沉降菌测试方法
1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净
化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=
.........21n
Mn
M M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数
用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
人员进出洁净生产区的一般程序：
人员进出无菌操作洁净生产区程序：
无菌医疗器具洁净室环境要求及监测：
监测项目技术指标监测方法监测频次100级10000级100000级300000级
温度（℃）18℃—28℃1次/班
相对湿度% 45~65 1次/班水平层流
风速m/s ≥0.4 ——————JC
垂直层流1次/月
≥0.3
换气次数——≥20 ≥15 ≥12 1次/月静压差Pa 不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间≥5
洁净室与室外大气≥10 1次/月沉降菌数≤1 ≤3 ≤10 ≤15 GB/T16294-1996 1次/周
附录C（资料性附录）洁净室（区）沉降菌技术要求
洁净室（区）沉降菌技术要求
无菌检查法试验步骤
无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
1、器具灭菌：培养皿若干个（报纸所好）、试管、剪刀、镊子等装入盒中置电热干燥箱内180℃，2小时。
2、硫乙醇酸盐流体培养基（细菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养48小时，应无菌生长。
改良马丁培养基（真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装，灭菌。改良马丁培养基置24℃培养72小时，应无菌生长。
营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml，分装几个皿来计算，灭菌。
0.9%氯化钠分装至7支试管，封口，灭菌。
3、把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下，放入0.9%氯化钠试管中摇匀，作10倍系列稀释至10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放入标号5#、6#、7#培养皿里，倒入营养琼脂摇匀，（营养琼脂不能太烫，以不烫手为准）待营养琼脂冷却后倒置放入33℃培养箱中培养48小时，48小时中取出观察计数，
根据菌落数小于100cfu来决定用几号。
4、操作时，应用适当的消毒液对供试品表面或外包装擦拭消毒后，以无菌方法取内容物。取供试品3只接种于足以浸没供试品的适量培养基中。一只瓣膜接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，轻轻摇动，使瓣膜与培养基混合，1支试管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml,作阳性对照，1支作空白对照。另取2只瓣膜接种于改良马丁培养基中，2支试管作空白对照。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养，改良马丁置24℃培养阳性对照管培养48小时后应有菌生长。
5、结果判断：在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。培养14天后，若供试品管匀澄清，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并有菌生长，判供试品不符合规定。
细菌内毒素试验步骤：
1、准备工作：
移液管：0.1ml1支，1ml10支
试管：10ml×4支，试管架2个（大小）
烧杯40ml2个，锥形瓶2个
试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素，玻璃器皿置电热干燥箱内180℃干烤至少2小时。
细菌内毒素检查水10ml×4支
细菌内毒素工作标准品1支，每安瓿含内毒素10EU
鲎试剂 0.1ml×8支
同一批号3支瓣膜
浸提介质：细菌内毒素检查水
L=8.6（ml）
浸提介质体积计算公式：V=
8.6×3=25.8（ml）
把细菌内毒素检查水4支外表擦净打开，倒入烧杯中，用移液管取25.8ml 倒入装3只瓣膜烧杯中，用锡纸封口，放进提前打开升温至37℃恒温培养箱中，
培养1.5小时。供试液贮存应不超过2小时。
注：V-浸提介质体积，单位为毫升（ml）
L-产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
λ-所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
2、细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查水1ml溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟。
①用移液管取0.1ml工作标准品和0.9ml检查水在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
②用移液管从第1管中取0.5ml混合液和0.5ml检查水在旋涡混匀器上混匀30秒钟。（阳性对照溶液）
③用移液管取0.1ml工作标准品和0.9ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
④用移液管从第3管中取0.5ml混合液和0.5ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。（供试品阳性对照溶液）
3、把8支鲎试剂外表擦净全部打开放进试管架中，每支各加入0.1ml细菌内毒素检查水，在旋涡器上混匀，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。
每支供试品管加入0.1ml供试液；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阴性对照管加入0.1ml阳性对照溶液；供试品阳性对照管加入0.1ml供试品阳性对照溶液。封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果，试管在孵育期间应避免任何振动。
4、结果判断：将试管从水浴箱中轻轻取出，缓缓倒转180若管内形成凝胶，
并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性（＋），未形成凝胶或形成凝胶不坚实，变形并从管壁滑脱者为阴性（－）。阴性对照管均为阴性，阳性对照管，供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查水或实验器具受污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂灵敏度及标准内毒素效价标示不准确或标准内毒素稀释有误。供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应干扰因素存在。
一、氯化物
1、配制标准溶液：0.1mol/L硝酸银溶液。
称取1.6987g分析纯硝酸银，定溶至100ml容量瓶中，转入棕色试剂瓶中，避光保存，贴标签。
2、取样，量取50ml样品水平行样（2份）倒入试管中，加5滴硝酸，再加入1ml硝酸银。均不得发生浑浊。
二、硫酸盐
1、配制标准溶液：称取5±0.5g氯化钡（分析纯），定溶至100ml容量瓶，倒入试剂瓶，贴标签。（如果浑浊，把蒸馏水烧开，放凉再用）
2、分析：取样50ml平行样（2份）倒入试管中，加2ml氯化钡溶液，不得发生浑浊。
三、钙盐
1、配制标准溶液：
称取分析纯草酸铵3.5g，定溶至100ml容量瓶，贴标签。
2、分析：取样50ml平等样2份，倒入试管中，加2ml草酸铵溶液，均不得发生浑浊。
四、二氧化碳
1、配制标准溶液：
称取分析纯氢氧化钙0.3g，定溶至100ml容量瓶，用橡皮塞塞紧，用力振摇，放置1小时，用时取清液。
2、分析：取样25ml平等样（2份）倒入带盖的试管中，加25ml氢氧化钙溶液，放置1小时，振摇，1小时内不得发生浑浊。
五、易氧化物
1、配制标准溶液：①高锰酸钾溶液：取3.3克高锰酸钾，加水1050ml，煮沸15分钟，加水到1000ml，密塞后静置2天以上，用微孔玻璃漏斗过滤，摇匀，标定其浓度。
②稀硫酸：取分析纯硫酸（98%）57ml，（注意烧杯里放蒸馏水，沿杯壁缓慢倒入硫酸57ml，定溶至1000ml，放凉再用）
2、标定：取在105℃干燥至恒重的基准草酸钠约0.2克，精密称定，加新沸过冷水250ml与硫酸10ml搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml，待褪色后，加热到65℃，继续滴定至溶液显微红色并保持30秒钟不褪；当滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，每1ml高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）相当于6.70mg草酸钠，根据本液消耗量与草酸钠取用量，算出本液浓度，即得。
贮藏：置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密闭保存。
3、分析：取样100ml平行样（2份）加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02M）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。
六、氨
1、配制标准溶液
①纳氏试剂：称取60g氢氧化钾，溶于约250ml无氨水，冷却至室温。另
外称取20g碘化钾溶于100ml无氨水，边搅拌边逐步加入二氯化汞结晶粉末（约
10克），至出现朱红色沉淀不易溶解时，改为滴加饱和二氯化汞溶液，保持搅拌，
到出现少量朱红色沉淀不易溶解时，停止滴加饱和二氯化汞溶液，然后把该溶
液缓慢注入上述已冷却的氢氧化钾溶液中，边注入边搅拌，并用无氨水稀释至
400ml，然后静置过夜。最后将该溶液上清液至聚乙烯塑料瓶中，常温避光保存。
②氯化铵溶液：称取分析纯氯化铵0.0315g，定溶至1000ml（0.0032g 100ml）容量瓶中，转入试剂瓶中保存，贴标签。
2、分析：取样50ml，加纳氏试剂2ml，放置15分钟。如果显色，加氯化
铵溶液1.5ml，加无氨水48ml，加纳氏试剂2ml，对照颜色不得更深。（氨含量
0.00003%）
七、重金属
1、配制标准溶液
①醋酸盐缓冲溶液：（PH=3.5）称取分析纯醋酸铵25g，加蒸馏水25ml溶解
后，加盐酸液[7mol/L(称取0.0255g至100ml定溶至100ml)]38ml，再用盐酸液
[2mol/L(称取0.0073g至100ml定溶)]准确调节PN值3.5（电位计指示）用水
稀释至100ml，倒入试剂瓶待用。
②硫代乙酰胺溶液：称取硫代乙酰胺4g，加水溶解成100ml，置冰箱中保
存。临用前取混合液[由1mol/L氢氧化钠（氢氧化钠4克＋100ml蒸馏水）15ml，
水5.0ml及甘油20ml组成]5.0ml加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml置水浴上加热
20秒钟，冷却，立即使用。
③铅标准贮备液：称取110℃干燥恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml容量
瓶中加硝酸5ml与水50ml溶解后用水稀释至刻度，摇匀，作标准贮备液，铅的浓度为100ug/ml。
临用前，精确量取铅标准贮备液稀释至所需浓度。
2、分析：取样40ml，加醋酸盐缓冲液2ml，加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟。取38ml样品水加2ml铅标液加醋酸盐缓冲液2ml加硫代乙酰胺2ml，对比颜色；40ml样品水的颜色不得比铅标液的对照管深。（铅的含量0.00005%）
八、不挥发物：
1、取干净蒸发皿200ml2个，分别标号放入105℃干燥箱中。
第一次：烘烤3小时后，放进干燥皿中冷却40分钟，天平称重，记录。
第二次：烘烤3小时后，放进干燥皿中冷却40分钟，天平称重，记录。
注：第一次和第二次重量差0.3毫克以内，如超过再恒重一次。
2、用移液管量取100ml样品水，放入恒重的蒸发皿中，水分在水浴锅上蒸干，同时做蒸馏水平行样。
3、第一次：把蒸发皿放进干燥箱中烘烤3小时，放进干燥皿中冷却40分钟，天平称重，记录。
第二次：把蒸发皿放进干燥箱2小时，放进干燥皿中冷却40分钟，天平称重，记录。
4、残渣计算公式：
W=[(W12－W11)－(W02－W01)]×1000
W-蒸发残渣质量mg
W11-未加入检验液蒸发皿质量g
W12-加入检验液蒸发皿质量g
W01-未加入空白液的蒸发皿质量g
W02-加入空白液的蒸发皿质量g
九、酸碱度
1、配制标准试剂:
0.05mol/L氢氧化钠溶液：0.05mol/L40=2g=0.2g/100ml
称取0.2g氢氧化钠定溶至100ml。
①甲基红指示液：取甲基红0.1g，加7.4ml氢氧化钠，在超声波完全溶解，再加水稀释至200ml装入试剂瓶。
变色范围：PH4.2-6.3（红-黄）试错4-6
溴百里香蓝：称取溴百里香酚蓝0.1g，加3.2ml氢氧化钠使溶解，再加水稀释至200ml装入试剂瓶。
变色范围：PH6.0-7.6（黄-蓝）
2、分析：取样10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色，取样10ml，加溴百里香酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
PH测定法：
除另有规定外，水溶液的PH值应以玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极的酸度计进行测定。酸度计应定期进行计量检定，并符合国家有关规定。测定前，应采用下列标准缓冲液校正仪器，也可用国家标准物质管理部门发放标示PH值准确至0.01PH各种标准缓冲液校正仪器。
1、仪器校正用的标准缓冲液
⑴邻苯二甲酸盐标准缓冲液：精密称取在115℃±5℃干燥2-3小时邻苯二甲酸氢钾10.21g，加水使溶解并稀释至1000ml（25℃ PH=4.00）。
⑵磷酸盐标准缓冲液：精密称取在115℃±5℃干燥2-3小时的无水磷酸氢二钠3.55g与磷酸二氢钾3.40g，加水使溶解并稀释至1000ml(25℃ PH=6.86）。
⑶硼砂标准缓冲液：精密称取硼砂3.81g(注意，避免风化)加水使溶解并稀释至1000ml置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入（25℃PH=9.18）。
2、注意事项：
⑴测定前，按各品种项下的规定，选择二种PH值约相差3个PH单位标准缓冲液，并使供试液的PH值处于二者之间。
⑵取与供试液PH值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正（定位）使仪器示值与表列数值一致。
⑶仪器定位后，再用第二种标准缓冲液核对仪器示值，误差应不大于±
0.02PH单位。若大于此偏差，则应小心调节斜率，使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符。重复上述定位与斜率调节操作，至仪器示值与标准缓冲液规定数值相差不大于0.02PH单位，否则，需检查仪器或更换电极后，再行校正至符合要求。
⑷每次更换标准缓冲液或供试液前，应用纯化水充分洗涤电极，然后将水吸尽，也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤。
⑸配制标准缓冲液与溶解供试品的水，应是新沸过并放冷的纯化水，其PH 值应为5.5-7.0。
⑹新购置的玻璃电极需在蒸馏水烧杯中浸泡24小时活化后才可使用。
3、操作：
⑴打开电源预热15分钟，探头用蒸馏水洗净，把探头帽里倒上饱和氯化钾溶液。
⑵测定前，分别用邻苯二甲酸盐标准缓冲液4.0校正后，用蒸馏水清洗探头，用滤纸毛边轻轻沾一沾。用磷酸盐标准缓冲液6.86校正，用硼砂标准缓冲液9.18校正后，使仪器示值与表列数值一致。
⑶把新沸过冷却蒸馏水装入小烧杯中，放在探头下，PH值在5.5-7.0之间合格。之后用蒸馏水清洗探头，把装满饱和溶液的探头帽盖上，拔掉电源，将电极放回盒中。
环氧乙烷残留量分析-比色分析法
1、原理：环氧乙烷在酸性条件下水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与品红-亚硫酸试液反应产生紫红色化合物，通过比色分析可求得环氧乙烷含量。
2、溶液配制：
0.1mol/L盐酸：取0.9ml盐酸稀释至100ml
高碘酸溶液（5g/L）：称取高碘酸0.5g，溶于水，稀释至100ml
硫代硫酸钠溶液（10g/L）：称取硫代硫酸钠1.0g，溶于水，稀释至100ml 亚硫酸钠溶液（100g/L）：称取10.0g无水亚硫酸钠溶于水，稀释至100ml 品红-亚硫酸试液：称取0.1g碱性品红，加入120ml热水溶解，冷却后加入10%亚硫酸钠溶液20ml，盐酸2ml置于暗处。
乙二醇标准贮备液：取一个外部干燥、清洁50ml容量瓶，加水约30ml，精确称重，精确量取0.5ml乙二醇，迅速加入瓶中，摇匀，精确称重。两次称重
m×1000 之差即为溶液中所含乙二醇的含量。加水至刻度，混匀计算其浓度：C=
50 C-乙二醇标准贮备液浓度，克/升
m-溶液中乙二醇质量，克
乙二醇标准溶液：精确量取标准贮备液1.0ml，用水稀释至1000ml
3、模拟使用浸提法：
⑴浸提介质：用水作为浸提介质。
⑵浸提温度：整个或部分与人体接触的器械在37℃浸提。
⑶浸提时间：不短于1小时。
⑷浸提表面：器械与药液或血液接触表面。
4、试验步骤：
⑴取5支纳氏比色管，分别精确加入0.1mol/L盐酸2ml，再精确加入0.5ml、
1.0ml、1.5ml、
2.0ml、2.5ml乙二醇标准溶液，另取1支纳氏比色管，精确加入0.1mol/L盐酸2ml作空白对照。
⑵于上述各管中分别加入高碘酸溶液（5g/L）0.4ml，摇匀，放置1小时，然后分别滴加硫代硫酸钠溶液至出现黄色恰好消失，再分别加入品红-亚硫酸试液0.2ml，用蒸馏水稀释至10ml，摇匀，35℃-37℃条件下放置1小时，于560nm 波长处以空白液作参比，测定吸光度。绘制吸光度-体积标准曲线。
⑶精确量取供试液2.0ml于纳氏比色管中，以测得吸光度从标准曲线上查得试液相应的体积。
5、结果计算：
环氧乙烷残留量用绝对含量或相对含量表示
环氧乙烷绝对含量：W EO=1.775VC1M
W EO-单位产品中环氧乙烷绝对含量
M-单位产品质量
C1-乙二醇标准溶液深度
V-标准曲线上找出供试液相应体积
环氧乙烷相对含量：C EO=1.775VC1×103
C EO-单位产品中环氧乙烷相对含量
C1-乙二醇溶液浓度
V-标准曲线上找出供试液相应体积
化学实验室安全制度：
1、实验室人员要熟悉实验室及周围环境，清楚水电开关位置，懂得消防器具使用方法，一旦发生事故，应采取相应措施。
2、实验室各类化学试剂要根据其性质分类，定置存放，标记清楚，摆放整齐，用量严格按照规定量。
3、各种试剂、容器要带有书写清楚标签，避免拿错、用错，吸取各溶液时要用橡皮吸球，严禁用嘴吸，易燃、易爆试剂要远离火源，使用腐蚀性药品应小心，避免沾在衣服或皮肤上。
4、实验室排风设备应保持通畅。
5、实验完毕后，应及时洗涤所用器皿，整理好实验用品。
6、实验后认真整理实验记录，处理实验所得数据。
7、离开实验室前，务必进行水电门窗安全检查，锁好门方可离开。
生物检测室安全制度：
1、实验用过培养基、试管、吸管用品须经有效消毒处理后方可丢弃或清洗。
2、操作仪器时不得超负荷、超量使用。凡有过热、冒烟、异常气味和异常声音等现象应立即切断电源，停止运行，查找原因。
3、实验仪器设备启动后，工作人员要坚守岗位，凡连续工作仪器设备须专人看管。
4、每日上班后检查冰箱、恒温箱工作情况，下班检查水、电、门、窗，确保安全。
5、实验室应备小型灭火器，每人应会使用。
生物室
药典一部高压消毒锅
恒温培养箱2台旋涡混合仪
恒温水浴箱电热鼓风干燥箱
冰箱酒精灯
营养琼脂培养基改良马丁培养箱
硫乙醇酸盐流体培养基 0.9%氯化钠
细菌内毒素工作标准品 10支/盒每安瓿含内毒素10EV
细菌内毒素检查用水 10ml×10
鲎试剂灵敏度0.25EV/ml 0.1ml×10支
培养皿ф90×15 剪刀试管（大、小）试管塞烧杯镊子封口膜
锥形瓶药匙铁盒
量筒洗耳球锡纸
试管架（大、小）移液管接种环
化学室：
紫外分光光度计分析天平
电导率仪及试液 PH仪及试液
干燥箱水浴锅（4个头）超声清洗器电炉/石棉网
滤纸沸石玻璃棒
烧杯锥形瓶
量筒容量瓶
广口瓶试管架
纳氏比色管移液管
洗耳球称量瓶
蒸发皿ф200 滴定管
滴定管架试管 20ml
冲洗瓶剪刀
镊子胶头滴管
PH广泛试纸1-14 刷子
电位仪玻璃仪器柜
配液洁净室沉降菌空气采样及检测方法 1、净化系统在开启状态，房间清洁并擦拭消毒后，紫外线照射30分钟，关闭紫外线后30分钟，无人使用条件下开始采样。 2、测试人员穿着洁净服，戴口罩，手消毒或戴手套。动作要轻，避免产生污染干扰。 3、取直径90mm×15mm无菌普通培养液平板培养皿，编号备用。 4、采样方法： ①普药间及抗化间每月各抽取一个操作台进行监测（1-14为采样点，15为对照点），在洁净间、二更和一更各选取两点（距地面0.8m～ 1.5m），监测结果取平均值； ②将培养皿按采样点布置图逐个放置，然后按编号从小到大的顺序逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中，沉降30min后，盖上平板盖后倒置收起；15号打开后立即封盖，作为空白对照； ③收取培养皿时与放置时顺序相反，从大到小依次收取； ④将采样平板送至检验科。 5、注意事项： ①采样时，采样者应站在采样口的下风侧，并尽量少走动； ②拿开平板盖时，手部不能穿越平板上空，将平板盖搭放在培养皿边上不重叠。 6、结果的评定： ①每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限； ②在静态监测时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，应重
新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合； ③洁净室沉降菌技术要求如下： 采样点布置图 洁净间、一更、二更采样点布置图 物表和手表微生物采样方法 一、物体表面采样方法： 用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积
≥100cm2，连续采样4个，取一支无菌棉拭子在10ml采样液的试管内浸湿，于管壁上挤压一下，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次（从下向上5次，从左向右5次），并随之转棉拭子，然后以无菌操作方式将采样的棉拭子头剪断并落入采样试管内，立即送检。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。 二、手部表面采样方法： 监测对象采取五指并拢姿势，操作者将无菌棉拭子蘸采样液挤干，在被采手指屈面自手指根到指尖往返涂擦2次直到采完全手，每只手采样面积约计30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子。然后以无菌操作方式将采样的棉拭子头剪断并落入采样试管内，立即送检。 物体表面和医务人员的手卫生标准 细胞毒药物破损和溢出应急预案 1.发生细胞毒药物破损和溢出时，如直接接触皮肤，应立即用肥皂或者清水清洗被污染的皮肤，溢出地点应隔离并有明确标记。
1.目的：建立沉降菌、浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测操作。 2.范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌、浮游菌检测工作 3.责任：中心检验室主任、检验员对本规程的执行负责。 4.内容： 浮游菌检测 4.1.1 检测前的准备 4.1.1.1按照药典规定制作平皿培养基。 4.1.1.2领出检测仪器，去掉防尘护罩。 4.1.1.3先用喷洒方法对仪器及采样管进行消毒，无法喷洒的地方应用擦拭或 浸泡办法进行消毒，消毒后置放十分钟使仪器基本干燥。 4.1.1.4将采样器放在采样工作台面上，拧下采样盖，使整个缝隙完全暴露在 空气中，便于直接采样。 4.1.1.5当在较高位置取样时，可把仪器采样盖拧紧，插上采样塑料管，把管 子延伸到所要采样的空间。 4.1.1.6打开采样器透明外罩，迅速将准备好的平皿放入采样托盘内，拿去平 皿上盖，立即拧上透明外罩密封。 4.1.1.7拧松外罩顶部装有指针的螺母，让指针自然下落或使指针底部刚接触 到培养基为止。 4.1.1.8调节狭缝螺母，使狭缝上升直至到头，再反方向调节使狭缝面下降， 将齐狭缝大螺母侧面的色标线与指针于水平线上。（保持狭缝的底平面与培养基表面相距1-3mm）。
4.1.1.9将指针向上轻轻拔起，使其底部离开培养基表面，并拧紧螺母，使之 固定不动。 4.1.2 采样操作 4.1.2.1将采样器后面板上的电源插上，按下仪器面板上的电源开关，指示灯亮， 时间显示窗内的数码应为“P”。 4.1.2.2根据采样现场环境的洁净度，选择采样时间中的某一档，并按下相应按 钮，指示灯亮，数码由“P”显示为“Y”，约经10分钟后气泵自动开启进 行采样。当采样时间达到时，气泵自动停止运行，数码显示终点采样时间。 4.1.2.3关掉电源开关，打下仪器的活动透明外罩，迅速把平皿上盖盖上并从仪 器中取出。 4.1.2.4按照上述方法，再放入新的平皿，进行第二次采样，直到采样完毕。4.1.2.5采集样品的平皿应置入培养箱，在培养48小时后，按检验规程检查菌 落数。 4.1.2.6采样工作结束，关断仪器电源，将程序： 4.2沉降菌检测 4.2.1消毒φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 4.2.2称取普通肉汤琼脂培养基31克，加蒸馏水1000ml，加热溶解分装，经 116℃30分钟灭菌备用。 4.2.3在无菌条件下将消毒的培养基注入培养皿中备用。 4.2.4放平板前应先洗手，穿消毒好的无菌衣、裤、帽、口罩。 4.2.5将已制备好的培养皿按净化级别要求选择放置位置和平皿块数。 4.2.6到车间打开培养皿盖，使培养基表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.7全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。（温度30℃~35℃， 时间不少于48h）。 4.2.8每批培养基应有对照试验，可选2~3只培养皿作对照培养，以检验培养 基本身是否污染。
无菌室沉降菌测试标准操作规程 一、目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证微生物检验在规定洁净级别内进行。 二、范围：无菌室的沉降菌的监测。 三、依据：国家标准GB/T 16294-1996。 四、职责：微生物检验人员对本制度的实施负责。 五、内容 1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。 3、所用的仪器和设备 1）高压灭菌锅锅 2）恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。 3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。 4、培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。 5、测试步骤 1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。 2）培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。 3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 6、注意事项 1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 2）采取一切措施防止人为对样本的污染。 3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 7、测试规则 1）测试状态 （1）沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。被测试洁净室（区）已消毒。 （2）测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。 （3）测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
编号： 目的：建立沉降菌菌落数检测标准操作程序 范围：适用于洁净区或洁净室的沉降菌菌落数测定操作。 职责：微生物检验员 提要：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 沉降菌：用本标准提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。 1.所用仪器、器具和培养基 高压蒸汽灭菌锅、隔水恒温培养箱、培养皿（φ90mm 15mm）、营养琼脂培养基。 2.测试人员 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服，不得随意进出洁净区；室内测试人员不得多于2人。 3.准备工作 3.1 温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18~24℃，相对湿度控制在45%~60%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。 3.2静态测试时,测试宜在生产操作人员撤离现场且净化空气调节系统正常运行时间不少于10分钟达到自净后开始，对非单向流洁净室，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于20分钟自净后开始，必要时可对被测试洁净室进行消毒。 3.3菌落数测定的培养皿应布置在有代表性的地方和气流扰动最少的地方。
3.4对培养皿表面必须进行严格消毒。 4.测试步骤 4.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。 4.2 静态测试时，培养基暴露时间为30分钟以上。 4.3全部采样结束后，将培养皿倒置于隔水恒温培养箱中培养（培养条件为：30~35℃）。 4.4注意事项： 4.4.1采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.4.2测试用具要进行灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.4.3 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒集中的回风口。 4.4.4测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量减少走动。 4.4.5 所用培养基应为通过适用性检查后的培养基。 4.4.6 每批培养基应有对照试验，检验培养基是否污染。 4.4.7应对隔水恒温水浴锅进行校正。 5. 采样点数目及布置 5.1 工作区采样点位置离地0.8~1.5m左右。 5.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测试点。 5.3 每个采样点一般采样一次。 5.4 沉降菌测定最少采样点数，如下表： 沉降菌测定最少采样点数目/个
沉降菌测试方法 1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。 2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。 4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。 5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。 6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。 7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净
化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。 8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数= .........21n Mn M M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数 用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。 人员进出洁净生产区的一般程序： 人员进出无菌操作洁净生产区程序：
1.目的： 本文规定了洁净室沉降菌的测试方法，以达到对其空气洁净度的评定。 2.适用范围： 适用于洁净区中沉降菌的监测和对洁净区等级的验证。 3.检测仪器：高压消毒锅、恒温培养箱。 4.检测依据： GB/T 16294—2010 医药工业洁净室 ( 区) 沉降菌的测试方法 5.测试前准备： 洁净室的温度应控制在18℃～ 26℃，相对湿度应控制在45％～ 65％之间。风速或压差的测试应符合要求。 静态测试时，室内测试人员不得多于 2 人。 对单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于10min 后开始。对非单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于30min 后开始。采样点数目见下表 面积 m 2 100 洁净度级别 300000 10000 100000 ＜10 2～3 2 2 2 ≥10～＜20 4 2 2 2 ≥20～＜40 8 2 2 2 ≥40～＜ 100 16 4 2 2 ≥ 100～＜200 40 10 3 3 ≥ 200～＜400 80 20 6 6 ≥400＜1000 160 40 13 13 ≥1000～＜2000 400 100 32 32 ≥2000 800 200 63 63 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对单向流洁净室，指的是房间面积。
采样点的位置一般在离地面0.8m 高度的水平面上均匀布置。 采样点的布置，见下图 洁净室 ( 区) 采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。下列采样点的图示可作参考。 洁净棚 ( 层流罩 ) ，洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置： 1.水平单向流 2．垂直单向流 最少培养皿数：见表 洁净度级别所需 90mm培养皿（以沉降计）100 14 10000 2 100000 2 300000 2 6.测试要求： 将已制备好的培养皿按要求的位置放置足够的数量，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 在 30℃～ 35℃的培养箱中培养不少于 48h。 每批培养基应选三只作对照培养，以鉴别培养基本身是否有污染。 菌落计数，严防遗漏。 7.结果计算和判断： M1+M2+Mn ——————————
沉降菌测试方法 1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。 2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。 4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。 5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。 6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。 7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化
房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。 8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数= .........21n Mn M M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数 用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。 人员进出洁净生产区的一般程序： 人员进出无菌操作洁净生产区程序：
1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作 方法 2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或 无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。 4.操作内容和方法： 4.1.定义： 4.1.1菌落 4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用 个数表示。 4.1.1.2 沉降菌 ⑴用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁 殖到可见的菌落数。 4.2.应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。 4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接 触碟法）等。 4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测 的结果。 4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测 外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。 4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：
4.2.4.1表中各数值均为平均值。 4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行 监测并累积计数。 4.3. 沉降菌测试操作方法： 4.3.1洁净区沉降菌控制限度： 4.3.2、测试操作方法： 4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养 平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3.2.2所用的仪器和设备 ⑴高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。 ⑵恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 ⑶培养皿：一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 ⑷培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。 4.3.3.测试操作步骤： 4.3.3.1采样操作方法：将已制备好的培养皿按4.2.4.2的要求放置，打开培养皿盖， 使培养基表面暴露4h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.3.3.2培养。 ⑴全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 ⑵在30℃--35℃培养箱中培养，时间不少于72h。 ⑶每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作 对照培养。 4.3.3.3菌落计数： ⑴用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5—10倍放大镜检查，
01.0目的 01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境 对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。 02.0适用范围 02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。 03.0人员职责 测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。 04.0内容 04.1术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常 用个数来表示。 04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专 门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。 04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/ 皿表示。 04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子 于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板 培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年 一次监控。 04.4测试方法： 04.4.1使用设备与材料 高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。 恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃ 恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好 的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。 清洁剂：75%酒精 04.4.2测试时间： （1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 （2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。 （3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上； 动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。 04.4.3采样点数及其布置 （1）最少采样点数目： （2）最少培养皿数
沉降菌检测记录 记录编号：AI/R QA-005 检测依据:《GB/T16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》 检测步骤： 1 培养皿(￠90mm×15mm的玻璃培养皿) 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现破损或污染的应剔除。 将培养皿121℃湿热灭菌20分钟或于180℃干热灭菌2小时，灭菌后取出备用。 2 培养基配制 取适量培养基，按培养基说明书配制比例加纯化水后加热溶解，溶解后分装于烧瓶，放入高温灭菌锅，121℃高温下灭菌20分钟后取出备用。 灭菌后的培养基冷却至约60℃，在万级洁净室中的百级超净台上，无菌操作要求下将灭菌过的培养基分装于培养皿中，每个培养皿约20mL，冷却凝固后便可使用。 制备好的培养基平皿应在2℃~8℃保存，一般有效期以一周为宜或按厂商提供的标准执行，需保存的剩余培养基应采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称及制备日期的标记。 3 采样方法 将已制备好的培养皿按测点图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 4 培养 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。 培养皿在用于检测时，为避免培养基本身污染，每次取3个对照皿同时进行对照试验，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，作阴性对照培养，结果应无菌落生长。 5 菌落计数 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，有条件的可用5-10倍放大镜检查有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 检测记录：
注：1、结果判定栏中，用“√”表示。 2、若部分洁净区域检测不符合，则需重新打扫卫生后复测。检测人：复核人：
目的 制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。 范围 适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。 责任 QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。 程序 1.定义 1.1.菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称 CFU。 1.2.沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养 基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。 1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，并 且有指定的人员按照规范操作的状态。 2.测试方法 2.1.测试过程 2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。
2.2.测试条件 2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求 时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。 2.2.2.风速、压差应在合格范围内。 2.2. 3.动态测试。 2.3.测试方法 2.3.1.将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。将采样 台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。 2.3.2.在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC 微生物室进行培养观察。 2.4.培养观察计数 2.4.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中 培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。 2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。可每次选定2只 培养皿作对照培养。 2.5.计算 2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MN N M1＝1号培养皿菌落数 M2＝2号培养皿菌落数
题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程 编码：颁发部门：质量部 起草：日期：2015年月日修订日期：年月日 审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日 批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版 分发部门：质量部、中心化验室 1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。 2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。 3.责任：沉降菌检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。 4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每 皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。 4.3.2测试时间: 对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。 4.3.3采样点数目及其布置: 最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2 表1 最少采样点数目 面积（m2） 洁净度等级 A、B级C级D级 ＜10 2-3 2 2 ≥10-＜20 4 2 2 ≥20-＜40 8 2 2 ≥40-＜100 16 4 2 ≥100-＜200 40 10 3 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。 表2 最少培养皿数 洁净度等级所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计） A 14 B 2 C 2 D 2 采样点的布置: 除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
洁净室沉降菌的测试方 法 -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
1.目的： 本文规定了洁净室沉降菌的测试方法，以达到对其空气洁净度的评定。 2. 适用范围： 适用于洁净区中沉降菌的监测和对洁净区等级的验证。 3. 检测仪器：高压消毒锅、恒温培养箱。 4. 检测依据： GB/T 16294—2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法 5. 测试前准备： 洁净室的温度应控制在18℃～26℃，相对湿度应控制在45％～65％之间。风速或压差的测试应符合要求。 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 对单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。对非单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。采样点数目见下表
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对单向流洁净室，指的是房间面积。 采样点的位置一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。 采样点的布置，见下图 洁净室(区)采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。下列采样点的图示可作参考。 洁净棚(层流罩)，洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置： 1. 水平单向流 2．垂直单向流
最少培养皿数：见表 洁净度级别所需90mm培养皿（以沉降计） 10014 100002 1000002 3000002 6. 测试要求： 将已制备好的培养皿按要求的位置放置足够的数量，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 在30℃～35℃的培养箱中培养不少于48h。 每批培养基应选三只作对照培养，以鉴别培养基本身是否有污染。 菌落计数，严防遗漏。 7. 结果计算和判断： M1+M2+……Mn 平均菌落数＝—————————— n Mn—n号培养皿菌落数 n—培养皿的总数 8. 结果评定：
沉降菌测试方法 1、把巾90mm K 15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180C后，干烤2小时。 2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45C 时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33C恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在2—8C环境中保存。 4、采样时，一般在100 级层流罩中放置3 个培养皿，在100000 级，10000 级按面积大小一般放2 个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5 小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33C培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m 左右。 5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10 倍放大镜检 查是否遗漏，若培养皿上有2 个或2 个以上菌落重叠，分辨时仍以2 个或2 个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。 6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。 7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2 人。测试时间对单向流100 级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开始，对非单向流，100000 级以上净 化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 8 平均菌落数计算：M+M+M
微生物检验室沉降菌测试原始记录 评定标准十万级w 10CFU 皿；万级w 3CFU 皿；百级w 1CFU 皿 RSB60-00 °C 采样点图示 见附图： 报告日期 _________
结 论 _______________________ 检验者 ____________ 复核者 ___________________ RSB64-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（ 2） 编 号______________________ 测试依据 SPG108-01 环境温度________________ °C 培养基批号__________________ 测试单位 ______________ 测试状态 ______________ 相对湿度% _____________ 培养温度 ______________ 采样点图示 见附图：
评定标准：十万级w 10CFU皿；万级w 3CFU皿；百级w 1CFU皿 结论___________________检验者_________________ 复核者______________ RSB63-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1 ）
评定标准： 十万级w 10CFU/皿； 万级w 3CFU/皿； 百级w 1CFU/皿 结 论 检验者 复核者 _____________________ RSB61-00 原料车间沉降菌测试原始记录 编 号 ______________________ 测试单位 ________________ 测试依据 SPG108-01 测试状态 _______________ 环境温度 _______________ ° C 相对湿度% ______________ 培养基批号 _________________ 培养温度 _________________ °C 静压差 ___________________ 检测日期 __________________ 报告 采样点图示 见附图： 日期
1 目的 建立洁净度（沉降菌）的检验标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。 2 范围 适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 概述：本标准对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.2 测试方法 4.2.1 方法提要： 本标准按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2.2 仪器 仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2.1 培养皿 一般采用90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。 4.3 测试前的规则： 4.3.1 测试状态； 4.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求， 静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。 4.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要 求，并在报告中注明测试状态。 4.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿 暴露时间为不大于4h。 4.3.2 测试人员： 4.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
RSB60-00 微生物检验室沉降菌测试原始记录 测试依据SPG108-01 测试状态 环境温度°C 相对湿度% 培养基批号培养温度°C 静压差检测日期报告日期 评定标准十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿 结论检验者复核者
RSB64-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（2） 测试依据SPG108-01 测试状态 环境温度°C 相对湿度% 培养基批号培养温度°C 静压差检测日期报告日期 评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿 结论检验者复核者
RSB63-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1） 测试依据SPG108-01 测试状态 环境温度°C 相对湿度% 培养基批号培养温度°C 静压差检测日期报告日期 评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿 结论检验者复核者
RSB61-00 原料车间沉降菌测试原始记录 测试依据SPG108-01 测试状态 环境温度°C 相对湿度% 培养基批号培养温度°C 静压差检测日期报告日期 评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿 结论检验者复核者
RSB62-00 原料车间沉降菌测试原始记录 测试依据SPG108-01 测试状态 环境温度°C 相对湿度% 培养基批号培养温度°C 静压差检测日期报告日期 评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿 结论检验者复核者
RSB61-01 原料车间沉降菌测试原始记录 编 号 测试单位 测试依据 SPG108-01 测试状态 环境温度 °C 相对湿度% 培养基批号 培养温度 °C 静 压 差 检测日期 报告日期 评定标准： 十万级≤10CFU/皿； 万级≤3CFU/皿； 百级≤1CFU/皿 结 论 检 验 者 复核者
沉降菌测试 1.目的 本程序规定了洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。 2.范围 本程序适用于洁净室和洁净区、无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.引用文件 3.1.GB/T 16294－1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 3.2.YY/T 0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分：药品生物测定法 3.3.药品生产质量管理规范（1998年修订） 3.4.中国药典2000年版 4.职责 质保室中控人员。 5.测试方法 5.1.方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养 基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌能进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 5.2.所用的仪器和设备 5.2.1.高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。 5.2.2.恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。 5.2.3.培养皿一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 5.2.4.培养基营养肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A。 5.3.测试步骤 5.3.1.采样方法：将已制备好的培养皿按 6.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴 露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 5.3.2.培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30~35℃培养不少于48h；每 批培养基应选定3只培养皿作对照试验，以检验培养基本身是否污染。 5.3.3.菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查， 有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 5.4.注意事项 5.4.1.测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.4.2.采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.4.3.对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.4.4.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不 要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5.4.5.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6.测试规则 6.1.测试状态 6.1.1.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、 空气流速必须控制在规定值内。 6.1.2.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 6.1.3.测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测
无菌室标准 (含《洁净室沉降菌测试标准操作规程》) 1.目的 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围 生测实验室 3.责任者 QC主管生测员 4.定义 无 5.安全注意事项 严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。 6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超