修订实验三 菠菜中的色素提取、分离及鉴定
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菠菜色素的提取和分离实验报告
一、实验目的:
本次实验的主要目的是学习和掌握菠菜色素的提取和分离技术,了解菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
二、实验方法:
1、制备样品:将新鲜的菠菜叶片洗净晾干,切碎成小块备用;
2、提取菠菜色素:将切碎的菠菜叶片加入适量无水乙醇,研
磨成泥状物,过滤后取得浸提液;
3、进一步提取:将浸提液过滤并再次提取,过滤得到过滤液;
4、分离:将过滤液使用氯仿进行分离,水相和氯仿相层的色
素分离;
5、测定:将得到的色素溶于适量乙醇,测定菠菜色素的吸光度。
三、实验结果:
经过提取和分离,得到了深绿色的液体,与纯菠菜色素溶液比
较后发现两者颜色相似。
测定得到吸光度为0.54。
四、实验分析:
本次实验成功提取和分离了菠菜色素,并得到了较为准确的测定值。
在实验中,氯仿和无水乙醇是常用的有机溶剂,主要是因为在这些溶剂中菠菜色素的溶解度较高。
但是,在实验操作过程中需要注意保持实验环境的卫生和安全,氯仿是一种易挥发的有机物,需要注意防火和防烟。
五、实验结论:
通过本次实验,我们成功地提取和分离了菠菜色素,并且得到了较为准确的测定值。
同时,我们也了解了菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
本次实验的成功对于今后相关实验研究以及实际应用具有一定的指导意义。
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言:菠菜是一种常见的绿叶蔬菜,富含多种营养物质,其中包括一种被称为菠菜色素的成分。
菠菜色素是一类天然的色素,具有良好的生物活性和抗氧化性质。
本实验旨在通过提取和分离的方法,研究菠菜色素的性质和应用。
实验材料和方法:材料:新鲜菠菜叶片、无水乙醇、丙酮、石油醚、二氯甲烷、硅胶G柱、色谱柱、色谱试纸等。
方法:1. 取适量新鲜菠菜叶片,洗净并切碎成细末状。
2. 将菠菜末置于研钵中,加入适量无水乙醇,浸泡30分钟,搅拌均匀。
3. 将菠菜浸提液过滤,收集滤液。
4. 取少量滤液,加入石油醚,振荡混合,使菠菜色素溶于石油醚中。
5. 将石油醚层收集,加入少量无水乙醇,使溶液变为淡绿色。
6. 将淡绿色溶液倒入色谱柱中,以无水乙醇为洗脱剂,收集洗脱液。
7. 将洗脱液浓缩,得到菠菜色素。
实验结果和讨论:通过以上实验步骤,我们成功地从菠菜中提取和分离出了菠菜色素。
在实验过程中,我们使用了无水乙醇作为提取剂,因为乙醇能够有效溶解菠菜中的色素成分。
同时,我们使用石油醚作为分离剂,因为石油醚能够与菠菜色素发生亲和作用,使其溶于石油醚中。
在分离过程中,我们使用了色谱柱和色谱试纸进行分离和检测。
色谱柱是一种常见的分离工具,通过其内部填充的固定相材料,能够将混合物中的成分按照其亲和性和分子大小进行分离。
我们选择了硅胶G柱作为固定相材料,因为硅胶G柱对菠菜色素具有较好的亲和性。
通过使用无水乙醇作为洗脱剂,我们成功地将菠菜色素从硅胶G柱中洗脱出来。
在实验中,我们观察到菠菜色素呈现淡绿色。
这是因为菠菜色素主要由叶绿素和类胡萝卜素等成分组成,这些成分赋予了菠菜独特的颜色。
叶绿素是一种绿色的色素,具有光合作用的功能。
类胡萝卜素则是一类黄、橙、红等颜色的色素,具有抗氧化和免疫调节等作用。
菠菜色素不仅在食品工业中有广泛应用,还在医药和化妆品等领域发挥着重要作用。
菠菜色素富含抗氧化物质,能够有效清除自由基,延缓衰老和预防疾病。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇实验报告一:菠菜中提取叶绿素的方法比较1.引言叶绿素是一种重要的植物色素,它在光合作用中承担着捕获光能和转化化学能的重要角色。
菠菜是叶绿素含量较高的植物之一,因此本实验旨在比较不同方法提取菠菜中的叶绿素,探索最有效的提取方式。
2.材料与方法2.1 材料:- 新鲜菠菜叶片- 无水乙醚- 丙酮- 高速离心机- 比色皿2.2 方法:- 方法一:无水乙醚提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中,加入适量的无水乙醚,用摇床震动片刻,使叶绿素溶解于乙醚中,然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法二:丙酮提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中,加入适量的丙酮,用摇床震动片刻,使叶绿素溶解于丙酮中,然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法三:乙醇提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中,加入适量的乙醇,用摇床震动片刻,使叶绿素溶解于乙醇中,然后离心10分钟收集上层液体。
3.结果在三种提取方法中,通过观察可以发现,方法一和方法二提取的叶绿素溶液呈现绿色,而方法三提取的叶绿素溶液呈现黄绿色。
利用分光光度计测定三个试管中叶绿素溶液的吸光度,发现方法一和方法二提取的叶绿素吸光度较高,而方法三的吸光度较低。
4.讨论方法一使用无水乙醚作为提取溶剂,乙醚能有效溶解叶绿素,并且在离心过程中上层液体的分离效果较好。
方法二使用丙酮作为提取溶剂,丙酮也能有效溶解叶绿素,并且丙酮相对于乙醚来说更易于购买。
方法三使用乙醇作为提取溶剂,乙醇对叶绿素的溶解能力较差,导致提取的叶绿素溶液吸光度较低。
5.结论通过对菠菜中提取叶绿素的实验比较,我们发现使用无水乙醚和丙酮作为提取溶剂的方法能够较好地提取菠菜中的叶绿素,并且吸光度较高。
因此,在菠菜中提取叶绿素的实验中,建议使用无水乙醚或丙酮作为提取溶剂。
实验报告二:叶绿素在光合作用中的作用研究1.引言叶绿素是植物体内最重要的色素之一,它在光合作用中起着关键作用。
本实验旨在研究叶绿素在光合作用中的功能和重要性。
菠菜叶中色素的提取实验报告一、实验目的1、了解菠菜叶中所含色素的种类和化学性质。
2、掌握从菠菜叶中提取和分离色素的实验方法。
3、学习使用分光光度计测定色素溶液的吸光度。
二、实验原理菠菜叶中含有多种色素,如叶绿素 a、叶绿素 b、叶黄素和胡萝卜素等。
这些色素在有机溶剂中的溶解度不同,因此可以通过萃取的方法将它们分离出来。
叶绿素 a 和叶绿素 b 为吡咯衍生物,可溶于有机溶剂,如乙醇、丙酮等。
叶绿素 a 为蓝绿色,叶绿素 b 为黄绿色。
叶黄素和胡萝卜素属于类胡萝卜素,叶黄素为黄色,胡萝卜素为橙黄色,它们也能溶于有机溶剂。
根据不同色素在层析液中的溶解度不同,在层析过程中,溶解度大的色素随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度小的色素扩散得慢,从而将不同的色素分离开来。
三、实验材料与仪器1、材料:新鲜菠菜叶2、仪器:研钵、漏斗、玻璃棒、分液漏斗、容量瓶、分光光度计、滤纸、脱脂棉等。
3、试剂:无水乙醇、石油醚、丙酮、层析液(石油醚:丙酮=9:1)四、实验步骤1、提取色素称取 5g 新鲜菠菜叶,剪碎后放入研钵中,加入 5mL 无水乙醇、少许碳酸钙和石英砂,充分研磨成匀浆。
将研磨好的匀浆用漏斗过滤到分液漏斗中,用 5mL 无水乙醇冲洗研钵和漏斗,将滤液合并到分液漏斗中。
轻轻振摇分液漏斗,静置分层,放出下层的水相,保留有机相。
2、制备色素溶液将有机相转移到容量瓶中,用无水乙醇定容至 25mL,得到色素提取液。
3、色素的分离取一块干燥的滤纸,剪成 15cm×3cm 的长条,在一端剪去两角,在距离剪角一端 1cm 处用铅笔轻轻画一条横线。
用毛细吸管吸取少量色素提取液,在铅笔线处点样,每次点样后吹干,重复多次,使点样处形成一条细而直的色素线。
将点样好的滤纸放入装有层析液的层析缸中,层析液液面不能超过滤纸的铅笔线。
盖上盖子,进行层析。
当层析液前沿接近滤纸的上端边缘时,取出滤纸,用铅笔标记出色素带的位置。
4、色素的鉴定用分光光度计分别测定叶绿素 a、叶绿素 b、叶黄素和胡萝卜素溶液在不同波长下的吸光度,绘制吸光度波长曲线,确定最大吸收波长。
菠菜中叶绿体色素的提取分离及鉴定植物中叶绿体色素的提取、分离及鉴定一、实验目的 1.学习并掌握植物中叶绿体色素提取的原理和方法。
2.掌握色谱分离(柱层析)的原理和方法。
3.学习叶绿体色素的鉴定方法。
二、实验原理高等植物叶绿体色素主要有两类:叶绿素和类胡萝卜素。
叶绿素包括叶绿素a 和叶绿素 b,它们不溶于水,而溶于有机溶剂,如:乙醇、丙酮、乙醚、石油醚和氯仿等。
叶绿素 a 为蓝绿色、叶绿素 b 为黄绿色。
按照化学性质,叶绿素是叶绿酸的酯,能发生皂化反应。
类胡萝卜素是一类由8 个异戊二烯单位组成的,含有 40 个碳原子的化合物,不溶于水而溶于有机溶剂。
类胡萝卜素包括胡萝卜素和叶黄素两种,前者为橙黄色,后者为鲜黄色。
一般情况下,叶片中叶绿素与类胡萝卜素的比值约为 3:1。
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性,表现出一定的吸收光谱。
叶绿素吸收光量子而转变成激发态,激发态的叶绿素分子很不稳定,当它变回到基态时可发射出红光量子,因而产生荧光。
叶绿素的化学性质很不稳定,容易受强光的破坏,特别是当叶绿素与蛋白质分离以后,破坏更快,而类胡萝卜素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素,铜代叶绿素很稳定,在光下不易破坏。
柱色谱是分离、纯化与鉴定有机物的重要方法之一。
柱色谱按其分离原理最常用的有吸附色谱和分配色谱两种在吸附色谱中常用氧化铝、硅胶作为吸附剂固定相。
吸附柱色谱法是将吸附剂装在色谱柱内,将欲分离的混合样品配制成溶液,从色谱柱的上端缓缓加入柱内,然后选择极性适当的洗脱剂作流动相,使其以一定的速度通过色谱柱进行洗脱。
当预分离的混合物随着流动相通过色谱柱时,在固定相上反复发生吸附—解吸—再吸附—再解吸的过程。
受固定相吸附作用弱的组分在柱内移动速度快,受固定相吸附作用强的组分在柱内移动速度慢,最后达到相互分离的目的。
叶绿体色素与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。
叶绿体中色素的提取和分离方案一【实验原理】(1)叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中,所以,可以通过研磨法用丙酮提取叶绿体中的色素(若无丙酮亦可用酒精代替)。
(2)纸层析法:层析液(在60℃~90℃下分馏出来20份石油醚+ 2份丙酮+ 1份苯混合而成)是一种脂溶性很强的有机溶剂。
叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同(溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。
)这样,几分钟之后,叶绿体中的色素就在扩散过程中分解开来。
所以,可以用纸层析法分离出叶绿体中的色素。
【实验器材】新鲜的绿色菠菜叶片,干燥的定性滤纸,烧杯,研钵,小玻璃漏斗,脱脂棉,载玻片,剪刀,小试管,培养皿盖,药勺,量筒,天平。
丙酮,层析液,二氧化硅,碳酸钙。
【实验过程】(一)提取绿色叶片中的色素:1、用天平称取5g绿色的叶片,用剪刀剪碎,放入研钵中;2、向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙,再加入5ml丙酮。
由于丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。
为了尽量少的吸入丙酮,可以将一片滤纸盖在研钵上,纸的中心穿一个洞,将杵棒套入洞口进行研磨。
※为什么要加入少许少许二氧化硅和碳酸钙?加入二氧化硅是为了研磨的更充分;加入少许碳酸钙是为了保护叶绿体中的色素,为是由于碳酸钙可以中和液泡破裂后释放出的有机酸,调节液体的PH,防止或避免色素被破坏。
※为什么要加入丙酮?丙酮是有机溶剂可以使色素溶解其中,作为色素的溶剂。
3、将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤(漏斗基部放一小团脱脂棉)。
将滤液收集到一个小试管中,及时用塞将试管口塞紧。
(以防止滤液中的丙酮挥发)※是否可以用滤纸来代替脱脂棉?不可以,滤纸对光合色素具有较强的吸附能力,使滤液的色素分子减少。
(二)制备滤纸条:取一块预先干燥处理过的定性滤纸,将滤纸剪成长6cm、宽1cm的滤纸条,将滤纸条的一端剪去两角,并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
※在剪裁定性滤纸时,尽量注意双手不要接触纸面,以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸,影响色素在纸条上的扩散。
[论文]菠菜中色素的提取与分离菠菜中的色素提取与分离食品11—2班李薇 110424228 一、实验目的1 、通过对菠菜中色素的提取和分离,了解天然物质分离提纯方法,2 、通过柱色谱分离操作,加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素,绿,、胡萝卜素,橙,和叶黄素,黄,等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C HONMg) 557254和叶绿素b(CHONMg),其差别仅中一个甲基被b中的甲酰基所55764取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素(CH )是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体,4056即a-,β -γ-胡萝卜素,其β-异构体含量最多,也最重要。
在生物体内,β-体受酶催化氧化即形成维生素A。
目β-胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素A 使用,也可作为食品工业中的色素。
叶黄素(CHO)是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量40562通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
柱色谱,柱色谱法,又称层析法.是一种以分配平衡为机理的分配方法.色谱体系包含两个相,一个是固定相,一个是流动相.当两相相对运动时,反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的。
柱色谱是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术,将吸附剂填充到管中而使之成为柱状,这样的管状柱称为吸附色谱柱。
使用吸附色谱柱分离混合物的方法,称为吸附柱色谱。
这种方法可以用来分离大多数有机化合物,尤其适合于复杂的天然产物的分离。
分离容量从几毫克到百毫克级,所以,适用于分离和精制较大量的样品。
1. 装柱色谱柱的大小规格由待分离样品的量和吸附难易程度来决定。
菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2.了解菠菜中主要色素的基本性质,通过菠菜色素的提取和分离,了解天然物质分离提纯方法及原理3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法二、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素(绿色)、胡萝卜素(橙黄色)和叶黄素(黄色)等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C 55 H 72O 5N 4Mg) 和叶绿素 b(C 55H 7O 6N 4Mg),结构见图1。
二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素( C 40H 56 )是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体,即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素,其中β - 异构体含量最多,也最重要。
在生物体内,β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。
目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素 A 使用,也可作为食品工业中的色素。
叶黄素( C40H56O2 )是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与β - 胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a 和叶绿素b 的结构(叶绿素a :R=CH 3, 叶绿素b :R=CHO )H 3C CH 3RCH 3H 3CRH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素和叶黄素的结构(β-胡萝卜素:R =H , 叶黄素: R = OH ) 菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
修订实验三 菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取,了解天然物质的分离提纯方法;2、熟悉薄板层析的用途及用法;3、通过柱色谱分离操作,加深了解有机物色谱分离鉴定的原理;4、从菠菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。
二、实验原理 1、叶绿素简介绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。
它们在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
本实验从菠菜中提取上述各色素,并通过柱层析进行分离.叶绿素存在两种结构相似的形式--叶绿素a (C 55H 72O 5N 4Mg )以及叶绿素b (C 55H 70O 6N 4Mg),其差别仅是a 中一个甲基被b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍.尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素(C 40H 56)是具有长链结构的共轭多烯.它有三种异构体,即a —,β-和γ—胡萝卜素,其中β-异构体含量最多,也最重要.在生物体内,β-异构体受酶催化氧化即形成维生素A 。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素A 使用,也可作为食品工业中的色素。
叶黄素(C 40H 56O 2)是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a (R = CH 3)叶绿素b (R = CHO )H3C CH3R CH3H3C RH3C CH3CH3CH3CH3CH3β-胡萝卜素(R = H) 叶黄素(R = OH)H3C CH3CH3CH2OHCH3CH3维生素A菠菜中各色素的理化性质β—胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a和叶绿素b四种色素在叶绿体中的含量比约为2:1:3:1.(1)叶绿素a有四个甲基与卟吩核连接(R = -CH3)。
菠菜中色素的提取和分析(15)一、实验目的:(1)熟悉天然产物的分离和提纯方法;(2)掌握有机化合物的色谱鉴定、分离的操作方法。
二、实验原理绿色植物中含有叶绿素a(绿色)、叶绿素b(绿色)、胡萝卜素(橙色)和叶黄素(黄色)等多种天然色素;叶绿素颜色深,而胡萝卜素和叶黄素颜色很浅。
它们的分子结构不同,因此极性大小也有差别。
但色素易溶于有机溶剂,在水中溶解度很小。
因此,可以用有机溶剂如石油醚提取植物中的色素,然后用色谱法对提取液进行鉴定、分离。
三、实验仪器和试剂研钵、分液漏斗、广口瓶、玻璃板、量筒、点样毛细管、抽滤瓶、载玻片、旋转蒸发仪、圆底烧瓶、丙酮、石油醚、95%乙醇、乙酸乙酯、饱和氯化钠、无水硫酸钠、硅胶GF254,CMC水溶液四、实验步骤10g菠菜(无水),剪碎→加入30ml石油醚:乙醇(2:1)混合液→研磨碎→抽滤→滤液转移到分液漏斗→ 20ml饱和盐水,振摇、分层,除去水层→有机相用20ml水洗涤两次→无水Na2SO4干燥10分钟,过滤,浓缩(旋转蒸发仪)约2ml。
五、思考题(略)菠菜中色素的提取和分析(16)一、实验目的:(1)熟悉天然产物的分离和提纯方法;(2)掌握有机化合物的色谱鉴定、分离的操作方法。
二、实验原理绿色植物中含有叶绿素a(绿色)、叶绿素b(绿色)、胡萝卜素(橙色)和叶黄素(黄色)等多种天然色素;叶绿素颜色深,而胡萝卜素和叶黄素颜色很浅。
它们的分子结构不同,因此极性大小也有差别。
但色素易溶于有机溶剂,在水中溶解度很小。
因此,可以用有机溶剂如石油醚提取植物中的色素,然后用色谱法对提取液进行鉴定、分离。
三、实验仪器和试剂研钵、分液漏斗、广口瓶、玻璃板、量筒、点样毛细管、抽滤瓶、载玻片、旋转蒸发仪、圆底烧瓶、丙酮、石油醚、95%乙醇、乙酸乙酯、饱和氯化钠、无水硫酸钠、硅胶GF254,CMC水溶液四、实验步骤(1)薄层层析对提取液进行分析鉴定点样→配展开剂(展开剂A:石油醚-丙酮(4:1);展开剂B:石油醚-乙酸乙酯(3:2))→展开→计算Rf值。
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言:菠菜是一种常见的食材,它不仅味道鲜美,而且富含多种营养物质。
其中,菠菜叶中的色素成分具有重要的生物学和营养学意义。
本实验旨在通过提取和分离菠菜叶中的色素,探究其组成和结构。
一、实验材料与方法:1. 实验材料:菠菜叶、无水乙醇、正己烷、醋酸乙酯、石油醚、氯仿、硅胶薄层色谱板。
2. 实验步骤:(1)菠菜叶的提取:将菠菜叶洗净并切碎,加入适量的无水乙醇中,浸泡30分钟,使色素充分溶解。
然后用滤纸过滤,收集菠菜叶提取液。
(2)色素的分离:将菠菜叶提取液与正己烷进行液液分配,重复3次,使色素分配到正己烷层中。
然后将正己烷层收集,蒸发溶剂,得到色素提取物。
(3)色素的纯化:将色素提取物溶解于醋酸乙酯中,进行液液分配,重复3次,使色素分配到醋酸乙酯层中。
然后将醋酸乙酯层收集,蒸发溶剂,得到纯化后的色素。
(4)色素的分离:将纯化后的色素溶解于石油醚中,进行液液分配,重复3次,使色素分配到石油醚层中。
然后将石油醚层收集,蒸发溶剂,得到分离后的色素。
(5)色素的鉴定:将分离后的色素溶解于氯仿中,进行薄层色谱分析。
将硅胶薄层色谱板浸泡于氯仿中,然后将色素溶液滴于色谱板上,放入色谱槽中,进行上升式开发。
开发完毕后,用紫外灯照射,观察色谱板上的色素带。
二、实验结果与分析:经过提取、分离和纯化,成功地从菠菜叶中提取到了色素。
通过薄层色谱分析,我们观察到了色谱板上的色素带,根据色素带的位置和颜色,可以初步判断菠菜叶中含有叶绿素、类胡萝卜素等多种色素成分。
三、实验总结与思考:通过本次实验,我们成功地提取和分离了菠菜叶中的色素。
然而,我们只能初步判断色素成分的种类,对于具体的结构和含量还需要进一步的分析和研究。
此外,本实验采用的是传统的提取和分离方法,还可以尝试其他更先进的技术,如高效液相色谱等,以提高分离效果和准确性。
结语:菠菜色素的提取和分离实验为我们了解菠菜叶中的色素成分提供了基础。
菠菜色素提取实验报告菠菜色素提取实验报告引言:菠菜是一种常见的蔬菜,富含多种营养物质,其中包括一种被称为菠菜色素的物质。
菠菜色素具有丰富的抗氧化性质,对人体健康具有重要作用。
本实验旨在提取菠菜中的色素,并通过实验验证提取方法的有效性和色素的特性。
实验方法:1. 菠菜样品准备:选取新鲜的菠菜叶子,洗净并切碎,以便于提取色素。
2. 提取色素:将切碎的菠菜叶子放入搅拌器中,加入适量的乙醇,搅拌均匀后,过滤得到浸提液。
3. 分离色素:将浸提液倒入离心管中,进行离心分离,得到上层的菠菜色素液。
4. 色素纯化:将菠菜色素液转移到干净的容器中,加入适量的醋酸乙酯,轻轻搅拌后,过滤得到纯净的菠菜色素。
实验结果:通过实验,我们成功地提取到了菠菜中的色素。
菠菜色素呈现出深绿色的液体,具有一定的黏稠度。
经过纯化后,色素更加纯净,颜色更加鲜艳。
实验讨论:1. 提取方法的选择:本实验采用了乙醇作为提取剂,乙醇具有良好的溶解性,可以有效地提取菠菜中的色素。
此外,乙醇还能够保持色素的稳定性,不易发生降解。
2. 色素的稳定性:菠菜色素具有一定的稳定性,不易受到光照和氧化的影响。
这使得菠菜色素在食品工业中具有广泛的应用前景。
3. 色素的应用:菠菜色素可以用作食品添加剂,为食品增添颜色的同时,还具有抗氧化和抗炎作用,有助于保护人体健康。
4. 色素的安全性:菠菜色素是一种天然的色素,相比合成色素更加安全可靠。
然而,在应用过程中仍需注意用量控制,以免过量摄入对人体健康造成不良影响。
结论:通过本次实验,我们成功地提取到了菠菜中的色素,并验证了提取方法的有效性。
菠菜色素具有丰富的抗氧化性质,可以作为食品添加剂使用。
然而,色素的应用仍需谨慎,合理控制用量,以确保人体健康。
参考文献:1. 陈晓明,赵丽华,李建中. 菠菜色素的提取与分离[J]. 化学教育, 2016, 37(12): 95-98.2. 张玉华,李红梅,张建华. 菠菜色素的提取工艺研究[J]. 食品科学, 2019, 40(4): 116-119.。
竭诚为您提供优质文档/双击可除菠菜色素实验报告篇一:菠菜中色素的提取预习实验报告实验名称:菠菜中的色素提取一:实验目的:了解薄层色谱在有机物分离中的应用,掌握薄层色的基本原理;加强有机物分离提纯技术的训练。
二:实验基本原理:菠菜的叶片中含有叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)、叶黄素及胡萝卜素等天然色素。
叶绿素是绿色植物的主要色素,分子由脱镁叶绿素母环、叶绿酸、叶绿醇、甲醇、二价镁离子等部分构成。
高等植物中有两种叶绿素即叶绿素a和叶绿素b共存,叶绿素a为一蓝黑色固体粉末,在乙醇溶液中为蓝绿色,并有深红色荧光。
而叶绿素b为暗绿色固体粉末,其乙醇溶液为黄绿色,并有红色荧光。
叶绿素不溶于水,易溶于有机溶剂,常可用极性有机溶剂,例如丙酮、乙醇、乙酸乙酯等。
从植物匀浆中提取它。
叶绿素存在于植物细胞的叶绿体中,与类胡萝卜素、类脂物质及脂蛋白复合在一起,分布在叶绿体内的蝶形体的片层膜上。
胡萝卜素是一种橙色的天然色素,属于四萜类,为一长链共轭多烯。
有α、β、γ三种异构体,其中β异构体最多。
叶黄素是一种黄色色素,与叶绿素同存在与植物体内,是胡萝卜素的羟基衍生物,较易溶于乙醇,在石油醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性,可将它们从植物叶片中提取出来,并通过萃取、沉淀和色谱方法将它们分离出来。
色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同,或和其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组份分开。
薄层层析是一种微量、快速和简便的色谱方法。
由于各种化合物的极性不同,吸附能力不相同,在展开剂上移动,进行不同程度的解析,根据原点至斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值。
化合物的吸附能力与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较强。
在给定的条件下(吸附剂、展开剂、板层厚度等),化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的,即Rf值是化合物的物理常数,其大小只与化合物本身的结构有关,因此可以根据Rf值鉴别化合物。
实验4菠菜中色素的提取与分离【实验目的】1.学会用有机溶剂提取菠菜中的色素并进行分离,了解从植物中提取有机化合物的一般方法;2.学会根据物质的性质选择合适的溶剂,知道选用混合溶剂是提取物质的有效途径;3.了解利用纸色谱法分离物质的原理和操作。
【实验原理】菠菜中含有多种色素,如叶绿素(绿色)、胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)等。
1.菠菜中色素的提取叶绿素a、叶绿素b和胡萝卜素易溶于石油醚,叶黄素易溶于乙醇,石油醚和乙醇可以混溶。
因此,可以选择石油醚—乙醇混合溶剂来提取菠菜中的色素,然后用水洗去乙醇和少量易溶于水的杂质,这样就可得到色素的石油醚溶液。
2.色素的分离提取菠菜色素得到的石油醚溶液可用纸色谱法分离:将少量含有几种物质的溶液涂在滤纸条的一端,并在这一端用适当的溶剂(称为展开剂)润湿,在滤纸的毛细作用下,展开剂携带待分离的物质沿滤纸纤维向上移动。
由于不同的组分的移动速度不同,一段时间后,不同的组分移动的距离不同,从而达到将这些组分分离开来的目的,如下图所示。
这种分离方法称为纸色谱法,又叫纸上层析。
【实验器具】试剂:石油醚、乙醇,丙酮、无水硫酸钠、脱脂棉。
仪器:研钵、锥形瓶、漏斗、铁架台(带铁圈)、分液漏斗、大试管。
【实验过程】一、菠菜中色素的提取1.研磨:取10g菠菜切成小块,用研钵捣烂,装入锥形瓶中。
2.浸取:向锥形瓶中加入10mL石油醚—乙醇混合溶剂(体积比为1:1),塞上橡胶塞,振荡。
3.过滤:将小团棉花放在漏斗颈部,过滤浸取液(如图1)。
4.洗涤:将滤液移人分液漏斗,用10mL水洗涤两次,以除去乙醇及浸取液中的少量水溶性物质。
注意不要剧烈振荡,以防止乳化;静置分层(如图2),弃去下层(水—乙醇层),将上层(石油醚层)溶液移至干燥的小锥形瓶中。
注意:洗涤后,下层水层从下口放出,上层有机层从上口倒出。
5.干燥:加入少量无水硫酸钠,干燥,备用。
图1图2二、色素的分离1.裁纸:取一张滤纸裁成1.5cm×20cm的长方形,注意使滤纸纤维呈竖直走向。
有机实验-菠菜中色素的提取和分析
菠菜中色素的提取和分析是有机化学实验中的一个经典实验。
本实验主要是通过对菠
菜中的色素进行提取和分析,来了解天然色素的结构和性质。
实验步骤:
1.菠菜的准备
将新鲜的菠菜洗净后,去除根和水分,然后用手将菠菜叶子捏碎成小片状备用。
2.色素的提取
将捏碎的菠菜叶子放入料理机中,加入适量的酒精和石油醚,再开启料理机进行打浆,在打浆过程中注意随时观察,避免料理机出现卡顿的情况。
将打好的菠菜混合物过滤,将过滤得到的过滤液收集到干净的试管中,然后用滤纸进
行一次二次过滤,得到浅绿色的菠菜色素提取物。
3.色素的分离
4.色素的鉴定
将得到的菠菜色素溶液分别加入稀盐酸和稀碱液中,观察颜色变化,记录下来。
然后
将菠菜色素溶液加入小麦酰胺溶液中,搅拌均匀,观察颜色变化,记录下来。
实验原理:
本实验主要是利用了酒精、石油醚等有机溶剂的沸点差异,对菠菜中的色素进行了提取。
然后利用硅胶G的极性和吸附作用对菠菜色素进行了分离。
最后,通过加入稀盐酸、
稀碱液和小麦酰胺溶液来鉴定提取出来的色素种类和结构。
实验中所用到的酸和碱,可以将菠菜色素分解成不同的成分。
这些成分所表现出来的
颜色不同,可以通过色谱分析来确定其化学结构。
总结:
通过本实验,我们可以了解到菠菜中含有的天然色素,同时也可以学习到色素的分离
和分析技术。
此外,本实验还可以作为有机化学实验中的基础实验,为我们今后的学习和
研究提供了良好的基础。
菠菜叶中色素的提取实验报告一、实验目的1、学习从菠菜叶中提取色素的方法。
2、了解叶绿体中色素的种类和性质。
二、实验原理菠菜叶中的色素主要包括叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素。
这些色素在不同溶剂中的溶解度不同,因此可以利用有机溶剂将它们提取出来。
叶绿素 a 和叶绿素 b 是绿色的,易溶于有机溶剂如乙醇、丙酮等。
叶黄素是黄色的,胡萝卜素是橙黄色的,它们在有机溶剂中的溶解度也较高。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜菠菜叶2、实验仪器研钵、漏斗、玻璃棒、脱脂棉、量筒、烧杯、滤纸、毛细管、层析液(石油醚:丙酮:苯= 20:2:1)、天平四、实验步骤1、称取 5g 新鲜菠菜叶,剪碎后放入研钵中,加入少许二氧化硅和碳酸钙,再加入 10mL 无水乙醇,充分研磨成匀浆。
2、在漏斗中放置一层脱脂棉,将研磨后的匀浆倒入漏斗中进行过滤,收集滤液于烧杯中。
3、取一张干燥的滤纸,剪成10cm×2cm 的长条,在一端剪去两角,用毛细管吸取滤液,在距剪角一端 1cm 处沿铅笔线均匀地画一条滤液细线。
4、将滤纸放入装有层析液的层析缸中,层析液不能淹没滤液细线,盖上盖子。
5、观察层析液在滤纸上的扩散情况,待层析液前沿接近滤纸的另一端时,取出滤纸,晾干。
五、实验结果在滤纸条上可以看到四条不同颜色的色素带,从上到下依次为:胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素 a(蓝绿色)、叶绿素 b (黄绿色)。
六、结果分析1、色素带的宽窄反映了色素含量的多少。
叶绿素a 的色素带最宽,说明菠菜叶中叶绿素 a 的含量相对较高;叶绿素 b 的色素带较窄,含量相对较少。
2、色素带的位置反映了色素在层析液中的溶解度大小。
溶解度越大,扩散速度越快,位置越靠上;溶解度越小,扩散速度越慢,位置越靠下。
七、注意事项1、研磨时要充分,以保证色素充分提取。
2、过滤时要用脱脂棉过滤,不能用滤纸,以免吸附色素。
3、画滤液细线时要细、直、均匀,且重复多次,以保证色素含量足够。
菠菜中的色素提取、分离及鉴定、实验目的1. 进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2. 了解菠菜中主要色素的基本性质,通过菠菜色素的提取和分离,了解天然物质分离提纯方法及原理3. 掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素(绿色)、胡萝卜素(橙黄色)和叶黄素(黄色) 等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a (C 55 H72O 5N»Mg )和叶绿素b (C 55HzON 4Mg ),结构见图1。
二者差别仅是a 中一个甲基被b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金 属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素 a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素(C 40峠 6 )是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体,即 a , 3-和Y -胡萝卜素,其中 3-异构体含量最多,也最重要。
在生物体内, 3-体受酶催化氧化即形成维生素A 。
目前3-胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素A 使用,也可作为食品工业中的色素。
叶黄素(C40H56O2 )是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与3-胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
3-胡萝卜素和叶黄素的结构( 3胡萝卜素:R =H,H 3CH 3C CH 3CH 3 CH 3CH 3CH 3 H 3CCH 3叶黄素:R = OH )叶绿体CH 211CHRH 3CH 3CN NN Mg N叶绿素a 和叶绿素b 的结构(叶绿素 a : R=CH , 叶绿素b : R=CHO菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括3-胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a和叶绿素b四种色素,它们在叶绿体中的含量比约为2: 1: 3:1。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇从菠菜中提取叶绿素实验报告一【实验目的】1、通过绿色植物色素的提取和分离,了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作,加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg };胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯,有三种异构体;叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。
当提取时,从上到下颜色依次为:黄绿色,蓝绿色,黄色和橙色。
【实验仪器】研钵,色谱柱,丙酮,乙醇,乙醚,中性氧化铝,菠菜叶,烧杯,漏斗,玻璃棒,滤纸,剪刀,脱脂棉,纱布。
【实验步骤】1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶,用剪刀剪碎,放入研钵中研磨,研磨时放入少量碳酸钙,防止研磨过猛破坏叶绿素结构,研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中,加入30mL配好的乙醇乙醚溶液,盖上表面皿,防止有机溶剂蒸发。
按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间,填充色谱柱,在最下面垫入脱脂棉,再盖上一个小滤纸片,装入氧化铝至4/5处,再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中,转入分液漏斗,加入10mL水洗涤,除去水层(下层),再用10mL水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中,加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器,收拾实验室,打扫卫生。
【实验记录】虽然分层现象不是非常明显,但是还是可以看得见分层现象。
【结果与讨论】1、做这个实验的时候,我觉得不应该用纱布挤干,因为个人感觉很多色素都被纱布吸走了,导致后来的实验现象没有很明显,经过对比,没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。
2、有机溶剂往往比较容易挥发,所以加入后要盖上表面皿。
3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显,因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的,15分钟足矣。
修订实验三 菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取,了解天然物质的分离提纯方法;2、熟悉薄板层析的用途及用法;3、通过柱色谱分离操作,加深了解有机物色谱分离鉴定的原理;4、从菠菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。
二、实验原理1、叶绿素简介绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。
它们在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
本实验从菠菜中提取上述各色素,并通过柱层析进行分离。
叶绿素存在两种结构相似的形式——叶绿素a (C 55H 72O 5N 4Mg )以及叶绿素b (C 55H 70O 6N 4Mg ),其差别仅是a 中一个甲基被b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素(C 40H 56)是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体,即a-,β-和γ-胡萝卜素,其中β-异构体含量最多,也最重要。
在生物体内,β-异构体受酶催化氧化即形成维生素A 。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素A 使用,也可作为食品工业中的色素。
叶黄素(C 40H 56O 2)是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
N N N N H 3C CHCH 2R CH 2CH 3CH 3H 3C O CO 2CH 3CH 2CH 2O O CH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a (R = CH 3) 叶绿素b (R = CHO )H3C CH3R CH3H3C RH3C CH3CH3CH3CH3CH3β-胡萝卜素(R = H)叶黄素(R = OH)H3C CH3CH3CH2OHCH3CH3维生素A菠菜中各色素的理化性质β-胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a和叶绿素b四种色素在叶绿体中的含量比约为2:1:3:1。
(1)叶绿素a有四个甲基与卟吩核连接(R = -CH3)。
蜡状蓝黑色微小晶体。
熔点117~120 o C。
溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、二硫化碳和苯,不溶于石油醚。
其乙醇溶液是蓝绿色,并有深红色荧光。
(2)叶绿素b有三个甲基和一个醛基与卟吩核连接(R = -CHO)。
蜡状蓝黑色微小晶体。
熔点120~130 o C。
溶于乙醇和乙醚,难溶于石油醚。
乙醚溶液有亮绿色。
其它有机溶剂的溶液通常是绿色至黄绿色,并有红色荧光。
可用作肥皂、脂肪、油蜡、食品、化妆品和医药用的无毒着色剂。
由绿叶用乙醇萃取而制得,也可用化学方法合成。
(3)胡萝卜素胡萝卜素有多种异构体,是四萜类化合物。
α-胡萝卜素为红色结晶。
熔点187 o C。
旋光度+385°(c=0.08,苯)。
溶于乙醚、苯、氯仿。
β-胡萝卜素为红棕色结晶,熔点181o C,溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚。
γ-胡萝卜素为紫色棱形结晶,熔点177.5 o C,溶于苯、氯仿。
α-,β-和γ-胡萝卜素常共存于许多植物中,β-胡萝卜素含量最高。
β-胡萝卜素在植物中几乎总是和叶绿素共存,含量最多的是胡萝卜、棕榈油以及多种绿叶植物。
用做食物色素、保健食品,以及作防晒化妆品成分,还可用作制造维生素A的原料。
(4)叶黄素又称胡萝卜醇(carotenol)。
一类羟基类胡萝卜素的衍生物。
以乙醚加甲醇精制,得黄色穗状物。
具金属光泽的结晶。
熔点183 o C。
不溶于水,溶于油性溶剂。
光稳定性较好。
主要与叶绿素、胡萝卜素共存于绿色植物的叶和花中。
在天然黄色素中,它的价格较贵,可用于食品着色。
也有添加于禽饲料中,使禽蛋蛋黄增进黄色。
2、色谱原理色谱法利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组分分开。
薄层色谱属于固-液吸附层析的类型。
通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层,作为固定相,以有机溶剂作为流动相。
实验时,把要分离的混合物滴在薄层板的一端,用适当的溶剂展开。
当溶剂流经吸附剂时,由于各物质被吸附的强弱不同,就以不同的速率随着溶剂移动。
展开一定时间后,让溶剂停止流动,混合物中各组分就停留在薄层板上显示出一个个色斑的色谱图。
若各组分无色,可喷洒一定的显色剂使之显色。
混合物中各物质在薄板上随溶剂移动的相对距离称为比移值(R f 值)。
距离溶剂前沿至原点中心的点中心的距离溶质最高浓度中心至原=f R 如图1中:()25.0120.31==cm cm R f 化合物 ()70.0124.82==cm cm R f 化合物图1 薄层色谱效果图(a )原板,(b )已展开层析板在一定条件下,各物质具有一定的R f 值。
不同物质在相同条件下,具有不同的R f 值。
因此,可利用R f 值对物质进行定性鉴定。
但物质的R f 值常因吸附剂的种类和活性、薄层的厚度、展开剂及温度等的不同而异。
所以在鉴定样品时,常用已知成分作对照试验,在同一个薄层板上进行层析,然后通过R f 值的比较,对物质作定性鉴定。
根据斑点的面积大小和颜色的深浅的标准物的对照下还可进行定量。
化合物的吸附性与其极性成正比,化合物分子中含有极性较大的基团时吸附性也较强。
展开剂(溶剂)的极性越大,则对化合物的洗脱力越大,则R f 越大(如果样品在溶剂中有一定的溶解度)。
柱层析技术也称柱色谱技术。
一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相,将待分离物质混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱,溶剂组成流动相。
在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配,将不同物质组分逐一分离。
本实验利用有机溶剂将菠菜中的色素浸提出来,利用柱层析和薄层层析法将色素分离开来,根据各色素的颜色、分子极性与R f值的关系、吸收光谱、荧光对分离出的色素进行鉴定归属,讨论结构对Rf值、吸收光谱的影响。
三、主要试剂及仪器新鲜脱水菠菜、石油醚、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、硅胶(柱层析用)、层析柱、层析板、层析缸、剪刀、研钵、烧杯、天平、点样毛细管、锥形瓶、玻璃棒、洗耳球、布氏漏斗、滤纸、梨形分液漏斗、点样瓶、紫外灯。
四、实验步骤1、色素的提取:称取5克新鲜的脱水菠菜,用剪刀剪碎,放在锥形瓶中,加入30 mL 2﹕1(v/v)的石油醚和乙醇混合溶剂,浸没菠菜叶片,用玻棒搅动数分钟,以利于菠菜叶的细胞破裂,色素浸出。
布氏漏斗抽滤,将菠菜汁转入分液漏斗,分别用等体积的饱和食盐水和蒸馏水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇(洗涤时要轻轻旋荡,以防止产生乳化)。
弃去水-乙醇层,石油醚层用无水硫酸钠干燥。
2、薄层层析将上述的萃取液用毛细管点在硅胶G 的预制板上,小心放入预先加好选定展开剂石油醚-乙酸乙酯(3:2)的层析缸中,待展开剂上升至规定高度时,取出层析板在空气中晾干,用铅笔做出标记,测量各色斑及溶剂前沿到原点的距离,并计算比移值Rf。
3、柱层析:在层析柱下端塞入少许脱脂棉,称取8g硅胶加入30 mL的石油醚进行搅拌后小心加入层析柱中,小心打开柱下旋塞,保持石油醚高度不变,留下的硅胶在柱子中堆积。
必要时用洗耳球在层析柱的周围敲击,使吸附剂填装地更平整致密。
柱中溶剂面,由下端旋塞控制,不使溢满,更不能让溶剂液面低于硅胶表面。
装完后,打开下端旋塞,放出溶剂,直到硅胶表面剩下1-2 mm高为止(任何情况下,硅胶表面不得露出液面)。
在硅胶上面小心的加入少量石英砂。
将干燥后的萃取液倾壁法导入100 mL圆底烧瓶中,在旋转蒸发仪上浓缩至剩余约1 mL时,将浓缩液小心地从柱顶部加入。
加完后打开活塞,让液面下降到柱中砂层,关闭活塞,加几滴石油醚冲洗内壁,打开活塞,使液面下降如前。
在柱顶小心加入约1.5-2 cm 高度的石油醚-乙酸乙酯(5:1)洗脱剂,层析即开始进行。
当第一个有色成分即将滴出时,另取一洁净的锥形瓶收集,得黄色溶液,即胡萝卜素。
(溶剂10 mL)。
将洗脱剂换成3:1的石油醚-乙酸乙酯混合液(溶剂:20 mL),继续洗脱可得到第二色带的黄绿色溶液,即叶绿素a。
然后再用3:2的石油醚-乙酸乙酯(溶剂:10 mL)进行洗脱,继续洗脱后可得到叶黄素。
五、实验数据记录溶剂前沿至原点中心的距离/cm:菠菜叶片色素色谱分析数据六、注意事项1、萃取时不要剧烈振荡,以防止发生乳化现象。
2、为了保持柱子的均一性,使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的,否则当柱中溶剂或溶液流干时,就会使柱身干裂,影响渗透和显色的均一性。
因此要保证整个装样过程中溶剂要高于硅胶的表面。
3、层析柱填装紧密与否,对分离效果很有影响,若各部分松紧不匀,会影响渗透速度和显色的均匀。
七、思考与讨论1. 薄层的展开为什么要在密闭容器中?2. 点样时如样品斑点过大有什么坏处?若将样品斑点浸入展开剂中会有什么后果?3. 比较叶绿素、胡萝卜素、叶黄素三种色素的极性,说明为什么胡萝卜素在氧化铝中移动最快?4. 常用的薄层色谱的显色剂有哪些?。