转基因植物的方法
转基因植物是指通过人工手段将外源基因导入植物细胞中，使其产生新的性状或改善原有性状的植物。转基因植物的方法主要包括以下几个步骤：
1. 基因克隆
基因克隆是指将所需的基因从外源生物中分离出来，并将其插入到载体DNA中。载体DNA是一种能够自我复制的DNA分子，通常采用的载体有质粒、噬菌体等。基因克隆的过程需要利用限制性内切酶切割DNA，将所需的基因与载体DNA连接起来，形成重组DNA分子。
2. 转化
转化是指将重组DNA分子导入植物细胞中，使其成为植物细胞的一部分。转化的方法有多种，包括农杆菌介导转化、基因枪法等。其中，农杆菌介导转化是最常用的方法。农杆菌是一种能够感染植物的细菌，通过将重组DNA分子导入农杆菌中，再将农杆菌接种到植物体内，使其将重组DNA分子导入植物细胞中。
3. 选择
选择是指通过筛选，将转化成功的植物细胞筛选出来。为了使转化
成功率更高，通常会在重组DNA分子中加入一些标记基因，如抗生素抗性基因等。在转化后，将植物细胞培养在含有抗生素的培养基上，只有转化成功的细胞才能够生长下去，从而筛选出转化成功的植物细胞。
4. 培育
培育是指将转化成功的植物细胞培养成完整的植物。在培育过程中，需要对植物进行筛选和鉴定，以确保其具有所需的性状。同时，还需要对植物进行基因检测，以确保其基因组稳定性和安全性。
转基因植物的方法虽然可以为人类提供更多的食品和药品，但也存在一定的风险。因此，在进行转基因植物研究和开发时，需要严格遵守相关法律法规，确保其安全性和可控性。同时，还需要加强对转基因植物的监管和管理，以保障公众的健康和安全。
转基因植物的生产和检测方法转基因植物是繁殖用于人类消费的农作物，其基因被修改以抵御虫害和提高产量。转基因的技术对世界的食品安全、环境保护和农业产量增加产生了重要的影响。但是，随着转基因产品的不断推广和应用，对于检测其是否安全和透明的要求也越来越高。本文将介绍转基因植物的生产和检测方法。 一、转基因植物的生产方法 转基因植物的生产方法主要分为两种，一种是基因枪法，另一种是农杆菌介导的转基因法。基因枪法是通过射入改造后的DNA 直接向植物细胞内导入外来基因，从而实现转基因植物的创建。而农杆菌介导的转基因法则是通过把拥有外来基因的细菌注入植物细胞内，再将细菌注入特定的细胞壁，使得外来基因稳定地嵌入植物的基因组中。 当然，在此基础上，科学家还使用了一些远离传统种植法的技术，例如如基因编辑工具CRISPR-Cas9。基于如此多样化的转基因生产方法，科学家们已经可以创造出各种不同类型的转基因植物。
二、转基因植物的检测方法 转基因植物的检测方法主要包括了两类：一是用于提取DNA 的样品，二是用于检测的样品。在前人研究的基础上，当前有两 种常见检测方法：PCR和ELISA。 PCR(聚合酶链反应)是目前主流的转基因检测技术，它能够根 据材料提取的DNA进行基因片段扩增，从而检测模板所对应的基 因是否存在。PCR技术以灵敏度、特异性高、复查和修复能力强 著称，不过，PCR技术存在可能会观察到错误反应的问题。 另外一个常见的检测技术是酶联免疫吸附法(ELISA)，它特别 适用于筛查含水量较低的复合样品。ELISA是一种抗体检测技术，它基于抗体结合了基因，在测试物接口中发生颜色反应，显示基 因存在或不存在。这种方法也常用于通过检测植物组织中蛋白质 水平的方法来检测转基因。 总之，用于转基因检测的技术越来越精准和可靠，从而让我们 可以安心地使用和消费转基因植物农作物。同时，也可以使用这
转基因方法 一、基因枪法： 1、综述： 基因枪法又称为高速微弹法、微粒抢法、微粒轰击法，是由康奈尔大学的Sanford等于1987年首次研制出的火药引爆基因枪，并与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出的一种基因转移的新方法。1990年美国杜邦公司推出商品基因枪PDS-1000系统。在此期间，高压放电、压缩气体驱动等各种基因枪相继出现，并都在重复的实践中得到改进和发展。其改进的核心是粒子加速系统，以提高射弹的可控度，即粒子速度和射入的浓度等。 2、基本原理： 其基本原理是将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下微粒被高速射入受体细胞或组织。微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上，得到表达，从而实现基因的转化。 根据基因枪的动力系统，可将它们分为三种类型：一类是以火药爆炸力为加速动力，其显著特征是塑料子弹和阻挡板。塑料子弹前端载放已沉淀有DNA的钨金粉。当火药爆炸时，塑料子弹带着钨金粉向下高速运动，至阻挡板时，塑料子弹被阻遏，而其前端的钨金粉粒子继续以高速向下运动，击中样品室的靶细胞。其粒子的速度主要是通过火药的数量及速度调节器控制，不能做到无级调整，可控度较低。 第二类是以高压气体作为动力，如以氦气、氢气、氮气等。其工作原理是把载有DNA 的钨金粉喷洒在一张微粒载片上，电极间悬滴众着微水滴。在压缩空气的冲击下，微水滴雾状喷射，驱动载片。当载片受阻于金属筛网时，载有DNA的钨金粒继续向下冲击射入细胞。 第三类是以高压放电为驱动力。其最大优点是可以无级调速，通过变化工作电压，粒子速度及射入浓度可准确控制，使载有DNA的钨金粉粒子能到达具有再生能力的细胞层。 3、步骤： （1）微粒体的洗涤。取60-100mg钨或金粉，溶于1ml无水乙醇中，用超声波振荡洗涤。微粒体处理后可在密闭条件下室温贮存一周。离心除去乙醇，密闭贮存于室温中，备用，保存时间不要超过一周。 （2）DNA微粒载体的制备。 （3）靶外植体材料准备。在无菌条件下截取靶外植体，放于样品皿中，外植体大小按基因枪要求选择；在无菌条件下把靶外植体放入基因枪的样品室，并对准子弹发射中心。 （4）DNA微弹轰击，按照不同的基因枪说明书操作。 （5）轰击后外植体的培养。DNA微弹轰击后立刻转入相应的培养基中培养，以免材料脱水加重细胞受伤害的程度，获得再生植株。 4、影响因素： （1）基因枪轰击参数，如基因枪类型、氦气压力、基因枪真空度、包裹金属粒子类型、金属粒子大小、载体膜位置、靶材料位置轰击次数、微粒加速装置参数等都会影响转化效率的高低。其中金属粒子以金粒效果最好、94.92kPa左右的氦气真空度为佳。 （2）转化质粒的参数，如转化质粒的纯度要高、且浓度不宜过大。加入一定量的氯
五种常用的植物转基因技术 植物转基因技术是通过各种物理的、化学的和生物的方法将从动物、植物及微生物中分离的目的基因整合到植物基因组中，使之正确表达和稳定遗传并且赋予受体植物预期性状的一种生物技术方法。1983年，首例抗病毒转基因烟草的成功培育标志着人类开始尝试利用转基因技术改良农作物。目前，植物转基因技术已在作物改良和育种领域发挥了重要作用。通过植物转基因技术，一些来自于动物、植物及微生物的有益基因如抗病／虫基因、抗非生物胁迫性状基因及特殊蛋白基因已被转化到农作物中以改良现有的农作物和培育新的农作物品种。以DNA重组技术为基础的植物转基因技术极大地扩展了基因信息的来源，打破了远缘物种间自身保持遗传稳定性的屏障。植物转基因技术已应用到玉米、水稻、小麦、大豆和棉花等许多农作物。同时，该技术也正在被尝试用于茄子和草莓等其它的作物中‘1’纠。目前，根据转基因植物的受体类型，植物转基因方法可以分为3大类：以外植体为受体的基因转化方法，如农杆菌介导法、基因枪法和超声波介导法；以原生质体为受体的基因转化方法，如聚乙二醇法、电击法、脂质体法及磷酸钙-DNA共沉淀法；以种质系统为受体的基因转化方法，如子房注射法和花粉管通道法。由于以原生质体为受体的基因转化方法有原生质体培养难度大，培养过程繁杂，培养工作量大且培养技术不易掌握；原生质体再生植株的遗传稳定性差、再生频率低并且再生周期长；相关的转化方法的转化率低、效果不理想等缺点，所以该类基因转化方法未被作为植物转基因的常规方法广泛使用。本文将对农杆菌介导法、基因枪法、超声波介导法、子房注射法和花粉管通道法的原理、基本步骤和优缺点作以简要介绍。 1 以外植体为受体的基因转化方法 1.1农杆菌介导法 农杆菌介导法是最早应用、最实用有效并且具有最多成功实例的一种植物转基因方法。农杆菌是一类普遍存在于土壤中的革兰氏阴性细菌。目前，用于植物转基因介导的农杆菌是根癌农杆菌和发根农杆菌。某些根癌农杆菌和发根农杆菌分别含有大小为200 -800bp的结构和功能相似的Ti质粒和Ri质粒。Ti质粒和Ri质粒含有3个功能区：参与农杆菌侵染植物过程的vir区、参与农杆菌基因整合到宿主植物基因组过程的T-DNA区、在农杆菌中启动质粒复制的ori区。在vir区上的vir操纵子群作用下，Ti质粒和Ri质粒能将自身的T-DNA转入宿主植物细胞内，而后将T-DNA整合到植物基因组中。T— DNA是质粒上一段10—30kb 的序列，它的两端各有一段高度保守的25bp的同向重叠序列。由于T-DNA转化无序列特异性，因此可用任何基因片段代替原来的T-DNA基因片段进行。 农杆菌介导法的原理是：在农杆菌基因ehvA，chvB，pscA，and att家族所编码的蛋白和植物伤口产生的酚类物质和糖类物质的共同作用下，农杆菌识别并附着在宿主细胞壁上。virD4和virB基因编码蛋白组成的type IV分泌系统将单链VirD2-T-DNA复合体运送到宿主细胞内。此外，VirE3、VirE2和VirF蛋白也通过该系统进入宿主细胞质中。在宿主细胞质中，VirE2蛋白与VirD2-T-DNA复合体结合。在VirD2核定位信号、某些农杆菌蛋白和宿主细胞蛋白的共同作用下，VirD2-T-DNA复合体进入细胞核。在VirD2、VirE2、某些宿主细胞核蛋白如AtKu80和DNA连接酶的作用下，T-DNA被整合到宿主基因组中，但具体过程不详。 农杆菌介导法的基本步骤是：(1)诱导目标植物外植体；(2)构建含有目的基因的质粒；(3)质粒导人合适的农杆菌菌株中及该菌株的活化过程；(4)植物愈伤组织的微伤口处理及农杆菌侵染；(5)共培养及脱菌处理； (6)愈伤组织筛选、分化与植株再生；(7)再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测；(7)转基因T1代的目标性状鉴定。 农杆菌介导法具有操作简单、转化效率较高、重复性好、单拷贝整合、基因沉默现象少、转育周期短、转化片段较大且插入片段明显及实验费用低等优点，因此，农杆菌介导法是目前应用最广泛的一种植物转基
植物转基因技术 植物转基因技术，也被称为植物基因工程技术，是一种利用生物技术手段改造植物基因组的方法。通过将外源基因导入植物细胞中，植物转基因技术使得植物获得了新的性状或功能，从而在农业、环境保护和医药等领域带来了革命性的变化。 一、植物转基因技术的原理和方法 植物转基因技术主要依靠DNA分子的重组和重构完成。其中，常用的方法包括基因枪法、农杆菌介导转化法和双链RNA法。基因枪法是将外源基因通过微粒轰击的方式送入植物细胞中，使得外源基因插入目标植物基因组中。农杆菌介导转化法则通过利用农杆菌将外源基因转移到植物细胞中。双链RNA法则是通过RNA干扰的方式，引导RNA分子与目标基因互作，从而达到基因沉默的目的。 二、植物转基因技术的应用 植物转基因技术在农业领域中有着广泛的应用。常见的转基因植物作物包括转基因水稻、转基因玉米、转基因大豆等。这些作物通过引入耐草酮类和杀虫剂抗性基因，提高了作物的抗蚜、抗虫能力，从而减少了农药的使用量。此外，转基因作物还能够抵抗病毒、细菌和真菌等各类病害，提高了作物的产量和质量。 植物转基因技术在环境保护领域也有重要的应用。通过转基因技术改造植物的性状，例如增加植物的污染物吸收能力和金属离子富集能
力，可以用于修复受到污染的土壤和水源。此外，转基因技术还可以 改善植物的耐旱、抗盐性能，以应对气候变化和土地退化等问题。 植物转基因技术还在医药领域有着巨大的潜力。通过转基因技术， 植物可以成为生产蛋白质药物和疫苗的“生物工厂”。例如，转基因植 物可以表达人类胰岛素、乳制品过敏症患者所需的乳头素等蛋白质， 用于治疗糖尿病、乳制品过敏等疾病。 三、植物转基因技术的争议和风险 尽管植物转基因技术在农业、环境保护和医药领域带来了巨大的潜力，但它也面临着一些争议和风险。其中，最主要的争议之一是关于 转基因食品的安全性问题。有人担心转基因食品对人体健康产生潜在 影响，而另一些人则认为已有的科学研究没有证明转基因食品有害。 此外，植物转基因技术也可能对生物多样性产生一定影响，例如转基 因植物与野生植物的杂交，可能引起野生种群的基因污染。 四、植物转基因技术的未来发展 尽管植物转基因技术面临诸多争议和风险，但其未来发展仍然广阔。随着科学技术的不断进步和安全性评估的加强，植物转基因技术有望 在农业、环境保护和医药等领域发挥更大的作用。值得注意的是，科 学家们应该加强与公众的沟通，透明公开相关研究的成果，提高公众 对植物转基因技术的认识水平，以减少不必要的争议和风险。 总结：
植物转基因技术的原理和方法 1、植物转基因技术的原理 植物转基因技术是指将外源DNA片段插入到植物细胞的过程，从而改变植物的表型特征。在植物转基因技术中，将外源DNA插入到植物细胞的过程包括以下几个步骤： (1) DNA片段的生产和收集：DNA片段的生产和收集是通过一系列的生物技术手段来实现的，比如PCR扩增技术、染色体复制，等等。 (2)特異性克隆：特異性克隆是一种利用抗原受体系统的分子生物学技术，主要是通过聚合酶链反应的方法，将无菌的DNA片段植入到宿主细胞中，从而使改变细胞表型性状的抗原受体获得潜在的克隆特异来源。 (3) 载体特异性转染：载体特异性转染是将DNA片段植入到宿主细胞中的过程，它通常是利用哺乳动物质粒等载体将外源DNA片段植入到宿主细胞中。 (4) 转化：转化是植物细胞在受到DNA片段植入后，能够形成含有外源基因的植物的过程。 2、植物转基因技术的方法 (1) 诱导细胞抗性：植物转基因技术可以利用一些诱导剂，如多聚糖、双链RNA等，通过诱导植物细胞的自然抗性，让其增加免疫反应及抗外源性抗原的能力，从而提高转基因植物的转化效率。 (2) 共价结合技术：共价结合技术是一种利用化学方法将外源DNA植入植物细胞的技术，它通常利用某种活性稀释剂将DNA片段与
植物细胞表面形成稳定的共价结合，从而使外源DNA片段能够植入宿主细胞。 (3) 转化抗性：转化抗性是一种利用抗生素来抑制植物细胞的自然抗性，从而促进植物细胞内部外源DNA的转化。一般常用的抗生素有青霉素和环丙沙星。 (4) 小麦内含体技术：小麦内含体技术是一种利用小麦内含体将外源DNA植入植物细胞的技术，它通常利用小麦内含体外质壁偶联（ECC）促进外源DNA的转化。
将目的基因导入植物细胞的方法 随着生物技术的不断发展，基因编辑和转基因技术在农业领域中得到了广泛的应用。将目的基因导入植物细胞，可以使植物获得更好的抗病性、耐旱性、耐盐性等性状，从而提高植物的产量和品质。本文将介绍几种常见的将目的基因导入植物细胞的方法。 1. 农杆菌介导的转化 农杆菌介导的转化是将外源DNA导入植物细胞的一种常见方法。农杆菌是一种土壤细菌，具有天然的基因转移能力。它可以将Ti质粒（土壤杆菌肿瘤质粒）导入植物细胞，并在植物细胞中形成肿瘤。利用这种特性，科学家可以将目的基因植入Ti质粒中，然后通过农杆菌介导的转化将其导入植物细胞中。这种方法适用于多种植物，包括拟南芥、玉米、水稻等。 2. 基因枪法 基因枪法是将外源DNA通过压缩气体或加速粒子的方式直接送 入植物细胞的一种方法。这种方法不需要农杆菌或其他转化载体的介入，因此可以避免由于介导体的限制而导致的转化效率低下的问题。基因枪法可以用于多种植物，包括玉米、大豆、小麦等。但是，由于该方法需要使用高压气体或加速粒子，因此设备成本较高，操作难度较大。 3. 电穿孔法 电穿孔法是将外源DNA通过电场脉冲的方式导入植物细胞的一 种方法。在这种方法中，植物细胞被置于含有外源DNA的缓冲液中，
并受到电场脉冲的作用，使得细胞膜发生短暂的孔隙，外源DNA通过这些孔隙进入细胞质。该方法适用于多种植物，包括拟南芥、玉米、水稻等。电穿孔法具有转化效率高、设备成本低、易于操作等优点，因此被广泛应用于植物基因转化中。 4. 直接DNA转化法 直接DNA转化法是将外源DNA与植物细胞一起置于含有多种物质的缓冲液中，通过一系列的化学反应和电化学反应使外源DNA进入植物细胞的一种方法。该方法适用于多种植物，包括拟南芥、玉米、水稻等。直接DNA转化法具有操作简单、无需特殊设备等优点，但转化效率相对较低。 总之，将目的基因导入植物细胞是一项重要的技术，可以为农业生产提供更多的选择。不同的转化方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑多种因素，包括植物种类、实验目的、设备和技术条件等。随着技术的不断发展，相信我们将会有更多更有效的方法来实现高效的植物基因转化。
植物转基因技术研究 随着人类社会的发展和人口的增加，粮食安全问题逐渐成为世界关注的焦点。传统的农业模式无法满足当前的粮食需求，因此科学家们开始探索一些新的技术手段，其中植物转基因技术被广泛应用于提高农作物的产量和改善植物品质方面。本文将深入探讨植物转基因技术的原理、发展现状以及存在的问题和争议。 一、植物转基因技术的原理 植物转基因技术是利用生物技术手段将外源DNA序列导入植物细胞中，并使其在植物生物体中产生稳定的遗传变异，从而改变植物的性状、产量和适应环境的能力。植物转基因技术的主要实验步骤包括外源基因的构建、基因导入和筛选、转基因植物育种和基因治理等。 外源基因的构建是植物转基因技术的第一步。科学家们根据预定的目标，从其他物种或自然界中筛选出合适的基因，经过特定的操作和处理，构建出转基因向量。这些向量包含目标基因、载体DNA和调控元件等重要的组成成分。其中载体DNA通常采用从Agrobacterium tumefaciens或农杆菌中提取的Ti质疑质粒DNA
来构建，而载体中的目标基因则是通过PCR扩增或其他人工合成技术获得。 基因导入和筛选是植物转基因技术中最关键的步骤，也是技术的核心。这个过程包含两个部分：一是将外源基因导入到植物细胞中；二是在转化过程中进行筛选，确定哪些细胞成功地将外源基因整合到自身的基因组中。植物转基因技术中目前主要有两种基因导入方法：化学法和物理法。其中化学法主要是利用化学试剂对细胞壁和细胞膜进行破坏，使外源DNA能够进入细胞内，这种方法成本低，但对细胞的生理影响较大。而物理法采用高速离心、甘油或微粒轰击等方式将DNA导入细胞中，比化学法效率更高，但成本较高。 转基因植物经过筛选后，植物体细胞中的外源DNA会整合到植物染色体的某个位置，形成转基因植物。与传统的育种方法相比，植物转基因技术具有快速、选择性强、可控性高等优点。转基因植物的种子经过筛选培养，最终得到的是遗传稳定、具有预期性状的植株。 二、植物转基因技术的发展现状
转基因植物的方法 1. 转基因植物育种方法 转基因植物育种是一种利用基因工程技术将外来基因导入到目标植物中，以改变其性状、提高产量、增强抗病性和适应环境等特性的技术。该技术主要包括基因克隆、构建载体、基因导入和筛选等四个步骤。通过这些步骤，人们可以将具有某种有益性状的基因导 入目标植物中，从而实现植物育种的目标。 2. 病虫害防治方法 利用转基因技术可以向植物中导入一些抗病虫基因，提高植物对病虫害的抵抗能力， 从而减少或避免农药的使用。向玉米中导入BT基因，可以使玉米对玉米螟的防御能力提高，从而有效控制玉米螟的危害，减少对玉米的损失。 3. 提高植物品质方法 通过向植物中导入可抑制酸性糖的基因，可以降低果实酸度，提高果实的甜度；通过 导入可提高果实香味和口感的基因，可以增加果实的风味和品质。 4. 提高产量方法 通过向植物中导入可促进植物生长发育的基因或增加植物的吸收效率等措施，可以提 高植物产量和种植收益。在水稻中导入SPXI基因，可以提高水稻的产量和粮食质量。 5. 土壤污染修复方法 通过向植物中导入可吸附和分解有毒化学物质的基因，可以有效净化土壤。向植物中 导入CODA基因，可以提高植物对有机氯农药的吸附能力，减轻土壤污染。 6. 植物逆境环境适应方法 通过向植物中导入耐旱、耐盐、耐寒基因等逆境基因，可以增强植物的逆境环境适应 能力。向小麦中导入DREB1A基因，可以提高小麦的耐旱性能，从而提高了小麦的产量和抗旱性。 7. 植物保护方法 通过向植物中导入编码抗毒素、抗病毒等基因，可以提高植物的抵抗力和免疫力。向 番茄中导入ACO2基因，可以提高番茄植株对植物病毒的抵抗力，保护番茄庄稼的安全。 8. 提高植物营养价值方法
植物转基因技术 质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了拟核中的DNA外，还有大量很小的环状DNA 分子，这就是质粒(plasmid)（补充：部分质粒为RNA）。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进细菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的%～3%。根据相对分子质量的大小，大致上可以把质粒分成大小两类：较大一类的相对分子质量是40×106以上，较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1～2个质粒；另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后仍然能继续复制，每一个细胞内一般有20个左右质粒。这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成还会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。 在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr)，并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点，不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或