酶标仪是什么？
用来做酶联免疫反应的专用仪器。
本质上是一台光电比色计。
按照用途可以分为光吸收酶标仪和多功能酶标仪。
光吸收酶标仪，只有光吸收模块，所以只能做光吸收实验，核酸蛋白定量，酶学分析，ELISA，细胞分析。
主要型号：F50，SUNRISE。区别，通道数不同。F50为8通道，SUNRISE为12通道，包括一个参比通道。光源不同，F50为LED冷光源，SUNRISE为卤素灯热光源。波长范围不同，F50为400～750，SUNRISE为340～750，并且，可配温控模块。
另外，SUNRISE12个通道，检测更快。有1个参比通道，可以开机可以自动校准波长。可配温控模块，温控还是比较好的。不用配电脑，集成有触控面板，内置Windows ce的系统。
F50体积小巧，检测准确，免费升级，免维护，不用换灯，卤素灯最多2年就需要更换，不用预热，使用方便。
两款都是经典的光吸收酶标仪。相当的皮实，耐用，而且也够准确。
多功能酶标仪
除了光吸收模块，还有温控，气体模块，进样器，荧光模块，发光模块，震荡模块。
所以，波长范围200~1000全波长。还会看到一个参数：OD范围：0～4。
在酶标仪上，测量光吸收量用OD表示样品的吸光度。典型应用，核酸定量，因为核酸在260有特征吸收。蛋白在280有特征吸收，故可以定量蛋白。而，两者的比值，可以反应样品核酸的纯度。
DNA或RNA的浓度
OD260=1.0相当于
?50 g/ml双链DNA(dsDNA)
?40 μg/ml单链DNA/RNA
?20 μg/ml寡核苷酸(Oligos)
?DNA或RNA的纯度
?DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8
?RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0
蛋白质定量—最常用的两种方法
y Bradford法—考马斯亮蓝染色法
考马斯亮蓝G-250
和蛋白结合
形成蓝色化合物（在595 nm处有最大吸收峰）
BCA法
蛋白质的酞胺键
在碱性条件下和Cu2+反应
生成Cu+
与BCA结合
形成紫色复合物（在562 nm处有最大吸收峰）
因为特征吸收波长的原因，F50，SUNRISE不能做核酸和蛋白定量。，所以老师如果做核酸和蛋白的话，需要用多功能酶标仪。另外，参数上写230的吸收，和320的吸收，这是为了去除空白，除了核酸蛋白，其他有机物在230有吸收，而无机物在320处有吸收。所以为了让老师更直观的看到有没有杂质，吸收图谱就很有必要，所以在SPARK10M上，就配置有吸收图谱。这个在NANODROPE上也有，它也有图谱。所以买了这个，就不用热电了。另外酶标仪在测定核酸蛋白的时候，比热电更高效，热点的有几个型号，最低配的一次测一个，最好的不知道，好像是48个，因为也是一排8个往上增加的。但是，不知道为什么，热电的一排间距设计的，刚好和排枪不同，所以，还是要一个样一个样的加。所以也就失去了意义。因为测量体系也就2ul，几秒钟就蒸发了，严重了样品干了，最少也会影
响浓度。而酶标仪，配上NANOQUANT检测板，一次可测16个最多。而且板子培优适配器，就是一个有机玻璃板子。检测板上有四个孔位，刚好和定位板适配，定位板上的孔和排枪适配，所以加样特产方便快捷。
现在在卖的多功能
M200,F200,F500,M1000
以及新的SPARK系列，10M,20M
下面我以10m作为例子，讲一下多功能酶标仪。
说到帝肯酶标仪，不得不说他们做了第一个四光栅光路，光栅是用来去除杂光的，原理类似棱镜的分光。样品前2光栅，后2光栅，组成四光栅。命名为：HSM光吸收高速光栅。这里看一下M1000彩页，里面有4光栅示意图。前面两个弧形的就是光栅。所以，样品前2个，后面两个。顺利得出，化学发光只能有两光栅。因为化学发光用不到激发光路。针对10M，由氙灯发光，用氙灯可以保证有足够的能量，和波长范围。之后通过光栅，之间用光纤传导，导入到样品的上方，检测器在板子下方。它的光吸收模块有两套光路，一个是垂直光路，用于酶标板检测，一个是水平光路，用于比色杯测量。单孔扫描：200~1000，可以1NM步进，全波长扫描5S就可以完成，可以提高实验速度。
针对光栅，波长的准确性，是重要参数。目前TECAN最好的光栅是Infinite系列酶标仪，可以做到0.5nm，之后是spark系列，0.8nm。而其他的，大多在2nm。重要性体现在：对于DNA样品，1nm检测波长的漂移将带来10%的读数误差，2nm 带来23%的误差，将导致实验结果的不稳定。
酶标仪现在的光路，只要有两种，一个是滤光片光路，一个是光栅光路，光程是一样的，区别在于把滤光片换成光栅。光栅光路的有点：波长可以任意选择，全波长扫描，而滤光片只可以选择特定的波长。故，滤光片的灵敏度高，但是会需要特定滤光片，比如偏振片，灰度片。位于光源和样品间的光栅或滤光片用于获得激发用的单色光。位于样品和检测器间的光栅或滤光片是为了滤除激发光和杂质的非特异性信号。
荧光：
目前国际上研究分子间相互作用广泛应用的方法：
y荧光偏振 - FP
y荧光共振能量转移 - FRET
y时间分辨荧光 - TRF
y TR-FRET
都用于研究分子间相互作用，用于筛选，比如看研发的新药是否会和靶点结合。
后来，tecan结合了两个光路的有点，创造性的开发出了融合光路，也就是说滤光片和光栅可以根据实验需求自由组合，这样便可以兼顾两者的有点。这里为了便于理解，对比一下伯腾的酶标仪，他只是简单地硬件堆积，只能2选一，要么光栅，要么滤光片，而机器也是那么大，就造成它的滤光片数量特别少，只有2组，所以滤光片光路的可用波长是在有限，限制了设备的应用。另外，说明一下各个光路的典型应用组合：滤光片（F），光栅（M），
M/M：常规荧光染料、探针实验、细胞实验
M/F：远红外荧光染料，TR-FRET等，激发波长扫描
F/M：发射波长扫描
F/F：高通量筛选，如：FP/TR-FRET
这个可以跟老师讲一下，说明我们这个使用实际用处的，不失为了堆参数，也可以显示我们的专业。现在的销售，一定要向专业发展和靠拢，慢慢的称谓老师的实验顾问，帮老师解决问题，这样，老师会觉得你不是为了销售而销售，是为了帮助他。而是也是，我们找他，是过去帮他的，没有我们，他怎么挑选设备，他怎么得到业界的最新的实验方法。他们也喜欢了解前沿信息，而我们就是他们的渠道。所以，针对销售，先做人，后做事。
扯远了。
上面的光路我们提到了垂直光路，和光纤，SPARK系列还针对应用，开发了z轴聚焦。就是光纤头可以上下移动。用来靠近样品，避免测这个空的时候，旁边孔的光进去，造成干扰。
我们看参数的时候，会发现有个顶部、底部，这里说一下，顶部测量用于测量光吸收，荧光，化学发光。底部用于测量细胞，也就是说细胞分析用的是底读功能，因为细胞会沉淀。
参数里面化学发光里面还有辉光和闪光，先说一下化学发光。生物发光现象很多，都是由ATP反应发出的。所以会看到参数里面有ATP字样。用于研究报告基因分析，可以简单地理解为基因表达。这里还涉及两个东西要说明。一个是滤光片。化学发光因为强度的原因，不能太强，所以这时候会用到灰度滤光片，就是滤光片的两端，有设定好的OD吸光值得的滤光片，组成OD1-3的灰度滤光片，用于减弱光的强度。
另一个是进样器。大家先说说什时候酶标仪需要配进样器，为什么。
化学发光分为两种，一种是闪光，一种是辉光。举个极端的例子，一个老师要测量一个样品，而这个发光是闪光，加入试剂立即发光，2秒就没了，老师都还没有来得及吧板子放进去，就没了，还怎么测。这个时候就用上了进样器。
另外就是活细胞实验用，比如钙离子通道实验。
还有一个要说的应用，荧光偏振：FP
荧光偏振(FP)
溶液中的荧光分子在受到偏振光照射时，可吸收并释放出相应的偏振荧光，如果在激发时荧光物质处于静止状态，发射光将保持原有激发光的偏振性，如果其处于运动状态，发射光电偏振偏振平面将不同于原有激发光的偏振特性，这就是荧光偏振现象，荧光分子与其它因子的相互作用，例如相互结合或排斥；其所处环境的性质，例如溶液的粘度、温度等，这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的发射光的发射平面产生影响。因此以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，如受体配体结合分析，DNA－蛋白质结合分析，SNP分析，酶活性分析。
荧光偏振分析所需的样品量少，灵敏度高，可达亚纳摩尔级范围，重复性好，操作简便，也更为安全可靠，不会在实验过程中生成有害的放射性废物，此外荧光偏振是真正均相的，允许实时检测（动力学检测），对于浓度变化不敏感，是均相检测形式（中间不含洗涤步骤）的最佳解决方案。
目前市场上多款酶标仪都可以用来做荧光偏振检测，Invitrogene公司专门利用Predictor? hERG对多款酶标仪进行荧光偏振测试分析。
细胞分析，流程：细胞复苏、细胞计数、培养、收获、计数/活力/汇合度、种细胞、检测。
目前为止，SPARK系列是唯一可以对悬浮细胞计数的酶标仪。针对细胞实验，有几点需要说一下，第一个是细胞计数，用的不用标记，但也可以荧光分析，通过特定试剂的细胞染色，可以把细胞里的一种蛋白染色，发荧光，机器读取，进行计数。并且可以进行死活分析，因为活细胞染色是一个空心圆，而死细胞是实心的。
Tecan针对细胞还有一次性的细胞计数片和响应的适配器。一个适配器可以配4块计数片，一个片可以上两个样品，一次最多可以做8个样品。
?在600nm浊度分析光吸收可用监测微孔板中细菌细胞的数量，也可用于研究细胞毒素类药物的效果
在600nm光的散射可以和细胞数量联系在一起
细胞计数应用举例：细胞毒理实验，MTT法，MTT-黄色染料。
测试细胞死亡数量于制毒物质浓度和量的关系，这里会用到Promega CellTox 试剂，特异性结合死细胞DNA。这个任何做毒理的实验室都可以问问，比如蔬菜研究所的毒理室。
Tecan有细胞培养用的气体控制模块，机器后面有两个气孔，分别接氧气还二氧化碳，可以根据实验需求，程序设定气体浓度，也可以实施设定。这里有一点说明一下，参数里面写到了一个氧气浓度的可控范围，tecan的是0.1起，其他的设备都是1%起，0.2% O2能诱导缺氧特异蛋白的表达，1%以上的O2浓度则不能血管内皮生长因子VEGF。瘤体组织VEGF表达水平与其微血管密度及恶性程度成正相关，并明显高于非肿瘤组织。这表明VEGF可能通过促进血管生成等方式促进肿瘤生成，尤其在高度血管化肿瘤中。
HIF-1普遍存在于人和哺乳动物细胞内，常氧下(21%O2)也有表达，但合成的HIF-1蛋白很快即被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解，只有在缺氧条
件下HIF-1才可稳定表达。这些基因表达后参与，如红细胞生成，血管形成，核苷、氨基酸、糖的能量代谢，细胞存活、凋亡和活动以及药物抵抗等生物学效应，以维持组织、细胞在缺氧条件下内环境稳定，以适应缺氧。同时HIF一1及其诱导表达的基因还在生理性缺氧如干细胞微环境、胎盘发育、胚胎发育过程中组织细胞分化，以及多种病理情况如肿瘤的发展、转移中发挥着重要作用。
补充：对于哺乳动物细胞，一般需要维持CO2 5%左右，与培养基中的缓冲盐作用，维持pH值。降低O2浓度可以诱导细胞缺氧反应，对于研究缺血性疾病、实体肿瘤和细胞代谢有重要意义。
CO2：
?0.04-10% vol.
?稳定medium pH
?模拟体内生理环境
O2：
?0.1-21% vol.
?模拟生理环境：血液=16% O2
?缺血性疾病研究：氧休克（再灌注损伤），心血管疾病（中风、心肌梗塞等）
?肿瘤组织研究：肿瘤在缺氧状态下的快速生长、靶向治疗
?细胞代谢：线粒体损伤
Tecan有一个湿度控制盒，也用于细胞实验。酶标仪做细胞实验，用的是酶标板，敞口的。二一个细胞实验，流程很长，几个小时很随意，所以，随着时间，细胞的培养体系会蒸发，更别说仪器内部的发热，会促进液体的蒸发，这回导致测量的不准确，极端情况下细胞干了，测不到数据，实验失败。二湿度控制盒，就是为了解决这个问题发明的。是一个钢性的盒子，盒子边缘有两个凹槽，每个凹槽可以最多加6ml水，最多共12ml，用来保证细胞生长环境的稳定。既然是盒子，
就一定有盖子，这就引出了tecan酶标仪的另一个功能：自动开盖。
需要测量的时候，机器内部有电磁铁，把盖子吸起来，测过之后，再盖上。在减少液体挥发的同时，实现了无人值守的长时间动态监测。电脑设定好程序即可完全自动运行，并且，SPARK配有远程控制软件，任意联网的Windows系统设备都可以随时访问，查看进展和状态。
参数里面还有震荡形式的参数，也是为了细胞实验，主要作用是摇匀。
总结一下：SPARK 10M，最新的多功能酶标仪，HSM高速光栅，荧光实验可以两全其美的融合光路，化学发光扫描，细胞计数、汇合度、活性分析、细胞孵育实验的环境控制，自动开盖，带有涡旋加热功能的加样器。充分满足任何实验的需求。
认证大于参数
在保证检测可靠的基础上，不同仪器的下一个差异就体现在检测的灵敏度上面，这时人们关心的就是仪器能够检测到多弱的信号。灵敏度涉及了整个光路系统的设计和选料，很难说某一个部件会起决定性作用。但是有一点，在各种单功能检测项目中，光吸收检测用非放大型的光电二极管、荧光检测用光电倍增管、发光检测用专门设计的单光子计数光电倍增管，这三种不同的检测器是各自检测领域的优先选择。各单项检测的最优结果都是用相应检测器完成的。当然也有的仪器出于成本等考虑，用一个检测器兼容多种检测模式，这在一定程度上也能完成实验需求，但是在性能上也会有所牺牲折中，无法实现各项检测都达到最优化。
关于灵敏度的定义和检测标准，每个厂家都有各自的描述，都会说自己是怎样怎样好，很难有一个直观的客观比较。因此，某些试剂厂家就站了出来，对某些仪器的检测性能提供一个第三方的认证。
比较常见的是发光检测领域里面的Promega公司DLReady认证，荧光检测领域的Invitrogen公司的LanthaScreen系列认证、Cisbio公司的HTRF认证、BellBrook
实验室的Transcreener认证等等。这些认证主要是针对公司提供的某一类型的要求较高的试剂盒，涵盖了对检测仪器的各种性能要求，包括：检测方法是否能用，灵敏度、线性范围、孔间干扰等是否满足要求等等。
如果需要做相关的实验，例如做Luciferase发光检测的就看看仪器是否有DLReady认证、做TR-FRET的就看看HTRF认证、做FP就看看Transcreener认证，如果机器拥有相关的认证，就可以说明该机器在一定程度上能够较好地满足类似检测的各种需求，远比单单比较一个灵敏度参数更能说明问题。因为一个实验能否做好并不是单单一个灵敏度就能表征的。
需要特别注意的是，LanthaScreen是一个系列的认证，涵盖了FI、FRET、TRF、FP等多个子项目，不同仪器所通过的子项目是不一样的，需要上Invitrogen网站仔细查询核对。
光栅型的仪器由于新技术近几年才逐渐兴起，受限于技术研发和仪器成本，同一个价格范围内的灵敏度等指标会略差于发展成熟的滤光片机器。所以，在中档多功能酶标仪领域，拿到了各种认证的光栅型仪器并不多见。而作为新一代光栅型酶标仪的代表作，TECAN M1000已经拿到了全部上述四种认证，而且在灵敏度等单项性能上也已经超越了不少的中高端滤片型酶标仪。
目前国内许多计生站系统开了酶免检测项目，如：乙肝五项、爱滋病检测、优生优育系列检测、激素检测等
PHOMO酶标仪的标准操作程序（SOP） 【目的】 规范仪器设备的操作程序，保证酶标仪的正常使用。 【适用范围】 本实验室酶联免疫试验的操作。 【操作人员】：本实验室实验人员。 【操作步骤】： 1.插上电源，打开酶标仪电源开关（按仪器后面的开关键），打开连接计算机的开关； 2.双击计算机上“安图仪器2.6”的图标，此时软件打开，先注册相应的软件信息，然后 选择相应的操作人员输入通行密码，进入软件的主操作界面； 3.单击“单项设置”，根据试剂说明编写对应的计算公式； 4.单击“布局”，根据试剂盒说明设置相应项目的板子布局； 5.单击“程序测量”，选择开始测量并选择相应的测量项目和使用的板子布局； 6.单击“设定本次测量样品编号”输入起始号码和样品数量。 7.单击“自动生成结果”然后点击确定。再点击开始按钮。 8.此时仪器处于测量状态，操作人员不能进行其它操作。 9.测量结束，测试结构显示在显示器上。此时点击“测量”按钮，选择保存测量数据项并 输入板子编号（如果有多块酶标板进行测量应加以区别如“-1”）试剂名称、生产日期以及试剂批号并点击确认按钮。 10.单击“测量”选择送检样品录入项，录入相应的标本信息并保存录入内容。 11.单击“查询及打印”按钮，选择样本管理或微板查询，选择需要打印的标本结果并打印。 12.关闭酶标仪电源。 【酶标仪的维护保养】 1.平常不用时，拔掉电源插头，盖好防尘罩。 2.使用完毕，一定要拿下测试完的反应板，千万不要将控制板留在载物台上。 3.若有液体溅到载物台或酶标仪外壁，应用湿抹布及时擦去。 4.每次使用完毕用湿抹布擦拭酶标仪，以保持其洁净。 【编制测试程序】 具体的程序编制方法请参阅autosoft PHOMO酶标仪操作手册。（下附操作流程表） 此文件只供参考，用户可根据自己的情况进行修改。 酶标仪测量、保存及打印步骤
酶标仪的检测原理 光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光，400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer 法则，OD值与光强度成下述关系： E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算： E＝OD=C×D×E C为检测物的浓度 D为检测物的厚度 E为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 Anthos 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在0％一100％之间。透光值 的计算如下： T＝（Meas—Min）／（Max—Min） 其中T为透光值，Meas为检测的二进位数值，Min为在0％的情况下检测的二进位数值，Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下： MaX=3600 Mn=20 Meas＝30 T=（30-20）/3600-20)＝0．0028 OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552 Anthos 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶标仪的用途和其它提示 用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。
酶标仪软件操作步骤 一、软件运行前得连接 酶标仪插上电源,与电脑连接好后，打开电脑与酶标仪开关,酶标仪至少稳定15miｎ后开始读数,效果比较好。注意，当酶标仪处于poweｒon 得状态时，不要手动打开酶标板室与比色皿室得门,以免紫外辐射得伤害或者仪器得损伤。二、软件得运行 １、打开桌面快捷方式SkanＩｔREｆor MSS ２.４.２运行软件,出现L ｏg on To SｋanIt sｏｆｔｗare得界面。 2、use name默认为“admｉn”,ｐasswoｒd为空 3、点OK进入ＳkaｎIｔsoｆtwaｒe ２.4.２界面,Nｅw ｓｅsｓiｏn-新建任务程序,Ｏpen sessiｏn-打开已有程序。 4、在界面上方得ｓｅtting中选择Ｉnsｔruｍｅｎt,出现Inｓｔrument setting 得界面,在Iｎｓｔｒumｅnt中选中Ｍulｔiskan specｔrum on Ⅰ,ＴhemｏＥｌectroｎ。点击右侧得setup，在serｉａｌnumbeｒ中输入150０-850,然后点击OK。再点击Deｆａuｌt instrument右边得ｃonnect,即可设定好连接。然后点击close关闭窗口。 三.Ｎew ｓeｓｓion操作 １.新建任务程序： →点击nｅw seｓｓion进入protocｏｌoｐtiｏｎs界面,在ｓessiｏn nam ｅ中输入新得程序名称 →点击nｅxt进入ｐlaｔe layout ｏpｔions界面，在seleｃt plate tempｌat ｅ中选择所需模板类型(一般96孔板选择ｕsｅdefaｕlt,比色皿选择cuvette,其她得可以选择相应得类型) →输入plaｔe lａyouｔｎamｅ(系统默认得与session name相同) →点击ｎexｔ进入Ｄｅfinitiｏn done界面,在ｓelect location中选择任务程序所要保存得目得文件夹(该界面可进行新建,重命名及删除文件夹操作) →点击fiｎish完成新建,进入SｋanＩｔsoftwarｅ 2.4.2程序操作主界面(主要有三大块: platｅlaｙｏuｔ用于模板区域选择,ｐroｔocｏl用于程序编辑,ｒesulｔs用于数据处理)。
多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程Standard Operation of SpectraMax i3 部门Department 签名/日期Signature/Date 起草人：Prepared by 樊小川，Xiaochuan Fan QC 审核人：Reviewed by 黄思佳，Sijia Huang QC 审核人：Reviewed by 褚夫兰，Fulan Chu QA 批准人：Approved by 张伯彦，Boyan Zhang 质量负责人 1 目的 建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时的操作。 2 适用范围
本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作 3 术语或定义 多功能酶标仪：指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间分辨荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。 4 责任 4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保 证运行正常。 4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用 记录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。 5 EHS要求 N/A 6 程序 6.1 仪器安装 仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。 6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤 6.2.1 打开软件 点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现"Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。 6.2.2 连接仪器 点击‘Choose a diffecient instrument’，打开‘Instrument Connection’对话框，在“Availible Instruments”菜单中选择仪器连接线与电脑所接的串口号(COM)。 选择所购买的酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。 6.2.3 仪器检测参数设定 点击图标后出现“Settings”对话框，对话框最上方出现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸收)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间分辨荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者根据实验
酶标仪使用方法 一、仪器准备 1．将MK3酶标仪后部的电源开关打开，仪器将显示自检，基础酶联，软件版本号。2．等待数秒后，荧屏显示“基础酶联，准备和时间”。表示仪器正常，处于等待状态。操作规程 1．工作人员心须详细阅读仪器操作使用说明书。 2．将被测样品板放入酶标盘中，同时打开与酶标仪相连的打印机开关。 3．按“测量模式”键：进入选择波长程序 荧屏显示：“基础酶联” “1.单波长检测” 按“↑”“↓”选择单波长.双波长检测. 4．按“输入”键：进入选择好的文件名状态。 若选择单波长检测, 荧屏显示：“1.单波长检测” “滤光片405” 再用数字键选择需要的波长. 若选择双波长检测, 荧屏显示：“2.双波长检测” “1.滤光片450” 再用数字键选择需要的第一检测波长.按”输入”键, 荧屏显示: “2双波长检测” “2.滤光片630” 再用数字键选择需要的第二检测波长.按”输入”键, 荧屏显示：“2双波长检测” “无试剂空白” 5．继续按”输入”键, 荧屏显示：“2双波长检测” “最终结果”(单波长无此步骤) 6．按”输入”键,返回到荧屏显示“基础酶联，准备和时间” 7．按”开始”键, 启动阅读功能，酶标仪对样品板开始进行测试。 8．读数完毕，被测孔子板复位，荧屏显示“正在传送数据”,等待数秒后,打印机开始打印测试结果。当打印完毕后，关闭打印机开关，荧屏回到主菜单状态。此时将酶标仪右侧开关打至“O”即可。
二、计算机控制 1．将MK3酶标仪后部的电源开关打开，仪器将显示自检，基础酶联，软件版本号2．等待数秒后，荧屏显示“基础酶联，准备和时间”。表示仪器正常，处于等待状态。3．在lab-35计算机的桌面上打开“思桥检验科管理系统”,输入用户名“system”及密码“system”. 4．进入系统后，选择“酶标仪”菜单。在下拉框中选择“酶标项目设置” （1）在面板当中进行单，双波长的设置，点击“仪器通迅设置”。 （2）在“仪器通迅设置”面板上，默认为单波长的方式，如要选择双波长，勾选双波长的选框。 （3）在主滤光片及副滤光片上选择相应的所需波长大小。 （4）选择完成后，点击“确认”键，系统显示“设置成功”，按“确定”退回。（5）点击“退出”键，系统显示“酶标仪器设置成功”，按“确定”键返回到“酶标项目设置”的面板上。 （6）在“酶标仪”的下拉框中选择“酶标仪操作”，在此面板中完成读板，数据存储及打印的工作。 5. （1）点击“连机”，在状态栏显示“连机成功”，表明计算机已与酶标仪连接成功。（2）点击“启动”，在状态栏显示“计算机远程控制成功”,表明计算机已远程控制酶标仪。如未显示此项，则读板功能不能完成，数据传输异常。 （3）顺利完成上面两项后，继续点击“读板”键，启动酶标仪读板功能。数秒后，酶标仪开始读板，完成读板后，在“状态”栏显示“结果数据分离成功”，并在面板的样品栏显示读板后的数据。（在此“酶标仪操作”面板未关闭之前，可连续读板，如关闭面板需重复“连机”，“启动“） （4）点击“入库”键，系统显示“入库完毕”，按“确定”返回。此项完成了数据的存储。 （5）点出“计算“键，系统显示“计算完毕”, 按“确定”返回。此项完成后才可以打印。 （6）点出“打印”键，完成打印到此波长选择设置成功，点击“关闭”键，退出“酶标项目设置” （7）当打印完毕后，关闭打印机开关。此时将酶标仪右侧开关打至“O”即可。
Multiscan MK3酶标仪说明书 Multiscan MK3 装机手册 一.装机 1.打开包装箱，取出仪器，去掉泡沫架，塑料封套，干燥剂。将仪器后部白色外盖左右二个固定螺丝打开。 2.安装滤光片轮（注意：滤光片轮有齿缘朝向仪器后部）。 3.安装灯泡（注意：灯泡边缘突起部向上）。 4.关上机盖,将盖左右二个固定螺丝固定好,连接仪器电源接口和打印机接口,将仪器和打印机电源打开.注意勿动仪器后部的二排(共16针)针式按钮. 二.MULTISCAN MK3 技术性能 1.卓越的光学系统: 八通道光路检测系统,检测速度非常快,检测96孔酶标板仅需2秒准确性好(?2%或0.007Abs),结果更可靠. 测量范围宽:0-3.5Abs,线性范围大:0-2.5Abs. 2.可线性振板,振板速度/时间可选. 3.内部软件有四种测量程序模块: 基础酶联(包括简单的定性和定量),临界值(可输临界值公式),曲线定量(可作标准曲线),凝集检测(供选装). 4. 内部软件功能强大,人机对话,便于操作,机器内存可储存64个测试程序,可满足常规应用. 5.提供中文电脑软件,可满足临床检验科室打印综合报告和质控图 三.使用培训： （一）编制测量程序： 步骤：先进入测量程序模块（“转换＋输入”）?设置“测量模式和测量参数”?设置“计算模式和计算参数”?储存所编程序?使用时再调出程序。 1.定性测量: 1).简单的定性测量(如固定单/双限值):可在“基础酶联”模式下设。 2).定性测量(需输入临界值公式):可在“临界值”模式下设定。 ?编程:按上述“步骤”（先进入测量程序模块?“测量模式和测量参数”?“计算模式和计算参数”）依次设定参数。 ?储存：先按“储存”，再设置程序号。 ?调出：先按调出，再输入程序号。（注意：在哪个程序块下储存的程序，调出时必须先进入该程序模块才能调出。
Multiscan MK3使用手册
一. 装机 1.打开包装箱，取出仪器，去掉泡沫架，塑料封套，干燥 剂。将仪器后部白色外盖左右二个固定螺丝打开。 2.安装滤光片轮（图中3号位，注意：滤光片轮有齿缘朝向 仪器后部）。 3.安装灯泡（图中1号位注意：灯泡边缘突起部向上）。
4.关上机盖,将盖左右二个固定螺丝固定好,连接仪器电源接口 (图中2位)和打印机接口(图中6位,电脑接口为4位),将仪器和 打印机电源打开.注意勿动仪器后部的二排(共16针)针式按钮(图中5和7位). 二. MULTISCAN MK3 技术性能 1.卓越的光学系统: 八通道光路检测系统,检测速度非常快,检测96孔酶标板仅需2秒 准确性好( 2%或0.007Abs),结果更可靠. 测量范围宽:0-3.5Abs,线性范围大:0-2.5Abs. 2.可线性振板,振板速度/时间可选. 3.内部软件有四种测量程序模块: 基础酶联(包括简单的定性和 定量),临界值(可输临界值公式),曲线定量(可作标准曲线),凝集
检测(供选装). 4. 内部软件功能强大,人机对话,便于操作,机器内存可储存64个测 试程序,可满足常规应用. 5.提供中文电脑软件,可满足临床检验科室打印综合报告和质控图. 三. 使用培训： （一）编制测量程序 ： 步骤：先进入测量程序模块（“转换＋输入”）→ 设置“测量模式和测量参数”→设置“计算模式和计算参数”→储存所编程序→ 使用时再调出程序。 1. 定性测量: 1).简单的定性测量(如固定单/双限值):可在“基础酶联”模式下设。 2). 定性测量(需输入临界值公式):可在“临界值”模式下设定。 ?编程:按上述“步骤”（先进入测量程序模块→“测量模式和测量参数”→“计算模式和计算参数”）依次设定参数。 ?储存：先按“储存”，再设置程序号。
多功能酶标仪基本操作规程 一、可见与紫外光原始吸光值的直接测定方法 1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。 2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。） 3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。 4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶 标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。 5、点击仪器下部最右侧的[move plate in] 图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手 将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。 6、在屏幕上选Start measurement。点击绿色箭头。 7、在Select a File窗口左上角选Obtain Raw Date 然后点击绿色箭头。 8、在plate 栏中的plate definition 下拉条中，对板的类型进行选择。酶标的吸光度测定，一般情况 下选xxxxx xx Flat Transparent (x孔，平底，透明板)。（注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板）如果板要加盖子，就要再选中Plate with cover。 9、在Measurements 栏内双击Absorbance ，出现Absorbance的对话框。 10、在Absorbance的对话框中： ⑴在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值；Reference项,在需要扣除背景波长时选中并 输入背景波长值。一般情况不选. ⑵在Multiple read per well栏中对于吸光值的测定可不选 ⑶在Read 栏中: Number of flashes 项一般选10；Settle time（使平静时间）项对于96或384孔 板一般选0；对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settle time 设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。 ⑷在Label栏中Name后输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。 11、在Part of plate 栏中，用鼠标左键拉框，选择要测定的样品孔（使待测定的样品孔变为黄色）， （注意：待测孔只可横向或纵向连续选择，不可以被间断）。如果选择错误需要更改，不要做任何删除，只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail 对所选的样品孔进行确认后，点击OK，（如果选孔有错误，选择Cancel 返回上页再重复以上操作。） 12、点击OK后，箭头变绿，点击绿色箭头，在Measurement 的workspace处输入（日、月、年- 自定义文件名wsp）再点击Start，仪器开始自动测定。 13、测定结束后，点击File 选择print,直接打印测定参数与结果，或在最上方Edit选择Copy to Excel， 然后打开下方出现的Excel表（显示为板式数据）并打印结果。 14、关机，退出当前界面，点击左下角Exit Megellan 回到主屏幕。关电脑，关仪器电源和插板电 源。 二、荧光值的直接测定方法 1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。 2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。） 3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。 4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶 标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。 5、点击仪器下部最右侧的[move plate in] 图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手 将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。 6、在屏幕上选Start measurement。点击绿色箭头。 7、在Select a File窗口左上角选Obtain Raw Date 然后点击绿色箭头。 8、在plate 栏中的plate definition 下拉条中，对板的类型进行选择。荧光酶标的测定，一般情况下 选xxxxx xx Flat black (x孔，平底，黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底,透明板)。
Infinite M200 F200多功能酶标仪标准操作规程 一. 目的 为规范多功能酶标仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保分析天平正常运转，特制定本程序。 二. 适用范围 本程序适用于Infinite M200 F200多功能酶标仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为多功能酶标仪操作者，各实验室负责人对本规程的实施情况进行 监督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由多功能酶标仪操作者负责。 四．操作步骤 1.依次打开酶标仪、电脑主机、显示器电源，待电脑正常启动后双击打开icontrol软件。 2.根据实验需要选择更换率光片。 3. 选择Creat/edit a method，点击下一步。 4. 再选择是编辑一个新方法（creat new），在原有方法的基础上进行编辑（Edit）， 选择之后点击continue进入下一步。 5.在终点检测、动力学检测、多标测定之中选择终点检测，点击下方的Measurement paraments按钮进入下一步。 6.此时会弹出一个Measurement paraments对话框，共有：检测功能模式（General）、 板型（plate）、检测参数设定（Meas. Params）、温度控制（Temperature）、振板 （Shaking）等一共5个选项。 7. 在检测功能模式下选择光吸收（Absorbance）、荧光（Fluorescence Intensity）、 发光（Luminescence）其中的一种，下面以做光吸收为例。 8.先选择光吸收, 点击Plate进入板型选项对话框，再点击Browse选择相应的板型（光 吸收用ft, 荧光用fb, 发光用fw）。 9.再点击Meas. Params进入检测参数设定选项对话框，输入或者选择相应的检测波长。 10.再依次点击Temperature、Shaking选择想要设定的温度范围及振板方式；也可不作 选择。 11.这些都设定好之后点击确定，再点击Continue进入下一步。
酶标仪基本知识及其检测原理 酶标仪基本知识及其检测原理，文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。 光是电磁波，波长100nm-400nm称为紫外光，400nm-780nm 之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，O D值与光强度成下述关系： E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表被吸收的光密度，Ⅰ0为在检测物之前的光强度，Ⅰ为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算： E=OD=C×D×E 其中：C为检测物的浓度；D为检测物的厚度；E为摩尔子。
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095.仪器定义没有光源下的透光值为0%，没有检测物的透光值为100%。则实际检测中，检测物的透光值均在0%-100%之间。 透光值的计算如下： T=（Meas-Min）/（Max-Min） 其中T为透光值，Meas为检测的二进位数值，Min为在0%的情况下检测的二进位数值，Max为在100%的情况下检测的二进位数值，举例如下： 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标
酶标仪操作步骤 集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#
酶标仪操作步骤： 一.打开酶标仪开关，仪器开始自检，； 二.打开电脑，点击桌面上的KCjunior软件，出现带This product is licensed to huashida gene 三.界面有5个选项－Read Plate, Open Results, New Protocol, Open Protocol, Modify Protocol； 5270201字幕的对话框，单击OK,进入软件界面； 四.如果初次检测，单击New Protocol建立方法；如果有建好的方法，单击Modify Protocol； 五.建立方法 1.单击New Protocol后进入Protocol Definition对话框，在General Information菜单下输入Protocol Name, Protocol Description中输入对此方法的描述，不需要此项可空； 2.在Read Method菜单下设置读板方法(有End Point, Multiwavelength, Dynamtic等)； 3.在Primary Wavelength中输入主波长，如有参比波长(Reference Wavelenth)也输入； 4.在Template菜单下的Well Type Selection中，根据多孔板的位置选择所设定的Blank 和待测的Sample； 5.在Shake Mode处，还可以选择震动模式和强度；建好方法后，点击确定。 六.读取数据 将多孔板放入酶标仪，其缺角与托架上的对应；单击Read Plate，在Result ID中随便输入信息或缺省，在Plate Number中输入板号后，多孔板进入仪器开始读取数据。 七.数据输出待酶标仪读取完数据后，多孔板托架自动弹出，选择Results菜单下的Exoport Date,即将所测数据导入至Excel表格；保存所测数据，关闭KCjunior软件，
酶标仪操作步骤： 一.打开酶标仪开关，仪器开始自检，； 二.打开电脑，点击桌面上的KCjunior软件，出现带This product is licensed to huashida gene 三.界面有5个选项－Read Plate, Open Results, New Protocol, Open Protocol, Modify Protocol；5270201字幕的对话框，单击OK,进入软件界面； 四.如果初次检测，单击New Protocol建立方法；如果有建好的方法，单击Modify Protocol； 五.建立方法 1.单击New Protocol后进入Protocol Definition对话框，在General Information菜单下输入Protocol Name, Protocol Description中输入对此方法的描述，不需要此项可空； 2.在Read Method菜单下设置读板方法(有End Point, Multiwavelength, Dynamtic等)； 3.在Primary Wavelength中输入主波长，如有参比波长(Reference Wavelenth)也输入； 4.在Template菜单下的Well Type Selection中，根据多孔板的位置选择所设定的Blank和待测的Sample； 5.在Shake Mode处，还可以选择震动模式和强度；建好方法后，点击确定。 六.读取数据 将多孔板放入酶标仪，其缺角与托架上的对应；单击Read Plate，在Result ID中随便输入信息或缺省，在Plate Number中输入板号后，多孔板进入仪器开始读取数据。 七.数据输出待酶标仪读取完数据后，多孔板托架自动弹出，选择Results菜单下的Exoport Date,即将所测数据导入至Excel表格；保存所测数据，关闭KCjunior软件，此时也可将建立的方法进行保存。八.关闭仪器
取下多孔板，轻按酶标仪开关上方的小按钮，托架滑入仪器，这时关闭仪器开关，最后关闭电脑及显示器开关。
多功能酶标仪SpectraMax-i3的操作规程编号 M-SOP-2-0083 No. 标准操作规程版本号 Standard Operating Procedure 01 Version 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 Standard Operation of SpectraMax i3 部门签名/日期 Department Signature/Date 起草人: XX， Xiaochuan X Prepared by QC 审核人: XX， Sijia XX Reviewed by QC 审核人: XX， Fulan X Reviewed by QA 批准人: XX， Boyan XX Approved by 质量负责人 颁发部门执行日期质量保证部-QA Issued by Effective Date 替换文件复审日期 Version 00 Replaced For Review Date 分发部门 QA，QC Distributed to 1 of 7 编号 M-SOP-2-0083 No. 标准操作规程版本号 Standard Operating Procedure 01 Version 多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程 1 目的 建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪 检测时的操作。 2 适用范围
本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作 3 术语或定义 多功能酶标仪:指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧 光强度(FL)、时间分辨荧光(TRF)、化学发光(Lum)等。 4 责任 4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保 证运行正常。 4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用 记录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。 5 EHS要求 N/A 6 程序 6.1 仪器安装 仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。 6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤 6.2.1 打开软件 点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现 "Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。
BCA 法测定蛋白浓度-酶标仪 一、药品 1. BCA 蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分： a) BCA 试剂A （P0012-1，100ml ，碧云天），室温保存 b) BCA 试剂B （P0012-2，3ml ，碧云天），室温保存 c) 蛋白标准（5mg/ml BSA ）（P0012-3，1ml ，碧云天），-20度保存 二、仪器和试剂 1. 酶标仪（测定波长为540-595nm 之间，562nm 最佳），水浴锅 2. 96孔单条可拆酶标板（平底） 3. 15 ml 离心管1个（准备BCA 工作液用） 4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用） 5. 单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头 6. PBS 三、操作步骤 1. 水浴锅调至37℃。 2. 蛋白标准品工作液（1 mg/ml ）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml ）从-20℃冰箱中取出， 完全溶解并混匀。取60μl 蛋白标准品（5mg/ml ），加入240μl PBS ，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml ）。 3. 计算BCA 工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。BCA 工作量按50体积的BCA 试剂A 加上1体积的BCA 试剂B 配制（即50:1），需充分混匀。BCA 工作液室温24小时内稳定。 4. 按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。
2 5. 将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。 （1） 先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl ，再用排 枪在蛋白样本孔中追加PBS 液各18μl ，使总量达到20μl 。（此时蛋白样本的稀释比为10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml 时。如预计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例） （2） 再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的8个蛋白标准液 各20μl 。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C D E F G H 6. 用排枪在各孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻摇匀，37℃放置30分钟或室温放置2小时。 （注意：①每次测定时必须都做标准曲线。因为BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则每次都做标准曲线。②如果浓度较低，可适当地延长孵育时间或在较高温度孵育。） 7. 用酶标仪测定562nm 下标准品和样本的吸光度。 8. 用标准蛋白质量为横座标，用吸光度值A562为纵座标，做标准曲线，用线形回归计算 公式Y=A X + B 。根据样本的吸光度，计算待测样本的蛋白浓度（注意待测样本的稀释倍数）。 9. 按WB 实验的要求，稀释为2.5mg/ml ，分装为每支100μl 。
1.目的 规范酶标仪的使用、维护与保养。 2.范围 适用于以下型号的酶标仪。 3.职责 使用人员对本规程的实施负责，部门负责人监督实施。 4.使用规程 4.1开关机 4.1.1打开电源开关，电源开关位于仪器右后方的电源接口的正上方。 4.1.2当操作者按下电源开关时，仪器正面左侧的绿色三角形电源指示灯会闪烁十数秒，这 是仪器正在进行自检，闪烁停止后，电源指示灯呈绿色发光状态时，仪器处于待机状态。 4.2启动软件 4.2.1双击桌面上“Magellan”图标，选择检测到的仪器—“Infinite 200”，点击“OK”； 4.2.2在桌面中央对话框的下侧点击“取消”，即进入Magellan主界面 4.2.3在界面下侧点击温度控制图标，设定目标温度—设置—开；点击当前温度，选择自动， 可以实时观察仪器内温度，（注：实验开始前需将仪器提前预热到目标温度） 4.2.4将样品板放到托架上，A1孔处于左上方；然后按右下角绿色三角形按钮继续，选择获 得原始数据—继续，进入测量流程编辑窗口 4.2.5在Plate下拉菜单中选择测量使用的板的类型，在Part of Plate中框选样品区域； 在指令栏左侧选择需要检测的指令，如：1）双击“摇动”，设置持续时间3 s，波幅 1.5 mm；2）双击“温度设置”，设置37 ℃，点开“等温度达到”，范围设置36.5 ℃ —37 ℃；3）双击“多点测定循环”，设置持续时间1-2 h，勾选使用多点测定间隔，时间1-2 min；4）双击“荧光强度”，设置为490 nm—520 nm，点击Star，开始检测 4.3注意事项 4.3.1仪器使用完关机后到下一次开机中间至少间隔0.5 h 4.3.2检测完成后及时取出微孔板、比色杯
P H O M O酶标仪的标准操作程序（S O P） 【目的】 规范仪器设备的操作程序，保证酶标仪的正常使用。 【适用范围】 本实验室酶联免疫试验的操作。 【操作人员】：本实验室实验人员。 【操作步骤】： 1.插上电源，打开酶标仪电源开关（按仪器后面的开关键），打开连接计算机 的开关； 2.双击计算机上“安图酶标2.0”的图标，此时软件打开，先注册相应的软件 信息，然后选择相应的操作人员输入通行密码，进入软件的主操作界面； 3.单击“单项设置”，根据试剂说明编写对应的计算公式； 4.单击“布局”，根据试剂盒说明设置相应项目的板子布局； 5.单击“程序测量”，选择开始测量并选择相应的测量项目和使用的板子布局； 6.单击“设定本次测量样品编号”输入起始号码和样品数量。 7.单击“自动生成结果”然后点击确定。再点击开始按钮。 8.此时仪器处于测量状态，操作人员不能进行其它操作。 9.测量结束，测试结构显示在显示器上。此时点击“测量”按钮，选择保存测 量数据项并输入板子编号（如果有多块酶标板进行测量应加以区别如“-1”）试剂名称、生产日期以及试剂批号并点击确认按钮。 10.单击“测量”选择送检样品录入项，录入相应的标本信息并保存录入内容。 11.单击“查询及打印”按钮，选择样本管理或微板查询，选择需要打印的标本 结果并打印。 12.关闭酶标仪电源。 【酶标仪的维护保养】 1.平常不用时，拔掉电源插头，盖好防尘罩。 2.使用完毕，一定要拿下测试完的反应板，千万不要将控制板留在载物台上。 3.若有液体溅到载物台或酶标仪外壁，应用湿抹布及时擦去。 4.每次使用完毕用湿抹布擦拭酶标仪，以保持其洁净。
BCA法测定蛋白浓度-酶标仪 一、药品 1.BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分： a)BCA试剂A（P0012-1，100ml，碧云天），室温保存 b)BCA试剂B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存 c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存 二、仪器和试剂 1.酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm最佳），水浴锅 2.96孔单条可拆酶标板（平底） 3.15 ml 离心管1个（准备BCA工作液用） 4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用） 5.单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头 6.PBS 三、操作步骤 1.水浴锅调至37℃。 2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出， 完全溶解并混匀。取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240μl PBS，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。 3.计算BCA工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。BCA 工作量按50体积的BCA试剂A加上1体积的BCA试剂B配制（即50:1），需充分混匀。BCA 工作液室温24小时内稳定。 4.按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。 5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。 （1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。（此时蛋白样本的稀释比
规范酶标仪的操作程序，正确使用酶标仪，保证酶标仪检测工作顺利进行和酶标仪日常维护。 2 适用范围 可用来进行标准光密度测定和凝集反应检测。 3 职责 酶标仪操作人员按照本规程操作酶标仪，并作使用记录。酶标仪管理人员负责监督酶标仪操作人员是否按本规程操作，对酶标仪进行定期保养。科室负责人负责酶标仪综合管理。 4 注意事项 4.1 环境要求：注意防电、防震，远离强磁场，避免日光直接照射；不要在过湿或温差过大的环境下工作。应在机器两边留出足够的空间以保证空气流通。 4.2 技术特性：主件电源200-240V，50/60H2，工作范围：180-260V。电源0.7A(200-240V)。保险丝2×3.5A。使用温度范围：+10℃—+40℃。预热速度L需1分钟自检。酶标板，建议使用平底酶标板。光谱范围：400-750nm。测量范围：0-2.000吸收单位。准确度：±2%或±0.007吸收单位。 4.3 日常维护 4.3.1 保养 4.3.1.1 为保证本酶标仪持续的稳定性和准确性，应避免干扰光学系统的任何部 件。 4.3.1.2 保持光学系统的清洁，以确保正常功能和结果的准确，避免任何液体流入 仪器内部。应防尘、防止其它外源性物质，不用手指触摸透镜表面、滤光片、光电检测器。 4.3.2 仪器日常清洁 4.3.2.1 关掉仪器开关应拉掉电源插头。 4.3.2.2 使用一次性手套，用一次性擦布沾水或温和去污剂，清洁仪器外部、导轨 和板架。 4.3.3 严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上退出检测状态，立即向保管人员或科室负责人报告，查明原因，及时处理，不得擅自“修理“，并做好使用和故障情况登记及实验记录。 5 操作 5.1 将酶标仪后部的电源开关打开，仪器将显示自检。等候1分钟预热。 5.2 将打印机开关打开，打印机自检，放置打印纸。 5.3 检测 5.3.1 选择程序模式时，先按转换键，确定程序模式后，再按输入键，进入自检并 完成。 5.3.2 选择测量模式：通过测量模式键来选择，可通过↑↓键查看测量模式目录， 确定测量模式按输入键确认。 5.3.3 选择测量参数：通过测量参数键或输入键来选择，也可通过↑↓键和数字键 输入新参数。 5.3.4 选择计算模式：用计算模式键设定。可用↑↓键查看计算模式。 5.3.5 选择计算参数：用计算参数或输入键设定计算参数。
酶标仪标准操作规程 一、目的 正确使用酶标仪测读酶联免疫吸附试验结果（吸光度）。 二、原理 通过选择滤光片获得特定波长的光线，透过待测溶液自动连续读取96孔板上各样品孔的吸光度。 三、主要操作规程 1.开启酶标仪电源，待酶标仪自检完成，仪器的液晶显示窗出现PLATE READING及闪动光标（若仪器提示不能通过自检或出现其他出错信息，请立即停止下列操作并将错误信息详细记录，报告专业人员维修）。 2.开启计算机。 3.打开酶标仪专用程序（此时在操作界面左下方显示Ready字样）。 4.打开“File”菜单，选择“New Reading”的“New Endpoint Protocol”项（此时酶标仪转为计算机控制模式）；在“Reading Parameters”处，设置各项参数： 单波长测定选择Single 双波长测定选择Dual 选择Measurement Filter项确定测量滤光片波长值 选择Reference Filter项确定参比滤光片波长值 本机目前配置的滤光片波长有四种： 1.405nm 2.450nm 3.540nm 4.630nm (另有490nm的滤光片可选用，需另行安装) 5.检查确认所设各参数无误，将酶标板放入仪器内（左上角为A1）关闭测量室的盖板（注意：不能将酶标板的盖子放入仪器内。） 6.点击Run键，仪器开始测定，测定完成后，显示出与酶 标板规格一致排列的各孔OD值。 7.可将数值用Copy命令复制后粘贴至Excel电子数据工作表上，或打开File菜单，运行Export 命令，选择相应的数据文件格式，按自己确定的路径和文件名进行保存。
8.取出酶标板，按关闭程序→关闭计算机→关闭酶标仪的顺序关机。 9.每次工作完毕，清洁工作台面，做好仪器使用记录。 四、关键词：酶标仪；操作 五、主要参考文献 酶标仪使用说明书: