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生物化学实验

生物化学实验
生物化学实验

生物化学实验讲义

化学工程与技术学院

基础部

实验一酪蛋白得制备

一、目得

学习从牛乳中制备酪蛋白得原理与方法。

二、原理 .

牛乳中主要得蛋白质就是酪蛋白,含量约为35g/L。酪蛋白就是一些含磷蛋白质得混合物,等电点为4、7。利用等电点时溶解度最低得原理,将牛乳得pH调至4、7时,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯得酪蛋白。

三、器材

1 、离心机 2、.抽滤装置

3、精密pH试纸或酸度计

4、电炉

5、烧杯

6、温度计 .

四、试剂与材料

1、牛奶 2500mL

2、95%乙醇 1200mL

3、无水乙醚 1200mL

4、0、2mol/L pH 4、7醋酸—醋酸钠缓冲液 3000mL

5、.乙醇—乙醚混合液2000mL

五、操作

1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预

热至40℃、pH 4、7得醋酸缓冲液100 mL。用精密pH试纸或酸度计调pH至4、7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3 000r/min)。弃去清液,得酪蛋白粗制品。

2、 用水洗沉淀3次,离心10分钟(3000r /min),弃

去上清液。

3、 在沉淀中加入30mL 乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊

液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉

淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次,抽干。

4、 将沉淀摊开在表面皿上,风干;得酪蛋白纯晶。

5、 准确称重,计算含量与得率。

含量:酪蛋白g /100mL 牛乳(g %)

得率:%100 理论含量

测得含量 思考题

1、制备高产率纯酪蛋白得关键就是什么?

实验二 小麦萌发前

后淀粉酶活力得比较

一、目得

1、学习分光光度计得原理与使用方法。

2、学习测定淀粉酶活力得方法。

3、了解小麦萌发前后淀粉酶活力得变化。

二、原理

种子中贮藏得糖类主要以淀粉得形式存在。淀粉酶

能使淀粉分解为麦芽糖。

2(C 6H 10O 5)n +nH 2O

nC 12H 22O 11

麦芽糖有还原性,能使3,5---二硝基水杨酸还原成

棕色得3-氨基-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计测

定。

OH COOH NO 2O 2N OH

COOH

O 2N NH 2

3,5 —二硝基水杨酸还原反应

(棕色) 休眠种子得淀粉酶活力很弱,种子吸胀萌动后,酶

活力逐渐增强,并随着发芽天数增加而增加。

本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力得变化。

三、器材

1、25mL刻度试管

2、吸管

3、离心管

4、乳钵

5、分光光度计

6、恒温水浴

7、离心机

四、试剂与材料

1、小麦种子

2、o、1%标准麦芽糖溶液

精确称量100mg麦芽糖,用少量水溶解后,移入100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度。

3、pH6、9,0、02mol/L磷酸缓冲液

0、2mol/L磷酸二氢钾67、5mL与0、2mol/L 磷酸氢二钾82、5混合,稀释10倍。

4、1%淀粉溶液

1g可溶性淀粉溶于100mL0、02mol/L磷酸缓冲液中,其中含有0、0067mol/L氯化钠。

5、1%3,5—二硝基水杨酸试剂

将1、00g3,5—二硝基水扬酸溶于20ml 2M L1NaOH 溶液与50ml水中,加入30g酒石酸钾钠定容至100ml。

6、1%氯化钠溶液

五、实验操作

1、种子发芽小麦种子浸泡

2、5小时后,放入25℃恒温箱内或在、室温下发芽。

2、酶液提取取发芽第3或第4天得幼苗15株,放入乳钵内,加入1%氯化钠溶液10mL,用力磨碎。在室温下放置20分钟,搅拌几次。然后将提取液离心(1500r/min)6—7分钟。将上清液倒人量筒,测定酶提取液得总体积。进行酶活力测定时,用缓冲液将发芽第3或第4天得幼

苗稀释10倍。

取干燥种子15粒作对照(提取步骤同上)。

3、酶活力测定

(1)取25mL刻度试管4支,编号。按下表要求加入各试剂(各试剂须在25℃预热10分钟)

将各管混匀,放在25℃水浴中,保温3分钟后,立即向各管加入1%3,5—二硝基水杨酸溶液2mL。

(2)取出各试管,放入沸水浴加热5分钟。冷却至室温,加水稀释至25mL。并混匀。在A500nm处测定各管得吸光度。

4、计算

根据溶液得浓度与光吸收值成正比得关

系,标准标准酶酶A C A C ?=

本实验规定:25℃时3min 内水解淀粉释放1mg 麦芽

糖所需得酶量为1个酶活力单位(u)。酶活力计算公式为:酶酶酶酶活力n V C ??=

式中:C 酶 酶液麦芽糖得浓度,V 酶 提取酶液得总体积,n 酶酶液稀释倍数。

思考题

1、 为什么此酶提纯整个过程在0—5条件下进行?

而测酶得活力时要在25预保温?反应后又放入沸水

浴中?

2、 实验结果说明什么?

实验三 纸层析法分离鉴定氨基酸

一、目得

通过氨基酸得分离,学习纸层析法得基本原理及操作方法。

二、原理

纸层析法就是用滤纸作为惰性支持物得分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂与水组成。

物质被分离后在纸层析图谱上得位置就是用R f 值(比移)

来表示得: …

R f ==原点到溶剂前沿的距离离原点到层析点中心的距在一定得条件下某种物质得只R 值就是常数。R f 析温度等因素有关。法分离氨基酸。

三、器材

1、层析缸

2、毛细管

3、喷雾器

4、培养皿

5、层析点原点

层析滤纸(新华一号)

四、试剂

1、扩展剂 650mL

4份水饱与得正丁醇与1份醋酸得混合物。将20mL 正丁醇与5mL冰醋酸放入分液漏斗中,与15mL水混合,充分振荡,静置后分层,放出下层水层。取漏斗内得扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂,其余得倒人培养皿中备用。

2、氨基酸溶液 0、5%得赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们得混合液(各组份浓度均为0、5%)。各5mL

3、显色剂 50~100mL

0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。

五、操作

1、将盛有平衡溶剂得小烧杯置于密闭得层析缸中。

2、取层析滤纸(长22cm、宽14 cm)一张。在

线,在此直线上每间隔2cm作一记号如图。

3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在

这6个位置上,干后再点一次。每点在纸上扩

散得直径最大不超过3 mm。

4、扩展用线将滤纸缝成筒状,纸得两边不能接触。将盛有约20mL扩展剂得培养皿迅速置于密闭得层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中(点样得一端在下,扩展剂得液面需低于点样线 1cm)。待溶剂上升15—20 cm时即取出滤纸,用铅笔描出溶剂前沿界线,自然干燥或用吹风机热风吹干。

5、显色用喷雾器均匀喷上O、1%茚三酮正丁醇溶液,然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。

6、计算各种氨基酸得只R f值。

思考题

1、何谓纸层析法?

2、何谓片R f值?影响R f值得主要因素就是什么?

3、怎样制备扩展剂?

3、层析缸中平衡溶剂得作用就是什么?

实验四酶得特性

一、目得

加深对酶得性质得认识。

二、内容

本实验由温度对酶活力得影响;pH对酶活力得影响;酶得激活剂及抑制剂;酶得专—性4组实验组成。

(一)温度对酶活力得影响

1、原理

酶得催化作用受温度得影响。在最适温度下,酶得反应速度最高。大多数动物酶得最适温度为37-40℃,植物酶得最适温度为50~60℃。

酶对温度得稳定性与其存在形式有关。有些酶得干燥制剂,虽加热到100℃,其活性井无明显改变,但在100℃得溶液中却很快地完全失去活性。

低温能降低或抑制酶得活性,但不能使酶失活。

2、器材

(1)试管及试管架(2)恒温水浴(3)冰浴(4)沸水浴

3、试剂与材料

(1)0、2%淀粉得0、3%氯化钠溶液 150mL需新鲜配制

(2)稀释200倍得唾液 50mL

用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,再含一口蒸馏水,半分钟后使其流入量筒并稀释200倍(稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整),混匀备用。

(3)碘化钾—碘溶液 50mL

将碘化钾20g及碘l0g溶于100mL水中。使用前稀释10倍。

4、操作

淀粉与可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子得大小, 遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单得糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水解得程度可由水解混合物遇碘呈现得颜色来判断。

号试管放人冰水中。10分钟后取出(将2号管内液体分为两半),用碘化钾—碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解得程度。记录并解释结果,将2号管剩下得一半溶液放人37℃水浴中继续保温10分钟后,再用碘液实验,结果如何?

(二)pH对酶活性得影响

1、原理

酶得恬力受环境pH得影响极为显著。不同酶得最适pH 值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性得影响,唾液淀粉酶得最适pH约为6、8。

2.器材

(1)试管及试管架 (2)吸管 (3)滴管 (4)50mL 锥形瓶 5)恒温水浴3、试剂与材料

(1)新配制得溶于0、3%氯化钠得0、5%淀粉溶液250 mL

(2)稀释200倍得新鲜唾液 100mL

(3)0、2mol/L磷酸氢二钠溶液 600mL

(4)0、1 mol/L柠檬酸溶液 400Ml

(5)碘化钾—碘溶液 50mL

(6)pH试纸 pH=5、pH=5、8、pH=6、8、pH=8四种

4、操作

取4个标有号码得50mL锥形瓶。用吸管按下表添加0、2mol/L磷酸氢二钠溶液与0、1 mol/L柠檬酸溶液以制备pH5、0~8、0得4种缓冲液。

号码得试管中,随后于每个试管中添加0、5%淀粉溶液2 mL与稀释200倍得唾液2mL。向各试管中加入稀释唾液得时间间隔各为1分钟。将各试管中物质混匀,并依次置于37℃恒温水浴中保温。

待向第4管加入唾液2分钟后,每隔1分钟由第3管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1小滴碘化钾—碘溶液,检验淀粉得水解程度。待混合液变为棕黄色时,向所有试管依次添加1—2滴碘化钾—碘溶液。添加碘化钾—碘溶液得时间间隔,从第1管起,亦均为1分钟。

观察各试管中物质呈现得颜色,分析pH对唾液淀粉酶活性得影响。

三)唾液淀粒酶得活化与抑制

1、原理

酶得活性受活化剂或抑制剂得影响。氯离子为唾液淀粉酶得活化剂,铜离子为其抑制剂。

2、器材

(1)恒温水浴 (2)试管及试管架

3、试剂与材料

(1)0、1%淀粉溶液 150mL (2)稀释200倍得新鲜唾液 150mL

(3)1%氯化钠溶液 50mL (4)1%硫酸铜溶液50mL

(5)1%硫酸钠溶液 50mL (6)碘化钾—碘溶液 100mL

4、操作

(四)酶得专一姓

1、原理

酶具有高度得专一性。本实验以唾液淀粉酶与蔗糖酶对淀粉与蔗糖得作用为例,来说明酶得专一性。淀粉与蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性得麦芽糖,但不能催化蔗糖得水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖与果糖,但不能催化淀粉得水解。用Benedict试剂检查糖得还原性。

2、器材 .

(1)恒温水浴 (2)沸水浴 (3)试管及试

管架

3、试剂与材料

(1)2%蔗糖溶液 150mL

(2)溶于0、3%氯化钠得1%淀粉溶液 150mL 需新鲜配制

间隔各为1分钟。将各试管中物质混匀,并依次置于37℃恒

温水浴中保温。

(3)稀释200倍得新鲜唾液 100mL

(4)蔗糖酶溶液 100mL

将啤酒厂得鲜酵母用水洗涤2~3次(离心法),然后放在滤纸上自然干燥。取干酵母100 g,置于乳钵内,添加适量蒸馏水及少量细沙,用力研磨提取约1小时,再加蒸馏水使总体积约为原体积得10倍。离心,将上清液保存于冰箱中备用。

(5)Benedict氏试剂 200 mL

无水硫酸铜17、4 g溶于100 mL热水中,冷却后稀释至150mL。取柠檬酸钠173g,无水碳酸钠100g与600 mL 水共热,溶解后冷却并加水至850 mL。再将冷却得150 mL 硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。

4、操作

(1)淀粉酶得专一性

芽糖酶)。

思考题

1、什么就是酶得最适温度及其应用意义?

2、什么就是酶反应得最适pH?对酶活性有什么影响?

3、什么就是酶得活化剂?

4、什么就是酶得抑制剂?与变性剂有何区别?

5、本实验结果如何证明酶得专一性?

实验五菜花中核酸得分离与鉴定

一、目得

初步掌握从菜花中分离核酸得方法,与RNA、DNA得定性检定。

二、原理

用冰冷得稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆,以除去酸溶性小分子物质,再用有机溶剂,

如乙醇、乙醚等抽提,去掉脂溶性得磷脂等物质。最后用浓盐溶液(10%氯化钠溶液)与0、5 mol/L高氯酸(70℃)分别提取DNA与RNA,再进行定性检定。

由于核糖与脱氧核糖有特殊得颜色反应,经显色后所呈现得颜色深浅在一定范围内与样品中所含得核糖与脱氧核糖得量成正比,因此可用此法来定性、定量测定核酸。

1、核糖得测定测定核糖得常用方法就是苔黑酚(即3,5—二羟甲苯法)。当含有核糖得RNA与浓盐酸及3,5—二羟甲苯在沸水浴中加热10—20分钟后,有绿色物产生,这就是因为RNA脱嘌呤后得核糖与酸作用生成糠

醛,后者再与3,5—二羟甲苯作用产生绿色物质。

DNA、蛋白质与粘多糖等物质对测定有干扰作用。

2.脱氧核糖得测定测定脱氧核糖得常用方法就是二苯胺法。含有脱氧核糖得DNA在酸性条件下与二苯胺在沸水浴中共热10分钟后,产生蓝色。这就是因为DNA 嘌呤核苷酸上得脱氧核糖遇酸生成ω—羟基—6—酮基戊醛,它再与二苯胺作用产生蓝色物质。

100℃

DNA+二苯胺试剂蓝色物

此法易受多种糖类及其衍生物与蛋白质得干扰。

上述两种定糖得方法准确性较差,但快速、简便,能鉴别DNA与RNA,就是检定核酸、核苷酸得常用方法。

三、器材

1.恒温水浴

2.电炉 3,离心机 4.布氏漏斗装置

5.吸管

6.烧杯

7.量筒

8.剪刀

四、试剂与材料

1、新鲜菜花

2、95%已醇 600 mL

3、丙酮 400 mL

4、5%高氯酸溶液 200 mL

5、0、5mo1/L高氯酸溶液 200 mL

6、10%氯化钠溶液 400 mL

7、标准RNA溶液(5 mg/l00mL) 50mL

8、标准DNA溶液(15 mg/100mL) 50mL 9.粗氯化钠 250g

10.海砂 5 g 11.二苯胺试剂 60 mL

将1 g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加入2、75mL 浓硫酸(置冰箱中可保存6个月。使用前,在室温下摇匀)。

12.三氯化铁浓盐酸溶液 25 mL

13.苔黑酚乙醇溶液 200 mL

1、核酸得分离

(1)取菜花得花冠20g,剪碎后置于研钵中,加入20mL95%乙醇与400 mg海砂,研磨成匀浆。然后用布氏漏斗抽滤,弃去滤液。

(2)滤渣中加入20mL丙酮,搅拌均匀,抽滤,弃去滤液。

(3)再向滤渣中加入20mL丙酮,搅拌5分钟后抽干(用力压滤渣,尽量除去丙酮)。

(4)在冰盐浴中,将滤渣悬浮在预冷得20mL 5%高氯酸溶液中。搅拌,抽滤,弃去滤液。

(5)将滤渣悬浮于20 mL 95%乙醇中,抽滤, 弃去滤液。

(6)滤渣中加人20 mL丙酮,搅拌5分钟,抽滤至于,用力压滤渣尽量除去丙酮。

(7)将干燥得滤渣重新悬浮在40 mL 10%氯化钠溶液中。在沸水浴中加热15分钟。放置,冷却,抽滤,留滤液。并将此操作重复进行一次。将两次滤液合并,为提

取物一。

(8)将滤渣重新悬浮在20mL 0、5 mol/L高氯酸溶液中。加热到70℃、保温20分钟(恒温水浴)后抽滤,留滤液(提取物二)。·

2.RNA,DNA得定性检定

1.核酸分离时为什么要除去小分子物质与脂类物质?本实验就是怎样除掉得?

2.实验中呈色反应时RNA为什么能产生绿色复合物?DNA产生

蓝色物质?

实验六紫外分光光度法测定核酸得含量

一、目得

1、了解紫外分光光度计得基本原理与使用方法。

2、学习用紫外分光光度法测定核酸含量得原理与操作方法。

二、原理

核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光。RNA与DNA得紫外吸收高峰在A260nm波长处。一般在A260nm波长下,每mL含1

μgDNA溶液得光吸收值约为0、020,每mL含1

μgRNA溶液得光吸收值约为0、022。故测定未知浓度RNA或DNA溶液A260nm波长得光吸收值即可计算出其中核酸得含量。此法操作简便,迅速。若样品内混杂有大量得核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光得物质,则测定误差较大,故应设法预先除去。

三、器材

1、分析天平

2、离心机

3、容量瓶

4、紫外分光光度计

5、吸管

6、冰浴或冰箱

四、试剂

1、5%~6%氨水

2、钼酸铵—高氯酸试剂(沉淀剂) 如配制200mL 可在193mL蒸馏水中加入7mL 70%高氯酸与0、5g钼酸铵。

五、操作

1、用分析天平准确称取待测得核酸样品500 mg,加少量蒸馏水调成糊状,再加入少量得水稀释。然后用5%~6%氨水调至pH7,定容到50mL。

2、取2支离心管,向第一支管内加人2mL样品溶液与2mL蒸馏水;向第二支管内加入2mL样品溶液与2mL

沉淀剂,以除去大分子核酸作为对照。混匀。在冰浴或冰箱中放置30分钟后离心(3000 r /min,10分钟)。从第一管与第二管中分别吸取0、5mL 上清液,用蒸馏水定容到50mL 。

用光程为1cm 得石英比色杯,于260mn 波长处测其光吸收值(A 1与A 2)。

六、计算

为光吸收值)

()

样品浓度(A mL g mL g A A RNA DNA 100/)/()022.0.(02.0)%(21?-=μμ mL g mL g mL mg /5010105.05

.050245050046μμ=?=??=样品浓度 如果已知待测得核酸样品不含酸溶性核苷酸或可透析得低聚多核苷酸,即可将样品配制成一定浓度得溶液(20~50μg/mL )在紫外分光光度计上直接测定。

实验七 总氮量得测定—凯氏定氮法

一、 目得

学习凯氏定氮法得原理与操作技术。

二、 原理

常用凯氏定氮法测定天然有机物(如蛋白质、核酸及氨基酸)得含氮量。含氮得有机物与浓硫酸共热时,其中得碳氢元素被氧化成二氧化碳与水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。

但就是,此反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液得沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应得进行。甘氨酸得消化过程表示如下

浓碱可使消化液中得硫酸铵分解,游离出氨,借

水蒸气将产生得氨蒸留到一定量、一定浓度得硼酸溶液中,硼酸吸收氨后使溶液中得氢离子浓度降低,然后用

标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来得氢离子浓度为止,最后根据使用得标准酸得摩尔数计算出待测物中得

总氮量。

三、仪器

1、50 mL消化管或100 mL凯氏烧瓶

2、改进型凯氏定氮仪

3.50 mL容量瓶

4.3 mL微量滴定管

5.分析天平

6.烘箱

7.电炉

8.1000mL

蒸馏烧瓶

9、小玻璃珠 10.远红外消煮炉

四、试剂

1、消化液(过氧化氢:浓硫酸:水二3:2:1)

200mL

2.粉末硫酸钾—硫酸铜混合物 16g

K2S04与CuS04·5H20以3:1配比研磨混合。

3.30%氢氧化钠溶液 1 000mL

4.2%硼酸溶液 500mL

5.标准盐酸溶液(约0.01 mol/L) 600mL

6.混合指示剂(田氏指示剂) 50mL

由50mL 0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200mL 0、1%甲基红

乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。这种指示剂

酸性时

为紫红色,碱性时为绿色。变色范围很窄且灵敏。

7.市售标准面粉与富强粉、各2g

五、操作方法

改进型凯氏定氮仪

改进型凯氏定氮装置就是在传统凯氏定氮装置得结

构基础上改装而成,其特点就是将蒸汽发生器、蒸馏器

与冷凝器组成一个整体,体积小,安装容易,操作简便。改进型凯氏蒸馏装置得结构如图所示。

图改进型凯氏蒸馏装置

1、水蒸汽发生器

2、反应室 3.水蒸汽排气孔 4.排水排气孔

5、外源水入口 6.进样口 7.加样漏斗 8.冷凝器 9.冷凝器出口

10、自来水入口 11.通气室出口 13、通气室出口 14.排水柱

15.排水柱入口 16.排水柱入口 17、冷凝水与废水出口①②③自由夹

可分成3部分来叙述:

(1)水蒸汽发生器与反应室水蒸汽发生器有3个开口,3、4、5,反应室有1个开口,6。

2)冷凝器与通气室冷凝器有2个开口,9、10,通气室有有2个开口,12、13

(3)排水柱排水柱有3个开口,15、16、17。

安装时,先将主体部分固定在支架上,其底部放上电炉。然后将5与13;4与16;12与15;6与7用橡皮管连接,并放上自由夹。最后长橡胶管连接进水口10与出水口

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2.样品处理

某一固体样品中得含氮量就是用l00g该物质(干重)中所含氮得g数来表示(%)。因此在定氮前,应先将固体样品中得水分除掉。一般样品烘干得温度都采用105℃,因为非游离得水都不能在100℃以下烘干。

在称量瓶中称人一定量磨细得样品,然后置于105℃得烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放入干燥器内,待降至室温后称重,按上述操作继续烘干样品。每干燥1小时后,称重—次,直到两次称量数值不变,即达恒重。

精确称取0、1g左右得干燥面粉作为本实验得样品。

3.消化

取4个100 mL凯氏烧瓶或50mL消化管并标号。各加1颗玻璃珠,在1及2号瓶中各加样品0、1g,催化剂(K2S04—CuS04·5H20)200 mg,消化液5 mL。注意加样品时应直接送人瓶底,而不要沾在瓶口与瓶颈上。在3及4号瓶中各加0、1 mL蒸馏水与与1及2号瓶相同量得催化剂与浓硫酸,作为对照,用以测定试剂中可能含有得微量含氮物质。每个瓶口放一漏斗,在通风橱内得电炉上消化。

在消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出S02白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。消化完毕,等烧瓶中溶物冷却后,加蒸馏水10mL(注意慢加,随加随摇)。冷却后将瓶中溶物倾入50 mL得容量瓶中,并以蒸馏水洗烧瓶数次,将洗液并人量瓶。用水稀释到刻度,混匀备用。

4,蒸馏

(1)蒸馏器得洗涤接通冷凝水,先向蒸汽发生器中加入一定量得水(以排水口高度为宜)用电炉将其加热烧开。然后将蒸馏水由加样室加入反应室,水即自动吸出,

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题 问答题: 1. 简述非编码RNA(non-coding RNA)的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA(transfer RNA,tRNA) 结构特征之一是含有较多的修饰成分,核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的,但其功能不清楚。5’末端具有G(大部分)或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环,在这一环的顶端有三个暴露的碱基,称为反密码子(anticodon).反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构,tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息,并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体,同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用,又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能,例如,在没有核糖体或其他核酸分子参与下,携带氨基酸转移至专一的受体分子,以合成细胞膜或细胞壁组分;作为反转录酶引物参与DNA合成;作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA(ribosomal RNA, rRNA) 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA,在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分,并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”,蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象,但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明,rRNA并非仅仅起到物理支架作用,多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如:核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构,同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成,与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环,类似tRNA中的二氢尿嘧啶环,称为“D”环。H3和H4,H6和H7,H8和H9,H10和H11之间分别形成Pk1,pK2,pK3,pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成,类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环,称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域(TLD)和mRNA类似域(MLD),TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环,MDL则包括ORF和H5,这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器(如叶绿体,线粒体)中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能,它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时,它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关,是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体,也识别那些延迟停转的核糖体,介导这些有问

生物化学实验的答案

生物化学实验的答案 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】

生物化学实验的答案 一、理论考试部分 1.醋酸纤维薄膜电泳时,点样的一端应靠近电极的哪一端为什么 2. 答:负极。因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电,根据同性相吸,异性相斥原理,点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 3.用分光光度计测定物质含量时,设置空白对照管的意义是什么? 答:空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度,但是作为溶剂也能吸收,反射和透射一部分的光,因此必须以相同的溶剂设置对照,排除溶剂对吸光度的影响。 4.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理? 答:血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动,而各种蛋白质等电点不同,且在PH为8.6时所带电荷不同,分子大小不等,形状各有差异,所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 5.何谓R f值?影响R f值的主要因素是什么? 答:Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构,性质,溶剂系统,层析滤纸的质量和层析温度有关, 6.什么是盐析盐析会引起蛋白质变性吗一般我们用什么试剂做盐析的实验 答:盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时,蛋白质的溶解度下降,当中性盐的浓度达到一定程度的时候,蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析。 7.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理? 答:还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸,而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比,用分光光度计测出溶液的吸光度,通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度,从而得出还原糖的浓度。 8.依据我们所做的实验,说明影响蛋白质沉淀的因素是什么影响蛋白质变性的因素是什 么沉淀和变性有何联系 答:水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀,沉淀的蛋白质不一定变性。 8. 什么是碘值脂肪的不饱和程度越大,碘值越大吗在测定碘值的实验中,氯仿的作用是什么 答:每100g脂肪所吸收的碘的克数,即脂肪的碘值。脂肪的不饱和度越大,碘值就越大。氯仿作为溶剂,去溶解脂肪。

生物化学实验报告

生物化学实验报告 动物营养研究所 树润 2015.10.12 猪血中超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及活性测定一.实验目地 1.通过实验了解活性物质的分离提取。 2.了解超氧化物歧化酶的基本功能与应用。 二.实验原理 超氧化物歧化酶是一种酸性蛋白,是唯一以自由基为底物 的酶,具有清除自由基的功能酶,在酶分子上共价连接金属辅 基,因此它对热、PH、以及某些理化性质表现出异常的稳定性。 该酶首次从牛红细胞中分离得到,是一种蓝色含铜蛋白,之后, 研究发现该蛋白酶具有催化氧发生歧化反应的能力,因此将其 命名为超氧化物歧化酶1-2。超氧化物歧化酶是一种能专一地清 除超氧离子自由基(O2-)的金属酶,它具有抗衰老、抗辐射、 抗炎抗癌等作用,因而在医药(如关节炎、红斑狼疮等疾病的 治疗3)、化妆品(有防晒抗炎效果4)、食品工业(SOD灵芝菌5 等)等方面具有了广泛的应用前景。 超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体的一种金属酶, 可催化超氧阴离子自由基(O2-)与H+发生歧化反应, 生成H2O2和 O2。SOD催化下述反应:2H++2O2-→H2O2+O2。

超氧化物歧化酶按照它所含金属离子的不同,可分为 Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体,呈 蓝绿色;Mn-SOD呈紫红色;Fe-SOD呈黄褐色。 SOD提取、纯化制备方法各异, 常用方法有经典的溶剂沉淀法、盐析法、超滤法和层析法等6-7。本实验采用有机溶剂沉淀法8以新鲜猪血为原料,从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可用以下方法:邻苯三酚自氧化法9、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。 该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定,酶活性单 位定义为:每毫升反应液中,每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率 达50%的酶量定义为一个酶单位。 样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮 蓝G-250在游离状态下呈红色,与蛋白质结合呈现蓝色。在一 定围,溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比,可 用比色法测定,测定围1-1000μg。 三.实验试剂与器材 1.实验试剂 ACD抗凝剂、0.9%Nacl、丙酮、95%乙醇、氯仿、考马斯 亮蓝G-250、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/L EDTA钠盐 溶液、3mmol/L邻苯三酚溶液等 2.实验器材

基础生物化学实验.

生物化学实验 实验基本原理 1 有效数字计算(结合电子天平的应用等) 加减法: 进行数字加减时,最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同,其尾数“四舍五入”。如:0.124+1.2345+12.34=13.6979,应取13.70。 乘除法: 进行数字乘除时,最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准,而与小数点的位数无关,其尾数“四舍五入”。如:1.23×0.12=0.1476,应取0.15。 2 误差分析 误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小,测定值越准确,即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。 绝对误差= 测定值- 真实值 相对误差= 绝对误差÷真实值×100% 一般用相对误差表示结果的准确度,但因真实值是并不知道的,因此实际工作中无法求出分析的准确度,只得用精确度来评价分析的结果。 3 偏差分析(结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握) 精确度表示在相同条件下,进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。 绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值(不计正负号) 相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%

例如:分析某一材料糖含量,共重复测定5次,其结果分别为:16.1%,15.8%,16.3%,16.2%,15.6%,用来表示精确度的偏差可计算如下: 分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差(不计正负) 16.1% 0.1% 15.8% 0.2% 16.3% 16.0% 0.3% 16.2% 0.2% 15.6% 0.4% 平均绝对偏差=(0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%)÷5 = 0.2% 平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25% 在实验中,有时只做两次平行测定,这时就应用下式表达结果的精确度: 两次分析结果的差值÷平均值×100% 4 实验结果的表述:实验结果可用列表法(“影响酶作用的因素”常用)和作图法(综合实验用)表示。 第1章分光光度技术 分光光度技术是光学(光谱)分析技术的一种,它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。 一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理 1、讨论的波长范围:200~400nm的紫外光区和400~760nm的可见光区。 人肉眼可见的光线称可见光,波长范围在400~760nm;

生物化学王镜岩(第三版)课后习题解答

第一章糖类 提要 糖类是四大类生物分子之一,广泛存在于生物界,特别是植物界。糖类在生物体内不仅作为结构成分和主要能源,复合糖中的糖链作为细胞识别的信息分子参与许多生命过程,并因此出现一门新的学科,糖生物学。 多数糖类具有(CH2O)n的实验式,其化学本质是多羟醛、多羟酮及其衍生物。糖类按其聚合度分为单糖,1个单体;寡糖,含2-20个单体;多糖,含20个以上单体。同多糖是指仅含一种单糖或单糖衍生物的多糖,杂多糖指含一种以上单糖或加单糖衍生物的多糖。糖类与蛋白质或脂质共价结合形成的结合物称复合糖或糖复合物。 单糖,除二羟丙酮外,都含有不对称碳原子(C*)或称手性碳原子,含C*的单糖都是不对称分子,当然也是手性分子,因而都具有旋光性,一个C*有两种构型D-和L-型或R-和S-型。因此含n个C*的单糖有2n个旋光异构体,组成2n-1对不同的对映体。任一旋光异构体只有一个对映体,其他旋光异构体是它的非对映体,仅有一个C*的构型不同的两个旋光异构体称为差向异构体。 单糖的构型是指离羧基碳最远的那个C*的构型,如果与D-甘油醛构型相同,则属D系糖,反之属L 系糖,大多数天然糖是D系糖Fischer E论证了己醛糖旋光异构体的立体化学,并提出了在纸面上表示单糖链状立体结构的Fischer投影式。许多单糖在水溶液中有变旋现象,这是因为开涟的单糖分子内醇基与醛基或酮基发生可逆亲核加成形成环状半缩醛或半缩酮的缘故。这种反应经常发生在C5羟基和C1醛基之间,而形成六元环吡喃糖(如吡喃葡糖)或C5经基和C2酮基之间形成五元环呋喃糖(如呋喃果糖)。成环时由于羰基碳成为新的不对称中心,出现两个异头差向异构体,称α和β异头物,它们通过开链形式发生互变并处于平衡中。在标准定位的Hsworth式中D-单糖异头碳的羟基在氧环面下方的为α异头物,上方的为β异头物,实际上不像Haworth式所示的那样氧环面上的所有原子都处在同一个平面,吡喃糖环一般采取椅式构象,呋喃糖环采取信封式构象。 单糖可以发生很多化学反应。醛基或伯醇基或两者氧化成羧酸,羰基还原成醇;一般的羟基参与成脂、成醚、氨基化和脱氧等反应;异头羟基能通过糖苷键与醇和胺连接,形成糖苷化合物。例如,在寡糖和多糖中单糖与另一单糖通过O-糖苷键相连,在核苷酸和核酸中戊糖经N-糖苷键与心嘧啶或嘌呤碱相连。 生物学上重要的单糖及其衍生物有Glc, Gal,Man, Fru,GlcNAc, GalNAc,L-Fuc,NeuNAc (Sia),GlcUA 等它们是寡糖和多糖的组分,许多单糖衍生物参与复合糖聚糖链的组成,此外单糖的磷酸脂,如6-磷酸葡糖,是重要的代谢中间物。 蔗糖、乳糖和麦芽糖是常见的二糖。蔗糖是由α-Glc和β- Fru在两个异头碳之间通过糖苷键连接而成,它已无潜在的自由醛基,因而失去还原,成脎、变旋等性质,并称它为非还原糖。乳糖的结构是Gal β(1-4)Glc,麦芽糖是Glcα(1-4)Glc,它们的末端葡萄搪残基仍有潜在的自由醛基,属还原糖。环糊精由环糊精葡糖基转移酶作用于直链淀粉生成含6,7或8个葡萄糖残基,通过α-1,4糖苷键连接成环,属非还原糖,由于它的特殊结构被用作稳定剂、抗氧化剂和增溶剂等。 淀粉、糖原和纤维素是最常见的多糖,都是葡萄糖的聚合物。淀粉是植物的贮存养料,属贮能多糖,是人类食物的主要成分之一。糖原是人和动物体内的贮能多糖。淀粉可分直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉分子只有α-1,4连键,支链淀粉和糖原除α-1,4连键外尚有α-1,6连键形成分支,糖原的分支程度比支链淀粉高。纤维素与淀粉、糖原不同,它是由葡萄糖通过β-1.4糖苷键连接而成的,这一结构特点使纤维素具有适于作为结构成分的物理特性,它属于结构多糖。 肽聚糖是细菌细胞壁的成分,也属结构多糖。它可看成由一种称胞壁肽的基本结构单位重复排列构成。胞壁肽是一个含四有序侧链的二糖单位,G1cNAcβ(1-4)MurNAc,二糖单位问通过β-1,4连接成多糖,链相邻的多糖链通过转肽作用交联成一个大的囊状分子。青霉素就是通过抑制转肽干扰新的细胞壁形成而起抑菌作用的。磷壁酸是革兰氏阳性细菌细胞壁的特有成分;脂多糖是阴性细菌细胞壁的特有成分。 糖蛋白是一类复合糖或一类缀合蛋白质。许多内在膜蛋白质和分泌蛋白质都是糖蛋白。糖蛋白和糖脂中的寡糖链,序列多变,结构信息丰富,甚至超过核酸和蛋白质。一个寡糖链中单糖种类、连接位置、异

生物化学实验内容

《生物化学实验》内容 课程类型:制药工程专业必修 实验总学时:32课时 开设实验项目数:8个 适用对象:2017制药工程1、2班 实验教师:段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程,培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 二、实验内容

三、成绩 包括实验时的表现(实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等,占50%)及实验报告的完成情况和完成质量(占50%),每个实验按总分为100分为满分进行打分,共8个实验,总评取平均值。 四、要求 (1)实验过程中同组人可以配合进行; (2)实验报告独立完成,同组人数据相同,不得抄袭他组数据;(3)实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做; (4)对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3.掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖,包括绝大部分的单糖、寡糖,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括:热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性,将植物磨碎,用热水将组织中的可溶性糖提取出来,结合实验二得到总糖浓度,已知溶液体积和原料重量,可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备:电子天平(精确到0.0g,配称量纸若干);可控温电 加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿:研钵1套;100mL锥形瓶1个;25mL量筒1个;玻 璃棒1根;100mL烧杯2个;胶头滴管1支;过滤装置1套(铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个); 不锈钢刮勺1个;剪刀1把。此部分为每组所用,集中到小框里,放置各实验台上。 3.药品试剂:新鲜植物叶片;蒸馏水。 4.其他:9cm滤纸若干(与玻璃漏斗配套);纸巾若干;标签纸若

生物化学实验理论考试题答案

生物化学实验理论考试题答案 1.醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端,为什么? 答;电泳时点样端应靠近负极,因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电,根据同性相吸,异性相斥原理,点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时,设置空白对照管的作用,为什么? 答;空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度,但是作为溶剂也能吸收,反射和透射一部分的光,因此必须以相同的溶剂设置对照,排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理? 答;血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动,而各种蛋白质等电点不同,且在PH为8.6时所带电荷不同,分子大小不等,形状各有差异,所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.何谓Rf值?影响Rf值的因素? 答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构,性质,溶剂系统,层析滤纸的质量和层析温度有关,对同一种物质来讲Rf是一个常量。 5.什么是盐析?盐析会引起蛋白质的变性吗?一般用什么试剂? 答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时,蛋白质的溶解度下降,当中性盐的浓度达到一定程度的时候,蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性,因为蛋白质的结构并未发生改变,去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解;一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析 6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理? 答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸,而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比,用分光光度计测出溶液的吸光度,通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度,从而得出还原糖的浓度。 7.影响蛋白质沉淀的因素是什么?沉淀和变性有什么联系? 答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶

食品生物化学实验

食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告,做好实验预习,无实验预习报告者不 许进入实验室。每大组实验人数28人,4人一小组。 2.实验试剂的配制,现场由教师指导,学生操作完成。学生在试剂配制过程中, 掌握试剂配置的基本步骤,基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用,器皿要小心使用,按规范要求操作, 如有损坏,照价赔偿。 4.卫生要求:每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁,器皿摆 放整齐有序,如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生,这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化(4学时) 2. 蛋白质的功能性质(4学时) 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定(4学时) 4. 或果胶的提取(4学时) 5. 酶的性质实验(4学时) 实验总课时:16学时

二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色,支链淀粉遇碘呈紫红色,糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高,可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法,也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度,它还可以用来测定水果果实(如苹果等)的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术(如X射线、红外光谱等)研究碘跟淀粉生成的蓝色物,证明碘和淀粉的显色除吸附原因外,主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体,每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用,使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用,生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中,每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合,淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状,碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色,跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内,随聚合度或相对分子质量的增加,包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如,直链淀粉的聚合度是200~980或相对分子质量范围是32 000~160 000时,包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉,在支链上的直链平均聚合度20~28,这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低,显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定,所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖,是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽属糖类,但本身没有甜味,是一种白色粉末,不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀,有一部分淀粉溶解在水里,另一部分悬浮在水里,形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后,一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用,发生水解反应,生成麦芽糖;余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下,继续进行水解,生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下,水解为人体可吸收的葡萄糖,供人体组织的营养需要。反应过程为:(C6H12O5)m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖

大学生生物化学实验技能大赛初赛试题及答案

大学生生物化学实验技能大赛初赛试题及答案 一、选择题 1、下列实验仪器中,常用来取用块状固体药品的仪器是()。 A. 药匙 B. 试管夹 C. 镊子 D. 坩埚钳 2、托盘天平调零后,在左盘衬纸上置氧化铜粉末,右盘衬纸上置1个5g砝码,游码标尺示数如下,此时天平平衡。则被称量的氧化铜质量为()。 A. 8.3 g B. 7.7 g C. 3.3 g D. 2.7 g 3、用减量法从称量瓶中准确称取0.4000 g分析纯的NaOH固体,溶解后稀释到100.0 mL,所得NaOH溶液的浓度为()。 A. 小于0.1000 mol/L B. 等于0.1000 mol/L C. 大于0.1000 mol/L D. 三种情况都有可能 4、已知邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)的摩尔质量为204.2 g/mol,用作为基准物质标定0.1 mol/L NaOH溶液时,如果要消耗NaOH溶液为25 mL左右,每份应称取邻苯二甲酸氢钾()g左右。 A. 0.1 B. 0.2 C. 0.25 D. 0.5 5、NaHCO3纯度的技术指标为≥99.0%,下列测定结果哪个不符合标准要求?()。 A. 99.05% B. 99.01% C. 98.94% D. 98.95% 6、精密称取马来酸氯苯那敏对照品12 mg,应选取()的天平。 A. 千分之一 B. 万分之一 C. 十万分之一 D. 百万分之一 7、实验室标定KMnO4溶液,常用的基准物质是()。 A. Na2CO3 B. Na2S2O3 C. Na2C2O4 D. K2Cr2O7 8、标定氢氧化钠常用的基准物质是()。 A. EDTA B. K2Cr2O7 C. 草酸 D. 邻苯二甲酸氢钾 9、下列物质可以作为基准物质的是()。 A. KMnO4 B. Na2B4O7·7H2O C. NaOH D. Na2S2O3 10、下列物质中,可以用直接法配制标准溶液的是()。 A. 固体NaOH B. 浓HCl C. 固体K2Cr2O7 D. 固体Na2S2O3

生物化学实验报告

实验一糖类的性质实验 (一)糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 (一)α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸(硫酸、盐酸)作用下,脱水生成糠醛及糠醛衍生物,后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性,故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架,滴管 3、试剂 莫氏试剂:5%α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g,溶于95%酒精中,总体积达100 mL,贮于棕色瓶内。用前配制。 1%葡萄糖溶液100 mL 1%果糖溶液100 mL 1%蔗糖溶液100 mL 1%淀粉溶液100 mL %糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管,分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、%糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂,充分混合。倾斜试管,小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL,慢慢立起试管,切勿摇动。 观察记录各管颜色。 (二)间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下,酮醣脱水生成羟甲基糠醛,后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢,只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时,才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架,滴管 3、试剂 塞氏试剂:%间苯二酚-盐酸溶液1000 mL,称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中,再用蒸馏水稀至1000 mL。 1%葡萄糖溶液100 mL 1%果糖溶液100 mL 1%蔗糖溶液100 mL 4、实验操作

生物化学实验

本科生实验报告 实验课程 学院名称 专业名称 学生姓名 学生学号 指导教师 实验地点 实验成绩 二〇一五年月二〇一五年月

实验一氨基酸的分离鉴定----纸层析法一、实验目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及实验方法。 二、实验原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。滤纸纤维上的羟基具有亲水性,因此吸附一层水作为固定相,而通常把有机溶剂作为流动相。纸层析法是根据不同氨基酸在两相间的分配比不同而进行分离的:在固定相分配的比例大的氨基酸,随流动相移动的速度慢,而在流动相分配的比例大的则随流动相流动的速度快。层析溶剂由有机溶剂和谁组成。 物质被分离后用比移值(Rf值)来衡量各组分的分离情况,如图所示。 根据图得到: Rf=a\b 其中:a为原点到层析点中心的距离(cm),b为原点到溶剂前沿的距离(cm)。 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值最大等于1,即该组分随溶剂一起上升,Rf值最小等于0,即该组分基本上留在原点不动。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、实验药品、实验器材 1.扩展剂:将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放入分液漏斗中,与15mL水混合,

充分震荡,静置数分层后,放出下层水相。取分液漏斗内的扩展剂约5mL 置于小烧杯中作为平衡溶剂,其余的倒入杯中备用。 2.氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们 的混合液(各组分浓度均为0.5%),各5mL。 3.显色剂:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 4.层析缸:毛细管,喷雾剂,培养皿,层析滤纸,分液漏斗,针,线。 四、实验方法 1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中,使展开剂达到饱和。 2.取层析滤纸(长22cm,宽14cm)一张。在纸的一端距边缘2cm处用铅 笔画一条直线,在此直线上每间隔2cm作一记号。 3.点样:用毛细管将氨基酸样品分别点在这6个位置上,吹干后再点一次。 注意没点再纸上扩散的直径最大不超过3mm。 4.扩展:用线将滤纸沿长边缝成筒状,纸的两边不能接触。将盛有约20mL 扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中。 点样的一端在下,滤纸下端侵入扩展剂0.5cm为宜,并且注意扩展剂的 页面需低于点样线1cm。待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸,用铅笔描 出溶剂前沿界限,自然干燥或用热风吹干。 5.显色:层析滤纸用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液;然后置烘箱 中烘烤5min(100)或用热风吹干即可先出各层析斑点。 6.计算各种氨基酸的Rf值。 7.注意事项:实验过程应带带胶手套,不可用手直接接触滤纸,以防止皮 肤分泌物的污染。 五、实验记录与数据处理

生物化学实验题目

实验一胆固醇的提取2012-11-15 16:20:00 生物师范班题目 1.比色法测定样品的理论基础是什么? 被测样品必须要有颜色。 2. 胆固醇含量在多少范围时,与值呈良好的线性关系? 在400mg/ml范围内。 3.在提取胆固醇的过程中,为什么要加无水乙醇? 促使蛋白质沉淀。 4.在试管中加入1ml磷硫铁试剂,会产生什么现象?(至少写2点) 产生紫红色化合物。产生热量。 5.在无水乙醇中加磷硫铁试剂时,正确的加法是什么?将产生什么现象?请准确描述 该现象。 沿管壁慢慢加入。溶液分层。上层是无水乙醇,下层是磷硫铁试剂。 1. 胆固醇提取过程中,无水乙醇为什么要分两次加入? 目的是使蛋白质以分散很细的沉淀颗粒析出。 2.我们用比色法测定胆固醇含量的仪器名称是什么? 分光光度计 3. P-S-Fe试剂配置时,能用稀硫酸吗?为什么? 不能。因为FeCl3本身是亲水性物质,稀硫酸中含有水,会降低P-S-Fe试剂的浓度,从而导致反应不能发生。 4.请简述移液枪的使用步骤。 根据所要吸取的溶液的体积选定合适量程的移液枪。 调好量程。 插枪头。 吸取液体。 将移液枪的量程调至最大。 5. 请简述0.08mg/ml胆固醇标准溶液的配置方法。 准确称取胆固醇80mg,溶于无水乙醇,定容至100ml 将贮液用无水乙醇准确稀释10倍既得。

实验二总糖和还原糖测定2012-11-15 16:20:00 生物师范班 1. 请写出还愿糖与非还原糖结构的不同之处 拥有自由的醛基和酮基 2. 对没有还原性的糖,用什么方法进行糖含量的测定? 酸水解的方法将非还原性的糖降解呈还原糖。 3. DNS之所以能和还原糖反应,是因为其结构中含有__________? 硝基 4. 如果将DNS和其与还原糖反应的产物同时进行比色,谁的A值更大?为什么? 产物的更大,因为产物生成棕红色,颜色越深,吸光度越高。 5. 还原糖提取过程中,为什么要离心两次? 因为这样可以更好地将还原糖全部提取出来。第二次洗涤沉淀。 海洋技术班 1.单糖都是还原糖吗?为什么? 是的,因为有自由醛基和酮基 2.为什么能用比色法测定还原糖的量? 因为还原糖的量与光吸收值呈线性关系。 3.DNS的全称是? 3,5-二硝基水杨酸 4.总糖提取过程中,碘液的作用是什么? 确认淀粉水解完全。 5.请简述标准曲线的作用。 通过标准曲线来算出未知样品的浓度。

生化大实验实验报告材料

生化大实验 实验报告 姓名: 学号: 专业: 班级: 实验班级: 单位: 指导老师:

实验1 多酚氧化酶(PPO)的分离提取 一、实验原理: 多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌,它是植物组织广泛存在的一种含铜氧化酶,位于质体、微体,可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节,属于末端氧化酶的一种。 植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成为醌,使组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外,多酚氧化酶也可以与细胞其他底物氧化相偶联,起到末端氧化酶的作用。 蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同,通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出,且大分子蛋白质不能通过透析膜。 二、实验目的: 通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关的仪器设备的正确使用的方法,以及蛋白质的提取分离的系统技术。 三、材料与试剂: 1.材料:马铃薯(两小组共称200g) 2.试剂:0.03M磷酸缓冲液pH 6.0(含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,5%甘油,1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制是配x10倍的浓缩液1000ml;固体硫酸铵;0.03M磷酸缓冲液pH 6.0(含0.02M巯基乙醇,0.001M EDTA,0.005M MgCl2) 3.设备:试管与试管架;烧杯、玻璃棒;移液管、滴管等;试剂瓶;透析袋;过滤纱布;植物组织匀浆机;pH计和pH试纸;高速冷冻离心机; 四、操作步骤: 1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块,加入300ml缓冲液A,两者按1:1(W/V)比例匀浆1min; 2.用两层纱布将所得的浆液过滤; 3.将匀浆滤液装入200ml的离心管10000rpm离心5min; 4.上清液两组平分,每组150ml,加36.45g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心5min; 5.取上清液定容至150ml,加入30.75g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心8min,倒掉上清液得粗酶沉淀,用并加入10ml 0.03M磷酸缓冲液B复溶沉淀3-5min; 6.将所得溶液倒入透析袋中,用0.02M的KCl溶液透析至无硫酸铵根离子。 五、结果和分析: 实验所得的初酶液颜色为浅黄色,颜色浅,主要是实验过程中特别是匀浆以前速度较快酚类被氧化的少,从而最大程度的保留了PPO的活性;经过一个夜晚的透析,得到了澄清的略带黄色的液体,这样就为进一步的柱层析提供了优良材料。 六、讨论与结论: 1. 本实验在匀浆阶段应尽量快速,防止酚类充分暴露在空气中被氧化; 2.实验材料马铃薯在削皮前一定要清洗干净; 3.加入硫酸铵固体时一定要小心缓慢,同时伴有玻璃般的搅拌,在溶解蛋白的过程中避免溶液局部盐离子浓度过大,使蛋白变性,并注意用量的计算,第二步加入的时候起点浓度是40%而不是0,否则会加入过量,影响实验的结果; 4.透析时,提前检查透析袋是否完整,避免透析时出现孔洞导致样品丢失。

生化实验五大技术

生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:(图1-1光吸收示意) 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率,L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:

可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法; 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中,在电场的作用下,向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带,用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比,与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大,带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远,质点所带净电荷越多,电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压),博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂,琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小,消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快,电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球

生物化学实验习题及参考答案

生物化学实验习题及解答 一、名词解释 1、pI; 2、层析; 3、透析; 4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳; 5、蛋白质变性; 6、复性; 7、Tm 值; 8、同工酶; 9、Km值; 10、DNA变性;11、退火;12、增色效应 二、基础理论单项选择题 1、用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键() A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法 2、下列哪组反应是错误的() A、葡萄糖——Molish反应 B、胆固醇——Libermann-Burchard反应 C、色氨酸——坂口(Sakaguchi)反应 D、氨基酸——茚三酮反应 3、Sanger试剂是() A、苯异硫氰酸 B、2,4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、?-巯基乙醇 4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收() A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm 5、下列蛋白质组分中,哪一种在280nm具有最大的光吸收() A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子 6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质() A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同 7、蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净,你选用下列哪一种试剂检查() A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Folin-酚试剂 8、蛋白质变性是由于() A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落 9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有() A、胶体性 B、粘性 C、变性作用? D、沉淀作用? 10、有关变性的错误描述为() A、蛋白质变性后,其一级结构和空间结构改变 B、蛋白质变性后,其理化性质和生物学活性改 变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加,易被酶水解,易沉淀 11、双链DNA热变性后() A、黏度下降 B、沉降系数下降 C、浮力密度下降 D、紫外吸收下降 12、酶的活化和去活化循环中,酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上()

生物化学实验内容

《生物化学实验》容 课程类型:制药工程专业必修 实验总学时:32课时 开设实验项目数:8个 适用对象:2017制药工程1、2班 实验教师:段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程,培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事的科学态度。 二、实验容

包括实验时的表现(实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等,占50%)及实验报告的完成情况和完成质量(占50%),每个实验按总分为100分为满分进行打分,共8个实验,总评取平均值。 四、要求 (1)实验过程中同组人可以配合进行; (2)实验报告独立完成,同组人数据相同,不得抄袭他组数据; (3)实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做; (4)对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。 3.掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖,包括绝大部分的单糖、寡糖,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括:热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性,将植物磨碎,用热水将组织中的可溶性

糖提取出来,结合实验二得到总糖浓度,已知溶液体积和原料重量,可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备:电子天平(精确到0.0g,配称量纸若干);可控温电加热板或电 炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿:研钵1套;100mL锥形瓶1个;25mL量筒1个;玻璃棒1根; 100mL烧杯2个;胶头滴管1支;过滤装置1套(铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个);不锈钢刮勺1个;剪刀1把。此部分为每组所用,集中到小框里,放置各实验台上。 3.药品试剂:新鲜植物叶片;蒸馏水。 4.其他:9cm滤纸若干(与玻璃漏斗配套);纸巾若干;标签纸若干。每个洗 手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。 四、实验操作 取新鲜植物叶片,洗净表面污物,用滤纸吸去表面水分。称取0.5g,剪碎,加入5~10ml蒸馏水,在研钵中磨成均浆,转入锥形瓶中,用蒸馏水少量多次冲洗研钵,洗出液也转入锥形瓶中,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min,提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中,同法残渣再提取2~3次,将提取液合并至容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。贴好标签,保存至冰箱中,用于实验二。 五、实验结果与讨论 1、观察产品颜色是否与理论相符,若不符合,分析原因。 2、结合实验二结果计算含量 六、实验注意事项 (1)若有干扰,可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质,若色素较多可脱脂。 (2)加热时应小心,避免灼伤皮肤。 七、思考题 1、可溶性糖在植物物质代中的作用。

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