生活饮用水标准检验方法
微生物指标
1 菌落总数
1.1 平皿计数法
1.1.1 范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。本法适用于生活
饮用水及其水源水中菌落总数的测定
1.1.2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
1.1.
2.1
菌落总数standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h 后，所得1mL 水样所含菌落的总数
1.1.3培养基与试剂
1.1.3.1营养琼脂
1.1.3.11 成分：
A蛋白胨10g
B牛肉膏 3 g
C氯化钠5g
D琼脂10g~20g
E蒸馏水1000mL
1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4 ～7.6 ，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。
1.1.4 仪器
1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。
1.1.4.2 千热灭菌箱。
1.1.4.3 培养箱36℃± 1℃。
1.1.4.4 电炉。
1.1.4.5 天平。
1.1.4.6 冰箱。
1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。
1.1.4.8 pH 计或精密pH试纸。
1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
1.1.5 检验步骤
1.5.1 生活饮用水。
1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约
15mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.1.5.1.2 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃ ?℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1mL中的菌落总数。
1.1.5.2 水源水
1.5.
2.1
以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液
1.5.
2.2
吸取1:10的稀释液1mL注人盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。
1.1.5.
2.3
用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作
同生活饮用水的检验步骤。
1.1.6. 菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗
漏。在记下各平皿的
菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若
其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度
的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2 以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数
1.1.7 不同稀释度的选择及报告方法
1.1.7.1 首先选择平均菌落数在30~300 之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）。
1.1.7.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300 之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）。若大于2 则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表1 中实例3 ）。若等于2 亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表1 中实例4 ）。
1.1.7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1 中实例5）
1.1.7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1 中实例6）
1.1.7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30 或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1 中实例7）
1.1.7.6 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之
1.1.7.7 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作报告
1.1.7.8 菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五人方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10 的指数来表示（见表1“报告方式”栏）。
表 1 稀释度选择及菌落总数报告方式
2 总大肠菌群 2.2 滤膜法
2.2.1 范围 本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群 本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定 2.2.2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标
2.2.2.1
总大肠菌群滤膜法 membrane filter technique for total coliforms 总大肠菌群滤膜法是指用孔径为 0.45pm 的微孔滤膜过滤水样， 将滤膜贴在添加乳糖的选择性 培养基上 37℃培养 24h ，能形成特征性菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水 中总大肠菌群的方法。 2.2.3 培养基与试剂
H 碱性品红乙醇溶液（ 50g/L ） 20mL
I 蒸馏水 1000mL 2.2.3.1.2
储备培养基的制备
3.1.1 成分 A 蛋白胨 10g B 酵母浸膏 5g C 牛肉膏 5g D 乳糖 10g
E 琼脂
15g ～ F 磷酸氢二钾 3.5g
G 无水亚硫酸钠
5g
20g
品红亚硫酸钠培养
基 2.2.3.1
先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒人已溶解的琼脂，补足蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为
7.2~7.4 ，再加人乳糖，分装，68.95kPa（115℃，10b）高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL～3mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养。
2.2.
3.1.3 平皿培养基的配制
将上法制备的储备培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的50g/L 的碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min 以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿内。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周。如培养基已由淡粉色变成深红色，则不能再用。
2.2.
3.2 乳糖蛋白陈培养液
同2.1.3.1
2.2.4 仪器
2.2.4.1 滤器
2.2.4.2 滤膜，孔径0.45 μm
2.2.4.3 抽滤设备。
2.2.4.4 无齿镊子。
2.2.4.5 其他仪器同多管发酵法2.1.4 。
2.2.5 检验步骤
2.2.5.1 准备工作
2.2.5.1.1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次
15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2 次~3次，以除去残留溶剂。
2.2.5.1.2 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用蒸汽灭菌器10
3.43kPa（121℃，15b）高灭菌20min.
2.2.5.2 过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07 ×104 Pa（负0.5 大气压）下抽滤。
2.2.5.3 培养
水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养24h± 2h
2.2.6 结果观察与报告
2.2.6.1 挑取符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检：
紫红色、具有金属光泽的菌落；
深红色、不带或略带金属光泽的菌落； 淡红色、中心色较深的菌落。 2.2.6.1.1 凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌， 再接种乳糖蛋白胨培养液， 于 37℃培养 24h ，有 产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。 2.2.6.1.2 按式（ 1）计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每 100mL 水样中的总大肠菌群数 （CFU/100mL ）报告之。
3.2 滤膜法
3.2.1 范围 本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及低浊度水源水中的耐热大肠菌群。 本法适用
于生活饮用水及低浊度水源水中耐热大肠菌群的测定。 3.2.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.2.2.1
耐热大肠菌群滤膜法 membrane filter technique for thermotolerant coliform bacteria 耐热大肠菌群滤膜法是指用孔径为 0.45m 的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在添加乳糖 的选择性培养基上， 44.5 ℃培养 24h 能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法。
3.2.3 培养基与试剂 3.2.3.1 MFC 培养基 3.2.3.1.1 成分
A 胰胨 10g
B 多胨 5g
C 酵母浸膏 3g
D 氯化钠 5g
E 乳糖 12.5g
F 3 号胆盐或混合胆盐 1.5g
G 琼脂 15g
H 苯胺蓝 0.2g
I 蒸馏水 1000mL 3.2.3.1.2 制法
在1000mL 蒸馏水中先加入玫红酸（10g/L ）的0.2mol/L 氢氧化钠溶液 10mL ，混匀后，取 500mL 加入琼脂煮沸溶解，于另外 500mL 蒸馏水中，加人除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已 溶解的琼脂，混匀调 pH 为 7.4 ，加入苯胺蓝煮沸， 迅速离开热源，待冷却至 60℃左右，制成平板， 不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于 2℃~10℃，不超过 96h 。 本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基使用时加 2mL~3mL 于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于 培养垫上培养。
总大 肠菌群 菌落 数 CFU/100mL )
数出的总大肠菌群菌落
过滤的水样体积（
数 ×100
??????
mL )
1）
3.2.3.2 EC 培养基
同3.1.3.1 。
3.2.4 仪器
3.2.
4.1 隔水式恒温培养箱或恒温水浴。
3.2.
4.2 玻璃或塑料培养皿：60mm× 5mm或50mm×12mm。
3.2.
4.3 其他仪器同2.2.4
3.2.5 检验步骤
3.2.5.1 准备工作同2.2.5.1 。
3.2.5.2 过滤水样同2.2.5.2 。
3.2.5.3 培养：水样滤完后，再抽气约5s ，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MFC培养基上，滤膜截留细菌面向上滤膜应与培养基完全贴紧两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入
4.5 ℃隔水式培养箱内培养24h士2h，如使用恒温水浴，则需用塑料平皿，将皿盖紧，或用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封入塑料袋内，浸到44.5 ℃恒温水浴里，培养24h?h。耐热大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非耐热大肠菌群菌落为灰色至奶油色。
3.2.5.4 对可疑菌落转种EC培养基，4
4.5 ℃培养24h±2h，如产气则证实为耐热大肠菌群.
3.2.6 结果报告
计数被证实的耐热大肠菌落数，水中耐热大肠菌群数系以100mL水样中耐热大肠菌群菌落形成单位（CFU）表示，见式（2）。
2）
耐热大肠菌菌落数（CFU /100mL)所计得的耐热大肠菌菌
过滤的水样体积（
落数×100
mL)
2）
培训资料 生活饮用水卫生监测 部分水质指标补充检验方法手册 （试行） 国家卫生计生委疾控局 2014年7月
目录 1生活饮用水中55种挥发性有机物的检验方法—吹扫捕集气相色谱质谱法 (1) 2生活饮用水中27种卤代烃的检验方法—顶空毛细管气相色谱法 (9) 3生活饮用水中11种挥发性有机物的检验方法—顶空毛细管柱气相色谱法 (15) 4生活饮用水中丙烯酰胺的检验方法—液相色谱串联质谱联用法 (19) 5生活饮用水中微囊藻毒素的检验方法—液相色谱串联质谱联用法 (24) 6生活饮用水中环氧氯丙烷的检验方法—气相色谱质谱联用 (29) 7生活饮用水中15种半挥发性有机物的检验方法—固相萃取气相色谱质谱法 (32) 8生活饮用水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-滴的检验方法—液相色谱质谱法 (39) 9生活饮用水中灭草松、呋喃丹、草甘膦、2,4-滴、莠去津、五氯酚和甲基对硫磷的测定方法—液相色谱串联质谱联用法 (41) 10生活饮用水中百菌清检验方法—毛细管柱气相色谱法 (48) 11生活饮用水中5种拟除虫菊酯的检验方法—高效液相色谱法 (51) 12生活饮用水中六种卤乙酸检验方法—离子色谱-电导检测法 (53) 13生活饮用水中游离余氯的检验方法—现场N，N-二乙基对苯二胺（DPD）法 (56) 14生活饮用水中总氯的检验方法—现场N，N-二乙基对苯二胺（DPD）法 (57) 15生活饮用水中挥发酚类化合物的检验方法—流动注射法1 (58) 16生活饮用水中挥发酚类化合物的检验方法—流动注射法2 (59) 17生活饮用水中氰化物的检验方法—流动注射法1 (61) 18生活饮用水中氰化物的检验方法—流动注射法2 (62)
CNAS-CL01-A001 检测和校准实验室能力认可准则 在微生物检测领域的应用说明Guidance on the application of testing and calibration laboratory competence accreditation criteria in the field of microbiological testing 中国合格评定国家认可委员会
前言 本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是CNAS根据微生物检测领域的特性而对CNAS-CL01:2018《检测和校准实验室能力认可准则》所作的进一步说明，并不增加或减少该准则的要求。 本文件与CNAS-CL01:2018《检测和校准实验室能力认可准则》同时使用。 在结构编排上，本文件章、节的条款号和条款名称均采用CNAS-CL01:2018中章、节的条款号和条款名称，对CNAS-CL09:2013应用说明的具体内容在对应条款后给出。 本文件代替：CNAS-CL09:2013。 相对于CNAS-CL09:2013，本文件除编辑性修订外，主要内容变化为： ——5.5.2条将质量手册中应规定生物安全责任人的作用和职责，改为实验室应规定的作用和职责； ——6.6.2c)将关键培养基和自制培养基技术验收合并在一个条款中改为“对检测结果有影响的培养基和试剂应进行技术验收：”然后分条款描述； ——7.3.1去掉了“取样应由经过培训合格的人员进行”。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为： ——CNAS-CL09：2006； ——CNAS-CL09：2013。
检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 1 范围 本文件适用于食品及其相关产品、化妆品、环境样品、玩具、医药、纺织品、卫生用品、消毒产品等微生物检测领域实验室的认可活动。微生物检测领域包括对样品中微生物进行的定性分析或定量检测。微生物专业中涉及的病毒检验、基因扩增检验等应符合相关专业的要求。 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 通用要求 4.2 保密性 4.2.2 适用时，当样品中检出致病菌（包括客户要求以外的致病菌）时应及时通知客户，必要时上报相关的主管部门。 5 结构要求 5.4.1 开展动物试验的机构，应当取得省级以上实验动物管理部门颁发的《实验动物使用许可证》。涉及生物安全实验室，应符合相应国家、行业、地方的标准和规定等。 5.4.2 在本实验室固定设施以外场所，如在临时实验室、移动实验室、抽样现场或野外现场进行检测和抽取样品，都必须在适当的技术控制和有效监督下进行。需要时，可在提供检测结果的上述场所设授权签字人，且应保留其所有相应活动的记录。 5.5.1 实验室应设置生物安全责任人和生物安全监督员，负责生物安全。 5.5.2 实验室应规定生物安全责任人的作用和职责。 5.5.3 实验室技术管理者中应至少包括一名在申请认可或已获认可的微生物检测范围内具有微生物专业或与微生物密切相关的本科以上学历和三年以上微生物检测的工作经历的成员；负责指导或培训检验人员常规微生物实验。 6 资源要求 6.2 人员 6.2.2.1 适用时，食品生产区抽样人员应独立于实验室的微生物检测活动，以防止交叉污染。 6.2.2.2 如实验室使用的高压蒸汽灭菌器不属于简单压力容器（定义参见TSG R0003 -2007《简单压力容器安全技术监察规程》）时，操作人员需持有特种作业人员证书。 6.2.2.3 实验室从事微生物检测的关键检测人员应至少具有微生物或相关专业专科以上的学历，或者具有10年以上微生物检测工作经历。授权签字人应具有相关专业本科以上学历，并具有3年以上相关技术工作经历，如果不具备上述条件，应具有相关专业专科以上的学历和至少10年的微生物相关领域检测工作经历。 6.2.2.4 实验室人员应熟悉生物检测安全操作知识和消毒灭菌知识。
生活饮用水标准检验方法 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 1、国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。 对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。 按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。 2、国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 国家标准物质提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。 3、多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。 初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。 其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。 4、滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上(如品红亚硫酸钠培养基)，经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数 注意;菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。 培养时间。与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006） 随着经济的发展，人口的增加，不少地区水源短缺，有的城市饮用水水源污染严重，居民生活饮用水安全受到威胁。1985年发布的《生活饮用水卫生标准》（GB5749－85）已不能满足保障人民群众健康的需要。为此，卫生部和国家标准化管理委员会对原有标准进行了修订，联合发布新的强制性国家《生活饮用水卫生标准》（GB5749－2006）（下称“新标准”）。 2007年7月1日，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准将正式实施。这是国家21年来首次对1985年发布的《生活饮用水标准》进行修订。 《生活饮用水卫生标准》的修订是保证饮用水安全的重要措施之一。在国家标准化管理委员会协调下，由卫生部牵头，会同建设部、国土资源部、水利部、国家环保总局，组织卫生、供水、环保、水利、水资源等各方面专家共同参与完成了该项标准的修订工作。 新标准具有以下三个特点：一是加强了对水质有机物、微生物和水质消毒等方面的要求。新标准中的饮用水水质指标由原标准的35项增至106项，增加了71项。其中，微生物指标由2项增至6项；饮用水消毒剂指标由1 项增至4项；毒理指标中无机化合物由10项增至21项；毒理指标中有机化合物由5项增至53项；感官性状和一般理化指标由15项增至20项；放射性指标仍为2项。二是统一了城镇和农村饮用水卫生标准。三是实现饮用水标准与国际接轨。新标准水质项目和指标值的选择，充分考虑了我国实际情况，并参考了世界卫生组织的《饮用水水质准则》，参考了欧盟、美国、俄罗斯和日本等国饮用水标准。 1985年出台的《生活饮用水卫生标准》里，饮用水浑浊度的指标是“3-5”，新《标准》则将之提高到“1-3”，也就是说，抛开一大堆老百姓看不懂的理化指标不说，最直观能感受到的，是水色将更为清亮。
微生物取样方法、微生物检测标准 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法） 2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 2.1细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验 沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验
自来水的饮用标准及常见的检测指标 一、自来水能否饮用？ 自来水厂生产的水是符合饮用标准的。但是，这并不表明它是标准的饮用水。原因有二：（1）自来水在生产过程中用氯净化水虽可杀死病原微生物等有害物质，但加入氯本身又可造成新的化学污染。氯可与水中的有机物生成三氯甲烷，它是一种致癌物质。同时，氯还破坏营养，易导致心脏病。（2）在自来水的管网中，长距离管道运输，管道陈旧生锈，城市高楼水箱和楼群蓄水池不清洁或常年使用不消毒，都可造成二次污染。二次污染使细菌、病毒和藻类繁殖，再加上原有的氯及氯化物、铁锈、重金属、放射性物质、使水体浑浊、有异味，其害无穷。所以说，自来水并不是标准的饮用水。在各种污染日益加重的环境下，我们喝到身体里的水一定要有严格的标准。还水的本来面目，喝纯净水才符合人体的需要，并且喝生水比喝开水更有利于人的健康。因为开水失去氧气太多，喝开水不利于向人体供氧。可能有的朋友要说，我喝了一辈子自来水，身体不照样挺好的吗？其实不然，首先，人体的疾病是个积累和渐进的过程，如果您不饮或少饮不洁的水，身体肯定比现在更健康。其次，现在的水环境也不能与若干年前相比。以前的水污染主要来源于有机物和自然界的污物，主要污染物质为细菌和病毒，因此，经过煮沸后的自来水基本可以达到消毒的目的。而现代水污染我们以上已经讲到，主要是工业废水中的化学污染和重金属，而这些污染物通过把水煮沸的办法是不可能去除掉的。因此，煮沸的开水同样不是标准的饮用水。 二、为什么自来水有时发浑、发白、发黄 1．发浑的原因主要是因城市供水管道实发性爆管，在抢修过程中带入了泥沙。当打开供水阀门恢复通水时，泥沙随着水流的冲击，可能造成局部、短时的浑水现象，很快就会恢复正常。 2．发白的原因主要是供水管网中溶入了空气，经压力作用分解成微小气泡（凭肉眼观察不到），气泡的紧密排列就会感觉到流出的水呈乳白色，当在容器中静止数分钟后，随着气泡消失，水就会变清。这种现象不会影响到自来水水质。另一种原因，某些二次供水储水池（箱）微生物超标，投加了漂白粉产生一种轻微白灰色。漂白粉主要成分为Ｃａ（ＣｌＯ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＣａＣｌ２等成分，主要有效成分是次氯酸钙：２Ｃａ（ＣｌＯ）２＋２Ｈ２Ｏ＝Ｃａ（ＯＨ）２＋ＣａＣｌ２＋２ＨＯＣｌ。当放水后，流出水的颜色是一种轻微白灰色，并能闻到轻微刺鼻氯气味，待静置数分钟后，有很少量微小颗粒沉淀物（一般情况不会有）。这种现象不会危害人体健康。如你感兴趣的话，可以用白色透明杯观察水的颜色。打开水龙头放水，将水流入杯中后观察水的颜色，如水发白，你可以观察到白色逐渐从杯底向上变清，这就是水中溶入了气体的现象。也就是水中微小气泡逐渐从杯底向上逸出，逐步变清，而且透明。如水中投加漂白粉，流入杯中水，排除气泡形成水发白外，观察杯中水仍然有轻微白灰色，能闻到轻微氯气味。 3. 发黄原因有两个。一是从用户总表后第一个阀门至用户家中的镀锌管道因长年使用或管材质量问题造成锈蚀而形成的自来水二次污染。这种现象在早晨尤为突出。二是使用二次供水设施水的用户，因产权单位未按规定定期清刷、清毒水池及水箱，容易造成自来水的二次污染。 三、常见水处理技术 随着人类物质生活的提高,环境污染的程度也日趋严重,特别是对水的污染尤为严重,为了人类的健康,而产生了净化水的概念,最原始的水处理方法是通过沉淀的方法,是混浊的水变清, 但这只能除去水中的泥沙等肉眼能见大颗粒,而对看不见的有害菌束手无策,进而人们用消毒
1 目的 建立微生物限度检查的操作规程，为微生物检查人员提供正确的标准操作方法。 2 范围 适用于原辅材料、内包装材料、半成品、成品的微生物限度检查。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 简述: 微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物 污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体健康或传播疾病。能引起皮炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。 4.2 器皿、仪器及用具。 4.2.1 玻璃器皿： 250ml锥形瓶、250ml具塞三角烧瓶、研钵（陶瓷制，直径10-12cm）、培养皿（90mm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml 分度0.1）、注射器(20或30ml)、注射针头、载玻片、盖玻片、 玻璃消毒缸（带盖）。 4.2.2 用具：大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%-75%乙 醇溶液浸泡）,无菌衣、帽、口罩、手套灭菌，备用, 显微镜、放大镜（5-10倍）、实体显微镜、解剖针（尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体）、发丝针（由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后粘上加拿大树胶或油漆，即得。适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体）、小毛笔（即绘图毛笔。适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在笔毛之间）、载玻片、盖玻片、酒精灯、培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）、扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）。 4.2.3 仪器：匀浆仪、培养箱、鼓风干燥箱、台式灭菌器、恒温水浴锅、超净工
食品微生物检验的指标 食品在食用前的各个环节中，被微生物污染往往是不可避免的。评价食品被微生物污染的程度，要采用微生物检验指标采进行。常采用的微生物检验指标为三项细菌指标，即细菌数量(主要是菌落总数)、大肠菌群最近似数(MPN)和致病菌。 第一节菌落总数 一、菌落总数的概念及卫生意义 食品中细菌数量越多，则食品腐败变质的速度就越快，甚至可引起食用者的不良王应．如有人认为细菌数量达到100—1000万个／g时食品就可能引起食用者的食物中毒。 菌落：指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。 细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种：菌落总数和细菌总数： 1、菌落总数 指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使每一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。通常以lg或1ml或lcm2样品中所含的菌落数量来表示。 按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 2、细菌总数 指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1m1或lcm2—样品中的细菌总数来表示。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣 二、菌落总数的常规检验方法 菌落总数的常规检验方法(GB4789．2-84)： 一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。 基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培养48（24）小时——计数报告。（一）样品的处理和稀释： 1．操作方法： 1）、以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
生活饮用水标准检验方法 微生物指标 1 菌落总数 1.1平皿计数法 1.1.1范围 本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。 本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定 1.1.2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1.1. 2.1 菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 1.1.3 培养基与试剂 1.1.3.1 营养琼脂 1.1.3.1.1 成分： A 蛋白胨10g B 牛肉膏 3 g C 氯化钠5g D 琼脂10g~20g E 蒸馏水1000mL 1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。 1.1.4 仪器 1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2 千热灭菌箱。 1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。 1.1.4.4 电炉。 1.1.4.5 天平。 1.1.4.6 冰箱。 1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。 1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。 1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。 1.1.5 检验步骤 1.5.1 生活饮用水。 1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
微生物检验规范 1.目的 明确微生物检验方法和监控标准，规范微生物检验的各项操作，通过对原料、产品及生产线各要求环节进行微生物测试，从检测结果来判定原料、产品及生产线微检监控点的微生物情况是否符合公司和国家规定的标准，确保产品品质。 2.适用范围 公司所有需要作微生物检验的原料、每批产品及微检监控点。 3.职责 3.1 品保微生物检验员负责微生物检验实验器材和无菌室的准备工作。 3.2品保微生物检验员负责原料和生产线微检监控点的微检样品抽样、保存、 登记和微生物检测工作。 3.3成品制程人员负责成品微检样品的抽样工作，品保微生物检验员负责成 品微检样品的保存、登记和微生物检测工作。 3.4品保微生物检验员负责出具检测报告并作出符合性判定。 3.5品保科长负责微生物检测报告的审核。 4.作业程序 4.1实验器材 4.1.1 实验器材、培养基和试剂 1．超净工作台2．恒温培养箱36±1℃ 3．低温培养箱25-28℃4．恒温水浴锅46±1℃ 5．电子/托盘天平（精确到0. 1g）6．高压蒸汽杀菌锅 7．烘箱8．酒精灯 9．记号笔10．打火机 11．镊子12．药匙 13. 生物滤膜14．培养皿9cm/6cm 15. 锥形瓶300ml/500ml+硅橡胶塞16．试管 17．小发酵管18．试管架
19．接种环20．显微镜 21．塑料篮子22．移液管1ml、5ml、10ml 23. 膜过滤设备24. 医用不锈钢剪刀 4.1.2培养基和试剂 1．总菌数培养基平板计数琼脂培养基 2．大肠菌群培养基结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）、煌绿乳糖胆盐 （BGLB） 3. 霉菌、酵母菌培养基虎红培养基 4．氯化钠 6．乙醇 7．二氧化氯粉剂 8. 过氧乙酸 4.2 微生物检验的前准备 4.2.1检验所需器具的灭菌 4.2.1.1培养皿及移液管的干热灭菌 洁净干燥的培养皿，倒放于专用培养皿铁筒内，洁净干燥的移液管，尖端朝下，置于移液管专用的铁筒内，把铁筒放在烘箱中，于120℃干热灭菌120分钟后，调至160-180℃干热灭菌120分钟后，关掉烘箱，自然冷却至60℃以下，方可打开烘箱门取出置无菌室冷却备用。 4.2.1.2锥形瓶及移液管的湿热灭菌 洁净的锥形瓶，塞上硅橡胶塞并用牛皮纸包扎好瓶口，洁净的移液管，用牛皮纸包扎完善后，置于蒸汽灭菌锅中，于121℃湿热灭菌20分钟即可。4.2.1.3镊子、接种环等的火焰灭菌 接种环、镊子要在酒精灯上须灼烧过方可使用；稀释操作时试管口应在火焰上方；培养基容器口边在火焰上方。 4.2.1.4化学灭菌（75%酒精、100×10-6ClO2） 无菌超净台，手部及不能加热灭菌的PE或塑胶制品，桌子等需用化学灭菌法；操作台、桌子、凳子、地面在使用完后均用100×10-6 ClO2擦洗灭菌。 4.2.2培养基及其缓冲稀释液的配制和湿热灭菌
临床微生物学检验 确保高压效果的可靠性。 【适用范围】 蒸气式高压锅。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。 2．打开排气阀。 3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。 4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。 5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。 6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在 0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分 钟，否则营养物质破坏。 7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。 8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。 操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
确保培养箱温度恒定。 【适用范围】 各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。 2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。 3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。 4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。 5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。 6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。 7．培养箱内外应保持清洁。 操作人员部门主管质量负责人 姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
1菌落总数 菌落总数是指示性微生物指标，并非致病菌指标。主要用来评价食品清洁度，反映食品在被加工过程中被污染的程度及卫生质量的重要指标。菌落总数超标可能是企业所使用的原辅料初始菌数较高，或未按要求严格控制生产加工过程的卫生条件，或包装容器清洗消毒不到位，还有可能是产品包装密封不严，储运条件控制不当等导致。如果食品的菌落总数严重超标，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。 2大肠菌群 大肠菌群是国内外通用的食品污染常用指示菌之一。食品中检出大肠菌群，提示被致病菌（如大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等）污染的可能性较大。大肠菌群超标可能由于产品的加工原料、包装材料受污染，或在生产过程中产品受人员、工具器具等生产设备、环境的污染而导致。大肠菌群，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。 大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。一般食品中大肠菌群超标，表示食品受动温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。人吃了大肠菌群超标的食物可能会导致：肠道传染病、食物中毒等。 3霉菌 霉菌，是丝状真菌的俗称，意即"发霉的真菌"，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不像蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。霉菌在我们的生活中无处不在，它比较青睐于温暖潮湿的环境，一有合适的环境就会大量的繁殖，必须采取措施来阻止霉菌的繁殖或切断其传播途径，就可以摆脱霉菌的污染。霉菌毒素对人主要毒性表现在神经和内分泌紊乱、免疫抑制、致癌致畸、肝肾损伤、繁殖障碍等。
浅析生活饮用水微生物检验质量控制 发表时间：2018-05-07T09:54:06.903Z 来源：《健康世界》2018年4期作者：孙菡昕 [导读] 探讨并研究生活饮用水微生物检验质量影响因素 孙菡昕 香坊区卫生监督所 150030 摘要：目的探讨并研究生活饮用水微生物检验质量影响因素，并提出质控措施。方法选取2017年1—12月期间在疾病预防控制中心进行的960件生活饮用水微生物检验为研究对象，回顾分析检测报告，分析影响检测结果的因素，并提出针对性的质量控制措施。结果生活饮用水微生物检验影响因素主要包括环境因素、实验设备因素、人为因素。结论分析生活饮用水微生物检验质量影响因素，并采取有效地措施加强对生活饮用水微生物检验质量控制，具有重要的意义。 关键词：生活饮用水；微生物检验；影响因素 [Abstract] Objective To explore and study the factors affecting the quality of microbiological test in drinking water，and to put forward the quality control measures. Methods from 2017 to December，960 microbiological tests of drinking water in the center for Disease Control and prevention from 1 to December were selected as the research objects. The test reports were analyzed retrospectively，and the factors influencing the detection results were analyzed，and the targeted quality control measures were put forward. Results the factors affecting the microbial test of drinking water mainly include environmental factors，experimental equipment factors and human factors. Conclusion it is of great significance to analyze the influencing factors of microbiological inspection quality of drinking water and take effective measures to enhance the quality control of microbial testing for drinking water. [Key words] drinking water；microbial test；influencing factors 生活飲用水与人类生活、健康息息相关，通过科学、有效的微生物检测，可确保生活饮用水水质合格、水处理符合标准[1]。然而在生活饮用水微生物检验过程中，存在一些影响因素，会影响微生物检验结果。生活饮用水是微生物的载体，如果人饮用了质量不合格的生活饮用水，极易受到微生物的侵害，从而导致疾病的发生。所以，研究生活饮用水微生物检验影响因素，并提出可行、有效的质量检验控制措施，具有至关重要的作用。结合2017年1—12月期间在该中心进行的960件生活饮用水微生物检验结果，分析生活饮用水微生物检验质量控制措施，进一步为检验人员提供参考依据。现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2017年1—12月期间在该中心进行的960件生活饮用水作为研究对象。 1.2 方法 1.2.1样本采集选取具有代表性的地点取样，采集过程必须严格执行无菌操作要求，确保水样采集、运输、储存等过程不受污染，且确保在采集4 h内进行检验，以免因放置时间过长造成水样变化或污染。若当天不能检测，应冷藏4℃下，并于24 h内完成检测。 1.2.2材料按照《生活饮用水标准检验方法》（GB /T 5750—2006）要求[2]，配制培养基并经121℃灭菌15 min。培养基制成平板以后，置于培养箱37℃培养24 h，若无菌落生长，证明培养基无菌，符合实验要求。将含有大肠埃希氏标准菌株的菌液接种在培养基上，若大肠埃希氏菌能够正常生长，证明培养基的成分能够满足细菌生长的条件，符合实验要求。 1.2.3实验仪器水浴箱、恒温培养箱、高压灭菌器等。 1.2.4检验方法按照《生活饮用水标准检验方法》（GB /T 5750—2006）要求，依据检验微生物类型，选择最适宜、最准确、最科学的实验检验方法。 2 结果 2.1 不同季节水样微生物检测情况 第一季度合格率最高为97.91%，第三季最低为83.33%。 2.2 不同存放时间水样微生物检测结果 存放24 h的水样菌落总数最多（13 MPN/100 mL），总大肠菌群也最多为（1.8×103）CFU/mL。 2.3 不同体积水样微生物检测结果 100 mL的水样菌落总数与总大肠菌群多于1 mL水样。 2.4 不同培养温度水样微生物检测结果 36℃为最适宜菌落为大肠菌群生长的温度。 3 讨论 3.1 影响生活饮用水微生物检验因素 3.1.1环境因素通过以上分析认识到微生物检测结果容易受到外部环境的影响，并且其操作环境必须在无菌环境进行。若无菌环境遭到破坏，生活饮用水微生物检验结果可能存在误差，影响检验质量。 3.1.2实验设备因素由于实验设备长期使用，若日常维护和保养不到位，可能会导致实验检测结果存在误差。特别是恒温培养箱，需要检定内部不同角落温度是否符合检测需求。细菌的培养温度对其生长效果影响极大。 3.1.3人为因素①若操作技术不规范，可能影响检测结果；②微生物样品被接收之后需要立即进行检测，避免其遭到破坏或者发生变化。样品存放时间越长，菌落总数的检测结果越高。③检测过程中取样体积、检测方法和标准限值的不同，检测结果可能出现不符合规律现象。 3.2 生活饮用水微生物检验质量控制措施 3.2.1控制实验环境加强对实验室环境的控制，依据实验实际需求和性质，检测环境采用超净工作台或洁净间，避免生活饮用水受到
化妆品微生物标准检验方法 总则（GB7918.1—87） 1 样品的采集及注意事项 1.1所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。包装量小的样品，取样量可酌减。 1.2供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。 1.3接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 1.4若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其他分析。 1.5在检验过程中，从开封到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行。或在相应条件下，按无菌操作规定进行。 1.6如检出粪大肠菌群或其他致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月奋查。 2 供检样品的制备 2.1培养基和试剂 2.1.1生理盐水：氯化钠 8.5g，蒸馏水 1000m溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90ml，121℃（151b）20min高压灭菌。 2.1.2SCDLP液体培养基,成分：酪蛋白胨 17g，大豆蛋白胨 3g，氯化钠 5g，磷酸氢二钾 2.5g，葡萄糖 2.5g，卵磷脂 1g，吐温80 。7g，蒸馏水 1000ml，制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.2？.3分装，121℃（151b）20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的法温80充分混合，冷却至25℃左右使用。 注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用日本多胨代替。 2.1.3灭菌液体石蜡。 2.1.4灭菌吐温80。 2.2.仪器： 2.2.1天平. 2.2.2灭菌的锥形瓶：内含玻璃珠及90ml稀释液. 2.2.3灭菌刻度吸管：10ml、5ml。 2.2.4水浴箱。 2.2.5灭菌研体及灭菌研棒。 2.2.6均质器。 2.3不同类型样品的检样制备。 2.3.1液体样品： 2.3.1.1水溶性的液体样品，可量取10ml加到90ml灭菌生理盐水中，如样品不少于10ml。仍按10倍稀释法进行。如为5ml 则加45ml灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10稀释液。， 2.3.1.2油性液体。取样品10ml，先加5ml来菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在40~44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75ml（在44~44℃水浴中预温），在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。 2.3.2膏、霜、乳剂半固体状样品。 2.3.2.1亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混匀，放32℃水浴静置15min。用其上青液作为1：10的稀释液。 2.3.2.2疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在40~44℃水浴充分混合，制成1：10稀释液。 2.3.2.3固体样品，称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，放30~32℃水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到30~32℃水浴中静置15min，取上清液作为1：10的稀释液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加到90ml灭菌生理盐水，均质1~2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品加到90MLSCDLP
1.0目的： 确保包装材料的微生物质量，规范包材之微生物检验方法。 2.0适用范围： 喷头、软管、乳液瓶、铝皿、内座、磨指器、内塞、眼毛修饰器、粉扑、假睫毛、眼影棒、睫毛刷、剃须刀。 3.0参考资料 3.1、《化妆品微生物检验标准方法总则》（SOP-HYS-002）。 3.2《细菌总数检验标准方法》（SOP-HYS-003）。 3.3《霉菌、酵母菌总数检验标准方法》（SOP-HYS-004）。 3.4《金黄色葡萄球菌检验标准方法》（SOP-HYS-005）。 3.5《绿脓杆菌检验标准方法》（SOP-HYS-006）。 3.6《粪大肠菌群检验标准方法》（SOP-HYS-007。 4.0定义:略 5.0所需设备:略 6.0安全需求:略 7.0程序:
7.1检验前先核对化验申请单之样品编号与实际样品上的编号是否 相符。检查样品包装之完好性，包装完好之样品方可进行检验，包 装不完整或疑有取样污染之样品退回IQC重新取样送检。 7.2样品稀释 7.2.1磨指器、内塞、眼毛修饰器、粉扑、假睫毛、眼影棒、睫毛 刷、剃须刀等体积较小的包装材料稀释：取10ml消毒过的生理盐水顷注于100ml 烧杯内，将内塞、眼毛修饰器、粉扑、假睫毛、剃须刀、眼影棒海棉端、睫毛刷毛端放于烧杯内与生理盐 水混匀备用。 7.2.2铝皿、内座的稀释：取10ml消毒过的生理盐水顷注于100ml 烧杯内，用消毒过的酒精棉球蘸取烧杯内的生理盐水擦拭铝 皿、内座内表面3遍，将此酒精棉放于盛有生理水折烧杯中 摇匀备用。同时计算铝皿、内座内表面的表面积。 7.2.3喷头的稀释：取消毒过的生理盐水10ml顷注于100ml烧杯内， 用喷头将此生理盐水吸于喷头内后喷出，如此 5遍，摇匀此 生理盐水备用。 7.2.4软管、乳液瓶的稀释：取10ml消毒过的生理盐水倒入待测定 的软管、乳液瓶内，并上下左右摇晃至少5次，使生理盐水 与软管、服液瓶内壁完全接触清洗，倒出生理盐水于100ml 烧杯内备用，同时计算出待测定之软管、乳液瓶内表面的总 表面积。 7.3稀释好的样品作如下指标检验。
一、定义 通过一定的实验方法测定食品中的微生物，特别是致病微生物的数量、种类、性质，从而判断食品的卫生质量，保证消费者的身体健康。 二、食品微生物检验的内容 卫生指标菌检验 菌落总数测定 细菌检验 大肠菌群数测定 致病菌检验 霉菌、酵母菌数测定 真菌检验 产毒霉菌检验 霉菌毒素测定 三、食品微生物检验的特点 1、具有法规性 2、检验的范围广 3、杂菌含量多，要检验的菌少。 （1）需要增菌（2）抑制杂菌 4、检验结果具有数量界限 5、需要采样后尽快检验，快出结果 四、意义： 检出有害微生物，避免食物中毒，避免造成经济损失。 五、食品卫生细菌常规检验项目 卫生指标菌 菌落总数测定 大肠菌群测定 沙门氏菌检验 u 致病菌 志贺氏菌检验 金黄色葡萄球菌检验 溶血性链球菌检验 六、细菌污染食品的途径 1、食品加工原料的污染 2、产、储、运、销过程中的细菌污染 3、从业人员的污染 4、食品加工过程中的污染 第一章 食品微生物检验中的生理生化实验 设计生化实验的原则：在实验中加入某些化学物质，使细菌代谢途径中分解代谢产物与加入<的化学物质发生反应，产生某些变化或出现某种特征。 一、过氧化氢酶及过氧化物酶实验原理 1、2H 2O 2 过氧化氢酶 2H 2O+O 2 阳性 2、过氧化物酶： RH 2+H 2O 2 过氧化物酶 R+2H 2O 阳性：细菌变为黑褐色； 阴性： 不变色。 阳性 阴性 二、细胞色素氧化酶实验原理 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺 + --奈酚 靛酚兰（蓝色） 阳性： 2分钟内生成蓝色为阳性； 阴性：无变化。 三、氰化钾实验 阳性： 不抑菌，变混浊 阴性：抑菌 无 蓝 四、硝酸盐还原实验原理 KNO 3 还原酶 KNO 2KNO 2 +对氨基苯磺酸+ a -萘胺 红色化合物（立刻或数分钟内）红色 无色 五、糖发酵实验 分解糖产酸，PH 值下降，使 培养基的 酸碱指示剂发生变化。 阳性：产酸产气 六、氧化发酵实验（O/F 实验 有些微生物分解葡萄糖 必须有氧参加，此种细菌菌称为氧化型； 阳 阴 有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖，称发酵型； 有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖，称产碱型。 灭菌琼脂（厌氧） 七、甲基红实验（MR 实验）和V-P 实验 1、MR 实验原理：一些细菌分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培养基的PH 值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色反应 2、V-P 实验原理 一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，进一步脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰丁二酮，进而与培养基内蛋白胨中所含的精氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。（实验结果同MR 实验） 阴 八 、柠檬酸盐实验（枸橼酸盐实验） 一些微生物可以以铵盐作为唯一 的氮源，以柠檬酸盐作为唯一的碳 源，在柠檬酸盐培养基上生长，分 解柠檬酸盐生成碳酸盐，使培养基 变成碱性，酸碱指示剂变色 九、丙二酸钠实验 一些微生物可以以丙二酸钠 作为唯一碳源，分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变成碱性，酸碱指示剂变色。 十、马尿酸盐实验 一些细菌可以水解马尿酸生成苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸和Fe3+反应生成有色的苯甲酸盐沉淀。 十一、明胶液化实验 一些细菌可产生胞外酶，使明胶蛋白分解为氨基酸,而失去明胶的凝固能力。 十二、苯丙氨酸脱氨酶实验 一些细菌有苯丙氨酸脱氨酶， 可以脱氨 生成苯丙酮酸， 其与FeCl 3反应产生绿色 。 十三、氨基酸脱羧酶实验 一些细菌可以产生氨基酸 脱羧酶使氨基酸脱酸，产生胺类物质，使培养基