Zhejiang Shiyongjun2010,18(2):23~25
)))银耳菌种繁育原理及试管培养基制作
丁湖广
(福建省古田县新元食用菌研究所,古田352200)
作者简介草菇栽培专题讲座专家丁湖广高级农艺师,系福建省古田县老科技工作者协会副会长兼食用菌分会会长,曾任福建省食用菌协会副秘书长、中国食用菌协会理事。编著出版食用菌专著25部450万字,2008年为金盾出版社编著出版专家释题解难农业生产技术丛书5草生菌高效栽培技术问答6,是5科普惠农种菇致富丛书6(19册150万字)的主编;发表论文近百篇。曾获福建省/哈曼尼科普0奖金,被评为全国农村科普先进工作者。
关键词银耳菌种;特性;繁育;原理
银耳生产,菌种先行。银耳菌种之所以排列在首位,是因为它具有由两种菌丝混合构成的独特特点;制种技术性强,且适用菌龄很短,稍有操作失误或培养管理不善,就会影响菌质,造成种植失败,使栽培者遭受经济损失。正因如此,银耳制种责任重大,操作人员必须具备专业知识和技能,持证上岗;生产经营中遵守职业道德规范,技术精益求精。
1银耳菌种特性
111繁殖原理银耳繁殖分为有性繁殖和无性繁殖两种。人工分离母种是根据银耳子实体成熟时,能够弹射担孢子的特性,使子实体上的许多担孢子着落在培养基上,以出芽的方式萌发形成菌丝而成为菌种。这种自然繁殖方式,通过人为分离的方法,谓之有性分离或有性繁殖。银耳子实体组织或耳木里面的菌丝,有很强的生命力,具有无性繁殖的性能。无性繁殖是从子实体或耳木中分离出菌丝体,移接在培养基上,使其恢复到菌丝发育阶段,变成没有组织化的菌丝来获得母种。用这种分离方式获得母种,既方便又较能保证其子实体和菌丝体都是近缘有性世代,遗传基因比较稳定,抗逆力强,母系的优良品质基本上可以继承下来。
112菌种特性银耳需利用担子菌(银耳菌丝或酵母状分生孢子)和子囊菌(香灰菌丝)两种菌丝进行混合培养,才能作为生产用的菌种。这两种菌丝在生产上称为银耳纯菌丝和羽毛状香灰菌丝(俗称耳友菌丝)。香灰菌的发现,使人们进一步认识到银耳虽然是一种木腐菌,但它分解纤维的能力很弱,必须伴同一种能分解纤维的香灰菌丝生活在一起,构成密切的共生关系。因此,银耳生长必须有被称为/伴生菌0的香灰菌来作/开路先锋0。没有这种/开路先锋0与之配合,银耳既长不进木材,也无法生存,只有在与香灰菌共存的条件下,才能长出朵大的银耳子实体。这种巧妙的组合,是长期自然进化选择的结果。不了解这一原理,就抓不住银耳菌种生产的关键,也就无法生产优良的银耳菌种。
113生活条件菌种质量的优劣,除母系遗传的原因之外,环境因素的影响也很重要。生态因子不能适应菌种生活需要时,菌种质量就会受到影响,出现退化甚至死亡。
营养是银耳菌种生命活动的物质基础,氢、氧、氮、碳、钙、磷、铁、钾、镁、硫等元素,以有机和
无机化合物的形态,构成菌丝体生长发育所需的能源和营养成分。这些元素以纤维素、半纤维素、木质素和其他化合物的形式,存在于棉籽壳、木屑、麦麸、米糠等栽培原料中。经过菌丝体分泌的酶的作用,降
解为简单的碳水化合物和无机物,为菌丝体所吸收。据试验,在琼脂培养基中加入适量的磷酸二氢钾或骨粉,能促使银耳芽孢萌发;在以玉米粉为碳源、麦麸为氮源的培养基上,菌丝生长最旺盛。因此在人工分离培育菌种时,要根据菌种不同发育阶段的营养需求,加入适量的蔗糖、麦麸、淀粉、蛋白胨、磷酸盐、硫酸镁等营养成分,以满足其生长发育的需要。
菌种生活条件除了营养之外,还必须根据生理和生态特性,满足其对温度、湿度、空气、光照、pH 值等的要求。在菌种培养过程中要求恒温,室内温度应保持在22~23e ,不超过26e ;培养室要求干燥,空间相对湿度在70%以下;室内适当通风换气,更新空气,防止二氧化碳沉积渗透,危害菌体。室内需要微弱散射光线,不可阳光直射,否则会直接伤害菌种,或引起菌种瓶内水分蒸发而危及菌种。人为创造适合菌种生活的环境条件,
有利于提高菌种的成品率和质量。
图1 银耳菌种分级形成示意图
2 银耳菌种的分级与形成程序
211 菌种分级 银耳菌种的分级与其他食用菌相类似,包括母种、原种、栽培种三级。
(1)母种。通常是从子实体或基内分离选育出来的,又称为一级菌种。它一般采用试管内的琼脂斜面培养基或玻璃瓶木屑培养基培养。母种数量很少,还不能用于大量接种和栽培,只能用于繁殖或保藏。
(2)原种。把母种移接到菌种瓶内的木屑、麦麸等培养基上所培育出来的菌丝体称为原种。原种是母种经过一次扩繁所得,所以又称二级菌种。原种虽然可以用来栽培产出子实体,但因为数量少,用作栽培成本高,因此,还必须经过再扩大。银耳试管母种,通常只有一个混合体的菌丝纽结团,所以只能移接为1瓶原种;而玻璃瓶的木屑培养基母种,一瓶可以移接为40~50瓶原种。
(3)栽培种。又叫生产种,即把原种再次扩接到同样的木屑培养基上,培育得到的作为银耳栽培用的菌种。经过这一次扩大的菌种,
称之为三级菌种。每瓶原种可扩
接成栽培种50~60瓶。
212 菌种形成程序 银耳菌种
因其自身的特性,它的分级形成
与其他菇类有别,详见图1。
3 母种培养基的配方与制作
311 培养基配方 银耳母种培
养基分为琼脂培养基和木屑培养
基。木屑培养基配方和制作方法
与原种和栽培种相同。由于银耳
菌种是由两种菌丝混合构成,在
培养基配方上分为通用的和专用
的,下面分别介绍4种类型配
方。
(1)通用培养基配方。通用
指的是既适于银耳芽孢萌发,又
利于与香灰菌丝混合发育生长。
常用的有以下3个配方。配方
一:马铃薯250克,葡萄糖25
克,硫酸镁015克,维生素B 110
毫克,琼脂20克,水1000毫#24# 2010年
第18卷第2期
升。通称PDA 培养基。配方二:马铃薯200克,蔗糖20克,磷酸二氢钾3克,琼脂20克,水1000毫升。称为PSA 培养基。配方三:玉米粉60克,葡萄糖10克,琼脂20克,水1000亳升。称为C MA 培养基。
(2)适于芽孢的培养基配方。配方一:银耳木屑菌种2瓶(750毫升),过磷酸钙1克或磷酸二氢钾3克,琼脂25克,水1000毫升。配方二:银耳适生树的木屑50克,磷酸二氢钾3克,蔗糖30克,琼脂20克,水1000毫升。
(3)适于纯白菌丝培养基配方。配方一:马铃薯淀粉40克,葡萄糖10克,蛋白胨5克,氯化钠5克,磷酸二氢钾015克,琼脂22克,水1000毫升。配方二:玉米粉50克,蛋白胨10克,琼脂20克,水1000毫升。
(4)适于香灰菌丝培养基配方。配方一:麦麸200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升。配方二:黄豆粉40克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,琼脂20克,水1000毫升。
312 试管斜面培养基制作 斜面试管是培养母种的营养物质,根据银耳母种培养基的配方加工而成。各种培养基配方虽不同,但制作方法大同小异。
(1)溶化取汁。将马铃薯洗净去皮(已发芽的要挖掉芽眼),称取200克切成薄片,置于铝锅加水煮沸30分钟,捞起用4层纱布过滤取汁。然后称取琼脂20克,用剪刀剪碎后加入马铃薯汁液内,继续加热,并用竹筷不断搅拌使琼脂全部溶化,再加足水1000毫升。然后加入葡萄糖,煮几分钟后,用4层纱布过滤1次,取其液汁。
(2)分装入管。装量为试管长度的1P 5,迅即塞上棉塞,立放于试管架上。分装时应注意不要使培养基粘在试管口或试管壁上,以免发生杂菌感染。
(3)高压灭菌。灭菌目的是把培养基内所有的微生物杀死,使之处于无菌状态。灭菌时将每10支试管扎成一捆,棉塞一端用牛皮纸包好,垂直放入高压锅内进行灭菌。以01110兆帕(1224140e )的压力保持30分钟左右;待压力表自动降到/00时,再打开锅盖,取出试管。
(4)趁热排斜。试管取出后趁热斜靠在桌上的小木棒上,使管内培养液斜面长度达试管长度的1P 2至2P 3,冷却后即成固体斜面培养基。
(5)检测纯度。灭菌后的效果如何,需要进行认真检测。可从每批试管中取出3~5支,移入恒温箱中,调温至28e 左右进行培养。经3~7天后,未见杂菌产生,证明无杂菌,可作为母种斜面培养基应用。
浙江龙泉食用菌产值创历史新高达416亿元
从龙泉市农业局获悉,2009年龙泉生产代料黑木耳111亿棒,代料香菇7000万棒,段木灵芝4100立方米,全年总产值达416亿元,生产规模和产值均创历史新高。
食用菌产业是龙泉市的传统优势产业。近年来,龙泉按照/提升发展食用菌0的思路,连续3年出台政策,扶持该产业发展。2009年,市农业局立足本地实际,充分分析产业发展态势,主动深入基层开展惠农行动,在技术培训、标准化建设、搭建销售平台等方面下功夫,为2010年食用菌产业丰产丰收奠定坚实基础。
按以往的发展规律,食用菌生产量与其价格往往成反比,而2009年,该市食用菌产品的价格却在产量和金融危机的双重影响下,扶摇直上。目前,仅光面菇价格为66~76元P 千克,比上年同期上升65%以上;干黑面菇价格为60~90元P 千克,同比上升36%~92%;代料黑木耳价格为66~90元P 千克,同比上升20%~36%;段木黑木耳为80~180元P 千克,同比上升14%~50%。
(本刊编辑部摘编自2010121265中国农业信息网6)#25#丁湖广:银耳菌种规范化生产工艺讲座(一)
蛹虫草种植方法 1.营养 碳源 蛹虫草使用方法 碳源是蛹虫草合成碳水化合物和氨基酸的基础，也是重要的能量来源。人工栽培时， 蛹虫草可利用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、果胶等，其中尤以葡萄糖、蔗糖等 小分子糖类的利用效果最好。 氮源氮元素是蛹虫草自身合成的蛋白质、核酸等有机氮以及铵盐等无机氮。能利用 的有机氮很多，如氨基酸、蛋白胨、豆饼粉、蚕蛹粉等;无机氮主要有氯化铵、硝酸钠、 磷酸氢二铵等。有机氮的利用效果最好。 矿质元素以磷、钾、钙、镁等为主要元素。一般通过添加无机盐类来满足蛹虫草对 矿质元素的需求。 维生素虫草菌丝不能合成必要的维生素，适当加入VB1有利于菌丝的生长发育。 2.温度在虫草的不同生长发育阶段都有最适温度、最低温度和最高温度的界限。菌 丝生长温度6℃—30℃，低于6℃极少生长，高于30℃停止生长，甚至死亡。最适生长温 度为18℃—22℃;子实体生长温度为10℃—25℃，最适生产温度为20℃—23℃。原基分化时需较大温差刺激，一般应保持5℃—10℃温差。 3.水分和湿度水分是蛹虫草菌体细胞的重要组成部分。菌丝生长阶段，培养基含水 量保持在60%—65%，空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段，培养基含水量要达 到65%—70%，空气相对湿度保持在80%—90%。要注意培养基适时补水和补充营养液。 4.空气蛹虫草需要少量空气。但在子实体发生期要适当通风，增加新鲜空气。否则，二氧化碳积累过多，子座不能正常分化，影响生长发育。 5.光照孢子萌发和菌丝生长阶段不需要光照，应保持黑暗环境。但转化到生殖生长 阶段需要明亮的散射光，光照度为100—240勒勒为光照度单位。光照强，菌丝色泽深， 质量好，产量高。 6.酸碱度蛹虫草为偏酸性真菌，其菌丝生长发育最适pH为5.2—6.8。但在灭菌和培养过程中pH值要下降。所以在配制培养基时，应调高pH值1—1.5，在配制培养基时可加0.1%—0.2%的磷酸二氢钾或磷酸氢二钾等缓冲物质。育种 长期采用无性繁殖及多次转管的蛹虫草菌种，其母本基因容易变异，表现为出草畸形，产质量下降。因此，在生产中应定期对蛹虫草菌种进行一次有性繁殖。具体做法是，
产 品 { 银 耳 > 营 销 策 略 分 析 广西禾美生态农业股份有限公司二O—六年五月六日
目录 1. 产品特点 (1) 1.1市场价值 (1) 1.2产品背景 (1) 2. 产品市场环境 (2) 2.1主要产区 (2) 2.2近年产能量 (2) 3. 产品市场定位 (3) 3.1客户的细分 (3) 3.2定价的原则 (3) 3.3产品竞价 (4) 4. 销售包装、储存及物流 (6) 4.1产品包装 (6) 4.2产品储存 (7) 5. 渠道策略 (8) 5.1密集分销渠道方案 (8) 5.2附渠道拟进入门槛表 (10) 1. 产品特点 1.1市场价值 富含胶原蛋白、氨基酸、矿物质及维生素，其中包含的膳食纤维可有效改善肠胃蠕动，减少脂肪吸收。还能增强肿瘤患者对放疗、化疗的耐受力。 I ■
1.2产品背景 银耳，早在清朝时期就已经成为了人们的食用佳品，在古代由于银耳及其稀少发源于四川通江，其价格也非常的昂贵，往往一小匣子银耳就要花一、二十两银子才能买到。随着社会的发展和培育技术的进步，现在的银耳已经不再像旧时那样稀少，人们已经能够比较方便的买到银耳，有因为银耳具有银耳具有强精、补肾、润肠、益胃、补气、和血、强心、壮身、补脑、提神、美容、嫩肤、延年益寿之功效。所以银耳成为了众人所推崇的保健佳品。 随着银耳的保健功效得到广泛传播，一些不良商人为了牟取暴利，将劣质银耳以次充好，或用有害化学品浸泡、熏烤加工银耳，这严重威胁到了广大群众的身体健康和对银耳产品的信任。在这样的情况下，广西禾美生态农业股份有限公司在看到了有机银耳的市场潜力，作为一个负责任、有担当的企业，建立一个致力于提供无污染有机鲜银耳与菌类生产基地势在必行。通过召集和组建一支国家级食用菌专家队伍，他们用严谨科学的态度，在银耳的生产过程中层层把关，全方位保证消费者的食品安全。 2. 产品市场环境 2.1主要产区 银耳是中国的特产，野生银耳主要分布于中国四川省、浙江省、福建省、江苏省、江西省、安徽省、台湾省、湖北省、海南省、湖南省、广东省、香港特区、广西壮族自治区、贵州省、云南省、陕西省、甘肃省、内蒙古自治区和西藏等地区。 2.2近年产能量 2013年我国银耳产量为37.4万吨，2014年国内产量增长至39.5万吨，占
银耳菌种的制作 2012年8月14日来源：中国食用菌商务网字号[ 大中小] 母种、原种的制作 把分离提纯后的银耳菌丝和香灰菌丝单独分开培养于试管中（详细的分离方法请浏览：银耳菌种的分离技术一文）。生产母种时，先取出银耳菌丝，并扩大到所需要的管数。然后放在25℃培养到银耳菌落直径约lcm左右。此时，再在每支长了银耳菌丝的试管中，接种极少量香灰菌丝，待两者长在一起时，就可以出售或用于原种生产了。 如先接香灰菌丝，因香灰菌丝生长快，很快覆盖斜面，并很快消耗养料，其后接上的银耳菌丝就不易生长。 若香灰菌丝和银耳菌丝同时接种在一支试管中，同样会出现银耳菌丝少、香灰菌丝数量多的缺陷。 因此，生产银耳母种（试管种）时一定要注意接种的先后，以及注意控制两者的比例。 制作银耳菌种有必要了解银耳及其“伴生菌”香灰菌丝的关系： 在可以人工种植的食药用中，属于这种类型的菌目前仅有银耳和金耳。它们子实体的形成，银耳除了要有纯银耳菌丝外，还必须有“伴生菌”即香灰菌的帮助；金耳除了要有纯金耳菌丝外，还必须有粗毛硬革菌的帮助，两者缺一不可。在一般条件下，银耳和金耳的纯菌丝体生长相当缓慢，分解木质素、纤维素能力极弱，分别要依赖于香灰菌丝和粗毛硬革菌丝分解基质，提供它们生长发育所需的养分，否则便不可能形成子实体。所以在扩繁银耳、金耳母种时，必须将两种相应的菌丝体，移接在同一培养基上进行混合培养。现以银耳为实例介绍两种菌丝混合制种技术： 1、斜面母种混接法 取纯银耳菌丝试管母种和新配制的PDA斜面试管各一支，连同接种器具一起放入接种室（箱）中，按无菌操作进行转接，即挑取米粒大小、带培养基菌种一块，移接于空白试管斜
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作 一．实验目的 学习并掌握蛹虫草固体一级菌种培养基、液体菌种培养基的制作方法 二．实验原理 蛹虫草（Cordyceps militaris），又名北冬虫夏虫，属于子囊菌门中的大型真菌，自然界中生长于昆虫的蛹体上，为虫生真菌。20世纪30年代，有学者用昆虫蛹接种获得了具有成熟子囊壳的蛹虫草，之后人们用米饭培养基培养除了蛹虫草，用家蚕和柞蚕接种蛹虫草菌种培养出了批量的蛹虫草子实体。 蛹虫草作为一种食药用真菌，其生长所需要的营养物质包括碳源、氮源、维生素、矿物质元素等。其各种培养基质的配置原则都要包含以上几种营养物质。试验表明：适宜蛹虫草的碳源有蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等；氮源有牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出物、各种蚕蛹粉以及硝酸盐、铵盐等无机氮；维生素有维生素B1；矿物质盐有磷酸二氢钾、硫酸镁、磷酸氢二钠等。 三．仪器设备与实验材料 1.主要仪器设备：电子台秤，高压蒸汽灭菌锅、电热炉等。 2.实验材料与试剂：玻璃棒，、脱脂棉、纱布、烧杯，漏斗，漏斗架，去皮刀，牛皮纸，量筒，马铃薯，葡萄糖，琼脂，水，蛋白胨，维生素B1，磷酸二氢钾等。 四．实验方法与步骤 1.固体一级培养基的制作 （1）配方一：改良PDA培养基：1000ml培养基包括200g马铃薯、20g葡萄糖、15-20g琼脂，2g蛋白胨、1g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加琼脂融化→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面 （2）配方二：大米培养基 大米50g，磷酸二氢钾0.05g，葡萄糖10g，维生素B1 0.5g，水50ml 操作方法： 大米用清水浸泡5至6小时，沥水。 将0.05g磷酸二氢钾，10g葡萄糖，维生素B1 溶于50ml水中。 ●将配置好的水溶液和大米共同装入罐头瓶中，瓶口用聚丙烯薄膜扎封。 ?高压灭菌1h 2.液体菌种培养基制作 培养基配方：1000ml液体培养基磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，维生素B1 50mg，马铃薯20g 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、生素B1 50mg→分装→加棉塞→包扎→灭菌 注：250ml摇瓶中中加入液体培养基120ml 五．实验注意事项。 1.灭菌锅操作时务必先将高压锅内的冷空气排干净。 2.注意避免培养基黏附在试管塞上，造成污染。 六．思考题 1.如果高压锅内冷空气排放不彻底，会对灭菌效果有什么影响，为什么？ 2.为什么摆斜面时试管上面盖纱布可以避免试管里面产生冷凝水？
蛹虫草人工培育技术 蛹虫草人工培育技术 https://www.doczj.com/doc/3718740355.html,/v_show/id_XMTYwODkyNTE2.html
蛹虫草，又称北冬虫夏草，北虫草，是子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草属的模式种，与冬虫夏草是同属不同种，也是一种久负盛名的药用真菌。可全草入药，具有特殊的药用价值和滋补功效。含有虫草酸、虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶SOD和微量元素硒等多种生物活性物质，可促进机体新陈代谢，提高机体的免疫功能。古人就有宁要虫草一把，不要黄金满车之说。 蛹虫草生理独特，生态复杂，自然界是鳞翅目昆虫的蛹体感染虫草菌后形成的虫与真菌两部分组成复合体，主要生长在针、阔叶林或混交林地表土层中。在冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季，从幼虫尸体上面生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得到。蛹虫草自然分布资源数量很少，价格昂贵。采用传统人工栽培，是把虫草菌注入到活的蚕蛹身上，模拟自然条件得到蛹虫草。但采用这种方法培育，注射技术难以控制，容易污染，
产量低，一般农户难以操作。 近年来，也有不少人参照常规药用真菌的生产方法，出现培养基营养配比不合理，菌种退化、污染严重等多种现象，导致产量下降、效益较低。为此，杭州市农科院科研人员通过多年的高产栽培研究和不同菌株比较试验，采用大米代替蛹体作为培养基，培育蛹虫草，获得了成功。经检测，人工培养虫草的主要营养与药用成分与野生虫草的含量相当。而且采用人工代料培育蛹虫草具有成功率高，生长周期短等优点，一般从接种到子座成熟只要40—45天。蛹虫草人工培育过 程与天然冬虫夏草不同，只是生产虫草上部子座，没有下部虫子。现将培育技术介绍如下： 人工培育蛹虫草的操作流程主要可分为以下几个阶段。 菌种准备→ 培养基的准备→ 接种→ 菌丝培养→ 出草管 理→ 采收 菌种准备： 蛹虫草的菌种不能长期保存，也不要多次转管扩繁，否则菌种容易退化、变异，使子实体生长不良，而且产量和质量都
产 品 （ 银 耳 ） 营 销 策 略 分 析 广西禾美生态农业股份有限公司 二○一六年五月六日
目录 1.产品特点 ............................................. 1.1市场价值 .......................................... 1.2产品背景 .......................................... 2.产品市场环境 ......................................... 2.1主要产区 .......................................... 2.2近年产能量 ........................................ 3.产品市场定位 ......................................... 3.1客户的细分 ........................................ 3.2定价的原则 ........................................ 3.3产品竞价 .......................................... 4.销售包装、储存及物流 ................................. 4.1产品包装 .......................................... 4.2产品储存 .......................................... 5.渠道策略 ............................................. 5.1密集分销渠道方案................................... 5.2附渠道拟进入门槛表.................................
ICS 67.080.20 B 39 备案号： DB35 古田银耳标准综合体 菌种制作规程 福建省质量技术监督局 发布
前言 本部分是古田银耳标准综合体中菌种制作规程，规定了菌种制作的术语和定义、基本设备、一级种制作、二级种培养、三级种培养、病虫害防治、菌种质量要求、检验方法、标志包装保存运输。 本标准由福建省质量技术监督局、福建省农业厅提出。 本标准主要起草单位：古田县质量技术监督局、古田县食用菌办公室。 本标准主要起草人：林祖寿、蔡金波、张国雄、彭冬祥、徐彦彦、张汉文、戴维浩。
古田银耳标准综合体 菌种制作规程 1 范围 本标准规定了古田银耳标准综合体菌种制作中的术语和定义、基本设备、一级种制作、二级种培养、三级种培养、病虫害防治、菌种质量要求、检验方法、标志包装保存运输。 本规程适用于古田银耳菌种制作。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 耳片 银耳子实体的瓣片。 2.2 耳基 银耳子实体基部，呈桔黄色或垩白色、硬实、蒂状与培养基质相联结的部分。 2.3 交合 将培养成熟的银耳纯菌丝与香灰菌丝按一定比例混合，培育有生产价值的银耳菌种的方法。 2.4 基质块 在银耳子实体的耳基正下方,由以银耳纯菌丝为主和少量香灰菌丝、培养基扭结而成的硬块层。2.5 基内分离 在生长子实体的培养基内分离出菌种的专门技术。 2.6 分泌液 银耳菌种正常的生理活动产生的无色、清黄或清红色的分泌液。 2.7 吐黑水 银耳菌种被病原菌污染，或培养条件不适宜出现的异常现象。 2.8 “杨梅霜病”（俗名） 菌种受为害时，局部表面出现白色粉斑，周围白毛团生长受抑制或逐渐消溶。 2.9 “死菌” 菌种受为害时，前期香灰菌丝可生长，中期香灰菌丝稀疏，菌丝前端出现粉红色或褐色，后期香灰菌丝停止生长。 3 基本设备 3.1 原料仓库 面积等于或大于20m2，建在制种厂的西北向，要求干燥、通风、环境卫生、远离畜、禽舍。 3.2 洗涤室 面积等于或大于10m2，水泥地面，平整，有水源。室内配备：台秤，工业天平，50、100、500ml 量杯，铁铲，水桶，铝锅，电炉，煤气炉，小压板，瓶刷，试管筐，试管（18×180mm），玻璃漏斗，漏斗架，纱布，棉塞，750ml菌种瓶。 3.3 灭菌室 要求水泥地面，有水源。室内配备：手提高压蒸汽灭菌锅，卧式高压蒸汽灭菌锅。 3.4 菌种培养室
常见食用菌液体菌种培养基配方大全 大家对食用菌的培养基配方都非常熟悉，但是却没有将培养基配方统一归纳出来，在此跟大家一起分享常见的10种食用菌液体菌种培养基配方。 (1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方
马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然; (10)灰树花培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖15克，麦麸45克，蛋白胨3.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;
常见微生物培养基 培养基 Medium 是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料 一般都含有碳水化合物、含氮 物质、无机盐 包括微量元素 以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同 可分为两类 应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的 称为天然培养基 应用化学药品配成并标 明成分的 称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基 大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保 管 现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同 使用要求不同 而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在 受热、吸潮后 易被细菌污染或分解变质 因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培 养基 如组织培养基 较长时间的贮存 必须放在2~6。C的冰箱内。 常见培养基有 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 蛋白胨1.0克 氯化钠0.5克 琼脂 1.5克 水100毫升 在烧杯内加水100毫升 放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠 用蜡笔在烧杯外作上记号后 放在火上加热。待烧杯内各 组分溶解后 加入琼脂 不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水 用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH 值到7.2 7.6,分装在各个试管里 加棉花塞 用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心 除去脂肪和血管 250克 用刀细细剁成肉末后 加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好 记号 煮沸 转用文火炖2小时。过滤 滤出的肉末干燥处理 滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升 肉汤和少量碎末状的干牛心 灭菌 备用。 配方三根瘤菌培养基 葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克 碳酸钙3克硫酸镁0.2克 酵母粉0.4克琼脂20克 水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解 然后分别加入其他组分 搅拌使溶解后 分装 灭菌 备用。
蛹虫草人工栽培技术要点 蛹虫草，又称北冬虫夏草。它同冬虫夏草一样同归于虫草属。蛹虫草的药用价值与保健价值和冬虫夏草相似，为我国特有的一类珍贵药用真菌。 由于人工栽培冬虫夏草需要养殖蝙蝠蛾幼虫和特定的生态环境，因此，人工栽培冬虫夏草难度较大，目前只有一些科研机构在此方面取得了一些进展。 为了解决冬虫夏草供不应求的矛盾，大量栽培蛹虫草是一个很好的办法。同时也能给种植者带来可观的经济效益。 栽培蛹虫草技术易学，全国有许多单位和个人均栽培成功。现把江西省进贤县特种养殖有限公司的栽培技术要点介绍如下。 一、配制培养料 配方：大米70％、蚕蛹粉23％、蔗糖5％、蛋白胨1．5％、酵母粉0．5％、维生素B1微量。 将上述物质按配方称量，混匀，分装入500毫升罐头瓶中，每瓶约装30克培养料，另加入30毫升左右的营养水，瓶口包扎聚丙烯薄膜。 二、灭菌、接入蛹虫草菌种 高压0．13兆帕保持1小时或常压100℃保持10小时。灭菌后，罐头瓶内的饭粒不生也不成糊状，饭粒之间有空隙。在接种室接种，每瓶约接入液体菌种5—10毫升。 三、菌丝培养管理 保持培养室温度15—20℃，湿度65％左右，避光，菌丝阶段在黑暗的环境下发育较快，光线强不易产生子座。因此，本阶段应避光培养。由于蛹虫草是在瓶内生长，空气湿度的高低对其影响不大。 四、子实体生长培养管理 待菌丝布满整个瓶面并扎到瓶底，开始见光，但避免太阳光直射。若培养室光线太暗，可补充日光灯照。菌丝见光后，在培养料表面或四周见有桔黄色色素形成，并出现米粒状的桔黄色菌蕾，菌蕾伸长后即成为子实体。子实体形成应有温差刺激，子实体培育阶段，温度应为20℃—25℃，超过28℃不能长草，湿度应提高到85％左右，以减少瓶内水分的蒸发，在整个生长阶段，不须去掉封口薄膜，在子实体培养后期，可在封口薄膜上扎几个小孔。 当子实体长高至5—8厘米时，即可采收。采收后每瓶加入清水或营养液3—5毫升，盖好薄膜，继续培养，约半个月可再发生子座，待子座长至5厘米以上高时，即可采收。 五、采收、出售 当蛹虫草成熟后，从子座根部剪断，将子座晒干，水分应低于5％，防止发霉变质，避免折断，用薄膜密封放在阴凉干燥处保存。 目前，全国有很多厂家收购蛹虫草，种植者可自行联系。------中国食品产业网
液体菌种的几种接种方法 刘益清(415900) 湖南忠食农业有限公司 液体菌种具有方便快捷菌龄短而一致纯度高活力强等优点，越来越受科研工作者和广大食用菌生产者的重视，但如何正确使用液体菌种尚未见系统报道．液体菌种培养好后接种方法直接影响液体菌种优势的发挥，甚至关系到生产的成败．我们在规模应用液体菌种接种中使用过多种接种方法，各有特点，下面就几种成功的方法介绍给大家． 一料表面接种法：这是目前采用比较多的方法,采用这种接种方法时多为瓶装或袋装培养料，上端有一定的空间，如生产金针菇茶薪菇黑木耳杏鲍菇菌包以及生产香菇鸡腿菇平菇等各种菌种，接种时尽量将料表面喷淋上菌种，液种萌发生长快，封面早杂菌污染的机会很小，除破袋外菌袋污染的机会极低，甚至以万袋计算可以达到零污染．这种方法的菌球处于氧气充足的条件下生长很好． 二表面加枪头插入式接种法：因表面接种法接种时菌球易被培养料的过滤作用阻滞在料的上半部分，菌丝生长需要从上往下生长，不能在料内上下同时生长．如果将接种枪枪头做成管状插入料内接种，菌球在料内同时生长，可以缩短发菌时间一半左右，甚至更多．这种方法一要注意料内氧气的供应（不适应扎口袋），二要注意接种环境的无菌要求，避免菌种不萌发或枪头带入杂菌造成污染，成品率在98-100%,比固体菌种袋口接种缩短时间一半以上. 三袋表面扎孔接种法：长菌棒从两端接种不能缩短养菌时间，从袋的表面一面或两面）用枪头扎入３－５cm深并同时接种，扎孔间隔根据需要确定，如香菇每棒扎３－５个孔，这种方法调节接种量和孔间距离可以达到缩短养菌时间和减少杂菌污染的目的，缺点是用种量大，每个孔的接种量不少于１０ml,接种后不封口的应达到每孔２０ml以上．这种方法2007年大量生产香菇出菇菌棒,成品率高达99%以上 四袋壁内喷射接种法：长菌棒还可以采取从两端一则用枪头分别扎入到袋薄膜内，从料与塑料薄膜之间喷射菌种（要求液体压力达到１kg/cm２以上），喷射后用手按压分散菌种，使菌棒一则布满菌种，待菌丝生长１－３cm后可以扎孔增氧．这种方法可以覆盖较大的料表面，发菌快袋面微孔污染小，缺点是用种量大，每喷射一次用种多在１００ml左右．而且在配料时就要注意减少培养料的含水量．这种方法在香菇生产上应用比较成功．是我们在第三种方法的基础上改进的方法,期望今后适应开放接种的需要. 五接种后摇动接种法：颗粒菌种培养基接液体菌种最能发挥快速发菌的优势，液体菌种接入玻璃瓶后旋转或摇动使液体流动粘到每粒颗粒上，在适合温度下三天即可长满菌丝，继续培养几天让菌丝深入颗粒内部后即可用于生产．这种方法可以在急需用种时使用．六接种机接种法：食用菌瓶栽工厂化企业使用的方法，接种速度一般7000-8000 瓶／小时，菌液喷射在料面及孔洞中。 液体菌种对不良环境的抵抗力不如固体菌种（如耐缺氧能力不强），采用发酵料，生料栽培或塑料袋熟料开放式拌料栽培往往不易成功.液体菌种生产技术与食用菌栽培技术的很好结合才能发挥液体菌种的优势
xxxxxxxx有限公司生产工艺规程 1 目的：建立银耳生产工艺规程，用于指导现场生产。 2 范围：银耳生产过程。 3 职责：生产部、生产车间、质保部。 4 制定依据：《药品生产质量管理规范》（2010修订版） 《甘肃省中药饮片炮制规范》1980 年版。 5 产品概述 5.1 产品基本信息 5.1.1 产品名称：银耳 5.1.2 规格：统 5.1.3 性状：本品呈类扁球形或不规则的块状，灿然若花，大小不一，直径3～18cm，由众多细小而薄的波状卷曲的子实体瓣片组成，子实体瓣片黄白色或淡黄褐色，半透明，体轻，质硬而脆。有特殊气味，味淡。 5.1.4 企业内部代码：C275 5.1 5性味与归经：甘、平。 5.1.6功能与主治：滋阴润肺，生津，益气活血。用于虚劳咳嗽，痰中带血，虚热口渴，肺热肺燥，衄血，咯血，肺痿。 5.1.7 用法与用量：3～9g。 5.1.8 贮藏：置阴凉干燥处，防蛀。 5.1.9包装规格：3g/袋；5g/袋；10g/袋；30g/罐；40g/罐；50g/罐；0.5kg/袋；1kg/袋；10kg/袋；15kg/袋；25kg/袋。 5.1.10 贮存期限：36个月
5.2 生产批量：5-10000kg 5.3 辅料：无 5.4 生产环境：一般生产区 6 工艺流程图 6.1 银耳工艺流程图： 6.2 生产操作过程与工艺条件： 6.2.1领料 6.2.1.1饮片车间根据批准的批生产指令，按照“生产过程物料管理程序”，凭填写品名、编码、领料量、数量的指令单到原料库领取银耳原料。 6.2.1.2领料过程中必须核对原料品名、编码、件数、数量、合格标志等内容。 6.2.2净制： 6.2.2.1取原料，置于不锈钢挑选台上，按照《净制岗位标准操作规程》手工挑选，除去杂质。用清洁过的重器，将净选后的银耳打成碎块，将净银耳置净料袋或周转箱。 6.2.2.2净制结束后,称量,标明品名、批号、总件数、总数量。将净制后的银耳运至车间中转间，及时清场并填写生产记录。
(1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;
蛹虫草培养基配方 2.4.1斜面培养基 PDA培养基:去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000mL，pH自然。 2.4.2液体种子培养基 去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20 g、MgSO4;1.0 g、KH2PO4;1.0 g、定容至1000mL，pH自然。 2.5实验方法 2.5.1蛹虫草固体培养 2.5.1.1固体培养基配制 固体培养基为大米培养基，即每瓶分别加入40 g大米与50mL营养液，然后于压力0.12MPa、温度121℃下灭菌20min。原营养液成分如下:葡萄糖5g/L、黄豆8g/L、奶粉5g/L、柠檬酸三铵 1.0g/L、磷酸二氢钾 1.0g/L、硫酸镁 1.0g/L、维生素B110mg/L。 2.5.1.2菌种的活化 将保存的原始菌株接种到PDA培养基上，23℃暗培养7d，得到活化的菌种。 2.5.1.3制备液体菌种 将活化的菌种块(lcm-1cm)接入液体培养基中，静止培养24h后置于摇床上进行悬浮培养(转速为110r/min)，在23℃的条件下暗培养6d，得到液体菌种，将液体菌种用磁力搅拌器打碎后即可用于接种。 2.5.1.4接种 在无菌条件下，往每瓶大米培养基中接种15ml稀释了250倍的液体菌种。 2.5.1.5菌丝体培养 将接种好的培养瓶置于温度22℃、湿度55一60%条件下暗培养6d左右，直至菌丝体长满整个培养基表面和吃透整个培养基。 2.5.1.6子实体培养 将菌丝体已长好的培养瓶置于有光照的适宜环境下培养至形成原基及子实体成熟。 2.5.1.7子实体采收 待子实体成熟后，进行采收并称取每瓶子实体鲜重，然后于45℃条件下烘干至恒重，称每瓶子实体干重。
银耳精深加工产业化项目可行性研究报告
一、总论 （一）项目名称和建设单位 1、项目名称：银耳精深加工产业化 2、建设性质：新建 3、建设地点：某县民胜镇周子坪食用菌园区 4、建设单位：某野生食品有限公司 5、项目负责人： （二）建设容与规模 本项目建在某县民胜镇周子坪村，位于通巴快车道（省道S201线），距县城5公里，占地面积15亩，建设某银耳速溶方便食品、银耳茶（复合袋泡茶）、某银耳多糖含片三条生产线，达产后，年可转化某银耳100 吨，生产精深加工产品1100吨。 （三）项目总投资 项目总投资：1800万元。 （四）资金筹措 项目单位自筹及其他资金800万元。商请银行贷款1000万元 （五）投资使用计划 项目总投资1800万元，其中：固定资产投资1290万元，占总投资的72%，无形资产及递延资产110万元，占总投资的6%，流动资金400万元，占总投资的22%。 （六）建设期限 项目建设期限18个月，2011年01月至2012年06月。
（七）项目效益 本项目达产年可实现销售收入3200万元，实现利润270万元，新增税金150万元，新增就业岗位160个，带动种植农户年均增收12000元。 二、项目单位基本情况 （一）企业基本情况 某野生食品有限公司成立与一九九八年七月，公司注册企业类型为有限责任公司，注册资本550万元，位于省某县诺江镇诺江中路855号。主要从事以某银耳、黑木耳、香菇为主的食用菌、中药材、野生山珍的生产、加工、销售及产品研制开发。 （二）企业人员及开发能力 企业法定代表人的基本情况：某，男，现年45岁，中共党员，大专文化，经济师职称，董事长，现任中共市第二届党代表，市民营科技企业联合会常务理事、副会长。先后被团中央、国家农业部授予“全国农村青年创业致富带头人称号”，市“十年创辉煌劳动模”；省农委、省乡镇企业局授予省第五届、第六届创业之星，市授予“再就业创业带头人”，市市委、市政府授予市质量兴市先进个人，“首届十杰民营科技企业家”、“市创业之星”等荣誉。曾主持研制开发了“精耳薯丝”新产品，该产品被省人民政府授予农业博览会银奖，并荣获国家专利。 企业人员基本情况：现有在职员工201人，大专以上专业技术人员58人，其中从事新产品研制和开发的专业技术人员22人，技术人员占公司总人数的29%。生产和销售人员占公司总人数的68%。
在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。 (一）母种的分离培养 食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。 1.孢子分离法 孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。 （l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。 （2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种： ①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。 还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，
如何选育菌种？ 为了获得适合大规模工业生产所需的优良生产菌种，一般首先是从自然界分离筛选具有产生目标产物能力的菌种，但这样获得的菌种的生产能力往往较低，生理生化特性不一定能满足生产要求，还需要进行大量的诱变选育，进一步提高其生产能力，改善性能；也可以对现有的生产菌种进行改造，即经诱变育种，选育出符合实际生产需要的菌株。 自然界中微生物资源异常丰富，土壤、水、空气、腐败的动植物残骸，都是微生物的主要集居和生长繁衍的场所。其种类之多，至今仍然是一个难于估测的未知数。以其集居环境（包括特殊和极端环境）、营养类型、生存方式、生理类型、代谢途径、合成能力等比较，均居生物界之冠。因此，微生物资源的开发和应用是当今世界瞩目的重大课题。 菌种的分离，不仅是把混杂的各类微生物有效地分开，得到纯种，更重要的是依着生产实际的要求，有的放矢、快速、准确地将能产生所需产物，或具有某种生化反应性能的菌种，从大量的微生物中挑选出来。有时是设计一种在分离阶段便能识别所需菌种的方法，更多的是利用特定的方法分离，获得所需菌种后，再进行识别。为了使获得的菌种能满足工业生产的需要，须考虑各种性能指标。因此，菌种分离和筛选的方法和策略就十分重要。 一般的菌种分离纯化和筛选步骤可分为采样、增殖与分离、发酵与性能测定等几个步骤。步骤和方法如下图所示：
3.发酵培养基如何配制？ 首先需了解微生物需要的营养物质。 （1）微生物需要的营养物质 营养物质应满足微生物的生长、繁殖和完成各种生理活动的需要。它们的作用可概括为形成结构（参与细胞组成）、提供能量和调节作用（构成酶的活性和物质运输系统）。 微生物的营养物质有六大类要素，即水、碳源、氮源、无机盐、生长因子和能源。 ① 水 水是微生物的重要组成部分，在代谢中占有重要地位。水在细胞中有两种存在形式：结合水和游离水。结合水与溶质或其他分子结合在一起，很难加以利用。游离水（或称为非结合水）则可以被微生物利用。 ② 碳源 碳在细胞的干物质中约占50%，所以微生物对碳的需求最大。凡是作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，称为碳源。
通江银耳菌种质量标准 一、一级菌种(试管种)鉴定标准 1、感观鉴定 (1)优质纯银耳菌丝在马铃薯洋菜培养基上洁白、粗壮、短齐向上、周围有淡黄色水珠、长势旺盛。 (2)优质纯羽毛状菌丝(俗称香灰菌丝) ，在马铃薯洋菜培养基上生长迅速，菌丝平爬，状如羽毛，爬壁能力强，转色快，由初生白色转为草绿色，最后转为褐色。 (3)纯银耳菌丝与纯羽毛状菌丝配对要适时。银耳菌丝在新培养基上生长七天，方可配对羽毛状菌丝。 (4)配对后的优质银耳一级种(试管种)应无明显拮抗线，以及黄、红、绿、黑等异常现象。 2、显微镜检查鉴定 (1)挑取少量纯银耳菌丝，置于载玻片中央的无菌水滴上，用解剖针拨散，盖上玻片，放大1500 倍观察，正常菌丝一般具有透明、分枝、有横隔和明显的锁状联合。 (2)挑取少量的纯羽毛状菌丝，置于载玻片中央无菌水滴上，用解剖针拨散菌丝，加碘酒或美蓝等染色后进行镜检，正常菌丝一般具有菌丝粗壮(状如羽毛) 、分枝、锁状联合多而密，无其它异常现象。 (3)用无菌操作法，将纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝分别注入 2 毫升液体培养基，在25 —28 C之间培养24 —48小时，取滴镜检菌丝恢复情况和有无其它异常物的出现。
3、生理特点鉴定 (1)纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝对冷反应：将培养7 天的两种菌丝(或菌液)置于—196 C的液氮罐内7天后取出复苏，立即镜检其在视野下是否有活力？同时移入新鲜马铃薯洋菜培养基上，在25 —28 C的条件下培养48小时，观察菌丝的恢复力强否。 (2)纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝对热反应：将培养7 天后的两种 菌丝分别置于35 C、38 C、40 C的温度下，观察多长时间活力消失。 (3)淡水生存：将培养好的菌液取1 毫升，注入1000 毫升的蒸溜水中，置于25 C的条件下24小时后，镜检其菌丝活力有无减弱。 (4)药物敏感试验鉴定 银耳生产的整套工艺流程比较多，各环节所需杀菌、杀虫的药品各不相同，浓度也不相同。因此，哪种药物、哪种浓度，对纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝接近临界死亡，菌种生产厂家应注明。 5、抽样：每100 支试管必须任取10 支进行各项指标检验。 二、二级菌种鉴定标准 1 、原料标准 (1)青杠木屑(或其它阔叶树木屑) ：粗细均匀、新鲜、无杂质、无泥沙、无霉烂变质。 (2)麸皮(或米糠)：新鲜无虫蛀、无霉变、无杂质，麸皮内不掺尾粉，米糠内不掺粗糠。 (3)石膏食用或药用系列均可。 (4)糖类：可用白糖、红糖、葡萄糖、麦芽糖等，不能用糖精(或矿物质炼的糖)。
菌种保存和微生物常识 1、常用培养基的制备、灭菌与消毒 营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活动的物质基础，是生命活动的起点。 营养物：具有营养功能的物质。也包括光能。提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。 营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水 培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。要求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。 2、选用和设计培养基的原则、方法及制备过程 原则：目的明确、营养协调、经济节约 物理化学条件适宜 方法：生态模拟、查阅文献 精心设计、试验比较 步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 培养基种类： 一、按成分的不同分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 二、按培养基的物理状态分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 三、按培养基用途 基础培养基、选择培养基、加富培养基鉴别培养基 消毒与灭菌： 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法： 一、物理的方法：加热、过滤、辐射 二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。 加热法： （1）干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180°； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70°时才开箱门。 （2）湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 常压蒸汽灭菌：对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌:135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。优点：保持食品价值和营养
鉴别银耳质量的方法 一、银耳的分类 根据银耳的生长基质和生长环境可以分为：天然 野生银耳、椴木野生银耳和袋料大鹏培植银耳。天然野生银耳是深山老林中的某些腐木在适合银耳生长的温度、湿度等条件下，通过真菌作用自然生长的银耳。这种银耳现在虽然仍然存在，但人们很难发现！且数量极少!即使偶尔被穿行在深山老林中的少数猎 人发现，也因为数量极少且极为珍稀，不可能出现 在市面上！这种银耳现在成为传说了，有钱也买不到！椴木野生银耳是将7年以上生的花栎木、青冈木等砍伐后，截成一定长度的木段，把椴木按一定的规则 放置在野外，再通过发酵、点菌等一系列生产工序后，在椴木上生长的银耳。这种银耳根蒂发达、耳片厚实韧性好，生长时未经人工施肥，完全依靠椴木本身 为其提供营养，耳朵不太大，因野外环境且营养吸收不均匀，产出银耳大小不一，一年只能生长一季，产量低。银耳成熟采摘后经过日光晒干，未经人工漂 洗和用化学药品处理，所以银耳的颜色不均匀，呈米
白色或淡黄色或深黄色，有些朵上带有些许黑色的椴木树皮或者小黑点（是天然银耳在野外生长过程中形成的非霉变），椴木银耳看起来不美观。这种银耳因为卖相不好、产量又低，所以经济效益差。多数耳农已经不愿意种植了！也许在不久的将来也会成为传说！但这种银耳因为胶质含量高、营养丰富、无人工化学成分添加、天然绿色而深受追求生活品质者的青睐，但价格比较贵。袋料种植银耳是以碎木屑、甘蔗渣、棉籽壳等农副产品为主要原料，适当添加一些麦皮、米糠、石膏等为辅助原料，经过蒸煮发酵，用瓶子或塑料袋盛装后放进大鹏中，在袋料上进行点菌后生长的银耳。这种银耳因为生长在大棚中，温度、湿度等可控，生长旺盛、耳蒂较小、耳片较薄、朵形较大、产量高、颜色均匀、耳朵干净，且一年可生长多茬。具有栽培原料广泛、成本低、周期短、卖相好、价格低、经济效益高的特点。受到已经过上了小康生活、正在提高生活品质的消费者的青睐。