保健食品车间洁净区沉降菌监测标准操作程序
集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-
保健食品车间洁净区沉降菌监测标准操作程序
一、目的：建立洁净区中沉降菌的标准操作程序，保证产品在规定的洁净级别内生产。
二、适用范围：适用于洁净区的沉降菌的监测。
三、职责：质量监督员、质量检验人员
四、正文：
1 定义：
1.1洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区
域。
1.2洁净工作台：处在垂直层流洁净罩下的工作台。
1.3洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬
浮粒子的允许统计数在规定范围内。
1.4菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
用个数表示。
2测试方法：
2.1方法概述：利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生
物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其
繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此
来评定洁净室（区）的洁净度。
2.2 所用的仪器和设备：
2.2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。
2.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
2.2.3培养皿：
2.2.
3.1一般采用￠90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
2.2.
3.2使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
2.3 培养基：普通营养琼脂培养基。
2.3.1将培养基加热熔化，冷却至约45℃，在无菌操作条件下将培养
基注入培养皿，每皿约15ml。
2.3.2待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿在2-8℃的环境中存放。
测试步骤：2.4.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖上盖后倒置。
2.4.2培养：
2.4.2.1全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
2.4.2.2在30~35℃培养，时间不少于48h。
2.4.2.3每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每
批选定3只培养皿作对照培养。
2.4.3菌落计数：
2.4.
3.1用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。
2.4.
3.2若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个
或2个以上的菌落计数。
2.5 注意事项：
2.5.1测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
2.5.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
2.5.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
2.5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
3 测试规则：
3.1 测试状态：
3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温度须达到规定的要
求，静压差必须控制在规定值内。
3.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已消毒过。
3.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的
要求，并在报告中注明测试状态。
3.2 测试人员：
3.2.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
3.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
3.3 测试时间：
对非单向流,100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
3.4 沉降菌计数：
3.4.1 采样点数目及其布置：
3.4.1.1 最少采样点数目
沉降菌的最少采样点数按国家标准确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。
3.4.1.2采样点的布置：
3.4.1.2.1工作区测试点位置离地0.8-1.5m 左右（略高于工作面）。
3.4.1.2.2可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。
3.5记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态
及测试数据。
3.6结果计算：
3.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
3.6.2 平均菌落数的计算见下式：
平均菌落数m=
式中：m 为平均菌落数；m 1为1号培养皿菌落数；m 2为2号培养皿菌落数； m n 为n 号培养皿菌落数；N 为培养皿总数
3.7结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
3.7.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
3.7.2若某洁净室（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
3.8各种洁净级别洁净区沉降菌标准值：100级≤1个/（￠
90mm·0.5h ）10000级≤3个/（￠90mm·0.5h）100000级≤10个/（￠90mm·0.5h）
3.9洁净区沉降菌检测频率：每月一次
m 1?＋m 2＋＋m? N
洁净区沉降菌测定规程公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作方法 2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或 无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。 4.操作内容和方法： .定义： 4.1.1菌落 4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用 个数表示。 4.1.1.2 沉降菌 ⑴用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁 殖到可见的菌落数。 .应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。 4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和 接触碟法）等。 4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监 测的结果。 4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监 测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。 4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：
4.2.4.1表中各数值均为平均值。 4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进 行监测并累积计数。 . 沉降菌测试操作方法： 4.3.1洁净区沉降菌控制限度： 4.3.2、测试操作方法： 4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培 养平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3.2.2所用的仪器和设备 ⑴高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。 ⑵恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 ⑶培养皿：一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 ⑷培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。 4.3.3.测试操作步骤： 4.3.3.1采样操作方法：将已制备好的培养皿按4.2.4.2的要求放置，打开培养皿 盖，使培养基表面暴露4h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.3.3.2培养。 ⑴全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 ⑵在30℃--35℃培养箱中培养，时间不少于72h。
1目的 规范洁净区环境监控管理，确保洁净区的环境符合GMP要求。 2范围 适用于各生产车间的洁净区的监控。 3职责 QA负责各车间洁净区的环境监控。 4内容 4.1定义 4.1.1静态 4.1.1.1静态a：洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，生产工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的状态。 4.1.1.2静态b：洁净室（区）在生产操作全部结束，生产操作人员撤离现场并经过20min自净后。 4.1.2动态：洁净室（区）已处于正常生产状态，设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作。 4.2测试项目、标准及频次 4.2.1风速、风量及换气次数 4.2.1.1风速测试：A级区进行风速测试，检测频次：每个月一次。 4.2.1.2风量及换气次数测试：A级区外的其它区域测量风量及换气次数。检测频次：至少每年一次。 4.2.1.3标准 a.A级区风速：层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s。 b.换气次数：B级洁净室换气次数n≥50次/h，C级洁净室换气次数n≥25次/h，D级洁净室换气次数n≥15次/h。 4.2.2流型 4.2.2.1检测区域：A级区，检测频次：至少每年一次。 4.2.2.2标准：应为层流 4.2.3压差 4.2.3.1检测频次：正常投产时每天一次。 4.2.3.2标准
a.洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡。 b.相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持适当的压差梯度，以防止污染和交叉污染。 4.2.4温度、相对湿度 4.2.4.1检测频次：正常投产时每天一次。 4.2.4.2标准：温度18-26℃，相对湿度45-65%。 4.2.5高效过滤器检漏 4.2. 5.1检测频次：A级区每半年用尘埃粒子计数扫描巡检法进行一次过滤器完整性测试，每年用气溶胶法进行一次过滤器完整性测试；B级、C级区每年用气溶胶法进行一次过滤器完整性测试，D级区每年用尘埃粒子计数扫描巡检法进行一次过滤器完整性测试。新更换高效过滤器要进行完整性测试。悬浮粒子检测结果异常，调查怀疑高效泄漏的可进行完整性测试。 4.2. 5.2标准：气溶胶法泄漏率应≤0.03%。（气溶胶法需外协检测） 4.2.6空气悬浮粒子 4.2.6.1灌装间A级区每批一次在线监测；B级区每个月进行一次动态监测，所有房间每3个月进行一次静态监测；C级区每2个月进行一次监测，动、静态不限；D级区每3个月进行一次静态监测，特殊情况下可进行动态监测。 4.2.6.2标准 各级别空气悬浮粒子标准规定
无菌室沉降菌测试标准操作规程 一、目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证微生物检验在规定洁净级别内进行。 二、范围：无菌室的沉降菌的监测。 三、依据：国家标准GB/T 16294-1996。 四、职责：微生物检验人员对本制度的实施负责。 五、内容 1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。 3、所用的仪器和设备 1）高压灭菌锅锅 2）恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。 3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。 4、培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。 5、测试步骤 1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。 2）培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。 3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 6、注意事项 1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 2）采取一切措施防止人为对样本的污染。 3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 7、测试规则 1）测试状态 （1）沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。被测试洁净室（区）已消毒。 （2）测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。 （3）测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
1.目的：建立沉降菌、浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测操作。 2.范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌、浮游菌检测工作 3.责任：中心检验室主任、检验员对本规程的执行负责。 4.内容： 浮游菌检测 4.1.1 检测前的准备 4.1.1.1按照药典规定制作平皿培养基。 4.1.1.2领出检测仪器，去掉防尘护罩。 4.1.1.3先用喷洒方法对仪器及采样管进行消毒，无法喷洒的地方应用擦拭或 浸泡办法进行消毒，消毒后置放十分钟使仪器基本干燥。 4.1.1.4将采样器放在采样工作台面上，拧下采样盖，使整个缝隙完全暴露在 空气中，便于直接采样。 4.1.1.5当在较高位置取样时，可把仪器采样盖拧紧，插上采样塑料管，把管 子延伸到所要采样的空间。 4.1.1.6打开采样器透明外罩，迅速将准备好的平皿放入采样托盘内，拿去平 皿上盖，立即拧上透明外罩密封。 4.1.1.7拧松外罩顶部装有指针的螺母，让指针自然下落或使指针底部刚接触 到培养基为止。 4.1.1.8调节狭缝螺母，使狭缝上升直至到头，再反方向调节使狭缝面下降， 将齐狭缝大螺母侧面的色标线与指针于水平线上。（保持狭缝的底平面与培养基表面相距1-3mm）。
4.1.1.9将指针向上轻轻拔起，使其底部离开培养基表面，并拧紧螺母，使之 固定不动。 4.1.2 采样操作 4.1.2.1将采样器后面板上的电源插上，按下仪器面板上的电源开关，指示灯亮， 时间显示窗内的数码应为“P”。 4.1.2.2根据采样现场环境的洁净度，选择采样时间中的某一档，并按下相应按 钮，指示灯亮，数码由“P”显示为“Y”，约经10分钟后气泵自动开启进 行采样。当采样时间达到时，气泵自动停止运行，数码显示终点采样时间。 4.1.2.3关掉电源开关，打下仪器的活动透明外罩，迅速把平皿上盖盖上并从仪 器中取出。 4.1.2.4按照上述方法，再放入新的平皿，进行第二次采样，直到采样完毕。4.1.2.5采集样品的平皿应置入培养箱，在培养48小时后，按检验规程检查菌 落数。 4.1.2.6采样工作结束，关断仪器电源，将程序： 4.2沉降菌检测 4.2.1消毒φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 4.2.2称取普通肉汤琼脂培养基31克，加蒸馏水1000ml，加热溶解分装，经 116℃30分钟灭菌备用。 4.2.3在无菌条件下将消毒的培养基注入培养皿中备用。 4.2.4放平板前应先洗手，穿消毒好的无菌衣、裤、帽、口罩。 4.2.5将已制备好的培养皿按净化级别要求选择放置位置和平皿块数。 4.2.6到车间打开培养皿盖，使培养基表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.7全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。（温度30℃~35℃， 时间不少于48h）。 4.2.8每批培养基应有对照试验，可选2~3只培养皿作对照培养，以检验培养 基本身是否污染。
1.目的：规定了公司洁净区洁净度的测试规则和控制标准。目的是规范洁净区的洁净度的监测，确保洁净区符合生产及质量检测要求。 2.范围：适用于我公司所有洁净区的洁净度测试和管理。 3.职责： 3.1.生产管理部：负责洁净区高效过滤器的检漏和补漏的监督管理工作； 3.2.生产管理部：负责空调净化系统的调试和使用，确保空调净化系统的正常运行； 3.3.质量管理部QA：负责悬浮粒子、浮游菌、沉降菌测试； 3.4.质量管理部QC：配合负责浮游菌、沉降菌的测试。 4.内容： 4.1.1.洁净区：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的功能间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.1.2.洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。 4.1.3.局部空气净化：仅使室内工作区域特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别，这种方式称局部空气净化。 4.1.4.洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径悬浮粒子的允许统计数。 4.1. 5.菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 4.1.6.单向流：沿着平行流线，以一定流速、单一通路、单一方向流动的气流。 4.1.7.垂直单向流：与水平面垂直的单向流。 4.1.8.水平单向流：与水平面平行的单向流。 4.1.9.非单向流（曾称为乱流）：具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。 4.1.10.静态测试：功能间净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，功能间内没有生产人员的情况下进行的测试。 4.1.11.动态测试：功能间已处于正常生产状态下进行的测试。 4.1.12.置信上限（UCL）
01.0 目的 01.1 阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对 产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。 02.0 适用范围 02.1 适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。 03.0 人员职责 测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。 04.0 内容 04.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 04.1.1 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用 个数来表示。 04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门 的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。 04.1.3 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/ 皿表示。 04.2 测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于 培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培 养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 04.3 监测周期：A级洁每次室验做监控， B 级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一 次监控。 04.4 测试方法： 04.4.1 使用设备与材料 高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。 恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。 培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35 ℃ 恒温培养箱中培养72 小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好 的培养基平皿应放在2- 8℃的环境中存放。 清洁剂：75%酒精 04.4.2 测试时间： （1）对单向流，如 A 级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不 少于10 分钟后开始。
1目的 通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。 2范围 沉降菌检测 3职责 检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。 4程序 4.1洁净（区）clean room(area) 对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使 用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.2洁净工作台cleaning work station 一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤 的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、 自净器等。 4.3洁净度cleanliness 洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。 4.4菌落colony forming units 细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 4.5沉降菌settling microbe 用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条 件下繁殖到可见的菌落数。 4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow) 沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。 4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow) 具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。 4.8静态测试at-rest test 洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区） 内没有生产人员的情况下进行的测试。 4.9动态测试operational test 洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。 4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。见表1 表1洁净室环境要求、测试项目和频次
目的: 规范沉降菌监测操作，加强洁净区的管理。 范围：洁净区的沉降菌监测。 职责：质量保证部起草 质量保证部部长审核 质量副总经理批准 质量管理人员及监测人员执行 内容： 1定义 1.1洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。 1.2洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。 1.3洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。 1.4菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 2 测试方法： 2.1方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 2.2所用的仪器和设备： 2.2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 2.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 2.2.3培养皿： 2.2. 3.1一般采用ф90mm×15 mm硼硅酸玻璃培养皿。 2.2. 3.2使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。 3培养基：普通营养琼脂培养基。 3.1将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3.2待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的环境中存放。 4测试步骤： 4.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开增减皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养基皿盖上盖后倒置。 4.2培养： 4.2.1全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 4.2.2在30-35℃培养，时间不少于48小时。 4.2.3每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养基。 4.3菌落计数： 4.3.1用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.3.2若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。5注意事项： 5.1测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6测试规则： 6.1测试状态： 6.1.1沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。 6.1.2沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。 6.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 7测试人员： 7.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 7.2静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。 7.3测试时间： 7.3.1对单向流，如100级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 7.3.2对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运
执行编写部门：文件编号：替代版本： 编写人签名：年月日 审核人签名：年月日 批准人签名：年月日 分发部门：执行日期： 沉降菌检验标准操作规程 1.目的 本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。 2.范围 标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。 3．职责 QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。 4.内容 4.1. 定义 4.1.1.洁净室（区） 对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其 使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.1.2.洁净工作台 一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。其特点是自身能够供给经过过 滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净 工作台、自净器等。 4.1.3.洁净度 洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。 4.1.4.菌落 细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个
数表示。 4.1. 5.沉降菌 用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长 条件下繁殖到可见菌落数。 4.1.6.静态测试 洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。 4.1.7.动态测试 洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。 4.2. 测试方法 4.2.1.方法概述 采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若 干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌 落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。4.2.2.测试仪器和设备 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿。 4.2.3.培养基 营养琼脂培养基：培养基的准备及灭菌依照培养基配制及灵敏度测试标准操作规程准备。 4.2.4.测试步骤 4.2.4.1.采样 将已制备好的培养皿按5.3.4.1.3的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面 暴露于空气中0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.4.2.培养 全部采样结束后，将培养皿倒置于在30～35℃生化培养箱中培养48h。每批 培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作 对照培养。 4.2.4.3.菌落计数 4.2.4.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检
1.目的:明确洁净区(室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区(室) 沉降菌的检验操作 方法 2.适用范围：洁净区(室) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或 无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.责任者：质量控制部洁净区(室) 沉降菌检验操作人员车间QC检验操作人员。 4.操作内容和方法： 4.1.定义： 4.1.1菌落 4.1.1.1细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU，通常用 个数表示。 4.1.1.2 沉降菌 ⑴用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁 殖到可见的菌落数。 4.2.应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。 4.2.1监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接 触碟法）等。 4.2.2动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测 的结果。 4.2.3对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测 外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。 4.2.4洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：
4.2.4.1表中各数值均为平均值。 4.2.4.2单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行 监测并累积计数。 4.3. 沉降菌测试操作方法： 4.3.1洁净区沉降菌控制限度： 4.3.2、测试操作方法： 4.3.2.1本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养 平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3.2.2所用的仪器和设备 ⑴高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。 ⑵恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 ⑶培养皿：一般采用Ф90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 ⑷培养基：普通肉汤琼脂培养基（微生物限度检查法）或其他药典认可的培养基。 4.3.3.测试操作步骤： 4.3.3.1采样操作方法：将已制备好的培养皿按4.2.4.2的要求放置，打开培养皿盖， 使培养基表面暴露4h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.3.3.2培养。 ⑴全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 ⑵在30℃--35℃培养箱中培养，时间不少于72h。 ⑶每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作 对照培养。 4.3.3.3菌落计数： ⑴用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5—10倍放大镜检查，
题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程 编码：颁发部门：质量部 起草：日期：2015 年月日修订日期：年月日 审核：日期：2015 年月日生效日期： 2016 年月日 批准：日期：2015 年月日发放份数：版次：第 1 版 分发部门：质量部、中心化验室 1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境 对产品的污染。 2.范围：适用于本公司洁净区 ( 室) 的沉降菌的监测。 3.责任：沉降菌检测员。 4.内容： 基本概念： 菌落 : 细菌培养后 , 由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落 , 简称 CFU.通常 用个数表示。 沉降菌：用 GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过 专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 沉降菌菌落数 : 规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个 / 皿表示。 测试原理 : 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒 子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 测试方法： 使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅 : 使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱 : 必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿 : 一般采用φ 90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌 20min。 培养基 : 胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每 皿约 15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在 2-8 ℃的坏境中存放。 测试时间 : 对单向流，如 A 级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运 行不少于 10 分钟后开始。 对非单向流，如 B 级、 C级、 D 级以上的净化房间，测试应在净化空调系 统正常运行不少于 30 分钟开始。 采样点数目及其布置 : 最少采样点数目 : 沉降菌的最少采样点数可按表 1 确定。在满足最少测点数的 同时，不宜满足最少培养皿数，见表 2 表 1 最少采样点数目洁 净度等级 2 面积（ m） A、B级 C 级D级 ＜10 2-3 2 2 ≥10- ＜20 4 2 2 ≥20- ＜40 8 2 2 ≥ 40- ＜ 100 16 4 2 ≥100- ＜200 40 10 3 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，
一、目的：建立一个洁净区（室）沉降菌测试的标准操作规程，以规范沉降菌的测试工作。 二、范围：洁净室和洁净区，无菌室或局部空气净化区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测试和环 境的验证。 三、责任：药检员、药检室负责人。 四、内容： 4.1 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2 仪器 仪器包括： a）培养皿； b）培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基； c）恒温培养箱； d）高压蒸汽灭菌器。 4.2.1 培养皿 一般采用φ90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2 培养基 按培养基要求加水，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20mL 至无菌平皿（φ90mml))中。加盖后在室温放至凝固。制备好的培养基平皿宜在2℃~8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。 4.2.3恒温培养箱 必须定期对恒温培养箱进行校验。 4.3测试步骤 4.3.1 测试前培养基表面必须严格消毒。 4.3.2 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.3.3 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。 4.3.4 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 4.3.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d。 4.3.6每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4.4 菌落计数 4.4.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.4.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.5 注意事项 4.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.5.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 4.5.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.6 测试时间 4.6.1 在空态或静态测试时，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始，或在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。 4.6.2 在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。 4.7 沉降菌菌落数计算 4.7.1 采样点数量及其布置
保健食品车间洁净区沉降菌监测标准操作程序 集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-
保健食品车间洁净区沉降菌监测标准操作程序 一、目的：建立洁净区中沉降菌的标准操作程序，保证产品在规定的洁净级别内生产。 二、适用范围：适用于洁净区的沉降菌的监测。 三、职责：质量监督员、质量检验人员 四、正文： 1 定义： 1.1洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区 域。 1.2洁净工作台：处在垂直层流洁净罩下的工作台。 1.3洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬 浮粒子的允许统计数在规定范围内。 1.4菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。 用个数表示。 2测试方法： 2.1方法概述：利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生 物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其 繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此 来评定洁净室（区）的洁净度。 2.2 所用的仪器和设备： 2.2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 2.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 2.2.3培养皿： 2.2. 3.1一般采用￠90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。 2.2. 3.2使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 2.3 培养基：普通营养琼脂培养基。 2.3.1将培养基加热熔化，冷却至约45℃，在无菌操作条件下将培养 基注入培养皿，每皿约15ml。 2.3.2待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿在2-8℃的环境中存放。
沉降菌测试方法 1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。 2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。 4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。 5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。 6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。 7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净
化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。 8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数= .........21n Mn M M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数 用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。 人员进出洁净生产区的一般程序： 人员进出无菌操作洁净生产区程序：
青岛有限公司文件 目的建立洁净区环境监测规程，规范洁净区沉降菌、浮游菌、悬浮粒子的测试，保证药品在规定的洁净级别内进行生产。 范围本标准适用于洁净区沉降菌、浮游菌、悬浮粒子的监测。 责任环境监测员 内容 1、检验依据： 1.1 GB/T16294-2010《医药洁净室（区）沉降菌的测试方法》 1.2 GB/T16293-2010《医药洁净室（区）浮游菌的测试方法》 1.3 GB/T16292-2010《医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》 2、悬浮粒子的监测 2.1概述：本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净区环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度等级。 2.2仪器和设备：尘埃粒子计数器，严格按照《尘埃粒子计数器操作、维护保养规程》（SOP-ZL95-1）操作。 2.3测试步骤 2.3.1测试条件：在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，包括温度控制在18-26℃、相对湿度控制在45-65%、压差等，同时应满足仪器的使用范围。 2.3.2测试状态：静态测试，人员不得多于2人。测试报告中应明确测试时所采用的状态及测试人员数。 2.3.3测试时间：在空态或静态a测试时，对单向流洁净室（区）而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。
2.4采样点数目及其布置 2.4.1在空态或静态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应力求均匀，并不得少于最少采样点数目。在动态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。最少采样点数目如下 采样点的布置： 2.4.2采样点位置：一般在离地0.8m 高度的水平面上均匀布置，并避开回风口。测试人员应在采样口的下风侧。 2.4.3采样次数的限定：对于任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。 2.5 2.6监测频率： 2.6.1每季度对微生物洁净实验室进行监测，并及时填写监测记录（附件2）。 2.6.2 D 级取样间每季度监测所有房间，并及时填写监测记录（附件1） 2.6.3每季度对D 级洁净区所有房间进行监测，并及时填写监测记录（附件1）。
无菌室标准 (含《洁净室沉降菌测试标准操作规程》) 1.目的 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围 生测实验室 3.责任者 QC主管生测员 4.定义 无 5.安全注意事项 严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。 6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照 参照《药品卫生检验方法》《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》 8.分发部门 质量管理部 无菌室技术指导说明 在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们
程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。 2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。 3.责任：沉降菌检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。 4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。 4.3.2测试时间: 对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。 4.3.3采样点数目及其布置: 最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2 表1 最少采样点数目