２００８Ｎｏ．５
?３４?
ＳｅｄａｌＮｏ．１８２
ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇ
ＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏｒｔ
肉汤培养基，分别挑１环已保藏的菌种振荡混匀，在３０℃培养箱中静置培养４８ｈ左右，使其得到充分生长。
乳酸定性鉴定．纸层析法：以１．５％乳酸为标准溶液对Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ＩＡ、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７和Ｌ８菌株发酵液进行纸层析实验。展开剂为乙醇：浓氨水：水＝８０：５：１５（ｖ／ｖ／ｖ）；以０．０４％的溴甲酚紫酒精溶液为显色剂，待层析液挥发之后，向层析滤纸喷洒并计算＆值。
乳酸定量测定阳：各取发酵液ｌｍＬ置于１５０ｍＬ三角瓶中，用５０ｍＬ蒸馏水稀释，以酚酞为指示剂，用０．ＩｍｏＵＬ的ＮａｏＨ标准溶液滴定溶液至微红色，记录用去的ＮａＯＨ标准溶液体积。酸度（。Ｔ）以１００ｍＬ发酵液中的产酸量计。
酸度（。Ｔ）《醐ｘ、ｋ一１００
式中：‰Ｉ指ＮａＯＨ标准溶液的摩尔浓度，Ｏ．１ｍｏ乩；Ｖ螂
指滴定所用的ＮａＯＨ标准溶液的体积。
１．２．４形态学鉴定
将分离的菌种分别接种到ＭＲＳ琼脂培养基上，３０℃培养４８ｈ，观察菌落特征，取典型单茵落，涂片并进行革兰氏染色和芽孢染色，油镜下观察菌体形态。１．２．５生理生化鉴定【３１
（１）糖发酵试验，（２）过氧化氢酶试验，（３）硝酸盐还原
试验，“）吲哚试验，（５）精氨酸水解试验，（６）明胶液化试验，（７）硫化氢产生试验，（８）葡聚糖产生试验，（９）运动性检查：使用试验菌生长良好的ＭＲＳ肉汤培养基，加入０。５％的琼脂。用直针穿刺接种试验菌于半固体培养基内，置于３０℃培养４８ｈ。２结果与分析２．１乳酸菌分离
生渍和熟渍自然发酵酸菜汁涂布于改良ＭＲＳ培养基上培养、分离纯化后，挑取菌落直径在１．５ｍｍ左右、透明圈明显的菌株镜检得到革兰氏阳性杆菌、无芽孢、菌落光滑、湿润、符合乳酸菌特性的８株菌，编号为Ｌｌ、Ｌ２、Ｌ３、
Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８。
２．２高产乳酸细茵筛选
由图ｌ纸层析结果可知，８株菌的层析斑点明显，并且和乳酸标准液＆值相近，且位于同一水平线上，可初步判定８株菌种的发酵液中都产生乳酸。
图１乳酸纸层研
Ｆｉｇｕｒｅ１．Ｐａｐｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄ
８株菌产酸量测定结果见图２。在相同培养条件下，各茵发酵液的酸度不同，其中较高的Ｌ３菌株酸度达
２．６８ｘ
１０．２。Ｔ，Ｌ４菌株２．６０ｘ１铲。Ｔ而空白发酵液为４．５０ｘ
１俨Ｔ，均比空白液提高５倍以上。
Ｇ
－ｑ
宝
Ｘ
∑
＿｜趟铤
护◆妒９妒◇护◇◇
图２各菌株的产酸量
Ｆｉｇｕｒｅ２．Ａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅａｃｈｓｔｒａｉｎ
Ｌ３和Ｌ４菌株的形态学特征鉴定结果见表ｌ。
衷１
Ｌ３和Ｌ４菌株的形态特征鉴定结果
Ｔａｂｌｅ１．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｍｏｆｓｔｒａｉｎｓ１．３ａｎｄＬ４
菌株形态特征
菌落突起，圆形、光滑、白色，革兰氏染色阳性，无Ｌ３
芽孢。培养液中生长物浑浊，菌体呈圆端直杆状，直径０．９ｐｍ—１．２ｐ．ｍ，长２斗ｍ－６ｐ，ｍ，单个或成对排列菌落圆形，白色，扁平，表面粗糙，较透明，边缘整齐，Ｌ４革兰氏染色阳性，无芽孢。菌体呈粗短杆状，直径
０．９ｐ．ｍ～１．２ｐ．ｍ，长１．５岬一３斗ｍ，单个或成对排列
２．３高产菌生理生化特征鉴定．２．３．１糖发酵产酸
将乳酸菌Ｌ３和Ｌ４接种到糖发酵培养基中，发酵结
果见表２。
表２Ｌ３和Ｌ４菌株糖发酵结果
Ｔａｂｌｅ２．ＲｅｓｕＩｔｓｏｆｓｔｒａｉｎｓＬ３ａｎｄＬ４ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ
发酵糖类Ｌ３菌株
Ｌ４菌株
发酵糖类Ｌ３菌株
Ｌ４菌株
葡萄塘＋
＋
淀粉＋．
麦芽糖＋．
木糖＋
＋
乳糖＋＋鼠李糖．
．
蔗糖＋＋甘油＋．
果糖＋＋
海藻糖＋
．
半乳糖＋＋
棉籽糖
＋
．
甘露糖
＋
．
注：“＋”为阳性反应，。．”为阴性反应。
３５
２５ｌ５Ｏ
２ｌ
Ｏ
自然发酵酸菜汁中乳酸菌分离鉴定
作者：李凤梅， 王晓， 张双灵， 白皓然， LI Fengmei， WANG Xiao， ZHANG Shuangling，BAI Haoran
作者单位：青岛农业大学,食品科学与工程学院,山东,青岛,266109
刊名：
中国酿造
英文刊名：CHINA BREWING
年，卷(期)：2008(3)
参考文献(5条)
1.毕金峰.刘长江.赵明自然发酵酸菜汁中乳酸菌的分离、鉴定及发酵剂的筛选[期刊论文]-沈阳农业大学学报2000(04)
2.MICHELA M.MARILENA https://www.doczj.com/doc/461247471.html,NFRANCO C Lactic acid fermentation of Brassica rapa:chemical and microbial evaluation of a typical Italian product,(Brovada) 2004(218)
3.凌代文乳酸细菌分类鉴定及实验方法 1999
4.成堃.于同立啤酒酵母中乳酸菌的分离鉴定[期刊论文]-中国酿造 2007(01)
5.BUCHANAN R E伯杰氏细菌鉴定手册 1984
本文链接：https://www.doczj.com/doc/461247471.html,/Periodical_zgnz200803012.aspx