啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义
1.概述
生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III 段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：
图1. 动物生命周期划分
A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：
生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B
胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D
围产期毒性试验（III段）：C-F
1一般试验设计简介
1.1受试物
生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物
首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药
1.3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
1.4对照组
应设赋形剂对照组。当赋形剂可能产生作用或影响受试物的作用时，应另设空白对照组。
二、生育力与早期胚胎发育毒性试验（I段）
生育力与早期胚胎发育毒性试验是对雌雄动物由交配前到交配期直至胚胎着床给药，以评价受试物对动物生殖的毒性或干扰作用（生殖细胞接触药物后对受胎能力、生殖系统及子代有无不良影响）。
评价内容包括配子成熟度、交配行为、生育力、胚胎着床前阶段和着床等。研究阶段包括生命周期的A阶段和B 阶段如下图所示：
图2. 生育力与早期胚胎发育毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图3. 生育力与早期胚胎发育毒性试验流程图
2.试验流程图解：
2.1分组及饲养：首先雌鼠、雄鼠分别按体重随机分为给药组和对照组，常规饲养，每天观察并记录动物体征和死亡情况；
2.2给药期：
雄鼠：交配前给药4-10周，给药期持续整个交配期，至处死；
雌鼠：交配前两周开始给药，并持续至胚胎着床（GD6-GD7）；
2.3阴道涂片检查：合笼交配前2周须每天对雌鼠进行阴道涂片检查，观测每只雌鼠的性周期变化，以检查其是否对交配和交配前时间有影响；
2.4合笼：雌鼠、雄鼠1：1合笼交配，交配期2周。交配结束后雌鼠、雄鼠分别进行不同处
理：
雄鼠：交配成功后即可处死，并进行剖检，保存睾丸、附睾、异常组织器官；
检测项目主要包括：附睾精子计数、精子活力检查、精子畸形检查；
统计项目：摄食量、体重、生育率；
雌鼠：未交配成功的雌鼠：交配结束后处死；
交配成功孕鼠：每天观察并记录体征、死亡情况；每3天测定体重、摄食量；并于GD13-GD15日处死，进行剖检。保存子宫、卵巢及异常组织器官；
检测项目：计数黄体数、活胎、死胎、吸收胎数，并计算着床数；
统计项目：摄食量、体重、受孕率、妊娠率、着床前丢失率、着床后丢失率；
三、胚胎-胎仔发育毒性试验（II段）
胚胎-胎仔发育毒性试验是研究妊娠动物自胚胎着床至硬腭闭合给药，评价药物对妊娠动物、胚胎及胎仔发育的影响。实验动物包括大鼠和家兔。
评价内容包括妊娠动物较非妊娠雌性动物增强的毒性、胚胎-胎仔死亡、生长改变和结构变化等。研究阶段主要包括生命周期的 C 阶段至D 阶段如下图所示：
图4. 胚胎-胎仔发育毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图5. 胚胎-胎仔发育毒性试验流程图
2.实验流程图解：
2.1制备孕鼠/孕兔，并按体重平均分为给药组和对照组，常规饲养，每3天测定摄食量、体重；每天观察并记录体征、死亡情况；
2.1给药期：给药期设定在怀孕动物胚胎着床至硬腭闭合期。孕鼠给药期：GD6-GD15；孕兔给药期：GD6-GD18；
2.3剖检：动物饲养至分娩前处死，剖腹取仔。孕鼠剖检日期：GD20/GD21；家兔剖检日期：GD28/GD29；
母鼠/母兔：进行大体尸检观察胎盘是否异常；保存异常组织器官；计数：黄体数、活胎、死胎、吸收胎；计算：摄食量、体重、着床数；
胎仔：胎仔清洗干净后分别测定每只胎仔体重、顶臀长，并进行大体外观检查。该过程以后胎鼠与胎兔处理是有区别的。胎鼠：50%胎仔制作骨骼标本，进行骨骼检查；50%胎仔制作内脏标本，进行内脏检查；胎兔：全部胎兔首先进行剖检，进行内脏检查，然后将剖检后胎兔剥离皮肤组织，并剔除脂肪，全部制作成骨骼标本，进行后期骨骼检查。
四、围产期毒性试验（III段）
围产期毒性试验是检测从胚胎着床到幼仔离乳给药对妊娠/哺乳的雌性动物以及胚胎和子代发育的不良影响；
评价内容包括妊娠动物较非妊娠雌性动物增强的毒性、出生前和出生后子代死亡情况、生长发育的改变以及子代的功能缺陷，包括F1代的行为、性成熟和生殖功能。研究阶段包括生命周期中的 C 阶段至F 阶段如下图所示：
图6. 围产期毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图7. 围产期毒性试验流程图
2.试验流程图解：
2.1制备孕鼠，按体重平均分为给药组和对照组，饲养至分娩，该阶段为怀孕期，每天对孕鼠进行体征及死亡情况观察；每3天进行体重、摄食量测定；
2.1给药期：设定在胚胎硬腭闭合至哺乳结束期，一般为孕鼠怀孕15日至子鼠离乳
（GD15-PND21）进行给药。
2.3分娩：孕鼠一般于GD21-GD23分娩；在大鼠分娩结束后进行观察（不能打扰其分娩，以免产生食仔现象），计数死胎数、活胎数、雌胎仔数和雄胎仔数；计算F1代大鼠畸形率、成活率、性别比例；对胎鼠进行外观畸形检查，并分别测定每窝雌、雄胎仔总体重；后进入哺乳阶段。
2.3哺乳期：P代大鼠：每天进行体征及死亡情况观察；每3天进行体重、摄食量测定，饲养至离乳；
F1代胎鼠：每天计数雌、雄胎鼠数量；每3天分别测定雌、雄胎鼠总体重；于PND4进行窝仔数调整（减少由于每窝胎仔数目不同而产生的对胎鼠身体发育等指标的影响）；哺乳期至离乳后还需根据身体发育、反射发育等检测指标日程安排对F1代胎鼠进行身体发育检测和反射发育检测；
2.4离乳：F1代大鼠于PND21离乳，代表哺乳期结束。此时对P代雌鼠及F1代大鼠分别
进行相应处理：
P代大鼠：哺乳期结束后（PND21）进行大体剖检；保存:异常组织器官；统计摄食量、体重、哺乳成活率；
F1代大鼠：每窝留存雌、雄仔鼠各1只，数量不够时同剂量组仔鼠补齐，饲养至性成熟。该阶段每天观察并记录F1代大鼠体征、死亡情况；每周测定摄食量、体重；据F1代仔鼠行为指标检测日程安排进行转棒试验和穿梭箱试验。
2.5F1代大鼠合笼交配：F1代大鼠性成熟后同剂量组雌鼠与雄鼠1:1配对，合笼交配，交
配期为2周。交配结束后对雄鼠、雌鼠分别进行相应处理：
F1代雄鼠：处死，计算生育率；
未孕雌鼠：处死，并进行大体剖检，保存异常组织器官；
孕鼠：饲养至胚胎硬腭闭合（GD13-GD15），怀孕期每天观察并记录F1代孕鼠体征、死亡情况，每3天测定摄食量、体重；
2.6F1代雌鼠于GD13-GD15处死，大体尸检，检查有无胎盘异常，保存异常组织器官；计数黄体数、活胎、死胎、吸收胎数；计算摄食量、体重、妊娠率；活胎率、死胎率、着床前丢失率、着床后丢失率；
砷的生殖毒性研究现状综述 作者：刘化一来源：中国知网维普网学号：2012515146 【摘要】：本文综述了砷对生殖发育功能的影响, 其中包括砷对生殖细胞的影响、砷对胚胎发育的影响。总结了砷的胚胎毒性作用机制，以及对砷中毒拮抗作用的物质的总述。 【关键词】：砷生殖毒性拮抗 【引言】：砷是一种环境毒物, 其对人畜的健康是有损害的，对生殖毒性也是不可忽视的。最近几年学者们对砷的生殖毒性研究进行了广泛而深入的研究。对砷的胚胎毒性作用有了一定了解。最近几年更多关注的是对砷的拮抗物质的研究，本文对这种拮抗作用也做一定综述。 1、砷对生殖细胞的影响及机制 环境雌激素（ESS）广泛存在于自然界中其种类繁多，其种类繁多，表现出拟天然激素或抗天然激素的作用，，ESS对人类生殖健康的威胁备受关注，有研究认为砷化物是一类潜在的环境雌激素物质。[1] 1.1砷对雄性生殖细胞的影响及机制 早期，砷的生殖发育毒性大多关注于雌性。近年来，砷暴露引起雄性生殖毒性也引起了广泛关注.越来越多的研究表明，许多生产生活中接触到的化学物质(包括砷在内)均可以损害男性生殖健康.环境内分泌十扰物对雌激素、皇丸酮、甲状腺激素等有显著影响，可导致代谢紊乱、生殖障碍，婴儿出生缺陷和发育异常以及某些恶性肿瘤的发生。[2] 普通环境条件下,砷暴露和男性精子质量存在一定的相关性. 结果显示血液中总砷含量与精子运动能力呈显著负相关.[3]聂继盛等人调查了饮水型砷暴露对男性精液质量的影响.结果表明,接触组(暴露剂量0.05~0.20 mg/L)人群血砷和精液砷含量 增高,且二者具有很强的相关性,说明砷可通过血睾屏障对男性生殖细胞产生损害. 精液质量参数表明,接触组人群精子活率、A 级精子百分率及顶体完整率显著低于对照组,精子畸形率高于对照组;且精液中砷含量与以上参数均具有显著相关性.[4]砷对精子活率、活力及正常形态都有损害，但对精子密度未见影响。砷是一种细胞
异常毒性实验豚鼠采食及体重变化分析 马力，潘若文，张鹏飞，张宇船，李本婷，原田田 （华兰生物工程股份有限公司，新乡453003） 【摘要】异常毒性实验是生物制品安全性实验重要的组成部分，是《中国药典》中规定的必须进行的实验检测项目。因此异常毒性实验结果判定的准确性至关重要。本文根据《中国药典》中对异常毒性实验的规定，分析进行异常毒性实验的豚鼠采食及体重数据，发现豚鼠日平均采食量与饲养密度成负相关性，并且日平均采食量于实验第二天明显下降，第三天开始逐渐恢复。体重增量在初始体重270～320g时最为稳定，在320～330g时，体重增量最大。 【关键词】生物制品；异常毒性；豚鼠；采食；体重 Analyze the Variety of Guinea Pig Ingestion and Body W eight in Abnormal Toxicity MA li, PAN ruo-wen, ZHANG peng-fei, ZHANG yu-chuan, LI ben-ting, YUAN tian-tian (HULAN BIOLOGIGAL ENGINEERING，INC，Xinxiang 453003，China) 【Abstract】 Abnormal Toxicity is the important experiment of the Biological Products safety test, 《China Pharmacokinetics》requires that the Abnormal Toxicity must to be put into effect. The judgment of the Abnormal Toxicity result is so important. This paper depends on the compendial requirement, analysis the numerical data of Guinea Pig ingestion and body weight in the Abnormal Toxicity. We discover that the ingestion cut down with the population density increasing, and the ingestion cut down clearly at the second day, recover at the third day. The increase of body weight is stable at the beginning body weight in 270～320g, and the highest at beginning body weight in 320～330g. 【Key words】 Biological Products; Abnormal Toxicity; Guinea Pig; Ingestion; Body Weight 异常毒性实验是生物制品安全性检查中重要的动物实验之一，是生物制品的非特异性毒性的通用安全试验【1】，检查制品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。 异常毒性检查法分为小鼠试验法和豚鼠试验法，《药典》中规定豚鼠检查法每批供试品使用2只豚鼠，体重范围250～350g，注射供试品观察7d，试验结束时，豚鼠无死亡，无异常反应，每只豚鼠体重均增加，则判定供试品合格。本研 [作者简介]马力（1971——），生物工程师，华兰生物工程股份有限公司质控部经理 E-mail: ml@https://www.doczj.com/doc/86169744.html,
董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29 Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用 董双，何剑斌*，张燚，龙淼* （沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866） 摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。 关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质 中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05 Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice DONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi （College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China） Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function． Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone 玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还 收稿日期：2015－06－30 基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152） 作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@https://www.doczj.com/doc/86169744.html,；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@https://www.doczj.com/doc/86169744.html, 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。 ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质
海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮 抗作用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：覃淑云，秦小云，张树球，方晓燕 【摘要】目的探讨海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用。方法取健康昆明雄性小白鼠，随机分为对照组、染铅组、治疗组3个实验组，进行醋酸铅染毒亚慢性毒性实验，治疗组用海尔福进行治疗。结果醋酸铅染毒组雄性小鼠的生殖腺有不同程度的病理学改变，精子计数、直线运动精子数、活精子率下降，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率升高；海尔福治疗组小鼠的生殖腺病理学改变有不同程度的改善，精子计数、直线运动精子数、活精子率有所升高，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率有所降低。结论海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性有拮抗作用。 【关键词】海尔福；铅中毒；生殖毒性；诱变力试验；小鼠Abstract: Objective To explore Haierfu syrup in protection against lead poisoning on genital gland in male mice. Methods
Kunming male mice were randomly divided into control group, lead poisoning group and therapeutic group. Sub-chronic toxicity test was performed with lead acetate poisoning. The therapeutic group was given Haierfu syrup. Results In lead poisoning group, the pathological changes in genital glands of mice were obtained; sperm count, linear movement sperm and live sperm rate decreased; the elevated motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate were found. In Haierfu group, the pathological changes in genital glands of mice ameliated to different degree, sperm count, linear movement sperm and live sperm rate elevated, and motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate decreased. Conclusion Haierfu syrup can prevent genital glands of male mice from lead poisoning. Key words: Haierfu syrup; lead poisoning; genital toxicity; mutagenicity tests; mice 铅是一种对人体有害的重金属元素，普遍存在于自然界中。环境中的生活性铅污染也很严重，铅对健康的影响已成为相当突出的社会问题。铅对健康的影响是多方面的，铅对雄性睾丸和附睾的毒性也得到了公认，人们对铅损害生殖腺的研究较多，但对用于干预铅损害生殖腺的研究报道较少，笔者通过观察海尔福对铅致小鼠性腺毒性的
【 Z H 】 G P T 1 - 1 指导原则编号： 药物生殖毒性研究技术指导原则 (第二稿) 二○○六年一月 目录 一、概述 (3) 二、基本原则 (3) （一）实验管理 (3) （二）具体问题具体分析 (4) （三）随机、对照、重复 (4) 三、基本内容 (4) （一）总体考虑 (4) 1、受试物 (4) 2、受试物药代动力学研究 (5) 3、试验系统 (5) 3.1 试验动物 (5) 3.2 其他试验系统 (6) 4、给药 (6) 4.1 剂量选择 (6) 4.2 给药途径 (7) 4.3 给药频率 (7) 4.4对照组 (7)
（二）试验方案 (7) 1、试验方案选择的一般考虑 (7) 2、常用的试验方案 (8) 2.1生育力与早期胚胎发育毒性试验（I段） (8) 2.1.1试验目的 (8) 2.1.2动物选择 (9) 2.1.3 给药期 (9) 2.1.4 动物处理 (9) 2.1.5 观察指标 (9) 2.2胚胎-胎仔发育毒性试验（II段） (10) 2.2.1试验目的 (10) 2.2.2动物选择 (10) 2.2.3 给药期 (10) 2.2.4 动物处理 (11) 2.2.5 观察指标 (11) 2.3 围产期毒性试验（III段） (12) 2.3.1试验目的 (12) 2.3.2动物选择 (12) 2.3.3 给药期 (12) 2.3.4 动物处理 (12) 2.3.5 观察指标 (12) 3、其他试验方案 (13) 3.1 单一（全程）试验设计（啮齿类动物） (14) 3.2 两段试验设计（啮齿类动物） (14) （三）毒代动力学 (14) 四、结果分析与评价 (15) （一）统计分析 (15) （二）数据报告 (16) （三）结果分析 (16) 1、生殖毒性 (16) 2、发育毒性 (17) 3、其他 (17)
1141 异常毒性检查法 异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引入或其他原因所致的毒性。 本法系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。 供试品溶液的制备按品种项下规定的浓度制成供试品溶液。临用前，供试品溶液应平衡至室温。 试验用动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。做过本实验的动物不得重复使用。 非生物制品试验 除另有规定外，取小鼠5只，体重18～22g，每只小鼠分别静脉给予供试品溶液0.5ml。应在4～5秒内匀速注射完毕。规定缓慢注射的品种可延长至30秒。除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。 生物制品试验 除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验，试验中应设同批动物空白对照，观察期内，动物全部健存，且无异常反应，到期时每只动物体重应增加，则判定试验成立。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。 ⑴小鼠试验法除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称体重，应为18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5ml，观察7天。观察期内，小鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。 ⑵豚鼠试验法除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只小鼠称体重，应为250～350g。每只豚鼠腹腔注射供试品溶液5.0ml，观察7天。观察期内，豚鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只豚鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，可用4只豚鼠复试1次，判定标准同前。
Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究 摘要：以泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｔｕｓ）精子为受试材料，应用计算机辅助精子分析（ＣＡＳＡ）系统，研究了亚铁离子（Ｆｅ２＋）对雄性泥鳅的生殖毒性。在预实验的基础上，设置３０、６０和３００μｍｏｌ／Ｌ３个Ｆｅ２＋浓度梯度。泥鳅精子暴露０、０．５、１.0、２.0和４.0 ｈ后激活，测定运动百分数、时间和速度等精子运动参数。结果表明，６０ｍｏｌ／Ｌ的Ｆｅ２＋溶液明显影响泥鳅的精子运动时间和相对速度（Ｐ＜０．０５）。高浓度的Ｆｅ２＋能够抑制泥鳅精子运动，对泥鳅具有潜在生殖毒性作用。 关键词：亚铁离子（Ｆｅ２＋）；泥鳅；精子运动；生殖毒性 Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＦｅ２＋ｏｎｔｈｅｓｐｅｒｍｏｆｌｏａｃｈ（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｔｕｓ）ｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙａCｏｍｐｕｔｅｒ－AｓｓｉｓｔｅｄSｅｍｅｎAｎａｌｙｚｅｒ（ＣＡＳＡ）．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｌｏａｃｈｓｐｅｒｍｗａｓｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＦｅ２＋（３０，６０，ａｎｄ３００μｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ０，０．５，１.0，２.0 ａｎｄ４.0 ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ｄｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｖｅｌｏｃｉｔｙｏｆｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｒｏｎｉｏｎｏｆｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｕｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅｖｅｌｏｃｉｔｙｒｅｄｕｃｅｄsignificantly ａｔ６０ｍｏｌ／ＬｏｆＦｅ２＋（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｒｏｕｓｉｏｎｓｗｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄａｍａｇｅｔｈｅｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｌｏａｃｈ，ａｎｄｍｉｇｈｔｈａｖｅｈａｒｍｆｕｌｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｌｏａｃｈｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｅｒｒｏｕｓｉｏｎ；ｌｏａｃｈ；ｓｐｅｒｍｍｏｔｉｌｉｔｙ；ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｏｘｉｃｉｔｙ 铁是动物体内必需的微量元素，是血红素、细胞色素的重要组成部分，可参与多种生命活动过程，机体内的铁代谢平衡是保证生命活动正常进行的基础［１］。随着现代化进程的加快，铁矿业的膨胀和工业废水排放的增加，水环境
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析 发表时间：2017-08-18T16:33:09.853Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：裴斯彪王丹李林彭贤东[导读] 综上所述，干姜人参半夏汤在治疗脾胃虚寒型妊娠恶阻时，可采用小剂量进行治疗，不会产生妊娠毒性。 （南充市中心医院<川北医学院第二临床学院> 四川南充 637000）【摘要】目的：分析干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的实验结果。方法：选取100只妊娠小鼠，将其随机分为4组，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，所有小鼠均是在孕后第6～17天进行灌胃，第18天处死，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况及胎仔外观。结果：低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照 组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05）；四组活胎率、死胎率及吸收胎率进行两两组间对比，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察胎仔发现高剂量组出现头盖骨变大腹部裂开等情况。结论：小剂量的干姜人参半夏汤不会对妊娠小鼠产生妊娠毒性，随着剂量增加，逐渐增加胚胎畸形的发生率。【关键词】干姜人参半夏汤；妊娠小鼠；生殖毒性【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0187-02 干姜人参半夏汤是由干姜、人参、半夏组成，其中半夏有“堕胎”的说法，现代药理证实，半夏有胚胎毒性，因此在治疗妊娠患者需慎用半夏[1]。但干姜人参半夏汤在发挥降逆功效时半夏发挥了重要作用。现笔者就干姜人参半夏汤对妊娠小鼠的生殖毒性进行实验研究，以便为孕期的安全用药提供理论依据。 1.资料与方法 1.1 实验材料 小鼠：选取性成熟清洁级小鼠150只，雌性小鼠100只，雄性小鼠50只，体质量平均（24.9±2.6）g，饲料为标准饲料。干姜人参半夏汤：依据金匮要略进行配置，干姜、生哂参各14g，生姜汁10滴，半夏28g，煎煮浓缩后保存于4℃的冰箱中备用。 1.2 实验方法 饲养条件：室温25℃，湿度40～70%，饲养标准鼠料，环境干燥清洁。确定妊娠：将2只雌性小鼠和1只雄性小鼠放置于一笼中，于每日9时检查雌性小鼠阴道口，如阴道口有阴栓，则将其取出，记录为受孕“0”天，分组饲养。 给药：随机将100只妊娠小鼠分为4组，空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，均于孕后第6天（胚胎器官形成期）开始灌胃给药，至第17天（器官形成），空白对照组采用等体积蒸馏水进行灌胃，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给药量为原方剂量、3倍原方剂量、6倍原方剂量。 1.3 观察指标 所有小鼠均于妊娠第18天处死，剪开腹壁，取出子宫，称重子宫及胎，切开子宫，取出胎仔，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况（死胎、活胎及吸收胎率）及胎仔外观。妊娠小鼠体质量增加=解剖体质量-受孕第“0”天体质量-子宫及胎质量。胎仔外观检查：检查头部是否器官完整、眼睛大小、是否有突眼等异常，是否露骨或脑膜膨出等；检查四肢是否多、并、少、无趾，有无足内外翻等畸形；检查躯干有无腹裂、脊髓膨出或裂开等；检查尾部是否短、卷、无尾或尾分叉等。 1.4 统计学分析 数据录入统计学软件SPSS 18.0，将计量资料（妊娠小鼠体质量及胎鼠体质量）、计数资料（死胎、活胎及吸收胎率）分别采用（x-±s）、（%）表示，并予以t检验、χ2检验，P≤0.05，差异有统计学意义。 2.结果 2.1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量 低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05），如表1所示。表1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量（x-±s）
生殖发育毒性试验设计和实施中应注意的问题 国家上海新药安全评价研究中心 常艳 2009年11月成都
汇报提纲 1 生育力和早期胚胎发育毒性试验 2 胚胎-胎仔发育毒性试验 3 围产期毒性试验 4 疫苗的生殖毒性评价 15 SD需要注意的共性问题
参考指导原则 -[ZH]GPT1-1：药物生殖毒性研究技术指导原则 [ZH]GPT11药物生殖毒性研究技术指导原则 -OECD414. Prenatal development toxicity study -OECD415.One generation reproduction toxicity study OECD 415. One generation reproduction toxicity study -OECD416. Two generation reproduction toxicity study -OECD421. Reproduction-developmental toxicity screening test -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_a_ Guidelines for Reproduction Studies -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_b_ Guidelines for FDA CFSAN OPA Redbook2000IV C9b Guidelines for Developmental Toxicity Studies -ICH S5A Reproduction toxicology __p gy -ICH_S5B_Male fertility
表1 生殖毒物的危害类别 类别1：已知或足以确定的人类的生殖或发育毒物 此类别包括对人类的生殖能力或者发育已产生有害效应的物质，或有动物研究的证据，及可能用其他信息补充提供其具有妨碍人生殖能力的物质。根据其分类的证据来源进一步区分，主要来自人的数据（类别1 A）或者来自动物的数据（类别1 B）. 类别1 A：已知对人类的生殖能力、生育或者发育造成危害效应的 该物质分类在这一类别主要依据人的数据。 类别1 B：推定对人的生殖能力或者对发育的有害影响 该物质分类在这一类别主要依据动物实验的数据。动物研究数据应提供清楚的、没有其他毒性作用的特异性生殖毒性的证据，或者有害生殖效应与其他毒性效应一起发生时，这种有害生殖效应不被认为是继发的、非特异性的其他毒性效应。然而。当存在有机制方面的信息怀疑这种效应对人类的相关性时，将其分类至类别2也许更合适。 类别2：可疑人类的生殖毒(性)物或发育毒(性)物 此类别的物质应有人或动物试验研究的某些证据(可能还有其他补充材料)表明对生殖能力、发育的有害效应而不伴发其他毒性效应;但如果生殖毒性效应伴发其他毒性效应时，这种生殖毒性效应不被认为是其他毒性效应的继发的非特异性结果。同时，没有充分证据支持分为类别1。例如.研究中的欠缺可以使证据的说服力较差，基于此原因，分类于类别2可能更合适。 表 2 哺乳效应的危害类别 哺乳效应 对哺乳的影响是被单独划分在单一类别。已知许多物质不存在经哺乳能对子代引有害影响的信息。然而，己知一些物质被妇女吸收后显示干扰哺乳，或该物质(包括代谢物)可能存在于乳汁中，而且其含量足以影响哺乳婴儿的健康，那么应标示出该物质分类对哺乳婴儿造成危害的性质。这一分类可根据如下情况确定 a) 对该物质的吸收、代谢、分布和排泄的研究应指出该物质在乳汁中存在，且其含量达到可能产生毒性的水平；和/或 b) 在动物实验中一代或二代的研究结果表明，物质转移至乳汁中对子代的有害影响或对乳汁质t的有害影响的清楚证据；和/或 c) 对人的实验证据包括对哺乳期婴儿的危害.
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义 1.概述 生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。 生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示： 图1. 动物生命周期划分 A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。 各段试验研究阶段如下： 生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B 胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D 围产期毒性试验（III段）：C-F 1一般试验设计简介 1.1受试物 生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。 1.2实验动物 首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。 1.3给药 1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
中药对生殖系统毒性的研究分析 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的研究分析中药生殖系统毒性的特点及现状。方法通过中药对生殖系统毒性的古代记载、中药对生殖系统损伤的临床症状、中药对生殖系统毒性的实验研究、化学成分对生殖系统的影响等的研究分析，提出生殖毒性中药的研究开发方向。结果对中药的生殖毒性进行了分析探讨，开展中药抗生育作用的研究是生殖毒性中药的重要发展方向。结论研究分析了中药生殖毒性的现状，提出了中药生殖毒性的研究发展方向。 【关键词】中药生殖系统毒性研究 由于中药作用相对温和，以复方为主治疗疾病，中药的不良反应较少。但随着国际上天然药物中毒事件的不断出现，对中药毒性重新认识的呼声逐渐增高。本文就中药的生殖毒性进行分析探讨。 1 中药对生殖系统毒性的古代记载 古代医药家很早就对妊娠禁忌药［1］有所认识，东汉《神农本草经》即有堕胎药的记载。历代本草均把部分虫类中药列为妊娠禁忌的范畴［2］，并列入许多妊娠禁忌药歌诀中。虫类妊娠禁忌药主要包括水蛭、虫、虻虫、全蝎、蜈蚣、地龙、斑蝥、白僵蚕［3］、蝉蜕等
9味。如水蛭,《本经》载：“破血瘕，积聚，无子”；《别录》载：”堕胎”；《本草经疏》亦言：“堕胎者，以其有毒善破血也”；近代记载：“妊娠不可服”。蜈蚣，《别录》载：“疗心腹寒热结聚，堕胎，去恶血”；“孕妇应用仍应持小心态度”。地龙，《中华本草》(精选本)载：“脾胃虚寒证不宜服，孕妇禁服”；“地龙对子宫有兴奋作用，能引起痉挛性收缩，孕妇慎用”。明代李时珍总结为四十余种有代表性的禁忌药物，阐明了孕妇禁用的观点，并著有流传至今的“妊娠禁忌歌。”“虫元斑水蛭及蝱虫，附子乌头配天雄，野葛水银并巴豆，牛膝薏米与蜈蚣，三棱芫花代赭麝，大戟蝉蜕黄雌雄，牙硝芒硝牡丹桂，槐花牵牛皂角同，半夏南星与通草，瞿麦干姜桃仁通，硵砂干漆蟹爪甲，地胆茅根都失中”。清代王孟英在李时珍禁忌用药的基础上增加至一百余种，现分类中主要是“妊娠禁忌歌”中的药物。将其分为禁用(剧毒)类，慎用(有毒)类，能用(无毒)类。禁用类：巴豆、螈青、牵牛子、斑蟊、天雄、野葛、水银、芫花、大戟、硵砂、地胆、雌黄、雄黄、水蛭、蝱虫、蜈蚣、蟹爪甲、干漆、商陆、麝香……；慎用类：附子、乌头、桃仁、红花、干姜、肉桂、三棱、牙硝、芒硝、牛膝、皂角、赭石……；能用类：茅根、通草、木通、瞿麦、薏仁、槐花、蝉蜕、丹皮、大黄、枳实、当归、川芎、冬葵子、益母草、半夏、南星、车前子、元胡、伏龙肝、神曲、麦芽等。 2 中药对生殖系统损伤的临床症状 长春花所含长春碱可产生精子形成障碍。洋地黄中的洋地黄毒苷长期应用可产生雌激素样作用，如男性乳房发育。孕妇（多）服商陆
精品文档 . 1141 异常毒性检查法 异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引入或其他 原因所致的毒性。 本法系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。 供试品溶液的制备按品种项下规定的浓度制成供试品溶液。临用前，供试品溶液应平衡至室温。 试验用动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。做过本实验的动物不得重复使用。 非生物制品试验 除另有规定外，取小鼠5只，体重18～22g，每只小鼠分别静脉给予供试品溶液0.5ml。应在4～5秒内匀速注射完毕。规定缓慢注射的品种可延长至30秒。除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。 生物制品试验 除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验，试验中应设同批动物空白对照，观察期内，动物全部健存，且无异常反应，到期时每只动物体重应增加，则判定试验成立。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。 ⑴小鼠试验法除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称体重，应为18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5ml，观察7天。观察期内，小鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。 ⑵豚鼠试验法除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只小鼠称体重，应为250～350g。每只豚鼠腹腔注射供试品溶液5.0ml，观察7天。观察期内，豚鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只豚鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，可用4只豚鼠复试1次，判定标准同前。
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2 （1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871） 【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。 【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2 (1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China) 【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully. 【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检 [作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@https://www.doczj.com/doc/86169744.html, [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@https://www.doczj.com/doc/86169744.html,