课时41学习微生物培养的基本技术
一．书本知识梳理
实验原理
目的要求
材料用具
方法步骤
二．思维拓展
培养基配制步骤：称量，溶化，调PH，培养基分装，加棉塞，包扎。
灭菌与消毒：前者常见有高压蒸气灭菌法，火焰灼烧灭菌法等，其理化性质变化剧烈，是指杀死一定环境中所有微生物的细胞芽孢和孢子。后者理化性质变化温和，指杀死表层有害物，主要是有害病原体和微生物营养体。
高压蒸气灭菌法杀菌效力强的原因：湿热穿透力强，空气中有潜热存在，蛋白质容易凝固。关键操作原由：
培养基分装与调酸碱度要在灭菌前否则会造成培养基污染
培养基分装要趁热否则培养基变成固体不好分装
培养基高度不能超过试管的五分之一否则搁置斜面时会占到棉塞，影响透气性污染培养基培养基分装后要用普通棉塞比脱脂棉好，因为容易透气
灭菌时要用牛皮纸包住试管，可防止冷凝水润湿棉塞影响透气性污染培养基
接种操作要在火焰旁因为那里形成一个无菌区
对木屑培养基灭菌要进行第二及第三次加热是为了杀死芽孢彻底灭菌
分装平菇培养基时要用木棒钻洞，因为它是需氧型微生物，钻洞能增加底部氧气含量，促进基内菌丝生长
接种划线要注意(1)划线方向应该从里向外（2）线条要细而密（3）不要重复划线
三．跟踪训练
1
A.蛋白质与其凝固温度成反比。
B.在一定温度下，湿热灭菌比干热灭菌的效果好
C.高温能引起蛋白质发生不可逆的变性。
D.高温能改变蛋白质中氨基酸的排列顺序.
2. 下列关于平菇培养技术的叙述中,不合理的是( )
A. 棉紫壳培养基属于天然固体培养基,但是必须加入适量水.
B 分装培养基时，需要木棒钻洞，以利于菌丝生长繁殖
C 对培养基进行高压灭菌时，应使压力维持在98KPa左右加压20MIN
D 待菌丝张出后，应保持适宜的温度和较大的湿度
3搁置斜面最佳温度是（）
A.30℃
B.40℃
C.50℃
D.60℃
4．分装培养基高度应为试管高度的（）
A.1/2
B.1/3
C. 2/3
D.1/5
5高压蒸汽灭菌时的正常压力是（）
A.49 kPa
B.98. kPa
C.980 kPa
D.89kPa
6.细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌，若只是在100℃下灭菌，以下那一种生物还
会存活（）
A .大肠杆菌 B.青霉菌C枯草芽孢杆菌D沙门杆菌
7多数真菌最适PH为（）
A.5.0~6.0
B.6.0~7.0
C.4.0~5.0
D.3.5~4.5
8细菌培养实验中使用滴定法调整PH时，滴入液体是（）
A,HCL B.NaOH C.水 D.琼脂
9要从多种细菌中分离某种球形细菌，培养基要用（）
A.加入青霉素的培养基B加入高浓度食盐的培养基C固体培养基
D液体培养基
10（多选）在培养基配制中下列那些操作是正确的（）
A趁热将培养基装到洁净试管中，培养基高度是试管的1/5
B在溶化过程中的最后阶段要补加蒸馏水至100ml
C在调PH时,要随时使用PH测定PH
D试管加塞后，每10支用绳捆扎好，就可以进行灭菌
11(多选)下列关于灭菌和消毒的理解中正确的是（）
A灭菌是指杀死一定环境中所有微生物的细胞芽孢和孢子
B消毒和灭菌实质上是相同的
D常用灭菌方法有加热法、过虑法、紫外线法、化学药品法
12（多选）通过选择培养基可以从混杂微生物群体分离出所需微生物，在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10％酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体分离出
A大肠杆菌B霉菌C放线菌D固氮细菌
13、生产谷氨酸等食品添加剂离不开发酵。请就谷氨酸发酵回答下列问题
（1）谷氨酸棒状杆菌的代谢类型是
（2）若从自然界分离得到的样品中含有谷氨酸棒状杆菌、固褐固氮菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等，现欲筛选出酵母菌，则简便的方案是
（3）一定容积的培养液中进行谷氨酸发酵，C/N之值为3/1时，活菌数可保持最大；pH呈酸性时，发酵产物是乙酰谷氨酰胺，这些事实说明
（4）为测定谷氨酸棒状杆菌的生长，某同学设计了如下步骤：
配置适宜培养基，分装到5个锥形瓶中，用缓冲液分别调pH为4.0，4.5, 5.0, 5.5
6.0,分别标号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ；将每瓶培养基等量分装到3支试管中，加棉塞包扎，每捆试管外挂上相应的标签；在酒精灯上加热煮沸10MIN后冷却；无菌条件下接种等量菌种；37度恒温箱中培养24小时；测定每管中谷氨酸的产量；计量、统计并分析结果。上述步骤中有三个明显错误，请指出并改正。
a
b
c
14下面是最早发现抗生素－青霉素的佛来明的探索过程：
观察及对问题的认识：培养细菌过程中，在青霉菌周围没有其它细菌生长。为什么出现这种情况？
假设：______________________________________________________________。
进行实验：把青霉菌放在培养液中培养后，观察这些培养液对细菌生长的影响。
结果：培养液阻止了细菌的生长和繁殖。
结论：_____________________________________________________________
（1）作为该实验的假设最恰当的是（）
A青霉菌能产生有利于人类的物质B青霉菌污染了细菌生长的培养基
C青霉菌可能产生了有利于细菌繁殖的物质D青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质（2）结论是_____________________________________________________________
（3）青霉菌和细菌的关系是_____________________________________。
（4）为了证明青霉菌确实是由青霉菌产生的，而不是培养液和培养基中其它微生物产生的，应进一步设计实验，其实验方法是____________________________________。若实验结果为：，则能证明青霉菌确实能产
微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或
环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于
一、选择题(A型): !、下列细菌中哪一种细菌在血平板上一般不出现溶血环? A、金黄色葡萄球菌 B、表皮葡萄球菌 C、甲型链球菌 D、肺炎双球菌 2、进行玻片法血浆凝固酶试验不需要下列哪种材料? A、免血浆 B、生理盐水 C、2%红细胞悬液 D、待检细菌 3、UMI系统不包括下列哪一项试验? A、尿素酶 B、甲基红 C、靛基质 D、动力 4、麦康凯培养基和克氏双糖铁共有的成分是: A、葡萄糖 B、酚红 C、中性红 D、乳糖 5、对浓汁标本进行细菌学鉴定,下列哪一项试验一般不包括在内? A、涂片染色镜检 B、血平板分离培养 C、血浆凝固酶试验 D、抗"O"试验 6、乙链在血清肉汤中的生长情况是： A、完全沉淀生长 B、均匀混浊生长 C、部分沉淀生长 D、形成菌膜 7、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性： A、分解乳糖产酸产气 B、分解葡萄糖生成丙酮酸 C、生成甲醇、甲醛 D、以上全部 8、下列哪一项不符合霍乱弧菌的特点 A、有动力 B、抵抗力较强 C、耐碱不耐酸 D、在自然界广泛存在，人是唯一易感者 9、对于一个脓汁标本，首先应进行的检验步骤是： A、涂片镜检 B、接种血平板 C、含硫氨基酸 D、苯丙氨酸 10、抗"O"试验管法中，溶血素应预先用还原剂处理，原因是： A、还原被氧化的S溶血素，恢复溶血能力 B、溶血素O对热不敏感 C、溶血素S对氧敏感 D、以上全错 11、观察乙型溶血性链球菌典型形态，选择哪一种培养基可得理想结果： A、普通琼脂平板 B、普通肉汤 C、血琼脂平板 D、血清肉汤 12、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？ A、低温 B、保温 C、防干燥 D、快速 13、区别志贺氏菌和沙门氏菌可采用下列哪种试验？ A、氧化酶试验 B、乳糖发酵试验 C、葡萄糖发酵 D、动力试验 14、下列哪一项可用于区别肺炎双球菌和甲型链球菌？ A、胆汁溶菌试验和甘露醇发酵试验 B、溶血试验和胆汁溶菌试验 C、菊糖发酵试验和胆汁溶菌试验 D、溶血试验和菊糖发酵试验
微生物的培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
1、史前期（约8000 年前一1676 ) ,各国劳动人民,①未见细菌等微生物的个体；②凭实践经验利用微 生物是有益活进行酿酒、发面、制酱、娘醋、沤肥、轮作、治病等）。 在17世纪下半叶，荷兰学者吕文虎克用自制的简易显微镜亲眼观察到细菌个体之前，对于一门学科来说尚没形成。这个时期称为微生物学史前时期。在这个时期，实际上人们在生产与日常生活中积累了不少关于微生物作用的经验规律，并且应用这些规律，创造财富，减少和消灭病害。民间早已广泛应用的酿酒、制醋、发面、腌制酸菜泡菜、盐渍、蜜饯等等。古埃及人也早已掌握制作面包和配制果酒技术。 这些都是人类在食品工艺中控制和应用微生物活动规律的典型例子。积肥、沤粪、翻土压青、豆类作物与其它作物的间作轮作，是人类在农业生产实践中控制和应用微生物生命活动规律的生产技术。种痘预防天花是人类控制和应用微生物生命活动规律在预防疾病保护健康方面的宝贵实践。尽管这些还没有上升为微生物学理论，但都是控制和应用微生物生命活动规律的实践活动。 2、初创期（1676 一1861 年）,列文虎克,①自制单式显微镜,观察到细菌等微生物的个体；②出于个人 爱好对一些微生物进行形态描述。微生物的形态观察是从安东·列文虎克（Antony Van Leeuwenhock 1632-1732）发明的显微镜开始的，它是真正看见并描述微生物的第一人，他的显微镜在当时被认为是最精巧、最优良的单式显微镜，他利用能放大50～300倍的显微镜，清楚地看见了细菌和原生动物，而且还把观察结果报告给英国皇家学会，其中有详细的描述，并配有准确的插图。1695年，安东·列文虎克把自己积累的大量结果汇集在《安东·列文虎克所发现的自然界秘密》一书里。他的发现和描述首次揭示了一个崭新的生物世界——微生物世界。这在微生物学的发展史上具有划时代的意义。这是首次对微生物形态和个体的观察和记载。随后，其他研究者凭借显微镜对于其它微生物类群进行的观察和记载，充实和扩大了人类对微生物类群形态的视野。但是在其后相当长的时间内，对于微生物作用的规律仍一无所知。这个时期也称为微生物学的创始时期。 3、奠基期（1861 一1897 年）,巴斯德,①微生物学开始建立；②创立了一整套独特的微生物学基本研究方法；③开始运用“实践―理论―实践”的思想方法开展研究；④建立了许多应用性分支学科；⑤进入寻找人类动物病原菌的黄金时期。继列文虎克发现微生物世界以后的200年间，微生物学的研究基本上停留在形态描述和分门别类阶段。直到19世纪中期，以法国的巴斯德和德国的柯赫为代表的科学家才将微生物的研究从形态描述推进到生理学研究阶段，揭露了微生物是造成腐败发酵和人畜疾病的原因，并建立了分离、培养、接种和灭菌等一系列独特的微生物技术。从而奠定了微生物学的基础，同时开辟了医学和工业微生物等分支学科。巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人。(1)巴斯德 巴斯德原是化学家，曾在化学上做出过重要的贡献，后来转向微生物学研究领域，为微生物学的建立和发展做出了卓越的贡献。主要集中在下列三个方面：①彻底否定了“自然发生”学说。“自生说”是一个古老学说，认为一切生物是自然发生的。到了17世纪，虽然由于研究植物和动物的生长发育和生活循环，是“自生说”逐渐消弱，但是由于技术问题，如何证实微生物不是自然发生的仍是一个难题，这不仅是“自生说”
临床微生物学检验技术试题及答案 A1题型 1. 机体抵抗病原微生物的屏障结构包括 A、皮肤与粘膜 B、血脑屏障 C、胎盘屏障 D、免疫系统 E、A、B和C 答案E 2. 有关内毒素的描述哪项是错误的 A、均由革兰氏阴性菌产生 B、其化学成分为脂多糖 C、160℃，2~4小时才被破坏 D、毒害效应具有组织器官选择性 E、毒性作用较弱 答案D 3. 下列描述哪项是错误的 A、病原菌致病力的强弱度称为毒力 B、毒力主要由侵袭力和毒素所决定 C、破伤风毒素属于内毒素 D、侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力 E、以上均不是 答案C 4. 下列哪种成分不属于外毒素 A、脂多糖 B、痉挛毒素 C、肉毒毒素 D、表皮剥脱毒素 E、霍乱肠毒素
答案A 5. 下列哪种成分不属于外毒素 A、金黄色葡萄球菌肠毒素 B、产毒性大肠杆菌肠毒素 C、白喉毒素 D、表皮剥脱毒素 E、类脂A 答案E 6. 内毒素的毒性作用包括 A、发热反应 B、白细胞反应 C、内毒素血症与内毒素休克 D、以上都是 E、A和C 答案D 7. 慢性志贺菌感染的病程一般在（）以上 A、两周 B、一个月 C、两个月 D、六周 E、七周 答案C 8. 志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为 A、一天之内 B、1-3天 C、5-7天 D、7-8天 E、8天以后 答案B 9. 下列关于结核分支杆菌描述正确的是
A、类脂质为胞壁中含量最多的成分 B、产生外毒素 C、产生内毒素 D、耐药性低 E、一般采用革兰氏染色 答案A 10. 我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过（）个大肠杆菌 A、1 B、3 C、5 D、7 E、8 答案B 11. 大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A、产酸 B、产酸产气 C、产酸不产气 D、产气不产酸 E、以上都不产生 答案B 12. 下列何种细菌为革兰氏阴性菌 A、脑膜炎奈瑟菌 B、结核分支杆菌 C、铜绿假单细胞 D、枯草芽孢杆菌 E、白喉棒状杆菌 答案C 13. 下列何种细菌为革兰氏阳性杆菌 A、大肠杆菌 B、铜绿假单细胞
《微生物学》复习大纲 一、考试性质 微生物学研究生入学考试科目是为我校招收微生物学硕士研究生而实施的水平考试，选拔具有较全面的微生物学理论知识和分析能力的学生。其指导思想是有利于国家对高层次人才的选拔，促进微生物学课程教学质量的提高。考试对象为2006年起参加我校硕士研究生入学微生物考试的考生。 二、考试基本要求 要求学生比较系统的理解和掌握微生物学的基本概念及基本理论，掌握各种微生物的形态、结构、功能及微生物的营养、生长、代谢、遗传育种等内容，能综合运用所学知识分析问题和解决问题。因此笔试内容包括具体实验方法等。 三、考试方法和考试时间 硕士研究生入学微生物学考试为笔试，总分150，考试时间为3小时。 四、参考书 《微生物学教程》第二版周德庆编高教出版社 《微生物工程》曹军卫马辉文编科学出版社 五、试题类型 1、填空题 2、是非与说明题 3、名词解析 4、问答题及论述题 六、考试内容、考试要求 第一部分微生物形态、结构与功能 掌握：微生物的概念及研究范畴；四大类微生物的基本形态特征（个体、菌落），细菌的基本形态、共同构造、特殊构造及功能，细菌的群体形态及繁殖方式；革兰氏染色的理论及实践意义；放线菌的形态构造、繁殖方式，放线菌的群体特征；酵母菌的特点、分布及与人类的关系，酵母菌的形态构造、繁殖方式与生活史，酵母菌菌落的特点；掌握霉菌细胞的形态构造、繁殖方式及菌落特点。 熟悉：，微生物对人类的影响及人类对它的认识，微生物学史中关键人物的贡献，微生物的五大共性与科研生产的关系； 第二部分病毒与亚病毒 掌握：病毒的特性、病毒的典型形态构造，噬菌体繁殖的几个阶段，噬菌体效价的测定，烈性噬菌体、温和噬菌体的概念，一步生长曲线的意义，噬菌体溶源性的概念，掌握噬菌体对发酵工业的危害与防治 熟悉：了解AIDS的相关知识，了解昆虫病毒用于生物防治的意义，了解病毒在基因工程中的应用 第三部分微生物的培养 掌握：微生物培养基的6大要素；培养基的设计原则，选择培养基、鉴别培养基的原理与实践意义；灭菌法的种类与应用；微生物生长量的测定方法，单细胞微生物的典型生长曲线，微生物连续培养的模式与优缺点，影响微生物生长的3要素在工业生产中的应用，微生物的实验室培养法 熟悉：微生物营养类型划分的依据和结果；高密度培养的方法和应用价值；了解化学杀菌剂、消毒剂、治疗剂的种类与应用。
填空题 1.动植物的研究能以体为单位进行，而对微生物的研究一般用体 2.在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物、其中只有培养物能较好地被研究、利用和重复结果。 3.一般情况下，培养微生物的器具，在使用前必须先行，使容器中不含。 4.用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括、和。 5、微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行、的重要依据。 6、微生物保藏的目标就是要使所保藏菌株在一段时间不、不和不 7、一般说来，采用冷冻法时，保藏温度越，保藏效果越。 8、、和是影响显微镜观察效果的3个重要因索。 9.光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是，这时一般使用 x的目镜，和 x的物镜，并应在物镜镜头和玻片之间加。 10、采用明视野显微镜观察未经染色的标本(如活的细胞)时，光的和都没 有明显的变化，因此，其形态和内部结构往往难以分辨。 11.在的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体，这就是荧光显微技术的原理。 12.透射电子显微镜用电子作为，因此其分辨率较光学显微镜有很大提高，但镜筒必须是环境，形成的影像也只能通过或进行观察、记录。 13.在显微镜下不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其基本形态可分为、与 3种。 14.霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝交织在一起，称为。在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为；另一部分则向空中生长，称为。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成。 15. 是一类缺少真正细胞壁，细胞通常无色，具有运动能力，并进行吞噬营养的单细胞真核生物。它们个体微小，大多数都需要显微镜才能看见。 选择题（4个答案选1) 1.培养微生物的常用器具中，（）是专为培养微生物设计的。 (1)平皿(2)试管(3)烧瓶(4)烧杯 2.( )可用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。 (1)选择平板(2)富集培养(3)稀释涂布(4)单细胞显微分离 3.下面哪一项不属于稀释倒平板法的缺点?( ) (1)菌落有时分布不够均匀 (2)热敏感菌易被烫死 (3)严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响 (4)环境温度低时不易操作 4.下面哪一种方法一般不被用作传代保藏?( ） (1)琼脂斜面(2)半固体琼脂柱(3)培养平板(4)摇瓶发酵 5.冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于( )的环境，代谢水平大大降低。 (1)干燥、缺氧、寡营养(2)低温、干燥、缺氧 (3)低温、缺氧、寡营养(4)低温、干燥、寡营养 6.对光学显微镜观察效果影响最大的是( )。
大学生选修课应用微生物学论文 当人类在发现和研究微生物之前，把一切生物分成截然不同的两大界－动物界和植物界。随着人们对微生物认识的逐步深化，从两界系统经历过三界系统、四界系统、五界系统甚至六界系统，直到70年代后期，美国人Woese等发现了地球上的第三生命形式－古菌，才导致了生命三域学说的诞生。该学说认为生命是由古菌域（Archaea）、细菌域（Bacteria）和真核生物域（Eucarya）所构成。在图示“生物的系统进化树”中，左侧的黄色分枝是细菌域；中间的褐色和紫色分枝是古菌域；右侧的绿色分枝是真核生物域。 生物界的微生物达几万种，大多数对人类有益，只有一少部份能致病。有些微生物通常不致病，在特定环境下能引起感染称条件致病菌。能引起食品变质，腐败，正因为它们分解自然界的物体，才能完成大自然的物质循环。 微生物技术作为生命科学和生物技术的主要分支之一，是它们发展的先导和基础，特别是在解决人类所面临的人口健康、资源紧缺、粮食危机等方面，其具有不可替代的重要作用。下面本文将在微生物在污水处理和制氢两个方面论述微生物在环保和能源方面的巨大作用。 古菌域包括嗜泉古菌界（Crenarchaeota）、广域古菌界（Euryarchaeota）和初生古菌界（Korarchaeota）；细菌域包括细菌、放线菌、蓝细菌和各种除古菌以外的其它原核生物；真核生物域包括真菌、原生生物、动物和植物。除动物和植物以外，其它绝大多数生物都属微生物范畴。由此可见，微生物在生物界级分类中占有特殊重要的地位。 在当今社会中，随着全球工业和经济的迅速发展，人们对能源的需求正在逐渐增大，但目前人类使用的绝大部分是不可再生的矿物质能源，其数量是十分有限的，从而造成了能源的短缺。与此同时，在人类发展的过程中，由于不注重对环境的保护而一味的发展，对地球造成了大量的污染，这些污染已严重影响了人类社会的发展，甚至关系到人类的生死存亡。因此有科学家预测说能源和环保将是人类社会在今后发展的两大主题。 生命进化一直是人们关注的热点。Brown等依据平行同源基因构建的“Cenancestor”生命进化树，认为生命的共同祖先Cenancestor是一个原生物。原生物在进化过程中产生两个分支，一个是原核生物（细菌和古菌），一个是原真核生物，在之后的进化过程中细菌和古菌首先向不同的方向进化，然后原真核
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
思考题 名词解释 应用微生物学、 微生物：微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。（但有些微生物是可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）、 细菌：广义的细菌即为原核生物是指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作拟核区（nuclear region)(或拟核)的裸露DNA的原始单细胞生物，包括真细菌（eubacteria）和古生菌（archaea）两大类群。人们通常所说的即为狭义的细菌，狭义的细菌为原核微生物的一类，是一类形状细短，结构简单，多以二分裂方式进行繁殖的原核生物，是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。 放线菌：放线菌（Actinomycete）是原核生物的一个类群。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。、 酵母菌：子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称。可用于酿造生产，有的为致病菌。是遗传工程和细胞周期研究的模式生物。 霉菌：是丝状真菌的俗称，意即"发霉的真菌"，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。 微生物培养基：通常只人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。广义上说，凡是支持微生物生长繁殖的介质或材料均可以作为微生物的培养基。培养基种类繁多。 微生物农药：直接利用细菌、真菌和病毒等产生的天然活性物质或生物活体本身开发的，对植物病虫草害进行防治的农药。 群体生长：一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，不断吸收营养物质并进行新陈代谢。如果同化作用速度超过了异化作用，则其原生质总量不断增加，于是出现个体生长现象。如果这是平衡生长，即各个细胞组分是按恰当比例增长时，到达一定程度就会发生繁殖，从而引起个体数目增加，这时原有的个体已经发展为一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长。在微生物的研究和应用中，只有群体生长才有实际意义。 分批培养：一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，不断吸收营养物质并进行新陈代谢。如果同化作用速度超过了异化作用，则其原生质总量不断增加，于是出现个体生长现象。如果这是平衡生长，即各个细胞组分是按恰当比例增长时，到达一定程度就会发生繁殖，从而引起个体数目增加，这时原有的个体已经发展为一个群体。随着群体中各个个体的进一步生
临床微生物学检验技术考试题库及答案 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～ 10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
目录 实验二土壤中微生物分离纯化培养 实验三菌种保藏 实验四细菌形态观察及单染色 实验五放线菌及霉菌形态观察 实验六革兰氏染色及芽孢染色 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 实验八微生物直接计数法及测微技术 实验九大肠杆菌生长曲线的测定 实验十水中细菌总数的测定 实验十一细菌细胞的生化反应实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 生长繁殖之用。
三、试剂与器材 微孔滤膜过滤器、镊子等。 四、实验内容 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材
应用微生物学习题解答 第一章 1. 解释名词： (a) spontaneous generation: 自然发生说。此概念乃系『生物生自无生物』，相似 词为abiogenesis（偶然发生说）。 (b) biogenesis: 生源论。此概念乃系『生物生自生物』。 (c) generation time: 世代时间。菌细胞分裂增殖一倍细胞数所需时间。相似词 为mass doubling time（倍增时间）、doubling time（倍加时间）。 (d) agar: 洋菜胶或琼脂。系为萃取自红藻类海草之复合多糖，主要由agarose （琼脂糖）及agaropectin（琼脂胶）这两种多糖所组成。 2. 科霍假说。 3. 有害人体之细菌：(a) Vibrio parahemolyticus (肠炎弧菌)，引起胃肠炎之致病原； (b)Legionella pneumophila（嗜肺退伍军人协会杆菌），引起退伍军人症之致病原。 有害人体之真菌：(a) Aspergillus flavus（黄曲菌），黄曲毒素（aflatoxin）生产菌；(b) Candida albicans（白色念珠菌），引起念珠菌病（candidiasis）之致病原。 4. 有益人体之细菌：(a) Lactobacillus bulgaricus (保加利亚乳酸杆菌)，可用来制作酸奶；(b)Bacillus natto（纳豆菌），可用来制作纳豆。 有益人体之真菌：(a) Saccharomyces cerevisiae（啤酒酿母菌），可用来酿制啤酒；(b) Aspergillus oryzae（米曲菌），可用来生产曲酸、酱油、味噌等。 5. 微生物六大优点如下：体积小表面积大、培养简单、繁殖迅速、于温和条件下进行、菌株育种容易、种类多。 6. 显微镜（microscopes）主要分为光学显微镜（light microscopes）及电子显微镜（electron microscopes）。显微镜法（microscopy）则有明视野显微镜法（bright field microscopy）、暗视野显微镜法（dark-field microscopy）、荧光显微镜法（fluorescence microscopy）、位相差显微镜法（phase-contrast microscopy）、电子显微镜法（electron microscopy）。
临床微生物学检验 确保高压效果的可靠性。 【适用范围】 蒸气式高压锅。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。 2．打开排气阀。 3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。 4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。 5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。 6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在 0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分 钟，否则营养物质破坏。 7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。 8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。 操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
确保培养箱温度恒定。 【适用范围】 各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。 2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。 3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。 4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。 5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。 6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。 7．培养箱内外应保持清洁。 操作人员部门主管质量负责人 姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
《工业微生物学》课程（090207）教学大纲 一、课程基本信息 课程中文名称:工业微生物学 课程代码：09207 学分与学时：4.0学分，72学时；（理论课3学分，54学时；实验课0.5学分，18学时） 课程性质：专业必修 授课对象：生物技术（专科） 二、课程教学目标与任务 通过教学，使学生掌握工业微生物学的完整基本知识，包括工业微生物的形态构造、生理代谢、遗传变异、生态分布等；了解和掌握微生物菌种分离和培养、染色和观察、菌种选育、菌种保藏以及有害微生物控制等基本微生物实验技术原理和方法；向学生展示工业微生物在现在发酵工业、食品工业、制药工业和环境工程等方面的应用现状和研究进展，使所学基本理论更好结合生产实践。在教学中要把精力集中在培养学生分析问题，解决问题的能力上。 三、学时安排 四、课程教学内容与基本要求 教学要求和教学方法： 1. 突出四性：基础性、系统性、先进性、应用性 2.多种教学方式：采用多媒体课件将授课内容、图表、照片、结论式条文展示出来，把原本活生生的微生物还原其本来面貌，触发学习者的形象思维，加深对基本理论的认识和掌握；每章节重点、难点的提示、章后小结，少而精，使学习者能触类旁通，举一反三、思维活跃、知识丰收； 3.理论与实验、理论与实践紧密结合 教学内容 目的和要求：本章主要引导学生了解什么是微生物，工业微生物学的建立和发展历史，对人类生产实践活动以及其他学科的影响，明确微生物学作为一门独立学科在生命科学发展中的重要作用和地位，了解微生物的分类、鉴定和命名，激发学生对微生物学的浓厚兴趣，启迪学生，勤于思考，勇于实践，为科学发展做出奉献。 重点与难点：要求掌握微生物学科发展历史中几位重要的奠基人物对微生物学的主要贡献；微生物的几大共性特征。
临床微生物学检验技术试题及答案 1.在对病人进行诊断时，常采用血清学方法，Ag-Ab反应有许多特点，但Ag-Ab反应主要特点是 A、分阶段性 B、可逆性 C、敏感性高 D、特异性 E、非特异性 答案：D 2.革兰氏染色是重要的细菌鉴别染色之一其媒染剂（卢戈氏碘液）所起的作用 A、增加摄取染料作用，不易脱色 B、固定初染细菌 C、对下一步脱色起促进作用 D、杀死细菌 E、破坏细菌细胞壁 答案：A 3.血清制品的保存常加一些防腐剂，防止杂菌生长，常用的是硫柳汞常用浓度为 A、0.001% B、0.01% C、0.1% D、1% E、10% 答案：B 4.能在SS琼脂上生长出的大肠埃希氏菌呈现______色 A、浅红 B、深红 C、微黄 D、无 E、深灰
答案：B 5.在用血清学方法诊断或进行流行病学调查时，常采用Ag与Ab反应，进行此反应必须有电解质参与，电解质量与反应有关，当电解质超出最佳浓度时 A、提高反应敏感性 B、降低敏感性 C、不反应 D、反应不变 E、提高特异性 答案：A 6. 肺炎链球菌在临床上主要引起下列何种疾病 A、脓胸 B、大叶性肺炎 C、肺纤维化 D、肺结节 E、支气管炎 答案：B 7. 颗粒型细菌抗原（死或活菌）在哪种反应中采用 A、沉淀反应 B、琼脂扩散 C、中和试验 D、凝集试验 E、对流电泳 答案：D 8.抗酸染色的结果判定 A、菌体着兰色为抗酸菌 B、菌体着红色为抗酸菌 C、菌体着绿色为抗酸菌 D、菌体着黄色为抗酸 E、菌体无色为抗酸菌 答案：B
9. 下列何种培养基适合军团菌培养 A、庆大霉素培养基 B、BCYE琼脂培养基 C、巧克力平板 D、PPLO培养基 E、Korthof培养基 答案：B 10. 冻干菌种待完全干燥后，需将安瓶中空气抽成真空，当用真空火花检测器检测时，火花是什么颜色证明为真空 A、红色 B、黄色 C、白色 D、紫色 E、兰绿色 答案：D 11.戊烷脒选择性培养基，胆汁湟绿培养基适用于什么细菌培养 A、霍乱弧菌 B、白喉杆菌 C、破伤风杆菌 D、布鲁氏菌 E、炭疽杆菌 答案：E 12.活性炭酵母琼脂培养基CYE是适用于培养什么细菌 A、分离鼠疫杆菌 B、布鲁氏菌培养 C、白喉杆菌培养 D、肠道细菌培养 E、军团菌的培养 答案：E 13.牛肉膏汤是常用的培养基，但它有一个特点是什么
普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[ 人教版] 课题 1 微生物的实验室培养 ★课题目标 （一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象 （三）情感、态度与价值观 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★ 课题重点无菌技术的操作 ★ 课题难点无菌技术的操作 ★ 教学方法启发式教学 ★ 教学工具多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。 （二）进行新课 1．基础知识 1．1 培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。 〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。【补充】培养基的类型及其应用： 1．2 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。 〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S 是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。 【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1．3 培养基除满足微生物生长的pH 、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。 〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH 调节为酸性，培养细菌时需要将pH 调节为中性或微碱性。 活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： 1．4 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。 1．5 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 1．6 比较消毒和灭菌（填表） 思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者 1．7 消毒方法： 1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法； （3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行 物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒； （5）饮水水源用氯气进行消毒。 1．8 灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱； （3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。 （4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
天津科技大学生物工程学院 制药工程专业 2005~2006学年第二学期工业微生物学试卷（A）答案 一、名词解释（每题2分，共20分） 1. 芽孢：某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的折光性很强的抗逆性休眠体，称为芽孢。 2. 烈性噬菌体：感染宿主细胞后，能引起宿主迅速裂解的噬菌体。（或：在短时间内能连续完成吸附、侵入、增殖、成熟（装配） 和裂解5个阶段而实现其繁殖的噬菌体。） 3. 化能异养型：能源和碳源都来自有机物的营养类型。 4. 巴氏消毒法：专用于牛奶、啤酒、酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法，此法可杀灭物料中无芽孢病原菌，又不影响其风味。具体方法可分为：低温维持法（63℃，30分）和高温瞬时法（72℃，15秒）。 5. 呼吸：又称好氧呼吸，是一种最普遍的生物氧化方式。即指底物按常规方式脱氢后，脱下的氢经完整的呼吸链（又称电子传递链）传递，最终被外源分子氧接受，产生水并释放出ATP形式的能量，是一种高效产能方式。 6. 营养缺陷型：某一野生型菌株因发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子、碱基或氨基酸的能力，因而无法在基本培养基上正常生长繁殖的变异类型，称为营养缺陷性。 7. Hfr菌株：即高频重组菌株。在该菌株细胞中，F因子整合在核染色体组的特定位点，Hfr菌株与F–菌株接合后，发生基因重组的频率要比F+与F–接合后的频率高出数百倍。 8. 点突变：又称基因突变，是指一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何改变，仅涉及一对或少数几对碱基的置换、缺失或插入，因其发生的范围很小，所以又称点突变。 9. 质粒：指一种独立于染色体之外的、能进行自主复制的双链闭合环状的DNA分子。也有极少的质粒是线性的DNA分子。 10. 半抗原：只具有反应原性而缺乏免疫原性的抗原。