光合细菌的培养方法
光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，其广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。光合细菌的培养，按次序分容器工具的消毒、培养基的配制、接种、培养管理四步。
一、容器、工具的消毒消毒方法参考本报第1199期B3版《单细胞藻类的培养方法》一文中的容器、工具的消毒方法。二、培养基的配制1.培养基配方培养光合细菌首先应选择一个能基本满足培养种的生理生态特性和营养要求、经过培养实践证明且效果比较理想的培养基配方。2.配制培养基的用水如果培养的光合细菌是淡水种，菌种培养可用蒸馏水；生产性培养可用自来水（或井水）配制。如果培养的光合细菌是海水种，则用天然海水（或人工海水）配制。用天然海水配制培养基，可免加镁盐和钙盐，因为海水中镁、钙元素的含量已能满足需要。此外，在海水中加入磷元素时不能用磷酸氢二钾，应用磷酸二氢钾，否则会产生大量沉淀。
3.配制按培养基配方把所列物质称量，逐一溶解后，混合，配成培养基。也可把部分组份配成母液，使用较方便。
4.灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅煮沸消毒。大型生产性培养则先把水用次氯酸钠处理、消毒，然后加入配方所列组份，溶解、混合。
三、接种培养基配制好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一般为20％～50％，即菌种母液量和新配培养量之比为1：4（20％）～1：1（50％），且不应低于20％，尤其微气培养接种总量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势。
四、培养管理光合细菌的培养过程中，管理工作包括日常管理操作和测试、生长情况的观察检查和出现问题的分析处理等三个方面。
1.日常管理和测试（1）搅拌或充气光合细菌培养过程中必须搅拌或充气，其作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长。小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮，可在接种前在培养容器中加入少量玻璃珠，摇动时易于搅起菌细胞。每天至少摇动3次，定时进行。也可使用磁力搅拌器搅拌，把锥形瓶或其他玻璃培养容器放置在磁力搅拌器上，瓶内放磁力搅拌棒，连续搅拌或间隔定时搅拌，搅拌时控制转速以液面微起波纹而无旋涡为适度。大型厌气培养则用机械搅拌器搅拌或使用小水泵使水缓慢循环运转，保持菌体悬浮。
微气培养是通过充气帮助菌体上浮的，因为培养液中溶解氧含量增加，光合细菌繁殖受到抑制，产量下降，所以必须严格控制充气量。一般采用定时断续充气，每小时每升水充气1升～1.5升左右，溶解氧含量保持在1ppm以下。（未完待续）
光合细菌培养基一、生产条件
1、培养介质：含菌量较低的清洁淡水。地下水（井水）含菌量低，为最佳水源；清洁的地表水（河水）也可
使用；含氯量较高的自来水应敞口放置一天；蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高。选取水源时，最好先做几种方便取用的水源的对比试验，使用哪里的水源在培养试验中最先变成红色（生长良好），就选用哪里的水作为生产用水。
2、酸碱度：PH值在7.5-8.5为最好，光合细菌的适应PH范围在6-10之间。
3、温度：以30-34℃为最适生长温度，其适应的生长温度范围为18-45℃,实际操作越接近最适温度范围越好。
本公司产品配方中含有抑制高温季节绿硫菌的产生，所以不惧高温，也不会大量产生绿硫菌。
4、光照强度：以3000-4000勒克斯（LX）为最佳，即每25公斤菌液需要用相当于60瓦左右的白炽灯炮作光
源，而太阳光照为最好且不要成本。
5、透气性：密闭、敞口皆可培养，密闭但是留十分之一空气效果更好。
6、工具：筒状塑料农膜或透明玻璃池、敞口塑料容器（400升）、两头能接管的最小型自吸泵或水舀子、白帜灯炮、温度计
二、生产方法（以生产1吨光合细菌菌液为例）
（一）培养容器
1、两端开口的长筒状透明塑料农膜，尽量选择厚一点的不破，尽量选择幅度宽一点的，剪成10米长一个备用
2、透明玻璃连接而成的池子，类似于金鱼池，但是要做薄（30厘米厚）以方便两边采光
（二）生产过程
1、第一次培养，可以得到220公斤菌种
（1）在阳光充足的上午10点左右，先将准备用水160公斤（有条件可以先将水加温到30度，这样培养的速度更快，菌液质量更好。注意温度不可过高破坏菌种）加入到敞口塑料容器（400升）内，再加入培养基二袋，建议先用小容器少量水溶解培养基搅拌，慢慢加水慢慢溶解直至溶解完全，最后接种菌种60公斤搅拌均匀，可以按照上述比例相应增加批次量。
（2）选择采光充足，地面平坦的地方（可以垫上编织袋及其它东西，以防地面温度太低），将上述混合培养液灌入或用自吸泵直接抽入透明塑料农膜内，尽量排尽空气，可以有少量小气泡，两端系紧。
（3）玻璃池子可以直接配培养基和接种菌种，需搅拌均匀。
（4）室外温度适宜情况下（30-34℃），将菌液直接置于阳光充足的地方培养。温度过低（气温低于25度），可用透明塑料薄膜搭建温棚，采光增温，仍达不到要求，应采取其它增温措施；温度过高（气温高于40度），将菌液置于通风的地方，仍过高，应在桶周围洒水降温，或采取部分遮阳（用黑色的遮阳塑料网）。
（5）为了光合细菌更快繁殖，如方便请白天每隔3小时人工摇动菌液一次，此方法是为了使下沉菌种上浮，更好接触培养基加快繁殖，如不方便也可以不用，只是繁殖相对较慢。
（6）本公司菌种红螺菌特别对温度要求很高，喜高温，只要温度达到（34度以上），即使有微弱光均可快速生长。所以有条件特别是气温较低时尽量将水温加热到30度。
（7）如连续晴天或气温较高的阴天，3-4天后可培养成熟；若有下雨天或气温较低阴天，培养时间则相对延长；连续有下雨天或气温较低阴天，应采用60瓦的白帜灯炮悬于农膜上方10厘米，每隔30厘米间距一个连续光照，缩短培养时间；也可以采用白天晒太阳，晚上用白帜灯泡补光，缩短培养时间。
2、第二次培养，可以生产1000公斤菌液
（1）在阳光充足的上午10点左右，先将准备用水800公斤（有条件可以先将水加温到30度，这样培养的速度更快，菌液质量更好，注意温度不可过高破坏菌种）加入到敞口塑料容器内，再加入培养基八袋，建议先用小容器少量水溶解培养基搅拌，慢慢加水慢慢溶解直至溶解完全，最后接种第一次培养成功的220公斤菌种搅拌均匀。若配比容器较小，可以按照上述比例相应减小批次量。
（2）-（7）见第一次培养方法
3、注意事项
（1）尽量选择在阳光充足的上午10点开始，因为培养繁殖初期8小时对温度和阳光要求最高，是关键阶段。
（2）对水温要求较高，特别第一次培养200公斤菌种尽量采用人工加热，第二次培养数量较大，有条件可以加热，没有条件可以提前一天准备用阳光晒热。可以采用加热少量水高温再兑至30度。
三、培养过程中菌液可能出现的问题及对策
1、变淡
原因：接种量过少，菌种老化、杂菌过多,PH值过低或过高,光照不足，温度过低或过高，水的硬度过高。
对策：调节至正常状态。
2、变黑
原因：气温较高的季节，刚培养好的菌液因长时间失去光照。
对策：施以光照。
3、变绿
原因：可能是菌液中绿硫菌大量繁殖，多见于高温季节。
对策：连续多次密闭培养，或更换菌种和水源。
4、变灰
原因：接种量少，菌种不纯，光照不足，PH值过低。
对策：选用优质菌种，按要求接种，增强光照，调适PH值。
益瑞光合微生物菌肥是由青岛普瑞生物制品有限公司生产的一种新型微生物肥料，目前已获得国家农业部审批，登记证号为“微生物肥（2007）临字（0630）号”。该技术为我公司自有技术，由山西大学张肇铭教授主持研究，经科技成果鉴定已达到国际领先水平。该项目先后申报并获授权8项国家专利，荣获北京国际发明展览会金奖，系国家级星火项目计划、国家科技攻关计划和山西省重点科技成果推广项目。
该菌肥是利用光合细菌的独特生理学特性，采用多株光合细菌菌种而发酵生产的一种高效活性硒微生物菌剂。首先，它富含生物硒，经光合微生物转化的生物有机硒，易被植物体吸收，可生产出富硒食品；其次，它富含植物生长所必须的多种营养元素、维生素、生长刺激因子及多种调节植物新陈代谢的活性物质和微量元素，是一种新型高效的微生物肥料；再次，施用该菌肥可有效降解植物体内的农药残留和重金属污染，为我们提供健康的绿色有机蔬菜。同时，试验证明对部分病虫害如根线虫、霜霉病等具有抑制作用。因此，该微生物菌肥和其它种类的肥料相比，具有多种综合效应和独特功效。
该菌肥适用于粮食、蔬菜、果木、花木、茶桑等作物，由于其独特的生理学特性，该菌肥可针对不同类型的作物采用不同的施用方法，可将其稀释后进行浸种、拌种、灌根和叶面喷施。
施用本菌肥，可生产出具有抗癌保健功效的富硒农产品；可大幅提高产量（10% ~ 40%）；促进营养转换，提高产品品质（果形美、色泽鲜、口感好、各种营养成分增加）；作为种肥施入土壤，可改善土壤微生物区系，大幅提高根际固氮活性，分解土壤中有毒有害物质，从而增进土壤肥力，恢复土地生态，改善植物营养条件；进行浸种拌种，可促进植物生长、预防抑制真菌性、细菌性病害发生，使苗齐苗壮；进行叶面施肥，可提高植物叶绿素含量，大幅增强光合强度，促进植物生长发育，提高防病抗病能力；有效防冻，抗旱、抗涝、抗倒伏。
总之，该菌肥无毒、无害、无污染，是发展高效生态农业，生产绿色、有机、富硒食品的首选肥料
光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB）是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，它广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤内，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。 第一节光合细菌的生物学和营养价值 一、光合细菌的生物学 光合细菌包括产氧光合细菌（蓝细菌）和不产氧光合细菌两大部分，在实际中应用的大部分是不产氧型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌、绿细菌和日光杆菌属、红色杆菌属等总共 27个属 66个种。不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同，它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型、光能异养型及兼性营养类型；从呼吸类型看包括好氧、厌氧和兼性厌氧型。 光合细菌是革兰氏阴性菌，在10～45℃范围内均可生长繁殖，最佳温度在30～40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH值范围在7～8.5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。 二、光合细菌的营养价值 光合细菌的菌体无毒，营养丰富，蛋白质含量高达65%，而且氨基酸组成齐全，含有机体需要的8种必需氨基酸，各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B族维生素，尤其是B12、叶酸、生物素的含量相当高是啤酒酵母和小球藻的20到60多倍。PSB 菌体内含有较高浓度的类胡萝素，而且种类繁多，迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素。除此之外，细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子，具有很高的营养价值。 光合细菌在虾、贝类的幼体培育中应用非常广泛，其一方面能净化水质，改善幼体的环境条件，另一方面作为饵料被幼体摄食（贝类幼体相对虾幼体的蚤状阶段都能直接摄食光合细菌），对促进幼体生长、变态和提高成活率有明显效果。 第二节光合细菌的培养方法 一、培养方式 光合细菌的大量培养通常采用全封闭式厌气光照培养和开放式微气光照培养两种方式。 （一）全封闭式厌气光照培养 全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑料薄膜袋，消毒后装入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，使整个容器均被液体充满，加盖（或扎紧接口）， 造成厌气的培养环境，置于有阳光的地方或用人工光源进行培养，定时搅动，在适宜的温度下，一般经过5～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时可采收或进一步扩大培养。 （二）开放式微气光照培养 开放式微气光照培养一般采用容量为l00～200升的塑料桶为培养容器。在桶底部装一气石，培养时微充气、使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶的正上方距捅面30厘米左有装一有罩的白炽灯泡，使被面照度达2000 lx左右。培养前先把容器消毒，加入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，照明，微充气培养。在适宜的温度下，一般经7～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时，进行采收或近一步扩大培养。 两种培养方式相比，以厌气培养方式较为理想，微气培养方式虽然设备比较简单，易于大量培养，但杂菌污染程度大，培养达到的菌细胞密度低。 二、菌种分离、保藏 培养光合细菌首先要有菌种。目前，应用于水产养殖业的光合细菌，主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基，和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。 （一）采样 红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，广泛分布在被有机物污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业 等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品，深水处借用采水器和采泥器采样。 （二）富集培养 富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，倒入配制好的培养液，充分搅拌。为造成厌气环境，在玻璃圆筒或大型
光合细菌培养基配方 光合细菌是兼性厌氧的，不同的光合细菌用的培养基不一样我现在就在做关于光合细菌的问题，这几中细菌都是常见的细菌，培养基在许多微生物上后面都有，光合细菌的富集培养基是： NH4Cl0.1g NaHCO3 0.1g KH2PO4 0.02g CH3COONa 0.1-0.5g MgSO4.7HO2 0.02g NaCl0.05-0.2g 三生长因子１ml 微量元素溶液１ml 蒸馏水９７ml ＰＨ７.０ 生长培养基加氮源（谷氨酸钠）和碳源（乙酸．丙酸．丁酸盐等）及可．其他菌的分离只要选择不同的培养基就可以选择分离啊 光合细菌富集纯化详见网易网盘 光合细菌培养基配方 氯化氨1克，磷酸氢二钾0.5克，氯化镁0.2克，氯化钠2克，酵母膏0.1克，水900毫升。 各成份溶解后15磅灭菌20分钟，然后无菌的加入过滤的碳酸氢钠5.0克/50毫升水；50毫升过滤的乙醇。用过滤的0.1N 磷酸调PH=7.0即可。 响应面设计法优化光合细菌培养基配方。培养基成分中醋酸钠和蛋白胨对于光合细菌的生长影响最为显著，最优培
养基配方为：醋酸钠1．145g／L、蛋白胨0．055g／L、碳酸氢钠0．6g／L、硫代硫酸钠0．4g／L、氯化钠0．3g／L、硫酸镁0．1g／L、磷酸二氢钾0．05g／L。在此条件下，光合细菌生长最为良好，经过5d培养以后，培养液OD600可以达到0．5以上 光合细菌(含生产工艺) 优良的光合细菌菌种的外观质量是啥样？ 一般优良的光合细菌菌种和产品的外观质量有以下几点： 1、外观上看比较均匀，基本无上下分层。相反，市场上有许多光合细菌是上下分层的，包括我中心初期的产品也是这样，上层比较清淡，下层则比较深厚，上层颜色浅，下层颜色深，最底层可能还会有一层黑黑的沉淀。 而优秀的光合细菌菌种和产品，上下都是比较均匀的，没有较明显的分层，颜色比较均匀，外观看起来也悦目。（当然，除了培养基溶解时，会与硬水中的重金属离子反应产生的絮装沉淀除外） 这种上下无分层，颜色均匀，不是靠加悬浮剂，或增稠剂而造成的，而是自然培养出来的，不加任何修饰而成的。少数地方，由于水质的原因，可能会产生稍稍的差别。 2、没有粘壁现象。很多市场上的产品都有粘壁现象，即在容器的壁上形成一层红紫色的颜色层，就象是油漆一
生物制氢 环工1402 2014011315许江东 摘要：基于2H2+O2＝2H2O，氢气燃烧不产生CO2这种温室气体，所以氢气被称为清洁能源，具有广大的应用前景，导致制氢技术具有很高的研究价值。简要概述了生物制氢的几种方法，包括光发酵、暗发酵、两步发酵、光解水等技术，并在此基础上，探讨可能的突破方向。 关键字：生物制氢；光解水；光发酵；暗发酵；两步发酵 引言 如果把社会比作一台机器，那么能源就是这台机器必不可少的能量来源。现如今全球大部分的能源来自于化石燃料的燃烧，这不仅产生了大量的CO2等温室气体，还浪费了这种不可再生能源。氢气燃烧仅产生水，而且放热远大于碳水化合物。氢气燃烧的最高热值是122 kJ/g，比碳水化合物燃料高2.75倍【1】。在生物制氢之前，已经有了一些制氢技术。 ①水电解法:以铁为阴极面,镍为阳极面的串联电解槽(外形似压滤机)来电解苛性钾或苛性钠的水溶液,阳极产生02,阴极产生H2。该方法成本较高,在电解过程只有15%的电能最终被转化为氢能,高达85 %的电能得不到合理利用被白白地浪费掉。但产品纯度大,可直接生产99.7%以上纯度的氢气。目前工业用氢总量的4%来源于水电解法。 ②热化学法:这种方法采用高温热解进行制氢,水在3000 °C条件下会发生热化学反应,生成H2和02。该方法对温度的要求较高,因此设备和能源的要求和花费较大,虽然经过研究人员的不懈努力,现在已经将热解温度降低到1000°C,但是与其他方法相比依然成本过高消耗过大。 ③等离子化学法:以石油、煤、天然气与水蒸气等物质为原料进行一系列反应生成水煤气,然后将水煤气和水蒸气一起通过灼热的Fe203(氧化剂)后就会产生C02和H2,经过简单的气体分离和干燥技术即可得到氢气。 ④光电化学法:这是一种比较新的方法,主要原理就是利用一些半导体材料和电解质溶液使其组成光电化学电池,在阳光照射下通过电化学方法生产出H2的过程。 而生物制氢法是通过发酵微生物或光合微生物的作用,在适当的工程条件下
光合细菌 绿硫细菌、红硫细菌（过去叫做紫硫细菌）和红螺细菌（过去叫做紫色非硫细菌）等，都是能够进行光合作用的细菌。这些细菌都是球状、杆状或弧状的小型细菌，并且大多数都不能够运动。这些细菌的菌体内含有类似于绿色植物体内叶绿素那样的光合色素，这种光合色素叫做细菌叶绿素。有的光合细菌还含有大量的类胡萝卜素，认而使菌体呈现出红色。 光合细菌和绿色值物都能够进行光合作用，但是，绿色植物的光合作用是以水作为二氧化碳的还原剂，同时释放出氧的，细菌光合作用则以硫化氢或有机物（如乙醇、琥珀酸等）为供氢体，即还原二氧化碳的还原剂，把二氧化碳还原为葡萄糖，同时析出硫磺或产生其它有机物（如乙醛等），下面写出的是绿硫细菌的光合作用反应式： 因此，细菌光合作用和绿色植物的光合作用，可以用下面的通式来概括（通式中的A对于绿色植物来说是氧，对于光合细菌来说则是硫或其他无机硫化物。 从光合细菌的代谢类型我们可看出，同化作用存在着不同的形式，下面就生物的同化类型进行一下分类。 根据生物的同化作用所需能源和碳源的不同，可把生物的代谢类型分为四大类型： （l）光能自养型：以光为能源，以二氧化碳为主要碳源的生物，通常具有光合色素 合成有机物。例如高等植物、藻类及某些具有光合色素的细菌均属于这一原CO 2 的方式可用以下通式表示： 类型。这类生物同化CO 2 （2）光能异养型：以光为能源，以有机物为主要碳源的生物，有些细菌具有光合色素能进行光合作用，但它们以有机物作为供氢体，同化有机物形成自身物质。如非硫紫菌以乙醇为碳源，使乙醇氧化为乙醛，二氧化碳还原成葡萄糖。
（3）化能自养型：以化学能为能源，以CO 2 为主要碳源。这类生物能氧化 某些无机物（如NH 3、H 2 S等）取得的化学能去还原CO 2 合成有机物。如硝化细菌、 硫细菌等。 （4）化能异养型：以有机物氧化所产生的化学能为能源，碳源也主要来自有机物。动物，动物、真菌和绝大多数细菌都属于这一类型。
填空题： 1.在所有卤虫品系的脂肪酸组成中几乎没有_DHA__，所以对卤虫必须进行营养强化。 2.微藻藻种保藏的基本条件是_低温和弱光__。 3.光合细菌培养基灭菌的方式有_常压蒸汽灭菌和过滤灭菌__和高压蒸汽灭菌。 4.“绿水育苗”是指在育苗过程中利用__微藻___的育苗方式。 5.微藻基因工程育种是引入__外源基因__在微藻内表达以改良微藻遗传品质的方法。 6._褶皱臂尾_轮虫在海水鱼虾蟹苗种培育过程中应用最为广泛。 7.在开放式培养螺旋藻时，施用__碳酸氢铵__可以杀死藻液中的轮虫和原生动物，还可以作为肥料。 名词解释： 1.营养强化:指针对生物饵料的营养缺陷，有意识地通过其摄食特定食物进行改善和补偿，达到营养平衡和满足鱼虾幼体发育的 需求。 2.诱变育种: 是指人为地利用物理的或化学的因素，诱发微藻产生遗传变异，通过对突变体的选择和鉴定，培育出有利用价值 的新品种或新的种质资源 3.单种培养: 指在培养过程中不排除细菌存在的一种培养方式 4.生物饵料:指经过筛选的优质饵料生物，进行人工培养后投喂给养殖对象食用的活的饵料。 5.指数生长期: 指微藻细胞迅速地生长繁殖，细胞数目以几何级数增加的时期. 判断题: 1、所有卤虫卵都是在低盐度下有较高的孵化率。 X 2、小新月菱形藻的最佳培养生态条件和应用途径与三角褐指藻相似。√ 3、角毛藻在低盐度下比高盐度下生长好。√ 4、褶皱臂尾轮虫对低氧含量甚至短时间缺氧的耐受力很强，因此，在高密度培养时，不需要充氧。X 5、微藻对二氧化碳的需要量大，但给微藻培养液过量通入二氧化碳，会对微藻产生毒害作用。√ 6、实验室小型培养微藻，海水的消毒通常采用有效氯消毒。X 7、不同光合细菌体内的颜色在固定的培养条件下具有特征性，因此，每个菌种的颜色不会随着培养条件的变化而发生变化。X 8、刚产出的卤虫休眠卵就具有较高的孵化率。X 9、目前培养的桡足类主要是隶属于猛水蚤目和哲水蚤目的种类。√ 10、轮虫的营养价值与所摄食的饵料有关。√ 选择题: 1、标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个大格所在区域的体积是__C_____。 A: 1mm3B: 10mm3C: 0.1mm3D: 0.1mL 2、敌害生物对微藻培养的危害作用主要有_D___。 A:掠食 B:通过分泌有害物质对微藻起抑制和毒害作用 C:竞争营养盐 D: A+B 3、土池培养浮游动物饵料时，采用施放___C______肥料培育浮游植物较佳。 A:无机肥B:有机肥C:无机肥+有机肥D:粪肥 4、红螺菌科光合细菌的获能方式有__D__。 A:光合磷酸化B:氧化磷酸化 C:呼吸作用D: A+B+C 5、用藻类二次强化培养轮虫所需的时间一般至少要在_A___以上。 A:6-12小时B:24-36小时 C:36-48小时D:1-3小时 6、分布于咸水中的枝角类是__A__。 A:蒙古裸腹溞 B:大型溞 C:多刺裸腹溞 D:鸟喙尖头溞 7、在轮虫培养过程中，若以酵母为饵料进行培养，则适宜的轮虫接种量是_C___。 A:0.1个/ml～0.5个/ml B:1个/ml C:14个/ml～70个/ml D:200个/ ml 8、采用酒精对皮肤和器皿表面进行消毒时，常采用的浓度是___C______。 A: 40-45‰B: 60-65‰C: 70-75‰D:80-85‰ 9、在下列藻类中，最佳培养条件为高温、强光和强碱性的是__A__。 A:极大螺旋藻 B:湛江等鞭金藻 C:中肋骨条藻 D:小球藻 10、生产上螺旋藻的培养方式是_A___。
光合细菌的培养操作教程 1、配制光合细菌菌液： （1）配制比例： 光合细菌培养基、清水、菌种的配制比例为：0.5:80:20。 示例1：0.5公斤（500克）培养基+ 80升水+ 20升菌种（接种），配成100升的光合细菌菌液。 示例2（少量培养）：0.05公斤（50克）培养基+ 8升水+ 2升菌种（接种），配成10升的光合细菌菌液。 （2）配制方法： 下面以配制100升光合细菌菌液为例来说明配制方法： ①溶化培养基：取培养基0.5公斤（500克），用少量水溶化（可以用50℃左右的热水，溶化培养基的速度会快些），搅拌均匀，然后倒入一个容量在100升以上的容器中； ②配制培养液：往容器中加水到80升，80升培养液配制完成； ③接种：再加入20升菌种，并搅匀，100升菌液配制完成；
④装瓶（袋）：将配制好的菌液装入干净的透明容器（瓶、壶、塑料袋等），容器中留5%的空气在里面，密封待用。 菌液配制说明及注意事项： a. 以上各成分的数量是以配制100升菌液为例来说明配制方法的，如配制其他数量的光合细菌菌液，各成分数量按比例增减即可; b. 培养用水源的选择： 一般含杂菌较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水都可以，如井水、河水、自来水、蒸馏水和纯净水等，甚至干净的池塘水也行。 从经济、实用的角度考虑，地下水（如井水）含杂菌低，是最理想的培养水源； 清洁的地表水也可使用,如河水、池塘水等； 含氯量较高的自来水应敞口放置两天或调PH值至偏碱后使用； 蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种； c. 培养用容器的选择： 必须为透明容器并清洗干净，透明的容器可让光合细菌最大限度的吸收到充分的光线，少量培养如饮料瓶、食用油壶等，规模培养如透明塑料桶、透明塑料袋等。 d. 菌种的接种量： 一般接种量为20-50%，即培养液与菌种的比例为4:1（4升培养液加1升菌种）到1:1（1升培养液加1升菌种），接种量最低不能低于20%。 接种量越高，光合细菌菌种越容易形成优势菌群而抑制其他杂菌生长，培养速度快，且培养成熟的浓度更高。但产出效率也越低，光合细菌易老化。 接种量越低，培养产出效率越高，但如果低于20%的接种量，光合细菌不容易形成优势菌群，培养初期易染杂菌，培养的成功率低。 我们推荐的接种量为20%，如果用太阳光培养，推荐的接种量为25-40%。
光合细菌的分离、培养和鉴定 摘要：从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。进行了菌落形态学观察和亚显微观察。于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。 关键词：生长曲线；沼泽红假单胞菌；光合细菌 The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris. Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria 引言 光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。经过研究发现光合细菌在环保、农业、医药等方面均有较高的应用价值。下面就光合细菌目前的开发应用研究近况作一概述。 光合细菌细胞营养价值极高。首先，光合细菌细胞干物质中蛋白质含量高达60%以上, 比目前生产的单细胞蛋白酵母中蛋白质的含量还高。而且其蛋白质氨基酸组成齐全, 是一种优质蛋白源。其次，光合细菌细胞含有多种维生素, 特别是B族维生素, VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远远高于酵母菌。另外, 光合细菌细胞还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等活性物质。因此, 光合细菌具有很高的营养价值。在水产养殖中, 光合细菌可被用于饵料或饲料添加剂。光合细菌促进鱼虾的生长, 无论是成活率或是产量的提高均可达10%-40%以上。同时，光合细菌还具有防治鱼虾疾病,净化养殖场所水质等方面的功能。使用光合细菌喂养的家禽, 成活率可提高5%-7%, 料肉比降低33%左右，肉鸡增重15%-17%, 产蛋率提高12.7%。而且所产
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、6.5一7.0、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合1.1菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农1.2实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺,E~mail:”y402@https://www.doczj.com/doc/be16725101.html,南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting
光合细菌及其在农业中的应用 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下，进行不产氧的光合作用。 根据“伯杰氏细菌鉴定手册”（第9版），不产氧型的光合细菌可分成以下6类，27属：●着色菌科（Chromatiaceae）（又称红色硫细菌、紫硫细菌），含9个属； ●外硫红螺菌科（Ectothiorhodospiraceae），含1属； ●红色非硫细菌（Purple nonsulfur bacteria），即原红螺菌科（Rhodospirillaceae），含6属； ●绿硫细菌（Green sulfur bacteria）即原绿菌科（Chlorobiaceae），含5个属； ●多细胞绿丝菌（Multicellular filamentous green bacteria），即原绿丝菌科 （Chloroflexaceae），含4属； ●盐杆菌（Heliobacterium），含2个属。 由于光合细菌在物质转化循环中的重要作用，以及菌体含有的丰富营养，使这类古老的微生物成为近二、三十年来人们开发利用的一大热点。大量的研究成果表明，光合细菌在农业、水产、污染治理与资源化等方面，有着巨大的实用价值，应用前景十分广阔。以下就光合细菌的主要性状、在农业等领域的应用、方法、作用原理等，作一简要介绍。 一、光合细菌的主要特征 1．光合细菌的形态学特征 ⑴PSB培养物的颜色 PSB因含有光合色素（细菌叶绿素、类胡萝卜素）而呈现一定颜色。除少数例外，一般说来，红螺菌科和着色菌科的菌呈红、粉红、橙黄、紫色或茶褐色；绿菌科和绿色丝状菌科的菌呈绿色。 红螺菌科和着色菌科的的培养物之所以呈现有黄色到紫色的各种鲜艳的颜色，这是由类胡萝卜素高浓度蓄积并掩盖了细菌叶绿素的色调而形成的。少数类胡萝卜素含量少的菌，或缺乏类胡萝卜素的变异株，便会显示细菌叶绿素的蓝绿色。 每个菌种各有自己的颜色，但由于培养条件的不同，其颜色会发生变化。例如，球形红菌（Rhodobacter sphaeroides）和荚膜红菌（Rhodobacter capsulatus）的厌氧液体培养物呈茶褐色，半好氧培养物呈红色。这是由于氧的存在使细胞内类胡萝卜素组成发生变化的缘故。 ⑵PSB细胞形状与大小 PSB菌体形态极其多样，有球状、卵状、杆状、弧状、螺旋状、环状、半环状、丝状，以及链状、锯齿状、格子状、网篮状等等。不仅不同的菌种有多种多样的形态，就是同一种类也往往由于培养条件和生长阶段等不同而使细胞形态发生变化。尽管如此，许多菌种在细胞形态上仍然是各具特征的。如球形红菌（Rhodobacter sphaeroides）的细胞为球状；红微菌属（Rhodomicrobium）细菌的细胞丝相连；绿突菌属（Prosthecochloris）的细胞为具突起之球菌等等。 细胞的大小因种类不同而变化很大。如Rhodocyclus gelatinosus在0.4~0.5*1~2微米，Chromatium okenii的细胞则大得多，大体在4.5~6.0*3~10微米。一般说来，红螺菌科细胞的大小为0.6~0.7*1~10微米；着色菌科细胞大小为1~3*2~15微米；绿菌科细胞大小为 0.7~1*1~2微米。 ⑶光合作用器官 PSB的细胞内存在着载色体（chromatopheres）或绿菌泡囊（chlorobium vesicles），光合色素是它们的基本组成部分。它们是光合细菌吸收光能并转变成化能，即进行光合磷酸化作用的所在部位。 载色体由细胞膜陷入细胞质内而形成，与细胞膜成连续的状态。在红螺菌科和着色菌科
光合细菌的分离培养 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。 1光合细菌的富集培养的一般方法 ①分离源 光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。 ②光合细菌富集培养基 用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。 基本培养基I： KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7 根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋
光合细菌在水产养殖中 的功用 集团公司文件内部编码：（TTT-UUTT-MMYB-URTTY-ITTLTY-
一、光合细菌在水产养殖中的功用 光合细菌(PhotoSyntheticBacteria.简称psb)是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称。光合细菌属红螺菌目，分属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、绿色丝状菌科，共4科23属80余种。应用较多的，光合细菌具有多种异养功能：固氮、脱氮：固碳、硫化物氧化等，与水体中的氮磷、硫循环密切相关，在水体的自净过程中扮演着重要角色。从不同的角度描述，PSB在水产养殖中具有以下六大功能。 1、水质净化剂 随着养殖水体的日趋严重的污染和富营养化些，氨氮、硫化氢等有害物质已严重影响到养殖动物的生长，如料转化率低，其它的病原菌生长受阻，从而起到了水质净化的作用。大连水产学院的养虾试验结果表明，使用PSB提高单23.1％。 2、饲料添加剂 将PSB的菌液／223％--5％的量添加鱼饲料中，可降起来低料系数，增强机体力病能力，促进试验表明，添加菌液优于添加干燥的菌体。 3、鱼虾苗种培育的保护 psb应用子鱼虾蟹贝的育苗中，可促进幼体生长、变态，提高成活率。因为PSB可通过争化水质，来改善幼体的发育环境，再者可直接被幼体作为适口饵料而增加营养源。 4营养丰富的饵料 psb菌群可直接被鱼虾滤食，更是浮动物的好饵料，而浮游动物则是虾、蟹、鱼类苗种及鳙鱼等成鱼的直接食料。 5、防治鱼病 (1)PSB通过对有害物质的异养作用达到净化水质，减少疾病的发生。 (2)通过降解鱼药及污水的污染，改善鱼类的生长环境，增强鱼体体质。 (3)光合细菌占优势时，可抑制其它病原茵的滋生，据试验，经常使用PSbs可治愈控制烂鳃、烂尾、水霉、赤鳍等疾病。 6、消除耗氧因子底质中的有害物质在分解转化中，要消耗氧，而psb吸收了耗氧物质接增氧的作用。 二、光合细菌的生长需求 光合细菌的生长需要有适宜的外部环境和合理的营养条件，才能正常地、高速地繁殖，产出优质的菌液。 (1)适宜的外部环境,(1)基质：洁净的淡水、海水或加粗食盐的淡水(本文洁净水指无菌水)。 (2)温度：15~C--45~C，最适28~C--36~C。 (3)光照：太阳光或4000勒克斯(LX)的光源(相当于60瓦的白炽灯)。 (4)PH值：8--8．5为佳(可适6--10)。 2、合理的营养条件： 光全细菌营养元素及合理的配比，是光合细菌营养需求的重要的条件。 psb能通过细胞壁有选择地吸收碳、氢、氮，磷，钾，钠，镁，硫及某些微量元素。光合量细菌的获能形式可概括为： (1)光合作用获能：只要供氢体和碳源合适，所有的PSB都能在光照厌气条件下，通过光合磷酸化过程获得能量。
光合细菌的优化培养和生长动力学 摘要:对光合细菌(PSB)培养的最适温度、光照、pH、溶解氧等条件进行了较系统的研究.通过正交试验,得出PSB生长的 最适条件为光照度3000 lx、微好氧、30℃、pH 7.0.在此基础上,建立了PSB在模拟味精废水条件下以乙酸钠为底物的生长 动力学模型,其参数为:饱和常数Ks=0.20-0.24 g·L-1,最大比生长速率Lmax=0.038-0.044 h-1,试验表明该模型能够较 好地描述PSB的生长情况. 关键词:光合细菌;正交试验;优化培养;动力学模型 Optimal cultivation and growth kinetics of photosynthetic bacteria Abstract: This paper gives a detail study on the optimal growth conditions of temperature, illumination, pH and dissolved oxygen for photosynthetic bacteria. With the orthogonal experiment, the optimal culture conditions for the growth of photosynthetic bacteria were determined: illumination intensity 3000 lx, faintly aerobic, 30℃, pH 7.0. Under the optimal cultivation and the simulated monosodium-glutmate wastewater conditions, a kinetics model on the growth of photosynthetic bacteria in the substrate of CH3COONa was set up. The parameters in the model are as follows: the saturation constantKs0. 20-0.24 g·L-1and the maximum specific growth rateLmax0.038-0.044 h-1. The experiment results showed that this model could describe the growth data of PSB very well. Key words: photosynthetic bacteria; orthogonal experiment; optimal cultivation; kinetics model 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB)是自然界中广泛存在,比较古老的细菌类群,是一大类能 进行光合作用的原核生物的总称[1].近年来,随着人们对PSB形态、结构、生理生化以及生态等特性研究 和认识的不断深入,发现PSB,特别是其中的红螺菌科能利用多种硫化物或有机物作为其光合作用的供氢 体和碳源,在厌氧光照、好氧光照、甚至好氧黑暗环境中都能很好地增殖,且能耐受很高盐度和浓度的有机 物,具有很强的分解、去除有机物的能力,显示其在高浓度、高盐度有机废水处理中的独特优势和广阔应用 前景,成为废水处理技术研究的一个新方向[2].同时,因其菌体富含蛋白质和胡萝卜素,可作为单细胞蛋白 应用于种植业、养畜业和渔业以及作为各种食用色素[3-5].PSB的上述特点,吸引着人们对其进行发掘、研 究和商品化生产.研究PSB的优化培养条件和生长动力学,对其规模化生产和资源化开发利用
光合细菌培养参数的研 究 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、一、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting
光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用 光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。 本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。 1. 光合细菌的培养 1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。 1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。如制固体培养基再加20%琼脂。 1.3 培养生态条件 1.3.1 pH值：光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。 1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。光强度一般为1000-2000Lux。 1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。 1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。 一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌（温度121℃、压力15磅、时间20分钟）, 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。 二级培养采用5000-20000毫升玻璃瓶, 生长培养基需煮沸消毒, 待冷却到25℃左右接种, 接种量10%一20%。 三级培养采用20一25公斤塑料桶或玻璃钢桶, 培养液用次氯酸钠消毒12一24小时, 再用硫代硫酸钠还原后接种培养。接种量一般为20%--30%。 1.5 培养场所一般在室内控温光照条件下培养, 一级试管种置于培养箱内。当自然温度适宜时, 可采用塑料薄膜大棚培养。
第３５卷第２期福州大学学报（自然科学版）ｖ０１．３５Ｎｏ．２兰Ｑ盟生垒旦』！竺翌！！堕也！皇！坚型堕堡望业！塑！皇坚型曼！绝呈！１２垒乜！：２螋！ 文章编号：１０００一２２４３（２００７）０２—０３０２一０６多菌种微生物混合培养的条件及生长关系研究 谢航，邱宏端，李中伟，林娟，陈朝洋 （福州大学生物科学与工程学院，福建福州３５０００２） 摘要：对３种具有水质净化功能的地衣芽孢杆菌、假丝酵母菌和荚膜红假单胞菌进行混合培养，探讨３种菌混 合培养的培养基、培养条件及其生长关系．实验结果表明，３种菌均可良好生长的培养基为每升水含葡萄糖１０ ｇ，酵母膏１０ｇ，蛋白胨６ｇ，ＮａＣｌ２２０ｇ，Ｍ舀０。０．２ｇ，ＫＨ２Ｐ０。０．５ｇ，ＫＨＰ０４０．３ｇ，ｐＨ６．５；３种菌混合培养的 接种顺序与培养条件为在培养液中先分别接种３％荚膜红假单胞菌与假丝酵母菌，于３５℃、２００ｒ／ｍｉｎ摇床下 培养４８ｈ，后接种４％地衣芽孢杆菌继续混合培养至６０ｈ；３种菌混合培养时的生长关系为假丝酵母菌与荚膜 红假单胞菌存在互惠互利关系，而地衣芽孢杆菌与其它两株功能菌为无关共栖关系． 关键词：多菌种；混合培养；微生物；正交实验；生长关系 中图分类号：Ｑ９３９．９文献标识码：Ａ ＳｔｕｄｙＯｎｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉＯ璐ａｎｄｇｒｏｗｍｒｅｌａｔｉｏ璐ｌＩｉｐｓｏｆｍｉ】｜【ｅｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｍｕｌｔｉ—ｓｔｒａｉｎｓ ｘＩＥＨａＩｌｇ，ＱＩＵＨｏｎｇ—ｄｕａｎ，ＬＩｚｈｏｎｇ—ｗｅｉ，ＵＮＪｕａｎ，ＣＨＥＮＣｈａｏ—ｙａｎｇ （ＣｏｕｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏ百ｃａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ，Ｉｋｈｎｏｌｏｇｙ，ＦＩｌｚｈｏｕＵＩｌｉｖｅ玛时，Ｆｕｚｈｏｕ，ＦｕｊｉａＩＩ３５０００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓ咖ｃｔ：ＳｔｕｄｉｅｄｔＩｌｅＩＩｌｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ，ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄ鼯ＤｗｍｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｏｆＢ口ｃＺｉｃ＾ｅ，ｌ洳ｒｍ厶， 如凡垅如印ａｎｄ脚ｃ叩ｓｕ如ｆ口ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｉｍｐｍｖｅｗａｔｅｒｑｕａｌｉ哆ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｎｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔ王ｌａｔ ｔ１１ｅｏｐｔｉｍｕｍＩＩｌｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ０ｆｔｌｌｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｗａｓ：ｐｅｒｌｉｔｅｒｗａｔｅｒｃｏｎｔａｉｎｓｄｕｃｏｓｅ１０ｇ，ｙｅａｓｔｅｘ一 咖ｃｔ１０ ｇ，ｐｅｐｔｏｎｅ６ｇ，ＮａＣｌ２０ｇ，ＭｇＳ０４０．２ｇ，ＫＨ２Ｐ０４０．５ｇ，ＫＨＰ０４Ｏ．３ｇｗｉｔｌｌｐＨｖａｌｕｅ６．５；ｔｌｌｅｓｅｃｍｅｎｃｅｏｆｉｎｏｃｕｌａｔｉ仰ａｎｄｃｕｌｔｕｒ＿ｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｍｉ）（ｅｄｃｕｌｔｕｒ＿ｅｏｆｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ：Ｃｏｎ垅ｄ８ｓｐａｎｄ Ｒ印ｃ口珊ｎＺ口玩埘ｔ｝ｌ３％ｉＩｌｏｃｕｌａｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｉｎｔｌｌｅｍｅｄｉｕｍ．ａｎｄｍｉｘｅｄｃｕｌ— ｔｕｒｅｄｆ缸４８ｈｕｎｄｅｒｔｌｌｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ３５℃。２００ｒ／ＩＩｌｉｎ，ｔｈｅｎＢ口ｃＺｉｃ危ｅｎｉ加ｒｍ如访山４％ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｖｏｌ— ｕｍｅｗａｓｉｎｏｃｕｌａｔｅｄａｎｄ１１１ｉｘｅｄｃｕｌｔｌｌｒｅｄｕｎ６ｌ６０ｈ．Ｔｈｅｇ刚危ｈｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｏｆｍｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｔｌｌｒｅｅ ｎｅｕ砌ｓｍａｎｄｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ：ｔ｝ｌｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＢ口ｃＺｉｃ＾ｅｎ帕丌７ｌ括ａｎｄｔ｝ｌｅｏｔｈｅｒｔ’ｖｏｓｔＩ＿ａｉｎｓｗａｓ ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ』ｂｐｃｏｐｓＭＺ口￡口ａｎｄｔｌｌｅＣ口，以ｉｄ口ｗ８ｓ∞ｍｅｒｇｉｓｍ． Ｋ叼ｗｏｒｄｓ：ｍｕｌｔｉ—ｓｔｒａｉｎｓ；ｍｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅ；ｍｉｃｒｏｂｅ；ｏｒｔｌｌｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ；铲ｏ、ｎｈｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ 应用微生态制剂治理养殖生态环境，投入少且无抗药性和药物残留，被认为是２１世纪养殖业的发展方向．目前，我国水产养殖中常用的菌剂有光合细菌、芽孢杆菌、肠球菌等单一菌剂，以及ＥＭ、美菌方、益菌王、利生素等复合菌剂¨“Ｊ．但从现有水产养殖的菌剂看，仍存在多菌种菌剂品种较少、菌剂耐盐性能较差等不足．由于单一菌剂对养殖水体的生物修复作用存在自身的局限性，因而开发具有一定耐盐性能的多菌种制剂在实践应用中具有重要意义．笔者在前期研究中已选育出降解养殖水体残余饵料、氨氮及亚硝基氮具有优势互补作用的地衣芽孢杆菌、假丝酵母菌和荚膜红假单胞菌，本文研究其混合培养的条件与它们之间的生长关系． １材料与方法 １．１材料 １）菌种．荚膜红假单胞菌（尺印ｃ叩ｓＭ胁口）、地衣芽孢杆菌（Ｂ口ｃｚｉｃ＾ｅｎ咖ｒｍ如）、假丝酵母菌（Ｃ口ｎｄｉｄ口印）为实验室选育保藏菌种． 收稿日期：２００６一０５—０９ 作者简介：谢航（１９８０一），女，硕士，助理实验师． 基金项目：福建省科技计划资助项目（２００５Ｎ０３８）；福建省海洋与渔业局资助项目（闽海渔科０４ｌｌ号）