Purification of genomic DNA from cultured cells using the QIAamp DNA Micro Kit (QA43 Jul-10) page 1 of 3
User-Developed Protocol:
Purification of genomic DNA from cultured cells using the QIAamp ? DNA Micro Kit
This procedure has been adapted by customers and is for purification of total DNA from cultured cells using the QIAamp DNA Micro Kit. QIAGEN has not verified the performance of this user-developed protocol.
IMPORTANT : Please read the QIAamp DNA Micro Handbook , paying careful attention to the “Safety Information” and “Important Notes” sections, before beginning this procedure. Equipment and reagents to be supplied by the user
When working with chemicals, always wear a suitable lab coat, disposable gloves, and protective goggles. For more information, consult the appropriate material safety data sheets (MSDSs), available from the product supplier.
? Ethanol (96–100%)*
?
1.5 ml microcentrifuge tubes ?
Pipets and pipet tips (to avoid cross contamination, we recommend pipet tips with aerosol barriers) ?
Thermomixer, heated orbital incubator, heating block, or water bath capable of incubation at 56°C and 70°C ? Microcentrifuge with rotor for 1.5 ml and 2 ml tubes
? Vortexer
Important points before starting
?
Lysis time will vary depending on the size and density of the source material. The lysis conditions given here are intended to serve as guidelines. ? All centrifugation steps are performed at room temperature (15–25°C).
Things to do before starting
?
Heat a water bath or heating block to 56°C. ?
If Buffer AL or Buffer ATL contains precipitates, dissolve by heating to 70°C with gentle agitation. ? Ensure that Buffer AW1 and Buffer AW2 have been prepared according to the instructions in the QIAamp DNA Micro Handbook .
* Do not use denatured alcohol, which contains other substances such as methanol or methylethylketone.
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Procedure
1.
Pipet 1–100 μl media containing the cells into a 1.5 ml microcentrifuge tube (not provided). 2.
Add Buffer ATL to a final volume of 100 μl. 3.
Add 10 μl proteinase K. 4.
Add 100 μl Buffer AL, close the lid, and mix by pulse-vortexing for 15 s.
To ensure efficient lysis, it is essential that the sample, Buffer ATL, proteinase K, and Buffer AL are thoroughly mixed to yield a homogeneous solution. Note : For small numbers of cells we recommend adding carrier RNA to Buffer AL (see the
QIAamp DNA Micro Handbook ). Note that carrier RNA does not dissolve in Buffer AL. It must first be dissolved in Buffer AE and then added to Buffer AL.
A white precipitate may form when Buffer AL is added to Buffer ATL. The precipitate does not interfere with the QIAamp procedure and will dissolve during the heat incubation in step 5.
5. Incubate at 56°C for 10 min.
Note : If samples are shaken during the incubation, DNA yields can be increased. 6.
Briefly centrifuge the 1.5 ml tube to remove drops from the inside of the lid. 7.
Add 50 μl ethanol (96–100%), close the lid, and mix thoroughly by pulse-vortexing for 15 s. Incubate for 3 min at room temperature (15–25°C).
Note : If the ambient temperature exceeds 25°C, cool the ethanol on ice before adding to the tube. 8.
Briefly centrifuge the 1.5 ml tube to remove drops from the inside of the lid. 9. Carefully transfer the entire lysate from step 8 into the QIAamp MinElute ? column
without wetting the rim. Close the lid, and centrifuge at 6000 x g (8000 rpm) for 1 min. Place the QIAamp MinElute column in a clean 2 ml collection tube, and discard the collection tube containing the flow-through.
If the lysate has not completely passed through the membrane after centrifugation,
centrifuge again at a higher speed until the QIAamp MinElute column is empty. 10. Carefully open the QIAamp MinElute column and add 500 μl Buffer AW1 without
wetting the rim. Close the lid and centrifuge at 6000 x g (8000 rpm) for 1 min. Place the QIAamp MinElute column in a clean 2 ml collection tube, and discard the collection tube containing the flow-through.
11. Carefully open the QIAamp MinElute column and add 500 μl Buffer AW2 without
wetting the rim. Close the lid and centrifuge at 6000 x g (8000 rpm) for 1 min. Place the QIAamp MinElute column in a clean 2 ml collection tube, and discard the collection tube containing the flow-through.
Contact between the QIAamp MinElute column and the flow-through should be avoided.
Some centrifuge rotors may vibrate upon deceleration, resulting in the flow-through, which contains ethanol, coming into contact with the QIAamp MinElute column. Careless removal of the QIAamp MinElute column and collection tube from the rotor may also cause
flow-through to come into contact with the QIAamp MinElute column.
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12. Centrifuge at full speed (20,000 x g ; 14,000 rpm) for 3 min to dry the membrane
completely.
This step is necessary, since ethanol carryover into the eluate may cause problems in some
downstream applications.
13. Place the QIAamp MinElute column in a clean 1.5 ml microcentrifuge tube (not
provided) and discard the collection tube containing flow-through. Carefully open the lid of the QIAamp MinElute column and apply 20–100 μl Buffer AE or distilled water to the center of the membrane.
If high pH or EDTA may affect sensitive downstream applications, use water for elution (see
the QIAamp DNA Micro Handbook ).
Important : Ensure that the elution solution is equilibrated to room temperature (15–25oC). If
using small elution volumes (<50 μl), dispense the elution solution onto the center of the membrane to ensure complete elution of bound DNA.
QIAamp MinElute columns provide flexibility in the choice of elution volume. Choose a
volume according to the requirements of the downstream application. Remember that the volume of eluate will be up to 5 μl less than the volume of elution solution applied to the column. 14. Close the lid and incubate at room temperature (15–25oC) for 1 min. Centrifuge at full
speed (20,000 x g ; 14,000 rpm) for 1 min.
Incubating the QIAamp MinElute column loaded with Buffer AE or water for 5 min at room
temperature before centrifugation generally increases DNA yield.
For up-to-date licensing information and product-specific disclaimers, see the respective QIAGEN kit handbook or user manual. QIAGEN kit handbooks and user manuals are available at https://www.doczj.com/doc/d82664276.html, or can be requested from QIAGEN Technical Services or your local distributor.
QIAGEN handbooks can be requested from QIAGEN Technical Service or your local QIAGEN distributor. Selected handbooks can be downloaded from https://www.doczj.com/doc/d82664276.html,/literature/handbooks/default.aspx. Material safety data sheets (MSDS) for any QIAGEN product can be downloaded from https://www.doczj.com/doc/d82664276.html,/ts/msds.asp.
Trademarks: QIAGEN ?, QIAamp ?, MinElute ? (QIAGEN Group).
QA43 ? 2007–2010 QIAGEN, all rights reserved.
组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型） 储存条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。 注意事项 1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。 操作步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1. 处理材料 用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织，体积约两个绿豆大小，放入DNAase-free的1.5ml EP中。向EP管中加入等体积的磁珠，以及加入200 μl缓冲液GA，振荡悬浮。置于组织破碎仪中运行5mins/次，共3次。每破碎一次，需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠，使其在下次破碎时更好的接触。可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数，目标是“碾磨均匀”，不能有较大体积的组织块（>2mm的组织块）。 如果需要去除RNA，需加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。 2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置1~3 h，直至组织溶解，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。将上清转移至新的EP管中。 3. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 4. 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。 6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 8. 重复操作步骤7。
中量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号：DN03 目录编号包装单位 DN0301 20次×3ml DN0302 50次×3ml 适用范围： 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存20次×3ml 50次×3ml 10×红细胞裂解液室温20 ml 45ml 细胞核裂解液室温60 ml 150 ml 蛋白沉淀液室温20 ml 50 ml DNA溶解液室温10 ml 20 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA, 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点： 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定，产量高（典型的产量3ml全血可提取出50-150μg），OD260/OD280典 型的比值达 1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳15ml离 心管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。 3.典型的产量3ml全血可提取出75-150μg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中中 白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。 4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量
大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号：DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围： 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点： 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500μg），OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。 4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 （20μl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
组织基因组DNA提取试剂盒（磁珠法） 使用说明书（Cat#Yu-TD02-1） 【产品介绍】 组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系，能从样品中分离纯化高质量DNA。在一定条件下，磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、无毒、便利，提取的DNA质量稳定、纯度高。纯化后的DNA适用于多种后续实验。本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高：DNA提取得率高，操作简便。 2. 安全、无毒害：整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质，提取环境更加安全。 3. 高纯度：OD260/230在1.5左右，OD260/280在2.0左右。可直接用于各种分子生物学实验。 【试剂盒组成】 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液和Buffer AW1必须室温（15-25℃）避光保存；磁珠室温保存；其他所有试剂室温保存，有效期为1年。 【注意事项】
1、Buffer AW1使用前，加入18mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前，加入21mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为70%。★ 3、磁珠使用前必须充分混匀。★ 4、组织最好置于组织核酸（DNA/RNA）保存液（Cat#Yu-TP01）或液氮中保存。【操作步骤】 1、样本的处理 1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后，使液氮充分挥发。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液，充分研磨。以下进入步骤2。 1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织，加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液，充分研磨。以下进入步骤2。 2、吸取400μL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中，加入5μL蛋白酶K，60℃1500rpm10分钟。 3、取出EP管，加入250μL异丙醇和10μL混匀的磁珠，闭盖，充分混匀。室温1500rpm振荡10min。 4、取出EP管，瞬时离心，将EP管放于磁力架上，吸附磁珠4分钟。 5、在磁力架上，打开EP管盖，吸弃液体，保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1，闭盖。从磁力架上取下EP管，充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注：可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒，使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架，吸附磁珠3分钟至液体清澈（吸附磁珠2分钟后，颠倒磁力架3次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收）。打开EP管盖子，吸弃液体，保留磁珠（需吸干EP管底和管盖中的残留液体）。 注：由于各个实验室磁力架磁力不尽相同，吸附时间可以延长，直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2，闭盖。从磁力架上取下EP管，充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注：可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒，使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。
DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号：DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍： DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂，简单高效，结果可靠，可快速提取基因组DNA，适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA，经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟，DNA 回收率可达70-100％，得到的DNA 不需再纯化，可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存： 室温保存至少一年。 注意事项： DNAzol 有毒害性，应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 1.裂解，匀浆 a.组织：25-50mg 组织加1ml DNAzol ，使用匀浆仪处理5-10 次。少量 （5-10mg）柔软组织，如脾或脑组织，可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打
混匀，室温放置5-10 分钟。 b.细胞：单层培养的细胞应直接裂解，倒出培养基，加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液：每1-3×107细胞（体积小于0.1ml）加1ml DNAzol，反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打，以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃，10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品，如肝、肌肉和大部分植物组织等，或要提取不含RNA 的DNA 时，可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇，颠倒离心管5-8 次，混匀样品至出现DNA 沉淀，室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀，让沉淀自然沉降到管底，尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上，仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug)，无法缠绕到枪头上，可在4 -25℃，4000g 离心1-2分钟沉淀DNA，弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75％乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时，将DNA 悬浮在乙醇中，颠倒离心管3-6 次，然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底，尽可能吸弃上清。 如果需要，可在4 -25℃，1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时，如需去除其他内含物，第一次漂洗可用70％DNAzol 和30％乙醇的溶液代替75％乙醇。
植物基因组D N A提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒 1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。 2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。 注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。 4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。 5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。） 6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 8 重复操作步骤7。 9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂
洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。 10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μL，体积过小影响回收率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm （~13,400×g）离心2 min。
通用基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号：D2100 规格：50T/100T 保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。开封后请将RNase A，蛋白酶K于-20℃保存。 试剂盒内容：D2100-50T D2100-100T RNase A1ml1ml×2 蛋白酶K1ml1ml×2 溶液A25ml50ml 溶液B25ml50ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液15ml30ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 说明书1份1份 产品简介: 本试剂盒为通用型，适合于从土壤，粪便，昆虫，以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌，真菌，昆虫等样本都具有很好的裂解效果，最大限度的保留了生物DNA的多态性。 使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤： 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、样品的处理： 1）土壤：称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤，放入研钵中，倒入适量的液氮，立即研磨，重复3次，使土壤颗粒研成粉末，加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。 2）粪便：称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便，加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。 3）昆虫：称取0.1-0.3g昆虫，倒入适量的液氮，立即研磨，重复3次，使昆虫研成粉末，加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。 4）未知样品，如为细未状，可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul 溶液A，如为块状，可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未，再加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。 2、向悬浮液中加入20ul10mg/ml的RNase A，55℃放置10min。 3、加入20ul10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化，30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次，12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。 4、加入500ul溶液B，充分混匀。如出现白色沉淀，于55℃放置5min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤 缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热） 缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%） 1.研磨前擦拭工作台。 2.研钵里加入液氮，预冷。研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。液氮预冷离心管后 加入材料，加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。 3.加入440l缓冲液AP1（必须为预热好的），。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。 4.加4lRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。 5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。 6.加入130l缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。 7.14000rpm/min离心5min. 8.仔细缓慢将上层液体（500l）置于QIAshredder Mini Spin Colum（柱）中（紫色）。 14000rpm/min离心2min. 9.将上步中的滤液（450l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中， 注意别吸到管底细胞碎片小球。 10.在溶解清液中仔细缓慢加入倍体积（675l）的缓冲液AP3/E。一定要仔细，慢慢抽 吸至两者充分混匀。 11.将上步中650l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum（柱）中（白色）， 其余的混合液留着，用于再次抽提。8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。 12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum（柱）中，8000rpm/min（一 般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。 13.将Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔 着塑封袋捏出离心管）。加入500l缓冲液AW，放置3-5min，8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min,丢弃废液，收集管再用一次。 14.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l缓冲液AW，放置3-5min，14000rpm/min 离心3Min,丢弃废液, 收集管再用一次。 15.Dneasy Mini Spin Colum（柱）中加入500l无水乙醇，放置3-5min，14000rpm/min离 心3Min,丢弃废液和收集管 16.在Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置或2ml离心管（自己准备的Axygen离心管）,吸取 100l灭菌的去离子水（必须为预热的）加到Dneasy膜上。65摄氏度水浴5min。 8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1min洗提DNA。
1.加2g土壤到15mL Bead Tube中 2.加入0.25mLSR1和0.8mLSR2之后，加入2.5mL Bead Solution到Bead Tube 3.加入3.5mL酚：氯仿：异戊醇25:24:1到试管中，加盖后涡旋混合直到分层消失。 4.最大转速涡旋震荡15min 5.室温，2500g离心10min 6.取出后，小心地转移上层水相到干净的15mL收集管中，弃掉下层酚 7.加1.5mL SR3到水相中，然后涡旋混匀，4℃孵育10min 8.室温，2500g离心10min。转移上清到一个新的15mL收集管中 9.加入5mL SR4溶液到装有上清的收集管中，混匀，室温孵育30min 10.室温，2500g离心30min 11.倒掉上清，将收集管倒置在纸上5min 12.震荡SR5混合。加1mL SR5到15mL收集管中，并反复吹打使完全重悬。 13.为每一个RNA样品准备一个RNA Capture Column A．拿去15mL收集管的盖子，将RNA Capture Column放入15mL收集管中。 B．加2mL SR5到RNA Capture Column中，让其完全流尽。 14.从第12步加入RNA样品至RNA Capture Column中，然后让其在重力作用下流尽。收集 液体。 15.用1mLSR5清洗柱子。重力流尽，收集洗脱液。 16.转移柱子到新的收集管，加入SR6震荡混合，然后加入1mL SR6到RNA Capture Column 洗脱RNA到15mL收集管中，重力流尽。 17.转移洗脱的RNA到2.2mL收集管中，并且加入1mL SR4.颠倒至少一次混合，然后-20℃ 孵育最少10min 18.室温13000g离心15min浓缩RNA 19.倒掉上清并倒转收集管在纸上10min晾干 20.用100μL SR7溶液重悬RNA沉淀，去除其中的基因组
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1. 处理材料 a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足； 注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。 b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤； c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮； d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮； 注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。 2. 加入20ul Proteinase K，混匀。 a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。 b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。 d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。 注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。 3. 加入200ul缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，肯能导致提取DNA 量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200ul且没有采用红细胞裂解处理，
注意：1.准备好70℃水浴锅。 2.所有的离心操作都在室温下（15-25℃），14000转/分钟 3.用BufferAL和InhibitEXBuffer溶解任何沉淀都要加热和混匀。 4.Buffer AW1和Buffer AW2都加乙醇。 5.使用之前混合所有缓冲液。 1.称取200ul样品在2ml的离心管中，离心管放在冰上。 2.每个样品添加1mlInhibitEXBuffer，然后持续旋涡混合1min或者直到样品混 合均匀。 3.在70℃加热悬浮液5min（难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃），然后 旋涡混合15s。 4.离心样品1min析出沉淀。 5.另取1.5ml离心管加15ulProteinaseK。 6.移取200ul步骤4的上清液至1.5ml含ProteinaseK的离心管中。 7.然后添加200ulBufferAL，旋涡混合15s。（注意：不要直接添加ProteinaseK 到BufferAL中，样品和BufferAL必须充分混合成均匀混合液） 8.70℃孵育10min。 9.添加200ul乙醇到溶解液中，旋涡混合。 10.小心移取600ul步骤9的裂解液到QIAamp旋转柱中，盖上盖子，离心1min。 把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中，丢掉含有滤液的管。11.小心打开QIAamp旋转柱，添加500ulBufferAW1，离心1min。把QIAamp旋 转柱放到一个新的2ml收集管中，丢掉包含滤液的收集管。 12.小心打开QIAamp旋转柱，添加500ulBufferAW2，离心3min，丢掉包含滤 液的收集管。 13.把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中，丢掉旧的含有滤液的收集 管，离心3min。 14.把QIAamp旋转柱放到一个新的1.5ml的离心管,直接移取200ulBufferATE 到QIAamp薄膜上。室温孵育1min，然后离心1min洗提DNA。通过UV吸收度判断DNA纯度，使用BufferATE做空白设计避免结果错误。
粪便基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号：D2700 规格：50T/100T 保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复-检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。 试剂盒内容：D2700-50T D2700-100T 溶液SA25ml50ml 溶液SB3ml6ml 溶液SC5ml10ml 溶液SD10ml20ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液15ml30ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 说明书1份1份 注：试剂盒开封后溶液SA、SB、SC、SD需在2-8℃保存。 产品简介： 粪便基因组DNA提取试剂盒适合于从各种粪便中提取微生物DNA。对粪便中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多态性。 使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 操作步骤： 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称取粪便样本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入450ul溶液SA震荡混匀。 *也可直接称取样本0.1-0.5g于离心管(建议使用2ml圆底管)，加入450ul溶液SA剧烈震荡混匀1-2min至没有固体块。使用液氮研磨效果最佳。 2、加入50ul溶液SB充分颠倒混匀（不要剧烈震荡），65℃水浴6min，每2min充分颠倒混匀一次。 3、加入100ul溶液SC充分颠倒混匀（不要剧烈震荡），12000rpm离心10min。 4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min。 5、在吸附柱中加入200ul溶液SD，将离心后的上清加入到带有溶液SD的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心1min。 6、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱(必须)，12000rpm离心1min。 7、倒掉收集管中的废液，在吸附柱中加入漂洗液500ul，12000rpm离心1min。 8、倒掉收集管中的废液，重复步骤7两次(共漂洗三次)。 9、倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2min。 10、拿出吸附柱在室温干燥数分钟(因季节及气候等因素不等)，或50℃干燥1min。 11、将吸附柱放入一个新的离心管中，加入50-100ul洗脱液(65℃预热)，12000rpm离心1min。 12、将离心管中的液体重新加入到吸附柱中，12000rpm离心1min。离心管中即为粪便微生物DNA溶液。 注意事项: 1、新鲜的粪便样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。 2、若溶液中出现浑浊可在37℃水浴中溶解片刻至清澈，不会影响结果。 3、在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
磁珠法动物组织基因组DNA提取试剂盒 MagBeads Tissues Gen DNA Extraction Kit 【目录号】TGDE-5005、TGDE-5030 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃，其它组分室温保存； 【试剂盒组成】 【注意事项】 1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，使用前请充分混匀； 2. 使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现结晶，如有结晶请置于65℃水浴重新溶解； 3. 在使用本试剂盒前，请用户自配80%乙醇； 4. 如需去除RNA请自备RNase A溶液（100mg/mL, 分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0）； 5. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。
磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 【产品简介】 本产品适用于从各种动物组织以或者细胞样本中提取基因组DNA。试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和独特的缓冲液系统。特殊技术包埋的纳米磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力，而当条件改变时可以释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。 本试剂盒提取所得基因组DNA产物得量高、纯度好，适用于各种下游分子生物学实验，如：酶切、PCR、QPCR、文库构建、Southern 杂交、芯片检测和高通量测序等。本试剂盒可配合核自动化酸提取仪或工作站使用，实现高通量操作。 【试剂盒说明】 【自备仪器、耗材及试剂】 仪器自动版 研钵（或组织研磨机、匀浆机）、英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、80%乙醇、异丙醇、液氮。 手动版 研钵（或组织研磨机、匀浆机）、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、80%乙醇、异丙醇、2.0mL离心管、离心管配套用磁力架、液氮。 【仪器自动版操作步骤】 本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。 1．准备96孔板 参照下表向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：
土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号：D2600 规格：50T/100T 保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。 试剂盒内容：D2600-50T D2600-100T 溶液A25ml50ml 溶液B3ml6ml 溶液C5ml10ml 溶液D10ml20ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液10ml20ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 PCR增强剂500ul1ml 说明书1份1份 注：试剂盒开封后溶液A、B、C、D需在2-8℃保存。PCR增强剂-20℃保存。 产品简介: 本试剂盒适合于从褐土、淤泥、火山灰等各种极端土壤环境中提取微生物DNA。对土壤中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生
物DNA的多态性。 本试剂盒采用我公司特有的腐殖质吸附材料，可高效专一的去除各种腐殖质成分而丝毫不会影响DNA的产率，纯度较酚、氯仿抽提法提高数倍。使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 操作步骤： 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、称取土壤样本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入450ul溶液A震荡混匀。 *也可直接称取样本0.1-0.5g于离心管(建议使用2ml圆底管)，加入450ul溶液A剧烈震荡混匀1-2min至没有固体块。使用液氮研磨效果最佳。 2、加入50ul溶液B充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，65℃水浴6min，每2min充分颠倒混匀一次。 3、加入100ul溶液C充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，12000rpm离心10min。 4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min。 5、在吸附柱中加入200ul溶液D，将离心后的上清加入到带有溶液D 的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心1min。 6、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱(必须)，12000rpm离心1min。
一、试剂盒打开后需要准备的工作 1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解 ①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解 ②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l～200ul ③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配 加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配 加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 二、组织DNA提取（试剂盒） 1、组织样品处理与消化 ①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。 ②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3个小时使其充分消化。 2、DNA提取 ①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴锅中10分钟。 ②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液 ④加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次） ⑤在70℃预热Elution Buffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入Elution Buffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。 三、细胞DNA的提取（试剂盒） 1、组织样品处理与消化 ①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清 ②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液 ③加200ul Binding Buffer，40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10 分钟。 2、DNA提取 ①加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ②倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液 ③加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次） ④预热双蒸水（37℃）然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入双蒸水 100ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。（注：最好溶解两次）。 四、分光密度仪的操作方法及样品的测试结果 1、光密度（optical delnsity）简称OD 2、操作示意图 电源开关→主界面→按1键→核酸dsDNA 3、检测 ①首先做一个空白对照，将1ul的水滴到镜头上盖上盖子，按一下蓝色键
磁珠法游离DNA 提取试剂盒(血清/血浆/脊髓液/淋巴液/尿液) 操作步骤 1. 裂解结合：在血清、血浆、脊髓液、淋巴液、尿液、无细胞体液等生物样品中(eg.100 μL)加入5倍体积BufferPGL(eg.500 μL)，室温放置5-10min，再加入5倍体积的异丙醇(eg.500 μL)和30ul磁珠悬浮液(MB) （使用前充分重悬），颠倒混匀，室温放置5 min（期间不时颠倒混匀）；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。 3. 漂洗: (1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer PGW 0,涡旋振荡5s，重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤1次。 (2)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer PGW I,涡旋振荡5s，重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃尽，不然残留会影响下游实验），晾干2min。 4.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-100 μl Buffer EB ，涡旋振荡结合移液器吹打，充分吹散磁珠（一定要完全吹散磁珠，若未充分重悬会影响DNA得率），56°C放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20 °C保存备用，保质期为2 年。 操作步骤1. 裂解结合：在血清、血浆、脊髓液、淋巴液、尿液、无细胞体液等生物样品中(eg.100 μL)加入5倍体积BufferPGL(eg.500 μL)，室温放置5-10min，再加入5倍体积的异丙醇(eg.500 μL)和30ul磁珠悬浮液(MB) （使用前
细菌基因组DNA提取试剂盒（溶液法） (Bacteria Genomic DNA Preparation Kit，solution‐based method） PBZ0207‐3 50次 280.00 PBZ0207‐4 100次 500.00 简介 本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。该试剂盒提供的方法简单 易行，无需过柱和酚仿抽提。简单离心操作便可完成。所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高 和稳定性好等特点。可以满足PCR、酶切等分子生物学实验需要。 试剂盒组成<50次> 溶菌酶缓冲液ELB 11 ml 裂解液GDL 33ml 蛋白沉淀剂PPR 12ml RNase A 300μl 缓冲液TE 15ml 需自备的试剂 异丙醇，70％乙醇，溶菌酶 试剂盒保存条件及有效期 试剂盒保存在室温（15‐30℃）。试剂如出现混浊或结晶，可以将试剂瓶置于55℃水浴加热，溶液变 清亮后再使用。本试剂盒有效期为12个月。RNase A请置于‐20℃可保存更长时间。 操作步骤 所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。 1.取1ml的细菌培养液（最多提取的细菌数量为2×109个），12,000rpm离心1分钟，弃上清，留细菌沉 淀备用。 2.提取的细菌为革兰氏阴性菌，直接向菌体沉淀中加入600μl裂解液GDL。用吸头吹打几下，充分混匀。 然后进入步骤4。 3.3a. 提取的细菌为革兰氏阳性菌，必须要进行溶菌酶破壁处理（如不确定为何种菌属，请按处理革兰 氏阳性菌的方法进行）。 具体操作如下：称取10mg溶菌酶，置于1.5ml离心管中，取1ml溶菌酶缓冲液ELB，反复吹打几次将溶菌酶完全溶解，配制成溶菌酶裂解液。向细菌沉淀中加入200μl溶菌酶裂解液（未用完的溶菌酶裂解液可保存于‐20℃，以备下次使用），吹打重悬细菌沉淀。37℃破壁处理30分钟以上，一些较难处理的细菌可以延长处理时间。破壁处理完成后便可以将水浴温度调至70℃备用。 (溶葡萄球菌素对葡萄球菌株破壁非常有效，单是溶菌酶一般不是很好。溶菌酶对其它革兰氏阳性菌株非常有效。多数情况下，建议首先使用溶菌酶处理，可大大节省费用) 3b. 12,000rpm离心1分钟，弃上清，向菌体沉淀中加入600μl裂解液GDL。用吸头吹打几下，充分混匀。 然后进入步骤4。 4.在70℃水浴裂解15-30分钟，期间可以温和颠倒离心管数次以加速裂解。 5.离心数秒去除管壁上的水珠，加入5μl RNase A，充分混匀，置于37℃保温15-60分钟。 6.加入200μl溶液沉淀液PPR，充分振荡混匀，冰水浴5 ‐10分钟， 此时可见大量白色沉淀，15,000rpm离 心5分钟。 7.用宽口吸头转移转移上清600μl到一个已经装有600μl异丙醇的1.5ml离心管中。 8.颠倒离心管缓慢混合数次，室温放置5分钟，一般会看到有丝状DNA出现。
试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次100次200次 酵母裂解液室温15 ml 30 ml 60 ml 蛋白沉淀液室温 5 ml 10 ml 20 ml DNA溶解液室温 5 ml 5 ml 10 ml 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时酵母裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃ 水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下，酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。 产品特点： 1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。 2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值 达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 1.吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml离心管；12,000rpm离心2分钟，尽可能弃 上清，必要时候可以用枪吸去。 2.高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。 3.加入300μl酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1毫升的枪头反复吹打混匀。 酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。 4.将裂解物放置在70℃水浴15-30分钟。 如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。 5.冰上至少5分钟使回复到室温。 6.在回复到室温的裂解物内加入100μl蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振 荡混匀20秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5分钟。 7.13,000rpm离心5-10分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀，也可能见到一些蛋 白沉淀漂浮在液体表面。 8.小心缓慢吸取上清到一个新的1.5ml离心管中，不要吸到沉淀。 吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。 9.加入等体积的室温异丙醇（约400μl），颠倒30次混匀或者直到出现絮状DNA沉 淀（或者白色浑浊沉淀）。