检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级）
1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名--VRir us 结尾的单词,亚科名--VRir inae结尾的单词,科名--VRir idae结尾的单词。目名—VRir ales。2004年ICTV 公布病毒分为：73个科、11个亚种、289个属。
2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。
3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。
各药敏纸片间距不少于24mm，距平板内缘不小于15mm。
药物敏感实验判定标准：抑菌圈直径（毫米）：20以上极敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。
多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。
4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CIE）、免疫印迹技术。
5.病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。
PCR技术—是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60℃（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5’→3’端延伸，合成与模板互补的DNA链。），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR特异性的决定因素，PCR反应中TaqDNA聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。
变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性发生改变。3）增色效应。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"，Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA的变性(单链)状态。
基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）—主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。
核酸杂交（基因探针杂交技术）--是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率＞70%（≥69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在20%--60%同一属内不同菌种，同源性
20%≤不同属的菌种。
AFLP的含义是----扩增片段长度多态性。有很大功能的DNA指纹技术。一种是罕见切割酶，一种是常用切割酶。具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。
6.细菌诊断流程有：双岐索引法，表解法，数字编码鉴定法。致病性岛：由基因编码决定的一团与致病性相关的基因组。
7. 病原细菌确定原则：（郭霍Koch原则）1、从一种疾病病人中能有规律地发现一种细菌2、能够分离这种细菌获得纯培养3、把这种细菌的培养物引入易感动物体内，可以引起与病人类似的疾病4、在实验感染引起的疾病中仍然能够分离同一种细菌。
8.杆菌肽用于A（敏感）与非A群链球菌的鉴定。O/129抑菌试验对弧菌有用而对气单胞菌无用。
9. 奥普托欣试验：肺炎链球菌敏感。
10. 杂交分：斑点，菌落原位，Southern（DNA）印迹，Northern（RNA，DNA）印迹。
11. L型细菌：细胞壁缺陷（形态多样，染色不定，可过滤，渗透压敏感，生化减弱等）培养应高渗透压（3-5%氯化钠、20%蔗糖），琼脂浓度0.5以下半固体培养基。染色多为G染阴性，形态不一（巨球形是特征），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。
增殖：以二分裂、出芽、巨形体释放颗粒方式。一般菌落有：油煎蛋样（L），颗粒型（G），丝状菌落（F），鉴定要点：染色易变多形性，生长在增菌液中微浑，颗粒样沉淀或沿试管壁生长，返祖现象。致病特点：慢性和反复发作性感染，致病物质是毒素。L型细菌在体内体外都可形成。原生质体与原生质球都是细胞壁缺陷的细菌。
12. 细菌的突变：基因突变（又称点突变；有碱基对的置换、插入、或缺失、错码）、染色体畸变（易位、倒位、重复、缺失）。突变：自发突变、诱发突变。质粒在细菌的自发突变中起重要作用。细菌质粒在重组DNA技术中常用的载体。质粒的分离提纯使用酚处理，用乙醇沉淀。
13.噬菌体--是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，具有病毒的基本特性，专性胞内寄生，有严格的宿主特异性。由核酸和蛋白质组成。大多数DNA噬菌体的DNA为线状双链（有尾噬菌体的核酸）；RNA噬菌体的RNA为线状单链（无尾噬菌体的核酸为环状单链DNA或线状单链RNA）。对紫外线敏感10-15分钟失去活性。噬菌体分毒性噬菌体、温和噬菌体（溶原性噬菌体）；毒性噬菌体以复制方式增殖，过程吸附、穿入、生物合成、成熟与释放，少脱壳。在液体培养基中使混浊菌液变澄清，在固体培养基上形成噬斑。温和噬菌体---是噬菌体基因组整合于宿主菌染色体中，有溶原性周期、溶菌性周期。噬菌体可以根据不同细菌的表面受体来裂解目标菌---是判定某些种类病原体的重要依据。
14. 肽聚糖的结构由聚糖骨架，四肽侧链和五肽交联桥（G－无交联桥）。磷壁酸为G＋特有，分壁和膜两种。外膜层由脂多糖，脂质双层，脂蛋白组成。细胞质内有核蛋白体（蛋白合成地），核质（主
要遗传物质）质粒，胞质颗粒，是细菌蛋白质和酶类合成的重要场所。鞭毛是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。性菌毛仅有1～10根，毒力和耐药质粒都能通过它转移，有致病性。
15. 免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾和黏膜免疫系统。免疫细胞：淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜酸嗜碱性粒细胞、肥大细胞、血小板。免疫分子：补体、免疫球蛋白、细胞因子
中枢免疫器官：骨髓、胸腺、鸟类法氏囊。外周免疫器官：淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织
特异性免疫：体液免疫、细胞免疫。
体液免疫：（B淋巴细胞介导，CD4+Th辅助，Th2细胞能分泌细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）；效应是抗体（Ab）；1、病毒中和抗体（不能直接灭活病毒，IgG、IgM、IgA）2、血凝抑制抗体（HLAb）3、补体结合抗体。
IgG在体液中含量最多，分子量小是唯一能通过胎盘的抗体。IgM分子量大，是最早产生的抗体，中作早期诊断。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入，能抵抗蛋白酶的水解作用，具局部抗体。IgE可与肥大细胞膜上的Fc受体结合。
补体C：存在血清中，不耐热，可辅助特异性抗体介导的溶菌作用，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件。由9种成份，11种蛋白组成。补体激活两个途径：传统途径（一）---被Ag-Ab免疫复合物IC活化，顺序C1、C4、2C、3C、5C、6C、7C、8C、C9。旁路途径（二）---被细胞的脂多糖激活。补体激活---酶促级连反应。
细胞免疫（T淋巴细胞介导，效应细胞：细胞毒性T细胞（CTL）、CD4+Th1细胞、CD8+毒性T细胞CTL）。Th1细胞诱导产生迟发型超敏反应（DTH）
16.测特异性抗原最常用实验：凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验、胶体金免疫吸附试验
17. 细菌营养转运的方式有：离子，透性酶，磷酸酶。营养物质进入机体的方式：易化扩散、主动运转（由透性酶完成）、基团移位（糖类由磷酸酶磷酸化进入胞内，不能再透出菌体）。
18. 细菌生长繁殖的条件:充足的营养、适宜的温度、合适的酸碱度、必须的气体环境。细菌生长的温度极限-7--90℃：嗜冷菌最适温为10～20℃，嗜温菌为20～40℃，嗜热菌为50～60℃。适宜的酸碱度PH7.2—7.6。细菌生长繁殖分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期
19.（肠道杆菌）细菌的四种生化反应：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C），合称为IMViC。大肠杆菌呈++--，产气杆菌呈--++。还需做糖发酵试验，KIA产酸产气，MIU＋――，有菌体（O）荚膜（K）鞭毛（H）三抗原。肠杆菌科分型多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验。可疑菌分别接种克氏双糖铁（KIA）尿素靛基质动力（MIU）来定属。
细菌代谢所需能量主要以生物氧化作用而来。细菌新陈代谢的产物：热原质、毒素与酶、色素、抗
生素、细菌素。热原质除去的最好方法---蒸馏。内毒素（G-脂质A）、外毒素（G+产生的毒性蛋白质产物，具有抗原性强、毒性强、作用特异性强、不耐热、人工化学可脱毒性，0.4%甲醛脱毒后形成类毒素进行人工免疫）。据亲和性及作用靶点分为:神经毒素、细胞毒素、肠毒素。细菌的内毒素一般由：脂质A（主要成份），非特异性核心多糖，菌体特异性多糖。一般7～10天后机体产生特异性免疫。IgG 和IgM能在血中直接中和病毒。
热原质：脂多糖，多由G-产生，耐高温，可引起发热反应，高压蒸气灭菌（121℃20分钟）使其破坏。
20.细胞壁的作用：承受胞内高渗压、支持细胞膜、维持细菌形态；是鞭毛运动的支点。
细胞壁的主要成份：肽聚糖（又称黏肽、胞壁质），是原核生物特有的成份，能破坏肽聚分子结构或抑制其合成的物质，都有抑菌和杀菌作用。
G-菌细胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（类脂A、核心多糖、特异性多糖），菌体脂多糖（LPS）能引起发热故称热原质，又称为细菌的内毒素。
细胞膜的主要功能：物质纳泄、生物合成、呼吸作用、形成中介体。
细胞质中的异染颗粒主要成份：RNA、多偏磷酸盐
21.有芽胞破伤风菌需沸水煮3h才杀死。水中加入2%碳酸钠能将沸点提到105℃又能防止金属生锈。
22.紫外线波长265～266nm时杀菌力最强。日光灯波长约0.5μm。
23. 滤菌器用于除菌的孔径是0.22μm，另外以石棉板为滤板的金属滤器称Seitz滤器（蔡氏滤器）按滤孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可阻止大病毒通过EK：居中，除去一般细菌。玻璃滤菌器分G1～G6，G5，G6两型能阻止细菌通过。
24.高压灭菌指示物：嗜热脂肪芽胞杆菌（ATCC 7053），紫外线杀菌指示物：枯草芽胞杆菌黑色变种（ATCC 9372）。
25.细菌遗传物质主要在于染色体、质粒和转位因子中。质粒：不依赖染色体而复制，不相容性，转移性，指令性，大多数质粒在自然状态下是一种闭合环状双链DNA。主要有耐药质粒，Col质粒（编码肠毒素）Vi质粒（编码细菌与致病性有关的蛋白）。转位因子为存在于细菌染色体或质粒上的一特异的核苷酸序列可在DNA中移动，主要有三类：插入顺序（最小的转位因子），转座子，转座噬菌体。
质粒载体具有特点：复制起点、抗菌素抗性基因、多种限制酶的单一切点、较高的拷贝数
26.病毒的特性：1、只含一种核酸2、基因组复制3、缺乏完整的酶系统4、RNA病毒的RNA经反转录合成互补DNA（CDNA）。甘油（10％）或10%二甲基亚砜的血清作悬浮细胞的液体在液氮中保存细胞，在干冰温度（-70℃）和液态氮温度（-196℃）下长期保存其感染性；将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中，解冻做法是：将封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养
基。PH5-9稳定；射线和紫外线、X线、r线能灭活病毒。病毒学上常用的细胞类型：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞。
27.超净工作台应采用层流技术净化空气、选择垂直气流通风方式。洁净度可达百级，只保护样品。
28.菌体蛋白电离后带负电荷；而碱性染料电离时染料离子带正电。
29.染色程序及方法：制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检。
革兰染色法：初染（草酸铵结晶紫）、媒染（碘液）、脱色（95%酒精）、复染（番红）。
抗酸染色法：5%石炭酸复红、5%盐酸酒精脱色、美兰复染。
芽胞染色：菌悬液→孔雀绿→水浴15-20分钟→涂片→干燥→固定→水洗脱色→番红或稀释石炭酸复红复染→水洗→晾干
荚膜染色：（负染色法、墨水法）。负染色法：制片（蒸馏水+菌）→干燥（晾干）→染色（复红）→水洗→干燥（晾干）→涂墨素。背景灰色、菌体红色、荚膜无色透明
鞭毛染色---镀银法；媒染A液—10%单宁酸10ml+5ml饱和硫酸钾铝水溶液+1ml苯胺饱和水溶液+5%氯化铁水溶液成墨色。银染B液—5%硝酸银+浓氨水（比重0.88）成薄雾状。
制片（蒸馏水+菌）→干燥（晾干）→染色（A液3—5分钟）→水洗→干燥（晾干）→染色（B液稍加热分30—60秒）→水洗→干燥（晾干）。菌体深褐色、鞭毛褐色。
30.病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成及组装、成熟和释放
31.病毒突变株分：条件致死性突变株，空斑和宿主依赖性。遗传型变异机制有突变，基因转移，重组。突变：突变率由复制的准确度，DNA发生损伤的机会，及对损伤DNA修复程度来决定。
32.非特异性免疫：干扰素（IFN）、NK细胞。干扰素（IFN）--具有广谱抗病毒作用，只能抑制病毒，即通过诱导细胞合成抗病毒蛋白（AVP）发挥效应。
33.小淋巴细胞分为：T细胞、B细胞、K细胞。T细胞来自骨髓，在胸腺成熟。在人体血液中T细胞占淋巴细胞总数的60—70%，；在胸导管则占95%以上。B细胞第一个合成产物是u链。
34.碱基的置换：嘌呤换嘌呤，嘧啶换嘧啶为转换，嘌呤换嘧啶为颠换。影响基因表达的因素有：调控部位，调节蛋白，效应分子。
35.转化：受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段，整合重组（与染色体重组）使受体菌的性状发生变异。一般有链，嗜血，芽胞菌有此功能。
36.G＋菌等电点pI=2～3，G－菌等电点pI=4～5。RNA主要存在于细胞质中占细菌干重的10%，DNA 存在于染色体和质粒中。G+菌的感受态是由感受态因子（CF）的胞外信号诱导的。
37. 转导：以噬菌体为媒介，将供体菌的基因转移到爱体菌内而致受体菌基因改变，分普遍和局限。
38. 接合：受体菌和供体菌直接接触，供体菌通过性菌毛所带的F质粒或类似遗传物质转移到受体菌。
39.溶源性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组，使宿主遗传结构发生变异。
40.原生质融合：两种经过处理失去细胞壁的原生体混合和可发生融合后的双倍体可发生染色体间的重组。
41.基因重组可使基因再激活表现为：交叉复活和多重复活。
42.粘附素是细菌表面的蛋白质有菌毛和非菌毛。进入宿主：黏附，定植，侵入，转归。毒力有侵袭力和毒素。
43.侵袭力：菌体表面结构，菌毛，侵袭性酶（凝固酶，透明质酸酶，链激酶，胶原酶等）。是指病原突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力。
45.细菌种的科学命名采用拉丁文种属双命名法，前一字为属名，名词，后一为种名，形容词。目前国际上普遍采用伯杰分类系统，也有用CDC（USA）。目前以细菌细胞壁的结构特点作最高一级分类依据将原核界分为薄，坚，软，疵壁四门。科，属，种分类主要依靠生化特性和抗原结构。
46.显微镜的分辩率为波长一半。荧光显微镜的光源为超高压汞灯（50—200W）。
47.油浸物镜的工作距离一般是0.2mm。普通光学显微镜不能观察细胞和细菌的亚结构。相差显微镜特殊装置—--环状光阑、相板，利用光干涉现象。适用于对活体细胞生活状态下的生长、运动、增殖情况、及细微结构的观察。用绿色滤光片。
48.不能立刻接种的血应用SPS（氯化钠溶液）抗凝。怀疑细菌性心内膜炎时血培养不少于三次。
49.肠杆菌科的强选择（SS琼脂）弱选择（EMB，麦康凯）。
50.直接镜检2h报告，最后鉴定和药敏一般不过3天，除血外，必须在24h内预报
53.α溶血是草绿色，β溶血是透明环，γ溶血红细胞不溶解，双环。
54.细菌数量达106~107CFU/ml时培养肉汤才见混浊。
55.血培养中有105菌落形成单位（CFU）/ML时才能通过革兰氏染色检出细菌。
56. AMS系统是目前微生物鉴定中最常用的自动化仪器。
57.突变种纯系动物：实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺陷的突变品系动物。
58.纯***动物：无计划随意交配的动物。近交系动物：采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖20代以上的纯品系动物。无菌动物：体表肠道内无菌、体内无抗体。悉生动物：给出无菌动物引入已知的5～ 17种正常肠道菌的动物。
59.小白鼠对肺链，破伤外毒素敏感，豚鼠对结核白喉易感，猫对金葡萄菌肠毒敏感。测定病原体
的感染性最好选用无菌动物或悉生动物。
60. 菌种保存：“冻干”保存—稳定剂（脱脂乳、蔗糖）。冻干菌种只能使用一次，冻干菌种打开后需要以传代保存形式保留工作菌种。冻干菌种在使用时须“复苏”且须传代才能恢复原生长特性。低温保存：-20℃或-80℃+甘油作稳定剂。菌种取出须置于干冰或预冷的铅质容器内，用完立即放回不可菌种解冻。冷冻干燥保存法是最有效的方法，利用各种斜面和半固体加石蜡油是最常用和最简便的方法，一般不含糖，不用液体。
61. 在细菌生长到足够量时加入抑制蛋白质合成的抗生素，在细菌停止繁殖后质粒还在复制，可以提高质粒的收获量。
62.粪便呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂，触酶阳性，凝固酶阳性玻片法筛选，试管法确证。必须做苯唑西林的敏感试验。
63.真菌，霍乱，铜绿及粪碱需在室温保存，而脑膜炎，淋球，初次分离的流感嗜血菌保存于37℃。每转种三代要鉴定一次。
65.葡萄球菌：产生脂溶性色素，多数分解甘露醇产酸液化明胶和产生血浆凝固酶。蛋白抗原（A 蛋白）种属特异无型特异，多糖抗原（A，B，C）是半抗原，有型特异。是抵抗力最强的无芽胞菌。
66. 布鲁司菌：无鞭无芽G-呈散沙状，S型有荚膜，专性需氧，抵抗力强，37 ℃，PH6.6～6.8，血液、血清、肝浸液可促进生长，48小时形成微小，无色透明光滑凸起菌落。6个种19个生物型，对人致病是羊、牛、猪种。血清凝集试验（SAT）是常用诊断实验，虎红平板凝集试验（RBPT），补体结合试验（CFT）、免疫荧光试验（IFT）等。静脉血3—5毫升。用肝浸液琼脂培养基、蛋白胨、土豆浸液琼脂等。动物分离—豚鼠。生化特征：分解尿素、产生硫化氢。
诊断标准：血清试管凝集试验（SAT）1：100++以上，补体结合试验（CFT）：1；10++
67. 莱姆病原：伯道疏螺旋体引起莱姆病，细胞结构：原生质柱、表层、外膜、鞭毛。微嗜氧G-，能自身合成类脂化合物、主要脂肪酸，并将嘌呤碱结合到核酸中，但不能合成长链脂肪酸，发展酵代谢产物---乳酸。蜱传播媒介，鼠主要宿主动物，标本在 -20—4℃运送。
标本制成悬液，暗视野显微镜20×10或40×10下检查。
病原分离：接种BSK培养基33℃培养。用兔抗B31特异性多克隆抗体进行间接免疫荧光抗体试验（IFA），或ELISA、WB---最终确诊方法。
68. 钩端螺旋体：原核细胞型微生物，双股DNA。需氧或微需氧，是致病性螺旋体中唯一能人工培养的。其中鼠类和猪为主要的传染源和储存宿主，通过人的皮肤黏膜侵入。常用柯夫培养基或EMJH培养基，需加入10%兔血清或牛血清，培养液透明有轻度乳光，摇动时有云雾状混浊。G-Fontana镀银染色成棕色。对酸碱敏感，最适是PH7.2～7.5，低于6.8，高于7.7生长不良，最适温28～30℃，12h分
裂一次。电镜下基要本结构：柱形原生质体、内鞭毛、外膜
标本：血液、脑脊液在发病后10天内，出现发热但未用药前，不能即时送检，血液用不含枸橼酸钠抗凝5-20℃保存，1周内接种。2周取尿液则用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸盐缓冲液稀释取50微升接种到5毫升培养基中每个稀释度2管，每管中先加入30微克新霉素滤纸片或每毫升培养基加5-氟尿嘧啶200-400微克。暗视野显微镜检查每周1次连5周，阴则每月2次连4月。
病原鉴定：血清群用显微凝集试验（MAT），血清型用交叉凝集吸收试验，分子生物学技术。
69. 致病性链球菌：沉淀生长（肺链为混浊），在含腹水的培养物上生长良好，溶血株呈絮状或颗粒状生长，不溶血株呈均匀混浊生长。
（一）化脓性链球菌：标本1天内送，不超过2天。THB增菌肉汤、5%脱纤维羊血的胰酶消化大豆琼脂培养基，血液和脑脊液应先增菌后接种平板，脓液、咽拭子直接种于血平板。
A群链对杆菌肽敏感青霉素G为首选，抑环＞10cm敏感。(90%对人致病)
B群链CAMP试验阳性（鉴定指标35℃卵育），马尿酸钠水解试验阳性
D群链七叶甘水解试验变黑色为阳性，6.5%氯化钠生长试验(黄色)
快速检测:酶标免疫测定法、PCR（A群链致热外毒素A，B，C基团speA，speB，speC各溶血素O基团slo）。抗溶血素O抗体---溶血法、胶乳凝集法。
（二）肺炎链球菌：37.5℃pH 7.4—7.6初次CO2卵育, 在含3%～5%的兔血清中生长良，血平板上草绿色a溶血环。如G+具有矛头状双球菌可初步诊断。培养时间过长会自溶管底澄清，以奥普托欣试验、分解菊糖，胆汁溶菌阳性区别于甲型溶血性链球菌。主要抗原有：蛋白质抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。胆汁溶菌试验---0.5ml生理盐水细胞悬液制成相当于0.5麦氏单位的密度标准。
取细胞悬液0.25ml+0.25ml 2%的脱氧胆酸35--37℃培养2小时，管液清澈或浊度消失为阳性。
氨基糖苷类合用，β溶链致病性最强，α溶链为条件致病菌。几乎所有的肺链对Optochin敏感。
（三）猪链球菌：人感染致病：脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克。35个血清型。2型致病其属于R群，属特异基团tuf、种特异基团16SrRNA
70. 肠球菌属：能在高盐（6.5% NaCl）高碱（pH 9.6）40%胆汁培养基上和10～45℃生长，是G+菌中仅次于葡萄球菌的重要院内感染病菌。临床上分离最高的是粪肠球菌，可分庆霉素高耐药和低耐药，一般用β-内酰胺类和氨基糖苷类联合。
71.脑膜炎奈瑟菌：脑液中位于中性细胞内，大多能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气，具有氧化酶和触酶。能产生自溶菌不宜冰箱应立即保温送检，冬末春初为流行高峰，青霉素G为首选。依据荚膜分13个血清型，主要是ABC三个血清型及W135、Y。通常采3管脑脊液（化学、微生物、细胞学）含添加剂的巧克力平板（CAP）和血琼脂平板（BAP），如不能立即接种，，则接种至预热35℃的转运—分离
（TI）培养基中保温通气，可保存7天，血液采集后1分钟内注入肉汤中。
镜检：脑脊液2000r/min离心20分钟，沉淀物镜检脑膜炎双球菌常在多核白细胞内或细胞外。病原鉴定：Kovac氧化酶实验10秒内呈紫色阳性反应。
快速检测：乳胶凝集试验测抗原。上清液可—20度冻存长时间。
72. 淋球奈瑟菌：G-人类是唯一天然宿主和传染源。不耐干燥，35—36℃，2.5—5%CO2生长,最适pH7.5，对糖类生化最低只能发酵葡萄糖，主要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗原。细菌培养是目前世卫推荐的唯一方法，用培养法查女病人宫颈口表面分泌物。培养基中应含万古霉素、多粘菌素B。标本接种在巧克力血琼脂平板或T-M培养基。急性期淋病菌常在白细胞内，慢性期淋病菌常在白细胞外，在中性粒细胞内有G-性双球菌具有诊断价值。
73.梅毒病原：菌体形似弹簧，运动活泼，两端尖直，有细胞壁和膜，原生质圆柱体且有3-4根周浆鞭毛，G-抵抗力极弱，对青霉素、四环素、红霉素、砷剂敏感。
标本：Ⅰ期梅毒取下疳渗出液（20分钟内查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液；先天性梅毒取脐血；神经梅毒取脑脊液。
镜检：新鲜标本加盖片暗视野显微镜下检查，浆液不能含有红细胞、微生物、组织碎片。荧光标记、ELISA普光下查，镀银染色螺旋体染成棕褐色光镜下查。
病原分离：人工培养基上不易生长，接种兔睾丸或眼前房内繁殖，并能保持毒力。34-35℃，分裂为30-33小时。
抗体检测：产生特异性抗体、反应素抗体（表面脂质引起），有非密螺和密螺抗原试验。初筛试验和疗效观察---非密螺抗原试验，正常牛心肌心脂质为抗原测患者血清中反应素，判断是否复发及再感染。最常用VDRE、RPR试验。VDRE以胆固醇为载体。玻片凝集可定性和半定量，低倍观察。RPR用未处理活性炭颗粒吸附VDRE抗原。专用纸片圈内（18mm）可定性和半定量。
密螺抗原试验（证实试验）---FTA-ABS作为诊断梅毒“金标准”试验。它是间接荧光抗体检测方法，
75.肠产毒型（ETEC）：作用小肠，霍乱样肠毒腹泻，是5岁以下婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌；肠毒素有耐热和不耐热，LT-Ⅰ是引起人类主要的致病物质，对热不稳定，65℃30分钟被破坏，A 亚单位是毒素的活动部位。耐热肠毒素（ST）是通过激活肠黏膜细胞上的鸟甘环化酶，使胞内CGMP量增多而导致腹泻。
肠致病型（EPEC）：作用小肠，水样腹泻，是婴儿腹泻主要病原菌。
肠侵袭性型（EIEC）：作用大肠，志贺样腹泻，很像菌痢，发热腹痛脓血便及里急后重。
肠出血型（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性腹泻和溶血性尿毒症，是4岁以下儿童急性肾功能衰的主要病原，6、7、8三月最高，北美多见。毒力因子：志贺样毒素、溶血素、LEE毒力岛、Vero毒素。
肠集聚型（EAggEC）：婴儿和旅游者腹泻持续性水样腹泻。
76. 志贺氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鲍氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋内（D 群）（扁平粗糙型菌落）四群，我国以福氏和宋内常见，无荚无芽无鞭，KIA：K/A，产气＋/－，H2S－，MIU－＋/――，最后可用诊断血清作群型鉴定
群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鸟氨酸脱羧酶
痢疾志贺菌 A 1-10 + - - -
福氏 B 1-6 + - + -
鲍氏 C 1-18 + - + -
宋内 D 1 + - + + 只有一个血清型，Ⅰ相和Ⅱ相加热60℃10分钟杀死，有强烈的内毒素，作用于肠黏膜，使其通透性增高。粪-口传播，只局限于
肠道，一般不进侵入血，发热、腹痛、水样腹泻，后转为脓血黏液便，伴有里急后重、下腹部疼痛。急
性中毒性痢疾多见小儿。粪便不能即时送检，需保存在30%甘油缓冲盐水中。志贺菌表达黏附、穿透上
皮细胞、胞内繁殖、及扩散等活性的基因存在于大质粒上。
测志贺菌的侵袭力用Sereny试验，接种于豚鼠眼结膜囊内。
快速诊断：1、免疫染色法2、免疫荧光菌法3、协同凝集试验4、胶乳凝集试验5、分子生物学方法
77.伤寒与副伤寒菌：无芽无荚有鞭毛（除鸡沙门）多数有菌毛，H2S可阳性，伤寒菌产酸不产气，菌体抗原有58种，鞭毛抗原有两相即特异性和共同，表面抗原有Vi，M，5三种，变异有：S-R，H-O，
v-w，相位。
伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌。所致疾病4类型：
（1）、肠热症：第一次菌血症，发热、不适、全身痛，与菌的感染剂量有关，通常潜伏期为2周，第二次菌血症，高热7-10天，缓脉、肝脾肿大，皮肤出现玫瑰疹，外周白细胞明显下降，严重者有出
血或肠穿孔等并发症。
（2）、胃肠炎（食物中毒）：由摄入大量＞108被鼠伤寒沙门菌(常引起食物中毒)、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌污染的食物引起。致病机制：细菌释放的内毒素。发热、恶寒、呕吐、腹痛、水样腹泻。
（3）、败血症：4、无症状带菌者：
标本：第1-2周采血，接种于室温＞20℃平衡血培养瓶，不能超过2小时送样，不能即时送样放在
室温，切勿放冰箱；第3-4周取粪便；第3周起还可取尿液；整病程均可取骨髓液。
病原分离：血液和骨髓须按1：10加入血液需氧培养瓶或胆盐葡萄糖肉汤增菌后接种于血琼脂平板或
营养琼脂平板，SS—双糖或三糖铁（TSI）培养基。粪便接种麦康凯（MaC）/DHL、SS平板上，或SF增菌。
病原鉴定：凡符合克氏双糖铁（KIA）斜面或三糖铁（TSI）：不发酵乳糖、蔗糖，发酵葡萄糖、麦
芽糖甘露醇，产气＋/－，H2S＋，吲哚尿素V-P均－，硝酸盐还原阳性，多价血清阳性的为沙门属。尿
素酶试验与变形杆菌区别。胞内寄生菌，临床上主要为不明原因持续发热。尿素半固体（MIU）。A-F群沙门菌（O）多价血清作玻片凝集，阳性则选用O2、 O4、 O7、 O9因子定群。
血清学诊断：肥达试验，一般伤寒沙门菌O凝集效价＞1：80、H＞1：160，副伤寒H＞1：160具有诊断意义。新一代疫苗：伤寒Vi荚膜多糖疫苗。
78.变形杆菌属：普通，奇异，产黏。普罗威登斯属有：产碱，斯氏，雷极，摩根菌只有摩氏摩根菌。有明显多形性，呈球状或丝状，生长于10～43℃，在固体培养基上普通和奇异呈迁徙生长现象，三属氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性G-杆菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使终浓度为1g/L和0.25%可抑制变形菌迁徒样生长。能迅速分解尿素以区别沙门菌，外斐试验辅助诊断立克次体
79. 耶尔森氏菌（鼠疫）：有7种，鼠疫，假结核，小肠与致病有关。带有3种质粒，主要的致病决定基因由质粒和染色体上的毒力岛编码。
鼠疫耶尔森：有荚无芽无鞭，两极浓染，28～30℃，pH6.9～7.1，液体中培养好，底部可有钟乳石样，常用1%溶血的胰酶消化肉琼脂（赫氏琼脂）加入亚硫酸钠或脱纤维血有刺激生长，用腐败材料分离，培养基中加入甲紫、胆酸钠抑制杂菌，龙胆紫亚硫酸钠为其选择性培养基，3%氯化钠上生长呈多形性。
小肠耶尔森：无动无芽无荚G－，25℃有动力，有周鞭毛，最适温20～28℃，VP试验25℃阳性，37℃阴性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃动力阳性37℃阴性。假结核：25℃有周鞭毛有动力37℃无动力，最适温30℃，pH6～8。血清检测的抗体是F1
经典鼠疫“四步检验”：显微镜检查（美兰染色）、培养、鼠疫噬菌体裂解试验（早期为暗黄的灰色表面粗糙的颗粒样突起，在血培养上有花边状薄而透明不整齐的边缘菌落。48小时为灰白色中央突起菌落，）、动物实验（小鼠、豚鼠）。
快速检测；PCR（高度特异性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫检测（F1抗原）
所有疑似鼠疫病人都需采取血标本，疑似腺鼠疫病人取肿大淋巴结穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子标本。
80. 枸橼酸杆菌：有弗劳地，异型，无丙二酸盐。只有弗劳地靛基质－，H2S＋，仅异型的丙二酸盐＋，β-半乳糖苷酶，赖氨酸脱羧酶，枸橼酸利用三试验：枸橼酸菌＋－＋，沙门－/＋＋＋，爱德华－＋－。
81.胶体金标记技术应用领域：免疫层析技术。其优点---标记物非常稳定。
82.细菌明胶液化试验原理---某些细菌产生胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸而液化。
氧化酶试验--用于肠杆菌科与假单胞菌的鉴别。胆汁溶菌试验--用于肺炎链球菌与甲型链球菌鉴别ONPG试验—迟缓分解乳糖的细菌试验为阳性。
83. 沙雷菌：最适温10～36℃，4%氯化钠下可长，产生灵红霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），关
键生化是DNA＋和葡萄糖酸盐＋。
85. 霍乱菌：呈弧状或逗点状，米泔样粪便作悬滴观察，细菌呈穿梭样或流星状运动；粪便涂片镜检见排列如“鱼群”状G－菌，耐碱不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2。最适宜生长pH7.2-7.4。血清分型可分为AB的小川型，AC的稻叶型，ABC的彦岛型
病原分离：水样便直接接种在硫代硫酸盐－柠檬酸盐－胆盐－蔗糖平板（TCBS）上37℃形成较大黄菌落，在含亚碲酸钾或庆大霉素平板选择性平板上呈灰褐色。食品及水样常用碱性蛋白胨水增菌培养后再接种，钠离子可剌激生长，但在＞8%NaACI中不生长。常用的保存或运送及增菌用碱性蛋白胨水，文-腊二氏，卡-布。
病原鉴定： O1群无芽胞，无荚膜，单一鞭毛；O139群菌体周围有一层比较薄的荚膜。测定耐热的特异性O抗原，用玻片凝集或ELISA鉴定，血清效价1：40-1：50。不耐热的非特异性H抗原，有两个环状染色体，即染色体1、染色体2。
深入鉴定：流行株与非流行株依靠噬菌体---生物分型法。噬菌体（VP1-VP5）将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。根据溶原性、溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验、溶血试验，将埃尔托型霍乱弧菌分成a-l共12个生物型。常见的流行株为噬菌体1-3型，生物型a-d型，常见的有：la、lb、ld。产毒基因鉴定：用PCR检测ct基因，流行株常带有霍乱肠毒素。
免疫检测：霍乱为肠为非侵袭性细菌，主要剌激局部黏膜产生分泌性AgA抗体，同时大量毒素及细菌脂多糖体的产生使机体产生抗毒和抗菌抗体。
恢复期带菌者是指临床症状消失后3个月内带菌者，恢复期带菌的时间一般不超过 2 周，健康带菌者的排菌时间一般不超过7天。
86.副溶血弧菌：嗜盐性弧菌（与霍乱显著区别），是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌，两极浓染，NaCl最适35g/L，无盐不长，pH7.0～9.5，最适pH 7.7，不耐热，不耐酸，在TCBS上不发酵蔗糖菌落绿色，＞80g/L盐内不长，神奈川现象（β溶血），KP+是致病株能使人或兔红细胞发生溶血对马红细胞不溶血为阳性。
87.气单胞菌最适生长温度30℃，但在0～45℃皆可生长。
88. 弯曲菌属是一类微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌体弯曲逞豆点状，S状或螺旋状有动力G－菌，5种5亚种，对人致病的主要是空肠弯曲菌（人类腹泻最常见之一，43℃生长，25℃不生长）
89.幽门螺杆菌（HP）：常用布氏培养基或脑心浸液血琼脂加入5～10%羊血和马血，在（85%N、10%CO2、5%O2）条件下，37℃3—7天，长成针尖状的半透明菌落，加入万古霉素、TMP、两性霉素B等组成抑菌剂防止杂菌生长。与十二脂肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发病有关。传染源主要是人，粪-口途径。标本：胃黏膜活检组织；
病原鉴定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶＋、触酶＋，具有碱性磷酸酶、r-谷氨酰转肽酶活性，硝酸盐还原＋，可生长于5%甘氨酸、0.04%氯化三苯四氮唑培养基中，三糖铁中不产生硫化氢，微需氧5～8%，37℃生长，25℃和42℃均不生长的G－菌，初次分离要3～4天。
快速检测：尿素呼吸试验---简单快捷，可以特异地诊断HP现症感染，敏感性高。主要采用13C、14C（放射性同位素）标记尿素，13C用于儿童和孕妇。
90.《伯杰系统细菌学分类》的标准：G染特性，形态，鞭毛，芽胞，荚膜，代谢产物。
91.有芽胞的厌氧菌：只有梭菌属包括83个种。厌氧菌每克粪中高达1012个，标本绝不能被正常菌污染，应尽量避免接触空气。最理想的标本是组织，送到实验室后20～30min内处理完不超过2h。应接种固体和液体两种培养基，应使用预还原培养基，液体培养基应煮沸10min以驱氧并立即冷却。每份标本至少接种三个血平板，置于有氧，无氧，5%～10%CO2环境中培养。厌氧手套箱培养法是迄今最佳厌氧培养仪器之一。
92. 厌氧状态的指示剂有：美蓝和刃天青，无氧时白色，有氧时美蓝蓝色，刃天青粉红色。紫外线下出现荧光也是厌氧菌参考之一，卡那霉素用于梭杆菌与类杆菌的区分，甲硝唑用于厌氧菌和非厌氧菌的区别。气液相色谱已成为鉴定厌氧菌及其分类比较可靠的方法。
93.破伤风杆菌：鼓槌状，早期培养G＋，48h后特别是芽胞形成后G－，的O和H抗原，主要症状为骨骼肌痉挛，不发酵糖类，能液化明胶产H2S。产生两种外毒素：破伤风溶血素、破伤风痉挛毒素
94.产气荚膜梭菌：G＋，20～50℃均能生长，最适为45℃，双层溶血，可分解糖类产酸产气，出现汹涌发酵现象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素为主，本质是卵磷脂酶（α毒素），在蛋黄琼脂平板上菌落周围出现乳白色浑浊圈。所致疾病为气性坏疽，有捻发感，青霉素为首选，万古为次选。
95. 肉毒梭菌：G+，芽胞胶囊于次极端呈汤匙状或网球拍状，严格厌氧，8型，以A，B多见，毒素不耐热，1min煮沸即死。
96.无芽胞厌氧菌是一大类正常菌群，引起感染是内源性感染。
97. 白喉棒状杆菌：为放线菌，G+，无荚无芽无鞭无毛，奈瑟（Neisser）染色成黄褐色，一端或两端染成蓝色或深蓝色颗粒即异染颗粒，阿培特（Albert）染色菌体呈蓝绿色，异染颗粒成蓝黑色。
分离培养：棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮肤病变部位，血平板，吕氏血清斜面（生长迅速，乳白色，S型，形态典型），哥伦比亚血培养基及亚碲酸钾血琼脂（48小时以上，菌落黑色，筛选鉴别）。白喉毒素是一种毒性强、抗原性强的蛋白质，B-棒状杆菌噬菌体毒素基因（tox+）编码的蛋白质，PCR扩增tox+基因辅助诊断不能确诊。免疫沉淀试验（EleK平板试验）检测产生白喉外毒素，是诊断白喉的关键试验。细菌一般不侵入血，但外毒素可入血引起毒血症，不能立即送检时应浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中。出现各种心肌炎，软腭麻痹是白喉晚期死亡的主要原因。（白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤
风类毒素的混合疫苗DPT）
98.百日咳鲍特菌：专性需氧，常用包-姜培养基（含青霉素G）细小S银灰色不透明珍珠状菌落，在加血培养基上,周围有狨毛状狭窄溶血环，液体培养基中混浊生长。菌落常S-R相变异，Ⅰ相S型，Ⅱ、Ⅲ相过渡型，Ⅳ相R型。有百日咳毒素，丝状血细胞凝聚素和腺嘌呤环化毒素。细菌不进入血流。临床分为3个期：1、卡他期2、痉咳期3、恢复期。依据菌落性状及凝集试验确诊。抗原有PT、FHA，主要用ELISA方法。可获持久免疫力
咳碟法：包-姜培养基（含青霉素G）置10cm使飞沫直射于培养基上，37℃2-3天
鼻咽拭子法：如不能及时接种可放入0.3毫升PH7.2—7.4的1%蛋白胨生理盐水中2小时内检
99. TBE-Tris硼酸缓冲液，长时间电泳选用。MIC-最小抑菌浓度
101．决定细菌的形态因素：培养基的成份、PH、培养时间、温度。直接观察细菌的超微结构：超薄切片技术、电子显微镜。
102. 芽胞：在80℃水中迅速死亡，在100℃水中能耐受2小时以上，在70%乙醇中能存活20年。高压蒸气灭菌杀死细菌牙芽胞最有效。荚膜的重要功能：抗吞噬。是构成细菌毒力的因素之一。
卫生毒理学
1．外源化学物在体内的生物转运：吸收、分布、代谢、排泄四阶段。
化学毒物在体内的代谢分为两相：Ⅰ反应---氧化、还原、水解；Ⅱ反应---与体内源性物质结合亚慢性毒性试验目的：最大无作用剂量、最大耐受剂量估测阈剂量。（选用两种种属及啮齿类、非啮齿类，初断乳动物）
慢性毒性试验目的：最小有作用剂量、阈剂量、最大未观察到有害作用剂量（选用两种种属及啮齿类、非啮齿类，初断乳动物）
危害性评价组成：认定、描述、接触评定、特征分析
毒理学试验项目：第一阶段：急性毒性试验。第二阶段：遗传毒性试验。第三阶段：亚慢性毒性试验。第四阶段：慢性毒性试验和致癌试验
GB 19489—2004《实验室生物安全通用要求》分级：危害等级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。
生物安全防护水平（BSL-1、2、3、4）。
生物安全柜一级：可保护工作人员和环境。生物安全柜二级：分A1、A2、B1、B2可保护工作人员、环境、样品。生物安全柜三级：
2．普通光学显微镜：最高分辨率0.2um,不能观察细菌的亚结构
3．暗视野显微镜：分辨率0.02-0.04um,载玻片厚度1.0mm、盖玻片0.17 mm
4．荧光显微镜：
5．滴定管精度为0.2—0.1ml,微量滴定管精度为0.005ml。微量吸管5—1000ul。培养皿分：5、7.5、
9、10cm
蛋白质、核酸提取及相关设备
一、蛋白质分离纯化----实验室常用盐析法（硫酸铵）。
核酸纯化----酚、氯仿抽提
制备细胞外膜蛋白----超声波细胞粉碎机。
大多数限制内切酶使用温度37℃，保存温度是-20℃。
二、层析
凝胶过滤法（分子筛层析法）---主要用于蛋白或核酸分离。介质：葡聚糖。过滤中先洗脱的是大分子物质，后小分子物质。原理：纤维素或凝胶介质带电荷不同。
三、检测仪
1、分光光度计及检测物质
分光光度计波长nm 比色皿检测细菌浓度可见分光光度计600 玻璃
测定颜色可见分光光度计450
检测蛋白紫外分光光度计280 石英
检测核酸紫外分光光度计260 石英
2、紫外透射仪：暗室紫外线下看DNA条带。
3、测序仪：蛋白测序仪---测定氨基酸排列顺序
DNA测序仪---测核苷酸排列顺序。物质是；质粒、噬菌体、PCR产物
4、扩增仪：能做PCR称DNA扩增数
5、酶标仪：
二、电泳类：用于原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）蛋白质、核酸分离用垂直电泳槽，凝胶介质形成立体多孔网状结构，过硫酸铵起催化
聚合作用, Tris-甘氨酸缓冲液。分离DNA片段最佳范围5-500bp
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）蛋白分离聚丙烯酰胺浓度越大，线性分离范围越小。十二烷基硫酸钠作用是解离蛋白，常用蛋白染料--考马斯亮蓝，甘氨酸—缓冲
琼脂免疫电泳蛋白分离和鉴定
脉冲电场凝胶电泳（PFGE）核酸分离用琼脂糖作介质。为正交的交变脉冲电场；条带靠近负极为大片
段DNA，靠近正极为小片段DNA。DNA染色用溴化乙锭（EB）或
硝酸银。（分析大分子物质）
琼脂糖凝胶电泳核酸分离与纯化1%琼脂糖作支持介质，有“分子筛”和“电泳”的双重作用。用
水平电泳槽，充分分离DNA片段最佳范围200bp-50kb
等电聚焦电泳（IFE）蛋白质分离以两性电解质制造凝胶有不同PH，使带不同电荷的多肽在电泳
条件下于等电点停留。用聚丙烯酰胺制备等电聚焦电泳凝胶。浓
缩效应、分辨率高、重复性好、用时少
对流免疫电泳（CIE）测定抗体或抗原缓冲液是PH8.6巴比妥液，使抗原抗体均带负电，抗原向正泳，
抗体电渗作用向负泳。
火箭电泳
测抗原量
交叉定量免疫电泳
醋酸纤维膜电泳免疫球蛋白鉴定
变性聚丙烯酰胺凝胶单链（DNA或RNA）
片段分离与纯化
四、快速斑点免疫金渗滤法（滴金免疫法）：属于常用的胶体金技术。方法是---以硝酸纤维素膜
（NC膜）为载体，将试剂和标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应，全程可于数分钟内完成，阳性在膜上呈红色斑点。基本原理是间接法或夹心法
免疫胶体金技术用于检测：抗原、半抗原、抗体
ATCC是指美国典型培养物保藏中心。
MPS---单核-吞噬细胞系统，又称巨噬细胞系统。
玻片凝集反应---2-3分钟看结果；试管凝集反应---18—24小时看结果；沉淀反应---72小时看结果；补体结合试验（CFT）---30分钟看结果
过滤式微生物采样器根据过滤材料不同有：薄膜过滤器、玻璃纤维过滤器、凝胶过滤器、谷氨酸碱过滤器。
病毒的分子生物学鉴定：病毒核酸和蛋白质测定。蛋白质使用--免疫测定技术、电泳技术、质谱技术；核酸使用—探针技术、杂交技术、聚合酶链反应技术
构建基因组文库，初始DNA长度须在90kb以上。纯化的mRNA在70%的乙醇中可保存1年以上。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4或6个核苷酸。
为获得条带清晰的DNA电流图谱DNA用量为0.5—1.0ug.
在酶切图谱制作过程中,分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法---聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、琼脂糖凝胶电泳。
普通水平电泳制备染色体DNA酶切图谱时，DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系，分离＜
0.5kb DNA片段所需胶浓度是1.2%-1.5%，分离＞10kb DNA片段所需胶浓度是0.3%-0.7%，在低电压时，
线状DNA片段的迁移率与所加电压成正比，电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使＞2kb DNA 片段的分辩率达到最大，所加电压不得超过5V/cm。
细菌的培养技术
一、培养基：1、营养物质：蛋白胨、肉浸汁和牛肉膏、糖醇类、血液、动物血清与鸡蛋、无机盐类、生长因子。
二、水分。
三、凝固物：琼脂、明胶、卵蛋白及血清
琼脂：成份为多糖，赋形物。固培养基2—3%，半固培养基0.2—0.5%
明胶:主含蛋白质,24℃以上溶解,20℃以下凝固
四、抑制剂：五、指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、甲基红、溴香草酚蓝、中国蓝、酸性复红等酸碱指示剂；美蓝氧化还原指示剂。
一般培养基高压121℃，1.05㎏30分钟。含糖培养基高压灭菌0.56㎏15分钟。
培养螺旋体常用培养基---Korthof，温度28℃，含有10%兔血清。
MPN法---稀释培养测数法。适宜测定土壤中微生物中的特定生理群。
活菌计数最准确的方法---倾注平板计数法。最快的细菌计数方法---显微镜直接计数法。
空斑形成数---PFU
我国最早实验室生物安全卫生行业标准是：微生物实验室生物安全通用守则。2003年8月1日实行。
我国第一部实验室生物安全国家标准是：《实验室生物安全通用要求》。2004年10月1日执行。
WHO制定的生物安全指南：《实验室生物安全手册》2004年11月出版第3版。
细菌的生化反应试验
糖醇类代谢试验：糖发酵试验、甲基红试验、V-P试验、葡萄糖氧化/发酵试验（O/F试验）、七叶苷水解试验、B-半乳糖苷渗透酶试验。
糖发酵试验原理：多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物（或产酸产气）→PH下降→指示剂呈酸性变色。
蛋白质类代谢试验：靛基质试验、硫化氢试验、苯丙氨脱氨试验、尿素酶试验
双糖：葡萄糖、乳糖；三糖：葡萄糖、乳糖、蔗糖；
双糖高层斜面发酵管：葡萄糖/乳糖=1：10
三糖铁与双糖铁区别：蔗糖。糖类发酵是鉴定细菌最常用的生化反应。需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。
TI-Ag的特点: 非胸腺依靠性抗原,不需T细胞辅助即可刺激机体产生抗体。少数Ag属此类。如细菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。共同特点：TI-Ag刺激机体产生的Ab仅是免疫球蛋白M，不引起回忆应答，不引起细胞免疫。
鉴定肠杆菌科基本条件；发酵葡萄糖、氧化酶阴性、还原硝酸盐。
核酸检验基本技术
转录----在生物体内，DNA指导的RNA合成过程。合成RNA时DNA双链要解旋，解旋部位称为
启动子。大肠菌的RNA聚合酶有5个亚基，其o亚基有启动子作用。
反转录病毒基因组一般不具感染性。
2．变态反应（超敏反应）------是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。
在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。DNA多聚酶只能结合在一长段DNA 单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。DNA在合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3’末端的羟基上。在合成发生错误时，DNA多聚酶会切除错误核苷酸，于此处加上正确的核苷酸。与人工合成DNA区别。
大肠杆菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶---DNA聚合酶Ⅰ。复制最主要的DNA聚合酶---DNA 聚合酶Ⅲ，该酶的核心聚合酶中，具有3’--5’外切酶活性的亚基是e亚基。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段没有5’--3’外切酶活性。逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。在体内DNA复制必须有RNA引物。
合成中tRNA搬运氨基酸作用、rRNA构成核糖体骨架、mRNA直接决定蛋白质结构。
Ⅰ型变态反应：即速发型，又称过敏反应。特点：过敏原进入机体后，诱导B细胞产生IgE抗体。由IgE介导，肥大细胞和嗜碱粒细胞等效应细胞以释放生物活性介质的方式参与反应；发生快，消退亦快；
Ⅱ型变态反应：细胞毒型/细胞溶解型，抗体（多属IgG、少数为IgM、IgA）首先同细胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相结合，然后通过四种不同的途径杀伤靶细胞
Ⅲ型变态反应：即免疫复合物型，又称血管炎型超敏反应。特点：游离抗原与相应抗体结合形成免疫复合物（IC），若IC不能被及时清除，即可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞及其他细胞参与下，引发一系列连锁反应而致组织损伤。
Ⅳ型变态反应：即迟发型（细胞介导型），Ⅳ型是由特异性致敏效应T细胞释放的LF介导的。分泌型IgA（S IgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。是机体黏膜防御感染的重要因素。
免疫原性含义：剌激机体免疫系统，有诱生抗体和致敏淋巴细胞的能力。产生抗体的细胞是B细胞，本质是免疫球蛋白（Ig）。免疫球蛋白（Ig）的分类主要依据—重链恒定部份CH的结构特点。
T细胞是：细胞毒性T细胞。浆细胞来源于活化B细胞。特异性B细胞经过抗原识别、活化、增殖、分化成为浆细胞。
可以保持蛋白质活性的蛋白质沉淀方法是：硫酸铵、聚乙二醇、免疫沉淀法。
可用于检测致泻大肠埃希菌肠毒素的方法：酶联免疫吸附试验检测LT和ST、双向琼脂扩散试验检测LT、乳鼠灌胃试验检测ST.
琼脂糖凝胶电泳缓冲液通常用：1*TAE或0.5*TBE，溴化乙锭是诱变剂。
鉴别宋内志贺菌与其他志贺菌的生化反应是：鸟氨酸试验。
卡介苗简称为：BCG
钩瑞螺旋体可以引起肺部感染
Vero细胞毒素是O157：H7大肠杆菌的最主要致病物质
耐热直接溶血素属于副溶血弧菌的主要致病物质
Ag与Ab结合的部位是：VH+VL
Ag决定基是: 决定Ag特异性最小化学基团
HIV造成免疫系统的多种功能发生缺陷的主要原因是: T4淋巴细胞耗竭
EBV除引起人类皮肤和黏膜的疱疹样病变外，还与下列人类鼻咽癌疾病密切相关
核衣壳是病毒粒子的主要结构，核衣壳是由衣壳和核酸成分组成的
做补体结合试验前血清加热灭活以破坏它所含有的补体，通常羊血清用58℃温度灭活
我国于1981年开始用地鼠肾细胞疫苗，近几年又开始应用更为先进的狂犬病疫苗，这种疫苗是:Vero细胞狂犬病疫苗
当进行抗球蛋白试验查不完Ab时，其中一个重要试剂是第二Ab，在抗球蛋白试验中第二抗体是----双价抗体
在CFT反应中有5种成份：Ag、被检血清、补体、溶血素和SRBC，CFT反应中补体的作用是: 非特异性结合。在CFT反应中为了查Ag，常常降低反应温度，称为冷CFT，冷CFT反应温度通常是：4℃
目前已知的可以在临床上造成出血热的病毒如下：
布尼亚病毒科：流行性血热、克里米亚刚果出血热
黄病毒科：登革出血热
丝状病毒科：艾博拉出血热。病毒在胞浆内繁殖，芽生释放。急性期标本接种于Vero细胞培养或藤鼠腹腔
与小儿顽固性腹泻有关的是：肠集聚粘附性大肠埃希氏菌
引起旅游者腹泻的最主要的是：肠产毒性大肠埃希氏菌
钩体病的主要传染源是：鼠类动物。发病一周内取血液，第二周以后取尿，有脑膜炎型症状者取脑脊液进行检查。
病毒检验基本技术
1．组织培养用玻璃器皿：硫酸、重铬酸钾液浸泡。
2．人工综合组织培养营养液：氨基酸、糖类、无机盐、维生素、辅助生长因子。MEM、RPMI 1640
3．细胞培养液分生长液、维持液，两者区别在血清含量不同。EDTA、胰蛋白酶分散作用。
4．细胞病变（CPE）、二甲亚砜（DMSO）细胞保护剂、
5．半数致死量（LD50）--导致半数动物死亡的细菌感染量。是评价化学毒物急性毒性大小最重要的参数。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受试后14天内总死亡数）
最小全数致死量（MLD）--引起全部动物死亡的最小感染剂量。半数感染量（ID50）--导致半数组织培养细胞发生感染的细菌数量或毒素剂量。TCID50—半数细胞培养物感染量。
一、致死剂量LD: (1)绝对致死剂量LD100 (2)最小致死剂量LD01 (3)最大耐受剂量LD0
二、效应、反应、剂量—效应、剂量—反应、关系曲线
6．超过滤法：用不同孔径的火棉胶滤膜过滤病毒悬液。
7．中和抗体抗病毒机制：改变病毒表面的构型，阻止病毒吸咐、穿入易感细胞进行繁殖。
8．迟发感染的特点：又称慢发病毒感染。潜伏期很长可达数月、数年或数十年之久。一旦症状出现，多为亚急性、进行性，并造成死亡。
包涵体----病毒在增殖过程中使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构，在光学显微镜下可见，多为圆形、卵圆形或不定形。
9．引起脑膜炎的肠道病毒：肠道病毒70型、肠道病毒71型、柯萨奇A组16型、脊髓灰质炎病毒。
10. C6/36是白蚊伊蚊细胞：分离登革热、乙脑病毒。
11. 蓄积系数经值：＜1高度、1—3明显、3—5中度、＞5轻度。
12. 协同作用---一种物质的存在能促进其他物质效应的作用。
13.病毒病的常规实验室诊断指----病毒的分离和鉴定、形态学检查、免疫学鉴定、分子生物学鉴定。
14.空斑试验---用于测定病毒的感染力。
15. Versen----又称EDTA
16. 病毒的形态学检查方法---电子显微镜（EM）、光学显微镜、超速离心法、超过滤法、X射线晶体衍射法。
17. Alsever液---是一种红细胞保存液，含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。
18. 常用的细胞培养液：MEM、1640。加入HEPES具有较强的缓冲能力。
19. 中和试验----必须制备高效价免疫血清或取高滴度病人恢复期血清。
20. 原位杂交----可直接检测或定位细胞内毒基因。
21. 乙脑病毒主要存在于血清中，用一于分离病的血清一般不加抗凝剂。
22. 麻疹病毒主要吸附在白细胞上，加抗凝剂可提高分离率。
23. 鼻咽拭子的除菌处理：加抗生素终浓度20 000U/ml，4℃作用4小时，2000转/ min，离心20分
去年微生物重点 1、分类学： （1）进化树； （2）以前分类和现代分类差别 2、生态学： （1）结构和信息的传递与交流；结构和功能； （2）肠道生态学的安全性； （3）极端生态环境：从分子机制上解释微生物怎么存活，机制上总结归纳，从角度上分析；（4）环境样品中怎么样认识它，微生物的结构（复杂体系中）； （5）结构特征反应生态学效应。 3、代谢： （1）代谢网络； （2）NRPS模型：核糖体和非核糖体的形成机制； （2）细胞的生理过程来考虑，代谢网络对微生物的影响。 4、生理学： （1）微生物的发育，细菌的分裂（关键事件）； （2）菌丝发育：内因子的影响； （3）异核体和单孢子形成关系； （4）孢子形成机制； （5）表型联现象； 5、发酵过程控制： （1）哪些因素对过程产生影响：泡沫，溶氧，染菌等； （2）应用微生物的开发从哪些方面考虑。
一、分类学： （1）进化树； 微生物的进化是指微生物与其生存环境相互作用过程中，其遗传系统随时间发生一系列不可逆的改变，在大多数情况下，导致微生物表型改变和对生存环境的相对适应。 系统发育是指生物进化的历史。 生物进化测量指征 一、能标示生物进化的指征分子 二、作为进化标尺的生物大分子的选择原则 三、16S rRNA是最佳的生物进化的指征分子，16S rRNA被普遍公认为是一把好的谱系分析的“分子尺” 1、rRNA具有重要且恒定的生理功能。 2、在16S rRNA分子中，含有高度保守、中度保守序列区域和 高度变化的序列区域。 3、16S rRNA分子量大小适中，便于序列分析； 4、和真核生物中的18S rRNA同源 四. 16S rRNA序列的顺序和进化 微生物间16S rRNA序列变化量越大，亲缘关系越远。 进化树是由相互关联的分支线条做成的图形。进化树具有时空概念。分支线条代表着属或种等分类单位；分支末端代表着某种生活着的生物个体。树还有时间尺度，其分支长度代表着已经发生在两线条间的分子进化时间距离。进化树可以是有根树也可是无根树。 进化树在生物学中，用来表示物种之间的进化关系，又称“系统树”、“系谱树”。生物分类学家和进化论者根据各类生物间的亲缘关系的远近，把各类生物安置在有分枝的树状的图表上，简明地表示生物的进化历程和亲缘关系。在进化树上每个叶子结点代表一个物种，如果每一条边都被赋予一个适当的权值，那么两个叶子结点之间的最短距离就可以表示相应的两个物种之间的差异程度。从进化树中还可看出：生物进化有一个规律，都是从水生到陆生，从低等到高等，从简单到复杂。 （2）以前分类和现代分类差别 1、经典微生物分类鉴定手段
临床微生物学检验技术复习练习试题 厌氧性细菌及检验 选择题 A 型题 1．下列产生外毒素的细菌中哪种细菌产生的毒素引起食物中毒 A 霍乱弧菌 B 肉毒杆菌 C 白喉杆菌 D 链球菌 E 破伤风杆菌 2．预防和治疗破伤风的方法是: A 清创处理 B 有效抗生素治疗 C 注射破伤风抗毒素血清 D A+B E A+B+C 3．当一民工因铁钉深刺足底造成外伤送医院急诊时，医生应首先考虑给予注射 A．破伤风类毒素 B．破伤风抗毒素 C．白百破三联疫苗 D．丙种球蛋白 E．破伤风菌苗 4.王某，48岁，建筑工人；因牙关紧闭、四肢痉孪而入院。8天前，右脚被铁钉扎伤，伤口深，但几日后自愈。5日后右腿有些麻木和疼痛，且咀嚼不便，吞咽困难，最后全身抽搐，四肢痉挛。入院诊断为破伤风，请问下述哪项是最佳治疗原则 A 注射青霉素 B 注射破伤风抗毒素和白百破疫苗 C 注射破伤风抗毒素和青霉素 D 注射破伤风抗毒素 E 注射青霉素和白百破疫苗 5．鉴定破伤风杆菌有无致病性的最重要的根据是 A G+细长杆菌 B 顶端圆形芽孢 C 有周身鞭毛 D 专性厌氧生长 E 产生特异性外毒素 6．破伤风梭菌除致破伤风病外，还能引起何种疾病E A．菌血症 B．食物中毒
C．组织坏死 D．坏死性肠炎 E．以上均不是 7．下列搭配哪项不恰当： A 大肠杆菌EHEC组——出血性肠炎 B 炭疽杆菌——气性坏疽 C 破伤风杆菌——脐带风 D 淋球菌——尿道炎 E 脑膜炎球菌——流行性脑脊髓膜炎 8．不是肉毒梭菌特点的是 A 芽胞位于菌体次极端，菌体呈网球拍状 B 严格厌氧 C 致病物质主要是肉毒毒素 D 引起疾病主要是细菌性食物中毒 E 肉毒毒素作用机制是阻止神经组织释放乙酰胆碱 B型题 A 常因滥用抗生素所致的疾病 B 常经呼吸道所致的疾病 C 常经消化道所致的疾病 D 常经产道所致的疾病 E 常因战伤所致的疾病 1．假膜性肠炎 2．气性坏疽 3．肉毒中毒 X型题 1．可能引起食物中毒较常见的细菌有 A 金葡菌 B 伤寒杆菌 C 产气荚膜杆菌 D 破伤风杆菌 E 副溶血性弧菌 2．产气荚膜芽孢梭菌引起的疾病有 A 气性坏疽 B 坏死性肠炎 C 产褥热 D 食物中毒 E 伪膜性肠炎 3．有迁徙性生长现象的是 A 链球菌 B 变形杆菌
《微生物检验技术》期末考试试题(A 卷) 一、名词解释(每小题3分，共15分) 1、菌落 2、正常菌群 3、消毒 4、噬菌体 5、最小抑菌浓度（MIC ） 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊结构 有 、 、 、 。 2.细菌生长繁殖的条件是 、 、 和气体。 3．病原菌的致病作用与 、 及 有密切关系。 4.诊断血清是用 免疫家兔等动物后取其 而制成的。一般置于 保存，使用时应避免 ， 降低效价。
5．K—B法中抑菌圈直径的大小与药物的最低抑菌浓度呈关系，即抑菌圈愈大，MIC值、细菌对药物的敏感程度。 6．、和可作为甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌的鉴别试验。 7．淋病奈瑟菌主要以方式传播，引起。 8.细菌对待测药物的敏感程度可分为、、 三级。 三、选择题(每小题1.5分，共30分)： 1、属于非细胞型微生物的是（） A、真菌 B、细菌 C、放线菌 D、病毒 E、螺旋体 2、革兰染色所用染液的顺序是（） A、稀释复红—碘液—95％乙醇—结晶紫 B、稀释复红—95％乙醇—碘液—结晶紫 C、结晶紫—碘液—95％乙醇—稀释复红 D、结晶紫—95％乙醇—碘液—稀释复红 E、稀释复红—结晶紫—碘液—95％乙醇 3、靛基质试验又称（） A、甲基红试验 B、尿素分解试验 C、硫化氢生成试验 D、吲哚试验 E、糖发酵试验 4、对人体无害的细菌代谢物是（）
A、热原质 B维生素 C、外毒素 D、内毒素 E、侵袭性酶 5、正常人体不存在细菌的部位是（） A、体表 B、口腔 C、大肠 D、尿道口 E、血液 6、实验室对接种针（环）、试管口的灭菌方法是（） A干烤法 B、流通蒸汽法 C、烧灼 D、焚烧 E、煮沸法 7、卡介苗是由何种变异而产生的（） A、形态变异 B、结构变异 C、毒力变异 D、耐药变异 E、酶活性变异 8、病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起严 重的全身症状，称为（） A、毒血症 B、菌血症 C、败血症 D、脓毒血症 E、 病毒血症 9、哪种动物不是微生物学检验中常用的实验动物（） A、小白鼠 B、豚鼠 C、裸鼠 D、家兔 E、马 10、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点（） A、凝固酶试验阳性 B、产生溶血素 C、分解 甘露醇 D、产生耐热核酸酶 E、胆汁溶菌试验阳性 11、在普通琼脂平板上生长的化脓性细菌是（） A、金黄色葡萄球菌 B、乙型链球菌 C、肺炎
一、选择题(A型): !、下列细菌中哪一种细菌在血平板上一般不出现溶血环? A、金黄色葡萄球菌 B、表皮葡萄球菌 C、甲型链球菌 D、肺炎双球菌 2、进行玻片法血浆凝固酶试验不需要下列哪种材料? A、免血浆 B、生理盐水 C、2%红细胞悬液 D、待检细菌 3、UMI系统不包括下列哪一项试验? A、尿素酶 B、甲基红 C、靛基质 D、动力 4、麦康凯培养基和克氏双糖铁共有的成分是: A、葡萄糖 B、酚红 C、中性红 D、乳糖 5、对浓汁标本进行细菌学鉴定,下列哪一项试验一般不包括在内? A、涂片染色镜检 B、血平板分离培养 C、血浆凝固酶试验 D、抗"O"试验 6、乙链在血清肉汤中的生长情况是： A、完全沉淀生长 B、均匀混浊生长 C、部分沉淀生长 D、形成菌膜 7、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性： A、分解乳糖产酸产气 B、分解葡萄糖生成丙酮酸 C、生成甲醇、甲醛 D、以上全部 8、下列哪一项不符合霍乱弧菌的特点 A、有动力 B、抵抗力较强 C、耐碱不耐酸 D、在自然界广泛存在，人是唯一易感者 9、对于一个脓汁标本，首先应进行的检验步骤是： A、涂片镜检 B、接种血平板 C、含硫氨基酸 D、苯丙氨酸 10、抗"O"试验管法中，溶血素应预先用还原剂处理，原因是： A、还原被氧化的S溶血素，恢复溶血能力 B、溶血素O对热不敏感 C、溶血素S对氧敏感 D、以上全错 11、观察乙型溶血性链球菌典型形态，选择哪一种培养基可得理想结果： A、普通琼脂平板 B、普通肉汤 C、血琼脂平板 D、血清肉汤 12、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？ A、低温 B、保温 C、防干燥 D、快速 13、区别志贺氏菌和沙门氏菌可采用下列哪种试验？ A、氧化酶试验 B、乳糖发酵试验 C、葡萄糖发酵 D、动力试验 14、下列哪一项可用于区别肺炎双球菌和甲型链球菌？ A、胆汁溶菌试验和甘露醇发酵试验 B、溶血试验和胆汁溶菌试验 C、菊糖发酵试验和胆汁溶菌试验 D、溶血试验和菊糖发酵试验
巴斯德效应：在有氧条件下。兼性厌氧微生物终止发酵，进行有氧呼吸，这种呼吸抑制发酵的现象称为巴斯德效应。即呼吸抑制作用。 巴斯德的贡献：1.证实了微生物活动和否定了微生物自然发生学说；2开创了免疫学——预防接种。3.发酵的研究 ；4.巴斯德消毒法，观察丁醇发酵时发现厌氧生命，提出好氧厌氧属于。 柯赫的贡献：1设计了分离和纯化细菌的方法：划线法、混合平板法。2.设计了培养细菌用的肉汁胨培养液和营养琼脂培养基。3.设计了细菌染色技术。4.提出柯赫法则：（证明某种生物是否为某种疾病的病原的基本原则）i.病原体微生物一定伴随着病害而存在; ii; 必须能自原寄主分理处这种微生物，并培养成为纯培养; iii. 分离培养出的病原体比能在实验动物身上产生相同的症状 iiii 必须自人工接种发病的寄主内，能重新分离出同一病原微生物并培养成纯培养。 3．试述染色法的机制并说明此法的重要性。 答：革兰氏染色的机制为：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。G+由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。反之，G-细菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时，在经沙黄等红色染料复染，就使 G-细菌呈红色，而 G+细菌则仍保留最初的紫色。 此法证明了 G+和 G-主要由于起细胞壁化学成分的差异而引起了物理特性的不同而使染色反应不同，是一种积极重要的鉴别染色法，不仅可以用与鉴别真细菌，也可鉴别古生菌。 5. 试述几种细菌细胞壁缺损型的形成，特点和实际意义。 自发缺壁突变：L 型细菌 实验室中形成 彻底除尽：原生质体 人工方法去壁 部分去除：原生质球 自然界长期进化中形成：支原体 实际意义：原生质体和原生质球比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，故是遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。 L 型细菌：细菌在某种环境条件下（如低浓度青霉素）因基因突变而产生的缺乏细胞壁的遗传性能稳定的变异类型。
检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级） 1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名--VRir us 结尾的单词,亚科名--VRir inae结尾的单词,科名--VRir idae结尾的单词。目名—VRir ales。2004年ICTV 公布病毒分为：73个科、11个亚种、289个属。 2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。 3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。 各药敏纸片间距不少于24mm，距平板内缘不小于15mm。 药物敏感实验判定标准：抑菌圈直径（毫米）：20以上极敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。 多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。 4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CIE）、免疫印迹技术。 5.病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。 PCR技术—是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60℃（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5’→3’端延伸，合成与模板互补的DNA链。），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR特异性的决定因素，PCR反应中TaqDNA聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。 变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性发生改变。3）增色效应。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"，Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA的变性(单链)状态。 基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）—主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。 核酸杂交（基因探针杂交技术）--是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率＞70%（≥69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在20%--60%同一属内不同菌种，同源性
临床微生物学检验技术试题及答案 A1题型 1. 机体抵抗病原微生物的屏障结构包括 A、皮肤与粘膜 B、血脑屏障 C、胎盘屏障 D、免疫系统 E、A、B和C 答案E 2. 有关内毒素的描述哪项是错误的 A、均由革兰氏阴性菌产生 B、其化学成分为脂多糖 C、160℃，2~4小时才被破坏 D、毒害效应具有组织器官选择性 E、毒性作用较弱 答案D 3. 下列描述哪项是错误的 A、病原菌致病力的强弱度称为毒力 B、毒力主要由侵袭力和毒素所决定 C、破伤风毒素属于内毒素 D、侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力 E、以上均不是 答案C 4. 下列哪种成分不属于外毒素 A、脂多糖 B、痉挛毒素 C、肉毒毒素 D、表皮剥脱毒素 E、霍乱肠毒素
答案A 5. 下列哪种成分不属于外毒素 A、金黄色葡萄球菌肠毒素 B、产毒性大肠杆菌肠毒素 C、白喉毒素 D、表皮剥脱毒素 E、类脂A 答案E 6. 内毒素的毒性作用包括 A、发热反应 B、白细胞反应 C、内毒素血症与内毒素休克 D、以上都是 E、A和C 答案D 7. 慢性志贺菌感染的病程一般在（）以上 A、两周 B、一个月 C、两个月 D、六周 E、七周 答案C 8. 志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为 A、一天之内 B、1-3天 C、5-7天 D、7-8天 E、8天以后 答案B 9. 下列关于结核分支杆菌描述正确的是
A、类脂质为胞壁中含量最多的成分 B、产生外毒素 C、产生内毒素 D、耐药性低 E、一般采用革兰氏染色 答案A 10. 我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过（）个大肠杆菌 A、1 B、3 C、5 D、7 E、8 答案B 11. 大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A、产酸 B、产酸产气 C、产酸不产气 D、产气不产酸 E、以上都不产生 答案B 12. 下列何种细菌为革兰氏阴性菌 A、脑膜炎奈瑟菌 B、结核分支杆菌 C、铜绿假单细胞 D、枯草芽孢杆菌 E、白喉棒状杆菌 答案C 13. 下列何种细菌为革兰氏阳性杆菌 A、大肠杆菌 B、铜绿假单细胞
食品微生物学检验技术（专科）作业题 一、简答题（每题15分，共4题，共60分） 1. 请简述革兰氏染色的原理及操作中应注意的问题。 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。 应注意的问题。 2.请简述细菌培养中所用的培养基的种类及各自的用途。 常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。 营养肉汤用于一般细菌培养、复壮、增菌等，也可用于消毒剂定性消毒效果测定营养琼脂培养基是一种无选择性的较低营养成分的固体培养基,主要用于细菌菌落计数,也可以用于细菌的传代和增菌,但一般不用于细菌的鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态特征）.只适合营养要求不高的细菌生长. 3.平板菌落计数原理。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，
根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量 4.食品中大肠菌群检测的意义。 食品的微生物学指标主要包括菌落总数、大肠菌群和致病菌等三个项目。其中菌落总数和大肠菌群是最重要、最常检的检验项目。 检测食品中的菌落总数，可以了解食品在生产中，从原料加工到成品包装受外界污染的情况．从而反映食品的卫生质量。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差，遭受病原菌污染的可能性越大。而菌落总数仅少量存在时，病原菌污染的可能性就会降低或者几乎不存在。但上述规则也有例外，有些食品成品的菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖并已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存留于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸乳等，本身就是通过微生物的作用而制成的，且是活菌制品。因此，菌落总数的测定对评价食品的新鲜度和卫生质量有着一定的卫生指标的作用，但本能单凭此一项指标来判定食品的卫生质量，还必须配合大肠菌群和致病菌等检验，才能作出比较全面、准确的评价。大肠菌群是水源污染的指示菌，当饮用水中检查出大肠菌群时，即证实水已被粪便污染，对人是有害的，是不卫生的。同样，食品中若有大肠菌群存在，也会影响人的健康 二、论述题（每题20分，共2题，共40分） 1. 纯净水样品中的菌落总数的检测方法。 国家饮用水标准GB 5749-85规定，菌落总数不得超过100 cfu/g(ml)，所用 的方法是稀释平板计数法。平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌
一.卫生微生物学的研究对象 1.环境中与人类相关的微生物即卫生微生物 2.卫生微生物所处的环境：物理环境和生物环境 二.卫生微生物学的应用及研究前景 1.在感染性疾病中的控制和治疗及其预防的应用 2.在生物危害和恐怖中的应用 3.在生物病原性突发事件中的应用 4.在科学发展和研究中的应用 5.在制定国家标准和行业规范服务中的应用 三.微生物与环境相互作用的三个基本规律 1.限制因子定律：存在于稳定环境中，任何生物的生物量取决于环境中该生物生长所需的最低营养浓度。 2.耐受性定律：是指生物对于环境中生态因子能耐受的范围。 3.综合作用定律;一个生物或一群生物的生存和繁殖取决于综合环境 四.微生物种群之间的相互作用类型 1.互生关系：偏利互生.互利互生.互惠互生 2.寄生关系 3.捕食关系 4.竞争关系 5.拮抗关系 6.种间共处 五.微生物生态研究的应用 1.在病因研究中的应用 2.在认识疾病本质中的应用 3.在疾病防治中的应用 4.在环境污染研究中的应用。 六.真菌包括哪些微生物，水体富营养化于哪种藻类相关 酵母菌.霉菌.丝状菌.类酵母菌甲藻海洋赤潮
七.什么是蓝藻菌，其中哪几属与水体富营养化有关 1.蓝藻菌是一种原核细胞型微生物，含叶绿素A，能进行光合作用 2.鱼腥藻属，颤藻属，微囊藻属 八.放线菌的一般特征是什么 原核微生物，其细胞壁含有胞壁酸，对抗生素敏感，无性生殖，大多属革兰阳性菌，体积比细菌大，以um计算，菌落形态介于霉菌和细菌之间，多数为腐生菌，厌氧或微需氧。 九.微生物检测时样品的采集原则 1.注意采样的代表性 2.样品的采集原则：避免采样时外界微生物对于样品的新污染，避免采样时微生物的杂灭作用和引入新的抑菌物质，保护目的微生物，详细的样品标记。 十.什么是卫生指示微生物，其选择标准是什么 1.是指用以指示样品的卫生状况和安全性的微生物 2.标准：数量大，易于检出，经济，简便，方便，效率高，具有一定的代表性，即数量发生变化时具有明显的反应。 十一.为什么检测指示微生物能反应样品的安全性 1.致病微生物种类繁多，很难分别分离和鉴别 2.分离鉴别致病菌需时长，很难满足实际需求 3.致病菌的数量少，检测方法灵敏度不高，容易产生假阴性结果 4.分离鉴别致病菌花费较高，对技术人员的要求也较高 十二.影响消毒灭菌效果的因素 处理剂量.微生物的种类和数量.温度.湿度.酸碱度.化学拮抗物质.穿透力
《微生物学与检验》题库及答案 一.名词解释 1.医院感染 2.肥达反应 3.内基小体 4. 噬菌体： 5.血浆凝固酶 6.败血症 7.灭菌 8.药物敏感试验 9.外 - 斐氏试验 10.L 型细菌 11.菌群失调：12.微生物 13.细菌 14.最小抑菌浓度 15.菌落 16.汹涌发酵 17.无菌操作18.流感杆菌“卫星现象” 19.培养基 20.包涵体 21.正常菌群 22. 内毒素 23. 干扰现象： 24.菌血症 25菌丝： 二.填空题 1 L 型细菌是指（）。 2 杀灭物体上所有微生物的方法称为（）。 3 细菌 H-O 变异是指（）。 4 药敏试验所用标准培养基是，所用菌液相当于（）个细菌／ ml ，细菌接种采用（）划线接种法。 5 细菌致病因素包括（）、（）和（）。 6 细菌引起的全身感染包括（）、（）、（）和（）四种类型。 7 不染色标本检查主要用于观察细菌的（）。 8 影响革兰染色结果的关键步骤是（）。 9 有动力细菌在半固体培养基中的生长现象是穿刺接种线（），无动力细菌穿刺接种线（）。 10 糖发酵试验用于观察细菌分解糖是否产（）和（）。 11 靛基质试验的原理为，细菌产生的色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸而生成（），此代谢产物与加入的试剂反应，生成（）。 12 链球菌根据溶血现象分为（）、（）和（）三种类型。 13 葡萄球菌触酶试验结果为（）性，链球菌触酶试验结果为（）性。 14 呈现脐窝状菌落的球菌是（）。 15 抗 O 试验是测定病人血清中（）抗体效价的试验，用于风湿热等疾病的辅助诊断。 16 血平板上呈现草绿色溶血环的病原性球菌是（）和（）。 17 IMViC 试验包括（）、（）、（）和（）四项试验。 18 分解乳糖的细菌在肠道选择平板上呈现（）菌落，不分解乳糖则为（）菌落。 19 KIA 斜面红色表明，底层黄色、有气泡表明（）、（），有黑色沉淀表明（）试验阳性 20 霍乱弧菌生物型包括（）和（）。 21 AIDS 的传染源是（）和（），传播途径主要有（），（）和（）。 22 真菌菌落有（）、（）和（）三种。 23 病毒培养方法有（）、（）和（）。 24 病毒的基本结构由（）和（）组成，有些病毒还具有（）。 25 流感病毒根据抗原结构不同分（）、（）、（）三型，其中容易引起流感大流行的是其中的（）型。 26 防止微生物进入机体和物品的操作方法称为（）。 27 含菌量较多的标本（如粪便）的接种通常采用（）接种法。
1-专业知识 1.血钾的参考值是：3.5~5.5mmol/L 2.红细胞绝对增加的疾病：真性红细胞增多病 3.以肾小球损害为主的疾病是：急性肾小球肾炎 4.乳糜尿多见于：丝虫病 5.下列选项中，CK-MB所占的比例最多的是：心肌 6.肝癌的诊断标志物组合最有意义的是：AFP AFU 7.具有收缩子宫，促进集合管对水重吸收作用的是：丙酮 8.鉴别发酵军与非发酵菌的关键性试验为：葡萄糖氧化-发酵试验 9.免疫增殖病最新分类方法依据为：增殖细胞形态 10.尿HCG检查不能协助诊断：乳腺癌 11.临床上需要进行血药浓度监测的是：青霉素 12.漏出液总蛋白与血清总蛋白的比值一般小于0.5. 13.免疫放射分析的英文缩写是：IRMA 14.下列不是检验免疫学检测对象的是：体液中各种酶活性 15.从病原微生物侵入开始出现临床症状为止的时期称为：潜伏期 16.关于辣根过氧化物酶（HRP）叙述正确的是:由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的一种卟啉蛋白质 17.肝脏功能受损后下列何项血清酶学指标下降：PCHE 假性胆碱脂酶 18.用于糖尿病肾病的早期诊断和监测的首选项目：尿微蛋白排泄率 19.血糖低于多少为低血糖：<2.8mmol/L 20.除了胰腺炎外：最易引起血AMY升高的疾病是：腮腺炎 21.属于细菌产生的侵袭性酶是：透明质酸酶 22.嗜碱性粒细胞计数升高常见于：慢性粒细胞白血病 23.筛查新生儿原发性甲状腺机能下降的指标：TSH 24.红细胞病理性升高见于：冷水刺激 25.关于人工主动免疫的叙述，正确的是：用减毒活疫（菌）苗，死疫（菌）苗等接种易感人群 26.不属于红细胞异常内容物的是：Auer小体 27.精密度无法直接测定，经常以不精密度表示量为：标准差 28.具有运载VA作用的是：视黄醇结合蛋白 29.室内质控图中控制限为：+-2S，表示95.45%的质控结果在此范围内 30.免疫组织化学染色，为最大限度保存抗原的免疫活性，不宜使用的固定剂是：含重金属的固定剂 31.关于中性粒细胞生理性变化的描述，不正确的是：婴儿期中性粒细胞为主（是淋巴） 32.尿中可出现本周蛋白的疾病是：巨球蛋白血症 33.慢性淋巴细胞白血病的特点不包括：多见于老年人 34.传播莱姆病的主要媒介：硬蜱 35.A群链球菌感染首选哪种抗生素：青霉素 36.HLA-I类分子存在于：绝大数有核细胞和血小板表面 37.免疫缺陷病特点，不正确的是：原发性免疫缺陷病可针对病因治疗，效果好！ 38.能引起机体产生抗磷脂抗体的靶抗原是血浆中：磷脂结合蛋白 39.AML-M2常见染色体畸变是t（8，21） 40.测量结果中系统误差与随机误差综合表示测量结果与真值的一直程度：准确度
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
微生物检验职称考试基础知识模拟试题(一) A1题型 1、脊髓灰质炎病毒主要经过下列哪一个途径传播 A、呼吸道途径 B、血液途径 C、破损皮肤 D、粪-口途径 E、性传播 正确答案D 2、脊髓灰质炎病毒主要侵犯下列哪一个部位 A、脊髓前角运动神经原 B、脊髓上部 C、脊髓下部 D、大脑 E、小脑 正确答案A 3、医院获得性肺炎中，以下列何种微生物引起的肺炎多见 A、流感嗜血杆菌 B、铜绿假单胞菌 C、肺炎链球菌 D、军团菌 E、肺炎支原体 正确答案B 4、伯氏疏螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠 E、猪 正确答案A 5、回归热螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠 E、猪 正确答案C 6、杜通氏螺旋体的主要传播媒介是 A、蜱 B、蚊 C、虱 D、鼠
E、猪 正确答案A 7、志贺菌属中，下列哪一项不正确 A、在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落 B、K抗原为型特异型抗原 C、O抗原为群特异性抗原 D、分解葡萄糖，产酸不产气 E、分解乳糖，产酸产气 正确答案E 8、下列细菌中，不属于肠杆菌科 A、伤寒沙门氏菌 B、空肠弯曲菌 C、奇异变形杆菌 D、痢疾志贺氏菌 E、枸橼酸杆菌 正确答案B 9、宋氏志贺氏菌有两个变异相，急性患者分离的菌株一般是 A、Ⅰ相 B、Ⅱ相 C、Ⅰ相或Ⅱ相 D、Ⅰ相和Ⅱ相 E、以上都不对 正确答案A 10、有关细菌培养基的描述，哪项是不正确的 A、按物理状态可分为液体、固体和半固体三类 B、SS培养基属于鉴别培养基 C、血琼脂平板属于营养培养基 D、蛋白胨水为常用的基础培养基 E、庖肉培养基属于厌氧培养基 正确答案B 11、肠道杆菌中，重要的荚膜或包膜抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、伤寒的Vi抗原 D、以上都是 E、以上都不是 正确答案C 12、新从病人分离的肠道杆菌菌落是 A、R型 B、S型 C、R或S型 D、R和S型 E、以上都不对 正确答案B
临床微生物学检验技术考试题库及答案 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～ 10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
食品微生物 1.微生物的特点：（1）微生物体积小，比表面积大（2）繁殖快，个体长不大（3）种类繁多，分布广泛（4）适应性强，易变异（5）观察和研究的手段特殊 2.细菌的基本形态：球状（球菌-单球菌，双球菌，链球菌，四链球菌，八叠球菌，葡萄球菌）、杆状（杆菌-长杆菌、短杆菌）、螺旋状（弧菌，螺菌） 3.细菌个体大小用微米（μm）表示，球菌的个体大小用直径表示，杆菌和螺旋菌的大小用宽度×长度表示 4.革兰氏染色的步骤：涂片、干燥、固定、初染、媒染、脱色、复染、镜检。 5.革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色 6.革兰氏染色的原理：利用细菌细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色；而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。 7.原核生物核糖体沉降系数为70S，真核生物的沉降系数是70S，细胞质中核糖体是80S。 8.糖被：某些细菌在一定条件下，在菌体细胞壁表面形成的一层厚度不定松散透明的粘液物质。 9.鞭毛是细菌的运动器官。 10.芽孢抗热性强的原因①芽孢中含有独特的DPA-Ca。Ca2+与DPA的螯合作用使芽孢中的生物大分子形成一定的耐热凝胶。 11.芽胞为什么具有较强的抗逆性 ? 因为芽胞具有以下特点：①.芽孢的自由水含量很低，代谢活动几乎停止，是一休眠体。②.芽孢壁厚而致密。a.可阻止细胞质吸水膨胀。b.热和化学试剂不易渗透进去起作用。 ③.芽孢内含有以Ca2+盐形式存在的2.6—吡啶二羧酸(DPA).④.芽孢中酶的相对分子质量较营养细胞中相应酶的小。 12.菌落：在固体培养基上，由单个细胞繁殖形成的肉眼可见的子细胞群体。 13.核糖体包括60S和40S两种主要亚基。 14.酵母菌芽植： 15.烈性噬菌体入侵增殖的5个阶段：吸附、侵入与脱壳、复制、装配、释放。 16.病毒的组成成分：核酸和蛋白质。 17.微生物六大营养素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水。 18.营养物质进入菌细胞的方式：单纯扩散、促进扩散、主动运输、基团移位。 19.高氏培养基用来培养放线菌；肉汤培养基用来培养细菌；无氮培养基用来培养固氮微生物；巴氏消毒的工艺条件是62-63℃30分钟；半固体培养基的主要用途是保藏菌种。 20.微生物生长量的测定方法：直接法、间接法、计数法。 21.微生物的生长曲线分为延滞期、对数期、稳定期、衰亡期。 22.影响微生物生长要素的4个因素：温度、PH、氧和水的有效利用率。 23.有害微生物的控制；防腐：利用一些理化因素使物体内外的微生物暂时处于不生长繁殖但又未死亡的状态。消毒：指杀死所有病原微生物的措施，可达到防止传染病的措施。灭菌：使用物理或化学因子使存在与物体中的微生物永久的丧失其活力。 24.发酵：利用好氧或厌氧微生物来生产有用代谢产物的一类生产方式。 25.有氧呼吸：在发酵过程中，葡萄糖经糖酵解作用形成的丙酮酸在厌氧条件下转变成不同的发酵产物。 26.无氧呼吸：厌氧和兼性厌氧微生物在无氧条件下进行的呼吸作用。 27.菌种保藏技术：斜面保藏法、液体石蜡保藏法、砂土保藏法、冷冻干燥保藏法、低温保藏法和液氮超低温保藏法。 28.防止菌种退化的措施①控制传代次数②创造良好的培养条件③利用不同类型的细胞进行移种穿代④采用有效的菌种保藏方法 29.菌种复壮的方法：纯种分离、宿主体内复壮、淘汰衰退个体。 30.共生关系：指两种生物共居在一起，相互协作、相依为命，甚至达到合二为一的一种相互关系。寄生关系：指一种小型的生物生活在另一种较大型的生物体内，从中获得营养进行繁殖，同时使后者蒙受损害甚至被杀死的现象。 31.鞭毛的化学成分为蛋白质，鞭毛的主要功能为运动 32.培养基应具备微生物生长所需要的五大营养要素是水、碳源、氮源、矿物质和生长因子 33.霉菌细胞壁的主要成分为几丁质 34.以有机物作为碳源和能源的微生物营养类型为化能异养型菌丝片断 35.细菌一般进行无性繁殖，即裂殖。酵母的繁殖方式分为有性和无性两类，无性繁殖又可分为芽殖，裂殖两种形式，有性繁殖时形成子囊；霉菌在有性繁殖中产生的有性孢子种类主要有子囊孢子，接合孢子；在无性繁殖中产生的无性孢子种类有孢囊孢子，分生孢子，厚垣孢子；放线菌以无性方式繁殖，主要形成分生孢子，也可以通过菌丝片断繁殖。 36.在酵母菌细胞结构中，细胞壁具有保护细胞及维持细胞外形的功能；细胞膜具有控制细胞对营养物及代谢产物的吸收和交换作用；细胞质是细胞进行生命活动，新陈代谢的场所；线粒体是呼吸酶类的载体，细胞的能量供应站；细胞核具有传递细胞遗传性状的作用。 37.微生物生长需要哪些基本条件？ 营养条件：C源、N源、无机盐、生长因子、水 环境条件：pH、温度、O2、氧化还原电位、渗透压适宜。 38.怎样观察、鉴别细菌、放线菌、酵母菌、霉菌？ 肉眼观察菌落形态：多数细菌、酵母菌的菌落表面都是光滑、湿润的。但是细菌的菌落比酵母菌的菌落要较小。霉菌、放线菌的菌落都是由菌丝体组成，但是霉菌的菌落质地疏松，呈絮状、蜘蛛网状、绒毛状。放线菌的菌落质地呈紧密绒状，表面硬，干燥 or较干燥，有许多皱折。形成孢子后，菌落表面呈粉状or颗粒状。1.2显微镜观察菌体形态：酵母菌、霉菌的菌体细胞较大，可用高低倍镜进行观察。在高低倍镜下多数酵母菌菌体细胞呈圆形、椭圆形。多数霉菌菌体细胞呈分支管状（丝状）。细菌、放线菌的菌体细胞较小，需用油浸镜进行观察。在油浸镜下细菌细胞呈圆形、杆状、螺旋形；放线菌菌体细胞呈分支管状（丝状）。根据以上特征可鉴别区分这四类细胞微生物。 39.乙醇对细菌芽孢的杀菌效力较差，为什么？（6分） 乙醇的杀菌作用机制：主要是⑴具有脱水作用，引起细胞蛋白质脱水变性，造成M死亡。∵①.芽孢中游离水含量很低。②.芽孢壁厚而致密。∴醇类物质对于芽孢菌一般没有作用。⑵.是脂溶剂，可损伤细胞膜 40.气调保藏食品的原理 ∵①.在有氧的环境下，霉菌、酵母菌、细菌都有可能引起食品变质。 而在缺氧，只有部分酵母菌和细菌能引起食品变质。 ②.在有氧的环境中,因M的生长、繁殖而引起的食品变质速度较快。 缺氧,由厌氧M生长引起的食品变质速度较缓慢。兼性厌氧M引起的食品变质速度也比在有氧环境中慢得多。即缺O2的环境中，a.可生长的M种类少；b.M生长的速度慢。∴在进行食品保藏时，可将食品储存在无O2环境（进行真空包装）or含高浓度CO2（40～80%）的环境中，以防止or 减缓M引起的食品变质。 41.嗜冷、嗜温、嗜热这三类微生物都有可能生长的温度范围是25-30℃。 42.从变质罐头中检出酵母菌和霉菌时，试分析引起罐藏食品变质的原因：从变质罐头中检出酵母菌和霉菌时，试分析引起罐藏食品变质的原因。 ∵酵母菌和霉菌的抗热性较差∴从变质罐头中检出酵母菌和霉菌，则引起罐藏食品变质的原因可能是：a.罐头裂漏，被M污染（∵这些M的抗热性较差）。 b. 罐头杀菌不完全残留霉菌孢子 c.罐内真空度不够∵霉菌只能在有氧的环境中生长 43.什么是细菌的生长曲线？其变化有什么规律：把少量的细菌接种到一定体积的，合适的，液体培养基中，在适宜的条件下培养；在一定的时间内（如24hr）每隔一定时间（如隔2hr）取样测菌数；以细菌数目的对数为纵坐标，以培养时间为横坐标。（即以细菌数目的对数对培养时间作图）由此画出的关系曲线称为生长曲线。变化的规律：在延滞期细胞数不增加，甚至略有减少。在对数期细胞数以几何级数增加在稳定期总菌数和活菌数都达到最大值；到衰亡期总菌数减少。 44..病毒结构有三种基本对称方式，即螺旋状对称型、二十面体对称型和复合对称型、根据碳源和能量来源可将微生物分成光能无机自养型、光能有机异养型、化能无机自养型和化能有机异养型四种营养类型鉴定食品腐败变质一般是从感官鉴定、化学鉴定、物理指标和微生物检验四个方面来进行的 45.生产酸奶的主要菌种是保加利亚乳杆菌、和嗜热链球菌 46.人体正常菌群的生理作用有生物拮抗作用、刺激免疫应答、合成维生素和降解食物残渣等。 47.设原菌液含菌数为100个/ml，经400分钟培养后含菌数增至109个/mL，则该菌的代时为 1.72分钟，400分钟繁殖 232 代。
临床微生物学检验 确保高压效果的可靠性。 【适用范围】 蒸气式高压锅。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。 2．打开排气阀。 3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。 4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。 5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。 6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在 0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分 钟，否则营养物质破坏。 7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。 8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。 操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
确保培养箱温度恒定。 【适用范围】 各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。 2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。 3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。 4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。 5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。 6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。 7．培养箱内外应保持清洁。 操作人员部门主管质量负责人 姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日