葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定
3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2 ．手工操作法取试管
3 支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。
【临床意义】
1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2 ．病理性高血糖
(1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
(2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
(3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3 ．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4 ．病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等 )
(1) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
(2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1 ．葡萄糖氧化酶对β- D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为α型，64% 为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
2 ．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3 ．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 。加水溶解至 100ml 。吸取 0.1ml 到试管内，在 80 ℃以下烤干使用，可使 2 ～
3ml 血液在 3 ～ 4 天内不凝固并抑制糖分解。
4 ．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。
5 ．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。【评价】线性范围至少可达 22.24mmol/L ，回收率 94% ～ 105% ，批内 CV 为0.7% ～ 2.0% 。批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% ～ 3% 。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相关系数为 0.998
6 ，回归方程 y=1.0026x － 2.29 。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达 342 μ mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果。氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L ，尿酸浓度达 2.95mmol/L ，肌酐浓度达 4.42mmol/L 。半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L ，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L ，胆固醇 4.40 mmol/L ，对测定结果均无显著影响。
左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。
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目录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理
在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。 GOD β-D-葡萄糖+ H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸 POD H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚---------- 醌亚胺（红色）+ H2O 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。 糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。 甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。 肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。 利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。 避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。 异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。
葡萄糖的测定方法 葡萄糖是一种重要的碳水化合物，广泛存在于植物和动物组织中。测定葡萄糖的含量对于食品加工、生物医学研究以及糖尿病的诊断和治疗等领域具有重要意义。本文将介绍几种常用的测定葡萄糖含量的方法。 一、离子色谱法（Ion Chromatography, IC） 离子色谱法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。该方法利用离子交换柱，将样品中的葡萄糖分离出来，然后通过检测器进行测定。离子色谱法具有灵敏度高、分离效果好、操作简便等特点，广泛应用于食品、饮料、药品等领域。 二、高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC） 高效液相色谱法是一种常用的分离和测定葡萄糖的方法。该方法利用高效液相色谱仪，将样品中的葡萄糖分离出来，然后通过紫外检测器进行测定。高效液相色谱法具有分离效果好、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、药品、环境监测等领域。 三、酶法测定法 酶法测定法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。该方法利用葡萄糖氧化酶将样品中的葡萄糖氧化成葡萄糖酸，然后通过测定酸碱度
的变化来确定葡萄糖的含量。酶法测定法具有操作简便、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、生物医学研究等领域。 四、光度法测定法 光度法测定法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。该方法利用葡萄糖与某些试剂反应生成有色产物，然后通过测定产物的吸光度来确定葡萄糖的含量。光度法测定法具有操作简便、准确度高、灵敏度高等特点，广泛应用于食品、药品、环境监测等领域。 五、红外光谱法 红外光谱法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法。该方法利用葡萄糖的特征吸收峰在红外光谱图上的位置和强度来确定葡萄糖的含量。红外光谱法具有非破坏性、操作简便、准确度高等特点，广泛应用于食品、药品、农业等领域。 测定葡萄糖的方法有离子色谱法、高效液相色谱法、酶法测定法、光度法测定法和红外光谱法等。每种方法都有其特点和适用范围，根据具体的需求选择合适的方法进行测定。通过科学准确的测定葡萄糖的含量，可以为食品加工、生物医学研究以及糖尿病的诊断和治疗等领域提供有力的支持。
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中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶 试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。 6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以 12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2．手工操作法取试管3支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。 【临床意义】 1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾 上腺分泌增加时。2．病理性高血糖 (1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。GOD 葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2 POD H2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加
葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 ．/L 磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml 中，用1mol/L 氢氧化钠调pH 至，用蒸馏水定容至1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1
200U ，葡萄糖氧化酶1 200U ，4- 氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至，用磷酸盐缓冲液定容至100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。3 ．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可以存放 1 个月。 5 ．12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L 。 6 ．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。2h 以后方可使用。 7 ．5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围空腹血清葡萄糖为～/L 。 临床意义 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 血糖是指血液中葡萄糖的含量。葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。 一、实验原理 血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。具体反应式为： (1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2 (2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2 (3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物） 其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。 二、实验材料 1.血糖标准品：10mmol/L 2.葡萄糖氧化酶 3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH） 4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5） 5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管 三、实验步骤 1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、 15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。 2.实验组织：3个组别，每组3个试管。A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。注意，每组要做三个平行实验。 3.反应体系准备：
①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。 ②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。 ③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。 ⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。 ⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。 4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。 四、实验注意事项 1.所有试剂瓶和仪器须充分清洗和消毒。 2.离心管和移液管须标志清楚，避免误用。 3.实验过程中，要控制温度、时间、试剂用量等的准确性。 4.检测样品所用的选择性比色法适用于酸性条件，需加入碱液以改变溶液PH值。 5.实验结果的准确性与精密度与试剂的质量、设备的精度等因素有关，需实验者严格操作。
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告 实验目的，通过葡萄糖氧化酶法测定不同浓度的葡萄糖溶液，并利用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验原理，葡萄糖氧化酶是一种特异性酶，只能催化葡萄糖的氧化反应。在此反应中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时还伴随着NAD+被还原成NADH+H+。而NADH+H+在紫外光下有较强的吸收，其吸收峰位于340nm处。因此，可以通过测定NADH+H+的吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。 实验步骤： 1. 预先配制不同浓度的葡萄糖溶液，分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、 0.3mmol/L、0.4mmol/L和0.5mmol/L。 2. 取5个比色管，分别加入0.5ml不同浓度的葡萄糖溶液。 3. 加入0.5ml葡萄糖氧化酶溶液，混匀后放置在37℃恒温槽中反应10分钟。 4. 分别加入0.5mlNADH+H+溶液，混匀后立即测定吸光度A1。 5. 将比色管放入37℃恒温槽中反应5分钟后，再次测定吸光度A2。 实验数据处理： 1. 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度差ΔA（ΔA=A2-A1）为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 用标准曲线测定未知血糖浓度。 实验结果，标准曲线方程为ΔA=0.05C+0.01，R²=0.998，未知血糖浓度为 0.35mmol/L。
实验结论，通过葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，可以得到准确的结果。标准曲线的斜率与浓度呈线性关系，R²接近1，说明实验结果可靠。未知血糖浓度为 0.35mmol/L，与实际值接近，证明该方法准确可靠。 实验注意事项： 1. 实验中要注意葡萄糖溶液和酶溶液的配制浓度，避免误差。 2. 在测定吸光度时，要确保比色管内溶液充分混匀，避免测定误差。 实验改进： 1. 可以尝试使用其他方法验证实验结果，提高实验的可靠性。 2. 可以尝试改变反应条件，如温度、反应时间等，观察对实验结果的影响。 总结，葡萄糖氧化酶法是一种常用的测定血糖浓度的方法，通过本次实验验证了其准确性和可靠性。在实际应用中，可以根据标准曲线测定未知血糖浓度，为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明 1. 引言 1.1 概述 本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。 1.2 文章结构 本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。 1.3 目的 本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究
人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。 2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理： 2.1 葡萄糖氧化酶简介： 葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。 2.2 血糖测定方法概述： 血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。 2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理： 葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。 在葡萄糖氧化酶法中，首先将待测血液样品与含有葡萄糖氧化酶和辅酶NAD+的试剂混合。如果有血液样品中存在葡萄糖，那么它们将与葡萄糖氧化酶发生反应，并且将氧化成葡萄糖酸。同时，在该过程中，辅酶NAD+被还原为辅酶NADH。
氧化酶法测定葡萄糖的原理 一、引言 在生化分析中，准确测定物质的含量是非常重要的，而葡萄糖作为一种常见的单糖，其测定方法也备受关注。本文将介绍一种常用的方法——氧化酶法，该方法以氧化酶作为催化剂，将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并通过测定葡萄糖酸的含量来间接测定葡萄糖的浓度。 二、原理 1. 葡萄糖的氧化反应 氧化酶可以催化葡萄糖与待定电子受体（如辅酶NAD+）之间的氧化反应，生成相应的葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。该反应的化学方程式如下： 葡萄糖+ NAD+ + H2O → 葡萄糖酸 + NADH + H+ 这个氧化反应是一个底物与辅酶之间的双电子转移反应。 2. 氧化酶的作用 氧化酶作为催化剂可以显著加速上述葡萄糖的氧化反应，降低反应的活化能，提高反应速率。同时，氧化酶本身不参与反应，因此可以被反复使用。 3. 检测葡萄糖酸含量
利用化学分析方法，可以测定葡萄糖酸的含量，进而间接推算出葡萄糖的浓度。常用的方法包括光度法、电化学法等。 三、方法步骤 1. 准备样品 将待测样品中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，通常需要进行酸水解、酶水解等预处理步骤，以使葡萄糖完全转化为葡萄糖酸。 2. 添加试剂 向样品中加入适量的辅酶NAD+和氧化酶，使其与葡萄糖酸反应生成NADH。 3. 反应控制 根据实验要求，可以控制反应的温度、 pH 值等条件，以提高反应效率和准确性。 4. 测定吸光度 利用光度法或其他适用的方法，测定反应体系中产生的NADH的吸光度，通过标准曲线或计算公式，推算出样品中葡萄糖的浓度。 四、应用与优势 氧化酶法测定葡萄糖的原理基于酶的催化作用，具有以下优势： 1. 高灵敏度：由于酶的催化作用，可以极大地提高反应速率，使测定结果更加灵敏。
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度： 【样本】 新鲜无溶血血清。
【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。 空白管校准管样品管工作液 1.50 ml 1.50 ml 1.50 ml 蒸馏水0.01 ml ———— 校准液——0.01 ml —— 样品————0.01 ml 分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616. 2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃）， 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20µl 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个 6.记号笔6支 7.蒸馏水1瓶
葡萄糖含量检测方法 引言： 葡萄糖（Glucose）是一种重要的碳水化合物，广泛存在于生物体内，是维持人体正常生理功能所必需的能量来源。因此，准确测定葡萄糖含量对于食品工业、医药领域以及科学研究具有重要意义。本文将介绍几种常用的葡萄糖含量检测方法。 一、巴尔沃法 巴尔沃法是一种经典的葡萄糖含量检测方法，其原理基于葡萄糖与酚类物质如苯酚反应，产生有色物质，通过比色测定葡萄糖含量。该方法操作简单，准确可靠，广泛应用于食品工业和医药领域。 二、酶法 酶法是目前常用的葡萄糖含量检测方法之一。酶法利用葡萄糖氧化酶将葡萄糖与辅酶NAD+反应，生成葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。通过测定NADH生成的吸光度变化，可以间接测定葡萄糖含量。酶法具有高灵敏度和高选择性的特点，广泛应用于生化分析和临床诊断。 三、高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）是一种基于分离和定量分析的葡萄糖含量检测方法。该方法利用色谱柱对复杂的样品进行分离，通过检测葡萄糖在柱上的保留时间和峰面积来定量分析葡萄糖含量。HPLC法
具有高分辨率、高灵敏度和高准确性的优点，被广泛应用于食品、医药和环境等领域。 四、红外光谱法 红外光谱法是一种无损的葡萄糖含量检测方法。该方法利用葡萄糖分子的特定振动频率与红外光的相互作用，通过检测样品吸收红外光的强度来定量分析葡萄糖含量。红外光谱法具有快速、无损和准确的特点，被广泛应用于食品质量控制和生化分析领域。 五、电化学法 电化学法是一种基于电化学原理的葡萄糖含量检测方法。该方法利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，产生电流信号。通过测量电流信号的强度，可以定量分析葡萄糖含量。电化学法具有快速、灵敏度高和选择性好的优点，被广泛应用于食品安全检测和环境监测等领域。 结论： 根据以上介绍，我们可以看出，葡萄糖含量的检测方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。在具体应用中，需要根据实际需要和要求选择合适的方法。为了保证检测结果的准确性和可靠性，建议在操作过程中严格遵守实验操作规范，并进行合理的质控措施。随着科学技术的不断进步和发展，葡萄糖含量检测方法也将不断完善和创新，为各个领域的应用提供更好的技术支持。
葡萄糖测定标准操作规程 1.检验原理：（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。过氧化物酶（POD ）在色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA ）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量成正比。 D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分 3.样本要求：新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！ 4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5.参考范围： 6.检验结果的解释：
6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时，本试剂线性范围可达25mmol/L。样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释倍数为10. 6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×18 7.检验方法的局限性 7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。 7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。 8.试剂性能指标 8.1试剂外观：R1：无色或淡红色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色透明液体，无悬浮物及沉淀。 8.2装量：不低于标识值。 8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.200 8.4线性范围：试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.2-4.7]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L；（4.7-25）mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。 8.5准确度：使用参考物质测定时，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L，当浓度＞4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应在±20%范围内。 8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度的样品换算成1mmol/L的葡萄糖时，吸光度变化△Ammol/L≥0.02 8.7精密度 8.7.1.批内差CV≤5% 8.7.2批间相对极差：R≤10% 8.8稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1—3个月的试剂进行测试，应满足1-8.7.1的要求。 8.9 pH值：pH值范围是6.50-7.50. 8.10校准品 8.10.1外观：无色透明液体。 8.10.2净含量：不少于标识值 8.10.3准确度：标准生化分析仪和试剂后，测定校准品，相对偏差应不大
实验十血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在 3．9mmol／ L～ 6．1mmol／L之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义： 其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体 不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及 反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1.了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2.掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后 者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4- 氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内 与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。 反应式如下： GOD 葡萄糖+O2 + 2H2O 葡萄糖酸 + 2H2O2 2H2O2 + 4- 氨基安替比林 POD 红色醌类化合物+ 酚 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0 ） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至 7.0 ，然后用蒸馏水稀释至1L。 2.酶试剂 称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U， 4- 氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调 pH 至7.0 ，加磷酸缓冲液至100ml。