食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤维的酶-重量测定法
当前，膳食纤维在预防慢性病中有着广泛的作用，膳食纤维与人体健康关系的研究日益受到重视。现已知道可溶性膳食纤维的作用主要为调节血脂、血糖及调节益生菌丛。而不溶性膳食纤维主要的作用为肠道通便。目前市场上富含膳食纤维的食物、食品添加剂和保健食品越来越多，原有膳食纤维的检测方法已不适应当前需要。古老的方法只能测定粗纤维[1],该方法所测数值与总纤维含量有较大差异，两者之间也没有一定的换算系数。现有的洗涤剂法只能测定不溶性膳食纤维[2]，但不能测定可溶性膳食纤维，尤其是可溶性膳食纤维已明确具有保健功能，并成为保健功能食品中的功效成分，这就给膳食纤维成分更加细致的分类测定提出了要求。目前膳食纤维的测定方法可分为两大类：重量法和化学法。重量法较简单[3]，主要测定总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维。化学法则可定量地测定其中每一种中性糖和总的酸性糖(糖醛酸)，还可单独测定木质素[4]，但化学法受仪器设备制约，因而不适用于常规的膳食纤维分析。酶-重量法于20世纪80年代在国外首先发展起来，现已成为AOAC认可的分析方法，已被美国、日本、瑞典及北欧许多国家广泛采用。
1材料和方法
1.1原理：
分别用热稳定的α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化样品以去除蛋白质和淀粉。总膳食纤维(TDF)的测定是先酶解,然后用乙醇沉淀，将过滤的TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥后称重。不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是在样品酶解后即刻将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗,经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后将滤渣干燥、称重。TDF、IDF和SDF的量通过蛋白质和灰分含量进行校正。
1.2仪器：
意大利VELP公司CSF6&GDE型膳食纤维测定仪；
天平：精确至±01mg；
马福炉：温度控制在(525±5)℃；
干燥箱：温度控制在(105±3)℃和(130±3)℃。
1.3试剂：
全部操作均使用蒸馏水；
85%和78%的乙醇溶液；
丙酮：分析纯；
热稳定α-淀粉酶溶液：CatNoA3306，Sigma；
蛋白酶：CatNoP3910，Sigma，当天用MESTRIS缓冲液配制50mgml的酶溶液；
淀粉葡糖苷酶溶液：CatNoAMGA9913，Sigma；
硅藻土：酸洗(Celite545AW，NoC8656，Sigma)；
铬酸洗涤液；
MES-TRIS缓冲液：005molL,温度在24℃时pH值为8。
1.4测定方法
1.4.1样品制备
1.4.1.1固体样品 如果样品粒度>05mm,研磨后过03～05mm(40～60目)筛。
1.4.1.2高脂肪样品 如果脂肪含量>10%，用石油醚去脂。每克样品用25ml,每次提取
后静置片刻，再小心倾斜烧杯，慢慢将石油醚倒出,共洗3次。
1.4.1.3高碳水化合物样品 如果样品干重含糖>50%，每克样品每次用85%乙醇10ml
去除糖份,共洗3次，轻轻倒出，然后在40℃烘箱中不时翻搅干燥过夜，经研磨
后过05mm筛。
1.4.2酶解处理：
准确称取双份1000g左右样品(M1和M2)，置于高筒烧杯中。分别加入40mlMES-TRIS缓冲液，在磁力搅拌器上搅拌直到样品完全分散。热稳定的淀粉酶酶解处理：加100μl热稳定的淀粉酶溶液,低速搅拌。并在80℃水浴中反应30min。移出后冷却至60℃。用刮勺将烧杯边缘的网状物以及烧杯底部的胶状物刮离,以使样品能够完全酶解。并用蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。
蛋白酶酶解处理：在每个烧杯中分别加入100μl蛋白酶溶液。用铝箔覆盖,在60℃持续振摇反应30min。
pH值测定:30min后，搅拌并加入5ml0561molLHCl，然后保持在60℃，用1molLNaOH溶液或1molLHCl溶液调至最终pH为40～47。
淀粉葡糖苷酶酶解处理：搅拌同时加100μl淀粉葡糖苷酶溶液。用铝箔覆盖，在60℃持续振摇反应30min,温度应恒定在60℃。
1.4.3总膳食纤维的测定 在每份样品中加入预热至60℃的95%乙醇225ml，乙醇与样
品的体积比为4∶1。室温下沉淀1h。用15ml78%乙醇将硅藻土湿润和重新分布在预先称重的坩埚中。用适度的抽力把硅藻土吸到坩埚底板上。
酶解过滤，用78%乙醇和刮勺转移所有内容物微粒到坩埚中。抽真空，分别用15ml的78%乙醇、95%乙醇和丙酮冲洗残渣各2次，将坩埚内的残渣抽干后在105℃烘干过夜。将坩埚置干燥器中冷却至室温后称重，精确称至01mg。减去坩埚和硅藻土的干重，计算残渣重。
1.4.4蛋白质和灰分的测定 取平行的样品中的一份用GB-96052方法测定蛋白质。用
平行样的第二份分析灰分在525℃灼烧5h后，在干燥器中冷却，精确称至01mg,减去坩埚和硅藻土的重量，即为灰分重量。
1.4.5不溶性膳食纤维测定 称适量样品按142进行酶解，过滤前用5ml水湿润硅藻
土和重新分布在预先处理好的坩埚上，保持抽气状态使坩埚中的硅藻土成均匀的一层。将样品过滤并冲洗烧杯，用10ml70℃水洗残渣2次，然后再过滤并用水洗,滤液保留于高筒烧杯，用以测定可溶性膳食纤维。用抽滤装置，分别以15ml78%乙醇、95%乙醇和丙酮各冲洗残渣2次。按144方法用双份样品测定蛋白质和灰分。
1.4.6可溶性膳食纤维测定 估计不溶性膳食纤维过滤后的滤液的容积，加约4倍量已
预热至60℃的95%乙醇，或者将滤液和冲洗残渣的蒸馏水的混合液调至80ml，再加入预热至60℃的95%乙醇320ml。室温下沉淀1h。下面按142方法测定总膳食纤维的方法抽滤及称重。
1.4.7计算(TDF、IDF、SDF均用同一公式计算)
膳食纤维(DF,g100g)测定：DF={[(R1+R2)2]-P-A}[(M1+M2)2]×100
式中：R1和R2=双份样品残留物重量(mg)；
P和A分别为蛋白质和灰分重量(mg)；
M1和M2=样品重量(mg)。
2结果
2.1精密度
选取2个有代表性的样品,采用同样方法分别测定6次和一次测定6个平行样测定批间精密度。
食品营养标签管理规范 卫生部印发 2008年5月1日开始实施 推荐性法规：国家鼓励食品企业对其生产的产品标示营养标签。卫生部根据本规范的实施情况和消费者健康需要，确定强制进行营养标示的食品品种、营养成分及实施时间。 营养标签是指向消费者提供食品营养成分信息和特性的说明，包括营养成分表、营养声称和营养成分功能声称。 食品企业在标签上标示食品营养成分、营养声称、营养成分功能声称时，应首先标示能量和蛋白质、脂肪、碳水化合物、钠4种核心营养素及其含量。 膳食纤维的定义 膳食纤维（dietary fiber）膳食纤维是指植物中天然存在的、提取的或合成的碳水化合物的聚合物，其聚合度DP ≥ 3、不能被人体小肠消化吸收、对人体有健康意义的物质。包括纤维素、半纤维素、果胶、菊粉及其他一些膳食纤维单体成分等。 食品中产能营养素的能量折算系数 表 1 食物中产能营养素的能量折算系数 * 1 营养成分的标示
包括能量和核心营养素的标识以及宜标示的营养成分的标示，膳食纤维属于宜标识的营养成分。 膳食纤维包括纤维素、半纤维素、果胶、菊粉及其他一些膳食纤维单体成分。膳食纤维可根据其成分选择检测方法和标示方式。 1）以国标或GB/T 9822测定数据，标示为： 不溶性膳食纤维…克（g）； 2）以AOAC 、AOAC 方法测定数据，标示为： 膳食纤维…克（g）；也可标示为：膳食纤维、可溶性膳食纤维、不可溶性膳食纤维， 例如：膳食纤维…克（g） 或膳食纤维…克（g） --可溶性膳食纤维…克（g）（自愿） --不溶性膳食纤维…克（g）（自愿） 3）以AOAC其他方法测定的膳食纤维单体成分的数据，可标示出膳食纤维和单体成分如“膳食纤维（以xxx计）…克或g ”， 例如：膳食纤维（以菊粉计）…克（g） “零”数值的表达 当某食品营养成分含量低微，或其摄入量对人体营养健康的影响微不足道时，允许标示“0”的数值。可标示的“0”的界限值如下表： 表5 标示“0”的界限值
总膳食纤维测定的介绍 1、在α-淀粉酶的作用下，PH为6的磷酸盐缓冲溶液，95—100度下加热15分 钟。 2、用蛋白酶在PH为7.5时60度培养30分钟。 3、用淀粉葡(萄)糖苷酶在PH为4.0---4.6下60度培养30分钟。 4、4体积的95%的乙醇沉淀。 5、过滤。 6、用78%和95%的乙醇和丙酮清洗沉淀物。 7、烘干称重。 8、干样可以拿去做凯氏定氮，也可以在525度的马弗炉里灰份5个小时，然后 去称重。 不溶的膳食纤维的定义为进行烘干前用乙醇进行清洗并用温水洗涤后残留物。总膳食纤维（TDF）—不溶膳食纤维= 可溶膳食纤维（SDF） 标准酶法测定食品和饲料中的总膳食纤维量 1、研磨分级样品 2、在105度的烘箱烘干并恒重，在干燥箱中冷却到室温。 3、如果样品脂肪含量高于10%，需要用石油醚进行脱脂，在最终结果中再进行 校正。 4、称出0.5—1克的样品，并转移到400毫升的烧杯中。 5、用α-淀粉酶在50毫升的PH为6的磷酸盐缓冲溶液中培养15分钟，培养温 度为95—100度，温度可以用温度计控制。 6、冷却到室温，并用0.275 N 浓度的氢氧化钠溶液调节PH到7.5。 7、将烧杯和样品一起转移到磁力搅拌培养器中（GDE）。 8、在搅拌的情况下，加入蛋白酶在60度的情况下培养30分钟。 9、冷却到室温，用0.325的盐酸调节PH值为4.0—4.6。 10、在搅拌的情况下，加淀粉葡(萄)糖苷酶，在60度时培养30分钟。 11、通过加4体积的95%的乙醇沉淀可溶性膳食纤维，并且在室温下沉淀大 约1个小时。 12、称量已经添加了0.5克的硅藻土(作为助滤剂)玻璃坩埚. 13、将坩埚放在CSF6 (或者FIWE6)上,倒入上述操作的沉淀物,并用 V ACUUM进行吸液排空,用78%的乙醇溶液进行洗涤转移沉淀物。 14、用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤玻璃坩埚中的沉淀物两次，再用10毫 升95%的乙醇溶液洗涤两次，10毫升的丙酮溶液洗涤两次并排除废液。 15、在105度的烘箱中烘一夜，在干燥器中冷却。 16、计算结果，要减去坩埚的重量Q和硅藻土的重量。 17、减去不消化的蛋白和灰份含量来矫正结果。 总膳食纤维的测定（TDF） 方法原理：
原理 采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理: 植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。将72%硫酸处理后的残渣灰化，在 灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。 试剂的配制 中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2?2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7?10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后， 再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）； 1N 硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤； 中性洗涤纤维测定 准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。用20ml丙酮冲洗二次，抽滤。将玻璃坩埚置于105℃烘箱中烘2h后，在干燥器中冷却30 min称重，直称至恒重。 酸性洗涤纤维测定 准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100 ml酸性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。趁热用已知重量的玻璃坩埚抽滤，并用沸水反复冲洗玻璃坩埚及残渣至滤液呈中性为止。用少量丙酮冲洗残渣至抽下的丙酮液呈无色为止，并抽净丙酮。将玻璃坩埚置于105℃烘箱中烘2h后，在干燥器中冷却30 min称重，直称至恒重。 酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定将酸性洗涤纤维加入72%硫酸，在20℃消化 3h后过滤，并冲洗至中性。消化过程中溶解部分为纤维素，不溶解的残渣为酸性洗涤木质素和酸不溶灰分，将残渣烘干并灼烧灰化后即可得出酸性洗涤木质素和酸不溶灰分的含量。 结果计算 中性洗涤纤维含量的计算：NDF（%）=（W1－W2）/ W×100 式中： W1—玻璃坩埚和NDF重（gW2—玻璃坩埚重（g） W—试样重（g） 酸性洗涤纤维含量的计算：ADF（%）=（G1－G2）/G×100 式中： G1—玻璃坩埚和ADF重（g） G2—玻璃坩埚重（g） W—试样重（g） 半纤维素含量的计算：半纤维素（%）=NDF（%）－ADF（%） 纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）
分析检割————————————————７瓦五鬲面函面厂—鲤酶重量法测定食品中膳食纤维含量 汪红，祁玉峰，魏红 （河南省农科院农业质量标准与检测技术研究中心，河南郑州４５０００２） 摘要：对酶重量法测定食品中总膳食纤维、不溶性膳食纤维和可溶性膳食纤维含量的方法进行了改进，利用磷酸缓冲液取 代了价格较高的ＭＥＳＩ—ＴＲＩＳ缓冲液，并在过滤过程中采 用热过滤法以加快过滤速度。利用改进法对燕麦片和红 枣粉为原料与传统测定方法进行了比较，结果表明，两种 方法测定结果基本一致。同时，对改进法在不同实验室进 行了对比测定，发现该方法稳定性较好，可以代替传统的 ＡＯＡＣ测定方法。 关键词：酶重量法，膳食纤维，测定，改进 Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄ０ｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌ，ｓｏｌｕｂｌｅａｎｄｉｎｓｏｌｕｂｌｅｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒｉｎｆｏｏｄｓｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃ— ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃｗａｓｉｍｐｒｏｖｅｄｗｉｔｈｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｃｉｄ ａｍｏｒｔｉｚｅｌｉｑｕｉｄｒｅｐｌａｃｉｎｇｃｏｓｔｌｙＭＥＳＩ—ＴＲＩＳａｍｏｒｔｉｚｅ ｌｉｑｕｉｄ，ａｎｄｕｓｉｎｇｈｏｔ－ｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｓｐｅｅｄｉｎ ｔｈｅｆｉｌｔｒａｔｉｏｎＴｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＡＯＡＣｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｏｆｏａｔｍｅａｌａｎｄ ＣｈｉｎｅｓｅｄａｔｅｐｏｗｄｅｒＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓｉｎｔｅｓｔｉｎｇｂｙｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓａｒｅｖｅｒｙｃｌｏｓｅＴｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄｗａｓｔｅｓｔｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｈａｄａｇｏｏｄｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｃａｎ ｒｅｐｌａｃｅｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＡＯＡＣｍｅｔｈｏｄ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｎｚｙｍａｔｉｃ—ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；ｄｉｅｔａｒｙｆｉｂｅｒ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ 中图分类号：ＴＳ２０１．２＋３文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－０３０６（２００７）０９—０２０３—０３ 膳食纤维被称为继淀粉、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质和水之后的第七营养元素，它与人体的营养和健康有着密切的关系，因其具有较强的持油、持水、增溶和诱导有益微生物的作用而引起各国营养学家的关注。随着人民生活水平的１３益提高，迫切 收稿日期：２００７—０１—１５ 作者简介：汪红（１９６３一），女，副研究员，主要从事农产品和食品质量分析测试工作。 基金项目：河南省分析测试基金资助项目。需要对膳食纤维进行更深入的研究。因此，对测定食品中膳食纤维含量的方法进行研究提出了要求。目前已报道的膳食纤维的检测方法主要分为洗涤法和酶重量法两大类。洗涤法操作简单方便，但只能分析到不溶性纤维含量，不能适应用膳食纤维分析的需要。酶一重量法于２０世纪８０年代在国外首先发展起来，现已成为国际农业化学家协会（ＡＯＡＣ）认可和推荐的分析方法，也是目前公认的测定膳食纤维含量的准确方法。国内对利用该方法测定食品中膳食纤维含量的报道ｉＥｄ－＂，一方面除了该方法需要比较昂贵的膳食纤维测定仪外，另一方面试剂成本高，测定过程繁琐，尤其是沉淀过滤比较困难，持续时间长也是其重要原因。为了更好的利用该方法开展食品中膳食纤维含量的测定分析和研究，我们对酶一重量法进行了改进。 １材料与方法 １．１材料与仪器 燕麦片、红枣粉购于市场；膳Ａ－纤维粉河南双汇集团检测实验室提供；耐高温ｄ一淀粉酶Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ３３０６、蛋白酶ＣａｔＮｏＡ３９１０、葡萄糖苷酶ＣａｔＮａＡＭＧＡ９９１３、酸洗硅藻土Ｃｅｌｉｔｅ５４５ＡＷＳｉｇｍａ公司；磷酸缓冲液０．０８ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ为６±０．２；乙醇、丙酮、盐酸、氢氧化钠均为分析纯；实验用水为去离子水。 ２３００型全自动定氮仪瑞典ＦＯＳＳＴｅｃａｔｏｒ公司；ＦＯＳＳＴｅｃａｔｏｒ膳食纤维测定仪（包括恒温水浴摇床和过滤系统），ＡＥＬ一２２０型电子天平（精度±０．１ｍｇ），高温炉（温度５２５４－５℃），干燥箱（温度１０５４－ｌｏＣ）。 １．２实验方法 １．２．１实验原理分别用耐高温ＯＬ一淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化，以除去样品中的蛋白质和可消化淀粉，然后用８０％乙醇沉淀，将沉淀物过滤洗涤后干燥称重，再通过测定沉淀物中的蛋白质和灰分含量进行校正，分别获得总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维含量。 １．２．２样品的选取和制备选取具有代表性的试样，用四分法减至１００９，粉碎后全部过４０目筛，装于
食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤维的酶-重量测定法 当前，膳食纤维在预防慢性病中有着广泛的作用，膳食纤维与人体健康关系的研究日益受到重视。现已知道可溶性膳食纤维的作用主要为调节血脂、血糖及调节益生菌丛。而不溶性膳食纤维主要的作用为肠道通便。目前市场上富含膳食纤维的食物、食品添加剂和保健食品越来越多，原有膳食纤维的检测方法已不适应当前需要。古老的方法只能测定粗纤维[1],该方法所测数值与总纤维含量有较大差异，两者之间也没有一定的换算系数。现有的洗涤剂法只能测定不溶性膳食纤维[2]，但不能测定可溶性膳食纤维，尤其是可溶性膳食纤维已明确具有保健功能，并成为保健功能食品中的功效成分，这就给膳食纤维成分更加细致的分类测定提出了要求。目前膳食纤维的测定方法可分为两大类：重量法和化学法。重量法较简单[3]，主要测定总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维。化学法则可定量地测定其中每一种中性糖和总的酸性糖(糖醛酸)，还可单独测定木质素[4]，但化学法受仪器设备制约，因而不适用于常规的膳食纤维分析。酶-重量法于20世纪80年代在国外首先发展起来，现已成为AOAC认可的分析方法，已被美国、日本、瑞典及北欧许多国家广泛采用。 1材料和方法 1.1原理： 分别用热稳定的α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化样品以去除蛋白质和淀粉。总膳食纤维(TDF)的测定是先酶解,然后用乙醇沉淀，将过滤的TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥后称重。不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是在样品酶解后即刻将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗,经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后将滤渣干燥、称重。TDF、IDF和SDF的量通过蛋白质和灰分含量进行校正。 1.2仪器： 意大利VELP公司CSF6&GDE型膳食纤维测定仪； 天平：精确至±01mg； 马福炉：温度控制在(525±5)℃； 干燥箱：温度控制在(105±3)℃和(130±3)℃。 1.3试剂： 全部操作均使用蒸馏水； 85%和78%的乙醇溶液； 丙酮：分析纯； 热稳定α-淀粉酶溶液：CatNoA3306，Sigma； 蛋白酶：CatNoP3910，Sigma，当天用MESTRIS缓冲液配制50mgml的酶溶液； 淀粉葡糖苷酶溶液：CatNoAMGA9913，Sigma； 硅藻土：酸洗(Celite545AW，NoC8656，Sigma)； 铬酸洗涤液； MES-TRIS缓冲液：005molL,温度在24℃时pH值为8。 1.4测定方法 1.4.1样品制备 1.4.1.1固体样品 如果样品粒度>05mm,研磨后过03～05mm(40～60目)筛。 1.4.1.2高脂肪样品 如果脂肪含量>10%，用石油醚去脂。每克样品用25ml,每次提取 后静置片刻，再小心倾斜烧杯，慢慢将石油醚倒出,共洗3次。 1.4.1.3高碳水化合物样品 如果样品干重含糖>50%，每克样品每次用85%乙醇10ml 去除糖份,共洗3次，轻轻倒出，然后在40℃烘箱中不时翻搅干燥过夜，经研磨
纤维素的测定------比色法 纤维素由葡萄糖基组成，它是组成植物细胞壁的基本成分。其含量的多少关系到植物的机械组织是否发达，作物抗倒伏、抗病虫害的能力是否较强，并且影响到粮食作物、纤维作物和蔬菜作物等的产量和品质。 在各种粮食中纤维素的含量各不相同，与籽粒皮层厚薄成正比。同种粮食中，原粮纤维素 维素含量最高，加工粗加工精度越高，纤维素含呈越少，如小麦标准粉约O．7％．稻谷约9.0％，糙米约1.0％，白米约0 4％。因此，根据纤维素的含量的测定，可以判别籽粒皮层的厚薄，粮食加工精度高低和营养价值评估。 纤维素的测定方法有酸碱醇醚法、酸性洗涤剂法、碘量法及比色法。第一个是国标法，但比较繁琐，后者操作比较简单。 一、方法原理 纤维素是由葡萄糖基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖。然后在浓硫酸作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物。利用蒽酮试剂与糠醛类化合物的蓝绿色反应即可进行比色测定。 二、仪器和试剂 1．主要仪器恒温水浴、冰罐、电炉、玻璃坩埚、漏斗、定时钟、分光光度计等。 2．试剂60％H2SO4溶液、浓H2SO4。 2％蒽酮试剂：2g蒽酮溶解于100rnl乙酸乙酯中，贮置于棕色试剂瓶中。 纤维素标准液：准确称取100mg纯纤维素，放入100Inl量瓶中，将量瓶放入冰浴中，然后加冷的60％H2SO4 60—70ml，在冷的条件下消化处理20—30min，然后用60％H2SO4稀释至刻度，摇匀。吸取此液5．0ml放入另一50ml量瓶中，将量瓶放入冰浴中，加蒸馏水稀释刻度，则每毫升含100μg纤维素。 三、操作步骤 1．绘制纤维素标准曲线 （1）取6支小试管，分别放入0、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml纤维素标准液。然后分别加入2.00、1.60、1.20、0.80、0.40、0ml蒸馏，摇匀。则每管依次含纤维素0、40、80、120、160、200μg。 （2）向每管加0．5ml％蒽酮试剂，再沿管壁加5．0ml浓H2SO4，塞上塞子，微微摇动，促使乙酸乙酯水解，当管内出现蒽酮絮状物时，再剧烈摇动促进蒽酮溶解，然后立即放入沸水浴中加热10min ，取出冷却。 （3）在分光光度计上620urn波长下比色，测出各管消光值。 （4）以所测得的消光值为纵坐标，以纤维素含量为横坐标，绘制纤维素标准曲线。 2.样品的测定 （1）准确称取风干的样品100mg，放入100rnl量瓶中，将量瓶放入冰浴中，加冷的60％H2SO4。60—70ml，在冷的条件下消化处理半小时，然后用60％H2SO4。稀释至刻度，摇匀，用玻璃坩埚漏斗过滤。 （2）吸取上述滤液5．0ml，放入5ml量瓶中，将量瓶置于冰浴中，加蒸馏水释至刻度，摇匀。 （3）吸取上液2.0ml，加0.5ml 2％蒽酮试剂，再沿管壁加5．0ml浓H2SO4，盖上塞子，以后操
一、淀粉含量的测定(旋光法) (一)实验目的 1.熟习旋光仪的使用方法。 2.了解旋光仪测定淀粉的原理并掌握其具体方法。 (二)实验原理 淀粉(starch)是植物的主要能量贮藏物质，主要存在于种子、块根和块茎中。淀粉不仅是重要的营养物质，并且在工业上的应用也很广泛。 将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮，可使样品中淀粉轻度水解，同时由于钙离子与淀粉分子上的羟基络合，使淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α)，旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。 应注意的是，酸性氯化钙溶液必须保持pH 值2.30，密度1.30，加时间的长短也要控制在一定范围，以保证各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］恒定不变(20℃)。样品中其他旋光性物质(如糖分)必须预先除去。 (三)仪器、原料和试剂 仪器 植物样品粉碎机、离心机、分析天平；粗天平、旋光仪及附件、三角瓶、分样筛(100目)、布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵、离心管、小电炉。 原料 面粉或其他风干样品 试剂 1. 醋酸—氯化钙溶液： 500g 氯化钙溶于600mL 蒸馏水中，过滤至澄清，用比重计在20℃条件下调节比重 1.3左右，再滴加冰乙酸调pH 为 2.3。 2. 30％ZnSO4溶液 3. 15％K4Fe(CN)溶液 (四)操作步骤 1.样品准备 (1)称样脱脂：将样品风干、研磨，通过100目筛，精确称取约2.5g 样品细粉(要求含 淀粉约2g)，置于离心管内，加乙醚数mL 到离心管内，用细玻棒充分搅拌，离心，倾出上清液，再加入乙醚如此操作数次，以去除样品的大部分油脂、色素等成分(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。 收集上清液以备回收乙醚。大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。 (2)抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL 到离心管内，充分搅拌，然后离心， 倾去上清液，得到沉淀物。 (3)脱糖：加80％乙醇10mL 到离心管中，充分搅拌以洗涤沉淀物(每次都用同一玻棒)， 离心，倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。 2. 溶提淀粉 (1)加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10mL 加到装有脱脂样品的离心管中，搅 拌后全部倾入250mL 三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50mL 分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。 (2)煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在5min 内 快速煮沸，保持沸腾15～17min，立即取下三角瓶，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌并调节温度，防止烧焦或泡沫涌出瓶外，必要时加水保持液面高度。
1.1.1.1.1.3 食品安全国家标准 食品中膳食纤维的测定 （征求意见稿） 发布实施中华人民共和国卫生部发布
前言 本标准代替《食品中膳食纤维的测定》。 本标准与相比，主要变化如下： ——修改了方法适用范围； ——增加了膳食纤维、总膳食纤维、不溶性膳食纤维、可溶性膳食纤维的术语和定义；——修改了试剂顺序和文字格式； ——修改了总膳食纤维计算公式； ——添加了当食品中含有低分子质量可溶性膳食纤维时总膳食纤维计算方法的注释；——将酶重量法作为第一法，中性洗涤剂法作为第二法。
食品安全国家标准 食品中膳食纤维的测定 1 范围 本标准规定了食品中膳食纤维的测定方法。 本标准酶重量法适用于植物类食品及其制品中总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定；中性洗涤剂法适用于谷物原料中不溶性膳食纤维的测定。 本标准第一法为仲裁法。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 膳食纤维 指植物中天然存在的、提取或合成的、聚合度 的碳水化合物聚合物，不能被人体小肠消化吸收、对人体有健康意义，包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶、菊粉及其他一些膳食纤维单体成分等。 2.2 可溶性膳食纤维 指能溶于水的膳食纤维部分。 2.3 不溶性膳食纤维 指不能溶于水的膳食纤维部分，包括木质素、纤维素、部分半纤维素等。 2.4 总膳食纤维 可溶性膳食纤维与不溶性膳食纤维之和。 第一法总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定（酶重量法） 3 原理 干燥试样经热稳定α淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖苷酶酶解消化去除蛋白质和淀粉后，酶解液经乙醇沉淀、过滤，残渣用乙醇和丙酮洗涤，干燥后称重，即为总膳食纤维残渣。另取同样经酶解的酶解液直接过滤，用热水洗涤残渣，干燥后称重，即得不溶性膳食纤维残渣；滤液用倍体积的乙醇沉淀、过滤、干燥后称重，得可溶性膳食纤维残渣。扣除残渣中相应的蛋白质、灰分和空白即可计算出试样中总的、不溶性和可溶性膳食纤维的含量。 采用酶重量法测定的总膳食纤维包括不溶性膳食纤维和能被乙醇沉淀的高分子质量可溶性膳食纤维，如纤维素、半纤维素、果胶、其它非淀粉多糖及木质素等；不包括低分子质量的可溶性膳食纤维，如抗性麦芽糊精、果寡糖、低聚半乳糖、多聚葡萄糖等，及部分被加热破坏的抗性淀粉。 4 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为规定的二级水。
烟草根系常见测定指标及实验方法 一、烟草根系发生特点 烟草根属直根系，由主根、侧根和不定根三部分组成。烟草由苗床栽入大田后，主根受人为控制，经常萎缩，而侧根和不定根迅速发展成一庞大根群。1级、2级侧根的增长及根长密度在时间、空间上的动态变化与其地上地下关系的变化是一致的。烟草的根系数量的增加和活力的提高存在双峰现象：第1次出现在团棵期至旺长期。移栽后40d前（团棵期），烟草的生长中心在地下部，根系生长迅速，并且所形成的根分布在较浅的土层中。旺长期，生长中心从地下部转移到地上部，0?10cm 土层出现了大量不定根，因此0?10cm内1级、2级侧根根长密度表现为增长趋势。而其它各土层内由于物质供应的减少，根长密度表现为缓慢增长，甚至呈下降的趋势；第2次出现在打顶后的圆顶期。圆顶期，由于打顶使根系生长又出现一次高峰，各土层1级、2级侧根根长密度均表现出增长的趋势。因此打顶具有诱发侧根数量的增加和活力提高的作用。到后期，随着烟叶的 逐渐成熟，根系开始死亡，根系生长速度减缓，根长密度变化不大。烟草生育后期下层分枝密度减少，下层较细的侧根有机物质供应不足，导致衰老死亡而出现的相对减少。 二、衡量根系的指标 1、根系生物量 根鲜重在植物营养研究方面很有应用价值。养分吸收大多用根鲜重作参量。根鲜重容易测定，但准确程度与根外粘附水分有关，故受操作影响较大。 根干重对于养分和水分吸收不是个理想的参数，因为老而粗的根所占的重量很大，而吸收养分和水分的能力很小。但当了解植物地下部的生产力时，干重常作为估计的标准。在估算根冠比（R/S ）时，也要用根干重。测定根干重一般采用烘干重量法。 根系干重和鲜重：烟草根系从土壤中挖出、洗净后，用吸水纸或滤纸吸干根表面水分，用电子天平称取根鲜重。获得鲜重数据后装入牛皮带放入烘箱内，在80 C 下烘干，称其干重。 2、根系形态 根系形态特征包括根系体积、几何形状、长度、分布深度、根密度、分枝状况、根重、根表面积、根毛数量和根尖数等。根系形态与养分、水分的吸收能力有密切关系。在植物营养研究中，常用的根形态参数主要有根长、根表面积、根体积、根直径等。 2.1根数：根基部的根数。在洗净根系去掉地上部分后，先数基部的根数。
纤维素的测定比色法 纤维素由葡萄糖基组成，它是组成植物细胞壁的基本成分。其含量的多少关系到植物的机械组织是否发达，作物抗倒伏、抗病虫害的能力是否较强，并且影响到粮食作物、纤维作物和蔬菜作物等的产量和品质。 在各种粮食中纤维素的含量各不相同，与籽粒皮层厚薄成正比。同种粮食中，原粮纤维素 维素含量最高，加工粗加工精度越高，纤维素含呈越少，如小麦标准粉约0. 7% .稻谷约9.0%，糙米 约 1.0％，白米约0 4％。因此，根据纤维素的含量的测定，可以判别籽粒皮层的厚薄，粮食加工精度高低和营养价值评估。 纤维素的测定方法有酸碱醇醚法、酸性洗涤剂法、碘量法及比色法。第一个是国标法，但比较繁琐，后者操作比较简单。 一、方法原理纤维素是由葡萄糖基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖。然后在浓硫酸作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物。利用蒽酮试剂与糠醛类化合物的蓝绿色反应即可进行比色测定。 二、仪器和试剂 1. 主要仪器恒温水浴、冰罐、电炉、玻璃坩埚、漏斗、定时钟、分光光度计等。 2. 试剂60% H2S04 溶液、浓H2S04。 2%蒽酮试剂：2g蒽酮溶解于100rnl乙酸乙酯中，贮置于棕色试剂瓶中。 纤维素标准液：准确称取100mg 纯纤维素，放入100Inl 量瓶中，将量瓶放入冰浴中，然后加冷的 60% H2SO4 60—70ml,在冷的条件下消化处理20—30min,然后用60% H2SO4稀释至刻度，摇匀。吸取此液 5.0ml放入另一50ml量瓶中，将量瓶放入冰浴中，加蒸馏水稀释刻度，则每毫升含100⑷纤维素。 三、操作步骤 1 .绘制纤维素标准曲线 (1)取6支小试管，分别放入0、0.40、0.80 1.20 1.60、2.00ml纤维素标准液。然后分别加入 2.00 1.60 1.20、0.80 0.40、0ml 蒸馏，摇匀。则每管依次含纤维素0、40、80、120、160、200? (2)向每管加0. 5ml%蒽酮试剂，再沿管壁加5. 0ml浓H2SO4，塞上塞子，微微摇动，促使乙酸乙酯水解,当管内出现蒽酮絮状物时,再剧烈摇动促进蒽酮溶解,然后立即放入沸水浴中加热10min , 取出冷却。 ( 3)在分光光度计上620urn 波长下比色,测出各管消光值。 (4)以所测得的消光值为纵坐标,以纤维素含量为横坐标,绘制纤维素标准曲线。 2.样品的测定 (1)准确称取风干的样品100mg,放入 100rnl量瓶中，将量瓶放入冰浴中，加冷的60% H2SO4。60—70ml，在冷的条件下消化处理半小时，然后用60% H2SO4。稀释至刻度，摇匀，用玻璃坩埚漏斗过 滤。
食品中粗纤维的测定 一、目的与要求： l、了解与掌握植物类食品中粗纤维含量的测定方法与原理。 二、原理： 在硫酸作用下，样品中的糖、淀粉、果胶质和半纤维素经水解除去后，再用碱处理，除去蛋白质及脂肪酸，遗留的残渣为粗纤维如其中含有不溶于酸碱的杂质，可灰化后除去。 三、试剂： 1、1.25％硫酸； 2、1.25％氢氧化钾溶液； 3、石棉：加5％氢氧化钠溶液浸泡石棉，在水浴上回流8小时以上再用热水充分洗涤。然后用20％盐酸在沸水浴上回流8小时，再用热水充分洗涤，干燥。在600-700℃中灼烧后，加水使成混悬物，贮存于玻塞瓶中。 四、操作方法： 1、称取20-30克捣碎的样品(或5．0克干样品)，移入500毫升锥形瓶中，加入200毫升煮沸的1.25％硫酸，加热使微沸，保持体积恒定，维持30分钟，每隔5分钟摇动锥形瓶一次，以充分混合瓶内的物质。 2、取下锥形瓶，立即用亚麻布过滤后，用沸水洗涤至洗液不呈酸性。
3、再用200毫升煮沸的1.25％氢氧化钾溶液，将亚麻布上的存留物洗入原锥形瓶内加热微沸30分钟后，取下锥形瓶，立即以亚麻布过滤，以沸水洗涤2—3次后，移入已干燥称量的G2垂融坩埚或同型号的垂融漏斗中，抽滤，用热水充分洗涤后，抽干。再依次用乙醇和乙醚洗涤一次．将坩埚和内容物在105℃烘箱中烘干后称量，重复操作，直至恒重。 如样品中含有较多的不溶性杂质，则可将样品移入石棉坩埚，烘干称量后，再移入 550℃高温炉中灰化，使含碳的物质全部灰化，置于干燥器内，冷却至室温称量，所损失的量即为粗纤维量。 计算： X=G/m×100 X：样品中含粗纤维的含量，％； G：残余物的质量(或经高温炉损失的质量)，g； m：样品的质量，g。
45.4.07 AOAC Of f i c ial Method 985.29 To t al Di e tary Fi b er in Foods Enzymatic–Gravimetric Method First Ac t ion 1985 Fi nal Ac tion1986 AOAC–AACC Method Co d ex-Adopted–AOAC Method* A.Prin ci ple Du p li c ate test por t ions of dried foods, fat-extracted if con t ain i ng >10% fat, are gelatinized with Termamyl (heat-stable α-am y l ase), and then en z y m at i c ally di g ested with pro t e a se and amyloglucosidase to re m ove pro t ein and starch. (When an a l yz i ng mixed di e ts, al w ays ex t ract fat prior to de t er m in i ng to t al di e tary fi b er.) Four vol u mes of ethyl al c o h ol are added to pre c ip i t ate sol u b le di e tary fi b er. To t al res i d ue is fil t ered, washed with 78% ethyl al c o h ol, 95% ethyl al c o h ol, and ac e t one. Af t er dry i ng, res i d ue is weighed. One du p li c ate is an a l yzed for pro t ein, and other is in c in e r a ted at 525°C and ash is de t er m ined. To t al di e tary fi b er = weight res i d ue – weight (pro t ein + ash). B. Ap p a r a t us (a)Fritted cru c i b le.—Po r os i ty No. 2 (Py r ex No. 32940, coarse, ASTM 40-60 μm; or Corning No. 36060 Büchner, fritted disk, Py r ex, 60 mL, ASTM 40-60 μm). Clean thor o ughly, heat 1 h at 525°C, and soak and then rinse in H2O. Add ca 0.5 g Celite to air-dried cru c i b les and dry at 130°C to con s tant weight (≥ 1 h). Cool and store in des i c c a t or un t il used. (b) V ac u um source.—V ac u um pump or as p i r a t or equipped with in-line dou b le vac u um flask to pre v ent con t am i n a t ion in case of H2O backup. (c) Vac u um oven.—70°C.Al ter na tively,105°C air oven can be used. (d) Des ic ca tor. (e)Muf fle fur nace. (f)Wa t e r b a t h s.—(1)B o i l i n g.(2)C o n s t a n t tem p er a t ure.—Ad j ust a ble to 60°C, with ei t her multistation shaker or multistation mag n etic stir r er to pro v ide con s tant ag i t a t ion of di g es t ion flasks dur i ng en z y m atic hy d ro l y s is. (g) Beakers.—Tall-form, 400 or 600 mL. (h) Bal a nce.—An a lyt i cal,readability to0.1mg. (i)pH me t er.—Stan d ard i zed with pH 7 and pH 4 buff e rs. C. Re a gents (a) 95% Eth a n ol.—v/v. Technical grade. (b) 78% Eth a n ol.—Place 207 mL H2O into 1 L vol u m et r ic flask. Di l ute to vol u me with 95% ethyl al c o h ol. Mix and di l ute to vol u me again with 95% ethyl al c o h ol if nec e s s ary. Mix. One vol u me H2O mixed with 4 vol u mes 95% ethyl al c o h ol will also give 78% ethyl al c o h ol fi n al con c en t ra t ion. (c)Ac e tone. (d)Phos p hate buffer.—0.08M, pH 6.0. Dis s olve 1.400 g so d ium phos p hate dibasic, an h y d rous (Na2HPO4) (or 1.753 g dihydrate) and 9.68 g so d ium phos p hate monobasic monohydrate (NaH2PO4?H2O) (or 10.94 g dihydrate) in ca 700 mL H2O. Di l ute to 1 L with H2O. Check pH with pH me t er. (e) Al p ha-amylase (heat sta b le).—Termamyl. (1) Store in re frig er a tor.Based on Nel s on/Somogyi re d uc i ng sugar with sol u b le starch as sub s trate.—10 000 + 1000 units/mL (1 unit is de f ined as the amount of en z yme re q uired to re l ease 1 μmole re d uc i ng sugar equiv a l ents/min at pH 6.5 and 40°C). (2) Based on Ceralpha method us i ng p-nitrophenyl-maltosaccharide as sub s trate in the pres e nce of a thermostable al p ha-glucosidase.—3000 + 300 Ceralpha units/mL (1 unit of en z yme is re q uired to re l ease 1 μmole p-nitrophenyl/min at pH 6.5 and 40°C). (f) Pro te ase.—Keep re frig er ated.(1)Ca sein as say.—300–400 Units/mL. (1 pro t e a se unit is de f ined as the amount of en z yme re q uired to hy d ro l yze (and solubilize in TCA) 1 μmole ty ro sine equiv a l ents/min from sol u b le ca s ein at pH 8.0 and 40°C); 7–15 units/mg (1 unit will hy d ro l yze ca s ein to pro d uce color equiv a l ent to 1.0 μmole ty r o s ine/min at pH 7.5 and 37°C). Color by Folin-Ciocalteau re a gent. (2) Azo-casein as s ay.—300–400 Units/mL [1 unit endo-peptidase ac t iv i ty is de f ined as the amount of en z yme re q uired to hy d ro l yze (and solubilize in TCA) 1 μmole ty r o s ine equiv a l ents/min from sol u b le ca s ein at pH 8.0 and 40°C]. (g) Amyloglucosidase.—Keep re frig er ated.(1)Starch/glu c ose oxidase–peroxidase method.—2000–3300 Units/mL (1 unit en z yme ac t iv i ty is de f ined as the amount of en z yme re q uired to re lease1μmole glu c ose/min at pH 4.5 and 40°C). (2) PNPBM (p-nitrophenyl beta-maltosidase) method.—130–200 Units/mL (1 unit en z yme ac t iv i ty [PNP unit] is the amount of en z yme, which in the pres e nce of ex c ess lev e ls of beta-glucosidase, will re l ease 1 μmole p-nitrophenyl from p-nitrophenyl beta-maltosidase/min at 40°C). The only en z yme which has been found to be sig n if i c antly con tam i nated with in ter fer ing ac tiv i ties is amyloglucosidase. Thermostable al p ha-amylase and pro t e a se from com m er c ial sources have been found to be gen e r a lly free of in t er f er i ng en z ymes. Low lev e ls of beta-glucanase have been de t ected in pro t e a se prep a r a t ions, but at lev e ls well be l ow that which would in t er f ere with to tal di etary fi ber anal y sis.The ma jor con tam i nant in amyloglucosidase prep a r a t ion was shown to be an endo-cellulase and re s ulted in endo-depolymerization of mixed-linkage beta-glucan from bar l ey and oats, with re s ul t ant un d er e s t i m a t ion of this di etary fi ber com po nent.The con tam i na tion of amylogucosidase with endo-cellulase (beta-glucanase) can be eas ily de tected. Al t er n a t ively, there are kits con t ain i ng all 3 en z ymes (pre t ested) avail a ble from a num b er of com p a n ies. (h)So dium hy drox ide so lu tion.—0.275M. Dis s olve 11.00 g NaOH ACS in ca 700 mL H2O in 1 L vol u m et r ic flask. Di l ute to vol u me with H2O. (i) Hy d ro c hlo r ic acid so l u t ion.—0.325M. Di l ute stock so l u t ion of known ti t er, e.g., 325 mL 1M HCl, to 1 L with H2O. (j) Celite.—Acid-washed. ? 2005 AOAC IN T ER N A T IONAL Ta b le 985.29. Test sam p les for en z yme pu r ity Test sam p le Ac tiv ity tested Test por t ion weight, g Ex pected re cov ery,% Cit rus pec tin Pectinase0.195–100 Stractan (larch gum)Hemicellulase0.195–100 Wheat starch Am y lase 1.00–1 Corn starch Am y lase 1.00–2 Ca sein Pro te ase0.30–2 β-Glucan (bar l ey gum)aβ-Glucanase0.195–100 a Sigma Chem i c al Co. or Megazyme In t er n a t ional Ire l and, Ltd.