制秋季采挖，除去粗皮，晒至半干，切段或纵剖，干燥。 性状根不规则圆柱形，或剖切成半圆柱形或块状，常弯曲，弯曲处有深陷横沟而呈结节状，长5-15cm，直径1-5cm。表面灰黄色，有细皱纹及横向突起的皮孔。质坚重，断面平坦，灰白色，粉性。气微，味苦。
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2016, 6(1), 14-19 Published Online February 2016 in Hans. https://www.doczj.com/doc/547796878.html,/journal/aac https://www.doczj.com/doc/547796878.html,/10.12677/aac.2016.61003 The Effects of Processing the Coptis chinensis Using Different Types of Wine on the Main Components of Alkaloids Kai Chen, Jianyong Yuan* College of Pharmacy, Chongqing Medical University, Chongqing Received: Jan. 30th, 2016; accepted: Feb. 22nd, 2016; published: Feb. 25th, 2016 Copyright ? 2016 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.doczj.com/doc/547796878.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To compare the effect of different types of wine on the main compositions and contents of the alkaloids of Coptis chinensis. Methods: the main components of Wine rhizoma coptidis alkaloids and the contents of coptisine, jatrorrhizine, palmatine and berberine are determined by HPLC. Re-sults: After HPLC detection, peak number and retention time are consistent, but the content of total alkaloids varies in different degrees. After sorghum liquor 60? processing, the total alkaloids i n-crease most significantly. But after Jingjiu 35? processing, the total alkaloids reduce. Conclusion: The research finds that after sorghum processing, the content of total alkaloids increases most signifi-cantly and that the sorghum processing can provide evidence for choosing the auxiliary wine. Keywords HPLC, Alkaloids, Alcohol Coptis, Sorghum Liquor, Yellow Wine 不同种类酒炮制黄连对生物碱类主要成分 的影响 陈凯，袁建勇* 重庆医科大学药学院，重庆 *通讯作者。
讨论HPLC法测定黄连中生物碱的含量 引言 黄连为多年生毛茛科草本植物，药用部分主要取自黄连、三角叶黄连、峨嵋山野连或云连的根茎。野生黄连主要产于四川、云南、湖北，现今多采用荫棚栽培。秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥。黄连作为临床常用药物，用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮;外治湿疹、湿疮、耳道流脓等。此外，黄连还具有很多药理作用譬如：抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用、对血液系统的影响、抗溃疡作用。 由于黄连的种类与炮制方法都非常多，地理分布也比较广泛，因此作为药材它们的质量不易控制。黄连的主要药用成份生物碱的含量的准确测定对评价不同产地黄连与质量监控具有重要意义。黄连生物碱含量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层扫描法(TLCS)与紫外分光光度法(UV)等，它也是一味具有广泛药效作用的中药，在国内外很多种疾病的治疗都用到了它，且黄连新的药效又不断被发现。尤其是其是在抗癌、降血糖和改善心脑血管功能等方面均具有较好的药效，越来越受到人们的重视，因此，对黄连进行深入研究，对黄连中的各种生物碱进行全面的分析，以开发生药资源，扩大其药效作用，将有很大的社会效益和广泛的开发前景。
1 实验部分 1.1 仪器与试剂 日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪、KQ-250DE型数控超声波清洗器、HH数显恒温水浴锅、上海博讯电热鼓风干燥箱GZX-9070MBE、BL电子分析天平FA2204N、容量瓶(10ml、25ml)、烧杯、玻璃棒、移液管、漏斗、微孔滤膜(0.45m)、移液枪;盐酸小檗碱化学对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200208)纯度为98%，黄连(味连、过120网目筛)、乙腈均为色谱纯，十二烷基硫酸钠、甲醇、磷酸二氢钾、磷酸、盐酸均为分析纯、水为蒸馏水。 1.2 对照品溶液的制备 对照品盐酸小檗碱在105℃下的烘箱中干燥至恒重，精密称取对照品约15.0mg，用甲醇溶解并定容到25.00ml，得对照品溶液的浓度为 0.06mgml-1。 1.3 供试品溶液的制备 精密称取黄连粉末样品(过120目筛，80℃干燥)约50mg，加盐酸-甲醇(1：100)溶液45ml，60℃水浴锅中温浸15min，超声处理(功率250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，用普通滤纸滤过，取滤液，用0.45m滤膜再次过滤，再定容与25ml容量瓶，即得供试品溶液。 1.4 液相色谱分析条件 液相色谱分析条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂;以乙腈、0.05molL-1磷酸二氢钾溶液(V：V=50：50;每100ml中加十
皂苷的提取分离 皂苷部分极性较大，首先应该附集皂苷部位，通常可用正丁醇萃取或是大孔树脂得到总皂苷部位。 对于具体皂苷的分离，若使用硅胶柱层析，一般以氯仿：甲醇：水进行洗脱，氯仿：甲醇：水一般为9：1：0.1，8：2：0.3，7：3：0.5，同时应注意要加大柱层析硅胶的装柱量，减少样品的上样量；另外也可使用反相柱。 此外有些皂苷类成分极性较大容易含有一些色素，不易结晶，可使用 Sephedex LH-20去除色素，进而使皂苷结晶。 类似物的hplc分离注意的问题 HPLC时生物碱对流动相的PH值很敏感。 三萜皂苷的提取与分离 （1）提取：三萜皂苷常用醇类溶剂提取，若皂苷含有羟基、羧基极性基团较多，亲水性强，用稀醇提取效果较好。提取物先用石油醚脱脂，然后再用正丁醇萃取，萃取物再经大孔吸附树脂，得粗皂苷。 （2）分离：采用分配柱色谱法要比吸附柱色谱法好，常用硅胶为支持剂，以氯仿-甲醇-水为或乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱剂。 氨基酸的分离 将氨基酸分离成酸性氨基酸，碱性氨基酸，中性氨基酸和芳香族氨基酸。取酸水解氨基酸液适量通过阳离子交换的层析柱，碱性氨基酸就保留在层析柱上；而中性氨基酸和酸性氨基酸的混合液则进入滤液中。再将滤液通过阴离子交换的层析柱，一切酸性氨基酸就保留在层析柱上；而中性氨基酸就进入滤液中。吸附在阳离子交换层析柱上的氨基酸，用2 N HAc洗脱；吸附在阴离子交换层析柱上的氨基酸，用0.5 NNaOH洗脱。 黄酮类化合物的分离 黄酮类化合物在硅胶上的吸附较多，可以采取减压硅胶柱或者中压硅胶柱，上样量稍大一些（这样可以减小吸附量），将样品分段，然后采用sephadex LH－20进行细分。采用sephadex LH－20时，最好选择一个比较合适的水与甲醇的比例（样品不会毫无保留），进行等度洗脱。因为水甲醇梯度洗脱很容易产生气泡。个人认为经过硅胶和sephadex LH－20后，黄酮和多糖应该能够分开。 生物碱与生物酸分离方法 https://www.doczj.com/doc/547796878.html,/bbs/post/view? ... sty=1&age=0#4271305 差向异构体的分离 https://www.doczj.com/doc/547796878.html,/bbs/post/view? ... 1&sty=1&age=0#62893 生物碱的提取： 由于各种生物碱的结构不同，性质各异，提取分离方法也不尽相同，主要是根据生物碱的溶解度而定。生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提出，常用的提取溶剂有下列3种： （1）非极性溶剂：样品先用10%氢氧化铵溶液湿润，使中草药中与酸结合成盐的生物碱呈游离状态，然后用氯仿或乙醚等提取，一些与酸结合比较稳定的生物碱盐类和鞣酸盐或碱性较强的生物碱盐等，氢氧化铵不能将其完全分解，可用碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙或氧化镁，甚至氢氧化钠碱化，这个方法的缺点是不能提出水溶性生物碱。 （2）极性溶剂：极性较大的生物碱可用中性甲醇、乙醇、酸性甲醇、乙醇、酸水（常
黄连中生物碱成分及药理作用研究进展 发表时间：2016-05-25T09:19:25.937Z 来源：《医师在线》2016年1月第2期作者：王双燕石宝堂[导读] 生物碱是含负氧化态氮原子，存在生物有机体中的环状化合物，常表现出较强的生物活性[1]。 （ 1云南经济管理学院云南 650106 2昆明医科大学海源学院云南 650106） 【摘要】黄连中生物碱主要包括黄连碱、巴马汀、表小檗碱、药根碱，具有抗菌、抗炎、降血脂、降血糖、减肥、抗焦虑、抗肿瘤、保护胃黏膜等多种药理学作用，在心脑血管病、痴呆、糖尿病、感染性疾病的治疗，具有广阔的发展潜力。【关键词】黄连；生物碱；药理作用；研究进展 生物碱是含负氧化态氮原子，存在生物有机体中的环状化合物，常表现出较强的生物活性[1]。黄连是常用中药材，属毛莨科黄连属，始载于《神农百草经》，其根茎呈连珠状且色黄而被称为“黄连”，有清热燥湿、泻火解毒功效[2]。中药药理学研究是当前药学研究的热点领域，本文对黄连中生物碱成分及药理作用研究进行概述。 1 黄连中生物碱成分研究进展 小檗碱又称黄连素，被广泛应用于中药制剂，黄连是提取小檗碱的主要药材，目前已开发出多种制剂。黄连素是一种氮杂环化合物，在生物系统中可经氨基酸合成，熔点145℃，小檗碱以季铵型、醛型、醇型三种不同形成存在，其中前者最多。黄连碱主要来源于黄连根茎，是一种常见的异喹啉生物碱，在乙醇溶液中可以浅黄色针状结晶形式存在，其硫酸盐为黄色晶体，不溶于水和乙醇。巴马汀又被称为黄藤素，是黄连中特殊的生物碱，主要存在于黄连根茎部位，熔点198-201℃，易溶于热水，但在有机溶液中不易溶解，经氢化可生产延胡索乙素。药根碱属四氢异喹啉生物碱，组成与黄连素基本相同，熔点208～210℃，碘化物呈红黄色，易溶于水、乙醇，硝酸盐为黄棕色针状晶体，分解温度228～229℃。 2 黄连中生物碱药理作用研究进展 黄连中生物碱含量丰富，具有较好的抗菌作用，为天然的抗菌药物，长期以来被用于感染性疾病治疗；近年来还被用于防治老年痴呆性疾病[3]。随着现代医学的发展，黄连素的药理作用研究越来越深入，为黄连价值开发奠定了基础。 2.1 抗菌作用 黄连中的四种生物碱均有一定的抗菌作用，为一种广谱抗菌药物，研究证实对革兰氏阳性和阴性菌，如伤寒杆菌、肠炎沙门氏杆菌、金葡萄球菌、大肠杆菌、等都有一定的抑制作用。小檗碱最早被用于临床抗感染，其对大肠杆菌、霍乱弧菌具有较强的抑菌活性。体外研究证实其对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、哈氏弧菌也有较高的抑菌活性，但对停乳链球菌几乎无抑制作用[4]。小檗碱对许多致病菌都有不同程度抑制作用，但大多数研究也局限于体外实验阶段，其抑菌作用主要可能通过抑制拓扑异构酶I以及拓扑异构酶Ⅱ活性影响细菌DNA 合成发挥作用。黄连碱具有抑制A型单胺氧化酶作用，对白色念珠菌具有较强的抑菌活性，对白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用，其与真菌具有很高的亲和力，使其较易进入菌体细胞内，破坏细菌正常生理功能。巴马汀其对金黄色葡萄糖球菌、肺炎克雷伯菌、痢疾杆菌都有一定的抑制作用，已被用于妇科炎症、呼吸道感染、结膜炎的治疗。表小檗碱抑菌作用尚不清楚，可能存在潜在的抗菌作用。药根碱抑菌活性最小，但其抗菌方面研究空间仍较广阔。小檗碱药理研究较多，部分学者试图通过对小檗碱进行结构修饰以提高其抗菌活性，并取得一定成效，研究证实在小檗碱9位去甲基引入酰氧基或苯氧丁基，可增强其抗菌活性。但基团的引入对小檗碱抗菌活性提高不具有普遍性。 2.2 抗糖尿病作用 糖尿病是胰岛β细胞受损或完全破坏而不能正常代谢引起的疾病，血糖升高是糖尿病的主要症状。Hep G2细胞属于肝胚胎瘤细胞株，和人体肝细胞表型十分相似，βTC3细胞属于胰岛素瘤细胞株，具有分泌胰岛素功能。实验发现，小檗碱可促进Hep G2中葡萄糖消耗，且呈现明显的剂量依赖，在5～100μmol/l范围内，小檗碱作用量与细胞葡萄糖消耗量呈正相关，但不会影响细胞功能[5]。小檗碱还可通过降低醛糖还原酶活性改善糖尿病。实验研究证实黄连复合生物碱由于黄连生物碱的相互协同作用，可增进降糖效果，小檗碱降糖活性次之，黄连碱再次之，巴马汀最差。药物可能通过蛋白质磷酸化及其级联信号传导等多个靶位点，调控信号传导，触发胰岛素抵抗，进而降低血糖。 2.3 抗肿瘤作用 恶性肿瘤已成为死亡三大因素之一。研究发现，药根碱对黑色素瘤新生血管具有明显的抑制作用[6]。此外，含有小檗碱的黄连药材可作为食道癌治疗的药物之一。一项体外研究证实，小檗碱非毒性剂量可降低人肺癌细胞A549中的MMP-2、uPA水平，调节金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-2）和尿激酶型纤溶酶原激活抑制剂（PAI）抑制肺癌细胞转移。在卷烟中添加黄连生物碱可使患者获益[7]。黄连中生物碱具有抗炎作用，可预防细胞突变。 2.4 抗心血管疾病 药用黄连用于治疗心脑血管病，对抗心力衰竭、抑制心肌炎、改善急性脑供血与供氧不足等疾病。小檗碱可调节心肌缺血、修正心衰，这可能与其作用于心肌周围阻碍血管，减少血液阻力，减轻心脏负荷有关。黄连解毒汤可改善脑部循环。药根碱具有明显的调脂作用，可上调LDLR蛋白表达，促进胆固醇转化为胆汁酸，提高胆汁酸排泄率，降低血胆汁酸含量。巴马汀可明显诱导巨噬细胞释放炎性因子NO，发挥抗炎作用。 3 小结 新药的研发并非一朝一夕之事，黄连中生物碱种类不多，但其药理学作用较复杂，体外研究、动物实验证实具有抗菌、抗炎、降血脂、降血糖、减肥、抗焦虑、抗肿瘤、保护胃黏膜等多种药理学作用，但对于临床研究仍较为肤浅。今后，应积极开展临床研究，结合临床实践研制相关衍生物，寻找更具有开创性、制剂意义的药理作用。 【参考文献】 [1] Manske R H F. The Alkaloids: Chemistry and Physiology, Vols. 1-20, New York, Academic Press, 1950-1979. [2]中华人民共和国卫生部药典委员会中华人民共和国药典[M]，化京:人民卫生出版化化学工业出版化2010, 285. [3]李亚娜，陶庆春.中药抑菌的研究现状及思考[J].国际检验医学杂志，2014， 35(2): 198-200.
黄连的主要成分 黄连主含小檗碱(berberine)，含量为5.20~7.69%，还含黄连碱 (cop-tisine)、甲基黄连碱(worenine)、掌叶防己碱(palmatisine)、药根碱(jatrorrhiz-ne)、表黄连碱(epiberberine)、groenlandicine和5—羟基小檗碱(berberastine) ，由于它们有相似结构，常统称黄连生物碱， 1)小檗碱(berberine) 别名为黄连素。分子式[-Czo H18 N04]十，相对分子质量336.37。自水或稀乙醇中结晶所得小檗碱为黄色针状结晶。盐酸小檗碱黄色小针状结晶；羟基化合物为黄色针状结晶（乙醚），熔点145℃（分解）。离小檗碱易溶于热水；略溶于水、热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。盐酸小檗喊微溶于冷水，易溶于热水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。小檗碱和大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度都很小。小檗碱有季铵式、醛式、醇式三种能互的结构式，以季铵式最稳定。小檗碱的盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液加入计算量的氢氧化钡，生成标红色强倾炷好禺小菜倾，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。如果于水溶性的季铵式小檗碱水溶液中加入过量的碱，则生成游离小檗碱的沉淀，称为醇式小檗碱。如果用过量的氢氧化钠处理小檗碱盐类则能生成溶于乙醚的游离小檗碱，能与羟胺反应生成衍生物，说明分子中有活性醛基，称为醛式小檗碱。 2)黄连碱(coptisine) 分子式[C19 H14 Not]+，相对分子质量320.32。黄连碱为浅黄色针状结晶（乙醇），熔点218℃。极难溶于水，微溶于乙醇／溶于碱。氯化物为橙黄色棱柱状结晶，300℃时也不熔寸，硫酸盐黄色结晶，不溶于水及乙醇； 3)叶防己碱(palmatisine) 别名为巴马丁。分子式[Czl HzzN04、]十，相对分子质量352.40。氯化物为黄色针状结晶（水）。熔点198~ 201℃（分解）。易溶于热水，略溶于水；微溶于乙醇和氯仿,几乎不溶于乙醚，经氯化生成延胡索乙素（消旋四氢巴马丁）.碘化物，熔点240℃（分解）。硝酸盐，淡貢色针状结晶（甲醇），熔点248℃（分解）。 4)其他成分木兰碱(magnoflorine)、3，4—二羟基苯乙醇葡萄糖苷(3， 4-di-hydroxy-phenyl ethyl alcohol glucoside)、3—羧基—4—羟基苯氧葡萄糖苷(3-carboxy-4-hydroxy-phenoxyglucoside), 2,3,4—三羟基苯丙酸(2,3, 4-trihydroxy-benzenpro-panoic acid)等
生物碱的提取与分离 化工081班第四小组成员 组长：梁钰泉主讲：牟星（200831204028） 材料收集：秦志浩（200831204023）卢晓波（200831204078）李汪（200831204059）Word制作: 李晓龙（200831204029）柏晓伟（200831204027） PPT 制作: 梁钰泉（200831204025）刘林（200831204031） 生物碱的概述 （一）含义：生物碱是一类来自生物体内含氮有机物，大多氮原子在环状结构内，分子结构复杂，多呈碱性,具有强烈生理活性。 （二）分布概况：1、存在科属:主要分布在植物界, 低等植物...较少高等植物... 多①双子叶植物---- 多如防已科、茄科、罂粟科、夹桃科、毛莨科、豆科、茜草科等。②单子叶植物----- 较少如百合科、石蒜科、兰科2、存在部位:不同植物均可存在于各个部位，在同一植物往往只集中于某一器官。黄连------根长春花------花麻黄------茎罂粟------果3、存在形式：①游离状态-----弱碱性生物碱②与酸结合成盐----- 强碱性生物碱③成酯或苷的形式 （三）生理活性:1、镇痛作用---- 吗啡、延胡索乙素2、抗消炎菌作用----- 黄连素3、抗肿瘤作用---- 喜树碱、美登木碱4、止咳作用---- 可待因 生物碱的分类分类方法(如下5种） 1、按植物来源分类法如长春花，黄连等 2、按生物碱的生源途径分类法 3、按生物碱的溶解性进行分类如游离亲脂性.游离亲性 4、按分子结构中氮原子处的 状态进行分类如双稠吡咯烷（两个吡咯烷共用一个N原子）5、按生物碱氮杂环基本母核分类如异喹啉.吡啶类 生物碱的理化性质 物理性质：1、性状:多为晶形，味苦，有焦灼感.颜色--多为无色，因分子中饱和度大。 少数具有黄色。2、旋光性:多数具有旋光性，且多为左旋而具疗效。3、溶解性: （1）游离亲脂性生物碱：可溶于苯、乙醚、氯仿尤其在氯仿中溶解度大，不溶于水。(2)游离亲水性生物碱：I、结构特点：a、季铵型生物碱---为离子型生物碱，b、具有半极性NO 配位键。c、小分子生物碱，如麻黄碱、菸碱。II、溶解性：-- 可溶于水、甲醇、乙醇，在正丁醇有一定溶解度。难溶于亲脂性强有机溶剂。（3）生物碱盐类：易溶于水，可溶于甲.乙醇难溶于亲脂性有机溶剂。因成盐的酸不同而具有不同的溶解度，其规律是：无机酸生物碱盐水溶性> 有机酸生物碱盐小分子有机酸生物碱盐> 大分子有机酸生物碱盐含氧酸生物碱盐> 卤代酸生物碱盐HCl 〉HBr 〉HI 化学性质：（一）碱性；（二）沉淀反应：生物碱在酸性水溶液中，与某些试剂生成难溶于水的复盐或分子复合物的反应。 用途：鉴别：检查生物碱有无（定性反应）；显色剂：薄层色谱，纸色谱提取分离：检查是否提取完全分离纯化：雷氏铵盐用于季铵碱的分离 常用生物碱沉淀剂碘化物复盐类碘化铋钾试剂：桔红色沉淀碘—碘化钾：红棕色沉淀碘化汞钾：类白色沉淀（若加过量试剂，沉淀溶解）重金属盐类磷钼酸试剂：白色或黄褐色沉淀硅钨酸试剂：淡黄或灰白色沉淀大分子酸类苦味酸试剂：黄色结晶其它：硫氰酸铬钾（雷氏铵盐）：红色沉淀或结晶（季铵碱）沉淀反应结果判断 a.鉴别生物碱的存在，需要采用三种以上生物碱试剂。 b.排除假阳性反应，除去水提液 中含有的蛋多肽、鞣质等杂质。c.仲胺类不易与生物碱沉淀试剂反应，如麻黄碱.
黄连生物碱的提取纯化及降脂作用 侯 宏1,李学刚1*,李 平2,王小华2,冯 平2 (1.西南大学药学院,重庆400715;2.重庆北碚区中医院,重庆400700) 摘要 目的:提取纯化黄连主要生物碱并研究其降脂作用。方法:采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取总生物碱,用萃取、柱层析及重结晶分离黄连生物碱。以高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂模型,观察各用药组对鹌鹑血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 影响。结果:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降低TC 、LDL -C 水平的作用。结论:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降脂作用。 关键词 黄连生物碱;提取;纯化;血脂;鹌鹑 中图分类号 R28511 文献标志码 A 文章编号 1007-4813(2011)01-0007-02 基金项目:重庆市科委攻关项目(CSTC 2010AC5007);科技部重大新药创制课题(2010ZX09401-306-3-10)。 作者简介:侯 宏(1986-),女,硕士研究生。研究方向:天然产物化学。*通信作者:李学刚,博士研究生导师。E -mail:xuegangli2000@https://www.doczj.com/doc/547796878.html, 黄连为毛茛科植物黄连Co ptis chinensisFranch ,三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta wall.的干燥根茎。其活性成分为原小檗碱型生物碱,主要包括盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀 及总生物碱。研究[1-5]表明,黄连有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖及降血脂等作用。黄连提 取纯化方法很多,有水提、醇提以及柱层析纯化 等[6-8],本实验采用乙醇结合酸溶碱沉的方法提取生物碱并再进一步纯化,在降血脂方面研究提供依据。1 材料 111 药材和试剂 黄连采自重庆石柱黄连GAP 基地;柱层析硅胶D101大孔树脂、乙醇、硫酸、Ca(OH )2(成都科隆试剂公司);脂脉康胶囊(12粒@3板/盒,批号20090502,国药准字ZI4020737,山西安特生物制药股份有限公司);胆固醇(安徽天启化工科技有限公司,纯度\9218%)。猪油、鲁花花生油(超市购买),总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)测定试剂盒(南京建成生物研究所)。 112 主要仪器 RE -52AA 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZ -D(ó)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);TG16-W 微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);E OSBRAVO 全自动生化分析仪。113 动物 鹌鹑,雌雄各半,2个月龄,体质量(130?20)g,购于重庆万盛鹌鹑养殖场。 2 方法和结果 211 提取和分离 黄连干燥根茎(10kg)粉粹,95%乙醇浸泡24h 过滤,倒出滤液,反复3次,合并滤液, 减压浓缩得浸膏2000g,通过预实验,浸膏采用5倍 量的015%H 2SO 4溶解,放置2h,再加Ca(OH)2调pH 值9~10,然后其将一部分加入装有D101大孔树脂的柱中,先用蒸馏水洗至无色,再用95%乙醇以2B V/h 洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得总生物碱的量;另一部分用氯仿、正丁醇萃取,其中取正丁醇萃取物上硅胶柱色谱,并利用重结晶手段,得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。212 黄连生物碱对血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 的影响 选用健康鹌鹑70只用普通饲料适应性喂养1周,随机分为7组:正常对照组,模型组,脂脉康组(460mg/kg,按人用量通过体表面积折算)及小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱组(剂量100mg/kg,根据前期血脂实验研究所得)。除正常组喂普通饲料外,其余各组喂高脂饲料(79%普通饲料+14%猪油+6%花生油+1%胆固醇)[9-10] 。于实验开始后第4周禁食12h,颈静脉取血1mL,分离血清,利用全自动生化分析仪测定血清中TC 、TG 、LDL -C 、HDL -C 。结果用均数?标准差( x ?s )表示,并进行t 检验,见表1。 结果显示,用高脂饲料连续喂养鹌鹑4周后血清TC 、LDL -C 、HDL -C 与正常组相比明显升高,表明造模成功;与模型组相比,所有药物组均可以降低鹌鹑血脂指标,其中,小檗碱、黄连碱、巴马汀可明显降低血清TC,差异有统计学意义,但总生物碱降TC 效果不明显,均可明显降TG,差异有统计学意义,在一定程度上药物组均可提高HDL -C,但差异无统计学意义。黄连碱降血脂指标最明显。 ) 7)