DB2缓冲池和索引调优的方法
1 DB2性能问题的表现
应用系统(OA)上的表现：一般是登录、首页、待办列表等数据量比较大的模块，响应时间长，耗时数秒到数十秒都有可能。有时候是用户访问高峰期慢，下班时间又比较正常。
操作系统上的表现：一般是中间件服务器(W AS)系统正常，CPU和IO占用不会持续超过50%，系统运行进程不会有持续的等待。数据库服务器则非常繁忙，CPU占用持续在50%以上，往往会达到持续90%左右，IO占用可能不高。从系统层面判断，性能瓶颈出在数据库上。
2 调优的基本思路
DB2的性能和操作系统、锁、缓冲池、索引等参数，以及SQL的写法都有很大关系，受限于个人认识，这里主要介绍缓冲池和索引的调优方法。
缓冲池的调整比较简单，一般可以先调整缓冲池，若效果不明显，则再调整索引和SQL。
3 缓冲池调优
缓冲池是内存中的一块区域，DB2会将用到数据放到缓冲池中提高性能。缓冲池太小，每次查询仍然要到磁盘中操作，达不到缓冲的效果。缓冲池太大，超出操作系统管理的限制，会导致数据库无法连接的错误。
缓冲池是通过表空间与数据表发生联系的，数据表存放在指定的表空间中，每个表空间又有指定的缓冲池。因为每张数据表存储的数据量都不同，一般根据每条记录存放的最大数据量，我们会为数据表分别指定4k-32k不同的表空间来存放，以达到优化存储和性能的目的，缓冲池也是类似。这个一般在创建数据库时就会分配好了。
在*unix下，可以使用下面的命令查看缓冲池相关信息：
切换到db2inst1账号
su – db2inst1
连接到pzbdw数据库
db2 connect to pzbdw
查看缓冲池定义
db2 "select BPNAME,NPAGES,PAGESIZE from syscat.bufferpools"
查看表空间的定义，包含表空间名称(TableSpaceName)、使用的缓冲池名称(BufferpoolName)，表空间的页大小(TBSPageSize)，缓冲池的数量(BufferpoolPages)，缓冲池的页大小数据(BufferpoolSize)信息。
db2 "select s.TBSPACE TableSpaceName,b.BPNAME BufferpoolName,s.PAGESIZE TBSPageSize,b.NPAGES BufferpoolPages, b.PAGESIZE BufferpoolSize from SYSCA T.BUFFERPOOLS b,SYSCA T.TABLESPACES s where s.BUFFERPOOLID=b.BUFFERPOOLID"|more
查看mv_workitem表所在表空间和缓冲池信息，一般“MV_”开头的表使用的缓冲池是重点关注对象：
db2 "select TABSCHEMA TableSchemaName, TABNAME TableName, t.TBSPACE TableSpaceName,b.BPNAME BufferpoolName, b.NPAGES BufferpoolPages, b.PAGESIZE BufferpoolSize from SYSCA T.TABLES t ,SYSCA T.BUFFERPOOLS b,SYSCA T.TABLESPACES s where tabname='MV_WORKITEM' and s.BUFFERPOOLID=b.BUFFERPOOLID and t.TBSPACE=s.TBSPACE"
开启缓冲池监控器：
db2 update monitor switches using bufferpool on
在应用系统重现问题后，检查缓冲池的快照：
db2 get snapshot for bufferpools on pzbdw|grep -i buffer|more
检查相关缓冲池快照，需要重点关注的data和index的逻辑/物理读写数据，一般来说，在缓冲池足够的情况下，physical reads值趋近于0，而logical reads值则很大。下面是红塔集团OA的32k缓冲池，在正常时的一个快照。
Bufferpool Snapshot
Bufferpool name = BF32
Buffer pool data logical reads = 493907
Buffer pool data physical reads = 78
Buffer pool temporary data logical reads = 129662
Buffer pool temporary data physical reads = 0
Buffer pool data writes = 1
Buffer pool index logical reads = 10302
Buffer pool index physical reads = 122
Buffer pool temporary index logical reads = 0
Buffer pool temporary index physical reads = 0
Total buffer pool read time (milliseconds) = 671
Total buffer pool write time (milliseconds)= 15
Buffer pool index writes = 58
No victim buffers available = 635
Tablespaces using bufferpool = 2
Alter bufferpool information:
如果发现物理和逻辑读的值相差不大，则使用下面的命令调整缓冲池大小，一般可以每次增加2000左右。
db2 ALTER BUFFERPOOL BF32 size 18000
缓冲池的调整是立即生效的，不需要重启数据库。需要注意的是，缓冲池的大小受物理内存和操作系统限制，一般32位操作系统下，总的缓冲池大小不能超过1G。如果在这个限制下，不能满足所有缓冲池都达到物理读趋近于0，则考虑尽可能保证用户体验影响较大的(MV、UM等开头的表使用的)缓冲池大小。理论上64位操作系统可以管理更大的内存空间，因此可以获得更好的性能。如下所示缓冲池，总大小为
1x4+4x4+3x8+2.5x16+2.5x32+1x32=226M
BPNAME NPAGES PAGESIZE
-------------------------------------------- ----------- -----------
IBMDEFAULTBP 1000 4096
BF4 4000 4096
BF8 3000 8192
BF16 2500 16384
BF32 2500 32768
PZBDW32 1000 32768
由于缓冲池的监控器收集的是自启用以后的数据，为获得调整后的准确情况，应关闭后重新打开，再次收集快照信息。
db2 update monitor switches using bufferpool off
db2 update monitor switches using bufferpool on
db2 get snapshot for bufferpools on pzbdw|grep -i buffer|more
重复以上步骤，获得比较合理的缓冲池设置。
4 索引调优
索引的调优，首先应该检查OA默认的索引是否已经创建成功，如果系统已经运行了较长的一段时间，可以对所有的索引进行一次runstat，保证索引的有效性，如果还是没有效果，就需要找到有严重性能问题的SQL语句进行有针对性的调优。
对所有表进行runstat的命令：
db2 -v reorgchk update statistics on table all
4.1收集DB2运行时数据：
DB使用事件监视器来收集运行时的数据，示例数据库名为pzbdw，rkmon是该示例所使用的事件监视器的名称，可以用其它任何名称来替代它。示例中的命令是在linux上测试的，其他操作系统可能要做一些相应的调整。
1.切换到db2inst1用户，保证db2inst1用户对/tmp目录具有写的权限，且具有500M以上
剩余磁盘空间。启动监控器，创建一个名为rkmon的sql语句监控器，并启动之。
su - db2inst1
db2 connect to pzbdw
db2 "update monitor switches using statement on"
db2 "create event monitor rkmon for statements write to file '/tmp'"
db2 "set event monitor rkmon state=1"
2.进入应用系统执行相应的操作，重现系统问题（最好多做几次或配合压力测试）。在/tmp
目录下，应该可以看到一组扩展名为“.evt ”的文件，这些文件就是您的事件监视器文件。然后关闭监控，否则监控文件可能很快会将系统存储撑爆。
db2 "set event monitor rkmon state=0"
3.从事件监视文件生成详细的SQL报告，在生成的sqltrace.txt文件中，可以看到这段时
间执行的所有sql语句，消耗的时间等详细信息。
db2evmon -path /tmp > /tmp/sqltrace.txt
4.如果要重新生成新的报告，需要先关闭监视器，清理监视文件，再重建，否则会和前面
的事件文件混在一起不便分析。
停止监控并删除日志：
db2 "drop event monitor rkmon"
rm -rf /tmp/*.evt
重建监控器：
db2 "create event monitor rkmon for statements write to file '/tmp'"
db2 "set event monitor rkmon state=1"
所有任务完成后应停止全局的监控器
$ db2 "update monitor switches using statement off"
4.2分析数据，收集性能影响最大的SQL语句
附件提供的db2trace工具，可以分析sqltrace.txt文件，并将分析结果导入数据库
DB2TRACE表中，便于查询分析。附带源代码，可能某些版本的DB2输出格式不完全一致，可以进行相应调整。
先修改classes目录下的config.properties文件，修改数据库连接参数，db2trace.txt文件
路径等信息。然后在命令行下进入db2trace目录，运行run.sh/bat文件，*unix环境下可能需要先赋予run.sh命令执行权限：
chmod 777 run.sh
在具有java环境的条件下，这个工具在服务器和客户端上都可以运行。由于sqltrace.txt 文件往往比较大，在远程调优的环境下，将工具直接上传到服务器运行比较方便。
AIX操作系统自带java环境，linux也可以使用W AS自带的jdk。Linux环境下JA V A 环境的配置请自行google。
根据sqltrace文件大小不同，此命令运行可能需要较长时间，控制台没有输出，可以到数据库中查看db2trace表记录的变化，此命令每次运行都会先清空db2trace表再插入。
分析完成后，就可以直接在数据库中查询得到性能影响较大的sql语句了。可以使用下面的四个来查询获得。如果查询出错，请检查db2trace表的schema是否正确。其中最耗CPU 的SQL语句对于解决问题往往是最有价值的：
最耗CPU 的SQL 语句
db2 "select sqltxt ,usrcpu from db2trace where operation not in ('Static Commit','Static Rollback', 'Prepare', 'Open', 'Describe', 'Compile') order by usrcpu desc fetch first 10 rows only"
执行时间最长的SQL语句
db2 "select sqltxt, exectime 'ExecutionTime(sec)' from db2trace where operation not in ('Static Commit', 'Static Rollback', 'Prepare', 'Open', 'Describe', 'Compile') order by decimal (exectime) desc fetch first 10 rows only"
执行次数最多的SQL 语句
db2 "select distinct(sqltxt),count(*) Count from db2trace where operation not in ('Static Commit', 'Static Rollback','Prepare', 'Open', 'Describe', 'Compile') group by sqltxt order by count(*) desc fetch first 10 rows only"
排序时间最长的SQL 语句
db2 "select sqltxt ,totsorttime ' TotalSortTime(ms)' from db2trace where operation not in ('Static Commit', 'Static Rollback', 'Prepare', 'Open', 'Describe', 'Compile') order by decimal(totsorttime) desc fetch first 10 rows only"
收集整理上面得到的SQL语句，并将里面的?替换为实际参数，放到DB2客户端中执行几次，验证这些SQL的查询时间确实较长(一般的查询时间在1s以上就很慢了)。
4.3使用索引顾问程序获得建议的索引
收集到有性能问题的SQL后，可以根据经验调整索引，也可以使用DB2的顾问程序获得建议的索引。将所有收集的语句放在tune.sql 文件中，并将下面这行插入到该文件中，这样可以更改工作负载中每条语句的执行频率：
--#SET FREQUENCY
这里的
select * from gzty.mv_object_right where attribute_id=11;
select a.*,b.descri from gzty.mv_opinion_inst a,gzty.mv_activity b where b.act_id =a.activity_id and a.formset_inst_id=11 order by binding_data_name,edit_time;
select f.* from gzty.mv_form_data_inst f where f.formset_inst_id=11;
select * from gzty.MV_FORM_FILE where OBJECT_ID=11 and OBJECT_TYPE=4;
select * from gzty.mv_form_file f where f.object_id=11 and f.object_type > 4;
先创建db2执行计划的相关数据库对象(以下命令只需要执行一次)
db2 -tvf ~/sqllib/misc/EXPLAIN.DDL
以前面得到的tune.sql为输入参数，执行顾问程序得到建议索引，生成的索引建议文件为tuneidx.sql
db2advis -d dbname -i tune.sql -t 0 -o tuneidx.sql
可以检查一下生成的建议索引，然后执行下面的命令创建索引
db2 -tf tuneidx.sql -z turnidx.log
重复以上步骤，尽可能是索引最优化。
需要注意的时，并不是所有的查询都可以通过索引解决性能问题，有时可能是需要对SQL或者应用进行优化才能从根本上解决问题的，比如：
未分页的大数据量查询
大表间的交叉连接导致笛卡尔乘积运算的
这些问题暂不在本文讨论范围内。
5. 其他调优
下面是一些DB2其他方面的调优要点，一般在初始化数据库的时候都需要调整的，从其他文档抄过来，供参考。
(1)调整db2 的最大连接数MAXAPPLS 和MAXAGENTS（默认是400），MAXAPPLS
值要略小于MAXAGENTS （记住这两个值与硬件的配置大小有关的，不能随意增大，否则会超过物理的承受能力）
使用以下命令查看MAXAGENTS 和修改其值的大小
db2 get dbm cfg
db2 update dbm cfg using MAXAGENTS N
使用以下命令修改MAXAPPLS
db2 get db cfg for DBNAME
db2 update db cfg for DBNAME using MAXAPPLS N
(2)调整db2日志文件最大的大小
db2 get db cfg for DBNAME 查看到LOGFILSIZ的值大小是多少，通常默认是1000，可加到10000(或更大)
db2 update db cfg for DBNAME using LOGFILSIZ N
(3)设置可打开最大文件数[默认64]
发现数据库该参数一直使用默认配置，系统正常运行时，不断打开和关闭文件的状态值相当高，减缓了SQL 响应时间并耗费了CPU 周期。根据现场实际情况，调整该参数值，直到不断打开和关闭文件的状态停止。
数据库配置参数MAXFILOP 约束DB2 能够同时打开的文件最大数量。当打开的文件数达到此数量时，DB2 将开始不断地关闭和打开它的表空间文件（包括裸设备）。不断地打开和关闭文件减缓了SQL 响应时间并耗费了CPU 周期。
要查明DB2 是否正在关闭文件，请发出以下命令：
db2 "get snapshot for database on DBNAME"
并查找以下的行：
Database files closed = 0
如果上述参数的值不为0，那么增加MAXFILOP 的值直到不断打开和关闭文件的状
态停止。使用以下命令：
db2 "update db cfg for DBNAME using MAXFILOP N"
(4)设置Locklist 和Maxlocks
locklist--在一个数据库全局内存中用于锁存储的内存。单位为页（4K）。
maxlocks--一个应用程序允许得到的锁占用的内存所占locklist大小的百分比。
可根据实际应用环境调整这两个值
db2 get db cfg for DBNAME
db2 update db cfg for DBNAME using locklist N
db2 update db cfg for DBNAME using maxlocks N
(5)设置超时锁
降低了原有的锁超时的参数值，防止在锁上等待过长时间会在锁上产生雪崩效应。
原有LOCKTIMEOUT = 30，改为15
db2 update db cfg for EXFLOW using LOCKTIMEOUT 15
LOCKTIMEOUT 的缺省值是-1，这意味着将没有锁超时（对OLTP 应用程序，这种情况可能会是灾难性的）。尽管如此，我还是经常发现许多DB2 用户用LOCKTIMEOUT = -1。将LOCKTIMEOUT 设置为很短的时间值，例如10 或15 秒。在锁上等待过长时间会在锁上产生雪崩效应。
首先，用以下命令检查LOCKTIMEOUT 的值：
db2 "get db cfg for DBNAME"
并查找包含以下文本的行：
Lock timeout (sec) (LOCKTIMEOUT) = -1
如果值是-1，考虑使用以下命令将它更改为15 秒（一定要首先询问应用程序开发者或您的供应商以确保应用程序能够处理锁超时）：
db2 "update db cfg for DBNAME using LOCKTIMEOUT 15"
您同时应该监视锁等待的数量、锁等待时间和正在使用锁列表内存（lock list memory）的量。请发出以下命令：
db2 "get snapshot for database on DBNAME"
查找以下行：
Locks held currently= 0
Lock waits= 0
Time database waited on locks (ms)= 0
Lock list memory in use (Bytes)= 576
Deadlocks detected= 0
Lock escalations= 0
Exclusive lock escalations= 0
Agents currently waiting on locks= 0
Lock Timeouts= 0
如果Lock list memory in use (Bytes) 超过所定义LOCKLIST 大小的50%，那么在LOCKLIST 数据库配置中增加4k 页的数量。
查看锁信息及释放死锁可通过下列一系列命令
db2 update monitor switches using lock on
db2 get snapshot for locks on DBNAME > locks.txt
把锁信息输出到locks.txt 文件中
在locks.txt 文件中查找某张表的相关锁
找到持有这个锁的应用程序句柄，如：888
db2 force application(888)
(6)调排序堆
发现数据库该参数一直使用默认值，根据现场情况，调整后，降低在CPU、I/O 和所用时间方面的成本。
db2 update db cfg for EXFLOW using SORTHEAP 256（调大一些）
请发出以下命令：
db2 "get snapshot for database on DBNAME"
并查找以下行：
Total sort heap allocated= 0
Total sorts = 1
Total sort time (ms)= 8
Sort overflows = 0
Active sorts = 0
Commit statements attempted = 3
Rollback statements attempted = 0
Let transactions = Commit statements attempted + Rollback
statements attempted
Let SortsPerTX= Total sorts / transactions
Let PercentSortOverflows = Sort overflows * 100 / Total sorts 100/14392681
如果PercentSortOverflows ((Sort overflows * 100) / Total sorts ) 大于 3 个百分点，那么在应用程序SQL 中会出现严重的或意外的排序问题。因为正是溢出的存在表明发生了大的排序，所以理想的情况是发现没有排序溢出或至少其百分比小于一个百分点。
如果出现过多的排序溢出，那么“应急”解决方案是增加SORTHEAP 的大小。然而，这样做只是掩盖了真实的性能问题。相反，您应该确定引起排序的SQL 并更改该SQL、索引或群集来避免或减少排序开销。
如果SortsPerTX 大于5 （作为一种经验之谈），那么每个事务的排序数可能很大。虽然某些应用程序事务执行许多小的组合排序（它们不会溢出并且执行时间很短），但是它消耗了过多的CPU。当SortsPerTX 很大时，按我的经验，这些机器通常会受到CPU 的限制。确定引起排序的SQL 并改进存取方案（通过索引、群集或更改SQL）对提高事务吞吐率是极为重要的。
dbm:
ASLHEAPSZ 256 ,
query_heap_sz N 查询堆的大小必须大于或等于ASLHEAPSZ ,最好5倍以上
db:
APPLHEAPSZ 4096
应用程序堆是供数据库管理器代表某个特定代理使用的私有内存。当代理或子代理要为应用程序而初始化时，就要从这个堆中分配内存，并且所分配的内存数量是处理请求时所需的最小内存量，如果需要更多的内存，则最多可以从堆中分配由该参数指定的一个最大值那么多的内存。按256 逐次增加，直到错误消失。
APP_CTL_HEAP_SZ 1024
了解了各参数的功能后，当需要对这些参数进行调整时，应同时考虑是否需要对其它几个相关参数进行调整。例如当SQL0973N 错误提示需要增大应用程序控制堆的大小时，则可直接增大APP_CTL_HEAP_SZ 参数的值，用户希望维持应用程序组中应用程序数目不变，由于该值为APPGROUP_MEM_SZ / APP_CTL_HEAP_SZ 所决定，就要考虑同时增大APPGROUP_MEM_SZ 的值，即增大应用程序组共享内存；或由于应用程序控制堆为公式((100 - GROUPHEAP_RATIO) / 100 * APP_CTL_HEAP_SZ) 所决定，因此也可通过仅减小GROUPHEAP_RA TIO 参数的值，在维持APPGROUP_MEM_SZ，APP_CTL_HEAP_SZ 大小以及应用程序组中应用程序数目不变的情况下，减少应用程序共享堆的大小，从而达到增大应用程序控制堆的总大小的目的。总之，在理解了这些参数之间的相互关系之后，用户可根据自己的内存使用情况和需求对这些参数进行调整，实现系统的调优。
这几个额外参数可以参考实际内存作相应调整。
SHEAPTHRES 10000
SHEAPTHRES_SHR 10000
(7)增大异步页面清除器个数，降低I/O的操作成本。
查看异步页面清除器个数，默认情况为1，调为4，根据现场服务器CPU而定
db2 get db cfg for exflow
Number of asynchronous page cleaners (NUM_IOCLEANERS) = 1
db2 update db cfg for exflow using NUM_IOCLEANERS 4
NUM_IOCLEANERS (DB)
这个参数指定一个数据库的异步页面清除器的数量，异步页面清除器将更改后的页面从缓冲池写到磁盘。一开始将这个参数设为等于系统中CPU 的数量。当触发了I/O Cleaners 时，它们会同时启动，因此不希望有那么多的清除器，以致影响性能和阻塞其他处理过程。
如果Asynchronous Write Percentage (AWP) 是90% 或更高，则减少
NUM_IOCLEANERS，如果Asynchronous Write Percentage (AWP) 小于90%，则增加NUM_IOCLEANERS。
AWP = (( "Asynchronous pool data page writes"+ "Asynchronous pool index page writes") * 100) / ( "Buffer pool data writes"+ "Buffer pool index writes")
(8)打开数据库自动RUNSTA TS开关（可选，打开会增加数据库一些性能负担）
db2 get db cfg for DBNAME 查看AUTO_RUNSTATS
db2 update db cfg for DBNAME using AUTO_RUNSTATS on
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
常见缓冲溶液的配制 缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH 值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH 值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为: 需Na2HPO4量为 : 计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等 常用体系 1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M） X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸再加水稀释至200ml pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml 2.2 50 44.0 3.0 50 11.4 2.4 50 32.4 3.2 50 8.2 2.6 50 24.2 3.4 50 6.4 2.8 50 16.8 3.6 50 5.0
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2mol/L 溶液为28.40克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2mol/L 溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1mol/L 溶液为21.01克/升 20%盐酸溶液如何配置： 取浓盐酸（质量百分比浓度为36.5%）一个体积（如100毫升），加入到96.5毫升水中就可以了。 36.5%*100*1.17=20%*m m=213.5(克) 所需水的质量为;213.5-117=96.5克，也就是96.5毫升水。 PH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 1 9.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55
实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl , , 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 2)10×TE Buffer , , 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3)1.5 M Tris-HCl 组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 4)3 M 醋酸钠 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至 3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer 组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵 组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml 配制方法：
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
各种缓冲液的配制方法 24 Na2HP6 2H2O,分子量=178.05 0.2mol∕L 溶液含35.61g∕L 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol∕L 溶液含21.01g∕L 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol∕L 溶液含21.01g∕L 柠檬酸钠.2HO,分子量=294.12; 0.1mol∕L溶液
(1)醋酸盐溶液的配制： 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.6) 取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml ,再加水稀释至250ml,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.7) 取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60?80ml ,至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml ,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.8) 取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml ,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.5) 取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.6) 取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节PH值至4.6,再加水稀释至100ml, 即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH6.0) 取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml ,即得。 用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAC)K在此，C(HAC指醋酸的 浓度，C(NaAC指醋酸钠的浓度，Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5 (1.8乘10的-5次方)，PKa=-IgKa=4.75,将PH=5.5代入，可得C(NaAC)/C(HAc)=5.6通常我们配制时会使C(HAC)=0.1mol∕L,或是C(HAC)=0.2mol/L 等。若是配制C(HAC)=0.1mol/L,则C(NaAC)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000∕17.5=5.7mL。将称好的 醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度， 也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
常用缓冲溶液的配制方法 磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/ 升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g 柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g
乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL 甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 甘氨酸分子量=75.07; 0.2M 溶液含15.01克/升。 pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。 Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。 Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。 pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g
PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。0.01M PBS缓冲液 称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO4?12H2O（磷酸氢二钠）和NaH2PO4?2H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml 使精品文档，你值得期待 溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.4，滤过。 巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g 加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)：取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml 混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液(pH8.0)：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0。 氨－氯化铵缓冲液(pH10.0)：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液(pH8.0)：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5ml调节pH值至8.0，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液(pH10.8～11.2)：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液(pH9.0)：取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L 氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液(pH3.5)：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至3.0，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml，再加水稀释至1000ml。
常用缓冲液的配制（TBS，PBS） 科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅 这是各种缓冲液的配制方法 1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。 （BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB液（PH7.6） 先配制0.05MTB液： Tris 60.75g 1N HCL 约420ml 双蒸水至1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)
最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点： ?磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。 ?因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。 ?磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。 表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制 pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 2 7.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.0 注：根据Green(1933)的资料汇编。 用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值： pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃) 表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 1 7.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7
磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。 磷酸盐缓冲液(pH2.0) 甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH2.5) 取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。 磷酸盐缓冲液(pH5.0) 取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。 磷酸盐缓冲液(pH5.8) 取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.5) 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.6) 取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8) 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.8) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.0)
取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.2) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.3) 取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.6) 取磷酸二氢钾27.22g，加水使溶解成1000ml，取50ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液42.4ml，再加水稀释至200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.8) 甲液：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。 乙液：取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml 与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.8～8.0) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L） X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 ) 甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为28.40克/升。 - Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含35.01克/升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为21.01克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化 钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量， mol/L 溶液为29.41克/毫升。 ;
22 # 7．磷酸盐缓冲液 242 Na2HPO4·12H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 NaH2PO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：pKa1＝，pKa2＝ 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1～4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。 《 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 > 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。 硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。 ) 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）