细胞传代培养的原理及操作步骤 （一）原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 （二）细胞传代培养具体操作 1、细胞：贴壁细胞株 2、操作步骤 1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2)加入0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 细胞冻存 1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水 浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的 细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。 5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀 6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储 存。-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。 细胞复苏 1.室内紫外消毒；培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。 2.自液氮罐中取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，离心。 3.去上清，加入培养基，吹打，然后移入培养瓶中，用培养基清洗冻存管，清洗液也移入培养瓶中。 4.于培养瓶中加入适量培养基，放入CO2培养箱中培养 5.记录复苏日期；次日换液。
细胞冻存方法 一、概述 目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。 二、主要冷冻设备和材料 常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有35L3和50L3两种。使用时要注意以下几点：（1）一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-196℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。 （2）液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。（3）在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。 细胞冻存时常备的材料有：0.25%胰蛋白酶，含10%～20%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121°C蒸气高压消毒)，2mL安瓿（或专用细胞冻存管）、吸管、离心管、喷灯、纱布袋（或冻存管架）等。 三、细胞冻存方法 主要操作步骤为： （1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。 （2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。（3）将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。 （4）将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时（此步可省略），再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。 细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
高一生物从生物圈到细胞的知识点总结 有关高一生物从生物圈到细胞的知识点总结 从生物圈到细胞 一、相关概念 细胞：是生物体结构和功能的基本单位。除了病毒以外，所有生物都是由细胞构成的。细胞是地球上最基本的生命系统 →群落→生态系统→生物圈 二、病毒的相关知识： 1、病毒（Virus）是一类没有细胞结构的生物体。主要特征： ①、个体微小，一般在10~30nm之间，大多数必须用电子显微镜才能看见； ②、仅具有一种类型的核酸，DNA或RNA，没有含两种核酸的病毒； ④、结构简单，一般由核酸（DNA或RNA）和蛋白质外壳所构成。 2、根据寄生的宿主不同，病毒可分为动物病毒、植物病毒和细 菌病毒（即噬菌体）三大类。根据病毒所含核酸种类的不同分为 DNA病毒和RNA病毒。 3、常见的病毒有：人类流感病毒（引起流行性感冒）、SARS病毒、人类免疫缺陷病毒（HIV）[引起艾滋病（AIDS）]、禽流感病毒、乙肝病毒、人类天花病毒、狂犬病毒、烟草花叶病毒等。 第二节细胞的多样性和统一性 一、细胞种类：根据细胞内有无以核膜为界限的细胞核，把细胞分为原核细胞和真核细胞
二、原核细胞和真核细胞的比较： 1、原核细胞：细胞较小，无核膜、无核仁，没有成形的细胞核；遗传物质（一个环状DNA分子）集中的区域称为拟核；没有染色体，DNA不与蛋白质结合，；细胞器只有核糖体；有细胞壁，成分与真 核细胞不同。 2、真核细胞：细胞较大，有核膜、有核仁、有真正的细胞核； 有一定数目的染色体（DNA与蛋白质结合而成）；一般有多种细胞器。 3、原核生物：由原核细胞构成的生物。如：蓝藻、细菌（如硝 化细菌、乳酸菌、大肠杆菌、肺炎双球菌）、放线菌、支原体等都 属于原核生物。 4、真核生物：由真核细胞构成的生物。如动物(草履虫、变形虫)、植物、真菌（酵母菌、霉菌、粘菌）等。 三、细胞学说的建立： 1、1665英国人虎克(RobertHooke)用自己设计与制造的显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木的'薄片，第一次描述了植物细 胞的构造，并首次用拉丁文cella（小室)这个词来对细胞命名。 2、1680荷兰人列文虎克（A.vanLeeuwenhoek），首次观察到活 细胞，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼的红细胞、牙垢中的细菌等。 3、19世纪30年代德国人施莱登（MatthiasJacobSchleiden）、施旺（TheodarSchwann）提出：一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位。这一学说即“细胞学说（CellTheory)”，它揭示了生物体结构的统一性。
八种细胞器的比较表
一、选择题（本题共12小题，每小题5分，共60分） 1.（2011届·质检）下列有关实验课题与相应方法的叙述，错误的是（） A.细胞膜的制备利用蒸馏水使哺乳动物的红细胞吸水涨破 B.分离细胞器利用了差速离心法 C.观察线粒体利用甲基绿染液将线粒体染成绿色，再用显微镜观察 D.研究分泌蛋白的合成与分泌，利用了放射性同位素标记法 【解析】观察线粒体需要用健那绿染液进行染色。甲基绿染液是观察DNA分布时所用的染液。 【答案】C 2.（2011届·质检）下列关于细胞的结构和功能的叙述，正确的是( ) A.在电镜下可以清晰地看到细胞膜呈亮—暗—亮的三层结构 B.线粒体的脂质单分子层的面积大约是线粒体表面积的4倍 C.人的成熟红细胞吸水涨破后离心，沉淀物中即可获得较纯的细胞膜 D.溶酶体膜不被其的水解酶分解是因为其不含蛋白质 【解析】本题考查细胞的结构和功能的相关知识。A项应该是暗—亮—暗，即蛋白质—脂质—蛋白质结构，A项错误；B项应是大于四倍，因为线粒体有很多突起的嵴，增加了膜面积，B项错误；D项，溶酶体膜上是含有蛋白质的，所有的膜结构都含有蛋白质，只不过溶酶体的水解酶肯定是不能酶解自己的那种，D项错误。 【答案】C 4.(2011届·江二中月考)如图为细胞亚显微结构示意图，下列有关说法不正确的是（） A.此图可用来表示低等植物细胞的亚显微结构
B.若此图表示洋葱根尖分生区细胞，应去掉的结构为5、9 C.图中能利用尿嘧啶核糖核苷酸的结构有3、5、6 D.此图若表示动物的性腺细胞，则不应有的结构为1、2、5 【解析】图中9是中心体，所以只能代表低等植物细胞，A项正确；若此图表示洋葱根尖分生区细胞，应去掉的结构为5、9和2，B项错误；若表示动物的性腺细胞，则不应有的结构为1、2、5，D项正确；含有DNA能进行转录的结构有3、5、6，C项正确。 【答案】B 5.一分子CO2从叶肉细胞的线粒体基质中扩散出来，进入一相邻细胞的叶绿体基质，共穿过的生物膜层数是（） A.5 B.6 C.7 D.8 【解析】线粒体和叶绿体是双层膜结构。一分子CO2从叶肉细胞的线粒体基质中扩散出来，需要穿过线粒体的两层膜，离开细胞需要穿过一层细胞膜，再进入一相邻细胞的叶绿体基质又需要穿过三层膜，共穿过6层膜。 【答案】B 6.从成分、功能方面将细胞器进行归类，不合理的是（） A.能产生水的细胞器有线粒体、核糖体等 B.可以产生［H］和ATP的细胞器是线粒体和叶绿体 C.能发生碱基互补配对的细胞器只有线粒体和叶绿体 D.可能含有色素的细胞器有叶绿体和液泡等 【解析】线粒体、叶绿体可发生DNA复制和转录等生理功能，因此能发生碱基互补配对，在核糖体上进行翻译过程，也可以发生碱基互补配对现象。 【答案】C 7.下列关于生物膜的叙述，不正确的是（） A.细胞完成分化以后，其细胞膜的选择透过性稳定不变 B.膜的流动性是细胞生物膜相互转化的基础
细胞冻存的方法与步骤文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶??????〖〗 一、细胞冷冻保存 1.材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。 -20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 3、步骤： （1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。 （2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。 （3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
高中生物高考知识总结细胞质细胞器 与生物膜系统知识 1 细胞质 细胞质包括细胞器、细胞质基质等。 2 细胞质基质 功能：细胞质基质是活细胞进行新陈代谢的主要场所，其为新陈代谢的进行提供所需要的物质和一定的环境条件。例如，提供ATP、核苷酸、氨基酸等。 化学组成：呈胶质状态，由水、无机盐、脂质、糖类、氨基酸、核苷酸和多种酶等组成。 3 细胞骨架 真核细胞中有维持细胞形态、保持细胞内部结构有序性的细胞骨架。 细胞骨架是由蛋白质纤维组成的网架结构，与细胞运动、分裂、分化以及物质运输、能量转换、信息传递等生命活动密切相关。 细胞器结构和功能 1 线粒体 结构特点：具有双层膜结构，外膜是平滑而连续的界膜，，内膜反复延伸折入内部空间，形成嵴。线粒体具有半自主性，腔内有成环状的DNA、少量RNA和核糖体，它们都
能自行分化，但是部分蛋白质还要在胞质内合成。线粒体基质和线粒体内膜上含有呼吸作用有关的酶。 功能：细胞进行有氧呼吸的主要场所，是“动力车间”。 2 叶绿体 结构特点：具有双层膜。在叶绿体内部存在扁平袋状的膜结构，叫类囊体。类囊体通常是几十个垛叠在一起而成为基粒。类囊体膜上有光合作用的色素，叶绿体基质中含有与光合作用有关的酶。叶绿体具有特有环状DNA、少量RNA、核糖体和进行蛋白质生物合成的酶，能合成出一部分自己所必需的蛋白质。 功能：光合作用的场所，是植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站”。 3 内质网 结构特点：是由膜连接而成的网状结构，单层膜，可分为滑面内质网和粗面内质网（附着有核糖体）。 功能：细胞内蛋白质加工以及脂质（如性激素）合成的“车间”。 4 高尔基体 结构特点：高尔基体是由单层膜围成的扁平囊和小泡所组成，分泌旺盛的细胞，较发达。成堆的囊并不像内质网那样相互连接。 功能：对来自内质网的蛋白质进行加工、分类、包装的
细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶〖返回主页〗 一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sｉｇma D-2６５0）、无菌塑料冷冻保存管(Naｌgene 5０0０—00２0)、0、４％（w／ｖ)tryｐan blue(GibcoBＲL1５250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KＲYＯ10Sｅri ｅsIＩ) 2、冷冻保存方法： （１)传统方法：冷存管置于4℃１0分钟－--＞-20℃3０分钟--－>-80℃１6~18小时（或隔夜)——->液氮槽ｖaｐorphａsｅ长期储存. -20℃不可超过１小时,以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入—80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 (２）程序降温:利用已设定程序得等速降温机以—１～-3℃／分钟之速度由室温降至（－8０℃以下）-12０℃，再放在液氮槽vａｐｏrphａｓｅ长期储存。适用于悬浮型细胞与hybｒidoｍａ之保存。 ３、步骤： （1）冷冻前2４－4８小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。 （2)配制冷冻保存溶液（使用前配制）：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMＳO）至20％浓度,即制成双倍得冻存液，置于室温下待用。 (3）离心收集培养之细胞，用加血清得培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约０、1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量得冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管,制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×１0６cｅlls/ｍl，混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中，1~2mｌ/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测.严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。 4、注意事项: （１）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（lｏgphase）且存活率高之状态，约为80~90%致密度。冷冻前检测细胞就是否仍保有其特有性质,例如hｙbrｉdoｍa应在冷冻保存前一至二日测试就是否有抗体之产生。
高中生物细胞器知识点总结 高中生物细胞器知识点(一) 一、相关概念： 细胞质：在细胞膜以内、细胞核以外的原生质，叫做细胞质。 细胞质主要包括细胞质基质和细胞器。 细胞质基质：细胞质内呈液态的部分是基质。是细胞进行新陈代谢的主要场所。 细胞器：细胞质中具有特定功能的各种亚细胞结构的总称。 二、八大细胞器的比较： 1、线粒体：(呈粒状、棒状，具有双层膜，普遍存在于动、植物细胞中，内有少量DNA和RNA内膜突起形成嵴，内膜、基质和基粒中有许多种与有氧呼吸有关的酶)，线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，生命活动所需要的能量，大约95%来自线粒体，是细胞的“动力车间” 2、叶绿体：(呈扁平的椭球形或球形，具有双层膜，主要存在绿色植物叶肉细胞里)，叶绿体是植物进行光合作用的细胞器，是植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站”，(含有叶绿素和类胡萝卜素，还有少量DNA和RNA，叶绿素分布在基粒片层的膜上。在片层结构的膜上和叶绿体内的基质中，含有光合作用需要的酶)。
3、核糖体：椭球形粒状小体，有些附着在内质网上，有些游离在细胞质基质中。是细胞内将氨基酸合成蛋白质的场所。 4、内质网：由膜结构连接而成的网状物。是细胞内蛋白质合成和加工，以及脂质合成的“车间” 5、高尔基体：在植物细胞中与细胞壁的形成有关，在动物细胞中与蛋白质(分泌蛋白)的加工、分类运输有关。 6、中心体：每个中心体含两个中心粒，呈垂直排列，存在于动物细胞和低等植物细胞，与细胞的有丝分裂有关。 7、液泡：主要存在于成熟植物细胞中，液泡内有细胞液。化学成分：有机酸、生物碱、糖类、蛋白质、无机盐、色素等。有维持细胞形态、储存养料、调节细胞渗透吸水的作用。 8、溶酶体：有“消化车间”之称，内含多种水解酶，能分解衰老、损伤的细胞器，吞噬并杀死侵入细胞的病毒或病菌。 三、分泌蛋白的合成和运输： 核糖体(合成肽链)→内质网(加工成具有一定空间结构的蛋白质)→高尔基体(进一步修饰加工)→囊泡→细胞膜→细胞外 四、生物膜系统的组成：包括细胞器膜、细胞膜和核膜等。
培养细胞的冷冻保存与复苏 ?概述?冻存过程 ?冷冻保存与复苏的原理?冻存结果 ?冷冻速率?讨论 ?冷冻保存温度?冻存细胞的复苏 ?复温速率?非玻璃化冻存细胞的复 苏 ?冷冻保护剂?主要材料 ?冷冻保存方法?复苏过程 ?非玻璃化冻存方法?结果 ?主要材料?讨论 ?冻存过程?玻璃化冻存细胞的复苏 ?冻存结果?主要材料 ?讨论?复苏过程 ?玻璃化冻存方法?结果 ?主要材料?讨论
? Polge等人（1949）发现了甘油对低温下贮存的细胞具有保护作用，他们仍然以精子进行研究发现，加入甘油能够大大提高贮存于-790C下精子的存活率。接下来的重大进展是Luyet（1951）与Lovelock（1953）等多位学者发现了电解质浓度对贮存细胞的损伤作用。他们的结论是，电解质浓度增大是造成贮存细胞损伤的主要原因。冷冻理论后来得到Merryman（1956）、Rey（1957）以及Smith （1961）等学者的继续和发展。 1949年至1960年这一段时间可以称为冷冻保存的“甘油时期”，这一时期对生物材料的冷冻保存一般都是以甘油作为保护剂。Lovelock（1959）等人发现了一种新的化学保护剂，这就是人们熟悉的二甲基亚砜（DMSO）。而且，用于冷冻保存的仪器也有明显的发展。目前，无论是冷冻保存理论、各种保护剂、冷冻用品和设备以及各种生物材料的保存与复苏技术都已十分成熟和完备。 返回页首 ?冷冻保存与复苏原理 在低于-700C的超低温条件下，有机体细胞内部的生化反应极其缓慢，甚至终止。水在低于零度的条件下会结冰。如果将细胞悬浮在纯水中，随着温度的降低，细胞内外的水分都会结冰，所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏而引起细胞死亡。这种因细胞内部结冰而导致的细胞损伤称为细胞内冰晶的损伤。如果将细胞悬浮在溶液中，随着温度的降低，细胞外部的水分会首先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高。如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时
高中生物细胞学说知识点 高中生物细胞学说基础知识点 细胞学说的内容： 细胞学说建立于19世纪，家里者主要是两位德国科学家施莱登(M·J·Schileiden,1804-1881)和 施旺(T·Schwann，1810-1882) 主要内容： (1)细胞是一个有机体，一切动植物都由细胞发育而来，并由细胞和细胞产物所构成; (2)细胞是一个相对独立的单位，既有它自己的生命，又对与其他细胞共同组成的整体的生命起作用; (3)新细胞可以从老细胞中产生。 细胞学说建立的意义： 揭示了细胞的统一性和生物体结构的统一性。 细胞学说的建立过程： 时间 科学家 重要发展 1543年 比利时的维萨里，法国的比夏 揭示了人体在组织和器官水平的结构 1665年
英国的虎克 用显微镜观察植物的不栓组织，发现许多规则的“小室”并命名为细胞 19世纪 德国的施莱登、施旺 细胞是构成动植物提的基本单位 1858年 德国的魏尔肖 细胞是构成动植物提的基本单位 高中生物细胞知识点 细胞质基质 功能：细胞质基质是活细胞进行新陈代谢的主要场所，其为新陈代谢的进行提供所需要的物质和一定的环境条件。例如，提供ATP、核苷酸、氨基酸等。 化学组成：呈胶质状态，由水、无机盐、脂质、糖类、氨基酸、核苷酸和多种酶等组成。 细胞骨架 真核细胞中有维持细胞形态、保持细胞内部结构有序性的细胞骨架。 细胞骨架是由蛋白质纤维组成的网架结构，与细胞运动、分裂、分化以及物质运输、能量转换、信息传递等生命活动密切相关。
线粒体 结构特点：具有双层膜结构，外膜是平滑而连续的界膜，内膜反复延伸折入内部空间，形成嵴。线粒体具有半自主性，腔内有成环状的DNA、少量RNA和核糖体，它们都能自行分化，但是部分蛋白质还要在胞质内合成。线粒体基质和线粒体内膜上含有呼吸作用有关的酶。 功能：细胞进行有氧呼吸的主要场所，是“动力车间”。 叶绿体 结构特点：具有双层膜。在叶绿体内部存在扁平袋状的膜结构，叫类囊体。类囊体通常是几十个垛叠在一起而成为基粒。类囊体膜上有光合作用的色素，叶绿体基质中含有与光合作用有关的酶。叶绿体具有特有环状DNA、少量RNA、核糖体和进行蛋白质生物合成的酶，能合成出一部分自己所必需的蛋白质。 功能：光合作用的场所，是植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站”. 高中生物记忆方法 1联想记忆法 根据教材内容，巧妙地利用联想帮助记忆。 2对比记忆法 在生物学学习中，有很多相近的名词易混淆、难记忆，对于这样的内容，可运用对比法记忆。对比法即将有关的名
高中生物必修一细胞器知识点 1、细胞质：细胞膜以内，细胞核以外的部分。包括：细胞质基质和细胞器 2、细胞质基质成分:水、无机盐、脂类、糖类、氨基酸、核苷酸和多种酶；功能：是活细胞进行新陈代谢的主要场所；为新陈代谢提供所需的物质和一定的环境条件 3、细胞器：线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、核糖体、中心体、液泡、溶酶体。 4、分离各种细胞器的方法：差速离心法。 5、线粒体：形状：椭球形，粒状或棒状；结构：外膜（控制物质进出线粒体）、内膜（向内折叠成嵴使膜面积增大）、嵴、基质（含少量DNA和有关酶）；功能：有氧呼吸的主要场所 6、叶绿体:形状扁平的椭球形或球形：;结构：外膜（控制物质进出细胞）、内膜（控制物质进出细胞）、基粒、基质（含少量DNA、RNA酶和色素）; 叶绿体存在于叶肉细胞及部分幼茎的皮层细胞及保卫细胞中在细胞中的位置随光照改变而发生变化 7、内质网：形状结构：单层膜;粗面内质网：上面附有核糖体；光面内质网与脂质合成有关 8、核糖体：形状结构：椭球形的粒状小体，无膜结构;功能：合成蛋白质的场所 9、高尔基体形状结构：扁平囊状结构，有大小囊泡; 主要功能：与细胞分泌物的形成有关；对蛋白质进行加工和转运；植物细胞分裂时，与细胞壁的形成有关 10、中心体：分布：动物细胞、低等的植物细胞中；结构：中心体（由两个垂直排列的中心粒组成）；功能：与动物细胞有丝分裂有关 11、液泡：形态结构：表面有单层膜，内有细胞液，含有色素；主要功能：调节细胞内环境；保持一定的渗透压，保持细胞膨胀 12、溶酶体：形态：是一种单层膜的囊状小泡；特点：含有多种水解酶；功能：分解衰老、损伤的细胞器；吞噬并杀死入侵的病毒和病菌 13、由细胞器膜（包括内质网、高尔基体、线粒体、叶绿体、溶酶体等）和细胞膜、核膜等结构，共同构成细胞的生物膜系统。 14、生物膜系统在细胞生命活动中的作用： 1、不仅使细胞具有一个相对稳定的内环境，同时在细胞与环境之间进行物质运输、能量交换和信息传递的过程中起着决定性的作用。 2、细胞内的许多重要化学反应都在生物膜上进行，细胞内的广阔的膜面积为酶提供了大量的附着位点，为各种化学反应的顺利进行创造了有利条件。 3、细胞内的生物膜把细胞分隔成一个个小的区室（如各种细胞器），这样就使得细胞内能够同时进行多种化学反应，而不会相互干扰，保证了细胞的生命活动高效、有序地进行。15、具有双层膜结构的细胞器——线粒体与叶绿体 具有单层膜的细胞器——内质网，高尔基体，液泡、溶酶体 不具膜结构的细胞器是——中心体，核糖体 与能量的转换有关的细胞器——线粒体与叶绿体 与蛋白质合成有关的细胞器——核糖体、内质网、高尔基体、线粒体 含有少量DNA和RNA的细胞器——线粒体、叶绿体 含有色素的细胞器——叶绿体、液泡
背景知识： 细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。 原理： 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 主体内容（操作步骤）： 一、材料 （一）仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃） 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱 7. 液氮冰箱 易生物仪器库：https://www.doczj.com/doc/7612673861.html,/yp/product-list-42.html （二）玻璃器皿 1. 吸管（弯头、直头） 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶（250ml、100ml） 4. 废液缸 （三）塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 胶塞 4. 移液管（10ml） 5. 15ml离心管 6. 冻存管（1～2ml） （四）其他物品 1. 微量加样枪 2. 红血球计数板 3. 记号笔 4. 医用橡皮膏 5. 移液枪 （五）试剂 1. D-Hanks液 2. 小牛血清
高一生物必修一细胞器知识点总结表格 归纳 导读：我根据大家的需要整理了一份关于《高一生物必修一细胞器知识点总结表格归纳》的内容，具体内容：细胞器知识点是高一生物必修一课本重点内容，学生可以通过表格把知识点整理出来。下面我给高一同学带来生物必修一细胞器知识点总结表格，希望对你有帮助。高一生物必修一细胞器知识点表格... 细胞器知识点是高一生物必修一课本重点内容，学生可以通过表格把知识点整理出来。下面我给高一同学带来生物必修一细胞器知识点总结表格，希望对你有帮助。 高一生物必修一细胞器知识点表格 高一生物必修一知识点 光合作用 1、光合作用的发现：①1771年英国科学家普里斯特利发现，将点燃的蜡烛与绿色植物一起放在密闭的玻璃罩内，蜡烛不容易熄灭;将小鼠与绿色植物一起放在玻璃罩内，小鼠不容易窒息而死，证明：植物可以更新空气。 ②1864年,德国科学家把绿叶放在暗处理的绿色叶片一半暴光，另一半遮光。过一段时间后，用碘蒸气处理叶片，发现遮光的那一半叶片没有发生颜色变化，曝光的那一半叶片则呈深蓝色。证明：绿色叶片在光合作用中产生了淀粉。③1880年，德国科学家思吉尔曼用水绵进行光合作用的实验。证明：叶绿体是绿色植物进行光合作用的场所，氧是叶绿体释放出来的。
④20世纪30年代美国科学家鲁宾卡门采用同位素标记法研究了光合作用。第一组相植物提供H218O和CO2，释放的是18O2;第二组提供H2 O和C18O，释放的是O2。光合作用释放的氧全部来自来水。 2、叶绿体的色素：①分布：基粒片层结构的薄膜上。②色素的种类：高等植物叶绿体含有以下四种色素。A、叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，包括叶绿素a(蓝绿色)和叶绿素b(黄绿色);B、类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，包括胡萝卜素(橙黄色)和叶黄素(黄色) 3、叶绿体的酶：分布在叶绿体基粒片层膜上(光反应阶段的酶)和叶绿体的基质中(暗反应阶段的酶)。 4、光合作用的过程：①光反应阶段a、水的光解：2H2O4[H]+O2(为暗反应提供氢)b、ATP的形成：ADP+Pi+光能—ATP(为暗反应提供能量)②暗反应阶段： a、CO2的固定：CO2+C52C3 b、C3化合物的还原： 2C3+[H]+ATP(CH2O)+C5 呼吸作用 1、有氧呼吸：①场所：先在细胞质的基质，后在线粒体。②过程：第一阶段、(葡萄糖)C6H12O62C3H4O3(丙酮酸)+4[H]+少量能量(细胞质的基质);第二阶段、2C3H4O3(丙酮酸)6CO2+20[H]+少量能量(线粒体);第三阶段、24[H]+O212H2O+大量能量(线粒体)。 2、无氧呼吸(有氧呼吸是由无氧呼吸进化而来)：①场所：始终在细胞质基质②过程：第一阶段、和有氧呼吸的相同;第二阶段、2C3H4O3(丙酮酸)C2H5OH(酒精)+CO2(或C3H6O3乳酸)②高等植物被淹产生酒精(如水稻)，(苹果、梨可以通过无氧呼吸产生酒精);高等植物某些器官(如马铃
冷冻保存方法： （1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 3、步骤： （1）冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。 （2）配制冷冻保存溶液（使用前配制）：将DMSO加入新鲜培养基中，最后浓度为5～10％，混合均匀，置于室温下待用。 （3）依细胞继代培养之操作，收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液（约0.1ml）计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）离心，去除上清液，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。 4、注意事项： （1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（logphase）且存活率高之状态，约为80–90％致密度。 （2）冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 （3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色（以0.22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650），以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 这是我的实验记录，经过实践检验的，成功率很高。 1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入1.5ml新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。 5. 去上清液，加入与1ml的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀
高中生物：细胞知识点 名词： 1、显微结构：在普通光学显微镜中能够观察到的细胞结构。 2、亚显微结构：在普通光学显微镜下观察不能分辨清楚的细胞内各种微细结构。 3、原核细胞：细胞较小，没有成形的细胞核。组成核的物质集中在核区，没有染色体，DNA不与蛋白质结合，无核膜、无核仁;细胞器只有核糖体;有细胞壁，成分与真核细胞不同。 4、真核细胞：细胞较大，有真正的细胞核，有一定数目的染色体，有核膜、有核仁，一般有多种细胞器。 5、原核生物：由原核细胞构成的生物。如：蓝藻、绿藻、细菌(如硝化细菌、乳酸菌、大肠杆菌、肺炎双球菌)、放线菌、支原体等都属于原核生物。 6、真核生物：由真核细胞构成的生物。如：酵母菌、霉菌、食用菌、衣藻、变形虫、草里履虫、疟原虫等。 7、细胞膜的选择透过性：这种膜可以让水分子自由通过，细胞要选择吸收的离子和小分子(如：氨基酸、葡萄糖)也可以通过，而其它的离子、小分子和大分子(如：信使RNA、蛋白质、核酸、蔗糖)则不能通过。 8、膜蛋白：指细胞内各种膜结构中蛋白质成分。 9、载体蛋白：膜结构中与物质运输有关的一种跨膜蛋白质，细胞膜中的载体蛋白在协助扩散和主动运输中都有特异性。 10、细胞质：在细胞膜以内、细胞核以外的原生质，叫做细胞质。细胞质主要包括细胞质基质和细胞器。 11、细胞质基质：细胞质内呈液态的部分是基质。是细胞进行新陈代谢的主要场所。 12、细胞器：细胞质中具有特定功能的各种亚细胞结构的总称。 13、细胞壁：植物细胞的外面有细胞壁，主要化学成分是纤维素和果胶，其作用是
支持和保护。其性质是全透的。 语句： 1、地球上的生物，除了病毒以外，所有的生物体都是由细胞构成的。(生物分类也就有了细胞生物和非细胞生物之分)。 2、细胞膜由双层磷脂分子镶嵌了蛋白质。蛋白质可以以覆盖、贯穿、镶嵌三种方式与双层磷脂分子相结合。磷脂双分子层是细胞膜的基本支架，除保护作用外，还与细胞内外物质交换有关。 3、细胞膜的结构特点是具有一定的流动性;功能特性是选择透过性。如：变形虫的任何部位都能伸出伪足，人体某些白细胞能吞噬病菌，这些生理的完成依赖细胞膜的流动性。 4、物质进出细胞膜的方式：a、自由扩散：从高浓度一侧运输到低浓度一侧;不消耗能量。例如：H2O、O2、CO2、甘油、乙醇、苯等。b、主动运输：从低浓度一侧运输到高浓度一侧;需要载体;需要消耗能量。例如：葡萄糖、氨基酸、无机盐的离子(如K+)。c、协助扩散：有载体的协助，能够从高浓度的一边运输到低浓度的一边，这种物质出入细胞的方式叫做协助扩散。如：葡萄糖进入红细胞。 5、线粒体：呈粒状、棒状，普遍存在于动、植物细胞中，内有少量DNA和RNA内膜突起形成嵴，内膜、基质和基粒中有许多种与有氧呼吸有关的酶，线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，生命活动所需要的能量，大约95%来自线粒体。 6、叶绿体：呈扁平的椭球形或球形，主要存在植物叶肉细胞里，叶绿体是植物进行光合作用的细胞器，含有叶绿素和类胡萝卜素，还有少量DNA和RNA，叶绿素分布在基粒片层的膜上。在片层结构的膜上和叶绿体内的基质中，含有光合作用需要的酶。
叶绿体 ·分布：植物体特有，主要存在于绿色植物的叶肉细胞内. ·形态：一般呈扁平的椭球形或球形. ·结构：具有外膜和内膜（双层膜结构），含基粒、基质. 基粒由一个个圆饼状的囊状结构堆叠而成，这些囊状结构称为类囊体，增大了叶绿体中的膜面积。 内膜：没有折叠，选择性很强 酶：与光合作用有关，分布于基粒、基质 色素：叶绿素、类胡萝卜素，分布于基粒 ·成分：蛋白质、脂质、与光合作用有关的酶、色素、少量DNA和RNA. ·功能：光合作用的场所，被誉为“养料制造车间”和“能量转换站”. 线粒体 ·分布：普遍存在于动植物细胞内（真核细胞内）. ·形态：呈圆球状、短棒状、线形、哑铃形等. ·结构：具有外膜和内膜（双层膜结构）. 外膜光滑，内膜的某些部位向内腔折叠形成嵴，增大了内膜的面积。 内膜：内膜向内腔折叠形成嵴，增大了内膜面积 酶：与有氧呼吸有关，分布于基质、嵴 ·功能：有氧呼吸的主要场所，是细胞的“动力车间”. 细胞生命活动所需的能量，大约95%来自线粒体. 内质网 ·分布：绝大多数动植物细胞中（真核细胞中），在细胞质基质内广泛分布.·形态：由单层膜围成的网状管道系统. ·结构：外连细胞膜，内连核膜，膜上有多种酶，有的上面还有核糖体附着. 广泛分布在细胞质基质内，增大了细胞内的膜面积，为各种化学反应的进行提供了有利条件。 ·类型：粗面内质网（附着核糖体） 滑面内质网（无核糖体附着） ·功能：与蛋白质合成与加工、脂质和糖类的合成有关. 某些大分子物质（如蛋白质）运输的通道. 高尔基体 ·分布：动植物细胞中（真核细胞中），细胞核附近. ·形态：扁平囊状结构及囊泡. ·结构：由扁平囊和大小囊泡组成，单层膜结构，与内质网相通.
细胞冻存和细胞复苏的方法步骤 点击次数：3337 发布时间：2011-4-12 细胞的冻存 一、概述 目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。 二、细胞冻存操作步骤： (1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。 (2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。 (4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时(此步可省略)，再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。 细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
高中生物必修1《分子与细胞》（人教版） 第三章细胞的基本结构 第2节“细胞器——系统内的分工合作”教学设计（第一课时） 一、教材分析： 本节是人教版《普通高中课程标准实验教科书生物①（必修）分子与细胞》第三章第2节的内容。课程标准中相关具体内容标准为： 1.“举例说出几种细胞器的结构和功能”，属于了解水平； 2.“观察叶绿体和线粒体”，属于独立操作水平。 学生通过进一步学习，从系统的角度来认识细胞，认识系统内主要细胞器的结构和功能，以及细胞器之间是怎样分工合作、协调配合来完成细胞的生命活动的，也为后面学习细胞呼吸、光合作用、细胞增殖等知识奠定细胞学基础。 本节计划用2个课时完成。考虑到学生第一次接触到多种细胞器，安排第1-1.5个课时主要引导学生识图，了解细胞器结构和功能等；第0.5-1个课时利用探究式教学，让学生学习“分泌蛋白的合成与运输过程”，体会细胞器之间的协调配合。 二、学情分析： 经过先前的学习，学生对细胞有了一个基本的认识。高中的学生已具备一定的自主学习能力，并且对于探究式教学方式兴趣浓厚，但能力有限，需要加强。教师可以予以正确引导，使学生投入到生物课学习中来。 考虑到我校学生初中生物知识水平参差不齐，在教学活动中要兼顾各个水平和类型的学生，充分促进不同学生的个性发展。 三、教学目标： （一）知识目标：准确说出细胞内各种细胞器的结构和功能特点 （二）能力目标：总结各细胞器的特点； （三）情感、态度及价值观： 1.确立“细胞器的结构和功能相适应的观点、部分与整体统一”的观点； 2.体验自主思考学习的乐趣。 四、教学重点与难点： （一）教学重点：认识几种重要细胞器的结构和功能。 （二）教学难点：细胞是一个统一整体，细胞器之间的协调配合。 五、教学过程： 教学内容教师活动学生活动 （一）新课导入 利用问题探讨导入新课 1、一件优质的产品是如何通过个车间 和部门之间的配合产生出来的？ 2、细胞内也存在类似工厂的各种车间 吗？ /3、细胞内的各种“车间”是怎么样的？ 做出总结：细胞在生命活动中发生着物 质和能量的复杂变化，细胞内部像一个繁忙 的工厂，在细胞质中有很多忙碌的“车间”， 思考并回答问题