gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因
检测方法
根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。
组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus 基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。
CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。主要用于提取生物DNA
步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状；
（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；
（4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二；
（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min 后取出；
（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀；
（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中；
（8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；
（9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；
（10）60 sec后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M
的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；
（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解；
（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min；
（13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；
（14）加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解；
以上为通用CTAB法,实验时可根据不同材料加以改进,以获得最佳实验结果.
TE Buffer
配制：
10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)
1 mmol/L EDTA(pH 8.0)
因为含有以上两种物质，所以称为TE。
作用：TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存.
MD板上生长速度明显快于MM板的克隆为His+Muts, 而MD板上生长速度与MM 板上生长速度相当的克隆为His+Mut+甲醇利用正常型
His+Mut+和His+Muts的菌的生长状态不同的根本原因。如果没有记错的话只是对甲醇的利用能力不同，所以，在MD板子上，由于加入的是葡萄糖，所有的菌生长状态应该是一样，为什么你有三个菌长的慢可能是你再转接的时候点上去的菌量少。对于MM板，由于加入甲醇作为碳源，PDA 所以利用能力强的菌
His+Mut+会先长出来，理论上就是和在MD板子上涨的速度一致，实际上MM上的菌总体都会比MD上的长的慢。而His+Muts型的菌长得非常慢，有时候甚至几乎在MM板上好像就没长。所以，你要好好观察MM板上的菌，长得比较大的应该就是His+Mut+。
处方药
所谓处方药是指需经过医生处方才能从药房或药店得到并要在医生监控或指导下使用的药物。国际上通常用Prescription Drug.表示，简称R（即医生处方左上角常见到的R）。
处方药一般包括：刚上市的新药：对其活性、副作用还要进一步观察；可产生依赖性的某些药物：如吗啡类镇痛药及某些催眠安定药物等；药物本身毒性较大：如抗癌药物等；某些疾病必须由医生和实验室进行确诊，使用药物需医生处方，并在医生指导下使用，如心血管疾病药物等。
非处方药
与处方药相对，非处方药是指那些消费者不需要持有医生处方就可直接从药房或药店购买的药物。国际常用的术语有：Nonprescription Drug, Over the Counter Drug，简称为OTC Drug，现已经成为国际上非处方药简称的习惯用语。这些药
物大都属于如下情况：感冒、发烧、咳嗽；消化系统疾病；头痛；关节疾病；鼻炎等过敏症；营养补剂，如维生素、某些中药补剂等。
如何区别处方药和非处方药
品牌、标识物、标签及含有OTC指导的用语
在国际上，非处方药在品牌和标识物上有着自己独特的象征，如品牌应尽力统一，同时重视不断创新的提高知名度，以便在连锁店销售，同时也以品牌作为保护自己产品的措施。标识物应能明显区分该药是作为处方药还是非处方药使用，如美国的处方药均要注明"联邦法规定无医生处方禁止调配"(Federal Law Prohibits Dispensing Without Prescription)，而非处方药标签上应有"适应的用药指导"(Adequate Direction foruse)，英国、德国、日本等国也有类似的字样或标识。检签应以正常人能理解的文字表述，甚至加以图解，以便消费者凭标签便能正确使用非处方药。美国食品与药品监督管理局提出非处方药标签的7项内容有：(1)产品名称；(2)生产商、包装商或分发商的名称、地址；(3)包装内容物；(4)所有有效成份的INN(国际非专利药物通用名)名称；(5)某些其它组分如乙醇、生物碱等的含量；(6)保护消费者的注意事项及忠告性内容；(7)安全、正确使用该药品适当的用药指导。因此，人们在识别非处方药时一般可从其品牌、标识物、标签及含有OTC指导的用语中得以辩认。
沙保氏培养基Sabouraud's smedium 含4%葡萄糖 1.0%蛋白胨 pH4.0～6.0，用于真菌培养。大多数真菌营养要求不高，在沙保氏培养基，22～28℃生长良好。大多于1～2周出现典型菌落。
A.巧克力培养基：脑膜炎球菌
B.伊红一美蓝培养基：鉴别大肠杆菌
C.亚碲酸钾培养基：白喉杆菌
D.沙保培养基：真菌
E.疱肉培养基：厌氧细菌
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
按物理性状划分：固体培养基
按培养基成分划分：半合成培养基
配方
马铃薯 200克葡萄糖 20克
琼脂 15~20克自来水 1000毫升
自然PH
配制步骤
其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管，加塞、包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
其他事项
1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH
试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL 溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性
干燥培养基的制造方法
申请号/专利号： 93104723
本发明涉及用于培养真菌类微生物的马铃薯葡萄糖琼脂干燥培养基的制造方法。马铃薯经匀浆、浸提、液化、糖化、胰酶消化、煮沸过滤、浓缩及喷雾干燥等生产工艺得到马铃薯营养提取粉，配以适量的葡萄糖和琼脂粉，就可制成ＰＤＡ干燥培养基。本发明从马铃薯中提取的营养物质数量是常规方法的５－７倍。本发明生产的ＰＤＡ干燥培养基具有使用方便、营养丰富、更宜于微生物生长发育、节省原料、便于贮运、适合工业化生产等优点
划线法获得单菌落菌落接种
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，手持机 通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
方式
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)
是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。
编辑本段步骤
用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到纯化分离微生物的一种方法。是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。用于目的微生物的分离。
编辑本段特点
快捷、方便、便于得到目的性状的单克隆。
编辑本段示例
对大肠杆菌的分离
实验器材
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液
牛肉膏蛋白胨培养基
无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。
4．划线操作
(1) 挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。
(2) 划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯(这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定)。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。
(3) 划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区(菌源区)将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。
5．恒温培养：将划线平板倒置，于37℃（或28℃）培养，24hr后观察。
基因组DNA提取方法
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB 方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等
试验步骤：
1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。
4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,
5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相
6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。
2500rpm,离心10min。弃上清。
8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。
外周血DNA提取技术
分离外周血白细胞提取方法：
试验步骤：
1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80?C冻存。
试验要求：
血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：
试验试剂：
Ligsisbuffer：
133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5 mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。
ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。
提取缓冲液（Extractionbuffer）：
10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDT A(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌
试验步骤：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。
3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。
4、加入8μl的蛋白酶K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。
5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。
6、取上清，每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。
7、取上清，每管加入500μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。
8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h以上。
9、以12000rpm，离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，离心5min，去上清，50－60℃干燥。
10、加入50μl灭菌去离子水，转弹，混匀。
NaI提取法提取外周血白细胞基因组：
实验步骤：
1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中，12000rpm离心12min。
2、弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。
3、混匀后加6MNaI溶液200ul，摇匀20s。
4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。
5、取上层液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴eppendorf管壁。
6、弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），以15000rpm离心12min。
7、弃乙醇，敞开eppendorf管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。
常用的外周血白细胞基因提取方法：
试验原理：
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两
相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。
试验步骤：
1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。
2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。
3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管
5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿：异戊醇（24：1），手持终端 上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复一次。
4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5ml离心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm离心5min。洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。
真核细胞DNA的制备
一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。
根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则：
1、防止和抑制DNase对DNA的降解。
2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。
试剂准备：
1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0)。
2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl。
3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4、20%SDS
5、2mg/ml蛋白酶K
6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、无水乙醇、75%乙醇
试验步骤：
材料处理：
1、新鲜或冰冻组织处理：
1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎，加TE0.5ml，转移到匀浆器中匀浆。
2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中。
3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混匀。
4)60°C水浴1-3hr。
2、培养细胞处理：
1)将培养细胞悬浮后，用TBS洗涤一次。
2)离心4000g×5min，去除上清液。
3)加10倍体积的裂解缓冲液。
4)50-55°C水浴1-2hr。
DNA提取：
1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min。
2、离心5000g×10min，取上层水相到另一1.5ml离心管中。
3、加等体积饱和酚，混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。
4、加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。
5、加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。
6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。
7、待絮状物出现后，离心5000g×5min，弃上清液。
8、沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g×3min，弃上清液。
9、室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。
植物组织中DNA的提取
试验原理：
脱氧核糖核酸（deoxribonucleicacid，DNA）是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中，盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液中，而RNA则能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中，利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中，细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中，使DNA因被降解而影响得率，在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离，再加入阴离子去垢剂0.15％的SDS，经过2h搅拌，或用氯仿－异醇除去蛋白，通过离心使蛋白质沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95％的预冷乙醇即可把DNA 从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。
植物DNA的SDS提取法：
试验试剂：
1、研磨缓冲液：称取59.63gNaCl，13.25g柠檬酸三钠，37.2gEDTA－Na分别溶解后合并为一，用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0，并定容至1000ml。
2、10×SSC溶液：称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠，分别溶解，一起定容至1000ml。
3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍。
4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍。
5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液，用1mol/LHCl，pH至5.0，使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）。
6、氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。
7、5mol/L高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O70.23g，先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。
8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止，然后在70～80℃的水浴中溶解，趁热过滤，冷却之后即将滤液放入冰箱，待结晶出现再置室温下凉干待用。
9、1mol／LHCl。
10、0.2mol/LNaOH。
11、二苯胺乙醛试剂：1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，添加1.5ml浓硫酸，装入棕色瓶，贮存暗处，使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。
12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）。
13、0.05mol/LNaOH。
14、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中，再用
0.05mol/LNaOH定容至25ml，后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加5.0ml1mol/LHClO4，混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度，则得100μg/ml 的标准溶液。
实验步骤：
1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中，加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g 左右的SDS，置冰浴上研磨成糊状。
2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，加上塞子，剧烈振荡30s，转入离心管，静置片刻以脱除组织蛋白质。以4000rpm 离心5min。
3、离心形成三层，小心地吸取上层清液至刻度试管中，弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿。
4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min），以灭活组织的DNA酶，然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温，加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）〕，使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L。
5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中，振荡1min，静置后在室温下离心（4000rpm）5min，取上清液置小烧杯中。
6、用滴管吸95％的预冷乙醇，慢慢地加入烧杯中上清液的表面上，直至乙醇的体积为上清液的两倍，用玻璃棒轻轻搅动。此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。
7、然后加入0.5ml左右的10×SSC，使最终浓度为1×SSC。
8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。
9、加入已处理的Rnase溶液，使其最后的作用浓度为50～70μg/ml，并在37℃水浴中保温30min，以除去RNA。
10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，在三角瓶中振荡1min，再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白，室温下以4000rpm离心5min，收集上层水溶液。
11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。
植物DNA的CTAB提取法：
试验步骤：
1、称取新鲜叶片2-3g，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。
2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30min。
3、取出离心管,冷却至室温，加入氯仿/异戊醇(24:1)，充分混匀，室温下2300转离心20min。
4、将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀，2300rpm离心20min。
5、转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000rpm离心10min，使DNA沉淀于管底。
6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。
7、待DNA完全溶解后，加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀，挑出DNA，置于15ml离心管中，用70%乙醇清洗30min。
8、离心机甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。
9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。
细菌DNA的提取方法
针对一些不易于提取的细菌的方法:
试验试剂：
抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)
25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl
10MLiCl
2MLiCl
DEPC-water（抑制RNA酶活性）
3MNaAc(pH5.2)
96%乙醇
70%乙醇
试验步骤：
1、抽提缓冲液65℃预热。
2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。
3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12,000rpm，离心10min。
4、取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12,000rpm，离心10min。
5、重复再作一次步骤4。
6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。
7、以2,000rpm，离心10min。
8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
较为常用的细菌DNA提取方法：
实验步骤：
1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul10%SDS 和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.
4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇
真菌DNA提取总结的两种方法：
第一种方法：
试验步骤：
1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。
3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。
4、以4℃，1000rpm，离心5min。
5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10,000rpm，离心5min。
6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。
7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。
8、加入1ul RNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。
9、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。
10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀
30min以上。
11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ul TE中，-20℃保存备用。
DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。
第二种方法：
试验步骤：
1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。
3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。
4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）。
5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。
6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。
7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。
8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。
9、取上清，1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。
10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。
植物基因组提取(CATB法)
一、实验目的
掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、实验原理
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。
三、实验材料
水稻幼叶
四、主要配方
2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl
20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml 氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。
五、实验步骤
1. DNA的提取
（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
（2）取少量叶片（约1g）置于研钵中，用液氮磨至粉状；
（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；
（4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌中，磨碎液的高度约占管的三分之二；（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，40 min后取出；（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min，使两者混合均匀；
（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 μl的异丙醇加入另一新的灭菌中；
（8）10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA 絮状物；
（9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；（10）60 sec后，直立离心管，加入720 μl
的75%乙醇及80 μl 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；
（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解；
（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 μl 75%的乙醇，将DNA 再洗30 min；
（13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；
（14）加入50 μl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解；
（15）置于-20℃保存、备用。
2. DNA质量检测
琼脂糖电泳检测，原理和方法见实验二。
六、注意事项
（1）叶片磨得越细越好。
（2）移液器的使用。
（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA 抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。
.乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释
至1000ml，即得。
2.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。
3.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L 三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。
4.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠
5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。
5.乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。
6.巴比妥缓冲液(pH
7.4)取巴比妥钠 4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。
7.巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。
8.巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠 5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。
9.甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因 检测方法 根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。 组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus 基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。 CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。主要用于提取生物DNA 步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。 （2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状； （3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动； （4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二； （5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min 后取出； （6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀； （7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； （8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物； （9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；
培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测
3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
PDA培养基的配制及试管斜面制作 1.实验材料 1.1试剂材料 土豆，葡萄糖，琼脂，试管，试管架，天平，注射用硫酸链霉素，注射用青霉素钠，三角瓶，灭菌锅，电磁炉，超净工作台，烧杯，1mL移液器，培养皿 1.2PDA培养基配方 土豆（去皮）200g 葡萄糖20g 琼脂15-20g 蒸馏水1000mL pH 自然 2.实验方法与步骤 2.1称量和熬煮 将土豆去皮，按自己所需的量（例如配制1L）称取土豆，将土豆切成小块放入锅内，加入适量的蒸馏水，在电磁炉上加热至沸腾，30min后用4层纱布在大量杯上过滤，弃掉滤渣，滤液用蒸馏水补足1L。 2.2溶解 用天平称取20g葡萄糖加入滤液中，用玻璃棒搅拌，使其完全溶解。 2.3分装 称取8-10g琼脂，加入所用三角瓶中，然后将滤液分装到三角瓶中，每瓶500mL，用玻璃棒将琼脂搅匀。 2.4加棉塞 培养基分装完毕后，在三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。 2.5包扎 加塞后，在棉塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。 2.6灭菌 将配制完成的培养基，包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌（见灭菌锅使用方法）。 3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同2.1，2.1步骤 3.2加热溶解 量取500mL滤液到1000mL的烧杯中，再加入8-10g的琼脂，用玻璃棒搅匀，放入微波炉缓慢加热溶解，加热其间注意不要让培养基溢出烧杯，不时用玻璃棒搅拌。 3.3分装 等琼脂溶解后，将培养基分装到事先准备好的试管中。分装量约占试管高度的1/4，管口尽量不要沾染培养基。 3.4加塞 培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞或橡胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。 3.5包扎 加塞后，试管7-9支捆用橡皮筋捆好，在塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。 3.6灭菌 将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。 3.7摆斜面 灭菌完成后，将试管拿出，在超净工作台下摆成斜面，根据自己需要选择合适的倾斜度。
PDA培养基的配制方法 一、目的要求 1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2．学习并掌握棉塞的制作方法。 二、培养基的配制原理 培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训 和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不 同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。 三、实训材料和用具 琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布， 四、操作方法与步骤 (一) 培养基的配制 PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。 (1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小 块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁 热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放 在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再 补充水分至所需量。 (3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用 三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超 过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试 管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防 止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 (二) 棉塞的制作 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基
https://www.doczj.com/doc/028891990.html,/experiment/plant2/159568.shtml 11. Glucose Asparagine （葡萄糖、天门冬素琼脂） Glucose （葡萄糖）10g Asparagine （天门冬素）0.5g K2HPO4 0.5g Water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌） 12. Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂） KNO3 1g Soluble starch（可溶性淀粉）20g K2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 0.01g Agar （琼脂）20g water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌）、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌 13. Wort Agar （麦芽汁琼脂） Dilute the world (without hop) to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating, then distribute the medium into tubes. Autoclave at 110 for 30 minutes. (将发酵啤酒的原料（未加酒花），稀释至12柏林，加琼脂15克，溶化后分装。15磅灭菌30分钟。) 适用范围：克鲁斯假丝酵母、郎比可假丝酵母、解脂假丝酵母、马其顿假丝酵母、拟热带假丝酵母、粗壮假丝酵母、皱褶假丝酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、阿舒假囊酵母、白地霉、果香地霉、地霉属、异常汉逊酵母、异常汉逊酵母变种、阿拉伯糖醇汉逊酵母、施氏汉逊酵母、菅囊酵母、伯顿毕赤酵母、膜醭毕赤酵母、粘红酵母、小红酵母、胶红酵母、深红酵母、卡尔斯伯酵母、酿酒酵母、椰园酿酒酵母、发酵性酵母、洛格酵母、罗斯酵母、鲁氏酵母多形鲁氏酵母、威尔酵母、酵母、路德类酵母、栗酒裂殖酵母、掷抱酵母、贝雷丝孢酵母、皮状丝孢酵母、糙孢曲霉、无壳曲霉、鲜橙曲霉、红曲霉、紫红曲霉、红色红曲霉、红曲霉菌 14. Potato Dextrose Agar PDA (马铃薯、葡萄糖琼脂) Potato extract (马铃薯汁) 1000ml Dextrose(glucose) (葡萄糖) 20g Agar (琼脂) 20g [Note]: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water, immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. (approximately 30min.). Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃for 20 minutes.（注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000
PDA培养基的配方及配制方法 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配方 土豆 200g 葡萄糖 20g 琼脂 15～20g 水 1000mL pH值自然 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。 MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO417 mg／L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／L+FeC13·6H2O
PDA培养基的配制方法和注意事项 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 PDA培养基配制注意事项
1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基) 马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g 琼脂 20g 水 1000mL pH值 自然 PDA培养基配制注意事项 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。 15:49:27 太珥日2016-4-26 15:49:27 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即 Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
PDA培养基配置方法 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potato Dextrose Agar ,PDA)，为固体培养基，是半合成培养基。 配方 马铃薯，葡萄糖，琼脂，蒸馏水 配制方法 马铃薯 200克，葡萄糖 20克，琼脂 15~20克蒸馏水 1000毫升 配制步骤 先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂(煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即 煮马铃薯块煮马铃薯块可)，用八层纱布过滤，加热，再据实际实验需要加15-20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15~20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。(3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量:固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4)加棉塞（或用封口膜） 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养 [摘要]在无菌条件下，用紫外线对酵母菌(yeast)进行不同时长的照射诱变处理，选出合适的诱变菌种进行振荡培养。经振荡培养后的诱变菌种运用正交试验设计的方法采用四个因素三个水平选出最适的菌种培养基，进行进一步的发酵培养。在发酵罐中加入最适培养基成分和合适的酵母菌诱变菌种进行发酵扩培，最终获得大量的菌种和发酵产物。 [关键词]酵母菌，紫外线，最适培养基，正交试验设计，发酵培养 面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种单细胞微生物，是酵母菌的一种,它含蛋白质50％左右，氨基酸含量高，富含B族维生素，还有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质。几千年前人类就用面包酵母发酵面包和酒类，在现代食品工业方面，广泛用作人类主食面包、馒头、包子、饼干糕点等食品的优良发酵剂和营养剂。 本实验选用的物理诱变因子为紫外线，DNA能强烈吸收紫外线，尤其是碱基中的胸腺嘧啶，从而在形成二聚体，改变DNA结构，引起基因突变。本实验的面包酵母菌经不同时长的紫外线诱变处理，培养出的适合的诱变菌种进行最适的菌种培养基的筛选和发酵培养。 最适菌种培养基的筛选是通过正交实验设计进行的。正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法,是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。正交表是一整套规则的设计表格，用L为正交表的代号，n为试验的次数，t为水平数，c为列数，也就是可能安排最多的因素个数，本实验采用了四因素三水平进行最适培养基的筛选。 选出合适的诱变菌种和适合诱变的酵母菌生长的培养基后，便可以能过发酵罐进行发酵培养，分时段观察记录发酵过程中的PH，溶氧，菌种数。绘制出面包酵母的生长曲线 １材料与方法 1.1实验材料 菌种： 面包酵母菌 仪器： 高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，光学显微镜，恒温培养摇床，分析天平，小型发酵罐 用品： 枪头及1mL和0.5mL移液器，三角瓶，试管，玻璃涂棒，平皿，血球计数板，酒精灯，棉
一、孟加拉红培养基（虎红培养基） 配方： 蛋白胨5g 葡萄糖10g 磷酸二氢钾1g 硫酸镁（MgSO4?7H2O）0.5g 琼脂20g 1/3000孟加拉红溶液100ml 蒸馏水1000ml 氯霉素0.1g 制法： 上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。 另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。 用途： 分离霉菌及酵母 加入红色素对培养基进行染色的原因主要是便于根据红色的浓度和色调的变化，以观察培养基的理化性质是否有所改变。 二、PDA培养基Potato Dextrose Agar （Medium） 配方： 马铃薯200g 葡萄糖20g 琼脂15~20g 自来水1000ml 制法： 马铃薯去皮，切成小块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。121℃灭菌30min。 用途： 一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸 或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止 局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰 性 三、牛肉膏蛋白胨培养基 配方： 牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15~20g 水1000ml pH 7.0~7.2 制法： 121℃灭菌20min。 用途： 培养细菌 牛肉膏中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。广泛应用于生物制药发酵。
实验用培养基配制 1．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g, 水1000mL, pH7.4～7.6 2.高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g , KNO3 1g, NaCl 0.5g, K2HPO4- ·3H2O 0.5g, MgSO4·7H2O 0.5g, FeSO4·7H2O 0.01g, 水1000mL, pH7.4～7.6。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3．马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖10g, 1/3000孟加拉红水溶液100mL,水900mL, 自然pH, 121℃湿热灭菌30min. 待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL). 4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g, 蔗糖(或葡萄 糖) 20g, 水1000mL, 配制方法如下: 将马铃署去皮,切成约2cm2的小块,放入1500mL的烧杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖,再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖. 5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖 30g, NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4·7H2O 0.1g, 水1000mL, pH7.0～7.2 6.Hayflik培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼 脂15g, pH7.8～8.0, 分装每瓶70mL, 121℃湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右,每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL, 15醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意:醋酸铊是极毒的药品,需特别注意安全操作. 7．麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。 8．葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P．反应和甲基红试验) 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL, pH7.2, 1l5℃湿热灭菌20min。 9．蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL，pH7.2～7.4, 121℃湿热灭菌20min。
PDA培养基 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基是分离菌物和细菌的常用培养基，其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），15磅蒸气（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 小技巧： 1、做PDA培养基用土豆应去皮，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。 PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。 一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 分装于试管 按物理性状划分：固体培养基 按培养基成分划分：半合成培养基 配方 马铃薯200克葡萄糖20克 琼脂15~20克自来水1000毫升 自然PH 配制步骤 其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。 其他事项 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH 试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性
2015-4-16 常见培养基的制备LB；G AUSE I;P AD培养基 []
LB培养基 LB（lysogeny broth）培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 LB培养基的配制： 成分： 胰蛋白胨(tryptone) 10g 酵母提取物(yeast extract) 5g 氯化钠(NaCl) 10g 固体培养基另加琼脂粉(15-20)g 加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。配制方法： ?称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。 ?溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。?调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。 ?定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积. ?加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 ?分装、加塞、包扎。 ?高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。 培养细菌： 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)天然培养基； Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂） 成分： ?KNO3 1g ?Soluble starch（可溶性淀粉）20g ?K2HPO40.5g ?MgSO4 .7H2O 0.5g ?NaCl 0.5g ?FeSO40.01g ?Agar （琼脂）20g ?water （水） 1000ml ?pH 7.2-7.4 方法： 加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20分钟备用.。 性状：干燥粉末，易吸潮。
常用培养基配制方法： （1）基础盐培养基（MSM）：(NH4)2SO42.0g，MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O 0.01g，FeSO4·7H2O0.001g，Na2HPO4·12H2O1.5g，KH2PO41.5g，蒸馏水1000 mL。 （2）LB培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，蒸馏水1000 mL，pH7.5。 （3）高氏合成1号培养基：硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.01g，可溶性淀粉20g，蒸馏水1000mL。 （4）查彼氏培养基：硝酸钠2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，蒸馏水1000mL。 （5）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20 g，蒸馏水1000mL。将无病马铃薯洗净去皮切碎，加蒸馏水1000mL，煮沸0.5 h，纱布过滤，滤液加蒸馏水补足1000mL，再加入葡萄糖，然后分装三角瓶灭菌备用。 （6）铵察氏琼脂培养基：氯化铵2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000 mL。 （7）克氏合成1号琼脂培养基：磷酸氢二钾1g，碳酸镁0.3g，氯化钠0.2 g，硝酸钾1g，硫酸亚铁0.01g，碳酸钙0.5g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。 （8）葡萄糖天门冬素琼脂培养基：葡萄糖10g，天门冬素0.5g，磷酸氢二钾0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。 （9）葡萄糖酵母膏琼脂培养基：葡萄糖10g，酵母膏10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。 （10）瓦氏肉汁琼脂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，牛肉膏10g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。 （11）淀粉琼脂培养基：可溶性淀粉10g，碳酸镁1g，磷酸氢二钾0.3g，氯化钠0.5g，硝酸钠1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。 （12）淀粉铵琼脂培养基：硫酸铵2g，碳酸钙3g，磷酸氢二钾1g，可
指状青霉 拉丁学名Penicillium digitatum 分类地位：菌物界> 无性型真菌门> 半知菌纲> 壳霉目> 杯霉科> 指状青霉属 菌落绒状,暗黄绿色,后变橄榄灰,有特殊的香味;分生孢子梗短,帚状枝大而不规则;产孢瓶体在不同的高度上形成;分生孢子卵形至圆柱形。侵害柑橘果实,引起绿霉病。 培养基（Medium） 是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含。 培养基有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。 培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。 培养基的配制 1.配料 配方换算→在容器中加入少量水〔蒸馏水，自然水〕→按照配方称取各种药品〔依次加入〕→加足所需水量《一药一勺，取药后立即盖上瓶盖》。 2.溶解 淀粉溶解：少量冷水调成糊状 加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95～97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。 3.调PH 用1N的盐酸或的1N NaOH把培养基调节到所要求的值。 4.过滤 滤纸或棉花进行过滤。 5.分装 一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。 (1)三角瓶 若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的 三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15～20 ml培养
PDA培养基制作 PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基) 马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ，自然pH。 在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。 (1) 称量称量去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15～20 g。 提示：琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的15 g就够了，质量差的应适当增加。另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。 (2) 将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000 ml，煮沸30 min。用纱布滤去马铃薯残渣。 (3) 将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。 提示：在琼脂熔化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 (4) 加入葡萄糖葡萄糖溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000 ml。 提示：通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，如1 000 ml、2000 ml 等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。 (5) 分装根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1／5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。 (6) 加塞在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。 正确的棉塞是形状、划、、松紧与管口或瓶口完全适合，过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的，且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1／3在外，2／3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。 (7) 包扎加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。 (8) 灭菌将上述培养基以0.1MPa，121℃，高压蒸气灭菌20 min。 (9) 搁置斜面将灭菌的试管培养基竖置冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 培养基经灭菌后，必须放在37℃温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
p d a培养基的配制方法流程-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基) 马铃薯(去皮)200g 葡萄糖20g 琼脂20g 水1000mL pH值自然 PDA培养基配制注意事项 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。 15:49:27 太珥日 2016-4-26 15:49:27 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即 Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮
按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。