题型：
名词解释
分析题
简答题
问答题
Genes perform three major roles:
1.Replicated faithfully
Chapter 2 DNA Replication：Mechanism and Enzymology
（1）掌握DNA和RNA在结构上和功能上的异同，并能够解释为什么DNA分子上需要用T代替U以及用脱氧核糖代替核糖。
（2）掌握DNA双螺旋结构的主要内容、支持DNA双螺旋结构的主要实验证据及其生物学意义；了解大沟对于DNA与蛋白质相互作用的重要性。（3）掌握A型、B型和Z型双螺旋结构之间的异同以及形成A型和Z型双螺旋所需要的条件。
（4）能够画出AT、AU和GC碱基对之间的氢键。
（5）掌握DNA的正超螺旋和负超螺旋形成的原因；能够使用L＝T+W预测DNA 过度缠绕或缠绕不足的后果；知道何种超螺旋有利于DNA复制和转录。（6）了解DNA的变性、复性及其杂交等性质；知道能够影响DNA变性和复性的各种因素。
（7）了解影响DNA的Tm的各种因素。
（8）掌握DNA复制的一般性质，包括半保留复制、具有固定的起点、需要引物、模板需要解链、复制方向总是从5'→3'、半不连续复制、通常是双向复制和具有高度的忠实性等。
（9）了解由Stahl和Meselson设计的证明DNA进行半保留复制的实验思路和具体过程；掌握如何证明DNA复制的方向总是从5'→3'以及如何确定一个DNA分子进行双向复制还是单向复制的方法及原理；了解脉冲标记和脉冲追踪实验的原理以及如何用它们证明DNA复制的半不连续性。
（10）了解以大肠杆菌为代表的五种原核细胞DNA聚合酶(DNA聚合酶工、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和V)的结构及其功能分工；知道DNA聚合酶Ⅲ是催化大肠杆菌染色体DNA复制的主要聚合酶以及支持这种说法的证据。
（11）了解DNA聚合酶工所具有的5'-外切核酸酶(简称外切酶)活性和绝大多数DNA聚合酶所具有的3'一外切酶活性的生理意义；了解DNA聚合酶(Klenow 酶)的三维结构与其功能之间的关系；掌握DNA聚合酶如何在聚合酶活性和校对活性之间进行切换。
（12）了解真核细胞五种主要的DNA聚合酶(DNA聚合酶αβγδ和ξ)的结构及其功能分工，以及新近发现的一些易错的DNA聚合酶(如DNA聚合酶δεζ)在DNA跨损伤合成中的作用；知道DNA聚合酶α、δ和ε是催化真核细胞染色体DNA复制的主要聚合酶；了解DNA聚合酶Ⅲ和DNA聚合酶δ所具有的高进行性的原因。
（13）掌握DNA聚合酶以外的其他蛋白质或酶(DNA解链酶、单链结合蛋白、引发酶、DNA拓扑异构酶、DNA连接酶、端粒酶等)在DNA复制中的作用。（14）了解原核系统复制子和真核系统复制子的类型及其异同；了解复制起始区和双向复制之间的关系；知道每一个双向复制的复制泡具有两个复制叉，每一个复制叉含有一个前导链和一个后随链。
（15）了解大肠杆菌DNA复制四个阶段的反应；了解大肠杆菌染色体DNA复制的详细机制，并能够利用双聚合酶(二聚体)模型解释一个复制叉内的前导链和后随链如何同时进行复制；能够利用招募解释在复制起始区如何形成预引发体的结构。
（16）了解terE、D、A和terC、B是如何一起终止大肠杆菌DNA复制的。（17）了解Dam甲基化酶在大肠杆菌DNA复制中的作用。
（18）了解真核DNA复制系统与原核复制系统的主要差别；了解SV40体外复制系统大概的复制过程以及T抗原，RFC(复制因子C)，RPA(复制蛋白A)，FEN —1(翼式核酸酶)，增殖细胞核抗原(PCNA)，DNA，聚合酶αδ和ε等在复制中所起的作用。
（19）了解自主复制序列（ARS）的结构以及ARS、起始点识别复合物（ORC）、执照因子（licensing fac-tor）、Cdc6和MCM(微小染色体维持蛋白)复合物之间
的关系。
（20）了解克服线性DNA未端复制问题的四种方法，特别是端粒酶在克服真细胞染色体DNA未端复制问题中所起的作用。
（21）了解滚环复制和D环复制的基本过程及其功能。
（22）了解实现DNA复制的高度忠实性的五种机制并能解释DNA复制为什么需要RNA引物以及DNA复制方向为什么总是从5'→3'。
2.Accumulate mutations thereby allowing evolution
Chapter 3 DNA Damage and repair
Chapter 4 Transposition
（1）掌握DNA重组的定义、类型及其生物学功能。
（2）能够区分解释同源重组的Holliday模型、单链断裂模型和双链断裂模型。（3）了解RecA蛋白、RecBCD蛋白、RuvABC蛋白的结构和功能以及它们在大肠杆菌RecBCD同源重组途芦中的作用。
（4）掌握位点特异性重组与同源重组的差别。
（5）了解attP位点、attB位点、整合酶和整合宿主因子(1HF)在入噬菌体在：进行位点特异性重组过程中的作用；了解整合酶与DNA拓扑异构酶工之间的异伺点。
（6）掌握转座重组的类型及其功能；认识以下几种常见的真核生物‘的转座子：Ac—Ds元件、户元件、Ty元件、Copia元件、SINE和LINE；能够区分逆转座：子与DNA转座子、自主型转座子与非自主型转座子与逆转录病毒之间的关系。
（7）掌握以下名词的定义或含义：嘧啶二聚体、直接修复、碱基切除修复(baseexcision此pa汀，BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excisionrepair；，NER)、错配修复、跨损伤合成(translesionDNA synthesis TLS)SOS修复、转录偶联修复(TCR)、易错修复二无嘌呤嘧啶(AP)位点、类变子(mutator)。
（8）了解导致DNA损伤的主要理化因素以及常见的DNA损伤。
（9）知道DNA是细胞内唯一一种受到损伤以后可以完全被修复的分子；了解DNA损伤能够完全被修复与DNA双螺旋结构之间的关系。
（10）了解DNA损伤修复的几种主要机制以及大致的修复过程；能够区分直接修复和切除修复以及易错修复；能够区分碱基切除修复与核苷酸切除修复、全局性核苷酸；切除修复和转录偶联核苷酸切除修复、短修补合成与长修补合成；了解切除修复四个；阶段的反应。··
（11）掌握大肠杆菌在错配修复中识别子链和母链的分子机制；能够预痢Dam 甲基化酶的缺陷对错配修复的影响。
（12）30、了解一些与修复缺陷有关的遗传性疾病(如着色-J隆干皮病)。（13）了解以下名词的定义或含义：点突变、移码突变、转换(transition)、颠换(订ansvefsion)、无义突变(nOnsensemutation)、错义突变(missensemutation)、沉默突变(silentmutation)、自发突变、诱发突变、突变原、回复突变、校正突变(suppressormutation)。
（14）掌握修复缺陷与突变之间的关系；了解突变的各种因素以及各种突变原叛‘变的分子机制。
（15）区分显性突变和隐性突变、基因内校正和基因间校正。
（16）了解IS如何导致靶点序列重复的；能够区分插入序列、复杂性转座子和复合型攻座子。
3.Direct the production of RNAs and proteins
Chapter 5 Transcription
（1）掌握DNA转录与DNA复制之间的异同。
（2）知道写出的启动子序列和一个基因的序列都是来自这个基因在DNA上的编码链。
（3）了解DNA聚合酶与RNA聚合酶之间的异同；·掌握以大肠杆菌为代表的原核细胞RNA聚合酶全酶的结构以及各亚基在功能上的分工；了解利福霉素和利链霉素对原核生物RNA聚合酶的抑制。
（4）了解ζ因子的结合如何影响原核细胞RNA聚合酶与启动子之间的亲和性。
（5）了解原核生物启动子的一致序列以及一10区与-35区之间的间隔距离对启动子本身的重要性。
（6）了解强启动子和弱启动子之间的差别；能够预测启动子发生的突变对转
录效率的影响力
（7）了解封闭的转录起始复合物和开放的转录起始复合物之间的差别。（8）了解转录过程中超螺旋的形成以及DNA拓扑异构酶工的作用。
（9）了解原核生物可以通过使用不同的ζ因子来控制不同类型基因的表达。（10）了解终止子是如何终止转录的以及原核细胞依赖于ρ卢因子和不依赖于ρ因子的两种终止机制的差别。
（11）掌握以下名词的含义；转录因子、介导子（mediator）、顺式作用元件，反式作用因子、增强子、增强体(enhanceosome)、羧基端结构域（carboxyl terminal domain,CTD）、核心启动（core promoter）、上游启体（upstream promoter element,uUPE）、起始子（initiator ,Inr）TATA框（TATA box）、下游启动子元件（downstream promoter element，DPE)、定位因子（positioning factor）、CAAT框、GC框、绝缘子(insulator)、CpG岛(CpGisland)。
（12）了解原核转录系统和真核转录系统的主要差别。
（13）了解转录因子在真核转录系统中的功能；能够区分基础转录因子和特异性转录因子，起始转录因子和延伸转录因子。
（14）掌握真核细胞核三种RNA聚合酶在细胞内的定位及其在功能上的分工；
知道如何利用α-鹅膏蕈碱来区分这三种RNA聚合酶以及如何确定一个基因的转录究竟由哪一种酶催化转录。
（15）了解真核生物和原核生物在RNA聚合酶的组成上的差别以及在三维结构上的相似之处；了解真核生物RNA聚合酶Ⅱ的CTD的结构特征以及它的重要性。
（16）了解RNA聚合酶I所负责转录的基因的启动子的特征；了解选择因子1(SL1)的功能以及它和TATA结合蛋白质(TBP)定位因子之间的关系。
（17）了解RNA聚合酶Ⅲ所负责转录的基因的启动子的特征；了解TFⅢB和TF ⅢC在RNA聚合酶Ⅲ转录中的功能。
（18）了解真核细胞第二类基因的启动子的特征；了解TFⅡD、TFⅢH和TFⅡS 在转录中的功能以及TFⅡH在DNA修复中的作用；了解招募是如何导致转录起始复合体形成的
（19）掌握启动子与增强子之间的主要差别；了解增强子、转录因子、介导子、
基础转录复合物和启动子之间的关系；能够区分顺式作用元件和反式作用因子。
Chapter 6 RNA Process
（1）掌握真核生物mRNA前体后加工的主要方式(加帽、加尾、剪接、内部甲基化和编辑)及其功能。
（2）掌握RNA聚合酶Ⅱ的CTD的磷酸化在mRNA后加工中所起的作用；能够解释为什么只有RNA嚎合酶Ⅱ催化的转录物才会发生加帽、加尾和依赖于snRNP的剪接。
（3）了解帽子结构的类型及其形成的大致过程；了解帽子结构的特殊连接方式及其功能。
（4）了解断裂基因发现的大致过程以及如何使用R环技术确定一个基因是不是断裂基因。
（5）了解5种snRNP(U1、U2、U4、U6和U5)和主要的剪接因子(ASF—SF2、U2A和SFl)在剪接中的作用；了解剪接体组装的基本步骤；了解在剪接过程中U6 snRNA、U4 snRNA和U2 snRNA之间的动态相互作用，以及控制分支点腺苷酸对5'—剪接点的亲核进攻和转酯反应以形成套索结构的机制。
（6）解剪接涉及的两步转酯反应是如何发生的。
（7）知道剪接能够控制mRNA从细胞核运输到细胞质。
（8）了解秀丽线虫和锥体虫内发生的反式剪接。
（9）够区分第一类、第二类和第三类内含子；知道某些第一类内含子和第二类内含子含有特殊的ORF，它们编码的蛋白质有助于内含子的扩散和“归巢”；
掌握鸟苷在第一类内含子剪接中所起的作用。
（10）了解几种常见的核酶的结构与功能。
（11）了解RNA聚合酶Ⅱ催化的基因转录的终止与转录物3’端后加工之间的关系。
（12）了解细胞核mRNA加尾反应所需要的主要加尾信号(AAUAAA和富含嘧啶核苷酸序列)以及各种剪切因子和多腺苷酸聚合酶在加尾反应中的功能；掌握多腺苷酸尾巴的功能以及选择性加尾对同一个基因编码多种蛋白质的贡献。
（13）了解编辑的不同方式、相关实例以及功能。
（14）掌握tRNA前体后加工的主要类型以及原核生物和真核生物在tRNA前体后加工形式和加工反应机制上的异同；了解核糖核酸酶P在化学组成上的特殊性及其在tRNA前体后加工中的作用。
（15）掌握rRNA前体后加工的主要类型以及原核生物和真核生物在rRNA前体后加工上的异同；了解snoRNA在真核生物rRNA前体后加工中所起的作用。
Chapter 7 Protein synthesis
（1）掌握翻译的主要特征，了解核糖体的结构与其主要的功能部位(P部位、A部位和E部位等)二了解原核生捞和真核生物在核糖体组成和大小上的差别。
（2）掌握原核生物mRNA和真核生物mRNA在一级结构上的差别。
（3）掌握氨酰-tRNA合成酶的反应机制和校对机制，能够区分两类氨酰-tRNA 合成酶在结构上和催化机制上的差异。
（4）掌握tRNA的个性含义以及如何确定一种tRNA个性的方法。
（5）了解什么是“摆动法则?及其生物学意义。
（6）了解破译遗传密码曾经使用过的几种方法。
（7）掌握遗传密码的主要特征，知道哪些密码子可以充当起始密码子、哪些是终止密码子。
（8）了解原核生物和真核生物参与翻译的起始因子、延伸因子和终止释放因子的结构与功能，了解哪些蛋白质因子属于小分子G蛋白。
（9）掌握原核生：物通过SD序列识别起始密码子的机制，能够在结构上和功能上区分tRNA f Me t和tRNA Met。
（10）了解原核生物在翻译起始阶段、延伸阶段和终止释放阶段发生的主要反应。
（11）掌握真核生物和原核生物在翻译上的主要差别。
（12）掌握真核生物识别起始密码子的“扫描”机制和“内部进入”机制。（13）了解真核生物：mRNA的帽子结构和多腺苷酸尾巴结构对翻译的重要性。（14）了解真核生物翻译起始、延伸和终止阶段的主要反应。
（15）了解转肽酶属于核酶的主要证据。
（16）了解几种翻译抑制剂：(曝呤霉素、氯霉素、四环素、红霉：素、百日咳毒素、放线菌酮、蓖麻毒素等)的作用机理，能够区分原核生物特异、真核生物特异性和既抑制原核生物又抑制真核生物的翻译抑制剂。
（17）掌握翻译后加工的主要形式及其功能。
Chapter 8 Post-translational events
（1）掌握“信号”主要内容，能够使用“信号”学说解释蛋白质是如何进入各种细胞器的；能够区分信号肽和信号斑。
（2）了解SRP的结构及其功能。
（3）区分共翻译和翻译后定向与分拣。
（4）了解真核细胞内由泛素介导的发生在蛋白酶体内的蛋白质的定向水解。Chapter 9 Prokaryotic expression regulation
（1）能够区分正调控和负调控、激活蛋白和阻遏蛋白。
（2）掌握原核生物和真核生物在基因表达调控机制上的异同；了解真核生物特有的基因表达调控手段。
（3）了解原核生物和真核生物在DNA水平上调控基因表达的可能方式。（4）掌握操纵子结构模型的主要内容及其作用方式。
（5）掌握大肠杆菌乳糖操纵子的结构及其所有成分(启动子、操纵基因、调节基因、阻遏蛋白、结构基物)以及运行机制；知道大肠杆菌乳糖操纵子的操纵基因的结构及其与启动子在空间上的关系。
（6）了解大肠杆菌乳糖操纵子的阻遏蛋白的结构(DNA结合结构域、诱导物结合结构域和寡聚化结构域)以及其阻遏乳糖操纵子基因表达的机制。
（7）能够正确预测各种突变(操纵基因、启动子或阻遏蛋白的突变)对乳糖操纵子三个结构基因表达的影响；了解一个操纵子的激活、阻遏以及去阻遏这三种状态之间的关系。
（8）能够区分大肠杆菌乳糖操纵子、阿拉伯糖操纵子、色氨酸操纵子的结构与功能。
（9）了解大肠杆菌乳糖操纵子为什么还需要正调控以及正调控的机制；了解
cAMP—CAP激活操纵子的机制。
（10）掌握弱化子模型的调控机制，能够解释为什么真核生物没有弱化子；能够区分终止子、弱化子和抗终止子。
（11）了解各种抗终止特别是抗终止蛋白的作用机制。
（12）了解反义RNA与基因表达之间的关系。
（13）掌握核糖体蛋白的自体调控机制。
（14）了解什么是严谨反应及其产生的原因。
（15）掌握什么是核开关及其控制基因表达的机制。
（16）了解双组分基因表达系统的作用机制。
Chapter10 Eukaryotic expression regulation
（1）掌握组蛋白的乙酰化和去乙酰化与染色质重塑及基因表达之间的关系（2）掌握真核生物DNA的CpG岛上的甲基化与DNA印记和基因表达之间的关系。
（3）掌握锥体虫VSG以及高等动物抗体或T细胞受体多样性产生的分子机制。
（4）了解各种反式作用因子与增强子、沉默子、激素反应元件（HRE）、金属反应元件（MRE）、血清反应元件(SRE)、cAMP反应元件(CRE)和热激元件(HSE)等顺式作用元件相互作用、调节基因表达的机制。
（5）掌握转录因子上与DNA结合的结构域(锌指结构、螺旋—转角—螺旋、螺旋—环—螺旋、碱性拉链)和调节基因表达结构域上的各种模体结构。（6）了解由同一个基因产生不同多肽的三种机制；了解选择性剪接、选择性加尾和编辑调节基因表达的机理及其重要性。
（7）了解RNAi的种类及其调节真核生物基因表达调控的机制；能够区分siRNA和miRNA并掌握它们是如何控制真核生物基因表达的及其生物学意义。
（8）了解在翻译水平上调控转铁蛋白受体和铁蛋白基因表达的机制。
（9）能够区分某些噬菌体的裂解周期和溶原周期之间的差别；了解入噬菌体三组在不同时间表达的基因是如何随着噬菌体生活周期的推进而依次表达的。
（10）了解果蝇发育过程中的组织特异性基因表达的调控机制，分清母体基因、分节基因和同源异形基因之间的等级关系及其在发育中的作用。4.Methods
（1）掌握核酸一级结构的表示方法以及其测定的主要手段和原理。
（2）掌握重组DNA的基本含义和主要步骤。
（3）了解克隆载体需要满足的条件。
（4）了解第二类限制性酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等工具酶的性质和在重组DNA技术中的应用；能够区分限制性酶中的同位酶、同裂酶、同尾酶。（5）了解将重组DNA导人到宿主细胞内的各种手段。
（6）掌握PCR方法的原理、基本操作步骤和在基因克隆中的应用；了解各种类型的PCR方法的原理及其用途。
（7）能够区分Southern印迹、Northern印迹以及Western印迹并掌握这几种印迹方法的原理和用途。
（8）知道什么是GFP以及为什么GFP是一个极为有用的报告基因，知道如何使用GFP标记一个细胞的内源蛋白。
（9）掌握反义RNA技术和干扰RNA技术的原理及其应用。
（10）掌握在体外和体内研究蛋白质与蛋白质相互作用，特别是酵母双杂交等几种方法的原理和应用。
分子生物学与基因工程复习重点 第一讲绪论 1、分子生物学与基因工程的含义 从狭义上讲，分子生物学主要是研究生物体主要遗传物质-基因或DNA的结构及其复制、转录、表达和调节控制等过程的科学。 基因工程是一项将生物的某个基因通过载体运送到另一种生物的活体细胞中，并使之无性繁殖和行使正常功能，从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。 2、分子生物学与基因工程的发展简史，特别是里程碑事件，要求掌握其必要的理由 上个世纪50年代，Watson和Crick提出了的DNA双螺旋模型； 60年代，法国科学家Jacob和Monod提出了的乳糖操纵子模型； 70年代，Berg首先发现了DNA连接酶，并构建了世界上第一个重组DNA分子； 80年代，Mullis发明了聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术； 90年代，开展了“人类基因组计划”和模式生物的基因组测序，分子生物学进入“基因组时代”； 目前，分子生物学进入了“后基因组时代”或“蛋白质组时代”。 3、分子生物学与基因工程的专业地位与作用：从专业基础课角度阐述对专业课程的支 撑作用 第二讲核酸概述 1、核酸的化学组成（图画说明） 2、核酸的种类与特点：DNA和RNA的区别 （1）DNA含的糖分子是脱氧核糖，RNA含的是核糖； （2）DNA含有的碱基是腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T），RNA含有的碱基前3个与DNA完全相同，只有最后一个胸腺嘧啶被尿嘧啶（U）所代替； （3）DNA通常是双链，而RNA主要为单链；
（4）DNA的分子链一般较长，而RNA分子链较短。 3、DNA作为遗传物质的直接和间接证据； 间接： （1）一种生物不同组织的细胞，不论年龄大小，功能如何，它的DNA含量是恒定的，而生殖细胞精子的DNA含量则刚好是体细胞的一半。多倍体生物细胞的DNA含量是按其染色体倍数性的增加而递增的，但细胞核里的蛋白质并没有相似的分布规律。 （2）DNA在代谢上较稳定。 （3）DNA是所有生物的染色体所共有的，而某些生物的染色体上则没有蛋白质。（4）DNA通常只存在于细胞核染色体上，但某些能自体复制的细胞器，如线粒体、叶绿体有其自己的DNA。 （5）在各类生物中能引起DNA结构改变的化学物质都可引起基因突变。 直接：肺炎链球菌试验、噬菌体侵染实验 4、DNA的变性与复性：两者的含义与特点及应用 变性：它是指当双螺旋DNA加热至生理温度以上（接近100oC）时，它就失去生理活性。这时DNA双股链间的氢键断裂，最后双股链完全分开并成为无规则线团的过程。简而言之，就是DNA从双链变成单链的过程。增色效应：它是指在DNA的变性过程中，它在260 nm的吸收值先是缓慢上升，到达某一温度后即骤然上升的效应。 复性：它是指热变性的DNA如缓慢冷却，已分开的互补链又可能重新缔合成双螺旋的过程。复性的速度与DNA的浓度有关，因为两互补序列间的配对决定于它们碰撞频率。DNA复性的应用-分子杂交：由DNA复性研究发展成的一种实验技术是分子杂交技术。杂交可发生在DNA和DNA或DNA与RNA间。 5、Tm的含义与影响因素 Tm的含义：是指吸收值增加的中点。 影响因素： 1）DNA序列中G + C的含量或比例含量越高，Tm值也越大（决定性因素）；2）溶液的离子强度 3）核酸分子的长度有关：核酸分子越长，Tm值越大
1. 定义重组DNA 技术将不同的DNA 片段按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 2. 说出分子生物学的主要研究内容 1. DNA 重组技术 2. 基因表达研究调控 3. 生物大分子的结构功能研究 4. 基因组、功能基因 组与生物信息学研究 3. 简述DNA 的一、二、三级结构 一级： 4 种核苷酸的连接及排列顺序，表示了该DNA 分子的化学成分 二级： 2 条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构 三级：DNA 双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定的空间结构 4. 原核生物DNA 具有哪些不同于真核生物DNA 的特征？ ①DNA双螺旋是由2条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成，多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条是5---3，另一条是3---5②DNA双螺旋中脱氧核糖和磷酸 交替连接，排在外侧构成基本骨架，碱基排在内侧③两条链上的碱基通过氢键相结合，形成碱基对 5. DNA 双螺旋结构模型是由谁提出的？沃森和克里克 6. DNA 以何种方式进行复制，如何保证DNA 复制的准确性？ 线性DNA 的双链复制：将线性复制子转变为环状或者多聚分子，在DNA 末端形成发卡式结构，使分子没有游离末端，在某种蛋白质的介入下在真正的末端上启动复制。环状DNA 复制：B型、滚环型、D型 ①以亲代DNA 分子为模板进行半保留复制，复制时严格按照碱基配对原则 ②DNA聚合酶I非主要聚合酶，可确保DNA合成的准确性
③DNA修复系统：错配修复、切除修复、重组修复、DNA直接修复、SOS系统 7. 简述原核生物DNA复制特点 只有一个复制起点，复制起始点上可以连续开始新的DNA复制，变现为虽只有一个复制单元，但可以有多个复制叉 8. 真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？ 细胞生活周期水平调控；染色体水平调控；复制子水平调控 9. 细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？ 错配修复，恢复错配；切除修复，切除突变的碱基和核苷酸片段；重组修复，复制后的修复；DNA直接修复，修复嘧啶二聚体；SOS系统，DNA的修复，导致变异 10?什么是转座子？分为哪些种类？ 是存在于染色体DNA上可自主复制和移动的基本单位。可分为插入序列和复合型转座子 11?什么是编码链？什么是模板链？ 与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链，另一条根据碱基互补配对原则指导mRNA 合成DNA链称为模板链 12. 简述RNA的种类及其生物学作用 mRNA :编码了一个或多个多肽链序列。 tRNA :把mRNA上的遗传信息变为多肽中的氨基酸信息。 rRNA :是核糖体中的主要成分。 hnRNA :由DNA 转录生成的原始转录产物。 snRNA :核小RNA，在前体mRNA 加工中，参与去除内含子。 snoRNA :核仁小RNA，主要参与rRNA及其它RNA的修饰、加工、成熟等过程。 scRNA :细胞质小RNA在蛋白质合成过程起作用。
常用分子生物学工具汇总 书目资料库管理系统 1、ReferenceManager v11.0 【说明】ReferenceManager是一个专门设计来管理书目参考文献的资料库程序。任何需要收集参考文献做研究之用或需要制作书目的人都可以使用Reference Manager更轻易地管理资料。Reference Manager受到全球学术机构以及商业、研究机构的研究人员、图书馆员和学生广泛地使用。 【功能】 a、快速地从草稿中准备格式化的内文引用文献和参考书目 b、建立并维护部门的研究资料库 c、追踪再版馆藏 d、为研究人员或图书馆赞助者管理新知通报服务 e、从不同的参考文献来源(如:联机、光碟、网际网络资料服务)收集参考文献 f、为学生建立指定阅读清单 g、建立教职员出版品清单 h、编目特殊馆藏 2、Endnote7.0
【说明】Endnote由ThomsonCorporation下属的Thomson ResearchSoft开发，是SCI的官方软件，具备直接连接上千个数据库、边书写论文边插入参考文献、管理数十万条参考文献等的功能。其所占系统资源容量小，基本不会发生因Endnote数据库过大而电脑死机的现象。 【功能】 a、在线搜索文献:直接从网络搜索相关文献并导入到Endnote的文献库内 b、建立文献库和图片库:收藏，管理和搜索个人文献和图片、表格 c、定制文稿:直接在Word中格式化引文和图形，利用文稿模板直接书写合乎杂志社要求的文章。 d、引文编排:可以自动帮助我们编辑参考文献的格式 序列获得和同源性比对
1、NCBI-Genbank 【说明】GenBank是美国国家生物技术信息中心(NCBI)建立的DNA序列数据库，从公共资源中获取序列数据，主要是科研人员直接提供或来源于大规模基因组测序计划( Benson等，1998)。为保证数据尽可能的完全，GenBank 与EMBL(欧洲分子生物学实验室)、DDBJ建立了相互交换数据的合作关系。 【功能】 a、Entrez检索:将核酸、蛋白质序列和基因图谱、蛋白质结构数据库整合在一起。 b、Blast检索:通过已知序列检索其同源序列(序列类型为核酸或核苷酸)。 c、序列分类检索:高通量基因组序列(HTG)、表达序列标记(EST)、序列标记位点(STS)和基因组概览序列(GSS)。序列文件的基本单位是序列条目，包括核甘酸碱基排列顺序和注释两部分。
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。
除了5’ 3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA重组技术）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（ hnRNA在转变为mRNA 的过程中经过剪接，）、
一. 名词解释 1. C值及C值反常反应：所谓C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。真核细胞基因的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能DNA序列大多被不编码蛋白质的非功能DNA所隔开，这就是C值反常现象。 2. 半保留复制：DNA生物合成时，母链DNA解开分为两股单链，各自为模板按碱基互补规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股从亲本完全接受过来，另一股则完全从新合成。两个子细胞的DNA碱基序列一致。 3 半不连续复制：前导链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 4 引发体：复制的起始含有解螺旋酶.DNA C蛋白.引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。 5. DNA损伤：在复制过程中发生的DNA突变体称为DNA损伤。 6 转座子：是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。 7. 中心法则：通过DNA的复制把遗传信息由亲代传递给子代，遗传信息由DNA传递到RNA，最后翻译成特异的蛋白质.RNA还以逆转录的方式将遗传信息体传递给DNA分子。这种遗传信息的流向称为中心法则。 8 编码链：双链DNA中，不能进行转录的那一条DNA链，该链的核苷酸序列与转录生成的RNA的序列一致，又称意义链。 9. 转录因子：能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，称反式作用因子。在反式作用因子中，直接或间接结合DNA聚合酶的，则称为转录因子。 10 RNA编辑：是某些RNA，特别是mRNA前体的一种加工方式，如插入，删除或取代一些核苷酸残基，导致DNA所编码的遗传信息发生改变，因为经过编辑mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。 11 cDNA：互补DNA，是以mRNA为模板，按碱基互补规律，合成与mRNA互补的DNA 单链。 12 RNA选择性剪接：是指不同的剪切方式从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构体的过程。 13 GU-AG法则：多数细胞核mRNA前体中内含子的5’边界序列为GU，3’边界，序列为AG。因此，GU表示供体先借点的5’端，AG代表接纳体衔接点3’端序列。习惯上，这种保守序列模式称为GU-AG法则。 14. 顺反子：遗传学上将编码一个多肽链的遗传单位，称为顺反子。真核mRNA只编码一种蛋白质，为单顺反子。 15. 翻译：以mRNA为模板，氨酰-tRNA为原料直接供体，在多种蛋白质因子和酶的参与下，在核糖体上将mRNA分子上的核苷酸顺序表达为有特定氨基酸顺序的蛋白质的过程。 16. 摆动假说：Crick为解释反密码子中某些稀有成分的配对以及许多氨基酸有2个以上的密码子的问题而提出的假说。 17. 氨酰-tRNA合成酶：是一类催化氨基酸和tRNA相结合的特异性酶。 18. SD序列：早在1974年，Shine就发现，几种细菌小亚基rRNA3’末端顺序为：5’—ACCUCCUA—3’，它可以和mRNA中离AUG顺序5’侧约9-13个碱基处有一段富含嘌呤碱基AGGA或GAGG互补，后来称此区域为SD。 19. 多核糖体：mRNA同时与若干个核糖体结合形成的念珠转结构，称为多核糖体。 20 核定位序列：蛋白质中的一种常见的结构域，通常为一短的氨基酸序列，它能与核载体相互作用，将蛋白质运进细胞核内。 21. 基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。
分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36 个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸（ppGpp）和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10 区的TATA、-35 区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源D NA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal（5- 溴-4-氯-3- 吲哚-β-D- 半乳糖苷）产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ 基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛 选重组细菌。称之为蓝- 白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。 18．Klenow 酶：DNA聚合酶I 大片段，只是从DNA聚合酶I 全酶中去除了5' → 3'外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用 多聚dC 和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1．DNA 的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2．RNA 酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1 ）、（IF-2 ）和（IF-3 ）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2 噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA′3 末端多了一个多聚腺苷酸（polyA）尾巴）。9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP 的启动子S2 进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于
常用分子生物学软件简 介 公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-
常用分子生物学软件 一、基因芯片： 1、基因芯片综合分析软件。 ArrayVision 一种功能强大的商业版基因芯片分析软件，不仅可以进行图像分析，还可以进行数据处理，方便protocol的管理功能强大，商业版正式版：6900美元。Arraypro Media Cybernetics公司的产品，该公司的gelpro, imagepro一直以精确成为同类产品中的佼佼者，相信arraypro也不会差。 phoretix? Array Nonlinear Dynamics公司的基因片综合分析软件。 J-express 挪威Bergen大学编写，是一个用JAVA语言写的应用程序，界面清晰漂亮，用来分析微矩阵（microarray）实验获得的基因表达数据，需要下载安装JAVA运行环境后后，才能运行。 2、基因芯片阅读图像分析软件 ScanAlyze ，斯坦福的基因芯片基因芯片阅读软件，进行微矩阵荧光图像分析，包括半自动定义格栅与像素点分析。输出为分隔的文本格式，可很容易地转化为任何数据库。 3、基因芯片数据分析软件 Cluster
斯坦福的对大量微矩阵数据组进行各种簇（Cluster)分析与其它各种处理的软件。 SAM Significance Analysis of Microarrays 的缩写，微矩阵显着性分析软件，EXCEL软件的插件，由Stanford大学编制。 4．基因芯片聚类图形显示 TreeView 斯坦福开发的用来显示Cluster软件分析的图形化结果。现已和Cluster成为了基因芯片处理的标准软件。 FreeView 是基于JAVA语言的系统树生成软件，接收Cluster生成的数据，比Treeview增强了某些功能。 5．基因芯片引物设计 Array Designer DNA微矩阵（microarray）软件，批量设计DNA和寡核苷酸引物工具 二、RNA二级结构。 RNA Structure RNA Sturcture 根据最小自由能原理，将Zuker的根据RNA一级序列预测RNA二级结构的算法在软件上实现。预测所用的热力学数据是最近由Turner实验室获得。提供了一些模块以扩展Zuker算法的能力，使之为一个界面友好的RNA折叠程序。允许你同时打开多个数据处理窗口。主窗口的工具条提供一些基本功能：打开文件、导入文件、关闭文件、设置程序参数、重排窗口、以及即时帮助和退
Northern blot：是DNA/RNA的杂交，它是一项用于检测特异性RNA的技术，RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，凝胶分离后的RNA 通过southern印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。它是研究基因表达的有效手段。与Southern blot 相比，它的条件更严格些，特别是RNA容易降解，前期制备和转膜要防止Rnase的污染。实验步骤：1.用具的准备2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染3．制胶4. RNA样品的制备5.电泳6.转膜7.探针的制备8.探针的纯化及比活性测定9．预杂交10．探针变性11．杂交12．洗膜13．曝光14．去除膜上的探针15．杂交结果 半定量PCR要求比普通PCR更严格一些，另外往往通过转膜后的同位素杂交检测或凝胶成像后的灰度测定比较样品间的差异。 半定量RT-PCR一般是在没有条件做实时PCR 的情况下使用，用于测定体内目的基因的表达增加减少与否，即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因（如β-actin）的电泳带的相对含量比较，观测目的基因表达增减，另外还要做一个β-actin的内参照对照。 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1．实时荧光定量PCR无需内标 2．内标对实时荧光定量PCR的影响 Sybr green（荧光染料掺入法）和Taqman probe（探针法） 检测两种蛋白质相互作用方法 1共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析 2蛋白质亲和色谱基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），当细胞抽提液经过改基质时，可与改固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有吸附的非目标蛋白则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或者洗脱条件而回收下来。 3免疫共沉淀免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。改法的优点是蛋白处于天然状态，蛋白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响；可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。缺点：免疫共沉淀同样不能保证沉淀的蛋白复合物时候为直接相互作用的两种蛋白。另外灵敏度不如亲和色谱高4 Far-Western 又叫做亲和印记。将PAGE胶上分离好的凡百样品转移到硝酸纤维膜上，然后检测哪种蛋白能与标记了同位素的诱饵蛋白发生作用，最后显影。缺点是转膜前需要将蛋白复性。 1.酵母双杂交 2.GSTpull-down实验 3.免疫共沉淀 4.蛋白质细胞内定位 RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法 1.此方法是通过PCR技术实现的，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有 利用价值的信息 2.节约了实验所花费的经费和时间。 3.只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长 基因特异性引物（GSPs）应该是： 23－28nt 50－70％GC Tm值≥65度，Tm值≥70度可以获得好的结果 注意事项 1.cDNA的合成起始于polyA+RNA。如果使用其它的基因组DNA或总RNA，背景会很高
分子生物学常见名词解释完全版(中英文对照) A Abundance (mRNA 丰度)：指每个细胞中mRNA 分子的数目。 Abundant mRNA(高丰度mRNA)：由少量不同种类mRNA组成，每一种在细胞中出现大量 拷贝。 Acceptor splicing site (受体剪切位点)：内含子右末端和相邻外显子左末端的边界。Acentric fragment(无着丝粒片段)：(由打断产生的)染色体无着丝粒片段缺少中心粒，从而 在细胞分化中被丢失。 Active site(活性位点)：蛋白质上一个底物结合的有限区域。 Allele(等位基因)：在染色体上占据给定位点基因的不同形式。 Allelic exclusion(等位基因排斥)：形容在特殊淋巴细胞中只有一个等位基因来表达编码的 免疫球蛋白质。 Allosteric control(别构调控)：指蛋白质一个位点上的反应能够影响另一个位点活性的能力。Alu-equivalent family(Alu 相当序列基因)：哺乳动物基因组上一组序列，它们与人类Alu 家族相关。 Alu family (Alu家族)：人类基因组中一系列分散的相关序列，每个约300bp长。每个成员 其两端有Alu 切割位点(名字的由来)。 α-Amanitin(鹅膏覃碱)：是来自毒蘑菇Amanita phalloides 二环八肽，能抑制真核RNA聚 合酶，特别是聚合酶II 转录。 Amber codon (琥珀密码子)：核苷酸三联体UAG，引起蛋白质合成终止的三个密码子之一。Amber mutation (琥珀突变)：指代表蛋白质中氨基酸密码子占据的位点上突变成琥珀密码 子的任何DNA 改变。 Amber suppressors (琥珀抑制子)：编码tRNA的基因突变使其反密码子被改变，从而能识 别UAG 密码子和之前的密码子。 Aminoacyl-tRNA (氨酰-tRNA)：是携带氨基酸的转运RNA，共价连接位在氨基酸的NH2 基团和tRNA 终止碱基的3￠或者2￠－OH 基团上。 Aminoacyl-tRNA synthetases (氨酰-tRNA 合成酶)：催化氨基酸与tRNA 3￠或者2￠－OH基团共价连接的酶。 Amphipathic structure(两亲结构)：具有两个表面，一个亲水，一个疏水。脂类是两亲结构，一个蛋白质结构域能够形成两亲螺旋，拥有一个带电的表面和中性表面。 Amplification (扩增)：指产生一个染色体序列额外拷贝，以染色体内或者染色体外DNA形 式簇存在。 Anchorage dependence (贴壁依赖)：指正常的真核细胞需要吸附表面才能在培养基上生长。Aneuploid (非整倍体)：组成与通常的多倍体结构不同，染色体或者染色体片段或成倍丢失。Annealing (退火)：两条互补单链配对形成双螺旋结构。 Anterograde (顺式转运)：蛋白质质从内质网沿着高尔基体向质膜转运。 Antibody (抗体)：由B 淋巴细胞产生的蛋白质(免疫球蛋白质)，它能识别特殊的外源“抗 2 原”，从而引起免疫应答。 Anticoding strand (反编码链)：DNA 双链中作为膜板指导与之互补的RNA 合成的链。Antigen (抗原)：进入基体后能引起抗体(免疫球蛋白质)合成的分子。 Antiparallel (反式平行)：DNA双螺旋以相反的方向组织，因此一条链的5￠端与另一条链的3￠端相连。
1.定义重组DNA技术 将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 2.说出分子生物学的主要研究内容 1.DNA重组技术 2.基因表达研究调控 3.生物大分子的结构功能研究 4.基因组、功能基因组与生物信息学研究 3.简述DNA的一、二、三级结构 一级：4种核苷酸的连接及排列顺序，表示了该DNA分子的化学成分 二级：2条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构 三级：DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定的空间结构 4.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？ ①DNA双螺旋是由2条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成，多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条是5---3，另一条是3---5②DNA双螺旋中脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧构成基本骨架，碱基排在内侧③两条链上的碱基通过氢键相结合，形成碱基对 5.DNA双螺旋结构模型是由谁提出的？沃森和克里克 6.DNA以何种方式进行复制，如何保证DNA复制的准确性？ 线性DNA的双链复制：将线性复制子转变为环状或者多聚分子，在DNA末端形成发卡式结构，使分子没有游离末端，在某种蛋白质的介入下在真正的末端上启动复制。环状DNA 复制：θ型、滚环型、D型 ①以亲代DNA分子为模板进行半保留复制，复制时严格按照碱基配对原则 ②DNA聚合酶I 非主要聚合酶，可确保DNA合成的准确性
③DNA修复系统：错配修复、切除修复、重组修复、DNA直接修复、SOS系统 7.简述原核生物DNA复制特点 只有一个复制起点，复制起始点上可以连续开始新的DNA复制，变现为虽只有一个复制单元，但可以有多个复制叉 8.真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？ 细胞生活周期水平调控；染色体水平调控；复制子水平调控 9.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？ 错配修复，恢复错配；切除修复，切除突变的碱基和核苷酸片段；重组修复，复制后的修复；DNA直接修复，修复嘧啶二聚体；SOS系统，DNA的修复，导致变异 10.什么是转座子？分为哪些种类？ 是存在于染色体DNA上可自主复制和移动的基本单位。可分为插入序列和复合型转座子11.什么是编码链？什么是模板链？ 与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链，另一条根据碱基互补配对原则指导mRNA 合成DNA链称为模板链 12.简述RNA的种类及其生物学作用 mRNA：编码了一个或多个多肽链序列。 tRNA：把mRNA上的遗传信息变为多肽中的氨基酸信息。 rRNA：是核糖体中的主要成分。 hnRNA：由DNA转录生成的原始转录产物。 snRNA：核小RNA，在前体mRNA加工中，参与去除内含子。 snoRNA：核仁小RNA，主要参与rRNA及其它RNA的修饰、加工、成熟等过程。scRNA：细胞质小RNA在蛋白质合成过程起作用。
第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链DNA 与RNA 分子之间的杂交 B ．双链DNA 与RNA 分子之间的杂交 C ．单链RNA 分子之间的杂交 D ．单链DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ．DNA 片段 B ．cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ．RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ．DNA 印迹 B ．RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ．PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ．Western blot 中的探针是 A ．RNA B ．单链DNA C ．cDNA D ．抗体 E ．双链DNA 7 ．Northern blotting 与Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是RNA D ．探针必须是DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ．RNA 印迹 D ．DNA 芯片技术 E ．DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在PCR 反应中不能作为模板 A ．RNA B ．单链DNA C ．cDNA D ．蛋白质 E ．双链DNA 10 ．RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ．cDNA C ．逆转录酶 D ．RNA E ．dNTP 11 ．关于PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性DNA 聚合酶 C ．dNTP D ．含有Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ．DNA 链末端合成终止法不需要 A ．ddNTP B ．dNTP C ．引物标记 D ．DNA 聚合酶 E ．模板 13 ．cDNA 文库构建不需要 A ．提取mRNA B ．限制性内切酶裂解mRNA C ．逆转录合成cDNA D ．将cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是GST D ．也可以是6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为
分子生物学知识点整 理
一、名词解释： 1. 基因：基因是位于染色体上的遗传基本单位，是负载特定遗传信息的DNA 片段，编码具有生物功能的产物包括RNA和多肽链。 2. 基因表达：即基因负载遗传信息转变生成具有生物学功能产物的过程，包括基因的激活、转录、翻译以及相关的加工修饰等多个步骤或过程。 3.管家基因：在一个生物个体的几乎所有组织细胞中和所有时间段都持续表达的基因，其表达水平变化很小且较少受环境变化的影响。如GAPDH、β-肌动蛋白基因。 4. 启动子：是指位于基因转录起始位点上游、能够与RNA聚合酶和其他转录因子结合并进而调节其下游目的基因转录起始和转录效率的一段DNA片段。 5.操纵子：是原核生物基因表达的协调控制单位，包括有结构基因、启动序列、操纵序列等。如：乳糖操纵子、色氨酸操纵子等。 6.反式作用因子：指由其他基因表达产生的、能与顺式作用元件直接或间接作用而参与调节靶基因转录的蛋白因子（转录因子）。 7.顺式作用元件：即位于基因附近或内部的能够调节基因自身表达的特定DNA 序列。是转录因子的结合位点，通过与转录因子的结合而实现对真核基因转录的精确调控。 8. Ct值：即循环阈值（cycle threshold，Ct），是指在PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值所经历的循环数。（它与PCR扩增的起始模板量存在线性对数关系，由此可以对扩增样品中的目的基因的模板量进行准确的绝对和（或）相对定量。）
9.核酸分子杂交：是指核酸分子在变性后再复性的过程中，来源不同但互不配对的核酸单链（包括DNA和DNA，DNA和RNA，RNA和RNA）相互结合形成杂合双链的特性或现象，依据此特性建立的一种对目的核酸分子进行定性和定量分析的技术则称为分子杂交技术。 10. 印迹或转印：是指将核酸或蛋白质等生物大分子通过一定的方法转移并固定至尼龙膜等支持载体上的一种方法，该技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹。 11. 探针：是一种用同位素或非同位素标记核酸单链，通常是人工合成的寡核苷酸片段。 12. 基因芯片：又称DNA芯片或DNA微阵列，是基于核酸分子杂交原理建立的一种对DNA进行高通量、大规模、并进行分析的技术，其基本原理是将大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的待测样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而对待测样品中的核酸进行定性和定量分析。 13. 基因文库：是指通过克隆方法保存在适当宿主中的一群混合的DNA分子，所有这些分子中的插入片段的总和，可代表某种生物的全部基因组序列或全部的mRNA序列，因此基因文库实际上是包含某一生物体或生物组织样本的全部DNA序列的克隆群体。基因文库包括两类：基因组文库和cDNA文库。 14. 克隆：是来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 15. 载体：为携带的目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 16. 限制性核酸内切酶：识别DNA的特意序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
分子生物学复习重点https://www.doczj.com/doc/f39169493.html,work Information Technology Company.2020YEAR
分子生物学研究：核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学。1953年，Watson和Crick提出脱氧核糖核苷酸的双螺旋膜型。 染色体包括：DNA和蛋白质两大部分。 基因组：由生物体内所有的染色体组成的。 真核细胞染色体的组成包括：蛋白质：组蛋白（染色体结构蛋白，组成核小体）、非组蛋白（RNA聚合酶、肌动蛋白、肌球蛋白、微管蛋白），真核生物基因组DNA，染色质和核小体。 DNA包装步骤：（核小体，螺线管，超螺线管，染色体） 1)核小体的形成是染色体中DNA压缩的第一阶段。核小体的组成：组蛋白+200bp DNA。 核小体组蛋白：H2A、H2B、H3、H4各两分子生成的八聚体，并伴有H1在核小体在外边，直径10nm。 2)将200bp的DNA分子（2nm）缠绕在核小体外，从68nm压缩到10nm中，压缩率1/7 3)六个核小体形成一个螺线管，压缩率1/6，直径30nm 4)螺线管形成超螺线管，压缩率1/40，直径4000nm 5)超螺线管形成染色单体，压缩率1/5 DNA的结构： （1）DNA的一级结构：四种核苷酸的连接排列顺序。 （2）DNA的二级结构：两条多核苷酸链反相平行盘绕所成的双螺旋结构。 （3）DNA的高级结构：多数为双链DNA，少数为单链；形成超螺旋，构成质粒分类：右手螺旋（A-DNA构象、B-DNA构象）、左手螺旋（Z-DNA构象） B-DNA构象特点：1）A-T丰富的DNA片段常呈B-DNA构型；2）脱氧核苷酸在外侧，碱基在内侧；3）链间形成的有螺旋状凹槽构成：大沟、小沟（沟用来接收Pr 的结合）；4)相邻碱基对平面间距0.34nm，结构重复周期3.4nm，双螺旋直径2.0nm；5)磷酸二脂键链接核苷酸；6)脱氧核糖环平面基本与纵轴大致平行 A-DNA构象：DNA模板链与转录所得RNA链间形成的双链，双链RNA之间形成的构象也是A-DNA构象. Z-DNA构象特点：1）12个碱基一圈，比A构型紧；2）只有一个螺旋沟，难于蛋白质结合；3）重复的结构式二核苷酸；4）碱基不再中央，外圈的碱基难被化学物质结合识别 意义：用于调控基因转录，Z构型变为B构型，可以使得近端区域活化转录；使得远端基因转录停止。 DNA的复制：
专业《分子生物学》复习题 (仅供参考) 一名词解释： 1、基因gene：基因是产生一条多肽链或功能RNA所必须的全部核苷酸序列,是决定遗传性状的功能单位。 2、基因组genome：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。 4、顺式作用元件：是指基因序列中可在原位发挥作用并影响其在物理上相连的基因表达的保守结构。如启动子、上游启动子元件、增强子、终止子等。 5、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。如RNA聚合酶。 6、启动子promoter：是与RNA聚合酶特异性结合并起始转录的DNA区域。 7、增强子enhancer：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。 8、基因表达gene expression：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。 9、分子克隆molecular expression：在体外对DNA分子按照既定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 10、基因工程genetic engineering：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。 11、 DNA变性Denaturation：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键则不受影响。 12、 DNA复性renaturation：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构。 13、退火annealing：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA 摸板互补区域结合形成杂交链。 14、反义RNA antisense RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA 称为反义RNA。可以作为一种调控特定基因表达的手段。 15、核酶ribozyme：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 16、管家基因（House-keeping gene）：在生物体生命的全过程都是必须的，且在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达的基因。 17、奢侈基因（luxury gene）：又称可调节基因（regulated gene）、可诱导基因，是在特殊类型的细胞中为特化功能蛋白质编码的基因，其表达和调控都受环境条件的影响。 18、重叠基因（overlapping gene）：它是指两个或两个以上的结构基因共用一段DNA顺序的现象。 19、C值矛盾C value paradox：一个单倍体基因组的全部DNA含量总是恒定的。这是物种的一个特征，通常称为该物种的C值。一般而言，随着生物的进化，生物体的结构和功能越来越复杂，其C值就越大。但由于人们无法用已知功能
分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫； ③完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；