第二节生殖毒性及其评定
一、生殖毒性表现
外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。
二、生殖毒性作用的评定
外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。
（一）试验方法原则
生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。
一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。
最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。
剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。
动物接触受试物的方式应参照人类实际接触途径。一般可混入饲料或饮水中，由动物摄取；也可采用灌胃或胶囊法。试验期间每周应根据动物体重并参照进食量（大鼠可按每日15～20g，小鼠每日5～10g计算）和要求的摄入剂量（mg/kg
体重／日）调整饲料中应混入受试物的数量。应始终保持达到动物应摄入的剂量。
利用大鼠或小鼠进行试验时，每组雌雄各16～20只，或雌性16～20只，雄性8～10只。
（二）试验方法
现以大鼠为例，介绍三代两窝生殖试验法和两代一窝生殖试验法：
1. 三代两窝生殖试验
大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或死亡。将雌雄亲代动物（F0）同笼交配，雌雄比例为1：1或2：1，直到受孕或进行3周为止。雌鼠受孕后即单笼饲养，继续接触受试物。交配3周后，如仍未受孕，则停止交配，并进行生殖器官病理学检查。
确定是否受孕的方法是每日清晨进行雌性动物阴道涂片，检查有无精子；亦可检查阴道有无阴栓出现，以确定受精日期。小鼠阴栓可在阴道口存留较长时间，但在大鼠极易脱落，次晨检查时往往在笼下粪便盘中检出。发现阴栓或检出精子，即为受孕0日，也有作为受孕第1日。
亲代动物（F0）所生仔鼠为第一代（F1）。出生后应检查每窝幼仔数、死亡数以及肉眼可见幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共生出仔鼠两窝，分别为F1a和F1b。F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。F1a断奶后观察其发育情况，不再喂受试物。F1b 断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。F1b所产第一窝幼仔为F2a，F2a断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b断奶后，将F1b淘汰。F2b交配处理方法与F1b相同。但F2b也可只交配一次，所产仔鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。
2．两代一窝和一代一窝生殖试验
近年来许多国家与机构多规定采用两代一窝或一代一窝试验法，我国国家环境保护局《化学品测试准则（1990年）》即采用两代生殖试验或一代生殖试验。两代一窝生殖试验法基本程序与三代两窝试验法相同，但只进行到第二代F2，每代只交配一窝。
（三）观察指标
在上述各种生殖毒性试验中，根据哺乳动物全部生育繁殖过程，可观察下列4个指标：
1．受孕率反映雌性动物生育能力以及雌性动物受孕情况。
妊娠雌性动物数
受孕率=————————×100%
交配雌性动物数
2．正常分娩率反映雌性动物妊娠过程是否受到影响。
正常分娩雌性动物数
正常分娩率= ————————×100%
妊娠动物数
3．幼仔出生存活率反映雌性动物分娩过程是否正常，如分娩过程受到影响，则幼仔往往在出生4天内死亡。
出生后4天存活幼仔数
幼仔出生存活率= ———————————×100%
分娩时出生幼仔数
4．幼仔哺乳成活率反映雌性动物授乳哺育幼仔的能力。
21天断奶幼仔存活数
幼仔哺乳成活率= ———————————×100%
出生后4天幼仔存活数
董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29 Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用 董双，何剑斌*，张燚，龙淼* （沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866） 摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。 关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质 中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05 Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice DONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi （College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China） Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function． Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone 玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还 收稿日期：2015－06－30 基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152） 作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@https://www.doczj.com/doc/7215179261.html,；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@https://www.doczj.com/doc/7215179261.html, 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。 ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质
第一节基本概念 （1）药物遗传毒性：指药物引起生物细胞基因组分子结构特异改变或使遗传信息发生变化的有害效应； 如：抗肿瘤药噻替派（Thiotepa，三胺硫磷），可造成染色体的断裂； 第一节基本概念 （2）药物的致突变性：指药物对DNA或染色体结构或数目的损伤并能传递给子细胞的作用； 药物遗传毒性（致突变作用）评价，是药物非临床安全性评价的重要内容； 第一节基本概念 （3）突变：是一种遗传状态，是指可以通过复制而遗传的DNA结构的永久性改变； 突变主要包括：基因突变和染色体畸变；两者没有本质区别，只是DNA损伤程度不同；凡能引起染色体畸变的化学药物，大部分能引起基因突变。 基因突变 基因突变：指一个染色体的一个或几个碱基发生变化，这种变化不能用光学显微镜直接观察； 基因突变可分为点突变和移码突变； 基因突变－点突变 点突变：又称“碱基取代型突变”；分为“转换型突变”和“颠换型突变”； 结果：在DNA转录时引起一个RNA密码子的改变，在翻译时可使多肽链中的一个氨基酸发生变更； 点突变-转换型点突变 转换型点突变：指DNA多核苷酸链上的碱基中，嘌呤互相取代（鸟嘌呤G置换腺嘌呤A或相反）或嘧啶相互取代（胞嘧啶C取代胸腺嘧啶T或相反）；如：亚硝酸可引起这种突变； 点突变-转换型点突变 点突变-颠换型点突变 颠换型点突变：指DNA多核苷酸链上的碱基中嘌呤取代嘧啶或嘧啶取代嘌呤所引起的突变；如：二乙基亚硝胺等某些烷化剂； 基因突变－移码突变 移码突变：可导致较多遗传信息改变； 如：多环芳香烃类、芳香胺类、嘧啶类化合物和黄曲霉毒素B1等可与DNA形成大加合物而引发； 例：溴化乙啶（EB），含可嵌入堆积碱基之间的一平面基团，致该染料与DNA结合现荧光；可导致基因移码突变；常用于电泳检测DNA。 突变－染色体畸变
【 Z H 】 G P T 1 - 1 指导原则编号： 药物生殖毒性研究技术指导原则 (第二稿) 二○○六年一月 目录 一、概述 (3) 二、基本原则 (3) （一）实验管理 (3) （二）具体问题具体分析 (4) （三）随机、对照、重复 (4) 三、基本内容 (4) （一）总体考虑 (4) 1、受试物 (4) 2、受试物药代动力学研究 (5) 3、试验系统 (5) 3.1 试验动物 (5) 3.2 其他试验系统 (6) 4、给药 (6) 4.1 剂量选择 (6) 4.2 给药途径 (7) 4.3 给药频率 (7) 4.4对照组 (7)
（二）试验方案 (7) 1、试验方案选择的一般考虑 (7) 2、常用的试验方案 (8) 2.1生育力与早期胚胎发育毒性试验（I段） (8) 2.1.1试验目的 (8) 2.1.2动物选择 (9) 2.1.3 给药期 (9) 2.1.4 动物处理 (9) 2.1.5 观察指标 (9) 2.2胚胎-胎仔发育毒性试验（II段） (10) 2.2.1试验目的 (10) 2.2.2动物选择 (10) 2.2.3 给药期 (10) 2.2.4 动物处理 (11) 2.2.5 观察指标 (11) 2.3 围产期毒性试验（III段） (12) 2.3.1试验目的 (12) 2.3.2动物选择 (12) 2.3.3 给药期 (12) 2.3.4 动物处理 (12) 2.3.5 观察指标 (12) 3、其他试验方案 (13) 3.1 单一（全程）试验设计（啮齿类动物） (14) 3.2 两段试验设计（啮齿类动物） (14) （三）毒代动力学 (14) 四、结果分析与评价 (15) （一）统计分析 (15) （二）数据报告 (16) （三）结果分析 (16) 1、生殖毒性 (16) 2、发育毒性 (17) 3、其他 (17)
发布日期20050628 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题药物生殖毒性研究阶段性要求的现状 作者王庆利 部门 正文内容 审评四部审评八室王庆利 摘要：《药物生殖毒性研究技术指导原则》是CDE确定的2005年技术指导原则修订的课题之一，在修订过程中需要对大量的文献资料进行调研，将通过电子刊物的方式与研究者进行交流，并希望研究者也积极 参与进来。 动物生殖毒性研究是新药安全性研究的重要组成部分之一，常常采用分段设计方案进行试验。从药品研发的一般规律和降低研发风险性等考虑，在保障受试者安全的前提下，可根据临床试验方案内容分阶段提供生 殖毒性试验资料。本文主要介绍了ICH三方阶段性要求的现状，并结合我国的现状，讨论了对我国阶段性要 求的一些考虑。 一、概述 生殖毒性实验目的是为了揭示一种或多种活性物质对哺乳动物生殖功能的任何影响。为达此目的，应结合现有的所有其他药理和毒理方面的资料，进行该研究及其结果的阐明，以确定其对人潜在生殖毒性（危险性）。
重复给药毒性研究可以提供有关潜在生殖毒性（尤其是雄性生育力方面）的重要信息。可靠的人体暴露、比较动力学和生殖毒性机理研究的资料，对将动物实验的结果外推到人类（评价其相关性）可能是有帮助的。 从目前的研究状况看，常常采用分三段设计进行生殖毒性试验，即一般生殖毒性试验（I段）、致畸敏感期试验（II段）和围产期试验（III段）。在采用分段试验设计时，应注意在动物成年期和从受孕到幼仔性成熟的发育各阶段给药。为测定出给药所致的速发和迟发效应，其观察应持续一个完整的生命周期，即从某一代的受孕到其下一代受孕间的时间周期。分阶段试验设计，可限定在相应的动物生殖阶段给药可更好的提示药品在人体的暴露情况，更具体的确定在哪个生殖阶段存在危险。三段试验设计是目前进行生殖毒性试验采用的主要试验方案，但在实际操作中，可根据适应症和受试物特点，对于啮齿类动物可采用单一（全程）试 验设计和两段试验设计方案。 二、国际阶段性要求现状 根据支持临床研究不同时期或上市申请的不同需要，以及具体药物、适应症和适用人群的特点，可分阶段提供相应的生殖毒性研究资料以保证受试者的安全性，这也是新药开发一般规律的具体体现。目前ICH生殖毒性指导原则已经进行到了第四阶段，但国际上对于阶段性的要求存在差异，即使是在ICH三方。下表列出了不同性别和不同生育状态的受试者入选临床试验时，需要提供的动物生殖毒性试验要求。 从上表可以看出，虽然日、美、欧三方达成通过ICH达成了协调一致，但在阶段性方面还存在着明显的差异，日本对动物生殖毒性阶段性要求最为严格，而美国最为宽松，欧盟基本是处于中间状态。这些差异的产生可能是多方面的，比如文化背景方面的差异、社会保障方面的差异等，历史上重大的药物不良反应事件也 可能在其中发挥了不小的作用。 三、对我国阶段性要求的考虑 从我国目前创新药物的研发情况看，生殖毒性研究基本采用的是常规的三段试验设计方案，而在阶段性方面起步较晚，没有明确的要求。现行的生殖毒性指导原则较为简单，也没有涉及阶段性问题。我国的新药研
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
表1 生殖毒物的危害类别 类别1：已知或足以确定的人类的生殖或发育毒物 此类别包括对人类的生殖能力或者发育已产生有害效应的物质，或有动物研究的证据，及可能用其他信息补充提供其具有妨碍人生殖能力的物质。根据其分类的证据来源进一步区分，主要来自人的数据（类别1 A）或者来自动物的数据（类别1 B）. 类别1 A：已知对人类的生殖能力、生育或者发育造成危害效应的 该物质分类在这一类别主要依据人的数据。 类别1 B：推定对人的生殖能力或者对发育的有害影响 该物质分类在这一类别主要依据动物实验的数据。动物研究数据应提供清楚的、没有其他毒性作用的特异性生殖毒性的证据，或者有害生殖效应与其他毒性效应一起发生时，这种有害生殖效应不被认为是继发的、非特异性的其他毒性效应。然而。当存在有机制方面的信息怀疑这种效应对人类的相关性时，将其分类至类别2也许更合适。 类别2：可疑人类的生殖毒(性)物或发育毒(性)物 此类别的物质应有人或动物试验研究的某些证据(可能还有其他补充材料)表明对生殖能力、发育的有害效应而不伴发其他毒性效应;但如果生殖毒性效应伴发其他毒性效应时，这种生殖毒性效应不被认为是其他毒性效应的继发的非特异性结果。同时，没有充分证据支持分为类别1。例如.研究中的欠缺可以使证据的说服力较差，基于此原因，分类于类别2可能更合适。 表 2 哺乳效应的危害类别 哺乳效应 对哺乳的影响是被单独划分在单一类别。已知许多物质不存在经哺乳能对子代引有害影响的信息。然而，己知一些物质被妇女吸收后显示干扰哺乳，或该物质(包括代谢物)可能存在于乳汁中，而且其含量足以影响哺乳婴儿的健康，那么应标示出该物质分类对哺乳婴儿造成危害的性质。这一分类可根据如下情况确定 a) 对该物质的吸收、代谢、分布和排泄的研究应指出该物质在乳汁中存在，且其含量达到可能产生毒性的水平；和/或 b) 在动物实验中一代或二代的研究结果表明，物质转移至乳汁中对子代的有害影响或对乳汁质t的有害影响的清楚证据；和/或 c) 对人的实验证据包括对哺乳期婴儿的危害.
中药对生殖系统毒性的研究分析 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的研究分析中药生殖系统毒性的特点及现状。方法通过中药对生殖系统毒性的古代记载、中药对生殖系统损伤的临床症状、中药对生殖系统毒性的实验研究、化学成分对生殖系统的影响等的研究分析，提出生殖毒性中药的研究开发方向。结果对中药的生殖毒性进行了分析探讨，开展中药抗生育作用的研究是生殖毒性中药的重要发展方向。结论研究分析了中药生殖毒性的现状，提出了中药生殖毒性的研究发展方向。 【关键词】中药生殖系统毒性研究 由于中药作用相对温和，以复方为主治疗疾病，中药的不良反应较少。但随着国际上天然药物中毒事件的不断出现，对中药毒性重新认识的呼声逐渐增高。本文就中药的生殖毒性进行分析探讨。 1 中药对生殖系统毒性的古代记载 古代医药家很早就对妊娠禁忌药［1］有所认识，东汉《神农本草经》即有堕胎药的记载。历代本草均把部分虫类中药列为妊娠禁忌的范畴［2］，并列入许多妊娠禁忌药歌诀中。虫类妊娠禁忌药主要包括水蛭、虫、虻虫、全蝎、蜈蚣、地龙、斑蝥、白僵蚕［3］、蝉蜕等
9味。如水蛭,《本经》载：“破血瘕，积聚，无子”；《别录》载：”堕胎”；《本草经疏》亦言：“堕胎者，以其有毒善破血也”；近代记载：“妊娠不可服”。蜈蚣，《别录》载：“疗心腹寒热结聚，堕胎，去恶血”；“孕妇应用仍应持小心态度”。地龙，《中华本草》(精选本)载：“脾胃虚寒证不宜服，孕妇禁服”；“地龙对子宫有兴奋作用，能引起痉挛性收缩，孕妇慎用”。明代李时珍总结为四十余种有代表性的禁忌药物，阐明了孕妇禁用的观点，并著有流传至今的“妊娠禁忌歌。”“虫元斑水蛭及蝱虫，附子乌头配天雄，野葛水银并巴豆，牛膝薏米与蜈蚣，三棱芫花代赭麝，大戟蝉蜕黄雌雄，牙硝芒硝牡丹桂，槐花牵牛皂角同，半夏南星与通草，瞿麦干姜桃仁通，硵砂干漆蟹爪甲，地胆茅根都失中”。清代王孟英在李时珍禁忌用药的基础上增加至一百余种，现分类中主要是“妊娠禁忌歌”中的药物。将其分为禁用(剧毒)类，慎用(有毒)类，能用(无毒)类。禁用类：巴豆、螈青、牵牛子、斑蟊、天雄、野葛、水银、芫花、大戟、硵砂、地胆、雌黄、雄黄、水蛭、蝱虫、蜈蚣、蟹爪甲、干漆、商陆、麝香……；慎用类：附子、乌头、桃仁、红花、干姜、肉桂、三棱、牙硝、芒硝、牛膝、皂角、赭石……；能用类：茅根、通草、木通、瞿麦、薏仁、槐花、蝉蜕、丹皮、大黄、枳实、当归、川芎、冬葵子、益母草、半夏、南星、车前子、元胡、伏龙肝、神曲、麦芽等。 2 中药对生殖系统损伤的临床症状 长春花所含长春碱可产生精子形成障碍。洋地黄中的洋地黄毒苷长期应用可产生雌激素样作用，如男性乳房发育。孕妇（多）服商陆
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2 （1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871） 【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。 【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2 (1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China) 【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully. 【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检 [作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@https://www.doczj.com/doc/7215179261.html, [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@https://www.doczj.com/doc/7215179261.html,
中药引发的生殖毒性综述 ——杨皓然 20131031 【摘要】目的研究分析中药生殖系统毒性的特点及现状。方法通过中药对生殖系统毒性的古代记载、实验研究、化学成分对生殖系统的影响等的研究分析，提出生殖毒性中药的研究开发方向。 【关键词】中药生殖系统毒性 前言 由于中药作用相对温和，以复方为主治疗疾病，中药的不良反应较少。但随着国际上天然药物中毒事件的不断出现，对中药毒性重新认识的呼声逐渐增高。本文就中药的生殖毒性进行分析探讨。 一、中药对生殖系统毒性的古代记载 古代医药家很早就对妊娠禁忌药有所认识，东汉《神农本草经》即有堕胎药的记载。历代本草均把部分虫类中药列为妊娠禁忌的范畴，并列入许多妊娠禁忌药歌诀中。虫类妊娠禁忌药主要包括水蛭、虫、虻虫、全蝎、蜈蚣、地龙、斑蝥、白僵蚕、蝉蜕等9味。如水蛭,《本经》载：“破血瘕，积聚，无子”；《别录》载：“堕胎”；《本草经疏》亦言：“堕胎者，以其有毒善破血也”；近代记载：“妊娠不可服”。蜈蚣，《别录》载：“疗心腹寒热结聚，堕胎，去恶血”；“孕妇应用仍应持小心态度”。地龙，《中华本草》(精选本)载：“脾胃虚寒证不宜服，孕妇禁服”；“地龙对子宫有兴奋作用，能引起痉挛性收缩，孕妇慎用”。明代李时珍总结为四十余种有代表性的禁忌药物，阐明了孕妇禁用的观点，并著有流传至今的“妊娠禁忌歌”。“虫元斑水蛭及蝱虫，附子乌头配天雄，野葛水银并巴豆，牛膝薏米与蜈蚣，三棱芫花代赭麝，大戟蝉蜕黄雌雄，牙硝芒硝牡丹桂，槐花牵牛皂角同，半夏南星与通草，瞿麦干姜桃仁通，硵砂干漆蟹爪甲，地胆茅根都失中”。清代王孟英在李时珍禁忌用药的基础上增加至一百余种，现分
类中主要是“妊娠禁忌歌”中的药物。将其分为禁用(剧毒)类，慎用(有毒)类，能用(无毒)类。禁用类：巴豆、螈青、牵牛子、斑蟊、天雄、野葛、水银、芫花、大戟、硵砂、地胆、雌黄、雄黄、水蛭、蝱虫、蜈蚣、蟹爪甲、干漆、商陆、麝香……；慎用类：附子、乌头、桃仁、红花、干姜、肉桂、三棱、牙硝、芒硝、牛膝、皂角、赭石……；能用类：茅根、通草、木通、瞿麦、薏仁、槐花、蝉蜕、丹皮、大黄、枳实、当归、川芎、冬葵子、益母草、半夏、南星、车前子、元胡、伏龙肝、神曲、麦芽等。 二、中药对生殖系统毒性的实验研究 莪术的萜类和倍半萜类、牡丹的丹皮酚有抗早孕作用。川牛膝有抗早、晚期妊娠作用。蒲黄、冰片、麝香酮等亦有终止妊娠的作用。阿魏的两种脂溶性成分对小鼠有中止妊娠作用。合欢皮（合欢总苷）的抗早孕作用在于杀伤胚胎滋养层细胞。土荆皮（土荆皮乙酸）使早孕鼠子宫血流量减少是造成胚胎死亡的重要原因。芫花、甘遂可增加子宫收缩使胎盘剥脱而终止妊娠。苦参中苦参碱使精子瞬间失活的最低有效浓度为0.85～3.15 g/L，形态学观察发现苦参碱对精子有致死作用[1]。怀牛膝皂苷(ＡＢＳ)对离体子宫有明显的兴奋作用和抗生育作用；川牛膝水煎液有抗早、晚期妊娠作用，可使早期妊娠小鼠流产率增加；川牛膝及怀牛膝的苯提取物对小鼠均为有抗生育、抗早孕和抗着床作用。地龙及五倍子均为具杀精、抗生育作用的药物，且地龙有较强杀精作用。雷公藤对雌雄二体均有不同程度的抗生育作用。半夏所含的半夏蛋白能终止妊娠，抗受精卵着床作用。麝香有兴奋子宫的作用，对妊娠子宫更敏感，故在古代，孕妇禁止佩带麝香。 紫草有抗垂体促性腺激素样作用，可用于避孕；中药紫草对ＦＳＨ和ＬＨ有较明显的抑制作用；紫草水提取物能终止小鼠和家兔的早期妊娠，还能使胎盘的绒毛细胞大量坏死。印楝素可显著抑制家蝇产卵，可能是药物影响到与产卵有关的一些激素合成和/或这些激素的分泌受阻[2]。穿心莲能中断大鼠精子的生成，使输精管退化，间质细胞、附睾、精囊、前列腺及凝固腺退化；穿心莲具有抗精子生成及雄性特征的作用。石榴果皮的水提液具有体外抑制人精子活性、增加家兔阴道压力和强烈的抗家兔生育作用。鹿含草也有抗早孕作用，可引起子宫、卵
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义 1.概述 生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。 生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示： 图1. 动物生命周期划分 A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。 各段试验研究阶段如下： 生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B 胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D 围产期毒性试验（III段）：C-F 1一般试验设计简介 1.1受试物 生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。 1.2实验动物 首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。 1.3给药 1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
发布日期20050922 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题日本药物生殖毒性试验技术指导原则简介 作者王庆利 部门 正文内容 审评四部王庆利 摘要：日本是受沙利度胺危害最大的国家，对其具有深远的影响。直至近日，日本对药物生殖毒性的要求依然是ICH三方最为严格的一方。1963年日 本制定了最初的胎儿试验法，1965年进行了修订。1975年进行了全面修订， 制定了所谓的三段生殖发育毒性试验法，并在1984年和1988年进行了部分 修正。在1993年接受ICH生殖毒性指导原则。其后日本对生殖毒性试验方 面进行了深入的研究，特别是在雄性生育力试验方面作出了积极的探索，其 研究的相关结果被纳入了ICH指导原则中。2002年日本发布了生殖发育毒性 试验的最新版本，本文介绍了该指导原则的主要内容。 关键词：日本药物生殖毒性试验技术指导原则 基本目的
利用哺乳动物检验药物可能存在的一些对生殖发育的不良影响，并公开这些不良的影响，以用于对人的生殖发育的安全性/危险性的评估。 试验方案 三段试验方案是最实际的选择，通过限定给药时间来识别有可能发生损害的生殖发育阶段，该方法在一般情况下几乎对所有的药物都有效。但应根据药物特点、适应症、适用人群、药代动力学资料、其他药理毒理资料等方面进行科学灵活的考虑，如单一试验方案或两段试验方案等。无论选择何种研究方案，必须能充分暴露和评价药物的生殖毒性，并应说明选择的依据。 试验动物 不同的动物种属对药物的反应有很大差别，为了充分暴露毒性，更准确地外推至人，最好尽可能选用多种动物。但是从经济或其他的理由来看，选择多种动物是不现实的。在选择试验动物的时候应考虑：①是否宜于做为人类疾病模型。②受试物的代谢方式与人相类似。③由于在生殖毒性试验开始之前就清楚受试物在人体的代谢方式往往是很困难的，故通常使用那些操作比较容易，而且对其一般的代谢方式和生殖生理非常熟悉的动物。④对动物自发畸形的了解和对已知的能诱发生殖毒性物质的敏感性。 大鼠作为试验动物使用的历史很长，有关其生殖生理的知识及其一般代谢方式已经相当清楚，具有性成熟期、妊娠期和哺乳期都比较短的优点，是生殖毒性研究中获得经验最丰富的动物，背景资料较多。 由于致畸敏感期毒性导致的毒性后果相对更严重，日本对致畸敏感期试验特别重视，认为使用多种动物进行试验，在结果类推于人时，能够提供更为
苯、甲苯、二甲苯和甲醛对雄性小鼠生殖系统的联合毒性 前言 近年来由于广泛的室内装修，含有苯系物和甲醛等有害物质的装修材料、建筑材料、家具的广泛使用，使得众多非职业人群处于低浓度苯系物、甲醛长期联合暴露状态。[1]流行病学调查表明居室装潢与近年来的白血病高发相关。[2] 故苯系物和甲醛联合暴露的健康相应应引起广泛的关注，初步的研究提示其对造血系统、生殖细胞具有一定的协同损伤作用[3-4]，但其联合毒性作用尚需系统的论证。 这里的苯系物主要是指苯、甲苯和二甲苯。苯、甲苯和二甲苯都是有机溶剂，在工业上应用广泛。在塑料、橡胶、油漆等行业中人们经常性接触。三者往往同时存在与环境中，因此接触混苯的人比较多。对苯、甲苯和二甲苯的单个研究已有报道，有关苯的致癌、致突变、致畸以被列入50多种化学致癌物之间。对于甲苯、二甲苯的毒性作用也被越来越多的研究报道[5]。 我国的《工作场所有害因素职业接触限值》（GBZ2-2002）规定了工作场所空气中苯的短时间接触容许浓度为10mg/m3；《室内空气质量标准》（GB、T18883-2002）中规定苯的室内最高容许浓度为0.11mg/m3。而目前的很多调查结果显示空气中苯的浓度超标问题仍然普遍存在于一些脂类加工、制鞋以及石油化工企业以及装修的居室。苯暴露可引起动物动情周期，怀孕动物的流产发生率增加以及产生明显的母体毒性[6]。Mickiney调查发现小儿白血病与其父亲在母亲妊娠前接触苯显著相关，[7]推测苯可能引起人类生殖系统受损，导致下一代先天性缺陷，如先天性心脏病、先天性白血病、智力低下等, 严重的还可致畸胎、不孕等。 Luoping Zhang[8]等研究发现，苯接触者的髓
生殖毒性化学物汇总（权威馆藏资料） 类别1A：已知的人类生殖毒物。主要依据人类证据。类别1B：推测可能的人类生殖毒物。主要依据动物的数据。类别2：可疑的人类生殖毒物。依据一些人类或动物的证据。附加类别：影响哺乳或通过哺乳产生影响。 下面数据来自危险化学品目录2015。品名危险性类别备注1高氯酸铅生殖毒性，类别1A2二氧化铅生殖毒性，类别1A3氟化铅生殖毒性，类别1A4氟硼酸铅生殖毒性，类别1A5氟硼酸铅溶液[含量＞28%]生殖毒性，类别1A6铬酸铅生殖毒性，类别1A7硅酸铅生殖毒性，类别1A8硫酸铅[含游离酸＞3%]生殖毒性，类别1A9氢化锂生殖毒性，类别1A10氢氧化锂生殖毒性，类别1A11氢氧化锂溶液生殖毒性，类别1A12氰化铅生殖毒性，类别1A 132,4,6-三硝基间苯二酚铅[湿的,按质量含水或乙醇和水的混合物不低于20%]生殖毒性，类别1A14砷酸铅生殖毒性，类别1A15四氟化铅生殖毒性，类别1A16四氯化铅生殖毒性，类别1A17四氧化三铅生殖毒性，类别1A18硒化铅生殖毒性，类别1A19硝酸锂生殖毒性，类别1A202-溴丙烷生殖毒性，类别1A21溴酸铅生殖毒性，类别1A22亚磷酸二氢铅生殖毒性，类别1A23一氧化二氮[压缩的或液化的]生殖毒性，类别1A24一氧化铅生殖毒性，类别1A
25一氧化碳生殖毒性，类别1A26一氧化碳和氢气混合物生殖毒性，类别1A27乙二醇二乙醚生殖毒性，类别1A28乙酸铅生殖毒性，类别1A293-(α-乙酰甲基苄基)-4-羟基香豆素生殖毒性，类别1A30碘酸铅生殖毒性，类别1A31叠氮化铅[含水或水加乙醇≥20%]生殖毒性，类别1A32二丁基二氯化锡生殖毒性，类别1B333-氯-1,2-丙二醇生殖毒性，类别1B34金属锰粉[含水≥25%]生殖毒性，类别1B 35六溴二苯醚生殖毒性，类别1B36氯二氟甲烷和氯五氟乙烷共沸物生殖毒性，类别1B37氰化汞生殖毒性，类别1B38一氯二氟甲烷生殖毒性，类别1B393-丁烯腈生殖毒性，类别1B40对壬基酚生殖毒性，类别1B41多氯二苯并对二噁英生殖毒性，类别1B42多氯二苯并呋喃生殖毒性，类别1B43多溴二苯醚混合物生殖毒性，类别1B44二丁基二(十二酸)锡生殖毒性，类别1B453-[2-(3,5-二甲基-2-氧代环己基)-2-羟基乙基]戊二酰胺生殖毒性，类别1B 46N,N-二甲基甲酰胺生殖毒性，类别1B471,2-二甲氧基乙烷生殖毒性，类别1B48氟化镉生殖毒性，类别1B49 铬酸钠生殖毒性，类别1B50汞生殖毒性，类别1B51 过硼酸钠生殖毒性，类别1B522-甲氧基乙酸乙酯生殖毒性，类别1B53邻苯二甲酸二异丁酯生殖毒性，类别1B54磷酸三甲苯酯生殖毒性，类别1B55硫酸镉生殖毒性，类别1B56硫酸钴生殖毒性，类别1B57硫酸镍生殖毒性，
双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究 发表时间：2016-04-12T11:49:43.363Z 来源：《系统医学》2016年第2期作者：汤婷苏望宁王婷郭迅依范朝彪曾灿[导读] 长沙医学院双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。 长沙医学院湖南长沙 410219 【摘要】目的：探讨不同剂量双酚A(bisphend A，BPA)对雄性小鼠的生殖毒性的影响。方法：选取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后颈椎脱臼处死，观察精子形态，精子畸形率，精子活度，睾丸切片。结果：双酚A实验组，其中附睾脏器系数，精子畸形率，精子活度指标随着剂量的升高而呈正相关，具有一定的对比性。HE染色得出结果显示双酚A实验组小鼠附睾有损伤，生精小管出现坏死。结论：一定剂量的双酚A对雄性小鼠精子有生殖毒性。 【关键词】BPA；生殖毒性；雄性小鼠 【中图分类号】R114【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-067-02 双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。日常生活中人们可以通过饮食摄入、灰尘吸入和皮肤接触BPA[1-2]。在人的血液、尿液、胎盘、乳汁、羊水及其他体液等组织中能检测到BPA[3]。BPA是一种环境内分泌干扰物[4]，能够模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合，干扰体内天然激素的正常活动，即使是极低剂量也能对生物体的生殖、神经、免疫等功能产生影响[5-6]。本实验旨在通过研究BPA对雄性小鼠的生殖毒性，试分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效关系，探讨BPA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用机制。 1 材料与方法 1.1 仪器与设备 BPA，分析纯，中国上海化工试剂公司，生产编号B108652； 玉米油，药用级，中国上海化工试剂公司，生产编号C116025； 显微镜(Unican)HV2818，生产编号30108453； 电子分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）。 1.2 实验动物 选用湖南省疾控实验动物中心提供的普通级封闭群，KM群雄性小鼠，体重18g到22g，随机分成对照组，BPA低剂量组、BPA高剂量组。分别记为C组，B低剂量组、B高剂量组，每组3只动物，对照组采用玉米油做空白对照，BAF低组染毒剂量为50mg/kg BW, BAF高组剂量为200mg/kg BW。 1.3 实验方法 1.3.1形态学观察计算精子活动率、精子畸形率。 精子活动率：采用伊红染色法，将0.5g伊红Y染料溶于100mL等渗盐水中配成染色液。计数100条精子，计数的精子所占比例即为精子活动率。 精子活动率=活精子数/100 精子畸形率：取一侧附睾置于5 mL生理盐水中，剪碎，37 ℃孵育 15-20 min 后，制得精子悬液。每只动物检查1000 只精子，计算精子畸形率。 畸形率=畸形精子数/1000 1.3.2脏器系数迅速取出实验小鼠睾丸和附睾, 去除周围的脂肪组织和结缔组织，准确称量小鼠双侧睾丸和附睾的重量。脏器系数(%)=脏器体重(g)/小鼠体重(g)×100% 1.3.3形态学观察常规 HE 染色，石蜡切片，光学显微镜观察。 以上睾丸病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。 1.4 统计方法 所有实验数据均应用SPSS18.0统计软件录入分析，实验组和对照组数据采用方差分析和LSD法进行比较。 2 结果 2.1 一般情况 染毒后，低剂量小组实验小鼠体重有上升，高剂量组小鼠出现活动量减少，精神萎靡，进食量也有不同程度减少，停止染毒后逐渐好转；整个实验过程中高剂量组小鼠死亡 1 只。 2.2 BPA染毒对成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影响 BPA染毒各组小鼠的精子活动率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，精子畸形率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，附睾的脏器系数与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，结果见下表。 表BAF染毒对精子活动率, 精子畸形率,睾丸附睾脏器系数的影响(±s)
第二章雄性生殖系统的发育 摘要：雄性和雌性生殖系统发育与泌尿道紧密相关。直到怀孕7周，人的胚胎维持性双电位。随后，在雄性，睾丸诱导因子从默认的女性表型引起分化。当睾丸形成，睾酮和其他雄激素促进外生殖器和内雄性结构的形成，同时其他的睾丸因子引起雌性生殖器官前体细胞的回归。雄激素在睾丸从上腹部的起源下降也扮演了一定的作用。生殖细胞在头三个月进入一个成熟的逮捕阶段。睾酮的大量出现在新生儿期的睾丸发育过程中发挥作用,但青春期最大的雄性激素激增,性腺功能初见发生在精子发生。在这一章中,我们回顾了生殖系统的形成和成熟,重点是激素因素和部分与男性生殖患者相关的临床护理。 缩写词 AGD Anogenital distance 肛门与生殖器间的距离 AMH Anti-Müllerian hormone 抗中肾管激素 CDGP Constitutional delay of growth and puberty增长和青春期的延迟 CF Cystic fibrosis 囊胞性纤维症 CFTR Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator囊性纤维化跨膜转导调节器 CGRP Calcitonin gene-related peptide 降钙素基因相关肽 CSL Cranial suspensory ligament or cranial mesonephric ligament 颅悬韧带 DHT Dihydrotestosterone 二氢睾酮 FSH Follicle-stimulating hormone 促卵泡激素 GnRH Gonadotropin-releasing hormone 促性腺激素释放激素 INSL3 Insulin-like factor 3 胰岛素样因子3 LH Luteinizing hormone 黄体