《EOS550D完全实用指南》
来自佳能官方资料，作者：高桥良辅
作者简介：曾任职于广告摄影工作室、，现为自由摄影师。以杂志为中心，活跃于广告、舞台、美食等广阔的摄影领域。从一般爱好者的角度出发进行撰写的文章受到广泛欢迎。出版了多部关于相机和摄影技术的著作。
前言
自从数码单反相机诞生以来，整个摄影界发生了巨大的变化。我们可以使用数码单反做很多胶片相机所无法胜任的工作，这已经是无可否认的事实。拍摄本身由此变得更加简单。数码单反相机继承了很多胶片单反相机的基本构造，在操作方面也有很多共通点。对于用惯了佳能EOS系列胶片单反相机的用户来说，掌握佳能数码单反相机的操作并不需要太长时间。而对于那些已经能够掌握小型数码相机的人来说，只要学会数码单反相机特有的操作方式和知识，做到随心所欲地拍出自己想要的照片也绝非难事。可以说，任何人都能很容易地学会使用数码单反相机。由于拍完能立刻确认拍摄效果，用户的摄影技术将会进步神速，甚至能够在短时间进入中级水平。而且，数码单反相机最大的特征就是能够更换镜头，这使得摄影的世界更加广阔。而EOS DIGITAL系列相机能够使用的镜头和其他附件非常丰富，所以使用该系列单反相机学习摄影是再好不过的选择了。各种让人用起来得心应手的机身和60款以上的镜头将会为用户的摄影生涯提供强有力的支持。如果将本书置于手边，边看边学，相信在很短时间大家都能拍摄出不输给专业摄影师的照片。
数码单反相机的魅力
数码单反相机的独特魅力在于它的系统可扩展性以及压倒性的完美画质。下面我们通过将数码单反相机与小型数码相机进行对比，来了解数码单反相机的特征。
照片的表现力有天壤之别
■数码单反相机拍摄
■小型数码相机拍摄
图像感应器的大小完全不同
■35mm胶片
■全画幅图像感应器
■APS-C尺寸图像感应器
■小型数码相机的图像感应器
图像感应器面积
对虚化效果带来的影响
数码单反相机与小型数码相机相比较，不仅外观有区别，更重要的是其部的基本构造上存在着根本性的差异。最主要的区别就在于用于接受光线、进行成像的图像感应器面积大小不同。与通常采用1/2.5英寸型图像感应器的小型数码相机相比，数码单反相机一般采用的APS-C尺寸图像感应器拥有约13倍的面积。因此在电子性能方面也拥有众多优点。图示照片成像视觉效果的主要区别就在于背景的虚化效果不同，而能够更换镜头的数码单反相机在这一点上与小型数码相机相比，也具有非常明显的优势。图像感应器面积大小导致的虚化效果差异与镜头的焦距有非常大的关系。图像感应器面积越小，则镜头焦距越短（倾向于广角），从而导致很难获得满意的背景虚化效果。当采用数码单反相机进行拍摄时，会感到与往常的照片有所不同，这与图像感应器大小的不同有着直接的联系。
镜头可以进行更换
众多的镜头给数码单反相机
带来无穷的可能性
数码单反相机起源于胶片单反相机，所以同样具有通过更换镜头来满足各种拍摄需求的能力。而小型数码相机的镜头与机身为一体，根本不可能更换镜头。不管采用多高倍率的变焦镜头，总是有它的极限，特别是其广角的能力较弱。数码单反相机可以使用从超广角镜头到超远摄镜头的多种镜头，佳能原厂镜头的数量就超过60款。众多镜头根据各自的光圈亮度及特性不同而被详细分类。能够充分利用这些镜头，正是数码单反相机的真正魅力所在。当希望将被摄体稍微放大一些或者希望对整个场景进行拍摄时，只需更换镜头就能够轻松得到所希望的效果，这可以说是数码单反相机最大的优势之一。
■数码单反相机拍摄
■小型数码相机拍摄
左图分别是采用数码单反相机和小型数码相机从同一位置对同一被摄体进行拍摄所得到的照片。与构造上不擅长广角拍摄的小型数码相机相比，能够使用超广角镜头的数码单反相机拍摄到了更广阔的围。
不会错失快门时机
迅速反应，捕捉瞬间动态
与小型数码相机相比，数码单反相机的一个优势就是整个动作过程的时滞较短。小型数码相机通常是通过背面液晶监视器进行观察后拍摄，从严格意义上讲，所拍摄到的画面并不是按下快门按钮那一瞬间的画面，而是略微滞后的画面，这是因为液晶监视器上观察到的画面是转换成电子信号后生成的，所以会产生时滞。而数码单反相机是通过光学取景器来观察实际图像，所以完全不会产生电子方面的时间差，当前所观察到的图像与被摄体的实际动作并无差异。而且不管是快门等的机械结构还是自动对焦功能的速度，数码单反相机都占有绝对性的速度优势，具有不会错失瞬间快门机会的高性能。即使是小型数码相机很难拍到的运动场景或人物的瞬间表情，数码单反相机都能够轻松捕捉。同时，因为图像处理性能更好，数码单反相机的拍摄间隔也较短，能够在一定时间周期拍摄更多的照片，所以可对高速运动被摄体进行连拍，从而提高获得最佳照片的机率。如上所述，数码单反相机在各种功能和性能方面都与小型数码相机存在差异，其设计特点保证了不会错失瞬间抓拍机会。
■数码单反相机拍摄
■小型数码相机拍摄
小型数码相机通过观察背面液晶监视器来进行拍摄，画面无法跟被摄体的运动同步，因此无法获得希望的构图效果。而在采用数码单反相机拍摄的上图过光学取景器甚至能够及时对人物的表情进行观察确认。
牢记相机各部分名称
在开始使用数码单反相机进行拍摄之前，让我们首先来了解相机各部分的名称。正确掌握相机各部分的名称和功能，是提高摄影水平的第一步。
转基因玉米的鉴别方法 转基因玉米的鉴别方法 判断转基因食品的几个标准： 1、个头。按照传统，西红柿也有一定个头的，比如：像大拇指头那么一点大的小西红柿绝对是转基因。再比如大豆，也叫黄豆，就是做豆腐，豆浆那种豆子，形状应该像动物内脏：腰的样子，有点扁，可现在的大豆，全是圆圆的、大不少、就像豌豆一样的大豆，产量很高，就是转基因。 2、色彩。与传统的不一样的绝对是转基因，比如彩色棉花、彩色辣椒。 3、产量。转基因作物一般在开始几年，其产量要比传统作物高不少。 4、季节。除了大棚蔬菜外，其它的反季节食品容易是转基因的。 5、害虫。凡是害虫喜欢光顾的作物就是没转基因的，凡是害虫害怕，也就是没有害虫，或很少害虫的作物，就是转基因。 甜玉米是转基因玉米吗 甜玉米的不同之处在于，它的胚乳中可不只有淀粉，还有相对含量很高的水溶性多糖，这就赋予了其不同于普通玉米的甜味。究其背后的原因，是在甜玉米控制淀粉合成的一系列基因中，有一个或几个基因发生了自然的突变，处于纯合隐性状态，切断了部分还原性糖向淀粉转化的过程。这点小缺陷反而促成了甜玉米可口的味道。 甜玉米并不是最近才有的新作物，它的真正起源时间虽然无法考究，但有文献记载的最早的甜玉米品种是1779年欧洲殖民者从美洲的易洛魁人那里收集到的Papoon玉米，据此可以肯定甜玉米的出现时间还要更早。要知道，那时候可还压根没有转
基因这一说。 现在的甜玉米品种虽然和几百年前的不完全相同，但它同样不是转基因的产物，而是在自然突变的甜玉米品种的基础之上，通过传统育种技术选育自交系、组配杂交种的办法培育出的新的甜玉米品种。 最近几年，与甜玉米有关的几个基因序列和与其关联的分子标记都已经被找到，育种家还可以依靠分子标记辅助选择技术来加快育种进程。此外，还有利用花药组织培养技术来加快隐性基因的纯合进程的选育方法，也开始受到育种家的重视。 这些育种技术并没有涉及到单个或少数几个结构和功能已知的目的基因的插入，也没有对基因进行修饰、敲除、屏蔽等的改变(这些是我们常说的转基因技术手段)。通过这些方法培育出来的甜玉米都不是转基因玉米。很多人因为甜玉米的甜味不同于普通玉米，就认为甜玉米是转基因技术培育的，这其实是没有想到玉米自己的基因突变也会产生不一样的性状。 分辨转基因食品的方法 专家指出，按我国相关立法，若产品的主要原料中含转基因成分，应当在包装上加以注明，如果消费者不想购买转基因食品，一定要认真阅读食品标签，如买大豆油时，往往会看到小字标注原料是转基因大豆。 但若加工食品中含有转基因产品配料，却没有规定必须注明。如美式快餐店里的薯条，用的大都是转基因马铃薯品种;点心里的油脂，饭店里的烹调油，往往是转基因油。 所以在外就餐、购买加工食品时，遇到转基因食品成分的机会较大。相比之下，买国产果蔬(除番木瓜)、用花生油等来做烹调，几乎没有吃进去转基因成分的可能。多吃中国的杂粮杂豆，如小米、红豆等，也不会遇到转基因成分，而且其营养价值高。
中国市场上的转基因食品及鉴别方法 国内市场上的转基因食品清单 一、我国转基因作物有哪些? 1、已批准安全证书的有棉花、水稻、玉米和番木瓜，只有棉花、番木瓜批准商业化种植 “截至目前，我国批准了转基因生产应用安全证书并在有效期内的作物有棉花、水稻、玉米和番木瓜。”中国农科院植保所副研究员谢家建介绍说。 “目前，转基因水稻和转基因玉米尚未完成种子法规定的审批，没有商业化种植。”谢家建表示，“我国已经进行商业化种植的转基因作物只有棉花和番木瓜。” 我国批准进口用作加工原料的转基因作物有大豆、玉米、油菜、棉花和甜菜。这些食品必须获得我国的安全证书。 2、目前市售圣女果、彩椒、小南瓜、小黄瓜都不是转基因食品 网上流传一份转基因食品名单，包括“圣女果、大个儿彩椒、小南瓜、小黄瓜”。对此专家并不认同。 中国农科院生物所研究员王志兴说，小番茄也叫圣女果、樱桃番茄，是自古就有的番茄品种，只是因为个头小、采摘不便、产量低，最早仅作为观赏用，后来发现食
用方便，口味经过改良后逐渐流行。个头小是天生的基因差异，不是转基因的结果。 中国农科院油料所副研究员吴刚说，小南瓜和小黄瓜也不是转基因食品，仅仅是未充分成熟的南瓜和黄瓜。如果继续在田间种植，小南瓜和小黄瓜最终会生长成普通的大南瓜和老黄瓜。 关于大个儿彩椒，吴刚表示，大个儿彩椒含有不同类型的花青素，表现为更丰富的颜色。花青素的变异在植物中很常见，像鲜花同一个品种就有不同颜色，萝卜也有红萝卜、绿萝卜、白萝卜等。“我国曾经批准过抗病毒甜椒的商业化种植，但与常规甜椒相比，转基因甜椒并没有明显优势，因此被市场自然淘汰。” 3、我国市场转基因食品主要是大豆油和木瓜 中国农业大学食品工程与营养科学院院长罗云波介绍，目前中国市场上的转基因食品主要有两种，一种是转基因食用油，就是我们所说的大豆色拉油，来源主要是从美洲，尤其是从美国、阿根廷、巴西等国家进口的大豆所生产出来的食用油。 还有一种就是转基因木瓜，因为木瓜容易得一种农药很难治的病，用基因的技术能够控制，转基因木瓜也是我们能够吃到的转基因食品。除此之外，我国很少能够见得转基因种类的食品。
农杆菌菌株的培养及感受态细胞的制备 挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基（链霉素100mg/ml），28℃振荡培养过夜 取过夜培养菌液500μl接种于50mlYEB（链霉素100mg/ml）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5 左右。 5000rpm离心5min，集菌。 加10ml0.15MNaCl悬浮细胞，5000rpm离心5min， 加10ml预冷的20mMCaCl2悬浮细胞，冰浴，24小时内使用，或分装成每管200μl，液氮中速冻1min，置于-70℃保存备用。 植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化 取200ml 感受态细胞，加入1μg构建好的质粒DNA加入到，混匀后，冰浴30min。 液氮中速冻2-3min，37℃水浴5min，接着冰浴3min。 加入1mlYEB培养基，28摄氏度慢速震荡培养4h。 5000rpm离心5min，弃上清，集菌。 加入0.1mlYEB培养基重新悬浮细胞，涂布于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB 平板上，28℃培养 阳性克隆的鉴定 挑取平板上长出的单菌落，接种于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB液体培养基中，28℃振荡培养过夜，小量提取质粒DNA，以质粒DNA为模板进行PCR扩增鉴定。 农杆菌菌液的制备 挑取继代2d后的农杆菌单菌落，在加有相应抗生素的液体YEB培养基中，在28℃黑暗条件下震荡培养16-20h（OD600为0.6-0.8） 将菌液置于离心管中，18-20℃，5000rpm离心5min收集菌体。 将收集到的菌体用2mlD-inf液体培养基悬浮进行洗涤，以去除残余的YEB培养基 18-20℃，5000rpm离心10min收集菌体，将菌体用2mlD-inf液体培养基，加入1‰AS，备用（放1h）
转基因研究的现状及发展 转基因作物是当今世界各国现代生物技术产业研究的热点，中国的转基因生物技术发展一、我国转基因作物的发展现状迅速，由于科学界对转基因作物对人类及生态环世界上最早的转基因作物诞生于年，是一境利与弊的争论，措政府应制定相应的政策、施对到种含有抗生素药类抗体的烟草。世纪年代，其进行安全管理。本文论述了转基因作物在国际农业生物技术已逐渐成为各国现代生物技术产业研国内的发展现状，分析了转基因作物对人类及生态环境的利与弊以及关于我国转基因作物安全管究的热点。 转基因技术的应用 1．在畜牧兽医中的应用 应用于动物抗病育种转基因技术可以用于动物抗病育种，通过克隆特定基因组中的某些编码片段，对之加以一定形式的修饰以后转入畜禽基因组，如果转基因在宿主基因组能得以表达，那么畜禽对该种病毒的感染应具有一定的抵抗能力，或者应能够减轻该种病毒侵染时对机体带来的危害。（其用于遗传育种，不仅可以加速改良的进程，使选择的效率提高，改良的机会增多，并且不会受到有性繁殖的限制。）例如Clements等将绵羊髓鞘脱落病毒的表壳蛋白基因转入绵羊，获得的转基因动物抗病力明显提高；丘才良把一种寒带比目鱼抗冻基因成功地转移到大西洋鲑中，为提高某些鱼类的抗寒能力做了积极的尝试。 2．在医学领域中的应用 用于生产药用蛋白用转基因动物的乳腺生产重组蛋白（乳腺生物反应器）可能是转基因动物的最大应用，这也是世界范围内转基因研究的热点之一。Swamdom （1992）用β-球蛋白的4个核酸酶I的高敏位点与人的两个基因相连，融合基因产生的转基因猪与鼠的原型相似。目前，把转基因动物当作生物反应器来生产药用蛋白已经受到国际社会的极大关注，不仅各国政府投资，一些私人集团也不惜投入大量资金加以研究和开发。 3．转基因的应用存在的问题及展望 （1）转基因表达水平低，许多转基因的表达强烈地位受着其宿主染色体上整合位点的影响，往往出现异位表达和个体发育不适宜阶段表达，影响转基因表达能力或基因表达的组织特异性，从而使大部分转基因表达水平极低，极少部分基因表达水平过高。 （2）难以控制转基因在宿主基因组中的行为，转基因随机整合于动物的基因组中，可能会引起宿生细胞染色体的插入突变，还会造成插入位点的基因片段丢失，插入位点周围序列的倍增及基因的转移，也可能激活正常状态下处于关闭状态的基因。 （3）不了解哪些基因控制多数生理过程，不了解基因表达的发育控制和组织特异性控制的机制。 （4）制作转基因动物的效率低，这是目前几乎所有从事转基因动物研究的实验室都面临的问题，也是制约着这项技术广泛应用的关键。 （5）对传统伦理是一种挑战，对人类的生存有一定的负面作用等。 当然，我们不能因为这些缺点的存在就否定转基因技术的研究价值。因为它作为一种新兴的生物技术，配合其他相关的生物技术将具有广阔的应用前景。随着这一技术日趋成熟，许多问题有望逐步得到解决。
收稿日期：2010-03-13 基金项目：国家“863”计划项目(2006AA10Z440)；国家自然科学基金项目(30800770)； 国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001) 作者简介：许文涛(1979—)，男，副教授，博士，研究方向为食品安全。E-mail ：cau xwt@y ah https://www.doczj.com/doc/8817925218.html, *通信作者：黄昆仑(1968—)，男，教授，博士， 研究方向为食品安全。E-mail ：hkl009@https://www.doczj.com/doc/8817925218.html, 转基因玉米59122品系的特异性检测 许文涛1,2，杨 蓉2，陆 姣1，张 南1,2，罗云波1，何 景1,2，黄昆仑1,2,* (1.中国农业大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室，北京 100083； 2.农业部转基因产品检验监督测试中心(北京)，北京 100083) 摘 要：使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列，并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物，运用半巢式PCR 技术建立了59122的品系特异性二重PCR 检测方法，扩增片段100b p ，横跨p a t 终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MO N863、MON810、GA21、NK603，转基因大豆Roundup Ready 和转基因油菜GT73等为材料，证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时，确定出连接体系中线性DNA 的最佳质量浓度为1ng/μL 左右，检出限达到0.1%，灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品，或作为常规PCR 定性检测后的验证方法。 关键词：转基因作物；品系特异性检测；半巢式聚合酶链式反应；反向聚合酶链式反应；二重聚合酶链式反应 Event-specific Transgenic Detection of Genetically Modified Maize 59122 with Flanking Sequence XU Wen-tao 1,2，YANG Rong 2，LU Jiao 1，ZHANG Nan 1,2，LUO Yun-bo 1，HE Jing 1,2，HUANG Kun-lun 1,2,* (1. Food Safety Laboratory, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University,Beijing 100083, China ；2. Supervision, Inspection and Testing Center of Genetically Modified Organisms (Beijing), Ministry of Agriculture, Beijing 100083, China) Abstract ：We report the cloning of two flanking sequence of the integrated gene construct of genetically modified maize 59122by inverse PCR method and the design of even-specific primers based on the left flanking sequence with the aim of developing of a duplex PCR assay for the event-specific transgenic detection of genetically modified maize 59122 using semi-nested PCR,result ing in an amplification fragment of 100 bp in length stretching from the terminator of the pat gene to the 59122 flanking genes.This assay has been successfully applied to detect genetically modified maizes 59122, MON863, MON810, GA21, NK603,genetically modified Roundup Ready soybeans and genetically modified oilseed rape GT73, with high specificity. The optimum concentration of linear DNA in a connection system for detecting genetically modified maize 59122 by this assay was around 1ng/μL, which exhibited a limit of detection of 0.1% and a sensitivity of 38 copies of haploid genome. Therefore, the developed PCR assay is applicable to detect genetically modified maize and its derivates accurately, fast and efficiently, and can serve to verify routine PCR qualitative detection. Key words ：genetically modified crop ；event-specific transgenic detection ；semi-nested polymerase chain reaction ；inverse polymerase chain reaction ；duplex polymerase chain reaction 中图分类号：Q789；S513 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)04-0139-04 随着转基因作物的不断商业化，新型转基因食品的安全性问题逐渐成为公众关注的焦点。为此，各国都加强了管理[1]。除了向公众公布相关信息、增加透明度外，关键问题是建立相应的科学检测方法来分析鉴别转 基因产品。 目前，转基因产品的检测技术[2]很多，分为基于核酸水平的检测技术、基于蛋白水平的检测技术以及其他检测技术。在定性检测中基于蛋白水平的检测[3]不能区
分辨转基因玉米的方法 可能我们生活中有很多种转基因食品，多食用一些转基因食品可以有效地帮助我们补充体内的各种营养需求，可能很多人对于转基因玉米与非转基因玉米的区别方法还不是很了解，通常转基因玉米通常比非转基因玉米更大，简述一下分辨转基因玉米的方法吧。 转基因大米透明、有光泽，又长又亮，均匀好看，淘米水很清，容易与东北“长粒香”混淆，买的时候一定看清原产地;非转基因大米呈白色，不很齐整，淘米水浑浊。 转基因玉米，颗粒大，有光泽，甜脆，饱满，无虫眼，大小均匀，体形优美，头颗粒尾差不多;非转基因玉米相反。 这是指没有经过加工的粮食，如果是加工过的食品就只能碰运气了。转基因大豆、玉米、大米生产最多、分布最广，因此购买任何大豆、玉米和大米制品都要慎重，哪怕是超市卖的玉米窝头和豆腐，都要敬而远之。用转基因饲料和激素喂养的转基因禽畜，基本都是有腿的毒品了，像那些国际知名的快餐店，基本都是用的这类，尽量少吃或者不吃。坚决不买色拉油、玉米油、豆
油、菜籽油，即使是表明的非转基因大豆油，也不要相信，因为几乎所有超市都大量上市非转基因大豆油，但是这些非转基因大豆是魔法变出来的?目前花生油绝对可靠。 转基因固然可怕，但是还有另外一个很大的致命威胁被人们忽略了，那就是化肥农药，化肥农药的原材料基本上都是剧毒重金属之类，成品之中会有大量的剧毒物残留，之后会随着使用进入土地，进入农作物，进入我们的餐桌。现代的很多疾病其实都是这种剧毒残留物导致的，我们一直在慢性中毒! 以上介绍的分辨转基因玉米的方法可以帮助我们进行很好的分辨，大家都可以尝试一下，多吃一些转基因玉米对于我们自身的身体会产生很多的好处，可以有效地帮助我们提高自身的免疫力和抵抗力，降低出现疾病的几率。
从进口转基因玉米看转基因与非转基因的区别 近来，有关转基因食品的安全性一直争议不断，不同的国家对转基因食品有不同的政策，但均持谨慎态度。近日，中粮进口6万吨美国转基因玉米，已接近整个6月份进口的玉米总量，并远远超过了5月份的进口玉米量。尽管对于如此巨量的进口转基因玉米的原因和安全方面的评价，中粮集团相关发言人暂未作出回应，但是伴随这批转基因玉米进入中国，一些农业方面的研究人士表现出诸多担忧。 为什么人们对中粮进口转基因玉米如此关注？转基因食品和非转基因食品究竟有什么区别？ 慧聪食品工业网为您找到相关资料，来解读非转基因与转基因。 非转基因是通过自然界优胜劣汰选择基因的变化，从而消除了转基因食品对人体可能造成的潜在危害.长期食用，安全可靠. 转基因指的是将某些物种所呈现出优秀性状的基因，转入可满足人类生存需求的动、植物、微生物基因组中，以使物种表现出其自身缺乏的优秀性状。在基因转入过程中，由于不可预见的基因突变，可能会转化为会对人体产生危害的有毒蛋白质等诸多因素，所以涉及到转基因的安全问题。 世界粮农组织、世界卫生组织及经济合作组织表示转基因食品可能带来环境风险和健康风险，人工移植外来基因可能令生物产生“非预期后果”。 世界上最好的大豆生产在中国东北(非转基因)，价格很高，中国把这些大豆出口到美国，这些钱再从美国进口美国大豆，转基因大豆由于产量大所以很便宜，而且出油量也很高，这样回到中国的大豆数量就变成原来的3~4倍，主要做成大豆油，价格便宜，能够保证人民的食用油. 但在英国和日本，95%以上的人都不接受转基因食品，是转基因的要明显标出来，而且价格特别便宜，但是也没有什么人买。 转基因作物，是指那些通过遗传工程进行修饰，根据需要转入某种特定基因的作物。目前最常见的是转入抗除草剂基因，这样的转基因作物可以抵抗普通的、较温和的除草剂，因此农民用这类除草剂就可以除去野草，而不必采用那些毒性较强、较有针对性的除草剂。其次是转入抗虫害基因，用得最多的是从芽孢杆菌克隆出来的一种基因，有了这种基因的作物会制造一种毒性蛋白，对其他生物无毒，但能杀死某些特定的害虫，这样农民就可以减少喷洒杀虫剂。据统计，在过去的四年内，美国由于推广抗虫害转基因作物，少喷洒了270万磅的杀虫剂。转基因作物还能增加产品，例如抗虫害转基因玉米能增产5－15％。转基因技术也可用于改变食物的营养成分，例如减少土豆的水分，这样炸出来的土豆片更脆；降低植物油中的不饱和脂肪酸，能延长储存期限。 转基因西红柿不仅容易运输、保存，而且味道也更佳。菲律宾的国际水稻研究院正在试验“金水稻”，通过转基因技术让水稻制造贝塔胡萝卜素（维生素A的前体），有助于消灭在亚洲地区广泛存在的维生素A缺乏症。转基因技术也可提高水稻中铁元素的含量，以减少亚洲妇女常见的贫血症。
玉米成分转基因检测知识 转基因玉米就是利用现代分子生物技术，把种属关系十分遥远且有用植物的基因导入需要改良的玉米遗传物质中，并使其后代体现出人们所追求的具有稳定遗传性状的玉米。 转基因食品有很多优点：增加作物产量、降低生产成本；增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品耐贮性。但转基因食品作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定：可能通过基因漂流影响其他物种；转基因食品可能会引起过敏等等。 比如说水果玉米，就是那种吃起来带甜味的。颗粒大小差不多，金黄色栗粒的，一般路边烧烤的那种玉米。彩色玉米，就是栗粒有紫色白色黄色的哪种，这是最原始的转基因玉米了。 下列是对于其它相关转基因成分物质： ◆大豆◆马铃薯◆木瓜◆青椒 ◆食用菌◆小麦◆烟草 ◆油菜籽◆棉花◆植物性饲料 ◆调味品◆食用油脂◆食品半成品、食品成品 ◆水稻及其产品◆植物及其加工产品 下面我们来看一下实时荧光PCR反应体系： 试剂名称终浓度ЧL/反应 10×PCR反应缓冲液1× 5 MgCl2（25m mol/L） 2.5 m mol/L 5 dATP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1 dGTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1 dCTP（10 m mol/L）200 n mol/L 1 dTTP(10 m mol/L) 100 n mol/L 0.5 dUTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1 UNG酶（1 U/чL）0.5U 0.5 上游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1
下游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1 探针（5 чmol/L）100 n mol/L 1 Taq酶（5U/чL） 2.5U 0.5 DNA模板（40 ng/чL~50ng/чL）- 5 补水至- 50 注：表中DNA模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。 1×25 TaMan R Universal PCR Master Mix(2×) 上游引物（10 чmol/L）150 nmol/L 0.75 下游引物（10чmol/L）150 n mol/L 0.75 DNA模板（40 ng/Чl~50 ng/чL）- 4.0 探针（5 чmol/L）50 nmol/L 0.50 补水至- 50 注：表中DAN模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。 实时荧光定量PCR的反应参数为：50℃PCR前去污染2min；预变性95℃15s，60℃1min，45个循环。 待测样品外源基因检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品未检出×××基因； 待测样品外源基因检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品检出×××基因； 待测样品外援基因检测Ct值在36~40之间，应重做实时荧光PCR扩增。再次扩增后的结果Ct值仍小于40，且设置的对照结果正常，则可判定该样品检出×××基因；再次扩增后结果Ct值大于40，且设置的对照结果正常，可判定该样品未检出×××基因。
[转基因玉米的鉴别]转基因玉米的鉴别方法 不知道大家对转基因食品有没有了解呢?今天，小编我向大家介绍介绍转基因玉米，认识转基因玉米对人体的危害，以及让大家懂得如何区分和辨别转基因玉米! 转基因玉米的鉴别如下： 判断转基因食品的几个标准： 1.个头。按照传统，西红柿也有一定个头的，比如：像大拇指头那么一点大的小西红柿绝对是转基因。再比如大豆，也叫黄豆，就是做豆腐，豆浆那种豆子，形状应该像动物内脏：腰的样子，有点扁，可现在的大豆，全是圆圆的、大不少、就像豌豆一样的大豆，产量很高，就是转基因。 2.色彩。与传统的不一样的绝对是转基因，比如彩色棉花、彩色辣椒。 3.产量。转基因作物一般在开始几年，其产量要比传统作物高不少。 4.季节。除了大棚蔬菜外，其它的反季节食品容易是转基因的。 5.害虫。凡是害虫喜欢光顾的作物就是没转基因的，凡是害虫害怕，也就是没有害虫，或很少害虫的作物，就是转基因。 现在的甜玉米品种虽然和几百年前的不完全相同，但它同样不是转基因的产物，而是在自然突变的甜玉米品种的基础之上，通过传统育种技术选育自交系、组配杂交种的办法培育出的新的甜玉米品种。 最近几年，与甜玉米有关的几个基因序列和与其关联的分子标记都已经被找到，育种家还可以依靠分子标记辅助选择技术来加快育种进程。此外，还有利用花药组织培养技术来加快隐性基因的纯合进程的选育方法，也开始受到育种家的重视。
这些育种技术并没有涉及到单个或少数几个结构和功能已知的目的基因的插入，也没有对基因进行修饰、敲除、屏蔽等的改变(这些是我们常说的转基因技术手段)。通过这些方法培育出来的甜玉米都不是转基因玉米。很多人因为甜玉米的甜味不同于普通玉米，就认为甜玉米是转基因技术培育的，这其实是没有想到玉米自己的基因突变也会产生不一样的性状。 转基因玉米的危害： 1.害虫无法被灭杀：转基因食品本身就存在害虫的基因，这些害虫会产生具有更高的防御性，不利于农药的灭杀。 2.影响发育：根据喂养小白鼠转基因食品的实验证明，转基因食品对小白鼠的繁殖和生长发育都带来了严重的影响。 3.营养问题：转基因食品通常存在很多营养问题，科学家们还认为，外来基因会以一种人类还不了解的方式去破坏食物中的营养成分。 感谢您的阅读！
第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理：DNA双链复制 （2）过程： 第一步：加热至90～95℃DNA解链； 第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 1. 转化的概念： 是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+ 处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA
中华人民共和国农业行业标准 NY/T720.1~720.3－2003 转基因玉米环境安全检测技术规范 Environmental impact testing of genetically modified maize 2003-12-01发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部 发 布 NY ICS 65.020.99 B 20
目录 NY/T 720.1-2003 转基因玉米环境安全检测技术规范第1部分：生存竞争能力检测 (1) NY/T 720.2-2003 转基因玉米环境安全检测技术规范第2部分：外源基因流散的生态风险 检测 (5) NY/T 720.3-2003 转基因玉米环境安全检测技术规范第3部分：对生物多样性影响的检测 (9)
中华人民共和国农业行业标准 NY/T 720.1－2003 转基因玉米环境安全检测技术规范 第1部分：生存竞争能力检测 Environmental impact testing of genetically modified maize － Part 1: testing the survival and competitive abilities 2003-12-01发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部 发 布 NY ICS 65.020.99 B 20
NY/T 720.1－2003 前言 NY/T 720《转基因玉米环境安全检测技术规范》分为以下三个部分： ——第1部分：生存竞争能力检测； ——第2部分：外源基因流散的生态风险检测； ——第3部分：对生物多样性影响的检测。 本部分是NY/T 720的第1部分。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、农业部科技发展中心。 本部分主要起草人：彭于发、王振营、李宁、杨崇良、董英山、路兴波、付仲文。
转基因玉米的应用前景 前言: 随着转基因大豆、马铃薯、油菜等许多转基因作物走进人们的生活，转基因玉米也进入人们的视野。玉米是重要的食物、饲料和工业原料，种植面积仅次于小麦和水稻，在世界粮食生产中占有重要的地位。玉米虫害是一个防不胜防的问题,由于虫害的原因,全中国乃至全世界的范围的玉米都在减产。转基因玉米的出现对玉米虫害防止问题有了新的希望。本文针对转基因玉米基因的研究，转基因玉米对虫害的防止以及转基因玉米的生物安全性等问题进行分析综述。 主题： 一、转基因玉米基因的研究 杀虫蛋白基因Cry1Ab/1Ac的研究 虫害的主要原因是玉米螟,它可以危害玉米的任何部位,致使玉米减产甚至颗粒无收。玉米螟俗名钻心虫,成虫属鳞翅目螟蛾科( Lepidoptera Pyralididae ) ，为世界性的蛀食性大害虫，影响玉米产量和品质的重要因素，世界每年因虫害造成的损失约占农作物产量的15％以上（1）。要解决这一棘手问题紧靠化学农药的使用不仅不能满足杀虫的目的，还会给人体和环境带来极大的伤害。而在这种背景下产生的转基因抗虫玉米则可高效专一控制玉米螟，是防治玉米螟的新途径（1）。常用的方法是从微生物中分离得到目的基因,然后通过转基因技术将目的基因（抗虫基因）导入玉米的细胞(即受体细胞)，再通过筛选得到可以稳定表达形状（即抗虫）的玉米。玉米是最难转化的作物之一，这是因为玉米不是土壤农杆菌的天然寄主，研究初期转化困难；另一方面，由玉米的原生质体悬浮细胞再生可育的植株也比较困难，所以，包括玉米在内的禾本科作物的遗传转化工作进展缓慢。直至1993年Michael成功地用基因枪法将Bt(苏云金芽抱杆菌毒蛋白)基因导入玉米并对转基因玉米植株在田间进行了抗虫试验。Bt是苏云金芽胞杆菌( Bacillus thuringiensis)的简称，是一种革兰氏阳性土壤芽胞杆菌。该细菌产生的杀虫蛋白能够破坏昆虫肠道内的细胞渗透压，导致昆虫死亡。Bt的一个突出特征就是在芽胞形成过程中，产生由蛋白质组成的且具有杀虫活性的伴胞晶体，人们称这种蛋白质为δ-内毒素(δ-endotoxins)或杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal protein，ICP)，而将编码这种蛋白的基因统称为Bt（4）。Bt 基因是第一代抗虫基因的典型代表，它所表达的蛋白统称为Cry 晶体蛋白，其中Cry1Ab和Cry1Ac基因对玉米螟等鳞翅目害虫具有专一性毒性（1）。转基因抗虫玉米Bt-176就是具有抗鳞翅目尤其是玉米螟等害虫及耐草铵磷除草剂的特性
生命科学前沿讲座论文 转基因食品的检测方法 姓名：陈继款 系别：生命科学学院 专业：生物信息学 年级：2008级 学号：080567011 指导老师：薛李春 总成绩： 2010年07月02日
转基因食品的检测方法 自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。因此转基因产品的检测就显得尤为重要。转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。 1核酸水平 主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 1．1定性检测 1．1．1聚合酶链式反应(PCR) 1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止污染。 1．1．2多重PCR 多重PCR是常规PCR方法的改进，它是在同一个反应中同时扩增两个或多个目标基因序列。这种方法具有更大的可靠性和适应性，并且能降低检测成本。多重PCR可以同时针对几个靶位点进行PCR技术检测。V．T．Forte等利用其设计的多重PCR方法对转基因大豆和Bt玉米样品进行实际检测，结果表明该方法能够准确的检测食品中是否含有转基因成分，其检测结果可以精确到2％～0．1％的范围。Permingeat等仅用两
植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定 金万枚 巩振辉 李桂荣 张桂华 (西北农业大学 陕西杨陵 712100) 提 要 对现有主要植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定进行了比较分析,并对它们在植物遗传转化中的前景进行了展望。 关键词 植物;遗传转化方法;转基因植株;转基因植株鉴定 人们可通过有性杂交,物理化学诱变或自然变异来创造新物种和新品种。但常常存在着杂交不亲和或杂种不育而造成的生殖隔离,也存在诱变的非定向性。采用遗传转化技术,将所要求的外源目的基因导入受体植株,并通过对转化植株的鉴定选择,从而创造出人类所需要的新品种或新物种。植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定是植物遗传转化的重要环节。关 3国家自然科学基金资助,项目编号39770522。 优质小麦品质的决定性因素;其次要有较强的生活力,保证营养生长健壮。 3.3.2 播种 研究表明,适当晚播和增加密度能在稳定产量的基础上提高小麦品质。根据我省实际,关中优质专用小麦播量应控制在每亩6～8kg,渭北应控制在9kg。播期可依据实际情况较当地常规适播期推迟2～3d。提倡机械以精量半精量播种。 3.4 灌水 灌水对小麦品质的影响比较复杂,尤以抽穗至成熟期间影响最大,此期灌水会降低蛋白质含量,对沉淀值等加工品质也不利,但如果氮量充足或灌水与施氮结合则蛋白质含量不下降或下降很慢。因而施肥上的前氮后移也为后期合理灌水提供了条件。中国农业大学曾研究出一套节水高产栽培技术,小麦春季可只灌一次,并将灌水时期移至孕穗期;若特别干旱,可在拔节期和开花期分别灌水。这种灌水制度与前氮后移的施肥方法配合起来,有利于优质专用小麦生产。 3.5 地膜覆盖 地膜覆盖栽培能使小麦产量大幅度提高,对品质的影响这方面研究还较少。陕西省农科院小麦中心的初步研究表明,小麦覆膜后籽粒容重有不同程度提高;蛋白质含量与正常露地播种没有差异;覆膜不影响不同生态类型品种的干、湿面筋值和沉淀值;但不同生态类型品种之间籽粒容重、蛋白质含量、干、湿面筋值和沉淀值存在较大差异。优质专用小麦可以采用地膜栽培,但不应忽视地膜覆盖后对小麦生育期及农艺性状的影响,比如植株增高,应采取化控措施,在小麦返青～起身期,喷施壮丰安防止倒伏;再如部分病虫害发生的提前与危害加重问题,应及时开展病虫防治,减少对产量和品质的影响。同时提供麦收前一个月揭膜,减少地膜污染。 3.6 病虫害防治 优质专用小麦病虫害的防治,应尽量减少化学药品残苗,不要影响食用品质。应坚持综合防治的原则,要采用农业防治、物理防治和生物防治措施,减少化学药剂防治次数;选用高效低毒低残留农药;收获前20d以内严禁施药;使用农药增效剂,提高防治效果。 3.7 收获 收获是优质专用小麦栽培的最后一个环节;也是比较关键的环节。要做到单收、单贮、单独销售,实现优质优价优加工。
收稿日期:2006-09-28转基因植物的检测与鉴定 宫雪超,于丽杰,高金秋 (哈尔滨师范大学环境与生命科学院,黑龙江哈尔滨150025) 摘要:对植物转基因过程中报告基因的种类和应用范围、转基因植物的检测和鉴定方法、转基因植物检测和鉴定方法的评价进行了综述. 关键词:转基因植物;检测;鉴定;评价 [中图分类法]Q943[文献标识码]A[文章编号]1003-6180(2007)01-0015-03 植物转基因实验因受体系统的限制,外源基因的转化频率较低,为了达到转化目的,必然要获得大量的转化材料,如何在数以千万计的转化植株或细胞中,快速、有效地检测出转基因阳性植株或细胞,外源基因是否整合到植物染色体上,整合的方式如何,整合到染色体上的外源基因是否正确表达等问题,就成为重要的研究课题.根据外源基因表达的不同水平,对外源基因的检测和鉴定可以分为三个水平进行:整合水平、转录水平和翻译水平.本文从外源基因表达的不同水平,阐述转基因植物的检测与鉴定. 1外源基因整合水平的鉴定 检测外源基因是否转化成功,首先是对报告基因进行检测,必要时再进行目的基因的检测,检测目的基因需要采用分子杂交方法. 1.1报告基因 报告基因必须具有两大特点:一是表达产物和产物的类似功能在未转化的植物细胞内并不存在;二是便于检测.目前植物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因.大致分为两类:抗性基因和编码催化人工底物产生颜色变化的酶基因.现在常用的报告基因主要有:gus基因、cat基因、冠瘿碱合成酶基因、np tò基因、gf p基因、bar 基因[1]、荧光素酶基因、二氢叶酸还原酶基因等.近年来,绿色荧光蛋白基因作为一种新型的报告基因在植物基因转化及基因表达调控中得到应用,并显示出较其他几个报告基因更大的优越性. gf p基因的检测gf p基因具有以下优点:1适用于各种生物的基因转化;o检测方法简便,无需底物、酶、辅因子等物质,只要有紫外光或蓝光照射,其表达产物就可以发出绿色荧光,这对转化细胞的检测极为有利;?便于活体检测,十分有利于活体内基因表达调控的研究;?检测时可获得直观信息,有利于转基因植物安全性问题的研究及防范.若此报告基因通过自然杂交扩散到其他栽培植物或杂草中时,很容易通过光照获得直观信息. gus基因的检测g us基因也是广泛用作转基因植物、细菌和真菌的报告基因,尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化试验中,gus基因应用的最多.gus基因3-端与其他结构形成的融合基因能正常表达,所产生的融合蛋白仍具有gus活性,这为研究外源基因表达的具体细胞部位及组织部位提供了条件,这是它的一大优点.但是需要注意的是,有一些植物在胚胎状态时能产生内源gus活性,Sory u[2]在转基因R0和R1代的子叶、花粉和胚珠中检测到g us活性,随着组织的成熟衰老,g us表达逐渐停止.在实验过程中要设定严格的阴性对照.g us活性的检测方法有很多,包括组织化学法、色谱法、荧光法等,其中植物切片gus 组织化学定位分析是分辨组织中不同细胞个体和不同的细胞类型基因表达差异的一种有效方法. 1.2转基因植株的PCR检测 PCR(聚合酶链式反应poly merase chain re-actio n)是首选的转基因产品检测方法.PCR技术能够有效地扩增低拷贝的靶片段DNA,可以检测到每克样品含有20pg~10ng的转化基因成分,对转基因产品大分子量DNA检测的灵敏度可以达到样品含量的0.0001%[3].因为PCR的高度特异性及检测所需的模板量仅为10ng以内,所以为外源基因整合的检测提供了便利条件,尤其是在转化材料少又需及早检测的时候.现在已经利用该技术对欧美杨[4]、番茄[5]、辣椒、葡萄、豆瓣菜、小麦[6]等转基因植物进行鉴定,是转基因植物鉴定中最简单、最常用的方法[7].PCR检测具有DNA用量少,操作简单,成本低,耗时少,不需要同位素等优点,但PCR检测也存在缺点,由于PCR扩增十分灵敏,有时会出现假阳性扩增,因此检测只能作为初步结果. 1.3Southern杂交 证明外源基因在植物染色体上整合情况的最可靠方法是DNA So uther n杂交,只有经过分子杂交鉴定为阳性的植株才可以称为转基因植物. # 15 #