生长曲线和细胞生长周期的测定
MTT比色法绘制生长曲线
生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。
原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天
3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。
每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。
4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
流式细胞仪测细胞生长周期：
流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。
流式细胞仪细胞周期检测流程
1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。
2，遇冷PBS 清洗两次
3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM
慢慢吹打细胞成单细胞悬液。
4，1000rpm 离心3min
5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min
6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞
7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）
8，-20℃固定过夜（overnight）
9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清
10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim
11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞
12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min
13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。
14，将细胞加入流式管，加PI 1滴上样流式细胞仪
16，分析结果
细胞生长曲线的绘制实验报告 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 利用血细胞计数板计数 涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法 细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的
掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料： 1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液 实验步骤： 1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。
儿童体格生长发育体格评价 一、体格生长的常用指标 1、身长(length) 身长为头部、脊柱与下肢骨骼长度的总和。新生儿出生时仅50厘米。0～6个月的婴儿每月平均增长厘米，7～12个月的婴儿每月平均增长厘米，生后第2年身长共增长10厘米左右，以后儿童身高（height）每年增长值波动在5～厘米左右。接近青春期儿童身高每年增长达8厘米左右，女童较男童略早开始2年。身高估算公式： 2～10岁儿童身高（厘米）= 年龄 X 7 + 70 2、体重(weight) 新生儿出生体重平均3公斤， 6个月内婴儿体重每月平均增长600克～700克，6～12个月体重每月平均增长250克～300克，之后儿童体重每年增长约2公斤。接近青春期儿童体重每年增长可达6公斤左右。体重估算公式： 小于6月婴儿体重 = 出生体重（公斤） + 月龄 x 7～12月婴儿体重 = 6（公斤） + 月龄 x 1～10岁儿童体重（公斤）= 年龄 X 2 + 7（或8） 3、头围(head circumference) 新生儿出生时头围34厘米，1岁内增长迅速，上半年8厘米，下半年4厘米，1岁时达46厘米。1岁后增长速度减慢，2岁时48厘米。若有头小畸形，提示脑发育不良；若头围过大，则要怀疑脑积水。 4、胸围(chest circumference) 胸廓与肺的发育可以用胸围测量。胸围在第一年发育最快，1～1岁半超过头围，第二年增长速度明显减慢，平均增长3厘米，以后每年平均增加约1厘米。 5、上臂围(arm circumference) 测量上臂围可以筛选营养不良儿童。1～5岁儿童上臂围多在～厘米间，>厘米示营养良好，<厘米为营养不良。 6、坐高(sitting height) 坐高指由头顶至坐骨结节的长度，坐高可显示躯干的生长。儿童1岁后身高增加主要是下肢增长，坐高占身高的比例随年龄而降低。一般出生时为66%，4岁时60%，10岁时54%。当儿童患克汀病、软骨发育不良时，坐高占身高百分比明显增大。 7、前囟(anterior fontanel) 新生儿出生时头顶部有两个骨性间隙，额骨与顶骨之间的菱形间隙称前囟，顶骨与枕骨之间的三角形间隙称后囟。前囟出生时约～2厘米，数月内随头围的增长而变化，6个月后则逐渐骨化缩小，一般在12~18个月闭合。后囟出生时很小，1～2个月即闭合。囟门闭合情况反映颅骨骨化过程。若囟门闭合早，则要警惕头小畸形；囟门闭合晚，多见于佝偻病、脑积水、克汀病等。同时囟门也是观察婴儿颅内疾病的一个窗口，当小儿患脑炎、脑膜炎而颅压升高时，前囟会变得饱满，而婴儿因腹泻致脱水时，会出现前囟凹陷。 8、牙齿人有两副牙齿，即乳牙(terminent teeth)和恒牙(permanent teeth)。乳牙共20颗。婴儿出生时无牙，一般在4~6个月左右萌出，全副乳牙2岁半出齐。自6岁左右，儿童开始换牙。在全副乳牙之后长出第一颗恒牙（第一磨牙），即出现24颗牙齿。然后基本按从前至后的顺序逐个替换同位乳牙。12岁长出第二磨牙，18岁以后出现第三磨牙（智齿），但也有人终生不长此牙。
细菌生长曲线的测定 1 目的 1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理 1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 2 原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 3 材料 3.1菌种 某细菌 3.2培养基 液体培养基 3.3 仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4 流程 种子液→标记→接种→培养→测定 5 方法 5.1种子液制备 取细菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中（液体培养基接种法），静止培养24h作种子培养液。 5.2标记编号 取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD 值。 5.4生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基（空白对照）倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 6 结果 6.1 将测定的OD值填入下表： 时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值（OD600） 0 6.2 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。 Point： 1液体培养基的配制以及接种方法 2无菌操作技术 3直接计数法
实验内容：计数法测定细胞生长曲线 作者：王卫东实验日期：2001.10.24-2001.10.31 实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。 实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止 生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、 指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相 （潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过 测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定 细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素 对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续 对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后 以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。 仪器、材料和试剂： 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板 1、仪器：CO 2 2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯 3、试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶 实验步骤： 1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培 养基制成细胞悬液后计数。 2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实际 接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。 3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。 4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。 结果与讨论： 1、细胞计数结果如下：
细胞生长状况有关指标的检测方法 一、细胞计数 这是细胞培养中常用的基本技术之一。所用材料为细胞计数板。巴氏吸管和显微镜。步骤如下。 l 取清洁计数板和专用盖玻片，用丝绸布轻轻擦干。 l 取细胞悬液0.3ml，加入0.9结晶紫染液，混匀后滴半滴于细胞计数板内，以充满不外溢为宜。也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中，不要溢出，也不要过少或出现气泡。 l 在显微镜下用10X物镜观察计数四角大方格中的细胞数。代入下式得出细胞密度。 细胞数（ml）=（4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数 台盼蓝染色法可计算出活细胞和死细胞数以测定细胞存活百分率。一般0.5%-1.0%的台盼蓝染液可使死细胞染成蓝色，活细胞不着色。此外还可用0.02%的藻红b染液将死细胞或受损细胞染成红色，或用0.05%的苯胺黑染液将死细胞染成黑丝。 细胞存活率=[4大格活细胞数/（4大格活细胞数+4大格死细胞数）]×100% 在进行细胞计数操作时，必须把细胞悬液准备好，细胞应分散良好，并充分混匀，若出现较多细胞团或细胞数少于200个/10mm2或多于500个/100mm2时，需重制细胞悬液，重新计数。 二、细胞生长曲线和生长倍数 细胞生长曲线是细胞培养实验中最基本的指标，是测定细胞绝对增值数值和生长繁殖基本规律常用的简便方法。常用的方法为：在同一规格的培养瓶中，接种等量的同一代细胞，经培养后每隔24h取出几瓶细胞进行计数，以培养时间为横坐标，不同时刻的细胞数的对数为纵坐标，标出各点并连成线，即为该细胞的生长曲线，可反映出细胞生长的动态。 测定生长曲线的另一种方法是用96孔/24孔细胞培养板，分7组，每组3孔，培养1周（7天），期间逐日检测一组，计数，最后把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。 也可采用MTT法来进行生长曲线测定。 标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，经过一段时间的潜伏期，再进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后衰老。
M TT比色法测定细胞生长曲线 郝新保 张利朝 殷 缨 韩秀珍 陶秦渝 郝晓柯 张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室 西安710038) 关键词 细胞生长曲线 M T T比色法 中图号 Q28 在有关肿瘤细胞生物学的研究中,我们常常要测定细胞的生长状态,制作细胞生长曲线,以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数,然后标注在坐标纸上,制作出细胞生长曲线.这种方法对同一样品要求计数几次取平均值,不但操作繁琐、费时,更主要的是误差较大,可达到20%～30%[1],包括取样误差、计数误差等.为了能简便、准确地测定细胞数,我们建立了基于M T T比色法的细胞生长曲线制作方法. 1 材料和方法 1.1 试剂 R P M I1640培养基为G I BCO公司产品,小牛血清为杭州四季青产品,M T T为SERV E产品,其它试剂均为国产. 1.2 仪器 HL22029P型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品,P rofile ,E lite型流式细胞仪为美国COUL T ER 公司产品. 1.3 细胞培养 选用人乳腺癌细胞系SK2BR23.细胞培养在含10%小牛血清的R P M I1640培养基中,37℃,5% CO 2. 1.4 镜下计数测定细胞数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数,每个样品测三次,取平均值. 1.5 流式细胞仪计数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,取0.2m l细胞过滤后用流式细胞仪自动计数. 1.6 M T T比色法计数 M T T比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线,然后根据欲测样品的A值计算出相应的细胞数. 1.6.1 制作标准曲线 准备细胞悬液,从1×107细胞 200Λl 孔开始在96孔板中倍比稀释至1×102细胞 孔,每个稀释度三孔细胞,培养板置37℃培养4h后细胞贴壁,每孔中加入20Λg M T T继续培养4h,然后吸出150Λl培养液,加入等量DM SO,37℃20m in,570nm处测定吸光度[2],用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线. 1.6.2 制作生长曲线 调整细胞的浓度,按2×103 孔接种在96孔板中,置37℃培养,每天用M T T比色法测定3孔细胞的A值,在标准曲线上计算出相应的细胞数,即可绘出细胞的生长曲线. 郝新保,男,32岁,讲师,主治医师2 结果 2.1 细胞数与A值的标准曲线 根据各稀释度的A值制作细胞浓度的标准曲线, 如图1. 图1 SK2BR23细胞浓度的标准曲线 2.2 肿瘤细胞的M T T比色法生长曲线 根据每天测定的三孔细胞的A值在标准曲线上求得其对应的细胞数,7～10d 后即可绘制细胞生长曲线,如图2. 图2 SK2BR23细胞的生长曲线 2×;--0.2×;…20×. 2.3 细胞接种密度对生长曲线的影响 当细胞接种密度较低(2×102 孔)和较高(2×104 孔)时,对细胞生长曲线的形状有一定的影响,如图2. 2.4 M T T比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较 为了比较M T T比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线,用流式细胞仪的计数结果作为参照,结果表明M T T 比色法与流式细胞仪计数结果更接近,明显优于镜下计数法的结果. 3 讨论 从结果可以看出,用M T T比色法制作细胞生长
實驗六細菌生長曲線之測定 ◎ Exp 11. Turbidity of bacteria 一、目的： 在進行細菌生長曲線之測定前，必須先了解 U-2001 Spectropho- tometer 操作方法，才能將細菌的數量以吸光值的方式表示出來。二、原理： 請詳讀整理 p. 90-92，學會調整 Optical density (O.D.) 【Exp 13.會用到】。 三、器材： 1. culture：(每組) 24 hr Escherichia coli (broth) 2. medium： (每組) Nutrient broth 3. equipment ： 1 ml pipette，pipette aid，cuvette，拭鏡紙，廢菌液杯，裝蒸餾水的洗 瓶，滅菌空試管，U-2001 Spectrophotometer，振盪器。 四、實驗步驟 ※由助教先示範操作方法，再由學生自行操作與測量待測液之吸光值。 1. 了解 U-2001 Spectrophotometer 操作方法： a. 溫機約 15 分鐘。 b. MENU → (主目錄) 選 1. Photometer →輸入波長 600 nm 及 ABS → Forward → c. Nutrient broth 歸零 autozero → (前、後二支 cuvette) ※1 d. 取出後面之 cuvette ，倒入待測液※2，等到右上方數據穩定後，按 下 Start →記錄。 ※1 cuvette 有石英管 (測波長 340 nm 以下)、玻璃管、塑膠管等材質，本實驗使用塑膠材質之比色管。 ※2 每次測定前需先用蒸餾水滴洗cuvette，再以待測液潤濕，倒掉，再裝入待測液，測完倒掉，用蒸餾水滴洗。測定之前
一细胞生长曲线： A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。 B、背景知识 细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。 原理（选填项目）： 细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。 C、材料 （一）仪器 1.净化工作台 2.离心机 3.恒温水浴箱 4.冰箱（4℃、-20℃） 5.倒置相差显微镜 6.培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度） （二）玻璃器皿 1.吸管（弯头） 2.培养瓶 3.玻璃瓶（250ml、100ml） 4.废液缸 （三）塑料器皿 1.吸头 2.枪头 3.24培养板 4.胶塞 （四）其他物品 1.微量加样枪
2.红血球计数 板（五）试剂 1.D-Hanks液 2.小牛血清 3.R PMI1640 4.双抗（青霉素、链霉素） 5.0.08%胰酶 （四）、操作步骤 1.取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液； 2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5d常要给未计数的细胞换液。 4.以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲 线后即成该细胞的生长曲线。 9 （五）、注意事项 1．细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。 2．现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。 3．标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天 的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。 4．在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。 二、四唑盐试验（ MTT）比色试验 （一）、目的 学习四唑盐比色试验，检测细胞存活和生长情况。
人体各大器官细胞的更新周期 肝细胞的寿命只有5个月 由于血液供应充足，肝脏自我恢复和再生的能力惊人。这意味着它把毒素排出体外的重要工作可以继续下去。如果你奇怪为什么就连酒鬼的肝功能有时候也会提高，这是因为肝细胞只有150天左右的寿命。英国莱斯特皇家医院的肝脏外科医生大卫·劳埃德解释说：“我可以在一次手术中切除患者肝脏的70%，只要两个月的时间，大约90%的肝就会长出来。” 但是，酗酒者的软组织细胞（肝脏的主要细胞）可能会逐渐受损，形成疤痕组织，也叫硬化。因此，虽然健康的肝可以不断自我更新，而硬化损伤是永恒的，有时甚至是致命的。 味蕾的寿命仅仅10天 英国牙医协会的科学顾问达明·维穆斯莱教授解释说，舌头上有大约9000个味蕾，帮助我们感受甜、咸、苦或者酸味。味蕾本身是舌头表面细胞的集合，每个味蕾有大约50个味觉细胞。味蕾一般只需要10天到2周便会自我更新一次。但是，任何引起发炎的因素如感染或者吸烟都会损害味蕾，影响它们的更新，减弱它们的敏感性。 大脑的寿命和你自己的寿命相同 英国巴特与伦敦医院的神经外科专家约翰·瓦德莱指出，能持续终身的大多数细胞是在大脑中发现的。瓦德莱说：“我们的脑细胞约有1000亿个，出生时数量已固定，我们大脑的大部分不会随老化而自我更新。” 事实上，我们的确会损失细胞，这就是患上痴呆症的根本原因以及头
部受伤破坏性很大的原因。瓦德莱说：“但是，大脑有两个部位的细胞会自我更新，支配我们嗅觉的嗅球和用于学习的海马状突起。” 脑细胞处在一种连续不断地死亡且永不复生增殖的过程，死一个就少一个，直至消亡殆尽。这是一种程序性死亡，也叫凋亡。人到20岁之后,脑细胞就开始以每天10万个速度递减，减少的都是那些闲置的，呀不经常通电的，也就是不用的，爱因斯坦的大脑利用为11%，平常人一般3--6%吧 心脏干细胞的寿命是20年 之前人们一直以为心脏不能自我更新。但是，纽约医学院的一项研究发现，心脏上布满不断自我更新的干细胞，它们一生中至少更新2到3次。 肺表面细胞的寿命大约是2到3周 国肺脏基金会副主席基思·普罗斯解释说，肺细胞不断自我更新。但是，肺有不同的细胞，它们的更新速度不同。位于肺部深处的用来交换氧气和气体的气泡或者气囊细胞更新过程稳定，需要约1年的时间。与此同时，肺部表面的细胞必须每隔2到3周进行自我更新。普洛斯博士说：“它们是肺的第一道防线，因此必须快速更新。”肺气肿会阻止这种更新，因为这种病源自气泡的破坏，肺壁上形成了永久性的“洞”。 眼睛的寿命也和你的寿命相同 眼睛是身体中为数较少的在你的生命期间不会改变的身体部分之一。眼部唯一不断更新的部位是角膜。英国视光师学院的院长罗伯·霍根表示，如果角膜受损，它能在24小时内复原。霍根说：“角膜必须有一个平滑的
近日，卫生部制定并公布了《中国7岁以下儿童生长发育参照标准》。该标准制定的数据来源于“2005年第四次九市儿童体格发育调查”中城区数据。参照标准主要有体重、身高以及头围等，且配有方便、实用的生长曲线图。 “生长曲线图是家长监测孩子生长发育情况更简单、直观的工具。”省儿童医院儿保科主任刘丽君说，儿童生长指标在上下两实曲线之间都属正常，接近中间的实曲线则为平均水平，接近上下两条虚曲线则说明孩子的指标稍高或稍低于正常范围。 家长判断孩子的生长情况，应该动态地观察不同阶段的数据，把各个阶段监测到的数值连成一条曲线，若这条曲线在正常范围内，且与参考曲线呈大体平行，这说明孩子的生长发育是比较正常的。否则，出现偏高或偏低的情况，应尽早带孩子到医院进行检查。 刘丽君主任指出，在孩童生长发育正常的情况下，1岁之前前6个月每个月到医院监测一次，第9个月和12个月各监测一次；1—3岁之间，则半年监测一次；3—7岁至少每年监测一次。若孩子生长发育出现异常，则需根据医生建议定期监测。 此外，对于头围的监测在囟门未闭合之前显得更为重要，主要在孩童2岁之前。头围的增长代表大脑发育情况，若头围过大，则要警惕有脑积水，头围过小则会增加有小头畸形的可能性。 刘丽君主任指出，从临床上来看，贫血、营养不良、微量元素缺乏、呼吸道疾病、肠道疾病等多发于1—3岁的孩童，从而影响孩子的正常发育水平。这个年龄段，家长们更应该注意孩子的营养状况。 如今，厌食的孩子越来越多，但经医生检查后发现，大多为非疾病性厌食，主要是家长们喂养方式不当造成的情绪厌食症，如有的家长以叫骂方式强迫孩子进食等导致孩子厌食。刘丽君主任建议家长们，应在孩子主动进食的情况下科学合理喂养孩子。而且，孩子的食谱应多样化，给孩子多食用一些含优质蛋白的食物，讲究营养均衡。另外，许多家长认为孩子又白又胖才健康，让孩子过多地进食，实际上孩子的体重不应超出儿童生长发育参照曲线的正常范围。孩童肥胖是成人代谢综合征的高发危险因素，会增加患高血压、高血脂、糖尿病等心脑血管疾病的风险。她主张孩子少吃高糖、高脂以及油炸快餐食品。 □本报记者方素菊.corrTxt_01{border-top:1px dashed #F0C8C8;margin-top:10px;}.corrTxt_01 h3{font-weight:bold;padding:5px 0 0 3px;line-height:25px;margin:0;}.corrTxt_01 ul{padding:0 0 0 18px;}.corrTxt_01 ul li{font-size:14px;line-height:%;}.corrTxt_01 a {text-decoration:none;}> 相关阅读：诠释10-11月龄生长发育规律家长应为孩子制作生长曲线图视频：婴儿生长发育及护理保健视频：2-3岁孩子生长发育指标家长应走出孩子生长发育误区为何5月是儿童生长高峰期？视频：婴儿生长发育知多少早产儿面临三大生长挑战4-5个月婴儿生长发育规律 了解育儿知识，看育儿博文和论坛，上手机新浪网亲子频道
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌生长曲线的测定实验报告 篇一：细菌生长曲线 实验九测定细菌生长曲线 [实验目的]1．了解细菌生长曲线特征：2．学习液体培养基的配制以及注意事项。3．学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4．利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。 [仪器和材料] 1．实验材料 (1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。 (2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml／250ml三角瓶x4瓶／大组)，配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，nacl5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，ph7．5。 2．实验仪器 取液器(5000μl，1000μl，200tμl各一支)；培养箱．摇床，722s分光光度汁；1000μl无菌吸头100个；5000μl 无菌吸头2(:细菌生长曲线的测定实验报告)个；1ml或4ml
玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。 [实验原理] 将一定量的细菌接种在液体培养基内．在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图91)。 单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的．测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以g表示。其计算公式为；
PMSCs生长曲线和倍增时间的测定 【1】来自猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化： 取生长状况良好的P1、P3、P5、P9代细胞，用0.25%胰酶消化液，在37℃消化1-3min，制成单细胞悬液，然后以5x104个/ml密度接种到30个直径为35mm培养皿中，随机分成10组，每组3皿，每天检测一组中每皿的细胞总数，取3个皿的均值，如此至第10组结束，细胞技术如下(2004,司徒镇强)即一天消化3个组，共消化10天。 P1，P3,P5，P9均如此，每代30个皿，共计120个皿。 细胞群体倍增时间（PDT）=(t-t0)lg2/(lgN t-lgN0) t0培养起始时间，t,培养终止时间； N0培养初始细胞数，N t培养终止细胞数。 【2】增强型绿色荧光蛋白转染猪骨髓间充质干细胞特性观察 用0.25%胰酶将转染后的细胞克隆消化为单个细胞，用PBS洗2遍，1x105个细胞加入75μl破膜剂，振荡10s,加入PI染料700μl,室温避光30min,上机检测；选同期培养的为转染细胞为对照组，比较EGFP转染对细胞增殖的影响，分别计算出静止期G0/G1,增殖期S%,和G2/M 【3】两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较 分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT （2mg/ml）20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492），以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线。 【4】人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性研究 取不同代数细胞，调整细胞浓度为2x104/ml后，接种于96孔培养板，置37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱培养后，用胰酶-EDTA进行消化，用台盼蓝拒染法计数活细胞，每天取12复孔，共7天；根据计数结果绘制细胞生长曲线。记录测得的结果，即培养潜伏期持续多长时间（12-24h）,多长时间进入对数生长期（3天后），对数增殖期持续时间（3-5天）,铺满皿底所需时间（5-7天），细胞进入平台期多长时间及持续多长时间，停止生长时间。
《细胞周期》 ★细胞的最终命运： 细胞分裂及生长（相关物质准备）→细胞增殖（受到严密的调控机制所监控）→细胞死亡 ★标准的细胞周期： （从G1期开始，历经S、G2，到M期结束） 一．细胞周期的基本概念： 1.细胞周期：细胞周期是细胞增殖周期的简称，指细胞从分裂结束后开始生长，到再次分裂终了所经历的全过程。 2.细胞周期时间(Tc)：细胞周期时间因细胞类型、状态和环境而异，变异范围大，从0h~数年都可能。 3.细胞的增殖特性（机体细胞的状态）： 1）增殖细胞（周期性细胞）：能够增殖，不断进入 周期完成分裂。 2）暂不增殖细胞（休眠细胞，G0细胞）：长期停 留在G1晚期（G0期）而不越过限制点，未丧失 分裂能力，在适当条件下可恢复到增殖状态。 3）永不增殖细胞（终末分化细胞）：始终停留在 G1期，失去增殖能力直到衰老死亡。 二．细胞周期的研究方法： ★细胞周期模型 细胞周期研究中经常使用一些典型的物种和细胞系统，最常用的模型包括酵母、爪蟾胚胎细胞和哺乳动物体外培养细胞。 ★细胞周期同步化 ——由于实验常常需要设法获得时相均一的细胞群，使样品中的细胞都处于大致相同的细胞周期阶段，所以常需要使细胞周期同步化。 同步化的策略：①诱导同步化；②选择同步化 同步化常用方法：①细胞分裂收获法②代谢抑制法（加入过量胸苷后清洗）③低温培养法 ★3H-TdR（氚标记胸苷）有丝分裂标记法（测定细胞周期的时间） ——应用3H-TdR短期饲养细胞，数分钟至半小时后，将3H-TdR洗脱，置换新鲜培养液并继续培养。随后，每隔半小时或1小时定期取样，作放射自显影观察分析，从而确定细胞周期各个时相的长短。
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细胞生长曲线的绘制实验报告范文 前言语料：温馨提醒，报告一般是指适用于下级向上级机关汇报工作，反映情况，答复上级机关的询问。按性质的不同，报告可划分为：综合报告和专题报告；按行文的直接目的不同，可将报告划分为：呈报性报告和呈转性报告。体会指的是接触一件事、一篇文章、或者其他什么东西之后，对你接触的事物产生的一些内心的想法和自己的理解 本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法
（二）细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growthcurve） 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的 掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料：
达肝素钠对A549细胞生长状态及细胞周期的影响(一) 作者：陈克芳陈芳兰黄龙杰 【摘要】目的研究达肝素钠对体外生长的肺腺癌A549细胞活性及细胞周期的影响。方法用6种不同浓度(0、2、10、50、100和500IU/ml)的达肝素钠干预A549细胞的生长，用MTT 方法在4个时间点(6、12、24和36h)检测细胞活性;将经过24h普通培养的A549细胞继续在含有50IU/ml达肝素钠的培养液中培育，以正常培育的细胞作为对照组，将两组细胞24h 后以PI染液染色，用流式细胞仪检测并分析细胞周期。结果达肝素钠降低A549细胞活性，这种作用表现出时间依赖性和浓度依赖性;达肝素钠主要抑制细胞在G1期。结论达肝素钠对A549细胞活性的降低与对细胞周期的抑制作用有关。 【关键词】低分子量肝素;达肝素钠;肺腺癌;细胞周期 肝素及其衍生物的抗细胞增殖作用，目前在平滑肌上进行的研究较多。Guyton等〔1〕报道，不论在体内还是在体外，肝素都能降低平滑肌细胞(SMC)的有丝分裂。其他部位的SMC，如气道及肠道、子宫肌层及子宫肌瘤的生长也能被肝素抑制〔2〕。也有在内皮细胞上进行的关于肝素的抗增殖作用研究，如Khorana等〔3〕报道肝素抗微血管内皮细胞(MVECs)和奇静脉内皮细胞的作用。关于未分级肝素(UFH)或低分子肝素(LMWH)对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用，目前较少有文献报道。该研究选用LMWH之一的达肝素钠进行相关研究。 1材料与方法 1.1主要试剂与仪器A549细胞(兰州大学医学院实验中心冻存)。CO2细胞培养箱(Biorad公司);超净工作台(CleanBlench公司);全自动酶标仪(Biorad公司)。RPMI1640培养基(Gibco);达肝素钠(Fragmin)。 1.2实验方法 1.2.1MTT法检测细胞活性将培养的A549细胞用胰酶消化，调整细胞浓度,培养24h。弃去培养基，加入含有所需浓度达肝素钠的RPMI1640培养基，继续培养。实验结束前4h,加入MTT，继续培养。4h后弃去培养基，加入DMSO，避光振荡10min。选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值(OD)。 1.2.2PI染色法检测细胞周期分布将培养的A549细胞用0.25%的胰酶消化，传代到6孔板的各孔中，培养24h。弃去培养基，加入含有所需浓度达肝素钠的RPMI1640培养基，继续培养。在设定的时间点按组收集细胞。收集的细胞以预冷PBS洗涤2次。离心5min，弃上清。加入含0.5%PI和0.01%RNase染液，重悬细胞，室温避光反应30min。1h内流式细胞仪检测，在488nm激发波长下测定DNA含量，分析细胞周期的分布情况。 1.3统计学分析数据以x±s表示，SPSS11.0统计软件分析,两组间比较用t检验。 2结果 2.1达肝素钠对A549细胞细胞活性的影响用6种不同浓度(0、2、10、50、100和500IU/ml)的达肝素钠干预A549细胞的生长，用MTT方法在4个时间点(6、12、24和36h)检测细胞活性。达肝素钠能降低A549细胞活性，而且这种作用表现出时间和浓度依赖性。在不含达肝素钠的培养基中培育的细胞，其12h和24h的细胞活性基本一致，但24h的细胞活性明显下降，这种下降是由培养基营养成分的耗竭所致，故24h以前的细胞活性值较能准确反应药物对细胞的影响。该数据还显示，用高浓度的达肝素钠(100和500IU/ml)培养细胞24h后，A549细胞活性大部分被抑制，但这种抑制可能与药物的毒性作用有关。50IU/ml达肝素钠在干预细胞生长24h后能抑制大约50%的细胞活性。为避免培养基成分的变化和药物毒性作用对实验结果的干扰，在随后的试验中，选择50IU/ml达肝素钠为干预浓度，测定干预24h后的各项指标。见图1。图1达肝素钠对肺腺癌A549细胞细胞活性的影响 2.2达肝素钠对A549细胞细胞周期的影响为观察达肝素钠对A549细胞周期进展的影响，将经过24h普通培养的A549细胞继续在含有50IU/ml达肝素钠的培养液中培育，以正常培育
实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
慢周期性-是指细胞生长周期较慢，因为生长周期较慢，可以选择细胞纯度较高 慢周期性-是指细胞生长周期较慢，因为生长周期较慢，可以选择细胞纯度较高，活性较好的时间进行进一步处理。生长周期快的细胞很快老化或者自行分化，较难控制最佳状态。 学术术语来源—— 组织块法与酶消化法培养大鼠毛囊干细胞的比较 文章亮点： 1毛囊干细胞是存在于毛囊中的干细胞，目前普遍认为毛囊干细胞定位于毛囊上段的隆突区(Bulge区)，通过自身的分裂增殖产生各种机体所需的细胞，以补充脱落和缺失的细胞。在毛囊干细胞的研究中首先要解决的问题就是细胞的获取和纯化，然而由于缺乏特异性标志，毛囊干细胞的分选和培养扩增是一个棘手的问题。 2 实验首先选用显微分离技术选取了大鼠毛囊干细胞的富集区域，分别用组织块法和两步酶法培养毛囊干细胞，在此基础上运用差速贴壁法分选毛囊干细胞，为毛囊干细胞构建组织工程化皮肤奠定基础。 3 两步酶法获得的细胞生长速度快，获得的细胞量多，而组织块法获得的细胞生长速度较慢，获得的细胞量也少。流式细胞仪分析显示酶消化法获得的细胞PE-CD34表达高于组织块法、FITC-β1整合素表达低于组织块法。总的来说，两种方法均能培养出毛囊干细胞，可根据不同实验需求选择恰当的培养方法。关键词： 干细胞；培养；毛囊干细胞；培养；组织块法；酶消化法；差速贴壁法；生长曲线；表面标志；组织工程皮肤；SD大鼠 主题词： 干细胞；毛囊；细胞培养技术 摘要
背景：研究证实毛囊干细胞比毛囊间表皮干细胞更有增生能力，近年来受到广泛关注，成为种子细胞的研究热点。 目的：比较组织块法和两步酶法培养大鼠毛囊干细胞的生物学特性。 方法：体式显微镜下分离大鼠触须部的毛囊，分别用组织块法和两步酶法培养毛囊干细胞，利用反复差速贴壁法纯化细胞，定期观察细胞生长状况及形态，流式细胞仪检测第3代毛囊干细胞CD34、β1整合素的表达。 结果与结论：两步酶法获得的细胞生长速度快，获得的细胞量多，而组织块法获得的细胞生长速度较慢，获得的细胞量也少。流式细胞仪分析显示酶消化法培养组PE-CD34、FITC-β1整合素的表达分别为(39.52±19.57)%和 (93.46±4.73)%，组织块法培养组相应为(19.20±11.53)%和 (363.57±14.42)%，两组间差异有显著性意义(P < 0.05)。总的来说，两种方法均能培养出实验所需毛囊干细胞，可根据不同实验需求选择恰当的培养方法。
实验三微生物生长曲线的测定 一、实验目的目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料 1、菌种 2、培养基：肉膏蛋白胨培养基 3、仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4、流程 种子液→标记→接种→培养→测定 四、实验步骤 1、种子液制备 取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。 2、标记编号 取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、2 0。 3、接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振
荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD值。 4、生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 五、实验结果与分析 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。