高效薄层色谱法鉴别6种中药多糖
杨成，管佳，章江生，李绍平*
（澳门大学中华医药研究院，澳门）
摘要：目的鉴别不同来源的中药多糖。方法采用高效薄层色谱法分析多糖酸水解产物，同时应用2种显色剂以及薄层扫描技术，获得可区别中药多糖的特征图谱。结果以正丁醇：甲醇：氯仿：冰醋酸：水=12.5: 5:4.5:1.5:1.5(v/v)为展开剂，7种标准单糖和2种糖醛酸为对照，使用苯胺-二苯胺为糖类成分显色剂，结合茚三酮显色剂检查氨基酸类成分，获得了多糖酸水解产物中两类成分的特征薄层色谱，可用于区分来自冬虫夏草、灵芝、黄芪、人参、西洋参和三七的6种多糖组分。结论建立了一种可鉴别6种中药多糖的高效薄层色谱法，此法简单快速，经济实用，可以用于多糖类成分质量控制。
关键词：多糖，高效薄层色谱，质量控制，中药
Discrimination of Polysaccharides from Six Traditional Chinese Medicines using High-performance Thin-layer Chromatography
YANG Cheng, GUAN Jia, ZHANG Jiang-sheng, LI Shao-ping* (Institute of Chinese Medical Sciences, University of Macau, Macao SAR, China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To distinguish the polysaccharides from different Traditional Chinese medicines (TCMs). METHODS The acid hydrolyzates of polysaccharides were analyzed by high-performance thin-layer chromatography (HPTLC) combined with two coloration methods and thin layer scanning technique. RESULTS The chromatography was performed on nano silica gel 60 plate with n-butanol -methanol-chloroform- acetic acid-water (12.5:5:4.5:1.5:1.5, v/v/v/v/v) as mobile phase. 7 monosaccharides and 2 glycuronic acids were used as reference compounds. The aniline-diphenylamine solution and ninhydrin solution were employed for detection of saccharides and amino acids, respectively. The polysaccharides from Cordyceps sinensis, Ganoderma lucidum, Astragalus memberanaceus, Panax ginseng, Panax quinquefolii and Panax notogiseng were easily discriminated based on their characteristic TLC profiles. CONCLUSION A simple, rapid and effective HPTLC method was developed for distinguishing the polysaccharides from 6 TCMs, which is helpful to control the quality of polysaccharides from Chinese medicine.
KEY WORDS: Polysaccharides; HPTLC; Quality control; TCMs
多糖是一类由单糖（通常大于10个）通过糖苷键连接而成的生物大分子聚合物，是生物体维持生命活动的必需物质。近年来，由传统中药及天然药物中分离得到的多糖类成分，因其广泛的生物活性，如抗肿瘤，调节免疫，抗病毒等[1-4]已成为多糖研究的热点。然而，如何鉴别不同来源的中药多糖一直是个难题，也是多糖质量控制的关键问题。目前多种现代仪器分析方法，如薄层色谱[5]、气相色谱[6]、高效液相色谱[7]、质谱[8]、核磁共振[9]等已应用于多糖的结构分析中，其中薄层色谱因其简单、快速、样本量大、成本低等优点已成为单糖、寡糖成分鉴别的常用方法[5]。本文应用高效薄层色谱（HPTLC）法对6种常用中药多糖的酸水解产物进行分析，以7种单糖和2种糖醛酸为对照，采用2种不同的显色剂对组成糖类成分及结合氨基酸类成分分别显色，获得了可用于鉴别的特征薄层色谱。
1 仪器与试药
Desga 高效薄层系统（含AS30自动点样器，CD60扫描仪，Pro Quant扫描软件德国Desga公司）；双槽展开缸；高效硅胶60板（德国MACHEREY-NAGEL 公司）。微波提取仪(Multiwave3000, Antonpaar, 奥地利)
D-半乳糖，D-葡萄糖，D-核糖，D-木糖，D-甘露糖，L-阿拉伯糖，L-鼠李糖，D-半乳糖醛酸，D-葡萄糖醛酸(美国Sigma公司); 水（MilliQ 纯水）；其他试剂均为分析纯。人参（Panax ginseng），西洋参（Panax quinquefolii），三七（Panax notoginseng），冬虫夏草（Cordyceps sinesis）购于澳门中侨参茸公司，黄芪（Astragalus memberanaceus）采自山西，灵芝（Ganoderma lucidum）采自安徽金寨，均由通讯作者鉴定。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备
取D-葡萄糖0.5 mg，D-核糖1.5 mg，D-木糖1.5 mg，D-甘露糖0.5 mg，L-阿拉伯糖1.0 mg，L-鼠李糖0.5 mg，D-半乳糖醛酸1.0 mg，D-葡萄糖醛酸1.0 mg，精确称定，溶于1 mL 95%乙醇制成混合对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
取干燥药材粉末1 g，加入10 mL水，置微波提取仪中于120 ?C 下提取15 min，提取液于4500 rpm下离心10 min后取上清液，加入40 mL 95%乙醇后于4 ?C冰箱内醇沉过夜。混悬液再次离心，弃去上清液，沉淀以5 mL 95%乙醇洗涤2次后冷冻干燥得粗多糖。取粗多糖10 mg溶于5 mL三氟醋酸（TFA），置于氮气保护密封试管内100 ?C水解2 h。水解液低压旋干，残渣溶于1 mL 50%乙醇得供试品溶液。
2.3展开剂和显色剂
以正丁醇：甲醇：氯仿：冰醋酸：水=12.5:4.5:5:1.5:1.5(v/v) 展开，苯胺-二苯胺溶液（二苯胺4 g、苯胺4 mL、85%磷酸20mL混合溶解于200 mL丙酮溶液中）和茚三酮溶液（0.2 g 茚三酮溶解于100 mL 丙酮中）为显色剂。
2.4 薄层层析
高效薄层板（20 cm×10 cm），点样量10 μL，混合对照品点样1 μL，样品条带宽10 mm，间隔15 mm，起始点样高度10 mm。点样后薄层板放入已预先饱和30 min的双槽层析缸中展开，展开距离9 cm，取出吹干，喷显色剂苯胺-二苯胺显色后，130 ?C加热显色至斑点清晰；或喷茚三酮后，105?C加热显色至斑点清晰，覆盖同样大小玻璃板，四周用胶布封固后作薄层扫描。
3结果
3.1多糖水解条件的优化
3.1.1酸的选择
参考文献[10]的方法，以人参多糖为样品分别使用硫酸、盐酸和三氟醋酸进行完全酸水解考察。硫酸水解：10 mg样品加入5mL 1 mol?L-1硫酸，密封试管100 ?C下水解4 h，水解液冷却后加入足量碳酸钡中和，4500 rpm下离心10min后收集上清液，沉淀以5 mL 50%乙醇洗涤后再离心，合并上清液。上清液于40 ?C下低压蒸干，残渣溶于1 mL 50%乙醇备用。盐酸水解：10mg样品加入5 mL 2 mol?L-1盐酸，100 ?C水解4 h，水解液冷却后加入NaOH 溶液中和，溶液于40 ?C下低压蒸干，残渣溶于1mL 50%乙醇备用。三氟醋酸水解：水解方法同2.2，水解时间为4 h。结果见图1，由图可见，盐酸水解后因中和步骤产生大量的NaCl，干扰了展开条带；硫酸水解产物可得清晰条带，但因中和步骤繁琐而导致产物损失；采用TFA水解，操作简单，条带多且清晰，产物损失较小，故选用TFA进行多糖水解。
图1多糖水解用酸的选择
L1－TFA水解；L2－硫酸水解；L3－盐酸水解；L4－混合对照品；1，D-半乳糖醛酸；2，D-葡萄糖醛酸；3，D-半乳糖；4，D-葡萄糖；5，D-甘露糖；6，D-阿拉伯糖；7，D-木糖；8，D-核糖；9，L-鼠李糖
Fig1 Selection of the acid for hydrolysis of polysaccharides
L1－TFA hydrolysate; L2－H2SO4 hydrolysate; L3－HCl hydrolysate; L4－Mixed standards; 1, D-Galacturonic acid; 2,D-Glucuronic acid; 3,D-Galactose; 4, D-Glucose; 5,D-Mannose; 6 L-Arabinose; 7,D-Xylose; 8,D-Ribose; 9, L-Rhamnose
3.1.2 酸浓度的优化
以3.1.1中TFA水解的条件，分别使用2、1.5、1 mol?L-1 TFA进行水解，考察不同浓度TFA对多糖水解的影响。结果如图2，由图可见，随酸浓度降低，水解不完全，释放出的半乳糖醛酸（条带1）减少，且条带3下方条带（可能是未水解寡糖）增多，干扰糖醛酸检测，因此酸浓度选用2 mol?L-1。
图2三氟乙酸浓度的优化
L1－2 mol?L-1；L2－1.5 mol?L-1；L3－1 mol?L-1；L4－混合对照品；1－9，同图1
Fig 2 Optimization of TFA concentration for the hydrolysis
L1－2 mol?L-1; L2－1.5 mol?L-1; L3－1mol?L-1; L4－Mixed standards; 1－9，same as in Fig 1
3.1.3水解时间的优化
以3.1.2中确定的TFA水解条件，分别考察4 h、2 h、1 h等不同水解时间。结果如图3，由图可见，1 h时水解不完全，条带3下方可见明显未水解寡糖条带，干扰糖醛酸检测，2 h与4 h水解效果相近，因此选择水解2 h。
图3多糖酸水解时间的优化
L1－4 h；L2－2 h；L3－1 h；L4－混合对照品；1－9，同图1
Fig 3 Optimization of TFA hydrolysis time
L1－4 h ; L2－2 h; L3－1 h; L4－Mixed standards; 1－9，same as in Fig 1
3.1.4 重复性考察
以3.1.3中所确定的TFA水解条件，取3份人参多糖样品平行水解，考察重复性，结果如图4，表明本水解条件重复性良好。
图4水解重复性考察
L1－L3，3份平行水解样品；L4－混合对照品；1－9，同图1
Fig 4 Repeatability for acid hydrolysis of polysaccharides from ginseng
L1－L3，3 hydrolyzates; L4－Mixed standards; 1－9，same as in Fig 1
3.2多糖的薄层色谱鉴别
3.2.1组成糖类成分特征色谱
6种中药多糖经完全酸水解后，以苯胺－二苯胺试剂显色，可得组成糖类成分特征色谱，如图5。由图可见，6种多糖的主要组成单糖均有葡萄糖，半乳糖，甘露糖，其中黄芪多糖、人参多糖、西洋参多糖及三七多糖中还含有少量阿拉伯糖与鼠李糖，并伴有少量半乳糖醛酸。灵芝多糖中呈现一条特殊的黄绿色条带（图中箭头所示），可与其他多糖区分。冬虫夏草多糖中没有检测到糖醛酸。综上，通过糖类成分特征图谱，冬虫夏草多糖及灵芝多糖可明显区别与其他四种植物多糖。
图5 6种中药多糖酸水解产物的苯胺－二苯胺显色薄层色谱图
L1，黄芪；L2，冬虫夏草；L3，灵芝；L4，西洋参；L5，人参；L6 三七；L7－混合对照品；1－9，同图1
Fig 5 HPTLC photographs of acid hydrolyzates of polysaccharides from six TCMs colorized by aniline-diphenylamine solution
LI，Astragalus memberanaceus；L2，Cordyceps sinesis；L3，Ganoderma lucidum；L4，Panax quinquefolii；L5，Panax ginseng；L6，Panax notoginseng；L7－Mixed standards; 1－9，same as in Fig 1
3.2.2氨基酸类成分特征色谱
6种多糖经完全酸水解后，以茚三酮试剂显色，可得多糖中氨基酸类成分的特征色谱，如图6。
图6 6种中药多糖水解产物的茚三酮显色薄层色谱图
L1－L6，同图5；A－K，特征条带
Fig 6 HPTLC photographs of acid hydrolyzates of polysaccharides from six TCMs colorized by ninhydrin solution
LI－L6，same as in Fig 5；A－K，characteristic bands
另对灵芝中5个特征条带（A，B，K，D和J）做光谱扫描，发现该类显色成分在550 nm处有最大吸收，故以550 nm为扫描波长，背景吸收较弱的700 nm为参比波长，对所有样品进行透射模式扫描，狭缝宽度为6.00 nm × 0.02 nm。结果如图7。
图7 6种中药多糖水解产物的茚三酮显色光谱扫描图（λ= 550 nm）
L1－L6，同图5；A－K，图6中特征条带对应的色谱峰
Fig 7 HPTLC scanning profiles of acid hydrolyzates of polysaccharides from six TCMs colorized by ninhydrin solution
LI－L6，same as in Fig 5；A－K，peaks of characteristic bands in Fig 6.
由图可见，黄芪、灵芝、冬虫夏草多糖水解产物中含有较多可使茚三酮显色的物质，而人参、三七和西洋参多糖中则较少。冬虫夏草多糖（L2）可见H、I 两个特征的条带；而灵芝多糖（L3）亦含有一特征条带K；黄芪多糖（L1）则含有一特征条带C，另外黄芪中含有条带F而灵芝与虫草中几乎没有，且虫草和灵芝中有J带而黄芪则没有，由此可区分黄芪多糖。西洋参多糖（L4）有明显的D条带，而三七与人参中不含有；三七与人参多糖（L5与L6）的结果较为相似，但L5中的A条带的颜色明显深于L6。综上，通过氨基酸类成分特征图谱，6种中药多糖基本可以明确区分。
4 讨论
4.1本研究通过优化酸水解条件，以获得多糖的完全酸水解产物，保证结果的重现及特征图谱的稳定。另本文应用薄层色谱成功分离分析了七种单糖及两种糖醛酸，可用于多糖的组成分析。
4.2多糖经完全酸水解后可释放出组成单糖及其他结合物质，应用苯胺－二苯胺试剂可对糖类成分显色，检测组成单糖的种类；而水解产生的氨基酸类成分，则可由茚三酮试剂显色。所获得的两类成分特征图谱，较全面反映了多糖组分的信息，增强了谱图的特征性。
4.3本文所建立的高效薄层色谱法简单快速，操作简便，结果直观，可有效鉴别不同来源的中药多糖，为其质量控制提供了一条新思路。
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薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。 仪器与材料 编辑 ⑴载板 变色硅胶 用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，但最大不得超过20×20，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm ×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 ⑵固定相(吸附剂)或载体 薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用
实验报告 一、实验目的 掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。 二、实验原理 有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值R f表示。 R f 原点至层析斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离 三、实验仪器与药品 5.0cm×15.0cm硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。 四、物理常数 五、仪器装置图
“浸有层析板的层析槽”图 1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液 六、实验步骤 （1）薄层板的制备： 称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代做！）固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。 （2）点样。 在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm） （3）定位及定性分析 用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称。
实验注意事项 1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。 2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。 3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm 以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5－1cm 时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。 讨论： 七、思考题
. 薄层色谱分析步骤详解 薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。现对此方法的分析步骤及留意事项提点建议。 完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操纵。 ⑴制板 在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。 一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。称取适量硅胶，加进0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平台上，留意防尘。在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。 ⑵点样 用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，假如要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间间隔为lcm左右，样点与玻璃边沿间隔至少lcm，为防止边沿效应，可将薄层板两边刮往1～2cm，再进行点样。 ⑶展开 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定间隔后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 ①展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加进足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、 宽的滤纸条，一端浸进展开剂中，密封室顶的盖。 ②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。 ③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 ④展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放进展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸进薄层下真个高度不宜超过0.5cm。 ⑤展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。 ⑥展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 ⑦Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变活动相的比例。 ⑷斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。 展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的间隔与溶剂前沿至原点的间隔的比值就是该化合物的Rf值。 ;.
中药饮片经验鉴别的方法 中药饮片经验鉴别的方法 一、眼观法 1、直接观察法用于观察中药饮片样品外表面、切面的特征。 2、放大观察法：一些中药饮片样品特征，细微而不能直接观察的，可用放大镜进行放大观察。常用于观察种子的纹理、细小毛茸等。例如观察紫苏子表面隆起的网纹。 3、水浸观察法：是对一些皱缩，质脆易碎的花、叶类中药饮片样品，先用清水(一般用温热水)将样品浸软，取出摊开展平后进行观察。如鉴别细辛叶可用此法观察其叶片形状及脉纹。 二、手感法 1、手摸法即用手捻试中药饮片样品的软硬、柔韧程度、疏松及粘性特征。例如黄芪软而绵韧，当归软而柔，紫草染手，鹿茸毛光滑舒适，土茯苓折之有弹性等。 2、手捏法用手指捏压中药饮片样品，感觉干湿、粘附等。例如天仙子手捏有粘性，萆薢手捏有弹性等。 3、手衡法用手把中药饮片样品、通过上下运动以感觉其轻重。例如矿物类中药饮片质轻与质重就更明显。如磁石质重，赤石脂次之，滑石较轻些，硼砂更轻。 三、鼻闻法 1、直接鼻嗅法是直接嗅闻中药饮片样品散发的气味。例如鉴别麝香的香窜气，白鲜皮的羊膻气，黄芪的豆腥气等。
2、揉搓鼻嗅法某些中药饮片样品由于散发的气微弱，不能直接 嗅到气味，可先将样品柔搓破碎后，再进行嗅。例如鉴别鱼腥草的 鱼腥气味，细辛的清香味等。 3、蒸气鼻嗅法是用热水浸泡中药饮片样品，然后嗅闻浸泡液的 水蒸气。例如鉴别犀牛的角，将犀牛的角置沸水中征浸，有清香气 而不腥，水牛角略有腥气。 四、口尝法 1、舌感法用舌尖接触中药饮片样品，体验味道和接触时的感觉。例如鉴别熊胆，可尝到先苦而回甜的味。鉴别龙骨，当其与舌尖接 触时有吸舌感等。 2、咀嚼法是将中药饮片样品放入口中，用牙齿嚼一分钟体验嚼 时感觉和药味。例如鉴别大黄，咀嚼有砂砾感，粘牙，味苦而微涩。石斛味淡而粘滑，有渣。秦皮味苦而入喉。细辛辛辣而麻舌等。另外，口尝时特别注意安全，对有毒中药饮片样品需尝味时，尝后吐 掉漱口以免中毒。
如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法 谢沐风 (上海市药品检验所上海200233) 摘要本文就如何建立TLC法测定有关物质的方法进行论述，系统地阐述了薄层色谱法各条件确定的原理，并列举了质量标准制订中存在的某些问题。 关键词薄层色谱法（TLC法）有关物质方法建立 有关物质是研究药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、降解物、副产物、聚合体、异构体以及不同晶型、旋光异构的物质，也可能是制剂过程中产生的降解物，或是在贮藏、运输、使用过程中产生的降解物等[1]。这些杂质的存在直接反映药品的有效性和安全性，故要对其进行研究，特别是在药品申报的质量研究资料中需建立其检测方法，并根据生产、稳定性考核等实际情况考虑是否在质量标准中制订该检查项，规定其限度。目前，有关物质的常用测定方法有高效液相色谱法(HPLC法)和薄层色谱法(TLC法)。 TLC的特点是快速、简便，尤其是对无紫外吸收的杂质测定，更具有其应用价值。如能将TLC法与HPLC法有机地结合、或彼此间进行比对研究，便可得到更多、更为准确的有关杂质信息，做到两方法间的相辅相成，相益得彰！本文将着重讨论如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法。 1．测定方法类型 常用的方法有杂质对照品法（适用于已知杂质）和自身（稀释）对照法（适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取得杂质对照品）。目前国内由于难以获得杂质对照品、故一般均采用自身对照法。 2．展开剂的确定（即专属性试验） 专属性的研究是提供被分析物在杂质和辅料存在时能被区分的证明，该点是色谱条件建立的关键。通常采用在被分析物的对照品或精制品中加入一定量的杂质或辅料，证明色谱条件可将各杂质与被分析物分离[1]。这里的关键是：将多少量的杂质加入到多少量的主成分中。正确的作法是将1%(w/w)浓度量的各杂质加入到100%浓度的主成分中，配制这样的溶液来
薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 1.仪器与材料 （1）薄层板 按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫外光254nm 波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40μm）和高效薄层板（5～10μm）. 在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10～40μm。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 （2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 （3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 （4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 （5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 （6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或
经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 2.操作方法 （1）薄层板制备 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。 自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水（或加有黏合剂的水溶液）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。 （2）点样除另有规定外，在洁净干燥的环境，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板上，一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线距底边10～15mm，高效板一般基线离底边8～10mm。圆点状直径一般不大于4mm，高效板一般不大于2mm；接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5～10mm。高效板条带宽度一般为4～8mm，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜，一般不少于8mm，高效板供试品间隔不少于5mm。 （3）展开将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭。除另有规定外，一般上行展开8～15cm，高效薄层板上
中药饮片鉴别及检验相关知识培训 《中华人民共和国药品管理法》第二章第十条第二款规定“中药饮片必须按照国家药品标准炮制；国家药品标准没有规定的，必须按照省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门制定的炮制规范炮制。省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门制定的炮制规范应当报国务院药品监督管理部门备案。” 中药饮片是中医临床方剂的基本组成部分，也是中成药的基本原料，其质量的优劣将直接影响到中医药临床疗效的体现，直接关系到人们用药的安全、有效。但是，随着中药饮片的市场需求量不断增长，及部分外来中药饮片的冲击，致使出现了大量的不按规定炮制方法炮制的中药饮片流入市场，从而导致了中药饮片的整体质量有所下降。 近年来，中药材抽验不合格率居高不下，在这当中有大部分是一些不法分子故意造假（重金属超标的虫草、模具压制的人参、土豆染色做成的天麻等），售假。有的则是中药材保管发生变质。中药材的鉴别不具有一定中药鉴别常识是很难鉴别真伪的。安排这次培训的目的，为了方便从药人员能够对中药材进行简单的快速鉴别，根据中药的某些成分的特性，快速鉴别一些中药。 一、药用植物学知识 1 .药用植物的分类 现以黄连为例示其分类等级如下：
界………………植物界 门………………被子植物门 纲………………双子叶植物纲 目………………毛茛目 科………………毛茛科 属………………黄连属 种………………黄连 2. 植物组织的类型 ２.１分生组织：顶端分生组织、侧生分生组织、居间分生组织位于植物体生长的部位，由于分生组织细胞不断分裂、分化，使植物体得以生长 ２.２薄壁组织：基本薄壁组织、同化薄壁组织、贮薄壁组织藏、吸收薄壁组织、通气薄壁组织 在植物体内担负着同化、贮藏、吸收、通气等营养功能，又称营养组织 ２.３保护组织：表皮(毛茸（腺毛非腺毛）、气孔（平轴式直轴式不等式不定式环式）) 周皮（由木栓层、木栓形成层和栓内层三种不同的组织的复合体） 保护着植物的内部组织，控制和进行气体交换，防止水分的过度散失，病虫的侵害以及机械损伤等。 ２.４机械组织：厚角组织厚壁组织：纤维、石细胞 ２.５输导组织：管胞与导管；筛管、伴胞与筛胞
姓名：科室分数： 中国药典2010年版薄层色谱法试题 一、填空（43分） 1、市售薄层板分（）和（），如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。 2、薄层板如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用（）、（）或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，（）活化，置干燥器中备用。 3、薄层板在使用前检査其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应（）、（）、（），（）、（）、（）及（）。 4、薄层点样除另有规定外，在洁净干燥的环境，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板上，一般为（）或（），点样基线距底边（），高效板一般基线离底边（）。圆点状直径一般不大于（），高效板一般不大于（）。 5、薄层点样，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。（）宽度一般为5?10mm。高效板条带宽度一般为（）。点间距离可视斑点扩散情况以（）互不干扰为宜，一般不少于8mm，高效板供试品间隔不少于5mm。 6、薄层色谱法的系统适应性试验包括（）、（）和（）三个方面。 7、薄层扫描定量时，除另有规定外，含量测定应使用（）簿层板。 8、薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的量在（）内，必要时可适当调整供试品溶液的（），供试品与对照品同板点样、展开、扫描、测
定和计算。 二、单选题（10分） 1、薄层色谱常用的固定相其颗粒大小，一般要求粒径为（） A、10～40um B、20～40um C、5～50um D、40～60um 2、自制薄层板的厚度为（） A、0. 2?0.3mm B、0.1?0.3mm C、0. 3?0.5mm D、不得过0. 5 3、供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于（）个。扫描时，应沿展开方向扫描，不可横向扫描。 A、1 B、2 C、3 D、4 三、多选题（21分） 1、薄层色谱中，最常用的固定相有（） A、硅胶G、硅胶GF254、 B、微晶纤维素 C、硅胶H、硅胶HF254、 D、氧化铝。 2、制备薄层板时，用羧甲基纤维素钠水溶液适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。羧甲基纤维素钠水溶液的浓度可为（）。 A、0. 2% B、0.5% C、0.7% D、0.3% 3、薄层色谱所用的仪器与装置有（） A、薄层板 B、点样器 C、展开容器 D、显色装置 E、检视装置 F、薄层色谱扫描仪 4、薄层显色有以下（）几种方式。 A、喷雾显 B、浸渍显色 C、蒸气熏蒸显色 D、紫外光显色 5、薄层检视装置中应装有以下设备：（）
一、中药饮片鉴别的目的意义 中药饮片是中药材经加工炮制后使其成为可直接配方或制剂的药品，为了适应中药临床治病、防病及制药的需要，中药饮片有生品和制品之分，每种中药材的饮片规格少则一、二种，多则四、五种，由此可见，中药饮片品种繁多。中药材大多来源于植物，特别是同科同属的植物器官形态相近，炮制后往往外表形态、颜色近似，不易区分，容易发生混淆，另外还经常出现假冒掺伪现象，给饮片的鉴别增加了难度，例如用纸丝染色充西红花，用紫苏子充菟丝子，月季花当玫瑰花使用，苏木当降香使用等，所以鉴别中药饮片的品种真伪、优劣，掌握常用中药饮片的鉴别特征是执业中药师的基本功，有必要提高执业中药师鉴别中药饮片的能力。 二、中药饮片性状鉴别的方法 中药饮片的性状鉴别，实际上就是传统的经验鉴别，是用人的感官，采用看、尝、嗅、听、手摸及水试和火试等方法，主要内容包括形状、规格、大小、表面或切面颜色、特征、质地、折断现象、气味，主要工具有放大镜，紫外光灯等。它简便易行，在药房柜台即可进行，鉴别时可运用植物分类学、解剖学的理论知识进行鉴别。 1、形状 中药饮片因其来源不同，植物器官不同及炮制方法不同，饮片的类型有多种，如圆片，有白芷、白芍、泽泻等，长方形片，如葛根、杜仲等，斜片如黄芪等，条片状，多为皮类药材及叶类药材，如丹皮、厚朴、枇杷叶等，段状片，多为草本类及细长枝条根，如荆芥、紫苏、党参、牛膝等，果实、种子一般为类圆球形，如五味子饮片，扁圆形如酸枣仁饮片，心形如苦杏仁饮片等，大者常切成类圆形片状等，如木瓜饮片、槟榔饮片。中药饮片片型的长短厚薄，是饮片规格、质量的一项重要的指标，根据《中国药典》2000年版一部的规定，片：0.5mm以下为极薄片，1～2mm为薄片，2～4mm为厚片；段长：10～15mm；块：8～12mm 的方块；皮类丝宽2～3mm，叶类丝宽5～10mm。有的地方中药炮制规范有补充。如2～4mm 为中片，4～5mm为厚片，5～10mm为短段，10～15mm为中段，长约30mm为长段等，各地中药炮制规范具体尺寸略有不同。 2、表面 是饮片最具特征的地方，切片的饮片可分为周边（即外表面）和切面（即横切面）。外表面属植物的保护组织，切面是植物分生组织，薄壁组织、机械组织、输导组织、分泌组织的综合反映。如白芷的周边具纵皱纹，木香的周边具网状皱纹，即双子叶植物根、根茎、茎、皮的最外层常由木栓细胞组成，因此饮片外表面显得较为粗糙，有时呈鳞片状剥落，单子叶植物根、根茎外表无木栓层，外表面较为光滑，如麦冬、天冬。 饮片的切面大多为横切面，特征非常重要，可通过观察皮部与木部的比例，维管束的排列方式，射线的分布，油点的多少等特征区别不同的品种及易混淆的饮片。 观察饮片横切面应注意区分双子叶植物、单子叶植物及蕨类植物，一般说来，双子叶植物根、根茎等，形成层成环，呈放射状纹理，根茎、茎中央有髓。单子叶植物根为内皮层环，皮部宽、中央有髓，中柱一般较皮部小，如百部、麦冬等。单子叶植物根茎皮层及中柱均有维管束小点散布。如白及。蕨类植物根茎、叶柄基部的中柱有一定形状或分体中柱环列，如狗脊根茎饮片中柱呈圆形环，紫萁贯众饮片叶柄基部中柱“U”字形，绵马贯众饮片叶柄基部分体中柱环列等。有的中药饮片具异常构造如牛膝、川牛膝，具同心多层异型锥管束环，商陆饮片切面上显“罗盘纹”；何首乌饮片切面上显“云锦状花纹”，大黄根茎饮片髓部具多数“星点”等。木质藤本植物导管较粗大，饮片切面上呈小孔洞，如川木通饮片。皮类中药有的干皮组织中纤维束和薄壁组织相间排列，折断面显层状结构，如黄柏饮片、秦皮饮片。 分泌组织在切面上也是重要的识别特征，如人参、西洋参、五加皮具树脂道，饮片皮部具棕黄色小点；苍术具大型油室，饮片显“朱砂点”；鸡血藤具分泌细胞，饮片皮部有树脂样红
中药饮片的经验鉴别 基层监管部门没有药品检验机构和检验科室，在日常监管工作，我们要根据实际情况，切实发挥传统的眼看、手模、鼻闻、口尝等常规方法的作用，没有七成把握不要抽样检验。中药材的来源、产地、商品规格、用药习惯的炮制方法等因素，产生了同一品种在形态特征上的差异、药材与饮片在形态特征上的差别，有的同一饮片又常是由多个品种混合而成，所以对真伪鉴别造成了一定的困难。为提高日常监管效率，现介绍中药饮片鉴别的经验方法如下，与大家共同探讨。 一、加强学习，牢记药材主要特征 要想区分各种药材的真伪优劣，首先要努力学习中药鉴别的基础理论知识。同一种药材，无论产地有什么变化，规格有什么标准，其主要特征不会起根本的变化。每一种药材都有其各自区别与其它药材的主要特征。这些特征，是我们监管人员做好真伪鉴别必备的基本功。 （一）形状鉴别：防风的“蚯蚓头”；潞党参的“狮子盘头芦”；野人参“芦长碗密枣核丁，紧皮细纹珍珠须”；海马的“马头蛇尾瓦楞身”；蕲蛇的“翘鼻头”。“方胜纹”。“连珠斑”。“佛指甲”；天麻的“鹦哥嘴”“肚脐眼”；槟榔的“大理石样花纹”。 （二）颜色鉴别：丹参红色，黄连黄色，紫草紫色，乌梅黑色，血竭黑似铁，研末红似血。 （三）质地鉴别：南沙参“松泡”；山药富“粉性”；当归“油润”；郁金、大麻“角质有光泽”。 （四）断面鉴别： 杜仲折断时有胶丝相连；黄柏折断面是纤维性，裂片状分层；苦楝皮折断面分为多层薄片，层层黄白相间；大黄在光下有“星点”；何首乌可见“云锦状花纹”；苍术有“朱砂点”“起霜”现象。 （五）气味鉴别：肉桂的浓烈特殊香气；阿魏的大蒜样臭气；苦杏仁的苯甲醛样香气；穿心莲苦至咽喉，经久不衰。 二、积累总结，注重药材之间的比较
薄层色谱法标准操作程序 1.目的：建立薄层色谱法标准操作程序，使薄层色谱法操作规范化、标准化。 2.范围：适用于薄层色谱法检验。 3.职责：质量管理部QA、QC负责本规程的实施；质量管理部负责人负责本规程实施情况的监督。 4.规程 4．1原理：将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 4．2仪器与设备：玻板（除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm，20cm×20cm 的规格）、定量毛细管或微量注射器、展开缸。 4．3试液与试剂：固定相或载体[最常用的有硅胶G、硅胶GF 、硅胶H、硅胶 254 。、羧甲基纤维素钠水溶液（0.5～0.7%）等]。 HF 254 4．4操作方法 4．4．1薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，调均，去除表面的气泡后，用勺子涂布于玻板上，平稳地振动30秒，(厚度为0.2～0.3mm)取下涂布好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后在110℃烘30分钟，立即置于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 4．4．2点样：除另有规定外，用定量毛细管或微量注射器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm,点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5～2.0cm，点间距离可视斑点情况以不检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。4．4．3展开：展开缸先放入展开剂，再把点样后的玻板放入展开缸内展开，待展开至规定距离（一般为10～15㎝），取出薄层板，晾干，然后在紫外灯下检视其斑点。并将对照品在同一块板上展开，进行比较。 4．5注意事项 4．5．1玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。 4．5．2点样点一般为圆点，不能太大。 5．标准依据：《中国兽药典》2000年版。 6．变更记载及原因：
中药饮片易混品种鉴别 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】中药材加工成饮片后，一些品种易混，抓住鉴别要点，将它们区别开。 【关键词】中药饮片易混品种鉴别 药房中饮片的性状鉴别，大多是采用传统的经验鉴别，即通过看、摸、闻、尝等方法鉴别饮片，对中药饮片易混品种鉴别，运用植物分类学的理论知识，抓住饮片的某些特征，更容易鉴别区分。下面是几组易混品种的鉴别要点： （1）佩兰与泽兰 佩兰：菊科植物佩兰EurpatoriumfortuneiTurcz.的干燥全草切节。茎圆柱状，叶背面有疏毛，揉之有香气。菊科植物主要特征为头状花序。 泽兰：唇形科植物地笋LycopuslucidusTurcz.干燥全草切节。茎方形有四棱中空，叶边缘有粗锯齿，下面密生腺点。唇形科植物主要特征是茎方、四棱，花唇形。 （2）松贝与小平贝母 松贝：为百合科植物卷叶贝母Fritillaria cirrhosa D.
Don、暗紫贝母FritillariaunibracteateHsiaoetK.C.Hsia和甘肃贝母FritillariaprzewalskiiMaxim的干燥鳞茎。大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”。大瓣与小瓣高度相等，大瓣、小瓣形态分明。顶端钝圆或稍尖。 小平贝母：为百合科植物平贝母FritillariaussuriensisMaxim 的幼小鳞茎。大瓣紧抱小瓣，小瓣高不及大瓣，大瓣、小瓣形态界限不分明，大瓣顶端有一棕褐色小点。顶端较平。 （3）山药、天花粉与葛根 山药：为薯蓣科植物薯蓣DioscoreaoppositeThunb根茎的切片。切面白色、粉性，有光滑细腻感、质脆、易断，味淡、微酸、嚼之发黏。山药为单子叶植物，切面维管束散列，显细小散在的筋脉点。 天花粉：为葫芦科栝楼TrichosanthesKirilowiiMaxim.或双边栝楼TrichosanthesunifloraHao根的切片，切面类白色，可见淡黄色筋脉纹或筋脉小点。质坚，细腻、味微苦。天花粉为双子叶植物，切面具放射状排列的导管，天花粉筋脉纹（导管、纤维）淡黄色。 葛根：为豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的根切片。切片灰白色至黄白色，可见淡褐色环纹及众多褐色小点与微细小孔。质坚韧、纤维性强或显粉性，味微甜。葛根为双子叶植物，切面具放射状排列的导管，葛根纤维性强，顺折易断，横折不易断。 （4）秦皮与合欢皮 秦皮：木犀科苦枥白蜡树FraxinusrhynchophllaHance、白蜡树 FraxinuschinensisRoxb.、尖叶白蜡树
薄层色谱鉴别操作规程 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，用于鉴别。 1.仪器与材料 （1）薄层板 市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2％～0.5％）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布器徐布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 （2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 （3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 （4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 （5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 2.操作方法 （1）薄层板制备 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破
摘要本文就如何建立TLC法测定有关物质的方法进行论述，系统地阐述了薄层色谱法各条件确定的原理，并列举了质量标准制订中存在的某些问题。 关键词薄层色谱法（TLC法）有关物质方法建立 有关物质是研究药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、降解物、副产物、聚合体、异构体以及不同晶型、旋光异构的物质，也可能是制剂过程中产生的降解物，或是在贮藏、运输、使用过程中产生的降解物等[1]。这些杂质的存在直接反映药品的有效性和安全性，故要对其进行研究，特别是在药品申报的质量研究资料中需建立其检测方法，并根据生产、稳定性考核等实际情况考虑是否在质量标准中制订该检查项，规定其限度。目前，有关物质的常用测定方法有高效液相色谱法(HPLC法)和薄层色谱法(TLC法)。 TLC的特点是快速、简便，尤其是对无紫外吸收的杂质测定，更具有其应用价值。如能将TLC法与HPLC法有机地结合、或彼此间进行比对研究，便可得到更多、更为准确的有关杂质信息，做到两方法间的相辅相成，相益得彰！本文将着重讨论如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法。 1．测定方法类型 常用的方法有杂质对照品法（适用于已知杂质）和自身（稀释）对照法（适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取得杂质对照品）。目前国内由于难以获得杂质对照品、故一般均采用自身对照法。 2．展开剂的确定（即专属性试验） 专属性的研究是提供被分析物在杂质和辅料存在时能被区分的证明，该点是色谱条件建立的关键。通常采用在被分析物的对照品或精制品中加入一定量的杂质或辅料，证明色谱条件可将各杂质与被分析物分离[1]。这里的关键是：将多少量的杂质加入到多少量的主成分中。正确的作法是将1%(w/w)浓度量的各杂质加入到100%浓度的主成分中，配制这样的溶液来验证系统适用性。之所以如此配制，目的是模仿样品中有可能存在的状态，即有少量（1%左右）杂质存在时是否能与主成分达到完全分离，只有这样才能比较客观、科学地反映样品中实际存在情况的（见图1）；而不应把该溶液配制成：主成分与中间体相同浓度的。因为一者实际检测时样品中不可能存在此种情况；二者该浓度不易确定，目前国内申报资料中一般的作法均是配制成较低的一致浓度，这样各斑点当然易于完全分离了（见图2），但在实际测定时，由于主斑点急剧增大，很易将相邻杂质包含于主成分斑点中。同样，质量标准中的系统适用性试验用溶液的配制方法亦如此。
薄层色谱中展开剂的选择 2007-04-05 02:03 （一）有机合成中展开剂的选择 做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。 选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚 中药饮片易混品种鉴别 【摘要】中药材加工成饮片后，一些品种易混，抓住鉴别要点，将它们区别开。 【关键词】中药饮片易混品种鉴别 药房中饮片的性状鉴别，大多是采用传统的经验鉴别，即通过看、摸、闻、尝等方法鉴别饮片，对中药饮片易混品种鉴别，运用植物分类学的理论知识，抓住饮片的某些特征，更容易鉴别区分。下面是几组易混品种的鉴别要点： （1）佩兰与泽兰 佩兰：菊科植物佩兰Eurpatorium fortunei Turcz.的干燥全草切节。茎圆柱状，叶背面有疏毛，揉之有香气。菊科植物主要特征为头状花序。 泽兰：唇形科植物地笋Lycopus lucidus Turcz.干燥全草切节。茎方形有四棱中空，叶边缘有粗锯齿，下面密生腺点。唇形科植物主要特征是茎方、四棱，花唇形。 （2）松贝与小平贝母 松贝：为百合科植物卷叶贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteate Hsiao et K. C. Hsia和甘肃贝母Fritillaria przewalskii Maxim 的干燥鳞茎。大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”。大瓣与小瓣高度相等，大瓣、小瓣形态分明。顶端钝圆或稍尖。 小平贝母：为百合科植物平贝母Fritillaria ussuriensis Maxim的幼小鳞茎。大瓣紧抱小瓣，小瓣高不及大瓣，大瓣、小瓣形态界限不分明，大瓣顶端有一棕褐色小点。顶端较平。 （3）山药、天花粉与葛根 山药：为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposite Thunb根茎的切片。切面白色、粉性，有光滑细腻感、质脆、易断，味淡、微酸、嚼之发黏。山药为单子叶植物，切面维管束散列，显细小散在的筋脉点。 天花粉：为葫芦科栝楼Trichosanthes Kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes uniflora Hao根的切片，切面类白色，可见淡黄色筋脉纹或筋脉小点。质坚，细腻、味微苦。天花粉为双子叶植物，切面具放射状排列的导管，天花粉筋脉纹（导管、纤维）淡黄色。 葛根：为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的根切片。切片灰白色至黄白色，可见淡褐色环纹及众多褐色小点与微细小孔。质坚韧、纤维性强或显粉性，味微甜。葛根为双子叶植物，切面具放射状排列的导管，葛根纤维性强，顺折易断，横折不易断。 1．半夏 【饮片来源】为天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.块茎的切片。 【饮片特征】生半夏为类圆形薄片，直径1～1.5cm。外表面类白色至淡黄色，有的可见小凹点状的棕色根痕。切面类白色，粉性，洁白细腻，或角质状。无臭，味辛辣、麻舌而刺喉。 清半夏为椭圆形、类圆形或不规则片状。切面淡灰色至灰白色，可见灰白色点状或短线状维管束迹，有的残留栓皮处下方显淡紫红色斑纹。质脆，易折断，断面略呈角质样。气微，味微涩、微有麻舌感。 姜半夏为片状、不规则颗粒状或类球形。表面棕色或棕褐色。质硬脆，断面淡黄棕色，常具角质样光泽。气微香，味淡、微有麻舌感，嚼之略粘牙。 法半夏呈类球形或破碎成不规则颗粒状。表面淡黄白色、黄色或棕黄色。质较松脆或硬脆，断面黄色或淡黄色；颗粒者质稍硬脆。气微，味淡略甘，微有麻舌感。 2．天南星 【饮片来源】为天南星科植物天南星Arisaema erubescens (Wall.) Schott、东北天南星Arisaema amurense Maxim.、异叶天南星Arisaema heterophyllum B1.块茎的切片。 【饮片特征】生天南星为扁长肾形薄片，直径1.5～6.5cm，外表面黄白色至淡棕黄色，未除尽外皮部分呈灰褐色至棕褐色，有的可见茎痕及麻点状须根痕。切面黄白色，粉性。气微辛，味麻辣。 制天南星为类圆形薄片。切面淡黄褐色，半透明角质样，光滑。质坚脆。微臭，味辛。 胆南星为方块状或圆柱状。棕黄色、灰棕色或棕黑色。质硬。气微腥，味苦。 3．浙贝母 【饮片来源】为百合科植物浙贝母Fritillaria thunbergiiMiq.鳞茎的切片。 【饮片特征】为肾形、新月形或不规则形的薄片，直径1～3cm。外表面类白色至黄白色，未除尽外皮部分呈淡棕黄色至棕黄色，有的可见根的残基。切面类白色至淡棕黄色，粉性，边缘色较浅。气微，味苦。 4．川贝母 【饮片来源】为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D. Don.、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肃贝母Fritillaria przewalskii Maxim.或梭砂贝母Fritillaria de1avayi Franch.鳞茎的切片。 【饮片特征】为类圆形、肾形、细条形或不规则形的薄片，直径0.3～2.5cm。外表面类白色至淡棕黄色，有的可见棕褐色基部和稍尖的顶端。切面类白色，粉性，有的可见中间微凹的长条形浅槽。质坚脆。气微，味微苦。 【鉴别要点】以上四种均为常用饮片，形态相似，均属单子叶植物，色白、粉性是它们共同的特征。半夏、天南星为块茎，须根在上端围绕茎生长，显麻点状须根痕，半夏为类圆形，天南星为扁长肾形，两者大小也不同。浙贝母、川贝母为鳞叶，须根生长在下部鳞茎盘上，饮片弯曲明显，均含有生物碱而味苦。浙贝母片型较大，川贝母较小，有的一端尖。 5．人参 【饮片来源】为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.根的切片。 1 薄层色谱法概述 (2) 1.1 定义 (2) 1.2 原理 (2) 1.3 特点 (2) 1.4 定量检测方法 (3) 2 TLC在药物分析方面的应用 (3) 2.1 中药材的鉴别 (3) 2.2 植物药成分的鉴别 (4) 2.3 化学药品及复方制剂 (5) 2.4 药品杂质检验 (6) 2.5 中药指纹图谱分析 (6) 2.6 在定量分析中得应用[13] (7) 2.6.1 薄层色谱定量方法 (7) 2.6.2 薄层色谱在定量分析中得应用 (8) 3 薄层色谱新技术及其应用 (8) 3.1 高效薄层色谱（HPTLC） (8) 3.2假相薄层色谱 (9) 3.3 反相薄层色谱( RPTLC) (10) 3.4 薄层扫描法[17] (11) 4 总结 (12) 薄层色谱在药物分析中的应用 薄层色谱( Thin Layer Chromatography，TLC) 在药物，尤其在植物药成分的定性和定量分析方面早已有了非常广泛的应用。随着科学技术的发展以及新材料的应用，使其得到了很大发展，出现了许多新技术，如高效薄层色谱、假相薄层色谱、反相薄层色谱、微乳薄层色谱在中药药物分析中已有一定的应用。TLC 在规范化、仪器化方面均取得了长足的进步，在大批量样品及某些特殊样品的快速分析中，显示了分析容量大、可采用特征专属的显色剂以及极低的溶剂消耗等优势。近年来TLC 广泛应用于有机化合物的分析鉴定、植物药有效部位的分离精制、有机合成、结构分析、生物测定等，尤其在研究开发植物药有效部位和中成药质量控制中，是用于定性、定量分析的最简便的科学方法。但TLC亦有其缺陷，其色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层析环境中展开剂的饱和度、环境温湿度等因素的影响，有时难于重复；显色又受均匀性、灵敏度、稳定性等影响，这均使测定结果偏差较大[1]。最近几年围绕着测定过程的标准化和自动化，薄层色谱技术有了全新的发展，扩大了TLC技术在中药药物定性定量分析中的应用。 1 薄层色谱法概述 1.1 定义 薄层色谱法（TLC）系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上, 成一均匀薄层。待点样，展开后, 根据比移值(Rf) 与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf ) 作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.2 原理 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相(溶剂) 流过固定相(吸附剂) 的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附, 从而达到各成分的互相分离的目的。 1.3 特点 薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也中药饮片易混品种鉴别
中药饮片鉴别
薄层色谱法在药物分析中的应用
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