手性色谱柱知识介绍
手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。。在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：
第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：
刷（Brush）型或称为Prikle型
纤维素（Cellulose）型
环糊精（Cyclodextrin）型
大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型
蛋白质（Protein）型
配位交换（|Ligand exchange）型
冠醚（Crown ethers）型
刷型：
刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应
用范围较广、柱效很好的手性色谱柱。
刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于Irving Wainer分类中的第一种类型。刷型手性固定相分为π电子接受型和π电子提供型两类。最常见的π电子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到γ-氨丙基硅胶上的制成。此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供π电子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。
π电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的萘基氨基酸衍生物，这种固定相要求被分析物具有π电子接受基团，例如二硝基苯甲酰基。醇类、羧酸类、胺类等，可以用氯化二硝基苯甲酰、异腈酸盐、或二硝基苯胺等进行衍生化后，用π电子供给型固定相达到手性分离。
刷型固定相的优势在于其易于合成。合成方法在Bill Prikle的著作中有详细的说明。另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的选择因子。它的不利之处在于它仅对芳香族化合物有效，有时不得不进行衍生化反应。但值得一提的是，这种衍生化反应是非手性衍生反应，所以不存在手性衍生的问题。刷型手性色谱使用的流动相基本是极性弱的有机溶剂，这对于制备色谱来讲未必是缺点。
近来，刷型固定相出现了π电子供给和接受基因的混合固定相。如：WHELK-O和BLAMO，及α-BURKE-Ⅱ固定相。α-BURKE-Ⅱ相十分适用于β-阻断剂的手性分离。典型的流动相为二氯甲烷-乙醇-甲醇混合物，比例为85：10：5。加入10mM醋酸铵可以调整保留时间。SS BLAMO Ⅱ，同时具有π电子供体区和受体区，形成手性裂缝，因此对于某些分子具有很高选择性。
纤维素型：
纤维素型手性色谱柱的分离作用包括相互吸引的作用及形成包埋复合物。它们属于Wainer 分类中的第2种类型。市售的手性色谱柱为微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸盐纤维素固定相。很多化合物可通过此类型的色谱柱得到分离。这种类型的手性色谱柱种类也很齐全。流动相使用低极性溶剂，典型的流动相为乙醇-己烷混合物。但特别要注意由于氯可以使纤维素从硅胶上脱落，因此要确保流动相中无含氯溶剂。
这种类型的手性色谱柱主要的制造商之一是日本的Daicel公司，他们生产的纤维素酯和氨基甲酸纤维素柱可以分离多种生物碱和药物。特别值得一提的是OD柱。在某手性化合物异构体的分离中，分离度超过了25，这意味着载样量可以很高，对于制备十分有利。
纤维素固定相的每个单元都为螺旋型，而且这种螺旋结构还存在极性作用、π-π作用及形成包埋复合物等手性分离因素。淀粉代替纤维素制成的此类手性柱显示了和纤维素柱不同的选择性，但是稳定性较差。因为淀粉是水溶性的，因此流动相中必须绝对无水才能保证柱子寿命。目前此类型的柱子能分离80%左右可能面临到的所有手性化合物。此类柱子通常用于正相系统，用正己烷-乙醇，正己烷-异丙醇混合溶剂为流动相。OD柱也可用于反相的情况，但流动相必须含有高浓度的高氯酸盐缓冲液，以防止固定相溶解。即使这样，使用较长时间以后色谱柱也难免要受到损害，但是在某些情况下使用反相系统分离效果要优于使用正相系统。
环糊精型：
环糊精是通过Bacillus Macerans 淀粉酶或环糊精糖基转移酶水解淀粉得到的环型低聚糖。通过控制环糊精转移酶的水解反应条件可得到不同尺寸的环糊精。市售的环糊精主要是α、β、γ三种类型，分别含6、7、8个吡喃葡萄糖单元。环糊精分子成锥筒型，构成一个洞穴，洞穴的孔径由构成环糊精的吡喃葡萄糖的数目决定。环糊精类型及洞穴的孔径等见下表：
环糊精糖元数目洞穴孔径可进入洞穴的分子类型手性中心数目
α 6 4.5-6.0 5-6元环的芳香族化合物 30
β 7 6.0-8.0 联苯或萘 35
γ 8 8.0-10.0 取代芘和类固醇 40
2，3位仲羟基分布在环糊精洞口，6位伯羟基在环糊精分子的外部，这意味着洞穴内部是相对疏水的区域。用环糊精手性固定相产生手性识别要求被拆分物的疏水部分能嵌入环糊精洞穴中，形成可逆的、稳定性不同的包合物，环糊精洞口的羟基和被拆分物的极性基团相互作用。
由于形成包合物速度较慢，因此可能导致色谱峰峰形较差，同样也影响了其在制备色谱中的应用。环糊精固定相的选择性取决分析物的分子大小；α-环糊精只能允许单苯基或萘基进入，β-环糊精允许萘基及多取代的苯基进入，γ-环糊精仅用于大分子萜类。β-环糊精手性固定相应用范围最广。Ibuprofen通过β-环糊精色谱柱得到分离，说明了pH值对氢键的影响。当流动相的pH=7时，观察不到拆分的迹象。pH=4时，可达到好的分离效果。通常分离氨基酸时，常采用低的pH值，以抑制酸性基团的离子化，同时也增强氨基的质子化。磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐证明对β-环糊精色谱柱来说是很好的缓冲液。通常缓冲液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸调节到合适的pH值。高的流速会降低形成复合物的能力，低流速分离效果较好，0.5-1ml/min的流速最好。另外，增加缓冲液的浓度可以克服流速的影响，因为它可以增加环糊精洞穴和流动相的吸引力。
常用缓冲液及其使用浓度如下表所示：
缓冲液浓度目的
TEAA（乙酸三乙胺盐） 0.01-2%
NH4NO3 10-500mM (用于减小包埋)
柠檬酸盐 10-200mM (特别适合于酸性化合物)
醋酸铵 10-200mM
pH值选择见下表:
醇和胺 pH4(加强NH的离子化)
酸 pH7
优化手性分离条件要考虑的方面有：pH值对分离度的影响；流速对分离度的影响；柱温、有机相比例、缓冲盐浓度对分离度的影响。
环糊精的修饰：最近，对环糊精的修饰使环糊精型手性色谱柱可以分离更多的化合物，
并可用于气相手性色谱分离。衍生化是通过将不同的基因键合到环糊精洞穴表面的羟基上。衍生化反应包括乙基化、S-羟基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸盐、3，5二甲基苯基氨基甲酸盐和环状对甲苯酰酯。这些新型的环糊精固定相有许多优点，它们可以分离更多化合物，价格上也有竞争力，由于改进了手性识别能力使其更适用于制备色谱。
配位交换型：
手性配位交换色谱（Chiral Ligand Exchange Chromatography，CLEC）由Davankov发明，是通过形成光学活性的金属络合物而达到手性分离，属于Irving Wainer分类中的第4类手性固定相，主要用于分离氨基酸类。
由于此类固定相是由手性氨基酸—铜离子络合物键合到硅胶或聚合物上形成，因此流动相中必须含有铜离子以保证手性固定相上的铜离子不至流失。其它的过渡金属元素也已用于手性配位交换色谱，但铜离子应用最广。形成络合物的过程十分缓慢，因此有时需提高柱温，最佳温度约50℃。
手性配位交换色谱仅对α- 氨基酸和其类似物有效。β- 氨基酸很难用手性配位交换色谱得以分离。手性配位交换色谱可用于制备，由于流动相中存在铜离子，虽然铜离子能用离子交换柱除去，但增加了样品处理的困难。
大环抗生素型：
大环抗生素型手性色谱柱是最近发展起来的，通过将大环抗生素键合到硅胶上制成的新型手性色谱柱。大环抗生素型手性色谱柱的出现归功于Dan Armstrong的贡献。此类色谱柱常用的大环抗生素主要由三种：利福霉素（Rifamycin），万古霉素（Vancomycin），替考拉宁（Ticoplanin）。利福霉素作为手性添加剂在毛细管电泳分离手性化合物方面得到了成功运用。万古霉素和替考拉宁分子结构中存在“杯”状结构区和糖“平面” 结构区。此类色谱柱性质稳定，可用于多种分离模式。手性分离基于氢键、π-π作用、形成包合物、离子作用和肽键等。
替考拉宁分子量为1885，结构中存在20个手性中心，3个糖基和4个环。酸性基团在多肽“杯”/ “裂层”的一端，碱性基团在它的另一端。酸性基团和碱性基团提供了离子作用点。糖基在三个平面上，可折叠起来将化合物分子包埋在多肽“杯”中。
万古霉素分子量为1449，结构中存在18个手性中心，3个环。万古霉素具有“篮状”结构，它的附近还有一个可弯曲的糖平面，可将分析物分子包埋在“篮子”中。羧基和仲氨基分布在“篮子”的边缘，参与和分析物分子产生离子作用。万古霉素手性色谱柱可用于反相模式、正相模式和极性模式。万古霉素手性色谱柱可以分离胺类、中性酰胺、脂类。但对于酸性化合物选择性较低。在反相模式中，有机相常用四氢呋喃、乙腈和甲醇。水相常用三乙胺-乙酸缓冲液。色谱柱适用的pH范围为4-7。通常优化碱性化合物手性分离条件时，选择pH=7 为起点比较好。另外四氢呋喃、乙腈有最好的选择性。有时采用纯的甲醇和乙醇作流动相也可达到好的分离效果。万古霉素手性色谱柱也可用正相模式，采用正己烷/乙醇为流动相。万古霉素手性色谱柱载样量可以很大，非常适用于制备色谱。
蛋白质型：
蛋白质型手性色谱柱属于第5种类型。分离依赖于疏水相互作用和极性相互作用。已经有多种蛋白质用于此类手性色谱柱。目前使用较多的是α-酸性糖蛋白（α-Acid Glycoprotein，AGP），人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA），牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）和卵类粘蛋白（Ovomucoid，OV）。
α-酸性糖蛋白分子由181个氨基酸残基和40个唾液酸（sialic acid）残基构成。α-酸性糖蛋白分子偏酸性，等电点为2.7。含有两个二硫键，性质很稳定。α-酸性糖蛋白分子可以共价键合到硅胶上，制成手性色谱柱，可以分离许多化合物。
α-酸性糖蛋白手性色谱柱使用的流动相通常为pH 4-7的磷酸盐缓冲液和很小比例的有机相。有机相首选异丙醇，如达不到分离要求，可以尝试乙腈，乙醇，甲醇或四氢呋喃。有机相的改变导致蛋白结构发生暂时的改变。色谱柱的负载量至关重要，典型的负载量为
0.02mg/ml的浓度样品，进样20μl。pH 的改变对手性选择性起关键作用，尤其是胺类化合物。pH降低导致蛋白质负电荷的降低，引起胺类化合物保留时间减小，然而这意味着可以减小有机相比例，使选择性增加，峰形改善。
通过调节有机相比例仍无法达到分离效果时，有时需用电荷调节剂。但这可能引起蛋白结构的永久改变，这些电荷调节剂包括丁酸、辛酸、癸酸和二甲基辛胺。有时也用到1，2 亚乙基二醇，1，2丁醇和氯化钠。温度对分离也有影响，温度增加保留时间，减小分离因子。人血清白蛋白（HSA）分子量为69,000，等电点为4.8。蛋白中认为存在两个药物结合位点：华法令-氮杂普鲁帕宗（warfarin-azapropazone）和苯基二氮杂-吲
（benzodiazapine-indole）结合位点。流动相中加入辛酸，采用人血清白蛋白手性色谱柱可以有效分离benzodiazapine。Warfarin 和oxazepam也用人血清白蛋白手性色谱柱得到了分离，流动相组成为：100mM磷酸缓冲液pH7：乙腈：异丙醇 = 84：10：6。
牛血清白蛋白（BSA）为球型蛋白，分子量为66,000，等电点为4.7。此蛋白为一个单氨基酸链，通过17个二硫键形成9个双环。许多化合物通过牛血清白蛋白手性色谱柱得到分离。牛血清白蛋白不如α-酸性糖蛋白稳定，一些有机溶剂（如乙腈、甲醇）可使蛋白变性，因此使用起来要特别注意。
卵类粘蛋白由蛋清中提取，分子量为55,000。它可分离大量的胺类和酸类化合物。
蛋白手性色谱柱的载样量均较小。影响了蛋白手性色谱柱在制备色谱中的应用。
蛋白手性色谱柱在所有手性色谱柱中是应用最广的色谱柱，但并不是效果最好的色谱柱。
冠醚型：
冠醚类固定相用于分离一级胺，一级胺必须质子化方能达到分离。因此必须使用酸性流动相，如高氯酸。最常用的是冠醚类固定相是18-冠-6，已有商品化产品，由Daicel公司制造。无论（+）或（-）型均可达到有效分离，并可通过变化（+）（-）类型而改变分析物出峰顺序。冠醚作为添加剂也用于核磁共振和电泳，但由于其毒性较大，有致癌性，使其应用受到限制。
目前，国际上手性和手性药物的研究正处于方兴未艾的阶段，手性制药是医药行业的前沿领域。临床上使用的手性药物大都以消旋体给药, 而由于体内蛋白质、酶和受体对两个对映体分子处理的差异, 结果会导致对映体疗效和毒性不同。因此, 单一对映体给药已成为一种趋势。建立对映体药物的手性拆分方法, 在药品质量控制及药物药理、药动学研究领域中日益突出了其重要作用。 高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、超临界流体色谱（SFC）和高效毛细管电泳（HPCE）是手性拆分的主要手段。截止目前，HPLC被认为是测定对应异构体纯度和分离制备光学单一对应异构体的最好方法。它适用范围广，操作条件温和，不会发生分离物构型变化或生物活性被破坏等现象。 为适应临床对单需求我公司研发中心决定开展黄酮类和洛尔类手性药物研发，现阶段研究结果如下： 一、黄酮类药物手性分析 黄酮类化合物在抗氧化、抗肿瘤、抗癌、抗菌、抗炎、抗衰老等方面有很强的药理活性，前期共合成了9对结构全新的黄酮类对映体，这些对映体的手性分析是这类药物研发的攻克难点。我们首先采用反相高效液相色谱法，以β-环糊精等多种手性流动相添加剂进行手性拆分，通过改变手性添加剂的用量调整分离效果，但是试验结果表明手性流动相添加剂法不适用这9对黄酮类对映体的分离分析。同时，我们购买了不同填料的手性固定相色谱柱，采用正相高效液相色谱进行拆分试验，通过大量的试验摸索，试验数据表明，纤维素Chiralcel OZ－H 手性柱对这9对黄酮类对映体显示了不同的拆分效果，且流动相中有机添加剂醇的比例和种类对于这两种柱的手性识别均有一定程度的影响。直链淀粉Chiralpak AD －H 柱对于流动相中醇的种类变化更敏感，不同醇流动相的拆分结果(分离度Rs)差别较大; 而纤维素Chiralcel OZ －H 手性柱对此的差别小。两种手性柱均对二氢黄酮类化合物表现出良好的手性选择性，但手性柱Chiralcel OZ －H 显示了更好的适用性。最终摸索出这9个黄酮类对映体的最佳分析条件，为此类手性药物研发提供强大的技术支持。 二、洛尔类手性药物分析 洛尔类手性药物主要应用于高血压、心律失常、心绞痛等临床病文献资料表明，S-对映体的活性更高，因此对此类药物的手性分析有较大的应用前景。我公
气相色谱柱知识详解 第一节气相色谱柱的类型 气相色谱法（gas chromatography, 简称GC）亦称气体色谱法，气相层析法。其核心即为色谱柱。 气相色谱柱有多种类型。从不同的角度出发，可按色谱柱的材料、形状、柱内径的大小和长度、固定液的化学性能等进行分类。色谱柱使用的材料通常有玻璃、石英玻璃、不锈钢和聚四氟乙烯等，根据所使用的材质分别称之为玻璃柱、石英玻璃柱、不锈钢柱和聚四氟乙烯管柱等。在毛细管色谱中目前普遍使用的是玻璃和石英玻璃柱，后者应用范围最广。对于填充柱色谱, 大多数情况下使用不锈钢柱，其形状有U型的和螺旋型的，使用U 型柱时柱效较高。按照色谱柱内径的大小和长度，又可分为填充柱和毛细管柱。前者的内径在24mm，长度为110m左右；后者内径在0.20.5mm，长度一般在25100m。在满足分离度的情况下，为提高分离速度，现在也有人使用高柱效、薄液膜的10m短柱。 根据固定液的化学性能，色谱柱可分为非极性、极性与手性色谱分离柱等。固定液的种类繁多，极性各不相同。色谱柱对混合样品的分离能力，往往取决于固定液的极性。常用的固定液有烃类、聚硅氧烷类、醇类、醚类、酯类以及腈和腈醚类等。新近发展的手性色谱柱使用的是手性固定液，主要有手性氨基酸衍生物、手性金属配合物、冠醚、杯芳烃和环糊精衍生物等。其中以环糊精及其衍生物为色谱固定液的手性色谱柱，用于分离各种对映体十分有效，是近年来发展极为迅速且应用前景相当广阔的一种手性色谱柱。 在进行气相色谱分析时，色谱柱的选择是至关重要的。不仅要考虑被测组分的性质，实验条件例如柱温、柱压的高低，还应注意和检测器的性能相匹配。有关内容我们将在以后章节中加以详细讨论。 第二节填充气相色谱柱 填充气相色谱柱通常简称填充柱，在实际分析工作中的应用非常普遍。据资料统计，日常色谱分析工作大约有80%是采用填充柱完成的。填充柱在分离效能和分析速度方面比毛细管柱差，但填充柱的制备方法比较简单，定量分析的准确度较高，特别是在某些分析领域（例如气体分析、痕量水分析）具有独特用途。从发展上看，虽然毛细管柱有逐步取代填充柱的趋势（例如已有一些日常分析使用PLOT柱代替过去常用的气固色谱填充柱），但至少在目前一段时期内，填充柱在日常分析中仍是一种十分有价值的分析分离手段。 填充柱主要有气固色谱柱和气液色谱填充柱两种类型。在色谱柱中关键的部分是固定相。在本节我们将首先介绍柱管的选择及其处理方法，然后再分别重点讨论气固色谱柱和气液色谱填充柱有关固定相的内容。
手性色谱柱知识介绍 手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。。在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。 第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。 但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种： 刷（Brush）型或称为Prikle型 纤维素（Cellulose）型 环糊精（Cyclodextrin）型 大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型 蛋白质（Protein）型 配位交换（|Ligand exchange）型 冠醚（Crown ethers）型 刷型： 刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应
手性色谱柱是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。 要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。 对于新的实验室要开展手性方面的研究，但不知怎么配置手性柱才能最好的，最大范围的对目标化合物取得较好的分析结果，下面我们来给您一些建议吧。 （加个表情或者箭头） 我把常用手性柱分成了五类，具体情况如下，建议每一类选择其中一种。
第一类：AD-H和IG，两个型号分离范围都比较广，区别是AD-H是涂敷型的，只能用于正相体系，IG是键合型的，正反相体系都适用。相对而言，AD-H这个型号是所有手性柱中的明星柱，所以建议选择AD-H型号。 AD-H IG 第二类：OD-H和IC,同理，OD-H是涂敷型的，只能用于正相体系，IC是键合型的，正反相体系都适用。其中IC对于含有羧基的酸性手性化合物分离性能更优异一些，并且第一类选择了涂敷型，所以这个建议选择键合型IC型号。 OD-H IC 第三类：IBN-5和AS-H，AS-H是四大金刚柱之一，比较经典，IBN-5是最近两年上市的，他跟其他型号互补性较强，当然这样也造成其应用范围比较窄的缺点，比如：有100种消旋体，AS-H或者AD-H能分离其中的85种，但对于剩下的15种分离效果不是很好，IBN-5可能对剩下的15种分离效果不错。所以这一类如果整体考虑，可以选择IBN-5，如果单独考
1 手手性性高高效效液液相相色色谱谱法法 **手手性性药药物物分分析析的的概概念念 **常常用用手手性性高高效效液液相相色色谱谱法法 手手性性衍衍生生化化试试剂剂法法 手手性性固固定定相相法法 手手性性流流动动相相添添加加法法 2 手手性性的的概概念念：：一一种种镜镜像像反反射射的的对对称称性性
3 手性分子：组成相同但空间结构上互成镜像的分子，称之为对映异构体。 分子结构中含有不对称碳原子是最常见的手性结构。 根据对偏振光的作用不同可分为R、S体，两者的等量混合物称之为消旋体。 OH COOH H CH 3 OH COOH H CH 3 4 Mirror Mirror
手手性性异异构构体体在在药药理理学学效效应应上上的的差差异异 ● Pfeiffer 规则： ● 对映异构体之间的生物活性存在着差异； ● 不同的对映体之间活性的差异是不同的； 当手性药物的有效剂量越低，即药效强度越高时，则对映体之间的药理作用的差别越大。 外消旋体和其两种单一对映体是不同的3种实体！ 5 对对映映体体与与生生物物大大分分子子的的三三点点作作用用 c a b d a b d c α γβ α β γ 手性分子的a 、b 、c 结合，是高活性对映体（优映体）。 手性分子的a 、b 、c 三个基团中只有a 和b 与受体分子的活性作用点 6 在未研究清楚两种单一对映体之间的生物学差异时，以消旋体给
药往往会影响药物质量，甚至会严重损害人体健康。 “反应停”(Thalidomide)作为人工合成药，当时投入使用时是两种 对映体的混合物。 7 反应停：五十年恩怨 发展趋势： 劣映体本身或其代谢物产生毒副作用，不再使用外消旋体。外消旋体转换成单一对映体，不仅提高质量，还延长药物寿命。 如：氧氟沙星的左旋异构体活性更强，左旋氧氟沙星临床使用剂量是消旋体的一半。
优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？ 正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。 建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？ 流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。 建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？ 根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。 手性柱使用完了之后如何清洗保存？ 正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。 CROWNPAK? CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？ CROWNPAK? CR(+)柱流动相中甲醇含量为0％-15%，甲醇的含量一旦超过15%，CROWNPAK? CR(+)柱会被损害。 正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？ 正相手性色谱柱（例如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。 样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？ 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在MA（+）柱上出现较多。 4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。 5、流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。 （小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？ 该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线
Nov 2005 Page 1 手性柱 CHIRALPAK ? AD 使用手册 请在使用色谱柱前仔细阅读本《使用手册》 色谱柱描述: 10卩硅胶表面涂布有直链淀粉—三（3,5 —二甲苯基氨基甲酸酯） 出厂保存溶剂： 正己烷/异丙醇（90:10 v/v ） 0 to 40 ° C 最大流速也和流动相粘度（流动相成分）有关，必须小心不能超过柱压上限 流动相 250 x 4.6mm ID 250 x 10mm ID 250 x 20mm ID 烷烃/醇类 90:10 1.0 to 1.5 ml/min 5.0 to 7.0 ml/min 18 to 25 ml/min 100% 乙醇 0.5 ml/min 2.0 to 3.0 ml/min 5.0 to 8.0 ml/min 100% 异丙醇 0.2-0.3 ml/min 1.0 ml/min 3.0 to 5.0 ml/min 柱压指色谱柱压降，即接上柱子后系统的压力与未接柱子时系统压力的差值。 填料结构: CH 250 x 4.6 mm ID 250 x 10 mm ID 半制备柱 250 x 20 mm ID 半制备柱 流动相方向 参照色谱柱标签上的箭头 典型流速 1.0 ml/min 不要超过1.5ml/min 柱压范围 5.0 ml/min 不要超过7ml/min < 30 Bar ( 约 430 psi) 不要超过50 Bar ( 约700 psi) 18 ml/min 不要超过25ml/min 温度 R = O CH 该色谱柱在岀厂之前都已经通过了检测，检测条件、结果和批号信息请查阅“岀厂检测报告”。
手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。 这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。 在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。 迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
色谱柱相关知识 1、色谱柱的使用说明： （1）色谱柱使用前注意事项： 色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。 （2）流动相： 流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。 （3）样品： 样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。 2、色谱柱的保存?? （1）反相色谱柱每天实验后的保养： 使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。 （2）长期保存色谱柱： 如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。 3、色谱柱的再生?? 因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。 （1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，
北大考博辅导：北京大学地理学（环境地理学）考博难度解析及经验 分享 2018-2019年考研时，地理学专业考研学校排名是广大考研学子十分关心的问题，2017年12月28日，教育部学位与研究生教育发展中心发布了最新第四轮地理学学科评估结果，是目前比较权威的排名数据。 从榜单中我们可以看出，全国共有43所开设地理学类专业的大学参与了排名，其中排名第一的是北京大学，排名第二的是北京师范大学，排名第三的是华东师范大学。 下面是启道考博整理的关于北大地理学（环境地理学）考博相关内容。 一、专业介绍 资源与环境地理系环境地理学教研室是国内最早研究环境问题的单位之一，陈静生、关伯仁等老一辈教授是中国环境科学的主要开拓者，自五十年代初以来一直从事环境地理学和环境生物地球化学方面的研究。随着技术手段和研究水平的不断提高，先后取得了大量理论科研成果，并在解决实际环境问题方面发挥了重要作用。通过211以及985计划等的支持，本学科点在科研人才、设备、科研成果等方面在国内已经具有了一定优势，在若干领域也取得了一系列高水平研究成果。 目前，国外研究的热点是探索微量污染物在多介质环境中的归趋、如污染水平、空间分布、动态变化、来源解析、界面迁移、多介质模拟、生物吸收、生态效应和健康危害等。本教研室目前研究重点包括两个方面。一是重点研究持久性有机污染物的区域环境过程和对生物吸收的有效性。二是重点研究有毒有害化学物质(包括内分泌干扰物质，持久性有机污染物质和新出现的环境污染物质), 在食物链中的传递规律与机制、生态健康危害机理和风险评价。 近5年来，本教研室承担了包括1项国家自然科学基金创新群体科研项目、2项国家自然科学基金重点项目、1项973课题、多项国际合作项目、2项国家杰出青年基金项目、1项教育部跨世纪人才基金项目、1项教育部中国高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划资助项目、多项国家自然科学基金面上项目、多个攻关项目及其他有关项目。在近年的研究工作中，随着实验室技术手段和研究水平的不断提高，先后取得了大量理论科研成果，并在解决实际环境问题方面发挥了重要作用，目前已经成为我国环境地学领域学术水平最高的科研基地之一，拥有一流的研究设备，形成了以中青年骨干为主的学术团队和浓厚的学术氛围，
手性分析经验谈 关于手性化合物、手性分析、手性填料和手性柱，现在的理论很多，讲的也比较复杂，我看了很多也不是特别明白，做分析三年多，分过的手性化合物最少也有几千种，拿到手里的消旋体几乎没有分不开的，没用到什么理论，主要都是经验，这里还是拣最实用的来讲。 手性分析可以使用普通的色谱柱，需要流动相中添加手性分离试剂，也可以直接用固定相为手性填料的手性色谱柱，前者使用较少，大家更多的是使用商品化的手性色谱柱。 手性分析包括气相和液相两种，这个主要和样品的物理性质有关系，现在的手性化合物绝大多数都不能做气相，所以气相手性色谱柱无论从数量还是质量上来讲都不能与液相手性色谱柱相提并论。 一、手性柱 手性分离最重要的是选择一根好的手性柱，说到手性柱就不得不提大赛璐，做手性分析的都知道，大赛璐的手性柱目前市场占有率最高，大家最熟悉的可能是OD- H，很多文献中都有报道。大赛璐公司最初有四种填料，结构类似，对应的色谱柱分别是OD、AD、OJ和AS，粒径10um，后来填料粒径变为5um，就是卖的最多、使用范围最广的柱子，号称四大金刚，分别是OD-H、AD-H、OJ-H和AS-H，在柱子名称后边加“-H”，意思应该是高效，这些柱子都只能做正相使用，为了在反相色谱中使用开发的柱子在相应的色谱柱名称中添加了一个“R”，上述色谱柱都属于涂覆型填料，不耐溶剂，使用起来受样品溶解性的限制，最近又开发了键合相手性柱，可以使用几乎所有的常见溶剂做流动相，新的溶剂还提供了新的选择性，进而提升了色谱柱的分离能力，主要是IA、I B和IC，其中IA对应AD-H，IB对应OD-H，IC是新开发的填料。和反相柱的发展趋势一样，大赛璐的手性柱也通过减小粒径来获得更高的柱效，最新的手性柱填料粒径是3um。另外大赛璐还有其它一些手性色谱柱，但是远不及上述几种。 关于大赛璐手性柱的详细资料官方网站上讲的很详细，大家有兴趣可以去看，这里主要讲我的使用经验。最近大赛璐公司的销售和技术曾经来过我们公司做讲座，因为我们先后买了他们三四十只手性柱，一直是自己摸索着使用，理论上的东西懂得很少，非常希望专家的能给我们提供指导，提升我们的技术水平，这个讲座的ppt网上流传的很多，对初学者来讲确实非常不错，但是专家的水平让我们实在不敢恭维。我们买了几十只手性色谱柱，但是型号相对很少，平时几乎只用两只色谱柱：AD-H和IC，但是拿到手里的手性化合物除去溶解性和紫外吸收的原因之外，几乎所有的样品都能用这两只色谱柱分开，我们主要的手段是在流动相上下功夫，通过流动相的调整来达到只用一两只柱子去解决遇到的所有手性分析问题，而大赛璐的专家讲座时给我们提供的思路是流动相变化相对较少，更多的是分不开就换柱子。细想一下也不难理解，厂家手里最不缺的就是柱子，为了分析一个样品他们可以试用所有型号的手性柱，但是对我们用户来说，一只柱子动辄一两万，相信没有哪个用户能有厂家那样的魄力和实力，一下子拿出那么多型号的手性柱来为一个样品的分离做筛选。 二、样品前处理 说到手性分析，样品的前处理非常重要。首先是消旋体样品的普通液相纯度问题，样品的纯度低了，看到手性柱上分离开的几个峰让人无从判断究竟对映异构体有没有分离开，分离开的几个峰哪个是杂质峰哪个是对映异构体的峰，所以样品的纯度要尽量的高，一般我们的要求是样品的纯度能达到90%以上，纯度低的样品需要做进一步的纯化。关于对映异构体峰的判断，现在比较好的手段是使用旋光检测器，在色谱图上可以直接看到分离开的两峰吸收一正一负，再有就是使用DAD检测器，通过看两峰的紫外吸收是否一致来做判断。 样品前处理的另外一项是稀释问题，这个问题最容易被忽视，处理不好会直接导致实验失败。我们都知道反
【讨论】高效液相色谱柱的保护 各位同仁，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。 我先来聊聊，算是抛砖引玉了 1、最好用预柱。（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了） 2、每次做完分析，都要进行冲洗， 分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min； 若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。 若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。 3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。 4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。 5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。 6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。 呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！ 1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。 4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。 5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6．压力升高是需要更换预柱的信号。 1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm） 2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm） 3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器 4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！ 还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生： 1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或
手性色谱柱知识介绍 中国色谱网(2006-10-27 9:16:39) 手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。。在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。 迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。 第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。1 但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种： 刷（Brush）型或称为Prikle型 纤维素（Cellulose）型 环糊精（Cyclodextrin）型 大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型 蛋白质（Protein）型 配位交换（|Ligand exchange）型 冠醚（Crown ethers）型 刷型： 刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应用范围较广、柱效很好的手性色谱柱。 刷型手性色谱柱是根据三点识别模式设计的，属于Irving Wainer分类中的第一种类型。 刷型手性固定相分为π电子接受型和π电子提供型两类。最常见的π电子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到γ-氨丙基硅胶上的制成。此类刷型手性色谱柱可以分离许多可提供π电子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等对化合物进行衍生化后进行手性分离。 π电子供给型固定相常见的是共价结合到硅胶上的萘基氨基酸衍生物，这种固定相要求被分析物具有π电
浅谈学情分析的几点经验 课前的学情分析很重要,是你备课、上课成败的重要因素。学情分析应结合你任教的科目，了解学生的兴趣爱好、相关知识的掌握或了解情况、学习习惯与态度等。 在教学中，教师要做到了解学生的认知结构，了解学生薄弱点，了解学生的个性特点和兴趣爱好等，这样才能实行有针对性教学，有的放矢的教学；才能因材施教，科学设计教学过程，灵活使用教学方法，从而实行有效教学。那么怎样做到了解学情呢？我常采取过两种分析方法：(1)交谈法(2)问卷法最好是两种方法结合使用，问卷法比较适合大面调查，设置问题应简洁明了，答案尽量可量化、最好是选择或判断，以方便统计。对于部分不愿答卷或随意答卷者应与之交谈，掌握真实信息，为备课及教学提供一手资料。 本人就自己在教学中一些其他方法做法谈一谈自己的经验 1．通过“教学观察”了解学情 作为一名有经验的教师，首先要学会“教学观察”技能，掌握学生一举一动，一言一行，所谓教学观察技能是指在课堂讲授或指导学生学习的同时，对学生的学习行为实行有目的有计划有组织的感知，以获取教学反馈信息的水平，通过教学观察，能够即时知道自己的教法是否适合学生的需要，学生是否听懂了讲授的内容，学生对教学的态度怎样等；通过教学观察，能够了解学生在学习中哪些知识技能掌握得比较好，哪些还没有完全掌握，存有什么偏差和问题。教师能够根据这些信息，即时对教学作出调整，以减少无效劳动，确保教学活动不偏离预定的教学目标。 教学观察的具体操作方式有； A：听其言 教师在教学中可结合教学内容特点和学生认知结构，设计一些有梯度，有层次，能引起学生共鸣深思的问题，调动学生积极参与课堂，教师可根据学生回答问题情况，即时调整教学设计，调整标高，以期提升课堂效率。 教师也可根据学生在课堂上语言反馈即时了解学情，例如学生兴趣高昂时会激昂陈词，积极参与课堂讨论，按着教师课堂设计，积极思考回答问题，甚至遇到异议时会提出质疑。学生若听不懂或对本节教学活动不感兴趣，他们会沉默不语或者窃窃私语。 教师还可根据学生对课堂作业提出疑问即时了解学生学习效果，问题所在。 B：观其行 学生在课堂上根据自己听课理解情况及兴趣爱好会有不同表现：发现学生抓耳挠腮，眉头紧皱时就是向教师发出他已听不懂的信号；若学生俯头窥看，时不时瞟一眼老师时就是向老师发出他正在开小车，心不在课堂上；若学生躺在桌上，无精打采就是向老师发出他对这节课不感兴趣；若学生手舞足蹈，跃跃欲试就是向老师发出他对这节课兴趣昂然思维活跃。总来说之，老师在教学中要善于捕捉学生行动语言，及每种行动语言反馈信息。 C;察其色 学生在课堂上听课情况，不但会以语言行动形式表现出来，还会以各种表情体现出来。这就要求老师要善于察言观色，若学生对老师教学感兴趣，学得轻松，他会笑逐颜开，思想轻松；若学生对老师教学不感兴趣，学得吃力，疑雾迷漫，他会眉头紧皱，表情呆滞，目无神韵，情绪低落。 所以老师理应即时根据上述三个方面的表现作出准确判断，即时采取调控措施，这种调控措施不是指责和批评学生，而是调整自己教学方式，教学进度以及教学态度，善于聆听学生心声。 2．通过“作业批改”了解学情
This data sheet contains impaortant information about the product. Operating instructions for Astec CHIROBIOTIC? LC Strationary Phases Column Installation 柱安装 CHIROBIOTIC columns are shipped in methanol . Before starting to use a new column , wash with 20ml HPLC grade methanol at 1ml/min.The column test standarad, 5-methyl-5- phenylhydantoin, can be injected at this stage to establish performance . CHIROBIOTIC色谱柱用甲醇装运。开始使用一个新的色谱柱之前，用色谱纯甲醇以1ml/min 的流速洗涤20毫升。色谱柱测试标准，5-甲基-5- phenylhydantoin在这个阶段被注入确立表现。 New columns can take longer to equilibrate, but once baseline stability is achieved it is consistent. New threaded hardware improves column performance. Do not overtighten. This threaded hardware also allows for direct connection to a guard column. 新柱子需要更长的时间达到平衡，但一旦基线达到稳定,是一致的。新的螺纹硬件提高柱子的性能。不要拧得过紧。该螺纹硬件也可直接连接预柱。 General Operating Conditions 常见的操作条件 Flow Rate Range: 0.2 to 3.0 mL/min Typically-1.0mL/min Pressure Range: Up to 3500 psi (240 bar) See details below pH Range: CHIROBIOTIC V and V2 2.7 to 7 CHIROBIOTIC T and T2 2.7 to 7 CHIROBIOTIC R 2.7 to 7 CHIROBIOTIC TAG 2.7 to 7 Injection Volumn: 1 to 5μL of a 1mg/mL solution See details below Mobile Phases 流动相 All known HPLC solvents and buffers are compatible with CHIROBIOTIC phases. The only critical operating parameter detrimental to these columns is extremes of pH. For best performance we highly recommend the Supelco Mobile Phase Degasser (Cat No.55018-U). 所有已知的HPLC溶剂和缓冲溶液与CHIROBIOTIC相兼容。唯一对这些色谱柱有损害的关键运行参数是极端的pH。为了获得最佳性能，我们强烈建议使用Supelco公司流动相脱气机。 Sample Solvents样品溶剂 Expect best results when mobile phase is used as the sample solvent. When the sample solvent has stronger eluotropic properties than the mobile phase, components of the sample may deposit on the head of the column causing poor peak shape and reduced column lifetime. Even if sample adsorption does not occur, incompatibilities between the sample solvent and mobile phase may cause peak distortion, especially in early-eluting compounds. 流动相被用作样品溶剂是被期望的最佳效果。当样品溶剂具有比流动相更强洗脱特性，样品的成分会沉积在柱的头部导致峰形变差和降低柱寿命。即使样品吸附不发生，样品溶剂和流动相之间的不兼容性可能导致峰变形，尤其是在化合物早期洗脱。
1. 怎样选择合适的手性柱 对于在文献中未提及的分析物分离，请参照表1选择合适的手性柱。 表1---手性柱选择指南 2. 选择一点开始你的分析 下面是正相和反相的流动相选择指南:
3. 流动相操作 A正相色谱 在正相模式下，流动相通常由正己烷和异丙醇（IPA）组成。 图1 给出了异丙醇比例的改变对保留因子(k’)和选择因子（α）的影响。 图1 IPA比例对k’ 和α的影响流动相：己烷/异丙醇，检测波长，230NM，流速：1.0 ml/ min
结果表明增加IPA的比例会导致心得安药物的两种对映异构体的k’明显减少。这可以用氢键的作用力减弱来解释。 B 反相色谱 << 极性有机修饰剂 以环糊精为基质的手性柱主要以反相模式为主。因为包结化合物很容易在水相和极性有机相中形成，因此包结化合物通常在水相中有很高的稳定性，加入足够多的有机修饰剂时稳定性会减弱。与只是在水相相比，有机—水相中的样品和环糊精的包结强度会减弱。因此，在反相中，增加流动相中水的比例可能会使保留值减少。 我们公司的手性柱用甲醇和乙腈作为最普通的有机修饰剂。因为相对于甲醇，乙腈和环糊精的空穴有更大的亲和力，所以乙腈的洗脱能力比甲醇大4倍左右。有时，加入两种有机修饰剂，选择性可能不同。目前，很难预测在某一情况下选择哪种修饰剂对分离会有较好的效果。 图2 表明了在RC-SCDP5，不同含量的乙腈对分离必得安对映体的影响。 图2 乙腈比例对k’和α的影响
流动相：水/乙腈，检测波长，230nm，流速：1.0 ml/ min << 缓冲溶液 缓冲溶液在对映体分离过程中起重要作用。在流动相中添加少量盐对保留值和分离度会产生明显的影响。 几乎所有盐类都有利于分离，其中的一些效果显著。环糊精手性固定相的缓冲溶液可以是三氟酸、三乙胺—醋酸盐(TEAA)和磷酸盐（TEAP）缓冲溶液。由于TEEA相对腐蚀小和容易调节PH值，它通常作为添加剂。在某些情况下，对映体分离只能在一个PH值下有效地进行。 三乙胺—醋酸盐和三乙胺磷酸盐通常用来提高对映体分离度。它们与延伸在空间中和溶质结构中的胺基基团相互作用而提高分离度。醋酸可以使氨基甲酸盐的一部分羰基基团通过氢键发生作用，那些氨基甲酸盐的孔洞都会有位阻现象。正常的TEAA的浓度范围应在质量分数0-1.5%，TEAP为0-0.3%。 图3 缓冲溶液对α和Rs的影响 流动相：乙腈/缓冲液（0.2%，pH=5.0）=45/55（v/v）
选择性，即无论怎样减小醇的比例样品都没有分离的迹象，可以换一种醇来试，通常乙醇和异丙醇会有不同的选择性，很多样品乙醇分不开，异丙醇能分离的很好。异丙醇也不行的时候可以尝试在乙醇或者异丙醇里加入合适浓度的叔丁醇或者是甲醇，对于 IC色谱柱可以尝试其它如二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯等其它溶剂，每一种溶剂都能为手性分析提供独特的选择性，一般除了乙醇、异丙醇之外我使用最多的还是叔丁醇，其次是甲醇，叔丁醇可以单独和正己烷做流动相，甲醇必须结合乙醇或异丙醇混合使用。需要着重强调的是，更换醇的种类，有可能会导致对映异构体出峰顺序的改变，使用乙醇的流动相，如果R构型先出峰，更换为异丙醇以后，有可能(不是一定)R构型会后出峰，S构型跑到前边去了。 虽然提高柱温能够使峰形变窄变细，但是会降低分离度，而且大赛璐的手性柱温度上限就是40度(这一点在超临界流体色谱应用上受限尤为明显)，所以优化分析方法时很少有人在柱温上下功夫。另外手性柱分析样品的保留时间受室温变化的影响特别大，通常大家都习惯用消旋体图谱计算对映异构体相对保留时间的方法根据主峰的保留时间来计算异构体的出峰位置。 五、写在最后 大赛璐的手性色谱柱还包括反相的系列，同时键合相的手性柱正相和反相都能用，只是要求在正相和反相流动相之间进行切换的时候要用异丙醇小流速的过渡，因为大赛璐手性柱压力都不能超过100bar，另外需要注意的是键合相手性柱的记忆效应，即流动相使用不同种类的溶剂切换时，柱效可能会下降，解决方法就是用DMF 做溶剂对色谱柱进行清洗。我感觉做反相的手性分离时，我们可以更多的当作使用一只比较特殊的柱子做普通的样品一样来看待，仔细的阅读一下柱子的说明书就好，其它的和最常用的反相液相都一样。反相常用的溶剂包括水、甲醇、乙腈和乙醇，每种溶剂都为样品分离提供了独特的选择性。 大赛璐还有其它一些手性色谱柱，他们的手册上说是要用这些色谱柱才能分离的样品我遇到过很多，用手头的AD-H也都解决了。其它公司也有做手性柱，我们手头也有几只，但是使用不多，没觉得有什么优点。